CN111989572A - 评估疑似感染、sofa评分低于2的患者中的并发症风险 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及体外或离体评估疑似感染、SOFA评分低于2的患者中并发症风险的方法，所述方法包括测量获自所述患者的生物学样品中的VEGFR2基因的至少一种表达产物的表达水平。

Description

评估疑似感染、SOFA评分低于2的患者中的并发症风险
本发明一般涉及医学领域，尤其是体外预后领域。更特定地，其涉及评估疑似感染、SOFA评分低于2的患者中并发症风险。
患有感染的患者并发症的主要风险之一是发展败血综合征。败血症与败血性休克是影响全球几乎1800万人的急症。在欧洲，年死亡率是30％-40％。这些患者需要住院的专科护理，住院通常超过1个月且产生极高的相关花费。
败血症是经历数个临床阶段的复合综合征。其与高死亡率相关。早期识别有预后不良风险的患者是预测的决定性因素之一。
到2016年为止，败血症的鉴定是基于从1991年开始并在2001年的更新的分类。其区分4个阶段，所述阶段被视作感染逐步加重阶段和对其炎性应答的阶段：感染、败血症、重症败血症和败血性休克。因此，在2016年之前，败血症被定义为存在与机体全身炎症(全身炎性反应综合征，SIRS)病征相关的感染。专家组提出用于定义下列临床综合征的标准(《国际败血症定义会议》(International Sepsis Definitions Conference),Crit.CareMed.31；2003)：
-SIRS是由多种病因、感染原或其他引发的全身炎性反应。由非感染病因引发的可引用的SIRS病症包括外伤、烧伤、胰腺炎、急性呼吸综合征。全身炎性反应由下列病征的至少2个表明：a)温度小于38℃或小于36℃；b)心率大于每分钟90次；c)呼吸率大于每分钟20呼吸；d)白血球数大于12000/mm3或小于4000/mm3，
-败血症是涉及感染的全身炎性反应综合征，
-重症败血症是与动脉低血压和/或灌注不足和/或至少一个器官功能障碍相关的败血症，
-败血性休克是与持续性低血压相关的重症败血症，可通过以下确定：
。存在已鉴定的感染位点，
。持续性低血压，尽管有适当补液和血管加压药治疗。
这些定义受到一些限制，尤其是过度关注炎症以及持续从重症败血症转移到随后的败血性休克的错误败血症模型。另外，全身炎性反应综合征(SIRS)的特异性和敏感性标准不充分。一个国际专家小组(SEPSIS-3)寻求简化和改进急性败血性病症分类，强调许多定义和很多不同术语用于败血症、败血性休克及用于某些器官功能障碍，导致所报告的发病率和所观察到的死亡率的异常。
因此，在2016年初，SEPSIS-3国际共识会议将败血症重新定义为危及生命的器官功能障碍并由宿主对感染的不恰当反应导致。自此以后，仅区分败血症与败血性休克。这些新定义强调危及生命的器官功能障碍观点，使用称为SOFA评分(序贯性器官衰竭评估评分)的评分和其简化形式qSOFA(快速SOFA)，如下所定义，用于确定死亡率与器官衰竭之间的关联。从临床的角度来看，器官功能障碍特征在于和SOFA评分2或更高相关的感染，或SOFA评分增加至少2分。
SOFA评分(序贯性器官衰竭评估评分)用于监测人在住院期间的状态以确定器官衰竭程度(Vincent JL等，1996)。该评分是基于6个不同评分，各用于下列系统：呼吸、心血管、肝、凝血、肾和神经。各系统的计算模式如下表1所示：
表1
Figure BDA0002725597540000011
Figure BDA0002725597540000021
Figure BDA0002725597540000031
qSOFA评分(快速SOFA)在2016年2月以简化形式的SOFA评分引入，作为鉴定感染后预后不良风险高的患者的初始手段(Eamon P.Raith等,2017)。qSOFA显著简化了SOFA评分，仅包含3个临床标准。因此，qSOFA可容易和快速地计算并且能对患者重复实施。下表2给出计算qSOFA的方法。
表2
评估 qSOFA评分
动脉收缩压≤100mmHg. 1
呼吸率≥22/min 1
更高的功能问题(混乱，格拉斯哥<15) 1
因此，qSOFA评分可以从0-3分变化。
接近于感染开始的qSOFA评分2分或更高与死亡风险更大或特护病房滞留延长相关。
任何呈现败血症的患者可能迅速向更严重和致命形式发展，如败血性休克。因而，患者护理的挑战是尽可能迅速干预，事实上甚至要早于患者呈现败血症，以防止组织缺氧发生和休克，这可导致不可恢复的情况。
在当前实践中，早期识别疑似仅有感染而无恶化风险的患者和有并发症风险的那些患者并不总是简单的。目前没有可用工具。此背景下，能鉴定出现主要临床并发症(尤其是导致败血症的并发症)风险的患者的分诊系统是反复出现的医疗需求。
在疑似有非严重感染(SOFA评分小于2分)的患者中尽可能早且在没有败血症情况下鉴定最有并发症风险的患者，会使得尽早限制其发生并发症风险的策略可行。例如，可施用预防性抗生素治疗(Puisieux F等，1993；Jensen JU等，2011)，或实际上靶向免疫疗法(Chahin A等，2015；Ali YM等，2014)，或更简单的，能限制病原体进入途径(即尽快移出导管等)。这些测量会更好护理患者，引起：
-重症特别护理和住院时间减少，这会降低相关花费(Lambert ML SC等,2011)；
-感染并发症减少；和
-死亡率降低。
因此，多年来始终未解决的是，迫切需要找到好的工具，特别包括好的标志物，其能在疑似感染但无严重病征且表征为SOFA评分小于2的患者中评估并发症风险，并因而使其能根据并发症风险分级。
为了协助诊断败血症，且有时在已呈现败血症的患者中评估并发症风险的背景下，描述了多个标志物。此类型标志物的示例包括原降钙素(PCT)或C反应蛋白(CRP)。
除了原降钙素，申请WO 2013/152047公开了超过100个生物标志物，用于诊断败血症或实际上诊断败血性休克，并且根据旧的定义，还用于预后已发展成败血性休克的败血症的进展。这些生物标志物包括血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)。然而，涉及用于预测发展的此标志物实例所述的患者群(cohortes)由许可进入特护病房至少48小时的患者组成，所述特护病房是专门用于护理危重患者或需要持久监测的特别严重的患者的专门的医院病房。这些患者的SOFA评分为3或更高。他们是临床病症特别严重的患者，其不以任何方式对应疑似感染、SOFA评分小于2的患者。仅疑似感染且SOFA评分小于2的患者初步不被健康专家视作严重。类似疑似感染且SOFA评分小于2的患者的该专利申请所述的患者是实施例4和11的那些。然而，对于那些患者，VEGFR2从未被描述为与恶化风险相关。
同样地，Wada和其团队(Wada T等，2013)描述血管生成因子的可溶性受体(如sVEGFR2或实际上血管生成素2，一种参与血管生成的生长因子)预测危重患者中的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的发展。此处再次指出，该出版物的群中包括的患者是重病患者，已住院，都在机械通气下呼吸且有败血症或严重创伤，或心脏骤停后进入加护病房。那些患者的SOFA评分极高，范围从4到几乎10。此处再次指出，接受呼吸辅助的患者不是仅疑似有感染、SOFA评分小于2、不视作严重的患者。
VEGFR2是一种血管内皮生长因子(VEGF)受体。后者是参与血管生成的主要因子。哺乳动物中的VEGF家族由称为A到D的4个糖蛋白和胎盘生长因子(PIGF)组成(Koch和Claesson-Welsh,2012)。其各自以不同同种型表达，这归因于可变剪接和蛋白裂解。这些VEGF结合并激活3类酪氨酸激酶受体，即VEGFR2以及VEGFR 1和3，分别称为KDR、Flt1和VEGFR3。VEGF也结合神经纤毛蛋白NP1和NP2，其用作VEGF的辅助因子。
VEGFR2基因也称为KDR(此基因在下文仅称为VEGFR2)，编码血管内皮生长因子2型受体。其是酪氨酸激酶蛋白，用作VEGFA、VEGFC和VEGFD的细胞表面受体。其在调节血管生成、血管发育、血管通透性和胚胎造血中发挥关键作用。此受体促进内皮细胞的增殖、存活、迁移和分化，并且也促进肌动蛋白细胞骨架的重组。此受体由胞外部分、跨膜区和胞内部分构成，胞外部分由7个免疫球蛋白类型结构域组成，胞内部分含有酪氨酸激酶结构域(Shibuya,2011)。
因此，在癌症治疗背景下，制药工业对这些受体非常感兴趣。开发了意在封闭VEGFR活化的分子，使控制血管生成和由此造成的肿瘤增殖成为可能。
尽管血管内皮生长因子2型受体或VEGFR2在医学领域有许多应用，其之前从未被描述为在仅疑似感染和SOFA评分小于2的患者中(换言之，在不视作严重患病的患者中)作为并发症标志物。与预期不同，申请人表明，测量VEGFR2基因表达水平能用于在极早期评估疑似感染患者的并发症风险，甚至早于严重病征出现。
为此，本发明因而在患者分级领域提出一个重要进展。本发明所述方法具有能够通过提供直接可测量的标志物，尤其是通过自动分析仪器容易地评估疑似感染且不呈现严重临床病征(SOFA评分小于2)的患者中并发症的风险的优势，且其中测量能在到达急救中心后于当地实验室中由治疗医生进行，或甚至在患者病床边进行，从而实施与患者护理必要性相关的分类，所述患者在这些疑似感染患者中风险最大。
因此，在第一方面，本发明提供体外或离体评估疑似感染、SOFA评分小于2的患者中的并发症的风险的方法，包括测量获自所述患者的生物学样品中的VEGFR2基因的至少一种表达产物的表达水平。
本发明还涉及疑似感染、SOFA评分小于2的患者分级和治疗方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：
-通过实施本发明的体外或离体评估患者的并发症风险的方法鉴定呈现并发症风险的患者，和
-调整之前步骤鉴定的所述患者的健康护理管理以降低并发症风险。
在另一方面，本发明涉及体外或离体测量疑似感染、SOFA评分小于2的患者中的VEGFR2基因的至少一种表达产物和uPAR基因的至少一种表达产物表达水平的试剂盒，所述试剂盒包括用于所述VEGFR2基因的至少一种表达产物的至少一种特异性结合伴侣以及用于所述uPAR基因的至少一种表达产物的至少一种特异性结合伴侣。
最后，在最后一方面，本发明提供体外或离体测量生物学样品中的VEGFR2基因的至少一种表达产物和uPAR基因的至少一种表达产物表达水平的试剂盒，所述试剂盒包括：
-特异性工具或试剂，其使得可以测量所述生物学样品中要测量的VEGFR2基因的所述至少一种表达产物和uPAR基因的所述至少一种表达产物的量，和
-对照，校准成含有VEGFR2基因的所述至少一种表达产物的量，所述量对应于已知量的VEGFR2基因的所述至少一种表达产物，和
-对照，校准成含有uPAR基因的所述至少一种表达产物的量，所述量对应于已知量的uPAR基因的所述至少一种表达产物。
在进一步描述本发明之前，提供下列定义以促进理解。
在本发明上下文中，“患者”是疑似感染和SOFA评分小于2的患者。换言之，他们是不呈现临床严重病征的患者。
术语“疑似感染的患者”指由健康专家根据临床或近似临床病征证实感染或疑似感染的患者。
“健康专家”是采用医疗技术和判断的任何人，提供与维持或改进患者健康，或治疗受伤、患病、残疾或虚弱的个体相关的服务并提供护理。
例如，我们能想起下列健康专家：医生、护士或实际上助产士。
作为临床病征的非穷举性示例，我们可引用以下：
-对于肺部部位感染：胸痛、呼吸困难，使健康专家转向肺部感染部位的任何事物；
-对于皮肤部位感染：红斑或其他炎性皮肤病变；
-对于尿路感染(下或上)：排尿灼痛、尿频或排尿困难、骨盆痛、从尿道口散发气味、单侧腰疼；
-对于神经脑脊膜部位感染：头痛、畏光、肌痛和关节痛、难以集中精神；
-消化部位感染：腹痛、肠问题；
-温度高于38℃或低于36℃；
-心率大于每分钟90次；
-呼吸率大于每分钟20呼吸；
-白血球数目大于12000/mm3或小于4000/mm3。
可引用的非穷举性近似临床病征示例是：
-测量原降钙素；
-乳酸血症(Lactatémie)；
-测量C反应蛋白；
-肝平衡；
-测量ALAT/SGPT(丙氨酸转氨酶/血清谷丙转移酶)和ASAT/SGOT(天冬氨酸转氨酶/血清谷草转移酶)；
-肾平衡(尿素和肌酐)；
-血液电解质；
-细胞细菌学的尿检查；
-动脉气体定量；
-凝血。
借助临床或近似临床病征，健康专家会确定患者是否疑似感染。疑似感染的患者会呈现一种或多种临床和/或近似临床病征，例如上面例示的那些。
在本发明上下文中，感染可由患者受任何传染剂污染导致，如病毒、细菌、寄生虫、真菌或甚至是原生动物。
我们能引用的传染剂示例可以是病毒如HIV、SIV、FIV、VHC、VHB、VHA、VHE病毒、VZV、CMV、EBV、VHS1、VHS2病毒，细菌如结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、狭义伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi stricto sensu)、埃氏疏螺旋体(Borrelia afzelii)、伽氏疏螺旋体(Borrelia garinii)、斯氏疏螺旋体(Borrelia spielmanii)、艰难梭菌(Clostridium difficile)、肉毒杆菌(Clostridium botulinum)、沙门氏菌(salmonelles)、克雷伯氏菌(Klebsiella)、军团菌(Legionella)、变形杆菌(Proteus)、克雷伯氏菌(Klebsiella)、大肠杆菌(Escherichia coli)、志贺氏菌(Shigella)、绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、金黄色酿脓葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、梅毒螺旋体(Treponema pallidum)，酵母如白色念珠菌(Candida albicans)，真菌如烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)、毛霉菌(Mucorales)等和原生动物如利什曼虫(leishmania)、阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)、疟原虫(plasmodium)等。
类似地，当患者疑似感染时，其能影响任何组织或器官。可引用的感染示例是：
-泌尿道和生殖器的感染；
-腹部器官的感染；
-来自伤口及软组织；
-皮肤的感染；
-经导管；
-中枢神经系统的感染；
-心脏瓣膜的感染；
-消化系统的感染，在其入口或部分(胃、十二指肠、小肠、结肠、直肠和肛门)，
-膀胱，
-肠(十二指肠、小肠、结肠、直肠和肛门)；
-耳、鼻和喉咙的感染。
根据本发明的具体实施方案，所述感染是细菌来源。
根据本发明，所述患者的表征是其SOFA评分严格小于2，换言之，患者的SOFA评分是0或1。换言之，根据2016年新定义(SEPSIS-3)，他们是不呈现败血症的患者。
因此，根据本发明的患者是不呈现严重临床病症的患者。例如，患者未进行重病特别护理和/或机械通气。
根据本发明的不处于严重的临床病症的患者将与会怀疑感染的健康专家接触，例如，在以下情况中：在到达急救中心后接触，由治疗医师自己接触或者实际上在医院中床边接触，这构成了另一个具体实施方案。
术语“评估并发症风险”指从疑似感染且SOFA评分小于2的患者中鉴定在测量标志物表达水平后的数小时病症会恶化的那些患者以及在接下来的数小时病症不会恶化并因而不需要专科医院护理的那些患者。
根据本发明，所述并发症的特征是下列事件的至少一种：
-SOFA评分增加至少1分，
-至少一个器官出现衰竭，
-需要进行重症监护，和
-死亡。
在本发明上下文中，术语“器官衰竭”指器官异常功能，导致器官的临床或生物学异常(参见下面的SOFA评分计算)。
可引用的器官衰竭示例是呼吸、心血管、肾、神经、肝衰竭，或实际上血液学衰竭。
关于临床或生物学异常，可以示例性引用Fagon关于器官衰竭的定义(Fagon等，1993)：
-呼吸衰竭(下列标准的至少一种)：
。PaCO2<60mmHg，FIO2＝0.21
。人工通气
-心血管衰竭(在没有血容量减少的情况下，下列标准的至少一种)：
。动脉收缩压<90mmHg，有外周低灌注病征
。使用变力性药物或血管加压药以维持动脉收缩压>90mmHg
-心血管衰竭(在没有血容量减少的情况下，下列标准的至少一种)：
。动脉收缩压<90mmHg，有外围低灌注病征
。使用变力性药物或血管加压药以维持动脉收缩压>90mmHg
-肾衰竭(在没有慢性肾功能不全的情况下，下列标准的至少一种)：
。血肌酐(Créatininémie)>300μmol/L，
。排尿量<500mL/24h或<180mL/8h
。需要肾透析
-神经衰竭(下列标准的至少一种)：
。格拉斯哥评分≤6(没有镇静剂)
。精神错乱突然发作
-肝衰竭(下列标准的至少一种)：
。胆红素>100μmol/L
。碱性磷酸(phosphate alcaline)>x3
-血液学衰竭(下列标准的至少一种)：
。血细胞比容≤20％
。白血球(Leucocytose)<2000/mm3
。血小板<40000/mm3
在本发明上下文中，患者在其病症需要持续监测生命机能时需进入重症监护室，且适当情况下，依赖支持方法(输入血液制剂、血管流体置换、机械通气、儿茶酚胺、血液透析、体外循环等)。重症监护的最终目标是恢复体内平衡。
存在并发症风险对应于并发症会在例如在取出样品后5天、尤其是4天、特别是3天以及并发症会在第一次取出样品后的5天、尤其是4天、特别是3天采集数个样品时发展的风险。
本发明所述方法包括测量获自所述患者的生物学样品中VEGFR2基因的至少一种表达产物的表达水平。
一般，术语“样品”指一部分或一定量，更具体的是一小部分或少量，从一个或多个实体取出用于分析目的。此样品可任选地经过先前处理，例如涉及混合和稀释步骤。
在本发明的方法的上下文中，样品是来自疑似感染、SOFA评分小于2的患者的生物学样品，评估其在测量一个或多个标志物表达水平后数小时的并发症风险。具体地，此类生物学样品选自能够包含VEGFR2表达产物或任何其他下述标志物的那些。
