CN111939259A - Na/K-ATP酶抑制剂及其应用 - Google Patents

Na/K-ATP酶抑制剂及其应用 Download PDF

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陈铎之
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Abstract

本发明提供了Na/K‑ATP酶抑制剂及其应用。具体地，本发明提供了Na/K‑ATP酶抑制剂的用途，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量。

Description

Na/K-ATP酶抑制剂及其应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域。更具体地，本发明涉及Na/K-ATP酶抑制剂及其应用。
背景技术
由于社会的进步和科技的发展，上世纪及其以前严重威胁人类的疾病如传染性疾病，由于抗生素等药物的出现其危害有了显著的降低。而癌症，心血管疾病，神经退行性疾病和代谢性疾病等慢性病成为了目前人类社会面临的主要健康威胁。肥胖，定义为个体脂肪过度积累，量化为体重指数(BMI，Body mass index，BMI等于体重(kg)除以身高(m)的平方)大于30，已然是一个全球性的生物医学问题，虽然曾经主要流行在北美，欧洲等西方发达国家。然而根据世界卫生组织统计，全球大约13％的人口为肥胖人群，肥胖的人数从1980年的8.57千万到2013年的21千万，大约20年间总数翻了一倍。以特别严重的美国为例，2013-2014年间，总人口的大约1/3为肥胖人群，其中男性的肥胖率大约为35％，而女性的肥胖率则高达40％。肥胖伴随着一系列并发症，如2型糖尿病，心血管疾病和高血压，同时有着发生脂肪肝，肾疾病，中风，癌症，骨关节炎，不育等的高风险性，严重的影响了人体健康和生活质量，同时也给社会带来巨大的经济压力。
可能由于营养摄入和储存对个体的生存来说是如此的重要，所以发展减肥药物去调控这个过程的道路才如此艰辛，这也使得肥胖药物市场有着巨大的空缺。虽然有很多的副作用，但是肥胖给人体的各个组织和器官如此大的压力和负担，所以对于很多肥胖的人而言，减轻体重是势在必行的。但是用于治疗肥胖的药物的研发史是一个相当不成功的过程，几乎所有治疗肥胖的药物都伴随着严重的副作用，导致大部分药物上市后很快就下市。
因此，本领域迫切需要开发一种新的治疗靶点、新的药物或新的策略。
发明内容
本发明的目的就是提供一种新的治疗靶点、新的药物或新的策略。
本发明第一方面提供了一种Na/K-ATP酶抑制剂的用途，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量。
在另一优选例中，所述组合物或制剂还用于选自下组的一种或多种用途：
(i)降低哺乳动物进食量；
(ii)减少哺乳动物的饮水量；
(iii)降低哺乳动物的体重；
(iv)治疗肥胖或其相关疾病；
(v)增强脂肪代谢。
在另一优选例中，所述促进脂肪分解的同时不降低哺乳动物的进食量。
在另一优选例中，所述哺乳动物包括啮齿动物(如小鼠、大鼠)、灵长动物和人。
另一优选例中，所述哺乳动物包括正常的哺乳动物和患有肥胖或其相关疾病的哺乳动物。
在另一优选例中，所述肥胖或其相关疾病选自下组：肥胖、糖尿病、高血脂、高胆固醇、脂肪肝、动脉粥样硬化、或其组合。
在另一优选例中，所述促进脂肪分解包括促进白色脂肪分解。
在另一优选例中，Na/K-ATP酶抑制剂选自下组：HLY72及其衍生物、强心甾类Na/K-ATP酶抑制剂、非甾类Na/K-ATP酶抑制剂、或其组合。
在另一优选例中，所述强心甾类化合物选自下组：洋地黄毒苷、夹竹桃苷、地高辛及其衍生物、或其组合。
在另一优选例中，Na/K-ATP酶抑制剂选自下组：HLY72及其衍生物、非甾类Na/K-ATP酶调节剂、或其组合。
在另一优选例中，所述HLY72及其衍生物的结构如式I所示：
Figure BDA0002061757630000021
式中，
各R0各自独立地选自下组：H、卤素、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C2-C8链烯基、取代或未取代的C2-C8链炔基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的-OC1-C8烷基、R3-C(O)-、R4-C(O)-O-CH2-、-O-R8、R5(R6)N-、取代或未取代的5-20元杂环基、-OH、和取代或未取代的苄基；其中，所述杂环基含有1-3个选自N、O、S的杂原子，并且所述取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：-OH、氧代(＝O)、-CN、硝基、羧基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、和-NRcRd；n为1、2、3或4，优选地1、2或3，更优选1或2；R8选自下组：H、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C2-C6烯基、取代或未取代的C2-C6炔基、和取代或未取代的C3-C6环烷基；并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：-OH、-CN、硝基、羧基、卤素、C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基；R1选自下组：H、取代或未取代的C1-C30烷基、取代或未取代的C2-C20链烯基、取代或未取代的C2-C20链炔基、取代或未取代的C1-C20烷氧基、取代或未取代的C3-C8环烷基、-OH、取代或未取代的-(CH2)m-C6-C12芳基或C4-C10杂芳基、和取代或未取代的苄基；所述杂芳基含有1-3个选自N、O、S的杂原子，并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：卤素、-OH、氧代(＝O)、-CN、-NRcRd、和硝基；
各R2各自独立地选自下组：-O-R7，其中R7选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C2-C8链烯基、取代或未取代的C2-C8链炔基、-(CH2)m-取代或未取代的C6-C12芳基或C4-C10杂芳基或取代未取代的C2-C6链炔基和取代或未取代的C3-C8环烷基；所述杂芳基含有1-3个选自N、O、S的杂原子，并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：C1-C8烷氧基、C1-C8烷基、卤素、-OH、氧代(＝O)、-CN、-NRcRd、和硝基；m为0-6的正整数，优选1、2、3或4；
R9选自下组：H、＝X、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C2-C6链烯基、取代或未取代的C2-C6链炔基、卤素、取代或未取代的C1-C3烷氧基和取代或未取代的C3-C6环烷基，所述取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：-OH、氧代(＝O)、-CN、硝基、羧基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、和-NRcRd；X为O或S；
q为0、1、2、3或4；
R3和R4各自独立地选自下组：H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、卤素、-OH、-CN、-NRcRd、硝基、或其组合；
R5和R6各自独立地选自下组：H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、-OH、-CN；或者R5和R6与相邻的N一起构成4-8元的含氮杂环；
或者，各R2可以和相连的C原子共同形成含有至少一个氧原子的、取代或未取代的5-20元杂环基，并且所述5-20元杂环基含有1-3个选自N、O、S的杂原子，其中所述取代为具有一个或多个选自下组的取代基：C1-C8烷氧基、C1-C8烷基、卤素、-OH、-CN、-NRcRd、和硝基；
Rc、Rd各自独立地为H、C1-C3烷基、或C3-C6环烷基。
在另一优选例中，所述的任一取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：-OH、氧代(＝O)、-CN、硝基、羧基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、和-NRcRd；其中，Rc、Rd各自独立地为H、C1-C3烷基、C3-C6环烷基。
