CN111184219A - 一种利用茶多酚与多肽结合制备多肽复合物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种利用茶多酚与多肽结合制备多肽复合物的方法,属于大豆蛋白产品开发领域,该方法包括以下步骤:(1)制备大豆分离蛋白(2)大豆蛋白酶解液的制备(3)大豆多肽与表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)复合形成的多肽复合物制备,本发明明确了大豆分离蛋白酶解成多肽与表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)复合的工艺,并且确定了二者复合后的多肽复合物具有更高的生物功能,该复合具有低成本,操作便捷,绿色健康的特点。

Description

一种利用茶多酚与多肽结合制备多肽复合物的方法
技术领域
本发明属于大豆蛋白产品开发领域,主要涉及一种利用茶多酚与多肽结合制备多肽复合物的方法
背景技术
近年来,随着大豆蛋白发展以及大豆酶解多肽在营养学,食品工业、发酵工业的潜在应用前景,人们对大豆多肽给予了关注,然而大豆蛋白酶解过程产生的沉淀常常被作为动物饲料或者被丢弃,造成了一定程度上的浪费,所以大豆酶解后的不溶物的研究还存在一定的阻碍性。
大豆分离蛋白是一种营养价值丰富的食用蛋白资源,由于其较高的蛋白含量及优良的功能特性,目前已被广泛地应用于食品加工。大豆多肽克服了大豆蛋白在营养学上的弱点,具有比大豆蛋白更丰富的营养和功能特性。大豆多肽已经成为有效的辅助制剂,在发酵工业中,大豆多肽可以作为微生物的营养源,促进微生物生长和代谢;在食品工业中,大豆在食品工业中,大豆多肽可以应用于焙烤食品、糖果糕点和冷饮食品中,既降低了成本,也改善了产品的风味、口感和组织状态等。此外,表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是中国绿茶中提取的一种成份,它是绿茶主要的活性和水溶性成份,是儿茶素中含量最高的组分,因为具有特殊的立体化学结构,EGCG具有非常强的抗氧化活性,在抗癌和心血管疾病方面担当了重要的角色。此外,它也用作肿瘤多药耐药性的逆转剂,能够改善癌细胞对化疗的敏感性并减轻对心脏的毒性。EGCG与多肽主要通过疏水相互作用相互结合,产生生物功能较高的多肽复合物。
本发明通过一种利用茶多酚与多肽结合制备多肽复合物,使得酶解产生的聚集物利用率提高,具有优异的生物活性。这一发明可能对利用茶多酚与多肽结合制备多肽复合物的设计和制造,甚至对具有某些独特功能的大豆蛋白产品的开发都有重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足,提供种利用茶多酚与多肽结合制备多肽复合物,达到提高酶解物得利用率;优化酶解物生物功能的效果。实现功能性多肽的粒子大小合适;抗氧化活性提高;提高生物利用度的目的。
本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的:
一种利用茶多酚与多肽结合制备多肽复合物的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)按1:3(w/v)的比例用正己烷对粉碎后得到的豆粉进行3次脱脂,并放在通风橱中除去正己烷,将除去正己烷的大豆粉末按1:8-1:14(w/w)溶于蒸馏水中,用2M NaOH将pH调节至8.5,并将所得浆液在43-46℃下机械搅拌2h,并保持pH 8.5。