本发明所述的生物学样品性质可变。具体地，此样品是生物学流体，例如选自全血(如收集自静脉的全血，即包含白和红血球、血小板和血浆)、血清、血浆、支气管肺泡灌洗液、脑脊液(也称为脊髓液)以及尿。优选地，获自患者的生物学样品是全血、血浆、血清或任何衍生物的样品。
根据本发明，测量VEGFR2基因(SEQ ID N°1)表达水平由定量此基因的至少一种表达产物组成。
在本发明上下文中，“表达产物”是获自VEGFR2基因表达的任何生物分子。可提及的示例是RNA转录物、蛋白或多肽。
根据本发明的一个实施方案，所述基因表达产物是RNA转录物。术语“转录物”指获自VEGFR2基因转录的RNA，尤其是信使RNA。更确切地，转录物是通过基因剪接生成的RNA。因而，在此实施方案中，可完成对VEGFR2基因的一种或多种RNA转录物表达水平测量。
VEGFR2基因具有3种目前已知的转录物，记录于Ensembl(GRCh38.p10)数据库且鉴定于下表3。
表3
转录物名称 标识号 理论蛋白大小 序列
KDR-201 ENST00000263923.4 1356aa SEQ ID N°2
KDR-202 ENST00000509309.1 无蛋白 -
KDR-203 ENST00000512566.1 无蛋白 -
根据一个实施方案，进行选自转录物KDR-201(SEQ ID N°2)、KDR-202和KDR-203及其变体的1个、2个或3个转录物的表达。术语“变体”指序列与所述转录物KDR-201、KDR-202、KDR-203序列之一有至少99％相同性的RNA。相同性百分比通过序列比对软件如CLUSTALW(Thompson等，1994)确定。具体地，变体会对应这些VEGFR2基因序列的多态性。VEGFR2基因的优选转录物是转录物KDR-201或其与所述转录物序列有至少99％相同性的变体之一，其表达会单独测定或与其他变体联合测定。优选地，仅测定转录物KDR-201或其与所述转录物序列有至少99％相同性的变体之一的表达。
本领域技术人员熟知的测量RNA转录物表达水平的任何方法可用于完成本发明。
作为一般规则，测量靶基因RNA转录物表达水平可包括从生物学样品提取总RNA的初始步骤。此步骤后是反转录这些不同RNA以获得其互补DNA(cDNA)的步骤。接着，扩增靶基因的特异cDNA，随后定量。
提取用任何提取和纯化核酸的操作进行，这是本领域技术人员熟知的。为了说明，核酸可通过裂解生物学样品中存在的细胞然后纯化来提取，或实际上通过酚、氯仿和醇提取。这些步骤为本领域技术人员熟知且由例如Sambrook J和Russell DW(2017)描述。
这些步骤能用于从含核糖体RNA、转移RNA和信使RNA的生物学样品提取总RNA。
接着，借助逆转录酶进行反转录反应，其可以用于从RNA片段获得互补DNA片段(cDNA)。实施此类步骤为本领域技术人员熟知(Bustin SA Journal of MolecularEndocrinology,2002,29:23-39；Giulietti A Methods,2001,25:386-401)。尤其是当仅要从信使RNA获得互补DNA时，此酶促步骤在仅包括胸腺嘧啶碱基的核苷酸片段(polyT)存在下完成，其通过互补与各种mRNA的polyA杂交以形成polyT-polyA复合体，所述复合体随后用作由逆转录酶所实施反转录反应的起始点。这生成最初存在于生物学样品中的不同信使RNA的不同互补DNA。
接着，进行酶促扩增反应以特异性扩增靶基因特异DNA。酶促扩增反应是通过至少一种酶作用产生多拷贝核苷酸片段的过程。此类扩增反应为本领域技术人员熟知且具体可引用下列技术：
-PCR(聚合酶链反应)，如专利US4683195、US4683202和US4800159所述；
-LCR(连接酶链反应)，如专利申请EP0201184所公开；
-RCR(修复链反应)，如专利申请WO90/01069所述；
-3SR(自我持续序列复制)，如专利申请WO90/06995；
-NASBA(基于核酸序列的扩增)，如专利申请WO91/02818；
-TMA(转录介导的扩增)，在专利US5399491中，和
-LAMP(环介导的等温扩增)，如专利US6410278。
术语“扩增子”用于指定由酶促扩增技术产生的多核苷酸。优选地，当酶促扩增是PCR时，特异性试剂包括至少2个特异性扩增引物以扩增获自靶基因的mRNA的互补DNA的特定区域。当酶促扩增是反转录反应后实施的PCR时，称为RT-PCR。
此扩增步骤后，靶基因表达水平通过杂交确定，借助该靶基因的表达产物的至少一种特异性杂交探针进行。
术语“杂交探针”指包括5-100个核苷酸基序，尤其是6-35个核苷酸基序的核苷酸片段，其在预定条件下具有杂交特异性以和靶核苷酸片段形成杂交复合体。在本发明中，靶核苷酸片段可以是信使RNA中包括的核苷酸序列，或通过所述信使RNA的反转录获得的互补DNA中包括的核苷酸序列。
杂交技术为本领域技术人员熟知；尤其可引用Northern印迹技术。
定量mRNA，靶基因的表达产物，包括检测杂交探针与靶核苷酸片段之间杂交反应的步骤。
术语“检测”指用物理方法的直接检测或借助标志物的检测方法。就核酸检测而言存在许多检测方法(Keller G.H.,1993；Kricka,1999)。在大部分情况中，此检测步骤并不在本发明所述的方法的过程中产生实施本发明的个体可见的结果。根据一个实施方案，VEGFR2基因的所述至少一种转录物的量通过下列特征的至少一种单独或联合确定：
-通过定量酶促扩增，优选实时PCR(定量RT-PCR或QPCR)；
-借助至少一种杂交探针和/或
-借助至少一种扩增引物。
确定若干转录物的量可依序或同时完成，采用本领域技术人员已知的常规方法，如上所述。
在本发明的另一实施方案中，所测量的表达产物是蛋白和/或多肽，其是上述转录物的至少一种或尚未经描述转录物的翻译产物。因而，在此实施方案中，可以进行一种或多种蛋白和/或多肽的表达水平的测量。
目前，已知获自KDR-201转录物的3种VEGFR2同种型，包括受体的同种型1(SEQ IDN°3)，N°UniProt P35968-1，其是跨膜形式，以及同种型2(SEQ ID N°4)，N°UniProtP35968-2和同种型3(SEQ ID N°5)，N°UniProt P35968-3，其是分泌血浆形式或可溶形式。后面这些命名为sVEGFR2。
所有VEGFR2同种型可单独或组合使用，作为标志物以评估疑似感染、SOFA评分小于2的患者中的并发症风险。
确定生物学样品中一种或多种同种型的量可根据本领域技术人员熟知的测定生物学样品中一种或多种分析物的量或剂量的技术进行。可引用的示例是通过免疫测定如ELISA(酶联免疫测定)、ELFA(酶联荧光测定)和RIA(放射免疫测定)的测定，和采用质谱的测定，构成本发明的一个实施方案。
通过免疫测定的测定是本领域技术人员熟知的方法且广泛用于生物学样品的分析领域。其能用于定量样品的分析物，尤其是蛋白(抗原/抗体)、肽和半抗原形式，如类固醇或维生素，涉及待检测分析物与此分析物的一种或多种结合伴侣之间的免疫反应，待检测分析物在本情况中是VEGFR2同种型之一。这些免疫测定方法基于定量生物学样品分析期间所发射信号的测量。检测到的信号量一般与待测量(例如在夹心法中)分析物的量或剂量成正比，或与待测量(例如竞争性试验)分析物的量或剂量成反比。显然，例如，术语“免疫测定”中的“免疫”在本申请中不应视作严格表明结合伴侣是免疫学伴侣如抗体。实际上，当结合伴侣(也称为配体)不是免疫学伴侣，而是例如待定量分析物的受体，本领域技术人员也广义使用该术语。因此，已知将术语ELISA(“酶联免疫吸附测定”)用于采用非免疫学结合伴侣的测定，更广泛地称为英语术语“Ligand Binding Assay(配体结合测定)”已知，而在首字母缩写的ELISA包括术语“免疫”。出于清楚的目的，申请人会在本申请全文中使用术语“免疫”，用于采用结合伴侣的任何测定，即使当其不是免疫学伴侣时。
可引用的VEGFR2同种型结合伴侣示例是抗体、抗体部分、nanofitin、适体(Ochsner U.A.等,2014)或已知与待研究的VEGFR2相互作用的任何其他分子，如脂多糖(Bucki R.等,2005)。
抗体结合伴侣示例是多克隆抗体或单克隆抗体，其生产为本领域技术人员熟知。用于VEGFR2同种型的此类抗体市售可得，例如以下多克隆抗体：人VEGF R2/KDR/Flk-1生物素化抗体ref:BAF357
Figure BDA0002725597540000101
和以下单克隆抗体：人VEGF R2/KDR/Flk-1抗体ref:MAB3573
Figure BDA0002725597540000102
可引用的抗体片段示例是片段Fab、Fab'、F(ab')2以及scFv(单链可变片段)、dsFv(双链可变片段)链。这些功能片段可具体地通过遗传工程获得。
用于确定一种或多种VEFGR2同种型的量的免疫测定优选采用VEFGR2同种型的2个结合伴侣。2个伴侣之一可偶联标志物以形成缀合物或示踪物。另一结合伴侣可捕获在固体支持物上。然后，后者称为捕获伴侣而前者称为检测伴侣。
然后，如上所示，免疫测定期间发射的测量信号与生物学样品中VEGFR2同种型的量或剂量成比例。
为使所得信号与生物学样品中的量或浓度相关联，采用预先建立自标准曲线的数学模型。此标准曲线早些时候以已知方式获得。简言之，获得标准曲线由以下组成：测量由已知渐增的量或浓度的VEFGR2同种型而产生的信号，绘出信号作为量或浓度函数的曲线，以及找到尽可能严密地代表此关系的数学模型。数学模型会用于通过外推确定待测试生物学样品所含的未知VEFGR2同种型的量或浓度
术语“用于形成缀合物的标志物”具体指任何分子，其所含的基团无化学修饰直接与结合伴侣基团反应，或在化学修饰后与结合伴侣基团反应，以包括这类基团，该分子能直接或间接产生可检测信号。这些直接检测标志物的非限制性列表由以下组成：
-产生通过比色法、荧光、发光可检测的信号的酶，如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶可检测；
-发色团如荧光、发光、染料化合物；
-放射性分子如32P、35S或125I；
-荧光分子如Alexa或藻青蛋白；和
-电化学发光盐如基于吖啶或钌的有机金属衍生物。
也可使用间接检测系统，例如能与抗配体反应的配体。然后，配体对应于标志物以与结合伴侣构成缀合物。
配体/抗配体对为本领域技术人员熟知；例如，下列对就是这种情况：生物素/链霉亲和素、半抗原/抗体、抗原/抗体、肽/抗体、糖/凝集素、多核苷酸/多核苷酸互补物。
然后，抗配体能通过上述直接检测标志物直接检测到，或本身可通过另一配体/抗配体对等检测。
在某些条件下，这些间接检测系统能引起信号扩增。此信号扩增技术为本领域技术人员熟知；可参考申请人之前的专利申请FR2781802或WO 95/08000。
根据所用标记类型，本领域技术人员会加入使标记能可视化或能发射信号的试剂，所述信号可用任何类型的适当的测量设备检测，如分光光度计、分光荧光计、密度计或实际上例如高清晰度相机。
免疫测定还可包括本领域技术人员已知的其他步骤，如洗涤和孵育步骤。
如本领域技术人员所熟知免疫，测定可以是一步或两步式测定。简言之，一步式免疫测定包括使待测使样品处于2个结合伴侣同时存在情况下，而两步式免疫测定包括首先测试样品处于第一结合伴侣存在情况下，随后使以此方式形成的分析物-第一结合伴侣复合体处于第二结合伴侣存在情况下。
质谱可用于代替上述技术，所述技术主要是免疫测定。其在质谱仪中进行。这是一个有力的工具，越来越多用于分析和定量生物学样品中的不同类型分子。一般，能电离的任何类型的分子可借助质谱仪根据其分子量定量。根据待定量的分子、蛋白或代谢源的性质，某些质谱技术可能更合适。然而，无论用于定量的质谱法如何，后者都包括使靶分子离子化成称为分子离子的物质的步骤，和根据其质量分离所得分子离子的步骤。质谱仪测量电离分子的质量与电荷(m/z)比，其与待分析的靶分子相关。
这是本领域技术人员众所周知且描述于申请人所提交专利申请WO 2016/181066的方法。
在本发明上下文中，当测量多种表达产物时，其可具有相同性质，但也可具有不同性质。换言之，其可以是分子性质(RNA转录物，mRNA)和/或蛋白性质(蛋白，多肽)。
无论基因表达产物是RNA或是蛋白，本发明方法可包括实施以下步骤或由其组成：
-测量来自患者的所述生物学样品中的VEGFR2基因的至少一种表达产物的量，
-将就所述生物学样品测定的至少一种表达产物的量或从此量衍生的值，与预定参考值进行比较，和
-从比较结果得出关于并发症风险的结论。
上面方法的各步骤依序完成。
测量VEGFR2基因的至少一种表达产物的量如上所述完成。为了方便，获自待评估并发症风险的患者的生物学样品称为测试样品。
在所述方法的第二步骤中，所述至少一种表达产物的量或从此量衍生的值会与预定参考值作比较，以评估并发症风险。
测定参考值为本领域技术人员熟知。具体地，其由在来自2个研究群体的生物学样品中实施与本发明方法中实施的相同或至少相当的测定方法和确定可以用于在这2个群体之间进行区分(本案中是在发生并发症与不发生并发症之间进行区分)的测试值(量)组成。
例如，从所述量衍生的值可以是绝对浓度，通过校准曲线方式计算。
用于与本发明上下文中所测得的量比较的预定参考值会从与待测试生物学样品中所定量的VEGFR2基因的一种或多种表达产物相同的VEGFR2基因的一种或多种表达产物确定。
从其确定参考值的样品也称为“参考样品”，相对于测试样品(生物流体)，可具有不同的性质，尤其是如上所示的生物学性质。有利地，这些参考生物学样品的性质与待测试生物学样品相同，或至少有相容性质，以构成用于定量所选的一种或多种VEGFR2基因表达产物的参考。例如，这些是对应于与测试样品相同的生物学流体的生物学样品，如全血、血清或血浆样品。所用的一种或多种参考样品优选获自与疑似感染而无败血症的对象或患者具有相同特征或大部分特征相同的个体，尤其是性别相同和/或年龄相似或相同和/或种族来源相同，要在所述对象或患者中评估并发症风险。
相反，在采集生物学样品时，所用的一种或多种参考样品获自疑似感染和SOFA评分小于2的患者。然而，其发展成或未发展成并发症作为后验记载以了解其属于发展并发症的群体或是未发展并发症的群体。
为了确定参考值并且为了在测试样品中定量VEGFR2基因的所述至少一种表达产物，优选使用在同一时间采集的样品，即一旦患者被鉴定为疑似感染、SOFA评分小于2就采集，或最晚24小时后采集。
已知一般而言，分析物测量测试的结果很大程度上取决于所用的一种或多种结合伴侣的特征。因此，在借助结合伴侣如抗体来定量蛋白或多肽的情况中，结果具体取决于所用伴侣特征如性质、与分析物的亲和程度或大小、组合物特征等，以及这些特征是否对测量值有影响。因此，应意识到不可能提供精确参考值以及适合所用测试的一种或多种参考值可通过简单常规实验在各情况中测定。在分子检测中也如此。
根据本发明确定参考值是在患者的有意义的样品上完成，即获得统计相关结果和因而代表所研究群体的结果的最少数目的样品。
本领域技术人员会了解如何根据要进行的比较确定参考值，就所述生物学样品测定的所述至少一种表达产物的量或从此量衍生用于比较的值可与所述参考值比较。应理解术语“参考值”用于离散值或对应不确定区的值的范围。显然，当测量值包括在不确定范围中或在离散值情况中极接近参考值时，无法得出明确结论且应实施补充研究。
确定参考值或测试值(量)意味着能在这2个群体之间区分，其可用ROC曲线(接受者操作特征曲线)计算。此曲线是如下获得的图：对于不同固定的阈值，沿着横坐标描绘假阳性部分(即如下所定义的特异性)，以及在纵坐标上描绘真阳性部分(即如下所定义的敏感性)。当判定阈随着测试所观察的值的范围而变化时，其代表所有特异性/敏感性对。定量测试诊断效果的整体方法是将其性能表示为ROC曲线下面积。按照惯例，此面积总是≥0.5。用于ROC曲线下面积的值在0.5(2个亚组之间的测定值分布没有差异：ROC曲线对应二等分线)和1(2个亚组的测定值完全分离；ROC曲线穿过点(0,1))之间变化。ROC曲线下面积是ROC曲线关于点(0,1)的位置的定量表示(Hanley,J.A.和McNeil,B.J,1982；Zweig,M.H.和Campbell G.,1993)。
敏感性代表如此识别的真阳性在阳性总体中的百分比。其表示所述测试检测出对应于病理学的真实阳性的生物学样品的能力。在“概率性”术语中，其对应于观察到认知阳性样品的阳性结果的可能性。
特异性代表如此识别的真阴性在阴性总体中的百分比。其表示所述测试不诊断出对应于健康个体的真实阴性的样品的能力。在“概率性”术语中，其对应于观察到认知阴性的样品阴性结果的可能性。
根据本发明的方法，当VEGFR2基因的所述至少一种表达产物的量的值小于参考值时，所测试的疑似感染患者是并发症风险增加的患者。相反，当VEGFR2基因的所述至少一种表达产物的量的值高于所述参考值时，这表示所测试的疑似感染患者不是并发症风险增加的患者。“风险增加的患者”如上所定义。
通过测量待测试的生物学样品中在2个不同时间的VEGFR2基因的至少一种表达产物的量，也可完成并发症风险的确定。
因此，在本发明一个特定实施方案中，所述方法可包括实施以下步骤或由其组成：
-测量所述患者的生物学样品中的VEGFR2基因的至少一种表达产物的第一量，所述样品通过在时间T1取第一样品获得，
-测量所述患者的生物学样品中的VEGFR2基因的至少一种表达产物的第二量，所述样品通过在时间T2取第二样品获得，
-计算所述VEGFR2基因的至少一种表达产物在T2的量与所述VEGFR2基因的至少一种表达产物在T1的量之间的变化，给出值Δ，
-将前面步骤所得值Δ与参考值进行比较，所述参考值从疑似感染、SOFA评分小于2的两个患者群体测定，一个群体发展并发症而另一个没有，
-从比较结果中得出关于并发症风险的结论。
优选地，时间T1的第一样品在疑似感染但无败血症的患者鉴定后12小时内取样，时间T2的第二样品在时间T1的第一样品后24小时(T24)中取样。
确定第二量后，本发明的此特定实施方案包括计算VEGFR2基因表达产物在T2的量与在T1的量之间的变化，给出值Δ的步骤。
值Δ的计算可用本领域技术人员已知的显示在T1的量与T2的量之间的差异的任何计算进行。
举例来说，可引用下列3种计算值Δ的方法：
-根据下式(I):
(在T1的VEGFR2)–(在T2的VEGFR2)(I).