在另一优选例中，所述化合物具有式Ia所示的结构：
Figure BDA0002061757630000031
式中，R0、R1、R9和各个R2的定义如上所述。
在另一优选例中，所述化合物具有式Ib所示的结构：
Figure BDA0002061757630000032
式中，R0、R1、R9和R2的定义如上所述。
在另一优选例中，所述化合物具有式Ic所示的结构：
Figure BDA0002061757630000041
式中，R0、R1和R9的定义如上所述。
在另一优选例中，各R0各自独立地选自下组：H、卤素、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C2-C6链烯基、取代或未取代的C2-C6链炔基、取代或未取代的C3-C6环烷基、取代或未取代的C1-C6烷氧基、R3-C(O)-、R4-C(O)-O-CH2-、R5(R6)N-、取代或未取代的5-10元杂环基、-OH、取代或未取代的苄基、或其组合；其中，所述杂环基含有1-3个选自N、O、S的杂原子，并且所述取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：-OH、氧代(＝O)、羧基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷基、和-NRaRb；n为1-4的正整数，优选为1、2或3，更优选为1或2；Ra、Rb各自独立地为H、C1-C3烷基；
R1选自下组：H、取代或未取代的C1-C25烷基、取代或未取代的C2-C10链烯基、取代或未取代的C2-C10链炔基、取代或未取代的-O-C1-C15烷基、取代或未取代的C3-C6环烷基、-OH、取代或未取代的-(CH2)m-C6-C12芳基或C4-C10杂芳基、或其组合；所述杂芳基含有1-3个选自N、O、S的杂原子，并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：卤素、-OH、-CN、-NRaRb和硝基；m为0-6，优选1、2、3或4；Ra、Rb各自独立地为H、C1-C3烷基；
各R2各自独立地选自下组：-O-R7，其中R7选自下组：H、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C2-C6链烯基、取代或未取代的C2-C6链炔基、-(CH2)m-取代或未取代的C6-C12芳基或C4-C10杂芳基、取代或未取代的C3-C6环烷基、或其组合；所述杂芳基含有1-3个选自N、O、S的杂原子，并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、卤素、-OH、-CN、-NRaRb、和硝基；m为0-6，优选1、2、3或4；Ra、Rb各自独立地为H、C1-C3烷基；
R3、R4、R5和R6各自独立地选自下组：H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C6环烷基、卤素、-OH、-CN、-NH2、硝基、或其组合；
或者各R2可以和相连的C原子共同形成含有至少一个氧原子的、取代或未取代的5-10元杂环基，并且所述5-10元杂环基含有1-3个选自N、O、S的杂原子，其中所述取代为具有一个或多个选自下组的取代基：C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、卤素、-OH、-CN、-NH2、和硝基。
在另一优选例中，R0为1、2或3个各自独立地选自下组的基团或取代基：H、卤素、取代或未取代的C1-C5烷基、取代或未取代的C2-C5链烯基、取代或未取代的C2-C5链炔基、取代或未取代的C3-C6环烷基、-OH、取代或未取代的-OC1-C5烷基、R3-C(O)-、R4-C(O)-O-CH2-、R5(R6)N-、或其组合；并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基所取代：卤素、-OH、-CN、-NRaRb和硝基，R3、R4、R5和R6各自独立地为H、C1-C5烷基；Ra、Rb各自独立地为H、C1-C3烷基。
在另一优选例中，R1选自下组：H、取代或未取代的C1-C20烷基、取代或未取代的C2-C10链烯基、取代或未取代的C2-C10链炔基、取代或未取代的C3-C6环烷基、-OH、取代或未取代的苄基、或其组合；并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基所取代：卤素、-OH、-CN、-NRaRb、和硝基；Ra、Rb各自独立地为H、C1-C3烷基。
在另一优选例中，R9选自下组：H、＝X、取代或未取代的C1-C5烷基、取代或未取代的C2-C5链烯基、取代或未取代的C2-C5链炔基、卤素、取代或未取代的C1-C3烷氧基和取代或未取代的C3-C5环烷基，所述取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：-OH、-CN、硝基、羧基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、和-NRcRd；X为O或S；Rc、Rd各自独立地为H、C1-C3烷基。
在另一优选例中，R9选自下组：H、＝X、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C2-C4链烯基、取代或未取代的C2-C4链炔基、卤素、取代或未取代的C1-C3烷氧基和取代或未取代的C3-C5环烷基，所述取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：-OH、-CN、硝基、羧基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、和-NRcRd；X为O；Rc、Rd各自独立地为H、C1-C3烷基。
在另一优选例中，R0为1个或2个各自独立地选自下组的基团或取代基：H、卤素、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C2-C4链烯基、取代或未取代的C2-C4链炔基、取代或未取代的C3-C5环烷基、-OH、取代或未取代的-OC1-C4烷基、R3-C(O)-、R4-C(O)-O-CH2-、R5(R6)N-、或其组合；并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基所取代：卤素、-OH、-CN、-NRaRb、和硝基；Ra、Rb各自独立地为H、C1-C3烷基；
其中，R3、R4、R5和R6各自独立地为H、C1-C3烷基。
在另一优选例中，R1选自下组：H、取代或未取代的C1-C15烷基、取代或未取代的C2-C8链烯基、取代或未取代的C2-C8链炔基、取代或未取代的C3-C6环烷基、-OH、取代或未取代的苄基、或其组合；并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基所取代：卤素、-OH、-CN、-NRaRb、和硝基；Ra、Rb各自独立地为H、C1-C3烷基。
在另一优选例中，R1选自下组：H、取代或未取代的C1-C12烷基、取代或未取代的C2-C6链烯基、取代或未取代的C2-C6链炔基、取代或未取代的C3-C5环烷基、-OH、取代或未取代的苄基、或其组合；并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基所取代：卤素、-OH、-CN、-NRaRb、和硝基；Ra、Rb各自独立地为H、C1-C3烷基。
在另一优选例中，R7选自下组：R7选自下组：H、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C2-C4烯基、取代或未取代的C2-C4炔基、取代或未取代的C3-C5环烷基、或其组合；所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：C1-C3烷基、卤素、-OH、-CN、-NRaRb、和硝基；Ra、Rb各自独立地为H、C1-C3烷基。
在另一优选例中，各R0可以相同，可以不同。
在另一优选例中，所述R0为H、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C2-C4链烯基、取代或未取代的C2-C4链炔基、取代或未取代的C3-C5环烷基、R3-C(O)-、R4-C(O)-O-CH2-、取代或未取代的C1-C4烷氧基、-NRaRb、取代或未取代的苄基、或取代或未取代的
Figure BDA0002061757630000051