随后在9000g下离心20min,收集上清液并用2M HCl调节pH至4.5,然后在6000g下离心20min,将获得的沉淀物溶于蒸馏水中,用2M NaOH中和至pH 7.0,在4℃下用蒸馏水透析24h,然后于-40℃预冻后冻干,研磨以得到大豆分离蛋白粉末;(2)称取大豆分离蛋白粉末溶于去离子水中配置成3-6%(w/v)大豆分离蛋白溶液,在50℃条件下机械搅拌2h,以使大豆蛋白结构更加松散,随后加入叠氮化钠(0.02%,w/v)以抑制微生物生长。大豆蛋白酶解的方法是用2M NaOH调节大豆蛋白溶液pH值为8.5达到碱性蛋白酶Alcalase的最适温度及pH值。将碱性蛋白酶按比例(0.05-2%)分别加入到蛋白溶液中在温度50℃下反应3h,并用2M NaOH保持蛋白—酶体系pH一直保持在碱性蛋白酶的最适pH 8.5。随后,将所有样品在85-100℃下水浴灭酶8-14min,然后立即在冰水浴中冷却至室温,调节pH 7.0,然后在10000g下离心20min,收集上清液得到酶解液。(3)大豆蛋白酶解液与表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)结合的方法:将EGCG按比例1-4%(w/w)加入到蛋白酶解液中室温避光磁力搅拌30min后在10000g下离心20min收集沉淀得到蛋白与多酚结合物。
根据权利要求1所述的一种利用茶多酚与多肽结合制备功能性多肽的方法,其特征在于:所述大豆粉末与蒸馏水混合优选比例为1:10,浆液磁力搅拌优选温度为45℃。
根据权利要求1所述的一种利用茶多酚与多肽结合制备多肽复合物的方法,其特征在于:配置大豆分离蛋白溶液浓度为4%,碱性蛋白酶与大豆分离蛋白比例为1%,样品水浴灭酶优选时间为90℃,水浴优选时间为10min。
根据权利要求1所述的一种利用茶多酚与多肽结合制备多肽复合物的方法,其特征在于:表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与蛋白酶解液优选比例为2%。
附图说明
附图发明的工艺路线
具体实施方式
下面结合附图对本发明具体实施例进行详细描述:
实施例1:
按1:3(w/v)的比例用正己烷对粉碎后得到的豆粉进行3次脱脂,并放在通风橱中除去正己烷,将除去正己烷的大豆粉末按1:8(w/w)溶于蒸馏水中,用2M NaOH将pH调节至8.5,并将所得浆液在44℃下机械搅拌2h,并保持pH 8.5。随后在9000g下离心20min,收集上清液并用2M HCl调节pH至4.5,然后在6000g下离心20min,将获得的沉淀物溶于蒸馏水中,用2M NaOH中和至pH 7.0,在4℃下用蒸馏水透析24h,然后于-40℃预冻后冻干,研磨以得到大豆分离蛋白粉末;(2)称取大豆分离蛋白粉末溶于去离子水中配置成3%(w/v)大豆分离蛋白溶液,在50℃条件下机械搅拌2h,以使大豆蛋白结构更加松散,随后加入叠氮化钠(0.02%,w/v)以抑制微生物生长。大豆蛋白酶解的方法是用2M NaOH调节大豆蛋白溶液pH值为8.5达到碱性蛋白酶Alcalase的最适温度及pH值。将碱性蛋白酶按比例(0.05%)分别加入到蛋白溶液中在温度50℃下反应3h,并用2M NaOH保持蛋白—酶体系pH一直保持在碱性蛋白酶的最适pH 8.5。随后,将所有样品在85℃下水浴灭酶6min,然后立即在冰水浴中冷却至室温,调节Ph7.0,然后在10000g下离心20min,收集上清液得到酶解液。(3)大豆蛋白酶解液与表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)结合的方法:将EGCG按比例1%(w/w)加入到蛋白酶解液中室温避光磁力搅拌30min后在10000g下离心20min收集上沉淀得到蛋白与多酚复合物。该复合物粒径较小,抗氧化活性较低,生物利用率较低不易储存。
实施例2:
按1:3(w/v)的比例用正己烷对粉碎后得到的豆粉进行3次脱脂,并放在通风橱中除去正己烷,将除去正己烷的大豆粉末按1:10(w/w)溶于蒸馏水中,用2M NaOH将pH调节至8.5,并将所得浆液在45℃下机械搅拌2h,并保持pH 8.5。随后在9000g下离心20min,收集上清液并用2M HCl调节pH至4.5,然后在6000g下离心20min,将获得的沉淀物溶于蒸馏水中,用2M NaOH中和至pH 7.0,在4℃下用蒸馏水透析24h,然后于-40℃预冻后冻干,研磨以得到大豆分离蛋白粉末;(2)称取大豆分离蛋白粉末溶于去离子水中配置成4%(w/v)大豆分离蛋白溶液,在50℃条件下机械搅拌2h,以使大豆蛋白结构更加松散,随后加入叠氮化钠(0.02%,w/v)以抑制微生物生长。大豆蛋白酶解的方法是用2M NaOH调节大豆蛋白溶液pH值为8.5达到碱性蛋白酶Alcalase的最适温度及pH值。将碱性蛋白酶按比例(1%)分别加入到蛋白溶液中在温度50℃下反应3h,并用2M NaOH保持蛋白—酶体系pH一直保持在碱性蛋白酶的最适pH 8.5。随后,将所有样品在90℃下水浴灭酶10min,然后立即在冰水浴中冷却至室温,调节pH 7.0,然后在10000g下离心20min,收集上清液得到酶解液。(3)大豆蛋白酶解液与表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)结合的方法:将EGCG按比例2%(w/w)加入到蛋白酶解液中室温避光磁力搅拌30min后在10000g下离心20min收集上沉淀得到蛋白与多酚复合物。该复合物粒径较小,抗氧化活性较好,生物利用率较高易储存。
实施例3:
按1:3(w/v)的比例用正己烷对粉碎后得到的豆粉进行3次脱脂,并放在通风橱中除去正己烷,将除去正己烷的大豆粉末按1:12(w/w)溶于蒸馏水中,用2M NaOH将pH调节至8.5,并将所得浆液在46℃下机械搅拌2h,并保持pH 8.5。随后在9000g下离心20min,收集上清液并用2M HCl调节pH至4.5,然后在6000g下离心20min,将获得的沉淀物溶于蒸馏水中,用2M NaOH中和至pH 7.0,在4℃下用蒸馏水透析24h,然后于-40℃预冻后冻干,研磨以得到大豆分离蛋白粉末;(2)称取大豆分离蛋白粉末溶于去离子水中配置成5%(w/v)大豆分离蛋白溶液,在50℃条件下机械搅拌2h,以使大豆蛋白结构更加松散,随后加入叠氮化钠(0.02%,w/v)以抑制微生物生长。大豆蛋白酶解的方法是用2M NaOH调节大豆蛋白溶液pH值为8.5达到碱性蛋白酶Alcalase的最适温度及pH值。将碱性蛋白酶按比例(1.5%)分别加入到蛋白溶液中在温度50℃下反应3h,并用2M NaOH保持蛋白—酶体系pH一直保持在碱性蛋白酶的最适pH 8.5。随后,将所有样品在95℃下水浴灭酶12min,然后立即在冰水浴中冷却至室温,调节pH 7.0,然后在10000g下离心20min,收集上清液得到酶解液。(3)大豆蛋白酶解液与表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)结合的方法:将EGCG按比例3%(w/w)加入到蛋白酶解液中室温避光磁力搅拌30min后在10000g下离心20min收集上沉淀得到蛋白与多酚结合物。该复合物粒径过大,抗氧化活性较好,生物利用率较高不易储存。
实施例4:
按1:3(w/v)的比例用正己烷对粉碎后得到的豆粉进行3次脱脂,并放在通风橱中除去正己烷,将除去正己烷的大豆粉末按1:14(w/w)溶于蒸馏水中,用2M NaOH将pH调节至8.5,并将所得浆液在47℃下机械搅拌2h,并保持pH 8.5。随后在9000g下离心20min,收集上清液并用2M HCl调节pH至4.5,然后在6000g下离心20min,将获得的沉淀物溶于蒸馏水中,用2M NaOH中和至pH 7.0,在4℃下用蒸馏水透析24h,然后于-40℃预冻后冻干,研磨以得到大豆分离蛋白粉末;(2)称取大豆分离蛋白粉末溶于去离子水中配置成6%(w/v)大豆分离蛋白溶液,在50℃条件下机械搅拌2h,以使大豆蛋白结构更加松散,随后加入叠氮化钠(0.02%,w/v)以抑制微生物生长。