此情况中，值Δ的单位与测定量(在T1的VEGFR2)或(在T2的VEGFR2)相同。
-值Δ可对应相对变化且根据下式(II)或(II)’之一计算：
Figure BDA0002725597540000131
此情况中，值Δ是比例(II)或百分比(II)’。
-值Δ可对应每单位时间的差异且根据下式(III)计算：
Figure BDA0002725597540000132
此情况中，值Δ的单位是每单位时间的量。
所述方法包括将前面步骤所得值Δ与参考值比较的步骤，所述参考值从疑似感染、SOFA评分小于2的两个患者群体测定，一个群体发展并发症而另一个没有。
参考值如上所示确定。在此上下文中，也需要2次采集参考样品。
根据此实施方案的方法意味着，对于从其采集生物学样品的患者的并发症风险水平可以得出结论，值Δ低于所述参考值表示所测试的患者是并发症风险增加的患者，值Δ高于所述参考值表示所测试的患者不是并发症风险增加的患者。“风险增加的患者”如上所定义。
本发明方法也可如下改进：除了测量VEGFR2基因的至少一种表达产物的表达水平外，测量至少一个其他基因的至少一种表达产物的表达水平。因此，至少2个标志物的组合意味着评估并发症风险的方法的特异性和敏感性可以改进。
因此，本发明的一个实施方案也包括测量uPAR基因的至少一种表达产物的表达水平，或由其组成。
涉及VEGFR2基因的一种或多种选定的表达产物的量的上面所提及的全部指示和偏好同样适用于uPAR基因，无论在测试样品或在参考样品中完成定量。
正如VEGFR2的情况，在本发明上下文中，uPAR(SEQ ID N°6)的一种或多种表达产物可以是通过这些基因之一表达获得的任何生物分子。例如，可以引用以下：RNA转录物、蛋白或多肽。
uPAR基因(尿激酶型纤溶酶原激活物)也称为PLAUR(其在下文中仅称为uPAR)，编码纤溶酶原尿激酶激活物的受体，并且考虑其在定位和促进纤溶酶形成中的作用，可能影响健康患者和生病患者中的许多过程，所述过程与激活细胞表面纤溶酶原和局部降解胞外基质相关。其与尿激酶型纤溶酶原激活物的前蛋白以及成熟形式都相关，且使得能够经纤溶酶活化结合受体的酶原。若干转录变体产生自该基因的可变剪接(NCBI参考数据库(NCBIReference Sequence Database)，2008年7月)。
Ensembl(GRCh38.p10)数据库鉴定了获自uPAR基因转录的16种转录物。这些转录物如下表2所鉴定。
表4
Figure BDA0002725597540000133
Figure BDA0002725597540000141
鉴定了此受体的3种同种型，所述受体的同种型1(SEQ ID N°11)，N°UniProtQ03405-1，也称为uPAR1或实际上GPI-锚定，其是膜形式，以及所述受体的同种型2(SEQ IDN°12)，N°UniProt Q03405-2和同种型3(SEQ ID N°13)，N°UniProt Q03405-3，其是分泌血浆形式或可溶形式。uPAR的可溶形式称为suPAR。
正如VEGFR2基因的情况，在本发明上下文中，所测量的uPAR基因的所述至少一种转录物选自表2所示的转录物和其变体，变体序列与所述转录物序列之一有至少99％的相同性。相同性百分比通过序列比对软件如CLUSTALW确定。具体地，变体会对应所选定的基因序列的多态性。
采用相同方式，在本发明上下文中，上面提及或尚未鉴定的获自uPAR基因的所有同种型可用作标志物以评估疑似感染、SOFA评分小于2的患者中的并发症风险。
此标志物同种型的结合伴侣的性质与就VEGFR2所述相同。
用于uPAR同种型的此类抗体市售可得，例如以下多克隆抗体：人uPAR生物素化抗体ref:BAF807
Figure BDA0002725597540000142
和以下单克隆抗体：人uPAR抗体ref:MAB807
Figure BDA0002725597540000143
采用与结合VEGFR2引用的一种或多种标志物相同的方式，当有多种测量的表达产物时，其可具有相同性质，但也可具有不同性质。换言之，其可以是分子性质(RNA转录物，mRNA)和/或蛋白性质(蛋白，多肽)。
根据一个实施方案，当使用uPAR标志物时，本发明方法包括实施以下步骤或由其组成：
-测量来自患者的所述生物学样品中的至少一种VEGFR2表达产物的量，
-测量来自患者的所述生物学样品中的至少一种uPAR表达产物的量，
-将就所述生物学样品测定的VEGFR2基因的至少一种表达产物的量或从此量衍生的值与预定参考值SVEGFR2进行比较；和
-将就所述生物学样品测定的uPAR基因的至少一种表达产物的量或从此量衍生的值与预定参考值SuPAR进行比较；
-从比较结果得出关于并发症风险的结论。
检测量的各步骤可依序或同时完成。类似地，与参考值比较的各步骤可依序或同时完成。
确定这些标志物表达产物的量和就各标志物确定参考值的步骤如上所述完成。
类似地，与参考值比较的步骤如上所述完成。
此实施方案上下文中的方法能用于得出结论，当VEGFR2基因的所述至少一种表达产物的量的值小于参考值SVEGFR2且uPAR基因的所述至少一种表达产物的量的值大于参考值SuPAR时，疑似感染、SOFA评分小于2的患者的并发症风险增加。相同的方法能用于推断当VEGFR2基因的所述至少一种表达产物的量的值大于参考值SVEGFR2且uPAR基因的所述至少一种表达产物的量的值小于参考值SuPAR时，所测试的疑似感染、SOFA评分小于2的患者不是并发症风险增加的患者。
如上所示，通过在待测试生物学样品中于不同时间测量不同标志物表达产物的量，也可完成并发症风险的确定。另外，另一实施方案是包括实施以下步骤或由其组成的方法：
-测量所述患者的生物学样品中的VEGFR2基因的至少一种表达产物的第一量，所述样品通过在时间T1取第一样品获得，
-测量所述患者的生物学样品中的VEGFR2基因的至少一种表达产物的第二量，所述样品通过在时间T2取第二样品获得，
-测量所述患者的生物学样品中的uPAR基因的至少一种表达产物的第一量，所述样品通过在时间T1取第一样品获得，
-测量所述患者的生物学样品中的uPAR基因的至少一种表达产物的第二量，所述样品通过在时间T2取第二样品获得，
-计算VEGFR2基因的所述至少一种表达产物在T2的量与VEGFR2基因的所述至少一种表达产物在T1的量之间的变化，给出值ΔVEGFR2，
-计算uPAR基因的所述至少一种表达产物在T2的量与uPAR基因的所述至少一种表达产物在T1的量之间的变化，给出值ΔuPAR，
-将值ΔVEGFR2与参考值ΔSVEGFR2进行比较，所述参考值从疑似感染、SOFA评分小于2两个患者群体测定，一个群体发展并发症而另一个没有，
-将值ΔuPAR与参考值ΔSuPAR进行比较，所述参考值从疑似感染、SOFA评分小于2的两个患者群体测定，一个群体发展并发症而另一个没有，
-从比较结果中得出关于并发症风险的结论。
检测量、计算变化和与参考值比较的所有步骤如上所述完成。
用于测量量的各步骤、用于计算变化的各步骤以及用于与关于各种标志物的参考值比较的各步骤可依序或同时完成，当然只要就各标志物而言保持以下的顺序：在T1测量，在T2测量，与参考值比较和得出结论。例如，测量uPAR的量可从在患者被鉴定为疑似感染时取样的第一样品开始进行，测量VEGFR2的量可从在患者被鉴定为疑似感染后6小时取样的第一样品开始进行。
如前，在时间T1的第一取样可在鉴定患者疑似感染后12小时内进行，在时间T2的第二取样可在时间T1的第一取样后24小时(T24)内进行。
标志物uPAR的样品时间T1和T2可与VEGFR2的那些相同，但也可不同。
此实施方案上下文中的方法能得出结论，当值ΔVEGFR2低于所述参考值ΔSVEGFR2且值ΔuPAR高于参考值ΔSuPAR时，疑似感染、SOFA评分小于2的患者的并发症风险增加。这一相同方法能用于推断，当值ΔVEGFR2高于所述参考值ΔSVEGFR2且参考值ΔSuPAR低于参考值ΔSuPAR时，所测试的疑似感染、SOFA评分小于2的患者不是并发症风险增加的患者。
确定并发症风险还可以通过使用与所用的各种标志物相关的评分的计算进行。另外，根据此特定实施方案的方法包括进行以下步骤或由其组成：
-测量来自患者的所述生物学样品中的至少一种VEGFR2表达产物的量，
-测量来自患者的所述生物学样品中的至少一种uPAR表达产物的量，
-计算来自前面步骤所测定的量的综合评分，
-将所述综合评分与预定参考评分进行比较，和
-从比较结果得出关于并发症风险的结论。
测量这些标志物的表达产物的量的步骤如上所述进行且可依序或同时进行。
评分可以是增加型组合、比例或阈值，对于至少2个标志物有不同权重。
各种定量的标志物也可通过本领域技术人员熟知的各种数学算法组合。
参考评分或阈值评分可以是就各标志物测定的参考值的乘法，当组合是比例时是这些参考值的除法或实际上是纳入各标志物的不同权重的等式类型y＝ax+by。
根据此特定实施方案的方法能得出结论，当综合评分高于参考评分时，疑似感染、SOFA评分小于2的患者的并发症风险增加，能得出结论，当综合评分低于参考评分时，疑似感染、SOFA评分小于2的患者不是并发症风险增加的患者。
根据上面方法的另一实施方案，所述计算和比较评分的步骤可通过绘制决策树取代。
本发明方法中的决策树是协助决策的工具，代表树图表形式中的选择组。各种可能的决策位于分支末端(树的“叶子”)并根据各步骤作出的决定而到达。
本领域技术人员能够容易地构建此类决策树。这里有一个示范性决策树构建：
如果：
-转录物KDR-201(VEGFR2)的浓度<X picoM，和
-转录物PLAUR-203(uPAR)的浓度<Y picoM。
Figure BDA0002725597540000161
则患者视作有并发症风险。
本发明还涉及基于上述方法所提供的风险评估来治疗患者的方法。
因此，本发明还涉及治疗疑似感染、SOFA评分小于2的患者，其特征在于其额外包括以下步骤或由其组成：
-鉴定呈现并发症风险的患者，这是通过实施本发明所述的体外或离体评估疑似感染、SOFA评分小于2的患者中并发症风险的方法进行的，和
-调整在前面步骤中鉴定的所述患者的健康护理管理以降低并发症风险。
鉴定为并发症风险增加的患者可接受调整的健康护理管理，旨在降低并发症风险和例如降低败血症、败血性休克发展风险或实际上死亡风险。
可引用的护理管理示例是免疫刺激剂治疗，或实际上是预防性抗生素治疗，2种治疗可能相关联和/或导向连续监护病房或特护病房以降低并发症风险，例如在测量一个或多个标志物表达水平后数天中，降低败血症、败血性休克发展风险或甚至死亡风险。
用于预防并发症风险的适当免疫刺激剂治疗的非限制示例是用GM-CSF、IL7、IFNy，或实际上是抗PD1的治疗。
用于预防肺炎的适当预防性抗生素治疗示例具体描述于Annales
Figure BDA0002725597540000162
d'Anesthesie et de Réanimation(30；2011；168-190)。
相反，未呈现并发症风险的患者能迅速导向门诊医院病房，例如传染病学病房，而不是留在不需要的密切监测的病房。
为实施本发明方法，当VEGFR2基因的至少一种表达产物和uPAR基因的至少一种表达产物用作标志物时，本发明还涉及在疑似感染、SOFA评分小于2的患者中预测并发症风险的试剂盒，所述试剂盒包括VEGFR2基因的至少一种表达产物的至少一种特异性结合伴侣和uPAR基因的至少一种表达产物的至少一种特异性结合伴侣。
具体地，本发明涉及体外或离体测量生物学样品中的VEGFR2基因的至少一种表达产物和uPAR基因的至少一种表达产物的表达水平的试剂盒，所述试剂盒包括：
-特异性工具或试剂，使得能够测量所述生物学样品中要测量的VEGFR2基因的所述至少一种表达产物和uPAR基因的所述至少一种表达产物的量，和
-对照，校准成包含VEGFR2基因的所述至少一种表达产物的量，所述量对应于已知量的VEGFR2基因的所述至少一种表达产物，和
-对照，校准成包含uPAR基因的所述至少一种表达产物的量，所述量对应于已知量的uPAR基因的所述至少一种表达产物。
对照包含已知量的本申请所引用的一个或多个标志物的一种或多种表达产物。优选地，对照包含已知量的本申请所引用的单一标志物的一种或多种表达产物。
此对照可以是合成的样品，含有校准量的一个或多个感兴趣基因表达产物，或是生物学样品，其一个或多个感兴趣基因的表达产物的量是已知的。
根据一个特定实施方案，本发明所述的试剂盒中表达产物的所述特异性结合伴侣是至少一种杂交探针和/或至少一种扩增引物，或至少一种抗体，或至少一种抗体片段，或至少一种亲和蛋白，或至少一种适体。
本发明还涵盖本发明所述的试剂盒在实施本发明方法中的应用，尤其是预测疑似感染、SOFA评分小于2的患者中并发症风险。
涉及本发明方法、目标的上面所提及全部实施方案，所有特征和其组合适用于本发明所述试剂盒和其应用。
根据一个特定实施方案中，本发明所述的试剂盒的表达产物的所述特异性结合伴侣是至少一种杂交探针和/或至少一种扩增引物，或至少一种抗体，或至少一种抗体片段，或至少一种亲和蛋白，或至少一种适体。
借助下列通过非限制性说明给出的实施例以及图1-4，会更好地理解本发明，其中：
-图1代表盒须图(或箱形图)，对应于样品中sVEGFR2和suPAR蛋白表达水平的图示，所述样品在进入急救中心(T0)后取样，根据患者中发展或不发展并发症：A.sVEGFR2在T0的表达水平；B.suPAR在T0的表达水平；
-图2代表盒须图(或箱形图)，对应于样品中蛋白sVEGFR2和suPAR表达水平的图示，所述样品在第一样品后6小时(T6)取样，根据患者中发展或不发展并发症：A.sVEGFR2在T6的表达水平；B.suPAR在T6的表达水平；
-图3代表盒须图(或箱形图)，对应于进入急救中心(T0)后的第一血液样品与第一样品后6小时(T6)的第二血液样品之间标志物sVEGFR2表达水平变化的图示，根据患者中发展或不发展并发症。
-图4代表表观ROC曲线，用于在T0(进入急救中心后的第一血液样品)的sVEGFR2和suPAR组合与第一样品在T0后72小时期间患者并发症可能性之间的关联。
实施例
实施例1：获得和制备血液样品
此回顾性观察研究在19-101岁的患者(111个男性，122个女性，中值年龄：53岁)中进行，所述患者在2015-2017年之间新进入14个法国和比利时医院中心的急救中心，进行涉及疑似感染的护理。这些患者都在疑似感染后住院。纳入标准如下：
-患者为18岁或以上；
-患者有单一急性感染位点，所述感染是疑似或确认通过临床医生根据临床或近似临床病征；
-患者进入急救中心，呈现以下标准的至少2个：
。温度高于38℃或低于36℃；
。心率大于每分钟90次；
。呼吸率大于每分钟20呼吸或PaCO2<32mmHg；
。白血球数目大于12000/mm3或小于4000/mm3。
-患者的SOFA评分小于2；
-患者从其到达急救中心后小于72小时内有症状；
-患者隶属于社会保障系统或是这类系统的受益人；和
-患者同意参与研究。
临床排除标准如下：
-患者到达急救中心超过12小时；
-患者在到达急救中心后呈现败血性休克(器官衰竭和持续性低血压(尽管有适当血管流体置换(1小时中多至20ml/kg))和/或需要使用儿茶酚胺)；
-患者在到达急救中心后具有败血症以外来源的急性器官衰竭；
-患者在纳入前的星期住院；
-免疫抑制患者(HIV、移植、患者接受化疗、患者接受>20mg/天的泼尼松龙或等效物的治疗)；
-患者具有来自可能与SIRS相关的非传染性病理学的已知病理学；
-患者在纳入日期前30天内诊断有败血症；
-患者已纳入研究；
-拒绝签署书面的知情同意书的人；
-处于法律保护下的成年人；
-怀孕、临产或哺乳期女性；
-有法定监护人的人；
-由司法或行政决定剥夺自由的人以及在《公共卫生法典》条款L.3212-1和3213-1下未经同意、不纳入条款L.1122-8范围的住院人员。
233名患者纳入研究。所有这些患者满足下列标准：
-第一血液样品最晚在患者进入急救中心后的前12小时中(T0)取样；
-第二血液样品在采集第一血液样品(T0)后4-8小时(T6±2h)取样；
-在采集第一血液样品(T0)后72小时(T72)内由评审委员会观察并发症评估；和
-在患者进入急救中心后28天评估死亡率。
并发症由评审委员会确定，所述委员会由独立于研究的3名医生组成。此委员会根据数种标准确定并发症；尤其是出现新的器官衰歇(SOFA评分增加)、死亡或需要重症监护。
此组的233名患者中，36个患者(21％)在其进入后72小时发展出并发症(“并发症”)且185个患者(79％)未发展出并发症(“无并发症”)。
实施例2：可溶型VEGF受体(sVEGFR2)的测定
人血浆在T0和T6收集自上述实施例1中的患者。
测定蛋白sVEGFR2，借助于
Figure BDA0002725597540000181
销售的抗体(Ac单克隆抗人VEGFR2(KDR)ref:MAB3573，和人VEGF R2/KDR/Flk-1抗体抗原亲和性-纯化多克隆山羊IgG ref:AF357)和用自动仪器
Figure BDA0002725597540000182
(生物梅里埃(bioMérieux))的ELISA测定。为此，构建ELISA测定，使用来自
Figure BDA0002725597540000183
B.R.A.H.M.S.PCTTM试剂盒(生物梅里埃,产品目录号30450)中药筒(cartouche)的试剂，而不用抗体和对照校准物。
Figure BDA0002725597540000184
是自动多参数免疫分析仪。其是提供高灵活性的统一测试封闭系统。此自动仪器的特征在于其稳健性、灵活性、易用性和用于小到中型实验室。其能用于进行常规测试、确认和高价值医疗测试。
检测用ELFA(酶联荧光测定)技术在血清或血浆中进行。ELFA测定的原理对应于免疫酶促反应与终点检测采用荧光的组合。所用的酶是碱性磷酸酶，其催化底物4-甲基-磷酸伞形酮(4-méthyl-ombelliferyl phosphate)到产物：4-甲基-伞形酮(4-méthyl-ombellierone)的水解反应。所述产物在370nm激发后，于450nm波长发射。结果通过
Figure BDA0002725597540000185
自动分析，并表示为相对荧光强度或RFV(用于“相对荧光值”)。通过从所得总值减去背景噪音(BKG)值确定此RFV值。
试剂如注释所述使用，进行以下修改：
1.椎体
Figure BDA0002725597540000186
用MAB3573单克隆抗体敏化，浓度为2.5μg/ml(用第一抗小鼠Ac以10μg/ml然后抗sVEGFR2 Ac以2.5μg/ml间接包被)；
2.
Figure BDA0002725597540000187
B.R.A.H.M.S.PCTTM试剂盒中药筒的第四孔内容物被400μl显示抗体(ref.:AF357)替代，其偶联生物素，稀释到1μg/ml；
3.直接使用纯的血浆样品(200μl)；
4.进行ELISA反应，借助于自动
Figure BDA0002725597540000191
仪器和应用
Figure BDA0002725597540000192
B.R.A.H.M.S.PCTTM试剂盒方案；
5.以减去背景噪音(在反应前就底物读取)后的总值的形式获得结果。通过测定一定浓度范围的重组蛋白(重组人VEGF R2/KDR/Flk-1 Fc嵌合体.