所述取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：-OH、羧基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷基、和-NRaRb；Ra、Rb各自独立地为H、C1-C3烷基。
在另一优选例中，所述R0为1个基团或取代基。
在另一优选例中，R0选自下组：甲基、丙烯、乙基、乙烯、
Figure BDA0002061757630000061
H-C(O)-和甲氧基。
在另一优选例中，R1选自下组：H、取代或未取代的C1-C20烷基、取代或未取代的C2-C10链烯基、取代或未取代的C2-C10链炔基、取代或未取代的C3-C6环烷基。
在另一优选例中，所述R1为H、取代或未取代的C1-C20烷基。
在另一优选例中，R2为-O-R7，其中R7为：H、取代或未取代的C1-C5烷基、取代或未取代的C2-C5烯基、取代或未取代的C2-C5炔基、-(CH2)m-取代或未取代的C6-C12芳基或C4-C10杂芳基、取代或未取代的C3-C5环烷基、或其组合；所述杂芳基含有1-2个选自N、O、S的杂原子，并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、卤素、-OH、-CN、-NRaRb、和硝基；m为1-3；Ra、Rb各自独立地为H、C1-C3烷基。
在另一优选例中，有两个R2分别位于8位和9位。
在另一优选例中，q为1或2。
在另一优选例中，位于8位和9位的两个R2与相邻的C原子构成5-7元杂环，其中所述杂环含有1-2个氧原子。
在另一优选例中，所述的卤素选自下组：F、Cl、Br或I。
在另一优选例中，所述卤素为Cl。
在另一优选例中，所述化合物为光学异构体或外消旋体。
在另一优选例中，R0、R1、R2、R9为实施例中各具体化合物相对应的具体基团。
在另一优选例中，所述HLY72及其衍生物选自下组：
Figure BDA0002061757630000062
Figure BDA0002061757630000071
在另一优选例中，所述Na/K-ATP酶抑制剂包括α3特异性抑制剂。
在另一优选例中，所述Na/K-ATP酶抑制剂包括特异性的靶向脑组织的抑制剂。
在另一优选例中，所述Na/K-ATP酶抑制剂对α3抑制的IC50(I1)与Na/K-ATP酶抑制剂对α1或α2抑制的IC50(I2)的比值(I1/I2)＞1/5，较佳地，＞2，更佳地，＞5。
在另一优选例中，所述Na/K-ATP酶抑制剂对α3抑制的IC50(I1)与Na/K-ATP酶抑制剂对α1或α2抑制的IC50(I2)的比值(I1/I2)为2－100，较佳地，5－100。
在另一优选例中，所述组合物包括药物组合物、食品组合物、膳食组合物或保健品组合物。
在另一优选例中，所述的组合物或制剂还包括选自下组的额外组分：其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物。
在另一优选例中，所述其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物选自下组：苯丁胺(phentermine)、奥利司他(orlistat)、氯卡色林(Lorcaserin)、利拉鲁肽(Liraglutide)、托吡酯(Topiramate)、苄非他明(Benzphetamine)、苯二甲吗啉(Phendimetrazine)、二乙氨苯丙酮(diethylpropion)、纳曲酮(naltrexone)、丁氨苯丙酮(bupropion)、贝洛拉尼(Beloranib)、西替利司他(Cetilistat)、特索芬辛(Tesofensine)、成纤维细胞生长因子21(FGF21)、美曲普汀(Metreleptin)、多肽YY(PYY)、达伐林肽(Davalintide)、大麻素受体阻断剂(SR141716,AM251,AM6545)、韦利贝特(Velneperit)、塞特黑肽(Setmelanotide)、或其组合。
在另一优选例中，所述的药物组合物含有(i)Na/K-ATP酶抑制剂；以及(ii)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述组分(i)占所述药物组合物总重量的0.001-99.9wt％,较佳地0.1-99wt％，更佳地1％-90wt％。
在另一优选例中，所述的Na/K-ATP酶抑制剂的浓度为0.001ug-10000000ug/ml，较佳地为0.1ug-1000000ug/ml，更佳地，10ug-100000ug/ml。
在另一优选例中，所述的组合物或药物包括：口服制剂和非口服制剂。
在另一优选例中，所述的制剂包括：粉剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂、酊剂、口服液、片剂或含片。
在另一优选例中，所述组合物为口服制剂。
在另一优选例中，所述的组合物(如药物组合物)通过以下方式施用于哺乳动物：口服、静脉注射、或局部注射。
在另一优选例中，所述哺乳动物包括人或非人哺乳动物。
在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括啮齿动物，如小鼠、大鼠。
本发明第二方面提供了一种药物组合物，包括：
(a1)用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的第一活性成分，所述第一活性成分为Na/K-ATP酶抑制剂；和
(a2)用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的第二活性成分，所述第二活性成分为其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物；和
(b)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物选自下组：苯丁胺(phentermine)、奥利司他(orlistat)、氯卡色林(Lorcaserin)、利拉鲁肽(Liraglutide)、托吡酯(Topiramate)、苄非他明(Benzphetamine)、苯二甲吗啉(Phendimetrazine)、二乙氨苯丙酮(diethylpropion)、纳曲酮(naltrexone)、丁氨苯丙酮(bupropion)、贝洛拉尼(Beloranib)、西替利司他(Cetilistat)、特索芬辛(Tesofensine)、成纤维细胞生长因子21(FGF21)、美曲普汀(Metreleptin)、多肽YY(PYY)、达伐林肽(Davalintide)、大麻素受体阻断剂(SR141716,AM251,AM6545)、韦利贝特(Velneperit)、塞特黑肽(Setmelanotide)、或其组合。
在另一优选例中，所述第一活性成分和第二活性成分的重量比为1:100至100：1，较佳地为1:10至10：1。
在另一优选例中，所述药物组合物中，含有0.0001-99wt％(较佳地0.01-90wt％，更佳地，0.1-80wt％)的组分(a1)，以药物组合物的总重量计。
在另一优选例中，所述药物组合物中，含有0.0001-99wt％(较佳地0.01-90wt％，更佳地，0.1-80wt％)的组分(a2)，以药物组合物的总重量计。
在另一优选例中，所述药物组合物中可以是单一化合物，也可以是多个化合物的混合物。
在另一优选例中，所述的药物组合物用于制备(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物或制剂。
在另一优选例中，所述的药物剂型为口服给药或非口服给药剂型。
在另一优选例中，所述的口服给药剂型是片剂、散剂、颗粒剂或胶囊剂，或乳剂或糖浆剂。
在另一优选例中，所述的非口服给药剂型是注射剂或针剂。
在另一优选例中，所述的活性成分(a1)和活性成分(a2)的总含量为组合物总重的1～99wt％，更佳地为5～90wt％。
本发明第三方面提供了一种药盒，所述药盒含有：
(i)第一容器，以及装于该第一容器中的活性成分(a1)Na/K-ATP酶抑制剂，或含有活性成分(a1)的药物；
(ii)第二容器，以及装于该第二容器中的活性成分(a2)其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物，或含有活性成分(a2)的药物。
在另一优选例中，所述的第一容器和第二容器是相同或不同的容器。
在另一优选例中，所述的第一容器的药物是含Na/K-ATP酶抑制剂的单方制剂。
在另一优选例中，所述的第二容器的药物是其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的单方制剂。
在另一优选例中，所述药物的剂型为口服剂型或注射剂型。