大豆蛋白酶解的方法是用2M NaOH调节大豆蛋白溶液pH值为8.5达到碱性蛋白酶Alcalase的最适温度及pH值。将碱性蛋白酶按比例(2%)分别加入到蛋白溶液中在温度50℃下反应3h,并用2M NaOH保持蛋白—酶体系pH一直保持在碱性蛋白酶的最适pH 8.5。随后,将所有样品在100℃下水浴灭酶14min,然后立即在冰水浴中冷却至室温,调节pH 7.0,然后在10000g下离心20min,收集上清液得到酶解液。(3)大豆蛋白酶解液与表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)结合的方法:将EGCG按比例4%(w/w)加入到蛋白酶解液中室温避光磁力搅拌30min后在10000g下离心20min收集沉淀得到蛋白与多酚复合物。该复合物粒径过大,抗氧化活性较好,生物利用率较好不易储存。

Claims (4)

1.一种利用茶多酚与多肽结合制备多肽复合物的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)按1:3(w/v)的比例用正己烷对粉碎后得到的豆粉进行3次脱脂,并放在通风橱中除去正己烷,将除去正己烷的大豆粉末按1:8-1:16(w/w)溶于蒸馏水中,用2M NaOH将pH调节至8.5,并将所得浆液在43-46℃下机械搅拌2h,并保持pH 8.5。随后在9000g下离心20min,收集上清液并用2M HCl调节pH至4.5,然后在6000g下离心20min,将获得的沉淀物溶于蒸馏水中,用2M NaOH中和至pH 7.0,在4℃下用蒸馏水透析24h,然后于-40℃预冻后冻干,研磨以得到大豆分离蛋白粉末;(2)称取大豆分离蛋白粉末溶于去离子水中配置成3-6%(w/v)大豆分离蛋白溶液,在50℃条件下机械搅拌2h,以使大豆蛋白结构更加松散,随后加入叠氮化钠(0.02%,w/v)以抑制微生物生长。大豆蛋白酶解的方法是用2M NaOH调节大豆蛋白溶液pH值为8.5达到碱性蛋白酶Alcalase的最适温度及pH值。将碱性蛋白酶按比例(0.05-2%)分别加入到蛋白溶液中在温度50℃下反应3h,并用2M NaOH保持蛋白—酶体系pH一直保持在碱性蛋白酶的最适pH 8.5。随后,将所有样品在85-100℃下水浴灭酶6-12min,然后立即在冰水浴中冷却至室温,调节pH 7.0,然后在10000g下离心20min,收集上清液得到酶解液。(3)大豆蛋白酶解液与表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)结合的方法:将EGCG按比例1-4%(w/w)加入到蛋白酶解液中室温避光磁力搅拌30min后在10000g下离心20min收集上清液得到蛋白与多酚结合物。
2.根据权利要求1所述的一种利用茶多酚与多肽结合制备多肽复合物的方法,其特征在于:所述大豆粉末与蒸馏水混合优选比例为1:10,浆液磁力搅拌优选温度为45℃。
3.根据权利要求1所述的一种利用茶多酚与多肽结合制备多肽复合物的方法,其特征在于:配置大豆分离蛋白溶液浓度为4%,碱性蛋白酶与大豆分离蛋白比例为1%,样品水浴灭酶优选时间为90℃,水浴优选时间为10min。
4.根据权利要求1所述的一种利用茶多酚与多肽结合制备多肽复合物的方法,其特征在于:表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与蛋白酶解液优选比例为3%。
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