Figure BDA0002725597540000193
ref:357-KD-050)形式的标志物，产生校准曲线。通过沿着横坐标记录标志物浓度和纵坐标上
Figure BDA0002725597540000194
的信号读数(RFV或相对荧光值)，绘制校准曲线。通过记录对应于
Figure BDA0002725597540000195
的RFV信号读数的浓度，计算血清中存在的标志物浓度。
实施例3：通过ELISA测定可溶型uPA受体(suPAR)
在实施例1的T0和T6从所述患者收集人血清。
借助冷冻血清(-80℃保存的样品)测量suPAR血计数。用商业CE/IVD标记ELISA
Figure BDA0002725597540000196
AUTO Flex试剂盒根据厂商(Virogates，Birkeroed，丹麦)说明分析样品。
Figure BDA0002725597540000197
ELISA测试基于简化的双单克隆抗体夹心ELISA测定，其中血清样品和辣根过氧化物酶缀合的抗suPAR初始混合，随后在抗suPAR预包被的微孔中孵育。校准试剂盒的重组suPAR标准品并使得能够计算校准曲线。suPAR浓度以ng/ml血浆测定。所述测试经验证用于测量0.6-22ng/ml的suPAR水平。
实施例5：统计分析
统计分析用3.4.0版本的R软件实施。对p值或p-值小于0.05，视作观察到的差异显著。
标志物sVEGFR2和suPAR表达水平与并发症的出现或其他方面之间的关联
研究测量标志物表达水平的预测能力，涉及第一血液样品在T0取样后72小时内患者是否出现并发症。Wilcoxon-Mann-Whitney测试用于鉴定此关联。
VEGFR2和suPAR在T0及T6的表达水平如上所述在233名患者的血液样品中测量，所述患者疑似感染、SOFA评分小于2。结果示于表5和图1及2。
表5
Figure BDA0002725597540000198
图1及2所示的结果在纵坐标上提供sVEGFR2(以pg/mL计)和suPAR(以ng/mL计)在T0及T6的表达水平，根据患者中是否发展并发症。
这些结果显示在T0及T6的标志物sVEGFR2和suPAR表达水平与在T0取样第一血液样品后72小时内发展并发症之间的显著关联(p<0.05)。sVEGFR2蛋白在T0及T6展示的性能优于suPAR。
因此，所研究的标志物的表达水平能用于区分在T0取样第一血液样品后72小时内会发展并发症的患者与不发展并发症的患者。
更确切地，会出现并发症的患者的sVEGFR2表达水平低于不受任何并发症影响的患者。关于suPAR，发展并发症的患者的表达水平高于不受任何并发症影响的患者。
sVEGFR2表达水平变化与是否发展并发症之间的关联
除了sVEGFR2表达水平与发展并发症之间的关联，观察到在第一血液样品取样后4-8小时中采集的2个连续样品所测sVEGFR2表达水平差异与72小时内出现并发症之间的关联。
sVEGFR2在T0及T6的表达水平如上所述在233名患者的血浆样品中测量，所述患者疑似感染、SOFA评分小于2。对于各患者，根据下式计算变化：
Figure BDA0002725597540000201
结果示于图3，在纵坐标上给出T0及T6之间的变化结果(根据上式的Δ)，作为患者是否发展并发症的函数，患者的临床监测显示其病症随后恶化(“并发症”)，以及临床监测显示其病症不会恶化(“无并发症”)。
这些结果显示sVEGFR2表达水平在T0及T6之间的变化与第一样品后72小时内的患者并发症差异性相关(p-值＝0.01)。
更确切地，发现其病症恶化的患者呈现的sVEGFR2表达水平在T0及T6之间的变化高于不受任何并发症影响的患者。
sVEGFR2和suPAR表达水平与并发症可能性之间的关联
变量sVEGFR2和suPAR与患者状态(本情况中是“并发症”)之间的关联通过逻辑回归测试。关联强度通过计算比值比(OR)预估，OR是患者发展至少一种并发症的概率与患者不发展任何并发症的概率之比。
对于各定量变量:sVEGFR2和suPAR表达水平，比值比如下解释：
-OR＝1:无关联
-OR<1:第一到第三个四分位数的增加与并发症风险降低相关联
-OR>1:第一到第三个四分位数的增加与并发症风险增加相关联
IQR是四分位差。IQR是通过获取第三与第一个四分位数之间差异获得的离差量度。
就233名患者的血液样品测量IQR.OR，所述患者疑似感染、SOFA评分小于2。
还生成逻辑回归模型以分析sVEGFR2和suPAR表达水平之比的性能。目标是证明标志物之比与第一样品取样后72小时内的并发症风险显著关联。
结果在下表6中给出。
表6
标志物 IQR.OR p-值
sVEGFR2 0.36(1.7-4.8) 1.19.10<sup>-4</sup>
suPAR 1.49(1.1-2.1) 2.09.10<sup>-2</sup>
sVEGFR2/suPAR 1.74(1.3-2.4) 5.13.10<sup>-4</sup>
所研究的群体中标志物sVEGFR2的IQR.OR值是0.36，p-值等于0.0001。因此，sVEGFR2表达水平低的患者(第一个四分位数)具有显著大于(2.76倍)sVEGFR2表达水平高的患者(第三个四分位数)的并发症概率。
所研究的群体中suPAR标志物的IQR.OR值是1.49，p-值等于0.02。因此，suPAR表达水平高的患者(第三个四分位数)具有显著大于(1.49倍)suPAR表达水平低的患者(第一个四分位数)的并发症概率。
sVEGFR2和suPAR之比的IQR.OR值是1.74，p-值等于0.0005。因此，sVEGFR2和suPAR之间表达比高的患者(第三个四分位数)具有显著大于(1.74倍)表达比低的患者(第一个四分位数)的并发症概率。
sVEGFR2和suPAR单独及联合的预测性能的分析
为分析sVEGFR2和suPAR标志物在T0的单独及联合预测性能(敏感性/特异性)，计算曲线下面积(AUC:曲线下面积)；另外，就0.90的最小强制敏感性评估最大特异性、最大阴性预测值(NPV)和最大阳性预测值。结果示于表5和图4。
表5
Figure BDA0002725597540000211
标志物在T0显示极佳的总体性能。然而，sVEGFR2在T0具有更好的总体性能(AUC＝0.70)。另外，结果显示sVEGFR2和suPAR标志物组合能用于增加预后测试的总体性能(cf.图4)。
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gaggacctga aagccagatc taactcggaa tcgtagagct ggagagttgg acaggacttg 480
acattttgcg atctttcatt taccagtggg gaaactgagg ctcagagact ggcccaagat 540
tacccagcga gtctgtggtc gcctgtgctc tagcccagtt ccttttctag gactctggtt 600
tgcgacaggg acctcggctg gagcatgtcc tgagatgccg acacaccctc aggctcttgg 660
gaggctgggg tgggaaggcg cctggggttg gcaggcagga ggtgcctccg caggcgagaa 720
caggcggtga aaagttgtct ggctgcgcgc aacatcctag tccgggcccg gggaagaaaa 780
ccttgccgga atctcaggcc gggtctcccg gatcggacgg tacactcggt tctgcctctt 840
tgcgggaccc ggcccgttgt tgtcttcatg ctcgaacaca cttgcacacc actgtgtgaa 900
gtggggtctg gagcggagag aaactttttt tccttccttg gtgcaggacg ccgctctcct 960
tgcagagcga agaagggggg gaatagggac ttgtcctggg ggctttgaca gcttccccaa 1020
gggtctccaa gtaacagcca actgtcctgc gtaaagcatt gcacatcttt caaagcgctg 1080
tggtccttgg tgtaagcgca tagtcagaag ttcaagctcc gaaaaccttt cctgtgggcc 1140
ttggtaccta gctttagtgc cattccttcc tctccctgcc gcctaaaatt tccgtctcct 1200
tcaattagga acacacacgt tcttcatgca atagctgtct gtcttttctt cctcactttc 1260
ctttctctct caacccctta gataatattt ctttcctgca gccagtttgc tgatatccag 1320
atttccaccc tttgcagggt gagaaagggg aaagggtcag agaaagaaaa aaaaaaagtc 1380
gaataattca gggaaaaaaa tttcttactc cctaagacaa gaatcacatg tcttagaaga 1440
cactcacacc cacatacagt accaggatca tctgtccatg gttactgaat tttctttata 1500
atgacttggt tcaacgggtc cagtccacca tggacactca tttgtcccag acaagccctc 1560
tctctccccc tttctgggca gagaatgaag gtctggaaca tgtggttgct ctgtattcca 1620
caaagaagtg agttgctttt aagcctgggg tgtttcctag cgtagtagta acggcaggcc 1680
ggtcgccctg aatataatgg tgaacttgcc cttttggagt gcattacttg cttaattgga 1740
ttgggctgta attggtgcca tcaaattcta gagacagagg cactgttgtt tttccttccc 1800
gtctttgagc tggaagggta acagtgcaca aattaattaa tattggttat gggatttgaa 1860
catagaaggg ctttttattg agtagtagca tgtgtacctc ttacagttat ttctttagaa 1920
ctttctgaag agtccagctc aagcttgcca atgaaaacga atgacattta atggagcaaa 1980
aacaaaaaac aaaaaactat gttggtctac aaatatgaat ttgaagttat tgagagcctt 2040
gttgaataga tttttgttgt aaacgtgtct ctagaatagt atggcatagt ctcagcttcc 2100
tatgaatgaa ggacatacct tttctttttt aaaatatttg ttacacagga aagtgtgtct 2160
agaatgtgat ctgtggcaat aaattatgag agaccttcaa gagtttctga ttttggtagc 2220
cgagtgggca cagtttattg agaatcattt ttactgccat ttgttttctc acaagaatgt 2280
gcccaaataa tggttttttt ctcatttgga tggcagtgtg aattgtacat catgttttca 2340
gcatctttct caacctagtg ttccccagtc aagtttgaaa tctgtgttat ccaaatgaat 2400
tgttttcatt ttccttttct tagacaaagt gggactccag gtttcatttt gcttttaaac 2460
attttggttt tttgtttgcc tgttttgggg gcagttattt ctttcatatt aaaaagtact 2520
gtgcaggctg ggtgcagtgg ctcattcctg taatcccagc acttagggaa gcagaggcag 2580
gaggatcgct tgagtccagg agttcaagaa gtgcctgggc aacatagcga gaccccattc 2640
tctatttaaa acataaatgt aacccccgtt ccacgcacaa agtactgtgc aaattaatta 2700
aacatgacca cccagaccag caactgtcca agagtggccc atagaccatc tgtggtagga 2760
taatttgaaa tgcttgttaa aatgcagatt tgtagaccca gggatattct gacagagtct 2820
aaagtcttaa gaacaaaact gttctaaaca taagtcagta ccaatgccag ttaatttctg 2880
agatatattg atataactta gtttccagtt ttttaaaaac catattattg acttaaaaac 2940
catgatattg accagttatg tcagtaactt attttgcaca tctgtgtggt gtgtgagaac 3000
atgtgcagtc acttattcat tttgcctgca tttgttcata ttgggatcct cagattcaat 3060
gcactggatg tttgcactgg gtatttactt atactctctc tatttattcc gtctcatact 3120
tcgtcctatt tgttcatact ctcttatttg cccagcaagg tcaatgccag tttaggccta 3180
gggagtcatt ttttcttagt tgatatgact tagaaagctt gggagcctgc ccaacatcaa 3240
ttactttttt aaagctggta ttttctaggt cttgatattt attaagaccc tagcatagtg 3300
gacaattttt ctttctctca tgctttttca acacctcata gctcttcaca tttagttgac 3360
agagaattca gttatcttgc tgtagagtga cccatggtga ggaatctatg ccatggtact 3420
tttctggttc ttatccctta taggtaaaga caagtttctt atgtctgaag cttgatgtca 3480
ggatgagttc agggctttga tgaataagtt cagatctccc aattgtaatt cattagcatt 3540
gcacttaaaa aaatttatat acgtttttaa aaaagggtaa tgctaatgaa ttacaataga 3600
gagaaaagta cattagtttg catgtatgtg tgaaactggg aaaatttttc acgaaaatat 3660
tcatatactt tttaaaaaaa gggtaatgct aatgaattac agtagacaga aaagtatatt 3720
aatttgcaca tatgtgtaaa attgggaaaa ttccacacat acataaaagt atattaatat 3780
gcatgtatgt gtggaattgg ggaatgtttt ctcttcctca gtttctctcc cttgctttta 3840
atgtacagtc tttatgagcc attatttcag ctgtggcagt ttggttacca ggggaagcgc 3900
actagaaaat tgataaagga aaatgagaca aggtcataga ttctctcact cccttcaggg 3960
tacgtagatg aactatataa aaatccgtct aagtgggatt cgttaatcag caatttagtc 4020
aaatgtgtac atcctatgtt ctataagaaa tgtcagtggg tcctttccca agggagtgag 4080
atcatcagat gaaggttcat ttggtttcaa tgtcccgtat ccttttgtaa gaccttgaag 4140
ttggcaatgc aggaaaacag gaactccacc ctagctccat gaattgcaga actgttgtgt 4200
tggtttatga ccatctgccc attcttcctg ttatgacaca gcttgtgaac ttttactgag 4260
aatggtgaaa agtaaattcc cagttttata caatgaattg ctgaagaggc cttttaaagt 4320
atagagtatg cattgtttat ggaaggtgtt tcctattagg tctaactcag tggcaactac 4380
attcatttat ttaatttgtt tctaggtttg cctagtgttt ctcttgatct gcccaggctc 4440
agcatacaaa aagacatact tacaattaag gctaatacaa ctcttcaaat tacttgcagg 4500
taaggattca ttctagatct agatttcttg tgttaagtaa ctgattgttt attgagtgga 4560
aataatttcc agtagagcag aattataata gagcttgtag taattgttca taagtggtga 4620
ggtttctaag aactgatgta ataatggaaa atgagaagaa ttttctctca aaaattctgt 4680
acaattttgc tggtgttttt atactattct ctgccaacat gcatacacac acacacacac 4740
acacgcacac aaatacacac ccacacccac attccaataa ccagtacagc cacctggcgt 4800
atagtagaca tacgctcaat aaatatgaat gaataaatga agttgagggc atacatttaa 4860
ggaatagagt tgaaaaaatt tgggactata tttattatgc ttggtatgat tcttgaacac 4920
ttattatccc tttccaaaaa ctttgcttta taagaaattt attactataa ttacttaggc 4980
agtaatattt aatagcaatt taatatttag tgggtaatat tactgagcgc atgatctaca 5040
taaataatgg acttcgggcc ctgccttgat attctggaat gcatctttcc ccacttgcta 5100
gcaagaagtc atgctattga tttttgataa ctggagaagt agacttcttt gtcaagaaga 5160
agaggccttt aaattttgcc tttcaaccct taccccagga cgaaagatag aagacccttg 5220
ggtttaacat agtgatcaca cacgaaaggc atggagcctt cttaggacct gtgtgttttt 5280
ggtagagact gtgacaagtg gaggtgatgt taccctcctg gaagagtgct gggggtccac 5340
aaaggacctt gggtaggtta ttgccattgc ttcatacttg ttgaatacta agcattaaac 5400
cgaatgacat acatctattt tagactgcag tataaagaat accctagccc cttaccaata 5460
cccagccctt gggaaaaaac acagtagcag gtgctgtttc tctagcttta cttgtttaag 5520
acacatttcc cattagattt tccttttacc gaccctcgat aacaaggtta tttgaaatcc 5580
ccaaggatcc catgctccct ttttaaaact ctgcataaac atttcttatg ttctgaaaaa 5640
aaccatggag tgtgttaaaa gtaacttcat tgatttagct gcaacttcct ggaaatttta 5700
agttctttga atgaagggcc aataatgtta cattcttctt gatgttgact atcttcttat 5760
cttccttggg gccttgtaga gaaatgctgc agtacaagcc atctatgttt taatgcgagg 5820
tccttacaag gtcctgaggg actcttactt gcacctcctt ccttcctaac ctcacttctt 5880
actccccttt gctcactctt acctggctgc tctggtttcc tggctgttcc cttaatactc 5940
cagatatgca cctgctccag ggcctttcca tgtgctgttt ttgctcctgt aatactgctc 6000
ttcatgatgt tcctatggct agctttatca agaccacctc ctgcaaaatt ctttactctt 6060
ttctttgtat cttctatatt tttctccata gtactaaaca ctatctttta tacaataaac 6120
tttccttact ttttaattgc ctgttttctc cagttagact gaggttccat aaaggcattg 6180
atttttgtct gatttgttca ctgctctttc tctagtcctt aacaagtttg gcacatagta 6240
gatgcttaat agatatttgt tgaaagaaag aatgcattaa ttaatggaaa actcaggaat 6300
ctttataagt gacttctgaa gctgagttta taacttttca tcatatgtca atctgacttg 6360
ttggtagaag actttgtttt tttttttttg aggcagggtt gccctcttgc ccaggctgaa 6420
gtgcagtggt gtgattttgg ctcactgcaa cctccacctc ccgggttcaa gcaattctca 6480
tgcctcagcc tcctgagtag ctgggattac aggcatgcgc caccacacct ggctcatttt 6540
tgtattttta gtagagacag ggttttacca tgttgcccag cctggtctcg aactcctggc 6600
ctcaggtgat ccatccgcct tggcctccca aagtgctggg attataggca tgagccacca 6660
tgcctggccg gtagaagact gactgtgtct gttgaagagt ttatttaagt ttcaaaacca 6720
aattttctct tttcttagaa atagcctcac agtctggcac ttcatattaa tacctccctg 6780
aaattaattt ttcaggggac agagggactt ggactggctt tggcccaata atcagagtgg 6840
cagtgagcaa agggtggagg tgactgagtg cagcgatggc ctcttctgta agacactcac 6900
aattccaaaa gtgatcggaa atgacactgg agcctacaag tgcttctacc gggaaactga 6960
cttggcctcg gtcatttatg tctatgttca aggtaagtgg tgaaataaaa ttcatttccc 7020
acgtctcttt accagttata aaagacaata ggctcaaaga agaattgagt acaacaaagg 7080
gcttgctcta aaggctgttt gccaagagga atacacacaa ttcttctctc ctgaggcttt 7140
ctctgagaaa taagactcat tgattctgga gcttgggccg tgttacctct tttttgccca 7200
gttagtttgg gtctgatctt tgtttccaag gtaaatctgt gttcactgtt ggccattgag 7260
acttataaaa agtcttccta tgtttgagaa gaaaacctaa aattcttgaa atcgaggaag 7320
atttgggggt gaattatgga gaaatttctg tggagagata agttatctac agcagagtag 7380
gagattttcc caagaatgca taggaaagca ttttttgcca agggctctgg agttttttgc 7440
acataggaac ctttttttct tactagtatt tcataaaaaa caattcccat actcatgtgc 7500
aaataaagac attgcttcag actcttttca ggacaatgtt tctttccttt gcttgtttgg 7560
tctgagatct tggatgatat gctgtatctt tctaggatgt gcagtttggg attgatatta 7620
tgaaggctga cttaacatcc atatagtata aaataaatgt cacacatatt ctgcatttat 7680
aatgagttat gcattctttt gtgtttcaaa aatcttacac tatcttatct tttctgtgaa 7740
aacctaactt aactaatgag atccctatga tataaattta aggaatgtaa gggctgcatc 7800
atagtttggt tggatgtacc aaatattttt cttttcagtg aagataaaca gacattttat 7860
gtatttacgt atatgccttt ttacatccca gagtatttga gacaggtgaa gatgacttag 7920
acttttttcc cagaagcagc ttttacaggg caagaatttc atcagctttg ggaaacacac 7980
ttgcatatct ctgcttacat ttcagtagtg taatatggtc agtgcaatga aaaagtggag 8040
accacatcaa aataacctat gccactggat tcacaatgtt tgagaaatat ctttgcccag 8100
agtaagcact gtcaaagata gaattctgtg ccctcctcct tccctccaca agatttgaaa 8160
gagacaaggc tcacatcttg gagaatttct ggctcctttt gacctggcag tcttgagaga 8220
tgcagctcgg tcagaagatt gcaaggattt cctgctttca gcctgtctag aaatactaca 8280
agatgaacat cccccatatc tcattattta cttcttccta agtcaggaaa cttggagaca 8340
tgtgaaaatt catttcatga gtttcagtaa atattttatt ttgagaggct gggtggtggt 8400
ttgggtttct tttgtttatt tccttttttt gagataccga aatagaattg atttactaaa 8460
taggtttagt cttacgtcaa agggttaatt tagcttccaa aggcttgctc tgtaagcaag 8520
ttatgtaata tttcataaca tgtggatgaa aggtaggcaa tattaagaag tggcaatccc 8580
tagcactgtt tattggtaca ctgcctgtct ttgggtatac cattaaattc tgcttcctgt 8640
ctaagcttaa agttctagga gttgggctgt ccaagatttt ggccatgaag ttaaacaatg 8700
ggaaaggaaa cactgaagta ttctctatgg ataggtgttt aatgtcccct ctggtcgcca 8760
ccttacttcc ctagtcttct gaccccattc tcttcagcaa tggatggagc caggaagtga 8820
gccctggcct cataagataa tggctatggc atgtggtggg ctagattggc tgcttttctg 8880
tgctttccag ctgggaagga aatcaaactt ctgctgttgc agggaattag ctgcctttgt 8940
cccctgtggt ttaattaact ctttcttcac tttgactgac tattatgaag cactctgaga 9000
atgcttgatg ggatgtgttg ggcatagcaa tgtgaaatgt tatctctctg agatttcaag 9060
catgactcca caccacatca tctctatctc tgaggaatgg actaggtttc cagcagcatg 9120
ttaacattgt atgagtaatg tttgattggc cttgaaatct tttttttttt ttttttttga 9180