在另一优选例中，所述的试剂盒还含有说明书，所述说明书中记载了联合给予活性成分(a1)和活性成分(a2)从而(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的说明。
在另一优选例中，所述含有Na/K-ATP酶抑制剂的制剂或含有其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物的制剂的剂型分别包括胶囊、片剂、栓剂、或静脉注射剂。
在另一优选例中，所述含有如Na/K-ATP酶抑制剂的制剂中，所述Na/K-ATP酶抑制剂的浓度为0.001ug-10000000ug/ml，较佳地为0.1ug-1000000ug/ml，更佳地，10ug-100000ug/ml。
本发明第四方面提供了一种体外非治疗性的(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的方法，包括：
(i)给需要的对象施用Na/K-ATP酶抑制剂、本发明第二方面所述的药物组合物、或本发明第三方面所述的药盒。
在另一优选例中，所述的施用包括口服。
在另一优选例中，所述的施用剂量为10μg-30mg/kg体重/天。
在另一优选例中，施用频率为1-2次/天，较佳地1次/天。
在另一优选例中，施用包括一个或多个周期，各周期为1-7天，较佳地2-3天。
在另一优选例中，所述的对象包括人或非人哺乳动物。
在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括啮齿动物(如小鼠、大鼠)、灵长类动物(如猴)。
本发明第五方面提供了一种筛选用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的候选药物的方法，包括步骤：
(a)在测试组中，在测试化合物及在表达Na/K-ATP酶的细胞的存在下，检测测试组中的Na/K-ATP酶的活性A1；
并且在不存在所述测试化合物且其他条件相同的对照组中，检测对照组中Na/K-ATP酶的活性A2；
(b)对A1和A2进行比较，如果A1显著低于A2，则表示所述测试化合物是(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的候选药物。
在另一优选例中，所述细胞为体外培养的细胞。
在另一优选例中，所述细胞选自下组的细胞表达系统：哺乳动物细胞表达系统、昆虫细胞表达系统、酵母细胞表达系统、无细胞蛋白表达系统、选自下组。
在另一优选例中，所述细胞选自下组：HEK293细胞、HEK293T细胞、CHO细胞、sf9细胞、sf21细胞、PichiaPink细胞、或其组合。
在另一优选例中，所述“显著低于”指A1/A2≤1/2,较佳地，≤1/3，更佳地≤1/4。
在另一优选例中，所述的方法是非诊断和非治疗性的。
在另一优选例中，所述的方法包括步骤(c)：将步骤(a)中所确定的候选药物施用于非人哺乳动物，进一步测定其对非人哺乳动物的(i)脂肪分解；(ii)脂肪含量；和/或(iii)肥胖或其相关疾病的影响。
本发明第六方面提供了一种(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的方法，包括：
(i)给需要的对象施用Na/K-ATP酶抑制剂、本发明第二方面所述的药物组合物、或本发明第三方面所述的药盒。
在另一优选例中，所述的施用包括口服。
在另一优选例中，所述的施用剂量为10μg-30mg/kg体重/天。
在另一优选例中，施用频率为1-2次/天，较佳地1次/天。
在另一优选例中，施用包括一个或多个周期，各周期为1-7天，较佳地2-3天。
在另一优选例中，所述的对象包括人或非人哺乳动物。
在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括啮齿动物(如小鼠、大鼠)、灵长类动物(如猴)。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示了HLY72抑制Na/K-ATPase的ATP水解活性。0,0.2,1,5和25μM的小分子化合物HLY72对Digitoxin敏感的Na/K-ATPase活性的抑制作用。
图2显示了HLY103的Na/K-ATPase抑制活性远低于HLY72.25μM的小分子化合物HLY72和HLY103对Digitoxin敏感的Na/K-ATPase活性的抑制作用。
图3显示了Na/K-ATPase的小分子抑制剂Digitoxin和Oleandrin降低小鼠的进食量。(DMSO组10只小鼠，Digitoxin和Oleandrin组各9只小鼠)
图4显示了HLY72和Digitoxin对小鼠代谢的比较分析。高脂饲料喂养的小鼠(A,B,C)，每组4只被放入代谢笼3天，每天注射DMSO，HLY72(20mg/kg)或Digitoxin(150ug/kg)，小鼠的能量耗散(A),呼吸交换率(B)，物理活动(C)
图5显示了HLY72和Digitoxin都减少小鼠的饮水量。高脂饲料喂养的小鼠,每组4只被放入代谢笼3天，每天注射DMSO，HLY72(20mg/kg)或Digitoxin(150ug/kg)，小鼠的饮水情况比较。
图6显示了口服灌胃Digitoxin和Oleandrin降低肥胖小鼠体重。(每组5只小鼠)连续3天灌胃0,12.5，25，50,100μg/kg剂量的Digitoxin对肥胖小鼠体重降低作用(A)；(每组5只小鼠)连续3天灌胃100μg/kg剂量的Oleandrin对肥胖小鼠体重降低作用(B)。
图7显示了Na/K-ATPase的小分子抑制剂Istaroxime(200μg/kg)和Na/K-ATPase的小分子拮抗剂Rostafuroxin(500μg/kg)没有降低小鼠进食量(DMSO组8只小鼠，Digitoxin，Istaroxime和Rostafuroxin组个9只小鼠)。
图8显示了HLY72,Digitoxin和Istaroxime的脑分布。(每组每个时间点3只小鼠)小鼠给予灌胃3mg/kg的HLY72,3mg/kg的Digitoxin或3mg/kg的Istaroxime，分别在给药后的0.5，1,2,4,8和24小时时检测脑分布。
图9显示了Hybj-12a在大鼠体内的组织分布情况。(每组5只大鼠)大鼠(Sprague-Dawley)给予灌胃3mg/kg的Hybj-12a，分别在给药后的0.5，2和8小时时检测多个组织的分布。
图10显示了HLY72和已知Na/K-ATPase的小分子抑制剂对脂肪分解的作用。小鼠(每组3只)腹腔注射20mg/kg的HLY72和40mg/kg的Hexam连续两天，第二天注射后5小时，分离附睾白色脂肪组织检测p-HSL的表达变化(a,b)。小鼠(每组3只)腹腔注射150ug/kg的Digitoxin,Istaroxime和Rostafuroxin连续两天，第二天注射后5小时，分离附睾白色脂肪组织检测p-HSL的表达变化(c,d)。小鼠(每组3只)腹腔注射150ug/kg的Digitoxin和40mg/kg的Hexam连续两天，第二天注射后5小时，分离附睾白色脂肪组织检测p-HSL的表达变化(e,f)。
图11显示了HLY72,Digitoxin和Istaroxime的心脏分布。(每组每个时间点3只小鼠)小鼠给予灌胃3mg/kg的HLY72,3mg/kg的Digitoxin或3mg/kg的Istaroxime，分别在给药后的0.5，1,2,4,8和24小时时检测心脏血和门静脉血。
图12显示了HLY72和Hybj-12a的药代动力学(每组3只小鼠)小鼠灌胃3mg/kg的HLY72或Hybj-12a和静脉注射1mg/kg的HLY72或Hybj-12a后的0.25，0.5，1，2，4，8，24小时取血液分析。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，首次意外地发现，Na/K-ATP酶抑制剂可有效(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量，并且，本发明人还意外的发现，Na/K-ATP酶抑制剂还可有效(i)降低哺乳动物进食量；(ii)减少哺乳动物的饮水量；(iii)降低哺乳动物的体重；(iv)治疗肥胖或其相关疾病；和/或(v)增强脂肪代谢。在此基础上，本发明人完成了本发明。
基团定义
如本文所用，术语“取代或未取代的”指所述基团可以是未取代的，或者所述基团中的H被一个或多个(如1-10个，较佳地1-5个，更佳地1-3个，最佳地，1-2个)取代基所取代。
如本文所用，所述的“取代”或“取代的”指所述基团具有一个或多个(较佳地1-6个，更佳地1-3个)选自下组的取代基：卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6链烯基、C2-C6链炔基。
如本文所用，术语“C1-C25烷基”是指具有1-25个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。
如本文所用，术语“C1-C20烷基”是指具有1-20个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。
如本文所用，术语“C1-C8烷基”是指具有1-8个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。
如本文所用，术语“C1-C5烷基”是指具有1-5个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。
如本文所用，术语“C1-C4烷基”是指具有1-4个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。
如本文所用，术语“C1-C3烷基”是指具有1-3个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、或类似基团。
如本文所用，术语“C2-C20链烯基”指具有2-20个碳原子的直链或支链的烯基，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、或类似基团。
如本文所用，术语“C2-C10链烯基”指具有2-10个碳原子的直链或支链的烯基，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、或类似基团。
如本文所用，术语“C2-C8链烯基”指具有2-8个碳原子的直链或支链的烯基，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、或类似基团。
如本文所用，术语“C2-C6链烯基”指具有2-6个碳原子的直链或支链的烯基，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、或类似基团。
如本文所用，术语“C2-C5链烯基”指具有2-5个碳原子的直链或支链的烯基，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、或类似基团。
如本文所用，术语“C2-C4链烯基”指具有2-4个碳原子的直链或支链的烯基，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、或类似基团。
如本文所用，术语“C2-C20链炔基”是指具有2-20个碳原子的直链或支链的炔基，例如乙炔基、丙炔基、或类似基团。
如本文所用，术语“C2-C10炔基”是指具有2-10个碳原子的直链或支链的炔基，例如乙炔基、丙炔基、或类似基团。
如本文所用，术语“C2-C8链炔基”是指具有2-8个碳原子的直链或支链的炔基，例如乙炔基、丙炔基、或类似基团。
如本文所用，术语“C2-C6链炔基”是指具有2-6个碳原子的直链或支链的炔基，例如乙炔基、丙炔基、或类似基团。
如本文所用，术语“C2-C5链炔基”是指具有2-5个碳原子的直链或支链的炔基，例如乙炔基、丙炔基、或类似基团。
如本文所用，术语“C2-C4链炔基”是指具有2-4个碳原子的直链或支链的炔基，例如乙炔基、丙炔基、或类似基团。
如本文所用，术语“C1-C20烷氧基”是指具有(C1-C20烷基)-O-结构的基团，例如，CH3-O-、C2H5-O-、C3H8-O-、或类似基团。
如本文所用，术语“C1-C8烷氧基”是指具有(C1-C8烷基)-O-结构的基团，例如，CH3-O-、C2H5-O-、C3H8-O-、或类似基团。
如本文所用，术语“C1-C5烷氧基”是指具有(C1-C5烷基)-O-结构的基团，例如，CH3-O-、C2H5-O-、C3H8-O-、或类似基团。
如本文所用，术语“C3-C8环烷基”指具有3-8个碳原子的环状烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、或类似基团。
如本文所用，术语“C3-C6环烷基”指具有3-6个碳原子的环状烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、或类似基团。
如本文所用，术语“C3-C5环烷基”指具有3-5个碳原子的环状烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、或类似基团。
如本文所用，术语“C6-C12芳基”指6至12个碳原子的单价芳香族碳环基团，它具有单环(如苯基)或稠环(如萘基或蒽基)，如果连接点在芳香碳原上，稠环可能是非芳香性的(如2-苯并噁唑酮，2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮-7-基等)。所述取代或未取代的C5－C20芳基选自下组：邻位取代苯基、间位取代苯基、对位取代苯基。优选的芳基包括苯基和萘基。该术语包括取代或未取代的形式，其中取代基的定义如上。所述取代苯基的取代基选自下组：卤素、羟基、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、叔丁氧基、三氟甲基、或其组合。
如本文所用，术语“C4-C10杂芳基”指具有4至10个碳原子和1至4个选自氧、氮和硫的杂原子的芳香基团，这样的杂芳基可以是单环的(如吡啶基或呋喃基)或稠环(如吲嗪基(indolizinyl)或苯并噻吩基)，其中，所述稠环可以是非芳香性的和/或含有一个杂原子，只要连接点是通过芳香性杂芳基的原子。优选地杂芳基包括吡啶基、吡咯基、吲哚基、噻吩基和呋喃基。该术语包括取代或未取代的杂芳基。
如本文所用，术语“5-20元杂环基”、或“C5-C20杂环基”指饱和的、部分饱和的或不饱和的基团(但不是芳香性的)，具有单环或稠环(包括桥环体系和螺环体系，具有5至20个碳原子(优选5-10个碳原子)和1至4个选自氮、硫或氧的杂原子，在稠环体系中，一个或多个环可以是环烷基、芳基或杂芳基，只要连接点通过非芳香性环。该术语包括取代或未取代的杂环基。
如本文所用，术语“卤素”是指氟、氯、溴、或碘，优选氟和氯，更优选氯。
如本文所用，术语“卤代的”指被相同或不同的一个或多个上述卤原子取代的基团，可以部分卤代或全部卤代，例如三氟甲基、五氟乙基、七氟异丙基、或类似基团。
如本文所用，术语“C1-C3卤代烷基”是指氢被1个或1个以上的卤素取代的具有1-3个碳原子的直链或支链烷基，例如，卤代甲基、卤代乙基、卤代丙基、卤代异丙基、或类似基团，优选三氟甲基。
本发明的化合物可以含有一个或多个不对称中心，并因此以消旋体、外消旋混合物、单一对映体、非对映异构体化合物和单一非对映体的形式出现。可以存在的不对称中心，取决于分子上各种取代基的性质。每个这种不对称中心将独立地产生两个旋光异构体，并且所有可能的旋光异构体和非对映体混合物和纯或部分纯的化合物包括在本发明的范围之内。本发明包括化合物的所有异构形式。
HLY72及其衍生物
如本文所用，术语“本发明的HLY72及其衍生物”为一种Na/K-ATP酶抑制剂，用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量。
在本发明中，本发明的HLY72及其衍生物还用于选自下组的一种或多种用途：
(i)降低哺乳动物进食量；
(ii)减少哺乳动物的饮水量；
(iii)降低哺乳动物的体重；
(iv)治疗肥胖或其相关疾病；
(v)增强脂肪代谢。
在本发明中，本发明的HLY72及其衍生物具有式I所示的通式：
Figure BDA0002061757630000141
式中，
各R0各自独立地选自下组：H、卤素、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C2-C8链烯基、取代或未取代的C2-C8链炔基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的-OC1-C8烷基、R3-C(O)-、R4-C(O)-O-CH2-、-O-R8、R5(R6)N-、取代或未取代的5-20元杂环基、-OH、和取代或未取代的苄基；其中，所述杂环基含有1-3个选自N、O、S的杂原子，并且所述取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：-OH、氧代(＝O)、-CN、硝基、羧基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、和-NRcRd；n为1、2、3或4，优选地1、2或3，更优选1或2；R8选自下组：H、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C2-C6烯基、取代或未取代的C2-C6炔基、和取代或未取代的C3-C6环烷基；并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：-OH、-CN、硝基、羧基、卤素、C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基；R1选自下组：H、取代或未取代的C1-C30烷基、取代或未取代的C2-C20链烯基、取代或未取代的C2-C20链炔基、取代或未取代的C1-C20烷氧基、取代或未取代的C3-C8环烷基、-OH、取代或未取代的-(CH2)m-C6-C12芳基或C4-C10杂芳基、和取代或未取代的苄基；所述杂芳基含有1-3个选自N、O、S的杂原子，并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：卤素、-OH、氧代(＝O)、-CN、-NRcRd、和硝基；