gacggagttt tgctcttgtt gcccaggcta aagtgcagtg gtgctatctc agctcactgc 9240
aacttctgcc ccccggttca aatgattctc ctgcctcagc ctctgaaata gctgggacta 9300
caggtgcgtg ccatcatgcc tggctaattt tttgtatttt tcgtagagat ggggttttgc 9360
cacgttggtc aggctggtct caaactcctg acctcaagtg atccacctgc ctcagcctcc 9420
caaagtgctg ggattacagg cgtgagccaa gaacccagtc agaatctctt cagttttctt 9480
ctcagtcttt ggagtggtga cttttcaaat gtttgtcatt gaagatatca atgactgcta 9540
aatgttaaac taaatgcaaa aacaattaaa catggtttta gaaagaatca tatccctagt 9600
cttcagaatc ttaaaatgct cacatgaatg gtcctcttga ataaccaaat tcaaaagtgt 9660
tagctgtttc ctgttaatct aaagatcctt tgggatccat tcatttattt tcatggaatt 9720
tacattattt acctaaagag agagcacatg agtattttaa atattagtaa aacttgtcgg 9780
taaagtgtat agatttaact ttaaatttta aagtaaatat tatccttcat tttgaaaaaa 9840
ttataatgat taatctttta aaatgtgaaa tctataaaaa tatattctgc ttgtcaataa 9900
accttgtgaa aggagtcaat ctcaattggg agtttttttt caaaattttt atacacacag 9960
atatatacac atgcatgtgc atgcacaaac acacacacac acatacacac acaccctcat 10020
gtagcacaga tatctatcag cagaataatc tgtggatgcc tttggttgtg tgaggtgtcc 10080
cttccagtca ttcacttgtc tggttagagt ttaggaacct gaaaaatgac caacttttct 10140
agtaaatact attaactcat taataaaact aaattttctt ctagattaca gatctccatt 10200
tattgcttct gttagtgacc aacatggagt cgtgtacatt actgagaaca aaaacaaaac 10260
tgtggtgatt ccatgtctcg ggtccatttc aaatctcaac gtgtcacttt gtgcagtaag 10320
ttgcatctcc tccaatcgtc tcttaagttt ttataatttt aagctaatat taagatgggt 10380
aacctgttta taatattcac aatgagtttt aaggatcctt taggaagggt caaatgcaat 10440
gaataaaact aattagtatt cttaaaaata agatgaattc ttcagtgatc attgtacatg 10500
gctctcattt ttggtactgg attaaatatt tgatatgtct ttttattacc cagagatacc 10560
cagaaaagag atttgttcct gatggtaaca gaatttcctg ggacagcaag aagggcttta 10620
ctattcccag ctacatgatc agctatgctg gcatggtctt ctgtgaagca aaaattaatg 10680
atgaaagtta ccagtctatt atgtacatag ttgtcgttgt aggtaagagg acatttcctt 10740
tccatatcat taataacata tccttgtatt aagatcttgg agataacaac atagagtgaa 10800
gaaggatatt gaaaagtata ggaactcagg atatggtgtt gggcaattca tctgctcttc 10860
tctaccaaat aaacccatgt gcaattgagg ttgtctcttt tcttgccaag attaaggaag 10920
aaaaagaaaa ctttttaaaa aaaggatgaa agcgaatggt attactcgag cacattttat 10980
gaagaattca atgttcagag cattgcttgc tatcaattat ttcaattatg actattttat 11040
ggaaacttca gcaatttgct aaagctggcc ctactggcct agggctactg accactgaaa 11100
gtttactact tttctgtcca ctgggttaca acatctttga gatctgtgaa ggtagtgctt 11160
tgtaaacctc tgttggccat tttcctggga gctaccaagt attggtgagg cctgcaggga 11220
aaaacaatgt ggcatgtttt aaagttgcat tactttaaaa aataaatctg tgcaaagtta 11280
taggcttatt tgctctctca tgttctgttt tttcaattta cttgctctag ggtataggat 11340
ttatgatgtg gttctgagtc cgtctcatgg aattgaacta tctgttggag aaaagcttgt 11400
cttaaattgt acagcaagaa ctgaactaaa tgtggggatt gacttcaact gggaataccc 11460
ttcttcgaag gtaacgctaa tgattcaaag ccagacctcc aaatacttag ataataagcc 11520
ccagtgaagt ttgcttgaga gataggggcc tctttggcca gataaaatgt aagagcctta 11580
aacacacaca catacacacc cactcacaca cacatacaca cacacacaat ttaagggaat 11640
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tagccaggct atgaatatta gttttctcta ggtgattaca tctttccaca ttatgtcatt 11760
tctctgttct ccaaagtttt tgatctacat tccttttaag ggaatttctc tttaagaggt 11820
ggcatgagat acactgctcc ttaaacagtg gtcacattta cttgtgtttc tgcagtttat 11880
atccatctca ctttcaccac gtgaggtttt aaaaatccta attcagttgg ttccatttat 11940
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ttttagcatt aaataatgtt taccaaagcc cagatttaat tctgtgtgtt actagaagtt 12060
attgggtaat gttatatgct gtgctttgga agttcagtca actctttttt tcagcatcag 12120
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ttgagcacct taactataga tggtgtaacc cggagtgacc aaggattgta cacctgtgca 12240
gcatccagtg ggctgatgac caagaagaac agcacatttg tcagggtcca tggtaagcta 12300
tggtcttgga aattattctg tgccttgaca agtgagataa tttaaataaa tttaggtcac 12360
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cacatgacct agaggtcaag agcatagctt tgtagtcagg aacttgggtt caaacctcaa 12480
ctttaaagat gagatgtgct gatatacagt aagagttcat ttagtattac ttattatagt 12540
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tttcatttta ttgcaaggct gagaggccta cttgaataag catgagcttt gcaaactggg 12660
gaaacattta gcaatataca gttgacctgt gagcaactca gggattgggg gaactcaggg 12720
gagttcccct aactttccct cctctgcagt caaaaatcca tgtataggcc gggcgcggtg 12780
gctcacgcct gtaatcccaa cactttggga gtctgaggtg ggtggatcac ctgagatcag 12840
gagttcgaaa ccagcctggt caacatggtg gaaccccatc tctactaaaa atccaaaaaa 12900
ttagcctggt gtggtggtgg gagcttgtaa tcccagctac tcaggaggct gaggcaggag 12960
aattgcttga acccaggagg tggaggttgc agtgagccaa gatcgtgcca ttgtacccca 13020
gcctgggcaa caagagtgaa actccttctc aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aatcaaggta 13080
taacttttga cttccacaaa acataactaa tggcctactg ttgactggaa gccctactga 13140
taacataaac agtcaattaa cacatatttt atatgttata tgtattatat actgtattct 13200
tccaataaag ctagagaaaa gaaaatgtta ttaagaaaat tgtaaggaag agaaaatata 13260
tttactattc attaagtgta agtggatcat cataaaggtc ttcatccttg tcttcacgtt 13320
gagtaggctg aggaaaaggg ggaagaggag ggggtggttt tgctgtctca ggggtggcag 13380
aggtggaaga aaatctgctt ataagtggac tcatgtagtt caagtttgtg ttatttaagg 13440
gtcaactgta attgaactgg aattaaattg aactggcctt gagaaaatca ccttaatttt 13500
ttgtttattc tctttcattt acataaatgt ctgagtttac atggtaattt gtgtggcatc 13560
ctacttataa gccttggaaa ggattttgga gtttatatta tgagaatgca tcaatacagt 13620
gaaattttaa aaatacctta gataatgcta tttattagag ttgtaatcat aaaagtggca 13680
acaactataa caagtatgat ttagtgagca cttactttat tagctcatct catctttgaa 13740
gctgagattg gaactcaagt tcctgactac aaagctatgc tcttgacctc taggtcacgt 13800
ggcatcccta gcaagaactt gaaaatttct tctgaatgaa caaaatagaa atcactaagt 13860
gtcctaaatt tatttaaatt atttcacttg ccaagatgca cttgtcaaaa tacacagaga 13920
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ggatatattt tgaaggtaga gtcaacaggg tccgctgatc aattcattgg ttgtggagta 14160
taagagaaaa agagtggaag atgactcgag cgttagcatg agcaactgag taaatgatgg 14220
tgttatttac tgagatggca aagatcgaga aggcagtgag atttagggaa acagtgttag 14280
atatgtttat ctggagatgc ctgttaaaca tccaagtgga gatatttaac atatcaaccc 14340
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catccctggg ggacttagag aaagctgcac agaggagcaa gtgtttgagt tgagacttga 14580
gcaatcacta ggcttgtggg agtgcactag cggggagaga aaagcaaatg caaacacagg 14640
aggtgtggga gaaacacggg aggtgtggga gaagctgaaa agtgacccac tgaaagatag 14700
tacaggaaat cttggaactg cagctactca gaccctcaag gtctttgacg tttcacttga 14760
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cttccagaaa aaccttttgt tgcttttgga agtggcatgg aatctctggt ggaagccacg 14880
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ggtagccgat ctgcagtcaa atataccacc actaaaatat aaatatttgt tcttttgcag 42960
tcagtatctg cagaacagta agcgaaagag ccggcctgtg agtgtaaaaa catttgaaga 43020
tatcccgtta gaagaaccag aagtaaaagt aatcccagat gtaagtacgt cttttaaaaa 43080
tagtcttaga aataatacaa aggatgaaac actagctaga taaatattag cctaagcatt 43140
aaagttttgg agcctcatta gaaggctgcc ctcgagtgtg tgtatcatgg ggtcattatg 43200
gagatggaac tttgtttttt tcataagtaa agcccttggt ccaaggttca agacagtgta 43260
gctttctgac caatttcact aaagtgcaag tagtgtcata gtgaagacag cgatggtaac 43320
aggcattctc agctgctgat ttgtaaattt tctcttctcc ctggcctgtg tctactcata 43380
ggaagcagtt gcttcctttt gtagcttgga caatttgtgg ctatgatacc tttatgttct 43440
tccacaggac cttatttgat agacatgata gatgggttga gaaatcagct taattaaata 43500
gttggtcatt ttatatgctc aattaactgt gccatctcat tgtctcttaa aaaggacaac 43560
cagacggaca gtggtatggt tcttgcctca gaagagctga aaactttgga agacagaacc 43620
aaattatctc catcttttgg gtaagactca gccatattaa aaagacaaat ttcaatagga 43680
atttttggaa ggaacttagg actttcagtg taagtgcaga attttcccta tggggtcttt 43740
gttggttgga gaaattagca tcaatttaac aaataaagaa tggaaactaa ccacacaata 43800
aaattaagtg ataaatctaa aaataatctg aaataaatta gagaatttgg tcaattttta 43860
tgagaattca tgaatactag ggaatttctg tgtatattta ctgtggtcag taatggctaa 43920
atgaaaaagg tgattggatg tgatccgtaa agctgtcaat atgattacaa tctttgtgga 43980
ctctgaagaa tttttaagtc tgtatacaaa tgggtgcatc tgtgcttaag aagtatgata 44040
tataaataag ccaatatcta tttgtttgag acatttaaat attattgtct gaattcgaag 44100
tatttcattg tgagaaaagt attaaaatta gttttaaata taatctccct tctatggctc 44160
agtaggaatt tgtaggtgtc ttgaatacgt gtacgttctc ttaacataac aaatcaatga 44220
aaatctatat ttataagaat aatagaataa gtgtagttat gtatttgctg gagtttattt 44280
gctagagtat tcttacctaa aggtaagaat agaggaggtt ttgatctgct tataatcttt 44340
tatataaaat gggaatactc atgggttttt gaataatgct cataccaaaa agaaaacaaa 44400
caaaaaaaac cccaacatat taaaaggtgc cattgtgcta ttttattgtt ttctttaagg 44460
cccaaggtaa gaaattgtga aagtcaatga tatgtttcat tcattgattc aaaaaatgtt 44520
tattcggcaa gtatcatgtg cagagcacca tgccattgct tgagacacct acattagttt 44580
tgttggggtt gaattgaaag aaaaaattgt atttctcatt atttgaagta acttttaaac 44640
tatgtataaa cacgagttac taaaattccc ttttgcagtt ttaacatgaa gaagttgggg 44700
aaaacaccta ttaccgggaa aaaacacctt agaatggctt gtgaaagtgt aaatcctgaa 44760
gttttagatc aacacagcct gcatttctag gctttgacat gattaccgtc tgtcaggatt 44820
ccatgccatt gaaaacattt tctagttgct gctgagtgac aggggttctc agtccttcca 44880
aggaatgtgg ttttgatgag taaaaagcag cgtttgatat gtctggcttg actgcacaca 44940
tgcttcaagt tattaaagtt taaagttgct caagagcttt attacaacca tacacatgcc 45000
ccgtaattcc caaattgcca caataggaaa agcacaagtg aaatttaaga acatcccaat 45060
ttccttgaat atcatgcaag tggccctttg gcgcctgtca ctgtatacaa atttgtcaat 45120
ctgcgaggcc ataaacatgt tccatcagtt ggggcctttg cataactcga gagaactgcc 45180
tttcatctca tttgaggctt gaaagacttg gacctgagta agaggactta tctgcaacta 45240
ctaattcatg cgagtacctg aaaatagacc ttgtccctgt aaacctgcta tgctgattaa 45300
caactgggag agatacgggg ctgcggtctc cagggagatg gcagccatat ggagttggga 45360
atggggtgag ggtaaaaagc aaaagaattg tcttctctct gccaactcct ttgtttgcca 45420
tttcttctgc agtggaatgg tgcccagcaa aagcagggag tctgtggcat ctgaaggctc 45480
aaaccagaca agcggctacc agtccggata tcactccgat gacacagaca ccaccgtgta 45540
ctccagtgag gaagcagaac ttttaaagct gatagagatt ggagtgcaaa ccggtagcac 45600
agcccagatt ctccagcctg actcggggac cacactgagc tctcctcctg tttaaaagga 45660
agcatccaca cccccaactc ctggacatca catgagaggt gctgctcaga ttttcaagtg 45720
ttgttctttc caccagcagg aagtagccgc atttgatttt catttcgaca acagaaaaag 45780
gacctcggac tgcagggagc cagtcttcta ggcatatcct ggaagaggct tgtgacccaa 45840
gaatgtgtct gtgtcttctc ccagtgttga cctgatcctc tttttcattc atttaaaaag 45900
catttatcat gccccctgct gcgggtctca ccatgggttt agaacaaaga cgttcaagaa 45960
atggccccat cctcaaagaa gtagcagtac ctggggagct gacacttctg taaaactaga 46020
agataaacca ggcaatgtaa gtgttcgagg tgttgaagat gggaaggatt tgcagggctg 46080
agtctatcca agaggctttg tttaggacgt gggtcccaag ccaagcctta agtgtggaat 46140
tcggattgat agaaaggaag actaacgtta ccttgctttg gagagtactg gagcctgcaa 46200
atgcattgtg tttgctctgg tggaggtggg catggggtct gttctgaaat gtaaagggtt 46260
cagacggggt ttctggtttt agaaggttgc gtgttcttcg agttgggcta aagtagagtt 46320
cgttgtgctg tttctgactc ctaatgagag ttccttccag accgttacgt gtctcctggc 46380
caagccccag gaaggaaatg atgcagctct ggctccttgt ctcccaggct gatcctttat 46440
tcagaatacc acaaagaaag gacattcagc tcaaggctcc ctgccgtgtt gaagagttct 46500
gactgcacaa accagcttct ggtttcttct ggaatgaata ccctcatatc tgtcctgatg 46560
tgatatgtct gagactgaat gcgggaggtt caatgtgaag ctgtgtgtgg tgtcaaagtt 46620
tcaggaagga ttttaccctt ttgttcttcc ccctgtcccc aacccactct caccccgcaa 46680
cccatcagta ttttagttat ttggcctcta ctccagtaaa cctgattggg tttgttcact 46740
ctctgaatga ttattagcca gacttcaaaa ttattttata gcccaaatta taacatctat 46800
tgtattattt agacttttaa catatagagc tatttctact gatttttgcc cttgttctgt 46860
cctttttttc aaaaaagaaa atgtgttttt tgtttggtac catagtgtga aatgctggga 46920
acaatgacta taagacatgc tatggcacat atatttatag tctgtttatg tagaaacaaa 46980
tgtaatatat taaagcctta tatataatga actttgtact attcacattt tgtatcagta 47040
ttatgtagca taacaaaggt cataatgctt tcagcaattg atgtcatttt attaaagaac 47100
attgaaaaac ttgaa 47115
<210> 2
<211> 4071
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<400> 2
augcagagca aggugcugcu ggccgucgcc cuguggcucu gcguggagac ccgggccgcc 60
ucuguggguu ugccuagugu uucucuugau cugcccaggc ucagcauaca aaaagacaua 120
cuuacaauua aggcuaauac aacucuucaa auuacuugca ggggacagag ggacuuggac 180
uggcuuuggc ccaauaauca gaguggcagu gagcaaaggg uggaggugac ugagugcagc 240
gauggccucu ucuguaagac acucacaauu ccaaaaguga ucggaaauga cacuggagcc 300
uacaagugcu ucuaccggga aacugacuug gccucgguca uuuaugucua uguucaagau 360
uacagaucuc cauuuauugc uucuguuagu gaccaacaug gagucgugua cauuacugag 420
aacaaaaaca aaacuguggu gauuccaugu cucgggucca uuucaaaucu caacguguca 480
cuuugugcaa gauacccaga aaagagauuu guuccugaug guaacagaau uuccugggac 540
agcaagaagg gcuuuacuau ucccagcuac augaucagcu augcuggcau ggucuucugu 600
gaagcaaaaa uuaaugauga aaguuaccag ucuauuaugu acauaguugu cguuguaggg 660
uauaggauuu augauguggu ucugaguccg ucucauggaa uugaacuauc uguuggagaa 720
aagcuugucu uaaauuguac agcaagaacu gaacuaaaug uggggauuga cuucaacugg 780
gaauacccuu cuucgaagca ucagcauaag aaacuuguaa accgagaccu aaaaacccag 840
ucugggagug agaugaagaa auuuuugagc accuuaacua uagauggugu aacccggagu 900
gaccaaggau uguacaccug ugcagcaucc agugggcuga ugaccaagaa gaacagcaca 960
uuugucaggg uccaugaaaa accuuuuguu gcuuuuggaa guggcaugga aucucuggug 1020
gaagccacgg ugggggagcg ugucagaauc ccugcgaagu accuugguua cccaccccca 1080
gaaauaaaau gguauaaaaa uggaauaccc cuugagucca aucacacaau uaaagcgggg 1140
cauguacuga cgauuaugga agugagugaa agagacacag gaaauuacac ugucauccuu 1200
accaauccca uuucaaagga gaagcagagc cauguggucu cucugguugu guauguccca 1260
ccccagauug gugagaaauc ucuaaucucu ccuguggauu ccuaccagua cggcaccacu 1320