各R2各自独立地选自下组：-O-R7，其中R7选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C2-C8链烯基、取代或未取代的C2-C8链炔基、-(CH2)m-取代或未取代的C6-C12芳基或C4-C10杂芳基或取代未取代的C2-C6链炔基和取代或未取代的C3-C8环烷基；所述杂芳基含有1-3个选自N、O、S的杂原子，并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：C1-C8烷氧基、C1-C8烷基、卤素、-OH、氧代(＝O)、-CN、-NRcRd、和硝基；m为0-6的正整数，优选1、2、3或4；
R9选自下组：H、＝X、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C2-C6链烯基、取代或未取代的C2-C6链炔基、卤素、取代或未取代的C1-C3烷氧基和取代或未取代的C3-C6环烷基，所述取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：-OH、氧代(＝O)、-CN、硝基、羧基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、和-NRcRd；X为O或S；
q为0、1、2、3或4；
R3和R4各自独立地选自下组：H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、卤素、-OH、-CN、-NRcRd、硝基、或其组合；
R5和R6各自独立地选自下组：H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、-OH、-CN；或者R5和R6与相邻的N一起构成4-8元的含氮杂环；
或者，各R2可以和相连的C原子共同形成含有至少一个氧原子的、取代或未取代的5-20元杂环基，并且所述5-20元杂环基含有1-3个选自N、O、S的杂原子，其中所述取代为具有一个或多个选自下组的取代基：C1-C8烷氧基、C1-C8烷基、卤素、-OH、-CN、-NRcRd、和硝基；
Rc、Rd各自独立地为H、C1-C3烷基、或C3-C6环烷基。
在另一优选例中，所述的任一取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：-OH、氧代(＝O)、-CN、硝基、羧基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、和-NRcRd；其中，Rc、Rd各自独立地为H、C1-C3烷基、C3-C6环烷基。
在一优选实施方式中，所述化合物具有式Ia所示的结构：
Figure BDA0002061757630000151
式中，R0、R1、R9和各个R2的定义如上所述。
在一优选实施方式中，所述化合物具有式Ib所示的结构：
Figure BDA0002061757630000161
式中，R0、R1、R9和R2的定义如上所述。
在一优选实施方式中，所述化合物具有式Ic所示的结构：
Figure BDA0002061757630000162
式中，R0、R1和R9的定义如上所述。
在一优选实施方式中，所述化合物选自下组：
Figure BDA0002061757630000163
Figure BDA0002061757630000171
组合物和施用方法
如本文所用，术语“组合物”包括(i)用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的Na/K-ATP酶抑制剂，和(ii)其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物(如苯丁胺(phentermine)、奥利司他(orlistat)、氯卡色林(Lorcaserin)、利拉鲁肽(Liraglutide)、托吡酯(Topiramate)、苄非他明(Benzphetamine)、苯二甲吗啉(Phendimetrazine)、二乙氨苯丙酮(diethylpropion)、纳曲酮(naltrexone)、丁氨苯丙酮(bupropion)、贝洛拉尼(Beloranib)、西替利司他(Cetilistat)、特索芬辛(Tesofensine)、成纤维细胞生长因子21(FGF21)、美曲普汀(Metreleptin)、多肽YY(PYY)、达伐林肽(Davalintide)、大麻素受体阻断剂(SR141716,AM251,AM6545)、韦利贝特(Velneperit)、塞特黑肽(Setmelanotide))；此外，所述的组合物包括药物组合物、食品组合物、膳食组合物或保健品组合物。
在一优选实施方式中，本发明的组合物还用于(i)降低哺乳动物进食量；(ii)减少哺乳动物的饮水量；(iii)降低哺乳动物的体重；(iv)治疗肥胖或其相关疾病；(v)增强脂肪代谢。
通常，可将本发明的活性成分配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的载体介质。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)：口服、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、皮内、或局部给药。
本发明还提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明的活性成分以及药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约1微克-10毫克/千克体重，优选地，Na/K-ATP酶抑制剂的用量可以为：成年人每日0.01～200mg，优选0.1～20mg/天。
作为治疗或预防肥胖或其相关疾病的药物，可以制成口服和非口服制剂。口服给药可制成片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等常用剂型，所用的赋型剂可以为淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、羟甲基纤维素等中的一种或几种。崩解剂可以为马铃薯淀粉、羟甲基纤维素等中的一种或几种。粘合剂可以为阿拉伯胶、玉米淀粉、明胶、糊精等中的一种或几种。口服制剂除上述剂型外，还可以制成乳剂、糖浆剂等。
非口服制剂可以制成注射剂，可以与注射用水、生理盐水、葡萄糖水制成注射剂，也可以在其中加入一定比例的乙醇、丙醇、乙二醇等。
本发明的进一步目的是提供一种用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物的制备方法，采用所述的Na/K-ATP酶抑制剂以及其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物为药物原料，用相应的赋型剂，按照常规的方法制成口服和非口服制剂，其中Na/K-ATP酶抑制剂的用量可以为：成年人每日0.01～200mg，优选0.1～20mg/天，每日服用1次；儿童的用量和次数需在成人的基础上酌情递减。
药盒
本发明还提供了一种药盒，所述的药盒含有：
(i)第一容器，以及装于该第一容器中的活性成分(a1)Na/K-ATP酶抑制剂，或含有活性成分(a1)的药物；
(ii)第二容器，以及装于该第二容器中的活性成分(a2)其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物，或含有活性成分(a2)的药物；和
(iii)说明书。
所述含有Na/K-ATP酶抑制剂可以是含有Na/K-ATP酶抑制剂的单元剂型，所述含有其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物可以是含有其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物的单元剂型。
药盒中装有至少两个含有Na/K-ATP酶抑制剂的单元剂型和含有其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物的单元剂型；较佳地，各为4-10个。
如本文所用，术语“单元剂型”是指为了服用方便，将组合物制备成单次服用所需的剂型，包括但不限于各种固体剂(如片剂)、液体剂、胶囊剂、缓释剂。
此外，可用于本发明药盒的其他的用于治(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物可以为一种或多种，优选地，所述其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物可以为多种，更优选地，可以为本领域技术人员所熟知的其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物组合。
(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的方法
本发明还提供了体外非治疗性的(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的方法，包括步骤：
(i)给需要的对象施用Na/K-ATP酶抑制剂、本发明第二方面所述的药物组合物、或本发明第三方面所述的药盒。
本发明的主要优点包括：
(1)本发明首次发现，抑制Na/K-ATP酶的活性，可显著(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量。
(2)本发明首次发现，抑制Na/K-ATP酶的活性，还可显著(i)降低哺乳动物进食量；和/或(ii)减少哺乳动物的饮水量；和/或(iii)降低哺乳动物的体重；和/或(iv)治疗肥胖或其相关疾病；和/或(v)增强脂肪代谢。
(3)本发明首次发现，本发明的Na/K-ATP酶抑制剂(比如HLY72及其衍生物)通过脑部发挥降低进食的作用，不是由于作用于心脏而间接产生的结果而导致进食量降低和脂肪分解。
(4)本发明首次发现，本发明的Na/K-ATP酶抑制剂(比如HLY72及其衍生物)吸收很快，而且8小时内就能很好的从体内消除无蓄积，是十分优良的候选化合物。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
除非特别说明，否则本发明实施例中所用材料和试剂均为市售产品。
在本发明中，本发明的HLY72及其衍生物中的具体化合物的制备见申请号为PCT/CN2018/107067的PCT申请。
材料与方法
1.1实验试剂，质粒
小鼠ATP1A3，ATP1B1基因全长通过PCR得到并克隆到哺乳动物表达载体PCMV-HA中。ProteoExtract Native Membrane Extraction Kit(444810)购自Calbiochem公司。ATP(R0441)来至Thermo Scientific公司。Anti-HSL抗体(Cell Signaling Technology)，anti-phospho-HSL抗体(Cell Signaling Technology)。ATPase/GTPase Activity AssayKit来至Sigma公司。Streptavidin-Agarose Beads(1709977)购自Invitrogen。HLY72，HLY103，Bio-72(biotin修饰的HLY72),Hybj-12a化学小分子来自中科院昆明植物所郝小江老师实验室。Digitoxin(HY-B1357)，Oleandrin(HY-13719)，Rostafuroxin(HY-12283)，Istaroxime(HY-15718A)和Hexamethonium Bromide(55-97-0)购至MCE公司。
1.2质谱
使用Calbiochem公司的ProteoExtract Native Membrane Extraction Kit获得小鼠全脑蛋白样品。具体的：取小鼠的整脑，迅速移去小脑等部分，只保留全部的大脑部分，按照试剂盒的说明书得到膜蛋白组分和非膜蛋白组分，分别用两种蛋白样品做IP。以膜组分为例，两份样品分别加入DMSO和150uM的HLY72，4度冷库中旋转混合30分钟后，每份样品都加入10uM的bio-72，4度冷库中旋转混合2小时。分别加入80uL处理后Streptavidin-Agarose Beads。4度冷库中旋转混合2小时后，用相应的IP buffer洗两次，之后用PBS洗3次。吸干PBS后零下80度保存做质谱分析。
1.3细胞培养和转染
HEK293T和Neuro-2a细胞在含10％胎牛血清的DMEM(Invitrogen)培养液中培养，37℃，CO2浓度为5％。细胞在转染前18-24小时分盘，10cm盘总的质粒转染量为10μg，转染ATP1A3，ATP1B1各2.5μg，质粒量不足时用LacZ补足到10μg。转染试剂为Lipo3000(Invitrogen)。转染后24-36小时时做相应的实验。
1.4细胞膜Na/K-ATPase样品制备
转染ATP1A3，ATP1B1的2盘10cm 293T细胞。转染后第二天刮取细胞到EP管中，0.3g离心3分钟，洗掉上清。在3ml的buffer(HEPES,10mM,pH7.4；EDTA,1mM；proteasomeinhibitors)中匀浆处理。6000g离心10分钟后转移上清到新的超速离心管中。100,000g离心1小时。用150μl的buffer(HEPES,10mM,pH7.4；Histidine,20mM；Glycerol,25％；proteasome inhibitors)重悬，冰上放置30分钟后-80度冻存备用。
1.5 Na/K-ATPase的酶活抑制实验
每个0.25ml的PCR管中加入20ul样品，接着加入DMSO,不同浓度的HLY72，HLY103和2.5uM的Digitoxin，冰上放置5分钟。再加入终浓度为2mM的ATP,最终反映体积为40ul。将PCR管放入PCR仪37度反应10分钟后，马上将所有样品冰上放置，并于3小时内检测反应产生的Pi。将40ul的反应液转移到96孔板，每孔加入200ul的Reagent(ATPase/GTPase ActivityAssay Kit)，室温反应20分钟。测量所有样品在620nm的吸收光值。Na/K-ATPase的酶特异活性定义为对Digitoxin敏感的ATP水解活性。
1.6 Western Blot
配制适当浓度的SDS-PAGE胶，加入蛋白样品电泳分离。电转胶中蛋白到NC(硝酸纤维素)膜，用0.5％的脱脂牛奶封闭1小时。TBST洗涤3次，每次5分钟，再加入相应的一抗4℃孵育过夜。回收抗体后，TBST洗涤3次，每次5分钟，加入相应HRP偶联的二抗，室温孵育1小时。洗涤三次后，加入显影液扫描。
1.7小鼠
所有动物实验被生化细胞所动物管理委员会批准。C57BL/6J小鼠购买自灵畅公司(正常小鼠和高脂饲料诱导肥胖小鼠)，用于诱导肥胖小鼠的高脂饲料(45％kcal，D12451)购买自Research Diets。从第六周开始，喂高脂饲料25周。其余小鼠用正常饲料(13.5％kcal)。小鼠饲养于生化细胞所SPF级别动物房，12小时关灯(19:00-07:00)，12小时开灯(07:00-19:00)。
1.8进食量，饮水和体重测定
小鼠在关灯前2小时内腹腔注射DMSO，HLY72，Digitoxin或Oleandrin(溶于DMSO)25μL。灌胃实验时，DMSO或小分子化合物溶于生理盐水，灌胃100μL的总体积，使DMSO的最终浓度小于1％。在息灯后的相应时间分别称量饲料的重量，计算出小鼠的进食量。相应的小鼠体重和饮水也在每天给药前相同的时间计量。
1.9代谢笼
在开始代谢笼实验前，小鼠先单笼饲养适应3天。单笼适应期后，在每天下午关灯前2小时内给小鼠注射DMSO25μL，使其适应注射3天。3天注射适应后的小鼠被放入代谢笼，每天在关灯前2小时内分别注射DMSO，HLY72和Digitoxin，连续3天。最终的分析数据时，第一天晚上和第四天白天的数据不被收录用来分析，连续收集两个白天(第二天白天，第三天白天)，两个夜晚(第二天夜晚，第三天夜晚)，分别各48小时的数据作为代谢笼最终展示的数据。
1.10小分子对小鼠脂解作用分析和溴化六甲铵的阻断实验
小鼠腹腔注射DMSO，HLY72(20mg/kg)，Digitoxin(150ug/kg)，Istaroxime(150ug/kg)，Rostafuroxin(150ug/kg)两天，每天17:00注射，第二天注射后五小时安乐死小鼠取白色脂肪组织做WB检测。溴化六甲铵阻断实验时，每天药物小分子注射后15分钟腹腔注射40mg/kg的溴化六甲铵，小分子和溴化六甲铵都是注射2次。