caaacgcuga cauguacggu cuaugccauu ccucccccgc aucacaucca cugguauugg 1380
caguuggagg aagagugcgc caacgagccc agccaagcug ucucagugac aaacccauac 1440
ccuugugaag aauggagaag uguggaggac uuccagggag gaaauaaaau ugaaguuaau 1500
aaaaaucaau uugcucuaau ugaaggaaaa aacaaaacug uaaguacccu uguuauccaa 1560
gcggcaaaug ugucagcuuu guacaaaugu gaagcgguca acaaagucgg gagaggagag 1620
agggugaucu ccuuccacgu gaccaggggu ccugaaauua cuuugcaacc ugacaugcag 1680
cccacugagc aggagagcgu gucuuugugg ugcacugcag acagaucuac guuugagaac 1740
cucacauggu acaagcuugg cccacagccu cugccaaucc augugggaga guugcccaca 1800
ccuguuugca agaacuugga uacucuuugg aaauugaaug ccaccauguu cucuaauagc 1860
acaaaugaca uuuugaucau ggagcuuaag aaugcauccu ugcaggacca aggagacuau 1920
gucugccuug cucaagacag gaagaccaag aaaagacauu gcguggucag gcagcucaca 1980
guccuagagc guguggcacc cacgaucaca ggaaaccugg agaaucagac gacaaguauu 2040
ggggaaagca ucgaagucuc augcacggca ucugggaauc ccccuccaca gaucaugugg 2100
uuuaaagaua augagacccu uguagaagac ucaggcauug uauugaagga ugggaaccgg 2160
aaccucacua uccgcagagu gaggaaggag gacgaaggcc ucuacaccug ccaggcaugc 2220
aguguucuug gcugugcaaa aguggaggca uuuuucauaa uagaaggugc ccaggaaaag 2280
acgaacuugg aaaucauuau ucuaguaggc acggcgguga uugccauguu cuucuggcua 2340
cuucuuguca ucauccuacg gaccguuaag cgggccaaug gaggggaacu gaagacaggc 2400
uacuugucca ucgucaugga uccagaugaa cucccauugg augaacauug ugaacgacug 2460
ccuuaugaug ccagcaaaug ggaauucccc agagaccggc ugaagcuagg uaagccucuu 2520
ggccguggug ccuuuggcca agugauugaa gcagaugccu uuggaauuga caagacagca 2580
acuugcagga caguagcagu caaaauguug aaagaaggag caacacacag ugagcaucga 2640
gcucucaugu cugaacucaa gauccucauu cauauugguc accaucucaa uguggucaac 2700
cuucuaggug ccuguaccaa gccaggaggg ccacucaugg ugauugugga auucugcaaa 2760
uuuggaaacc uguccacuua ccugaggagc aagagaaaug aauuuguccc cuacaagacc 2820
aaaggggcac gauuccguca agggaaagac uacguuggag caaucccugu ggaucugaaa 2880
cggcgcuugg acagcaucac caguagccag agcucagcca gcucuggauu uguggaggag 2940
aagucccuca gugauguaga agaagaggaa gcuccugaag aucuguauaa ggacuuccug 3000
accuuggagc aucucaucug uuacagcuuc caaguggcua agggcaugga guucuuggca 3060
ucgcgaaagu guauccacag ggaccuggcg gcacgaaaua uccucuuauc ggagaagaac 3120
gugguuaaaa ucugugacuu uggcuuggcc cgggauauuu auaaagaucc agauuauguc 3180
agaaaaggag augcucgccu cccuuugaaa uggauggccc cagaaacaau uuuugacaga 3240
guguacacaa uccagaguga cgucuggucu uuugguguuu ugcuguggga aauauuuucc 3300
uuaggugcuu cuccauaucc ugggguaaag auugaugaag aauuuuguag gcgauugaaa 3360
gaaggaacua gaaugagggc cccugauuau acuacaccag aaauguacca gaccaugcug 3420
gacugcuggc acggggagcc cagucagaga cccacguuuu cagaguuggu ggaacauuug 3480
ggaaaucucu ugcaagcuaa ugcucagcag gauggcaaag acuacauugu ucuuccgaua 3540
ucagagacuu ugagcaugga agaggauucu ggacucucuc ugccuaccuc accuguuucc 3600
uguauggagg aggaggaagu augugacccc aaauuccauu augacaacac agcaggaauc 3660
agucaguauc ugcagaacag uaagcgaaag agccggccug ugaguguaaa aacauuugaa 3720
gauaucccgu uagaagaacc agaaguaaaa guaaucccag augacaacca gacggacagu 3780
gguaugguuc uugccucaga agagcugaaa acuuuggaag acagaaccaa auuaucucca 3840
ucuuuuggug gaauggugcc cagcaaaagc agggagucug uggcaucuga aggcucaaac 3900
cagacaagcg gcuaccaguc cggauaucac uccgaugaca cagacaccac cguguacucc 3960
agugaggaag cagaacuuuu aaagcugaua gagauuggag ugcaaaccgg uagcacagcc 4020
cagauucucc agccugacuc ggggaccaca cugagcucuc cuccuguuua a 4071
<210> 3
<211> 1356
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Met Gln Ser Lys Val Leu Leu Ala Val Ala Leu Trp Leu Cys Val Glu
1 5 10 15
Thr Arg Ala Ala Ser Val Gly Leu Pro Ser Val Ser Leu Asp Leu Pro
20 25 30
Arg Leu Ser Ile Gln Lys Asp Ile Leu Thr Ile Lys Ala Asn Thr Thr
35 40 45
Leu Gln Ile Thr Cys Arg Gly Gln Arg Asp Leu Asp Trp Leu Trp Pro
50 55 60
Asn Asn Gln Ser Gly Ser Glu Gln Arg Val Glu Val Thr Glu Cys Ser
65 70 75 80
Asp Gly Leu Phe Cys Lys Thr Leu Thr Ile Pro Lys Val Ile Gly Asn
85 90 95
Asp Thr Gly Ala Tyr Lys Cys Phe Tyr Arg Glu Thr Asp Leu Ala Ser
100 105 110
Val Ile Tyr Val Tyr Val Gln Asp Tyr Arg Ser Pro Phe Ile Ala Ser
115 120 125
Val Ser Asp Gln His Gly Val Val Tyr Ile Thr Glu Asn Lys Asn Lys
130 135 140
Thr Val Val Ile Pro Cys Leu Gly Ser Ile Ser Asn Leu Asn Val Ser
145 150 155 160
Leu Cys Ala Arg Tyr Pro Glu Lys Arg Phe Val Pro Asp Gly Asn Arg
165 170 175
Ile Ser Trp Asp Ser Lys Lys Gly Phe Thr Ile Pro Ser Tyr Met Ile
180 185 190
Ser Tyr Ala Gly Met Val Phe Cys Glu Ala Lys Ile Asn Asp Glu Ser
195 200 205
Tyr Gln Ser Ile Met Tyr Ile Val Val Val Val Gly Tyr Arg Ile Tyr
210 215 220
Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu Ser Val Gly Glu
225 230 235 240
Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu Asn Val Gly Ile
245 250 255
Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln His Lys Lys Leu
260 265 270
Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu Met Lys Lys Phe
275 280 285
Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser Asp Gln Gly Leu
290 295 300
Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr
305 310 315 320
Phe Val Arg Val His Glu Lys Pro Phe Val Ala Phe Gly Ser Gly Met
325 330 335
Glu Ser Leu Val Glu Ala Thr Val Gly Glu Arg Val Arg Ile Pro Ala
340 345 350
Lys Tyr Leu Gly Tyr Pro Pro Pro Glu Ile Lys Trp Tyr Lys Asn Gly
355 360 365
Ile Pro Leu Glu Ser Asn His Thr Ile Lys Ala Gly His Val Leu Thr
370 375 380
Ile Met Glu Val Ser Glu Arg Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Val Ile Leu
385 390 395 400
Thr Asn Pro Ile Ser Lys Glu Lys Gln Ser His Val Val Ser Leu Val
405 410 415
Val Tyr Val Pro Pro Gln Ile Gly Glu Lys Ser Leu Ile Ser Pro Val
420 425 430
Asp Ser Tyr Gln Tyr Gly Thr Thr Gln Thr Leu Thr Cys Thr Val Tyr
435 440 445
Ala Ile Pro Pro Pro His His Ile His Trp Tyr Trp Gln Leu Glu Glu
450 455 460
Glu Cys Ala Asn Glu Pro Ser Gln Ala Val Ser Val Thr Asn Pro Tyr
465 470 475 480
Pro Cys Glu Glu Trp Arg Ser Val Glu Asp Phe Gln Gly Gly Asn Lys
485 490 495
Ile Glu Val Asn Lys Asn Gln Phe Ala Leu Ile Glu Gly Lys Asn Lys
500 505 510
Thr Val Ser Thr Leu Val Ile Gln Ala Ala Asn Val Ser Ala Leu Tyr
515 520 525
Lys Cys Glu Ala Val Asn Lys Val Gly Arg Gly Glu Arg Val Ile Ser
530 535 540
Phe His Val Thr Arg Gly Pro Glu Ile Thr Leu Gln Pro Asp Met Gln
545 550 555 560
Pro Thr Glu Gln Glu Ser Val Ser Leu Trp Cys Thr Ala Asp Arg Ser
565 570 575
Thr Phe Glu Asn Leu Thr Trp Tyr Lys Leu Gly Pro Gln Pro Leu Pro
580 585 590
Ile His Val Gly Glu Leu Pro Thr Pro Val Cys Lys Asn Leu Asp Thr
595 600 605
Leu Trp Lys Leu Asn Ala Thr Met Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asp Ile
610 615 620
Leu Ile Met Glu Leu Lys Asn Ala Ser Leu Gln Asp Gln Gly Asp Tyr
625 630 635 640
Val Cys Leu Ala Gln Asp Arg Lys Thr Lys Lys Arg His Cys Val Val
645 650 655
Arg Gln Leu Thr Val Leu Glu Arg Val Ala Pro Thr Ile Thr Gly Asn
660 665 670
Leu Glu Asn Gln Thr Thr Ser Ile Gly Glu Ser Ile Glu Val Ser Cys
675 680 685
Thr Ala Ser Gly Asn Pro Pro Pro Gln Ile Met Trp Phe Lys Asp Asn
690 695 700
Glu Thr Leu Val Glu Asp Ser Gly Ile Val Leu Lys Asp Gly Asn Arg
705 710 715 720
Asn Leu Thr Ile Arg Arg Val Arg Lys Glu Asp Glu Gly Leu Tyr Thr
725 730 735
Cys Gln Ala Cys Ser Val Leu Gly Cys Ala Lys Val Glu Ala Phe Phe
740 745 750
Ile Ile Glu Gly Ala Gln Glu Lys Thr Asn Leu Glu Ile Ile Ile Leu
755 760 765
Val Gly Thr Ala Val Ile Ala Met Phe Phe Trp Leu Leu Leu Val Ile
770 775 780
Ile Leu Arg Thr Val Lys Arg Ala Asn Gly Gly Glu Leu Lys Thr Gly
785 790 795 800
Tyr Leu Ser Ile Val Met Asp Pro Asp Glu Leu Pro Leu Asp Glu His
805 810 815
Cys Glu Arg Leu Pro Tyr Asp Ala Ser Lys Trp Glu Phe Pro Arg Asp
820 825 830
Arg Leu Lys Leu Gly Lys Pro Leu Gly Arg Gly Ala Phe Gly Gln Val
835 840 845
Ile Glu Ala Asp Ala Phe Gly Ile Asp Lys Thr Ala Thr Cys Arg Thr
850 855 860
Val Ala Val Lys Met Leu Lys Glu Gly Ala Thr His Ser Glu His Arg
865 870 875 880
Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Ile Leu Ile His Ile Gly His His Leu
885 890 895
Asn Val Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Lys Pro Gly Gly Pro Leu
900 905 910
Met Val Ile Val Glu Phe Cys Lys Phe Gly Asn Leu Ser Thr Tyr Leu
915 920 925
Arg Ser Lys Arg Asn Glu Phe Val Pro Tyr Lys Thr Lys Gly Ala Arg
930 935 940
Phe Arg Gln Gly Lys Asp Tyr Val Gly Ala Ile Pro Val Asp Leu Lys
945 950 955 960
Arg Arg Leu Asp Ser Ile Thr Ser Ser Gln Ser Ser Ala Ser Ser Gly
965 970 975
Phe Val Glu Glu Lys Ser Leu Ser Asp Val Glu Glu Glu Glu Ala Pro
980 985 990
Glu Asp Leu Tyr Lys Asp Phe Leu Thr Leu Glu His Leu Ile Cys Tyr
995 1000 1005
Ser Phe Gln Val Ala Lys Gly Met Glu Phe Leu Ala Ser Arg Lys
1010 1015 1020
Cys Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Leu Ser Glu
1025 1030 1035
Lys Asn Val Val Lys Ile Cys Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Ile
1040 1045 1050
Tyr Lys Asp Pro Asp Tyr Val Arg Lys Gly Asp Ala Arg Leu Pro
1055 1060 1065
Leu Lys Trp Met Ala Pro Glu Thr Ile Phe Asp Arg Val Tyr Thr
1070 1075 1080
Ile Gln Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Leu Leu Trp Glu Ile
1085 1090 1095
Phe Ser Leu Gly Ala Ser Pro Tyr Pro Gly Val Lys Ile Asp Glu
1100 1105 1110
Glu Phe Cys Arg Arg Leu Lys Glu Gly Thr Arg Met Arg Ala Pro
1115 1120 1125
Asp Tyr Thr Thr Pro Glu Met Tyr Gln Thr Met Leu Asp Cys Trp
1130 1135 1140
His Gly Glu Pro Ser Gln Arg Pro Thr Phe Ser Glu Leu Val Glu
1145 1150 1155
His Leu Gly Asn Leu Leu Gln Ala Asn Ala Gln Gln Asp Gly Lys
1160 1165 1170
Asp Tyr Ile Val Leu Pro Ile Ser Glu Thr Leu Ser Met Glu Glu
1175 1180 1185
Asp Ser Gly Leu Ser Leu Pro Thr Ser Pro Val Ser Cys Met Glu
1190 1195 1200
Glu Glu Glu Val Cys Asp Pro Lys Phe His Tyr Asp Asn Thr Ala
1205 1210 1215
Gly Ile Ser Gln Tyr Leu Gln Asn Ser Lys Arg Lys Ser Arg Pro
1220 1225 1230
Val Ser Val Lys Thr Phe Glu Asp Ile Pro Leu Glu Glu Pro Glu
1235 1240 1245
Val Lys Val Ile Pro Asp Asp Asn Gln Thr Asp Ser Gly Met Val
1250 1255 1260
Leu Ala Ser Glu Glu Leu Lys Thr Leu Glu Asp Arg Thr Lys Leu
1265 1270 1275
Ser Pro Ser Phe Gly Gly Met Val Pro Ser Lys Ser Arg Glu Ser
1280 1285 1290
Val Ala Ser Glu Gly Ser Asn Gln Thr Ser Gly Tyr Gln Ser Gly
1295 1300 1305
Tyr His Ser Asp Asp Thr Asp Thr Thr Val Tyr Ser Ser Glu Glu
1310 1315 1320
Ala Glu Leu Leu Lys Leu Ile Glu Ile Gly Val Gln Thr Gly Ser
1325 1330 1335
Thr Ala Gln Ile Leu Gln Pro Asp Ser Gly Thr Thr Leu Ser Ser
1340 1345 1350
Pro Pro Val
1355
<210> 4
<211> 678
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Met Gln Ser Lys Val Leu Leu Ala Val Ala Leu Trp Leu Cys Val Glu
1 5 10 15
Thr Arg Ala Ala Ser Val Gly Leu Pro Ser Val Ser Leu Asp Leu Pro
20 25 30
Arg Leu Ser Ile Gln Lys Asp Ile Leu Thr Ile Lys Ala Asn Thr Thr
35 40 45
Leu Gln Ile Thr Cys Arg Gly Gln Arg Asp Leu Asp Trp Leu Trp Pro
50 55 60
Asn Asn Gln Ser Gly Ser Glu Gln Arg Val Glu Val Thr Glu Cys Ser
65 70 75 80
Asp Gly Leu Phe Cys Lys Thr Leu Thr Ile Pro Lys Val Ile Gly Asn
85 90 95
Asp Thr Gly Ala Tyr Lys Cys Phe Tyr Arg Glu Thr Asp Leu Ala Ser
100 105 110
Val Ile Tyr Val Tyr Val Gln Asp Tyr Arg Ser Pro Phe Ile Ala Ser
115 120 125
Val Ser Asp Gln His Gly Val Val Tyr Ile Thr Glu Asn Lys Asn Lys
130 135 140
Thr Val Val Ile Pro Cys Leu Gly Ser Ile Ser Asn Leu Asn Val Ser
145 150 155 160
Leu Cys Ala Arg Tyr Pro Glu Lys Arg Phe Val Pro Asp Gly Asn Arg
165 170 175
Ile Ser Trp Asp Ser Lys Lys Gly Phe Thr Ile Pro Ser Tyr Met Ile
180 185 190
Ser Tyr Ala Gly Met Val Phe Cys Glu Ala Lys Ile Asn Asp Glu Ser
195 200 205
Tyr Gln Ser Ile Met Tyr Ile Val Val Val Val Gly Tyr Arg Ile Tyr
210 215 220
Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu Ser Val Gly Glu
225 230 235 240
Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu Asn Val Gly Ile
245 250 255
Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln His Lys Lys Leu
260 265 270
Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu Met Lys Lys Phe
275 280 285
Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser Asp Gln Gly Leu
290 295 300
Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr
305 310 315 320
Phe Val Arg Val His Glu Lys Pro Phe Val Ala Phe Gly Ser Gly Met
325 330 335
Glu Ser Leu Val Glu Ala Thr Val Gly Glu Arg Val Arg Ile Pro Ala
340 345 350
Lys Tyr Leu Gly Tyr Pro Pro Pro Glu Ile Lys Trp Tyr Lys Asn Gly
355 360 365
Ile Pro Leu Glu Ser Asn His Thr Ile Lys Ala Gly His Val Leu Thr
370 375 380
Ile Met Glu Val Ser Glu Arg Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Val Ile Leu
385 390 395 400
Thr Asn Pro Ile Ser Lys Glu Lys Gln Ser His Val Val Ser Leu Val
405 410 415
Val Tyr Val Pro Pro Gln Ile Gly Glu Lys Ser Leu Ile Ser Pro Val
420 425 430
Asp Ser Tyr Gln Tyr Gly Thr Thr Gln Thr Leu Thr Cys Thr Val Tyr
435 440 445
Ala Ile Pro Pro Pro His His Ile His Trp Tyr Trp Gln Leu Glu Glu
450 455 460
Glu Cys Ala Asn Glu Pro Ser Gln Ala Val Ser Val Thr Asn Pro Tyr
465 470 475 480
Pro Cys Glu Glu Trp Arg Ser Val Glu Asp Phe Gln Gly Gly Asn Lys
485 490 495
Ile Glu Val Asn Lys Asn Gln Phe Ala Leu Ile Glu Gly Lys Asn Lys
500 505 510
Thr Val Ser Thr Leu Val Ile Gln Ala Ala Asn Val Ser Ala Leu Tyr
515 520 525
Lys Cys Glu Ala Val Asn Lys Val Gly Arg Gly Glu Arg Val Ile Ser
530 535 540
Phe His Val Thr Arg Gly Pro Glu Ile Thr Leu Gln Pro Asp Met Gln
545 550 555 560
Pro Thr Glu Gln Glu Ser Val Ser Leu Trp Cys Thr Ala Asp Arg Ser
565 570 575
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580 585 590
Ile His Val Gly Glu Leu Pro Thr Pro Val Cys Lys Asn Leu Asp Thr
595 600 605
Leu Trp Lys Leu Asn Ala Thr Met Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asp Ile
610 615 620
Leu Ile Met Glu Leu Lys Asn Ala Ser Leu Gln Asp Gln Gly Asp Tyr
625 630 635 640
Val Cys Leu Ala Gln Asp Arg Lys Thr Lys Lys Arg His Cys Val Val
645 650 655
Arg Gln Leu Thr Val Leu Gly Arg Glu Thr Ile Leu Asp His Cys Ala
660 665 670
Glu Ala Val Gly Met Pro
675
<210> 5
<211> 712
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Met Gln Ser Lys Val Leu Leu Ala Val Ala Leu Trp Leu Cys Val Glu
1 5 10 15
Thr Arg Ala Ala Ser Val Gly Leu Pro Ser Val Ser Leu Asp Leu Pro
20 25 30
Arg Leu Ser Ile Gln Lys Asp Ile Leu Thr Ile Lys Ala Asn Thr Thr
35 40 45
Leu Gln Ile Thr Cys Arg Gly Gln Arg Asp Leu Asp Trp Leu Trp Pro
50 55 60
Asn Asn Gln Ser Gly Ser Glu Gln Arg Val Glu Val Thr Glu Cys Ser
65 70 75 80
Asp Gly Leu Phe Cys Lys Thr Leu Thr Ile Pro Lys Val Ile Gly Asn
85 90 95
Asp Thr Gly Ala Tyr Lys Cys Phe Tyr Arg Glu Thr Asp Leu Ala Ser
100 105 110
Val Ile Tyr Val Tyr Val Gln Asp Tyr Arg Ser Pro Phe Ile Ala Ser
115 120 125
Val Ser Asp Gln His Gly Val Val Tyr Ile Thr Glu Asn Lys Asn Lys
130 135 140
Thr Val Val Ile Pro Cys Leu Gly Ser Ile Ser Asn Leu Asn Val Ser
145 150 155 160
Leu Cys Ala Arg Tyr Pro Glu Lys Arg Phe Val Pro Asp Gly Asn Arg
165 170 175
Ile Ser Trp Asp Ser Lys Lys Gly Phe Thr Ile Pro Ser Tyr Met Ile
180 185 190
Ser Tyr Ala Gly Met Val Phe Cys Glu Ala Lys Ile Asn Asp Glu Ser
195 200 205
Tyr Gln Ser Ile Met Tyr Ile Val Val Val Val Gly Tyr Arg Ile Tyr
210 215 220
Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu Ser Val Gly Glu
225 230 235 240
Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu Asn Val Gly Ile
245 250 255
Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln His Lys Lys Leu
260 265 270
Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu Met Lys Lys Phe
275 280 285
Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser Asp Gln Gly Leu
290 295 300
Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr
305 310 315 320
Phe Val Arg Val His Glu Lys Pro Phe Val Ala Phe Gly Ser Gly Met
325 330 335
Glu Ser Leu Val Glu Ala Thr Val Gly Glu Arg Val Arg Ile Pro Ala
340 345 350
Lys Tyr Leu Gly Tyr Pro Pro Pro Glu Ile Lys Trp Tyr Lys Asn Gly
355 360 365
Ile Pro Leu Glu Ser Asn His Thr Ile Lys Ala Gly His Val Leu Thr
370 375 380
Ile Met Glu Val Ser Glu Arg Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Val Ile Leu
385 390 395 400
Thr Asn Pro Ile Ser Lys Glu Lys Gln Ser His Val Val Ser Leu Val
405 410 415
Val Tyr Val Pro Pro Gln Ile Gly Glu Lys Ser Leu Ile Ser Pro Val
420 425 430
Asp Ser Tyr Gln Tyr Gly Thr Thr Gln Thr Leu Thr Cys Thr Val Tyr
435 440 445
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450 455 460
Glu Cys Ala Asn Glu Pro Ser Gln Ala Val Ser Val Thr Asn Pro Tyr
465 470 475 480
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485 490 495
Ile Glu Val Asn Lys Asn Gln Phe Ala Leu Ile Glu Gly Lys Asn Lys
500 505 510
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515 520 525
Lys Cys Glu Ala Val Asn Lys Val Gly Arg Gly Glu Arg Val Ile Ser
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565 570 575
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580 585 590
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595 600 605
Leu Trp Lys Leu Asn Ala Thr Met Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asp Ile
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645 650 655
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<210> 6
<211> 24252
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 6
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ggaggttcgt acgggaggag ggggaggcgc ccacgcatct ggggctgact cgctctttcg 120
caaaacgtct gggaggagtc cctggggcca caaaactgcc tccttcctga ggccagaagg 180
agagaagacg tgcagggacc ccgcgcacag gagctgccct cgcgacatgg gtcacccgcc 240
gctgctgccg ctgctgctgc tgctccacac ctgcgtccca ggtaggggct gggtcccgaa 300
cgcctgcgcc tggaacaggg tctaattgag ggggttgggg gttgtcagag gatgagttgg 360
aggaatgcgg ttcagtcctc agcatcctcc ctaatcaaat aatagtaatt ctcgtgcttt 420
gtgcaacgcc acgcggcgca gtacctggca ctcagtagct aaggaaatat tagtggagca 480
aaggcattta gctttacata atttagtgag tgcttttttt tttttttttt tttttttgac 540
agagtctcac tctgtcgccc aggctggagt gcagtggcgc gatctcggct cactgcaacc 600
tctgccgccc gggttcaagc gattctcctg cctcagcctc ctgggtagct gggattacag 660
gcgcctgcca tcgcgcccgg ctaatttctg tatttttagt ggagaccggg tttcactctg 720
ttagccagga tggtctcaat ctcctgacct cagatgatcc acctgcctcg gcctcccaaa 780
ctgctgggat tacaggcgtg agccaccgcg cccggcccaa gtgttctttt tttaaatgga 840
gttcttcgaa gcctcttcct tgcaatttca aactaggcga tgggacttta ttaatttcgt 900
ttcgcagagg aaactagggc acagagaggt tagataactg gcctaaaatc acacagccag 960
tgcttgaata cgcaggatct gaccctgcag cgccccccag cgctctccac gctgctgggt 1020
ctccccctct gagaaacggg gggacaggac ccccttttac aaaaggccca aagggaggct 1080
gactgagcgg cgcagagcca gtgctggaga cccgggactg tccctcagga cctttccctc 1140
tcactgaggc gactctcact tacttccccg gaaaatgtgg ggggctctgg gtcgaggaat 1200
tcgagaagga actgagtcag ggcgggtggc cacagggtgt tggggccgcg atgaataacc 1260
cggaaagcgc tcgagaccgc gggaggccgg gaatgagtaa cagctccggg atactccgaa 1320
cgcgcagctg gaaagggatg tccgggaagg cccggaggtc ggggaccggg cctagggact 1380
gggctgcaat ctcggggcgg agcctggggc ggggagagag tgtcggggag gagccagagg 1440
gcggggctgg aacctcaagg aagagctacg ggagaggtta cagaccgagg aagagctagg 1500
agcggggcta gaacctcgag gcggagccag agggcggggt tataacctcg aggcgtaacc 1560
agagggcgga gttataacct cgggaggagc tagaaggtgg gactagactc ttgaggggca 1620
ggattataac ctcggggagg agctagaggg cggggctgga acctcaagga ggggctaggg 1680
gcggggttat aagcttgggg aggagctacg gggctgggct aggacctcaa ggggccaagg 1740
ggcgggggtt acgacctcgg ggaggagcta cagggtgggg ctgaaacctc aagaagggac 1800
tggggcggag ttatgacctc aggggaaaac taggggcggg gagagctaaa gggcgaagtt 1860
agaatctcaa ggaggagcta gagggaggga ctaaagcctc gaggaggagc taggggcggg 1920
gttatggcat cggggaggag ctagggggcg ggaagataag gtcaggaaga gctaaagggc 1980
ggggctagaa cctcgacgat gagtctggag cggggccaaa acctagttgg agagctggag 2040
ggcggagaca gaacttcgcg ggaaactaga gtatctaaca atagaaactc cggagggctg 2100
atggggccgg gcctagaatt tgggaataaa ttagtgggcc gggagaggct ctggagccgg 2160
gtagaaccag ggggagtgag tggagggata gttccattag ggcactggga gtgacggtat 2220
aacataaaga tcgacgcggg tggggcaagg ctagaacgtc cccagcagaa ctggagaggc 2280
gtaatcgacc gagggccggt gcggtgagaa agacctaata ggagcaggaa tagaacgtac 2340
tgatagagag ggcggggata cgactgtcag gatatacgcc tcacgaggac agaatgaaag 2400
gaaaaacggg ccaaggcagg actttgggaa aggacttgtg ggcagggata gaacgttcag 2460
ttagtggggt ggaggtagaa cgtggacaac ggacagactg gaagtaccgc cggccggaac 2520
ccagcagaac atggacacga atctgaatgg acggggcctg gagacttggt gttggtattg 2580
ggacatgcag gggtgagcgg gggtcttgga gctaagcgta gttaacctct cctctcctct 2640
ccctccttcc cccagcctct tggggcctgc ggtgcatgca gtgtaagacc aacggggatt 2700
gccgtgtgga agagtgcgcc ctgggacagg acctctgcag gaccacgatc gtgcgcttgt 2760
gggaaggtga gcttcccccc aacccacaca cccctccagc gcagcatgga acgcgagtga 2820
ttgagaaacc ttcctcacca gtaactggga catgcaaact aaaaacaaac aaacaaggag 2880
agcccatttc acacccacca gattggcaag catttaaaaa tctgacaata cccgggttag 2940
taaggatgtg gagttgcaga ccgtgtctgt ggtgggggag taaattggca catcaaccac 3000
ttagagcgat tcggcaatat ctagtccaga tgaagattaa catatgctac agctcaactc 3060
ctcgccatgc agaaatgcca aagaaccttg gccacatata cccagggaca catgtatacg 3120
aatgttctta gcagcaatgt ttgtgacatg gaaaattgga aacaggctgg gcactggctc 3180
acacctgtat ttccagcact ttgggaggca gaggcggatg aattgcttga ggtcaggagt 3240
tcaagaccag gctggccaac atggtgaaac acccgtctcc acacacacac aaaaaaggaa 3300
aaattagccg agtgtggtgg cacgcacctg taatctcagc tacttgggag gctgagacag 3360
gagaattgct tgaacctggg aggtggaggt tgcagtgagc tgagatcatg ctactgcact 3420
ccagcctggg cgacagagcg agatcctgtc aaaaaaatga acgaaagaga gaaaggtggg 3480
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acctgaggtc aggagttcag gaccagcctg gccaacatgg tgaaaccctg tctctactaa 3600
aaaatacaaa aattagccgg gcttggtggc aggcaccagt tatcccagct actcgggagg 3660
ctgagacagg agaattgttt gaacccagga ggcggaggtt gcagtgagct gagattgtgc 3720
cattgcactc cagcctgggc gacaagagca aaactccatc tcaagaaaga aagaaagaaa 3780
ggaaaggaag agagagagag agaaagagag agaggaaggg agggagggac ggagagaggc 3840
agggagggag ggagggagga gggaggaagg aaggggagaa agaaagaaaa gaagaaaatg 3900
gaaacgactt tatgtcagtc agcaagtcag cagcagaaga gaaacactgt ggtaataatt 3960
acataatgga gcgctctact gcagcttaaa gaaggaaata gagctgcaga taccaatgtg 4020
gacacatctc agaaacctaa ggttgagagg gaaaaaaatg ttgcagaata tgatacgttt 4080
tttataagct ttaagaacac atgaaacaac agtatatgaa gccaagcaca gtagctcaca 4140
tttgtacccc tagctactca ggaggctaag gcagaaggat tccttgagcc cagaagttcg 4200
aggttgtggt gagctatgat tgccccagct gggacaacag agaccctgtt tctaataaat 4260
aaataaataa aataaagtta catttgaggc atctcagtac tgagatcact aagctgaggg 4320
tgtgggggag ggatagatgg atccagaaag tcccagttgt agtgctgtca ctacaagagc 4380
aggagtggga cacagtggct cacacctgta attccagcac tttgggaggc caaggtggga 4440
ggatcacttg aggccaggag tttgagatca gcctgggcaa catagtgaga tgccatctgt 4500
ataaaaaatt taaaaattag cagggtgtgg tgatgtaagc ctgtggttcc agctactcgg 4560
gaggccgaag caggactgct tgagcctggg aggtcaaggc tccagtgagc tatgattgca 4620
ccactccagc ctgggtgaca gagcaagacc ctgtctcccg gaaaaaaaaa ttaattaatt 4680
aattaattga aataaaatag agcaggctcc ttgttggggt gggggtggag gcaaggttaa 4740
ctctagaaaa agacagagtt cgactcaaat aacagaagag gcctagcaga gatcagccct 4800
gggagtggat gaccttgaga ccaggagtgt cagaggctgg ttgagctgag aggagcctct 4860
ggggtaatga agatcccctc cttgcagaag gagaagagct ggagctggtg gagaaaagct 4920
gtacccactc agagaagacc aacaggaccc tgagctatcg gactggcttg aagatcacca 4980
gccttaccga ggttgtgtgt gggttagact tgtgcaacca gggcaactct ggtgagtagg 5040
gcagcccttg ccatccccaa ccccaagcca tccccagctc aacctcatca tcatcccaat 5100
cctattctta actttacatc agctgaaccc caactccatg ccttatccaa gtcccaaccc 5160
caacccaacc catctctagc tcagctccat ccccaactca ttcttgaccc catatccaac 5220
cccaactcaa cttcacctcc aatcctatgc ccaacttcat gttaccctaa cactgttccc 5280
aactcaaacc cagccctgtt ccaagcacag ttccaacccc atccccaaat caaccccatc 5340
cttatctcag actacccaaa tccccacccc aacgacacaa ttactttcat ccttaaccca 5400
atccccatcc tgcatgtttg tatgtatggt tgttatgtat aacttgcaac tctgccctta 5460
acaagctcac acgcatgcat gagacataga tgagatgtct cagtgatgtt tgtccatctg 5520
actgggcagg agatggtcct gcccaatcca ttgggacggg agatggtcca agcaatagat 5580
actgaggggc caggattcaa gcaaagactt gacgttctta agggaagtcg aaagagggga 5640
agattaaatg ggccgcagta ggctgggaga atcctctgca atagatggtc tctgacttgg 5700
gcagtgaaaa aacaaatgtg aggaaatgtc cataataggc tgggtgtggt ggctcatgcc 5760
tgtaatccaa gcactttggg agaccaaggc gggagaaccg cttgagccca agagtttaag 5820
accagcctgg gcaacaacca taagcccctt tgtcgaattt catggcttca ggctctgatc 5880
attttaagaa aaagacttag aaaaggtcaa attttcctaa attcccacag gagaggaagg 5940
gtggggaagg aatgggtcca tggtgcatgg atccatccgt gaaagagatt cctctttctg 6000
gacctggtga ggaaggaaat agggtaaggc cagtctagtc atggttggtg acatcagtga 6060
gcagagtgct gcgtttgcac tgggttttct ttgttcttca ttcatcctga ttctgcctgg 6120
ttttcatcca tcctgacctc aaacactaat ccgctggtgg ggccaaatca gatgtttgtt 6180
ttgaggaagt gacgagagga tgtgggcttc ccgtctcggt gagatgtgct taaggaaagc 6240
accaatactt gggtctaagt agtgcattca atcagagatg atagcgaaaa tatttaacaa 6300
tattggtcag tgctgggaca aactcctgga gtccgctgct gggcctggtg ttgccccttt 6360
ccatgatggg tcacagggac atgaagggtc ctggggagag agttggcagt ggtcagggat 6420
ccaccaggag cttagagcag cagctatcaa ttcaggaatc taataactga gatacctata 6480
tcatcccttt ttcttttctt ttttctttct tttttttttt gtttcctttt gtttttgttt 6540
tttttttttg tttgtttgtt cgtttgagat ggagtttcac tcttcttgcc caggctggag 6600
tgcaatgcca cgatctcggc tctctgcaac ctccgcctcc taggctcgag cgattcttct 6660
gcctcagcct cccaagtagc tgggattaca ggcatgcgcc accacgccca gctaattttg 6720
tatttttagt agagatgagg tttctccatg ttggtcaagc tgatcttgaa ctcctgacct 6780
caggtgatct gcccgcctca gcctcccaaa gtgctgggat tacagacgtg agccaccgtg 6840
cccggcctca tccccatttc taatgccatt gtaccctgct tgtggcaact tgcatagttg 6900
gttaaactgc actcagtact tacatgatgc tgggaacaca gcagggacca agacagcctt 6960
gtgccctgcc tgactccatg ggactcacag tcctgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 7020
gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtaggg gtgacagacc catccatcac cagacagtga 7080
ctgattatta ggttaatgca aaagtaattg tggcttttgc cattaaaagc aatggcagaa 7140
accacaatta cttttgcacc aacctaatag atttgtctgg gctatgaagg gggaaacaca 7200
ggcagagggg tcagggctgg gatgagggaa gagtaggagc tgtgggaccc tagaggagat 7260
acctgactca ggtcagggaa ggtttcctag gggaagcaac agctaagctg gatcttgaag 7320
gatgagtagg aatcagacta ttaaacagct aatggaggct gggtgcagtg gctcacgcct 7380
gtaatcccaa cactttggga ggcccaggtg ggaggattgt ttcagaccag cctaggcaac 7440
atgactctac aaaaaaatta aaaaattagc cagatgtgat ggtacatgcc tgtgatccca 7500
gctccttggg aggttgaggc gggaggatca ctatagccca ggtggtggag gctgcagtaa 7560
gctatgatcg caccactgta ccccagcctg ggtgacagag cgagatcctg caaaaaaaaa 7620
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cagtgtggct ggacaaagga aacagtacag tggggcgaga tgagctggaa agcttggcag 7740
gggcatgtta cacaggggtt tctagacatt gtcctgggag cactggggca tcacagaaga 7800
ttttaaacag cgaatgtcat gatcgcaatt atttatttat ttatttttga gatggagttt 7860
cgctcttttt gcccaggctg gagtgcaatg gtgcgatctc agctcactgc aacctccgcc 7920
tcctaggttc aagtgattct cctgcctcag cctcccaaga aactgagatt acaggcaccc 7980
gccaccatgc ccggctaatt tttttgaatt tttagtagag atggggtttc accatgttgg 8040
ccaggctggt ctcgaactct tgacctcgtg atccacccac ctcggcctcc caaagtgctg 8100
ggattacaga cgtgagccac cgcgcccggc ccccatttat atttttaaca aattattctg 8160
acctcaggac agaagataga ctgaaaggaa gcaagagtag atgaggggaa accaacttgg 8220
gggtgggcga ggttgtccag gtggagaaga gggcagcagg actagggtgt caggtgtgca 8280
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taatcccagc actttggaag gccaaggcag gaggactgct tgatcccagg agttggaggc 8400
tgcagtgatc acgccactgc actccagcct aggcggcaga gcaaaaccct gtctcaacca 8460
aagccgaaca agagctatta agaagcaggc cttagtggtg gattagatgt gggaggggac 8520
ctgcaattct ggtcatgatg gagtcacttg tatcagacca acccttctgc caatgacagt 8580
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ggagaaactt ggctgggcaa agtggttcat gcctgtaatc ccagcacttt gggaggccaa 8700
gacaggtgaa ttgctcgagc tcatgagttc aagaccagcc tgggcaacat ggcgaaaccc 8760
cgtctctact aaaaatacaa aagttagcca ggcgtggtgg cacatgcctg tggtcccagc 8820
tacttgggtg gctgaggcac aagaattgct tgaacccggg aggtagaggt tacagtgagc 8880
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caactacttg gaaggatttc ttgagcctga gagttctggg ctgtagtgtg ctatatcaac 9660
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ttttaagaaa ctttcatttt tcactttctg aatcttagaa cgctcactct ggggaagctg 23820
gttgccatgt aaaagtacta ctgccctgag accaccatgc tgtgaggaag cccaagctac 23880
tcatgtataa atgccatgtg gagatagagc cccagatgtt tcagccatct cagcccaggc 23940
accagacaag tgggtgaaga agccaccttg gacatgtagc cccagcagat gtgatataga 24000
gaagaaacag gaaacttggc tatattagtt tcctagggct gcctgtgata aattattaca 24060
aactttataa actaacacat tgtgtgccta tatcaaaaca tcatggaagg acaggcacag 24120
tggctcatgc ctgtagtcct agcactttgg gagggtgaga aaggaagatc tcttgagctc 24180
aggagttcaa gatcagcctg ggcaacacag tgagacctca tctccactaa aaataaaaaa 24240
aaattggctg ga 24252
<210> 7
<211> 873
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<400> 7
augggucacc cgccgcugcu gccgcugcug cugcugcucc acaccugcgu cccagccucu 60
uggggccugc ggugcaugca guguaagacc aacggggauu gccgugugga agagugcgcc 120
cugggacagg accucugcag gaccacgauc gugcgcuugu gggaagaagg agaagagcug 180
gagcuggugg agaaaagcug uacccacuca gagaagacca acaggacccu gagcuaucgg 240
acuggcuuga agaucaccag ccuuaccgag guugugugug gguuagacuu gugcaaccag 300
ggcaacucug gccgggcugu caccuauucc cgaagccguu accucgaaug cauuuccugu 360
ggcucaucag acaugagcug ugagaggggc cggcaccaga gccugcagug ccgcagcccu 420
gaagaacagu gccuggaugu ggugacccac uggauccagg aaggugaaga aguccuggag 480
cuugaaaauc ugccgcagaa uggccgccag uguuacagcu gcaaggggaa cagcacccau 540
ggaugcuccu cugaagagac uuuccucauu gacugccgag gccccaugaa ucaaugucug 600
guagccaccg gcacucacga accgaaaaac caaagcuaua ugguaagagg cugugcaacc 660
gccucaaugu gccaacaugc ccaccugggu gacgccuuca gcaugaacca cauugauguc 720
uccugcugua cuaaaagugg cuguaaccac ccagaccugg auguccagua ccgcaguggg 780
gcugcuccuc agccuggccc ugcccaucuc agccucacca ucacccugcu aaugacugcc 840
agacuguggg gaggcacucu ccucuggacc uaa 873
<210> 8
<211> 1008
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<400> 8
augggucacc cgccgcugcu gccgcugcug cugcugcucc acaccugcgu cccagccucu 60
uggggccugc ggugcaugca guguaagacc aacggggauu gccgugugga agagugcgcc 120
cugggacagg accucugcag gaccacgauc gugcgcuugu gggaagaagg agaagagcug 180
gagcuggugg agaaaagcug uacccacuca gagaagacca acaggacccu gagcuaucgg 240
acuggcuuga agaucaccag ccuuaccgag guugugugug gguuagacuu gugcaaccag 300
ggcaacucug gccgggcugu caccuauucc cgaagccguu accucgaaug cauuuccugu 360
ggcucaucag acaugagcug ugagaggggc cggcaccaga gccugcagug ccgcagcccu 420
gaagaacagu gccuggaugu ggugacccac uggauccagg aaggugaaga agggcgucca 480
aaggaugacc gccaccuccg uggcuguggc uaccuucccg gcugcccggg cuccaauggu 540
uuccacaaca acgacaccuu ccacuuccug aaaugcugca acaccaccaa augcaacgag 600
ggcccaaucc uggagcuuga aaaucugccg cagaauggcc gccaguguua cagcugcaag 660
gggaacagca cccauggaug cuccucugaa gagacuuucc ucauugacug ccgaggcccc 720
augaaucaau gucugguagc caccggcacu cacgaaccga aaaaccaaag cuauauggua 780
agaggcugug caaccgccuc aaugugccaa caugcccacc ugggugacgc cuucagcaug 840
aaccacauug augucuccug cuguacuaaa aguggcugua accacccaga ccuggauguc 900
caguaccgca guggggcugc uccucagccu ggcccugccc aucucagccu caccaucacc 960
cugcuaauga cugccagacu guggggaggc acucuccucu ggaccuaa 1008
<210> 9
<211> 846
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<400> 9
augggucacc cgccgcugcu gccgcugcug cugcugcucc acaccugcgu cccagccucu 60
uggggccugc ggugcaugca guguaagacc aacggggauu gccgugugga agagugcgcc 120
cugggacagg accucugcag gaccacgauc gugcgcuugu gggaagaagg agaagagcug 180
gagcuggugg agaaaagcug uacccacuca gagaagacca acaggacccu gagcuaucgg 240
acuggcuuga agaucaccag ccuuaccgag guugugugug gguuagacuu gugcaaccag 300
ggcaacucug gccgggcugu caccuauucc cgaagccguu accucgaaug cauuuccugu 360
ggcucaucag acaugagcug ugagaggggc cggcaccaga gccugcagug ccgcagcccu 420
gaagaacagu gccuggaugu ggugacccac uggauccagg aaggugaaga agggcgucca 480
aaggaugacc gccaccuccg uggcuguggc uaccuucccg gcugcccggg cuccaauggu 540
uuccacaaca acgacaccuu ccacuuccug aaaugcugca acaccaccaa augcaacgag 600
ggcccaaucc uggagcuuga aaaucugccg cagaauggcc gccaguguua cagcugcaag 660
gggaacagca cccauggaug cuccucugaa gagacuuucc ucauugacug ccgaggcccc 720
augaaucaau gucugguagc caccggcacu cacgaacgcu cacucugggg aagcugguug 780
ccauguaaaa guacuacugc ccugagacca ccaugcugug aggaagccca agcuacucau 840
guauaa 846
<210> 10
<211> 861
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<400> 10
augggucacc cgccgcugcu gccgcugcug cugcugcucc acaccugcgu cccagccucu 60
uggggccugc ggugcaugca guguaagacc aacggggauu gccgugugga agagugcgcc 120
cugggacagg accucugcag gaccacgauc gugcgcuugu gggaagaagg agaagagcug 180
gagcuggugg agaaaagcug uacccacuca gagaagacca acaggacccu gagcuaucgg 240
acuggcuuga agaucaccag ccuuaccgag guugugugug gguuagacuu gugcaaccag 300
ggcaacucug gccgggcugu caccuauucc cgaagccguu accucgaaug cauuuccugu 360
ggcucaucag acaugagcug ugagaggggc cggcaccaga gccugcagug ccgcagcccu 420
gaagaacagu gccuggaugu ggugacccac uggauccagg aaggugaaga agggcgucca 480
aaggaugacc gccaccuccg uggcuguggc uaccuucccg gcugcccggg cuccaauggu 540
uuccacaaca acgacaccuu ccacuuccug aaaugcugca acaccaccaa augcaacgag 600
ggcccaaaac cgaaaaacca aagcuauaug guaagaggcu gugcaaccgc cucaaugugc 660
caacaugccc accuggguga cgccuucagc augaaccaca uugaugucuc cugcuguacu 720
aaaaguggcu guaaccaccc agaccuggau guccaguacc gcaguggggc ugcuccucag 780
ccuggcccug cccaucucag ccucaccauc acccugcuaa ugacugccag acugugggga 840
ggcacucucc ucuggaccua a 861
<210> 11
<211> 335
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 11
Met Gly His Pro Pro Leu Leu Pro Leu Leu Leu Leu Leu His Thr Cys
1 5 10 15
Val Pro Ala Ser Trp Gly Leu Arg Cys Met Gln Cys Lys Thr Asn Gly
20 25 30
Asp Cys Arg Val Glu Glu Cys Ala Leu Gly Gln Asp Leu Cys Arg Thr
35 40 45
Thr Ile Val Arg Leu Trp Glu Glu Gly Glu Glu Leu Glu Leu Val Glu
50 55 60
Lys Ser Cys Thr His Ser Glu Lys Thr Asn Arg Thr Leu Ser Tyr Arg
65 70 75 80
Thr Gly Leu Lys Ile Thr Ser Leu Thr Glu Val Val Cys Gly Leu Asp
85 90 95
Leu Cys Asn Gln Gly Asn Ser Gly Arg Ala Val Thr Tyr Ser Arg Ser
100 105 110
Arg Tyr Leu Glu Cys Ile Ser Cys Gly Ser Ser Asp Met Ser Cys Glu
115 120 125
Arg Gly Arg His Gln Ser Leu Gln Cys Arg Ser Pro Glu Glu Gln Cys
130 135 140
Leu Asp Val Val Thr His Trp Ile Gln Glu Gly Glu Glu Gly Arg Pro
145 150 155 160
Lys Asp Asp Arg His Leu Arg Gly Cys Gly Tyr Leu Pro Gly Cys Pro
165 170 175
Gly Ser Asn Gly Phe His Asn Asn Asp Thr Phe His Phe Leu Lys Cys
180 185 190
Cys Asn Thr Thr Lys Cys Asn Glu Gly Pro Ile Leu Glu Leu Glu Asn
195 200 205
Leu Pro Gln Asn Gly Arg Gln Cys Tyr Ser Cys Lys Gly Asn Ser Thr
210 215 220
His Gly Cys Ser Ser Glu Glu Thr Phe Leu Ile Asp Cys Arg Gly Pro
225 230 235 240
Met Asn Gln Cys Leu Val Ala Thr Gly Thr His Glu Pro Lys Asn Gln
245 250 255
Ser Tyr Met Val Arg Gly Cys Ala Thr Ala Ser Met Cys Gln His Ala
260 265 270
His Leu Gly Asp Ala Phe Ser Met Asn His Ile Asp Val Ser Cys Cys
275 280 285
Thr Lys Ser Gly Cys Asn His Pro Asp Leu Asp Val Gln Tyr Arg Ser
290 295 300
Gly Ala Ala Pro Gln Pro Gly Pro Ala His Leu Ser Leu Thr Ile Thr
305 310 315 320
Leu Leu Met Thr Ala Arg Leu Trp Gly Gly Thr Leu Leu Trp Thr
325 330 335
<210> 12
<211> 281
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 12
Met Gly His Pro Pro Leu Leu Pro Leu Leu Leu Leu Leu His Thr Cys
1 5 10 15
Val Pro Ala Ser Trp Gly Leu Arg Cys Met Gln Cys Lys Thr Asn Gly
20 25 30
Asp Cys Arg Val Glu Glu Cys Ala Leu Gly Gln Asp Leu Cys Arg Thr
35 40 45
Thr Ile Val Arg Leu Trp Glu Glu Gly Glu Glu Leu Glu Leu Val Glu
50 55 60
Lys Ser Cys Thr His Ser Glu Lys Thr Asn Arg Thr Leu Ser Tyr Arg
65 70 75 80
Thr Gly Leu Lys Ile Thr Ser Leu Thr Glu Val Val Cys Gly Leu Asp
85 90 95
Leu Cys Asn Gln Gly Asn Ser Gly Arg Ala Val Thr Tyr Ser Arg Ser
100 105 110
Arg Tyr Leu Glu Cys Ile Ser Cys Gly Ser Ser Asp Met Ser Cys Glu
115 120 125
Arg Gly Arg His Gln Ser Leu Gln Cys Arg Ser Pro Glu Glu Gln Cys
130 135 140
Leu Asp Val Val Thr His Trp Ile Gln Glu Gly Glu Glu Gly Arg Pro
145 150 155 160
Lys Asp Asp Arg His Leu Arg Gly Cys Gly Tyr Leu Pro Gly Cys Pro
165 170 175
Gly Ser Asn Gly Phe His Asn Asn Asp Thr Phe His Phe Leu Lys Cys
180 185 190
Cys Asn Thr Thr Lys Cys Asn Glu Gly Pro Ile Leu Glu Leu Glu Asn
195 200 205
Leu Pro Gln Asn Gly Arg Gln Cys Tyr Ser Cys Lys Gly Asn Ser Thr
210 215 220
His Gly Cys Ser Ser Glu Glu Thr Phe Leu Ile Asp Cys Arg Gly Pro
225 230 235 240
Met Asn Gln Cys Leu Val Ala Thr Gly Thr His Glu Arg Ser Leu Trp
245 250 255
Gly Ser Trp Leu Pro Cys Lys Ser Thr Thr Ala Leu Arg Pro Pro Cys
260 265 270
Cys Glu Glu Ala Gln Ala Thr His Val
275 280
<210> 13
<211> 290
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 13
Met Gly His Pro Pro Leu Leu Pro Leu Leu Leu Leu Leu His Thr Cys
1 5 10 15
Val Pro Ala Ser Trp Gly Leu Arg Cys Met Gln Cys Lys Thr Asn Gly
20 25 30
Asp Cys Arg Val Glu Glu Cys Ala Leu Gly Gln Asp Leu Cys Arg Thr
35 40 45
Thr Ile Val Arg Leu Trp Glu Glu Gly Glu Glu Leu Glu Leu Val Glu
50 55 60
Lys Ser Cys Thr His Ser Glu Lys Thr Asn Arg Thr Leu Ser Tyr Arg
65 70 75 80
Thr Gly Leu Lys Ile Thr Ser Leu Thr Glu Val Val Cys Gly Leu Asp
85 90 95
Leu Cys Asn Gln Gly Asn Ser Gly Arg Ala Val Thr Tyr Ser Arg Ser
100 105 110
Arg Tyr Leu Glu Cys Ile Ser Cys Gly Ser Ser Asp Met Ser Cys Glu
115 120 125
Arg Gly Arg His Gln Ser Leu Gln Cys Arg Ser Pro Glu Glu Gln Cys
130 135 140
Leu Asp Val Val Thr His Trp Ile Gln Glu Gly Glu Glu Val Leu Glu
145 150 155 160
Leu Glu Asn Leu Pro Gln Asn Gly Arg Gln Cys Tyr Ser Cys Lys Gly
165 170 175
Asn Ser Thr His Gly Cys Ser Ser Glu Glu Thr Phe Leu Ile Asp Cys
180 185 190
Arg Gly Pro Met Asn Gln Cys Leu Val Ala Thr Gly Thr His Glu Pro
195 200 205
Lys Asn Gln Ser Tyr Met Val Arg Gly Cys Ala Thr Ala Ser Met Cys
210 215 220
Gln His Ala His Leu Gly Asp Ala Phe Ser Met Asn His Ile Asp Val
225 230 235 240
Ser Cys Cys Thr Lys Ser Gly Cys Asn His Pro Asp Leu Asp Val Gln
245 250 255
Tyr Arg Ser Gly Ala Ala Pro Gln Pro Gly Pro Ala His Leu Ser Leu
260 265 270
Thr Ile Thr Leu Leu Met Thr Ala Arg Leu Trp Gly Gly Thr Leu Leu
275 280 285
Trp Thr
290

Claims (13)

1.一种体外或离体评估在疑似感染、SOFA评分低于2的患者中并发症风险的方法，所述方法包括测量获自所述患者的生物学样品中VEGFR2基因的至少一种表达产物的表达水平。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因的表达产物是RNA转录物。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述表达产物是蛋白或多肽。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括实施由以下组成的步骤：
-测量来自患者的所述生物学样品中的VEGFR2基因的至少一种表达产物的量，
-将就所述生物学样品测定的所述至少一种表达产物的量或从此量衍生的值与预定的参考值进行比较，和
-从比较结果得出关于并发症风险的结论。
5.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括实施由以下组成的步骤：
-测量所述患者的生物学样品中的VEGFR2基因的至少一种表达产物的第一量，所述生物学样品通过在时间T1取第一样品获得，
-测量所述患者的生物学样品中的VEGFR2基因表的所述至少一种表达产物的第二量，所述生物学样品通过在时间T2取第二样品获得，
-计算VEGFR2基因的所述至少一种表达产物在T2的量与VEGFR2基因的所述至少一种表达产物在T1的量之间的变化，给出值Δ，
-将前面步骤所得的值Δ与参考值进行比较，所述参考值从疑似感染、SOFA评分小于2的两个患者群体测定，一个群体发展并发症而另一个没有，
-从比较结果中得出关于并发症风险的结论。
6.如权利要求1-3中任一项所述的方法，还包括测量uPAR基因的至少一种表达产物的表达水平。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法包括实施由以下组成的步骤：
-测量来自患者的所述生物学样品中的VEGFR2基因的至少一种表达产物的量，
-测量来自患者的所述生物学样品中的uPAR基因的至少一种表达产物的量，
-将就所述生物学样品测定的VEGFR2基因的至少一种表达产物的量或从此量衍生的值与预定参考值SVEGFR2进行比较；和
-将就所述生物学样品测定的uPAR基因的至少一种表达产物的量或从此量衍生的值与预定参考值SuPAR进行比较；
-从比较结果得出关于并发症风险的结论。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法包括实施由以下组成的步骤：
-测量所述患者的生物学样品中的VEGFR2基因的至少一种表达产物的第一量，所述生物学样品通过在时间T1取第一样品获得，
-测量所述患者的生物学样品中的VEGFR2基因的至少一种表达产物的第二量，所述生物学样品通过在时间T2取第二样品获得，
-测量所述患者的生物学样品中的uPAR基因的至少一种表达产物的第一量，所述生物学样品通过在时间T1取第一样品获得，
-测量所述患者的生物学样品中的uPAR基因的至少一种表达产物的第二量，所述生物学样品通过在时间T2取第二样品获得，
-计算VEGFR2基因的所述至少一种表达产物在T2的量与VEGFR2基因的所述至少一种表达产物在T1的量之间的变化，给出值ΔVEGFR2，
-计算uPAR基因的所述至少一种表达产物在T2的量与uPAR基因的所述至少一种表达产物在T1的量之间的变化，给出值ΔuPAR，
-将值ΔVEGFR2与参考值ΔSVEGFR2进行比较，所述参考值ΔSVEGFR2从疑似感染、SOFA评分小于2的两个患者群体测定，一个群体发展并发症而另一个没有，
-将值ΔuPAR与参考值ΔSuPAR进行比较，所述参考值ΔSuPAR从疑似感染、SOFA评分小于2的两个患者群体测定，一个群体发展并发症而另一个没有，
-从比较结果得出关于并发症风险的结论。
9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法包括实施由以下组成的步骤：
-测量来自患者的所述生物学样品中的VEGFR2基因的至少一种表达产物的量，
-测量来自患者的所述生物学样品中的uPAR基因的至少一种表达产物的量，
-计算来自前面步骤所测定的量的综合评分，
-将所述综合评分与预定的参考评分进行比较，和
-从比较结果得出关于并发症风险的结论。
10.一种用于治疗疑似感染、SOFA评分小于2的患者的方法，其特征在于，所述方法包括由以下组成的步骤：
-通过实施权利要求1-9中任一项所述的方法鉴定呈现并发症风险的患者，和
-调整之前步骤鉴定的所述患者的健康护理管理以降低并发症风险。
11.一种体外或离体测量疑似感染、SOFA评分小于2的患者中VEGFR2基因的至少一种表达产物和uPAR基因的至少一种表达产物的表达水平的试剂盒，所述试剂盒包含用于VEGFR2基因的所述至少一种表达产物的至少一种特异结合伴侣以及用于uPAR基因的所述至少一种表达产物的至少一种特异结合伴侣。
12.一种体外或离体测量生物学样品中VEGFR2基因的至少一种表达产物和uPAR基因的至少一种表达产物的表达水平的试剂盒，所述试剂盒包含：
-特异性工具或试剂，其使得能够测量所述生物学样品中要测量的VEGFR2基因的所述至少一种表达产物和uPAR基因的所述至少一种表达产物的量，和
-对照样品，其是校准成含有VEGFR2基因的所述至少一种表达产物的量和uPAR基因的所述至少一种表达产物的量的样品，所述量对应于已知量的VEGFR2基因的所述至少一种表达产物和已知量的uPAR基因的所述至少一种表达产物。
13.如权利要求11或12所述的试剂盒，其特征在于，表达产物的特异性结合伴侣是(i)至少一种杂交探针和/或至少一种扩增引物，或(ii)至少一种抗体，或至少一种抗体片段，或至少一种亲和蛋白，或至少一种适体。
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