1.11小鼠白色脂肪总蛋白提取
小鼠安乐处死后，分离出附睾的白色脂肪组织，加入到2ml的组织匀浆管，含有1.5ml的RIPA裂解液(含多种抑制剂PI,Ppi,NaF)，匀浆后在4度旋转充分裂解1小时，13K离心10分钟后，取上清用BCA法定量后加入适量的loading buffer后做WB检测。
1.12 HLY72,Hybj-12a,Digitoxin,Istaroxime的体内组织分布和药代动力学
化合物配制：灌胃以5％DMSO/0.5％HPMC溶液配制，给予3mg/kg的剂量；静脉注射以DMSO/EtOH/PEG300/NaCl(5/5/40/50,v/v/v/v)溶液配制，给予1mg/kg的剂量。
实验设计：健康ICR小鼠，雄性，体重20-25g，实验前禁食12小时，自由饮水。给药后2小时统一进食。Hybj-12a的多组织分布实验用(Sprague-Dawley)大鼠，雌雄兼用，体重为220±10g。
具体实验及数据分析由中科院昆明植物所郝小江实验室协助中科院上海药物所及相关生物公司完成。
1.13数据统计分析
数据以平均值±标准误(means±s.e.m)的方式呈现。P值通过t检验(student′stest，两组数据比较)，one-way or two-way ANOVA(大于三组数据比较)计算出，显著性表示为*：P＜0.05，**：P＜0.01，***：P＜0.001。
实施例1 HLY72直接抑制Na/K-ATPase的酶活
因为食欲调控的中枢主要在大脑，而且发明人做了药物分布实验也发现HLY72的衍生物能通过血脑屏障到达脑部，所以在找HLY72的靶点时用脑组织的总蛋白。通过质谱的方法找HLY72的靶点蛋白Na/K-ATPase的α3亚基。首先，为了确定HLY72是否直接抑制Na/K-ATPase的活性，在293T细胞中过表达α3β1，分离收集细胞膜组分做体外ATP水解酶活性实验，发现HLY72可以剂量依赖性的抑制Na/K-ATPase的活性(图1)。而HLY72的相似物，没有抑制进食量和减肥活性的HLY103在同等浓度的情况下，其抑制Na/K-ATPase的活性远低于HLY72(图2)。
实施例2 Na/K-ATPase的抑制剂Digitoxin和Oleandrin降低小鼠进食量
如果HLY72作为Na/K-ATPase的抑制剂而发挥降低进食量和减肥的功能，那么，已知的Na/K-ATPase的抑制剂是否也有这样的功能呢？发明人用了Digitoxin和Oleandrin两种小分子，200μg/kg的剂量腹腔注射，发现它们都能非常明显的降低小鼠的进食量(图3)。这就说明了已知的Na/K-ATPase的抑制剂和HLY72一样，都能降低小鼠的进食量。
实施例3 Digitoxin和HLY72对小鼠的代谢有相同的影响
为了进一步的探究HLY72和已知的Na/K-ATPase的抑制剂的异同，发明人进行了代谢笼实验，比较这两类分子对小鼠代谢指标的影响。高脂饲料喂养25周的肥胖小鼠用于实验。结果显示HLY72处理组和Digitoxin处理组在夜间和白天的能量耗散(EE，EnergyExpenditure)显著的减少了(图4A)。呼吸交换率(RER，Respiratory Exchange Ratio)相比DMSO组，HLY72处理组和Digitoxin处理组在夜间和白天也都明显降低，说明了HLY72和Digitoxin处理小鼠都增加了以脂肪作为能量的能量利用方式(图4B)。物理活动(Activity)在夜间也是明显的比对照组有明显下降，白天HLY72组没有显著的降低而Digitoxin组有显著的下降(图4C)。而这三个代谢指标，HLY72组与Digitoxin组没有明显差异。综合这些代谢笼实验数据明确的说明了：HLY72和Digitoxin对于肥胖小鼠的代谢有着几乎一致的影响。
实施例4 Digitoxin和HLY72都减少小鼠的饮水量
前面发明人发现了HLY72有减少小鼠饮水量的作用，在代谢笼的实验中也检测了Digitoxin处理小鼠的饮水情况。统计了3组高脂小鼠的饮水量。累计统计这三天实验的实验数据，结果显示，与注射DMSO的对照组相比，Digitoxin组和HLY72组都能显著的减少小鼠的饮水量(图5)。这就再一次的说明了已知的Na/K-ATPase抑制剂与HLY72在对小鼠的饮水控制方面有着相同的作用效果。
实施例5 Na/K-ATPase的抑制剂Digitoxin和Oleandrin降低高脂喂养的肥胖小鼠的体重
接下来的实验连续3天灌胃给小鼠不同剂量的Digitoxin，观察到其对肥胖小鼠的减肥作用具有剂量依赖性，而且在25μg/kg的剂量时就能有显著的降低体重的效果(图6A)。同样的,连续的3天灌胃给小鼠100μg/kg的Oleandrin也有显著的降低体重的作用(图6B)。这就说明了Na/K-ATPase的抑制剂也有减肥的作用。
实施例6多种Na/K-ATPase抑制剂小分子对小鼠进食量的作用
前面发明人用了两种Na/K-ATPase的抑制剂小分子,Digitoxin和Oleandrin，发现它们能明显的降低小鼠的进食量。接下来用了另外的一种Na/K-ATPase的抑制剂Istaroxime和一种靶向Na/K-ATPase的小分子Rostafuroxin(Na/K-ATPase antognist),结果显示这两种分子都没有降低小鼠进食量的作用(图7)。因为进食的控制，大脑作为作重要的中枢，发明人猜测能否到达脑是Na/K-ATPase抑制剂有没有降低小鼠进食的重要原因。
实施例7 HLY72，Digitoxin和Istaroxime脑组织分布分析
小鼠体内分布实验时，小鼠给予灌胃3mg/kg的HLY72,3mg/kg的Digitoxin或3mg/kg的Istaroxime，结果显示HLY72和Digitoxin有明确脑分布，而Istaroxime几乎不能检测到脑分布(图8)。HLY72在脑中的分布0.5小时就能检测到而且是最大值，随着时间的推移很快的降低，在8小时时几乎降到没有。Digitoxin也在0.5小时就能明显的发现脑定位，但是随着时间的积累，Digitoxin在脑中的量是增加的。
实施例8 Hybj-12a在大鼠内各组织的分布分析
前面通过对HLY72的多个修饰衍生物的筛选，发现了Hybj-12的降低小鼠进食量的活性远强于HLY72(至少强10倍以上)。进一步详细的分析了Hybj-12a在大鼠全身多个器官的分布情况。通过灌胃口服给予大鼠3mg/kg的Hybj-12a后，Hybj-12a在不同组织分布表明，给药0.5h时，Hybj-12a在大鼠体内的肠、胃、肝中浓度较高，在各组织均能检出Hybj-12a，表明Hybj-12a在大鼠体内分布较快。而2h时，Hybj-12a在各组织的分布量均大幅增加，其中心、脾、肝、肠、肺、胃分布浓度较高，而肾、脑、肌中分布较低，表明该药物能迅速广泛分布于各组织器官中。Hybj-12a在8h于各组织的分布量明显降低(除肾外，可能由于在消除器官有较长时间的蓄积及消除过程)，表明Hybj-12a在大多数组织器官中，能够较好消除无明显蓄积现象(图9)。所以这些分布结果明确了HLY72系列分子的脑分布。
实施例9 HLY72和Na/K-ATPase的小分子抑制剂对脂肪分解的作用需要通过神经传导
Leptin被报道作用于脑通过交感神经系统控制白色脂肪(WAT,white adiposetissue)组织的脂肪分解，而且这个作用可以被外周交感神经传导阻断剂六甲铵(Hexamethonium,Hexam)阻断。发明人也尝试观察HLY72是否也有这种作用。结果显示HLY72也非常明显的促进白色脂肪分解，使磷酸化的HSL(p-HSL)显著升高。同leptin一样，用外周神经阻断药物六甲铵也能明显抑制HLY72对脂肪的分解作用(图10a,b)。这就进一步说明了，HLY72对脂解的作用通过作用于大脑。进一步的发现：有降低小鼠进食量作用，能通过血脑屏障到大脑的Na/K-ATPase的小分子抑制剂Digitoxin也能促进白色脂肪分解，使磷酸化的HSL(p-HSL)明显升高，而没有降低小鼠进食量作用，不能通过血脑屏障到大脑的Na/K-ATPase的小分子抑制剂Istaroxime则不能促进脂解(图10c,d)。这就表明：对白色脂肪的脂肪的分解作用是通过对脑而非对心脏等作用后再间接发生的效果，与此类分子的治疗心衰是不同的机制。同时，用外周神经阻断药物六甲铵也能显著的抑制Digitoxin对脂肪的分解作用(图10e,f)。这个结果和脑分布的结果一起表明了，HLY72系列分子和已知的Na/K-ATPase的小分子抑制剂的降低进食量和脂解作用需要通过脑。
实施例10 HLY72，Digitoxin和Istaroxime心脏分布比较分析
Digitoxin类药物是临床上用来治疗心衰的药物，主要通过作用于心脏，促进心肌收缩。在做脑分布的同时，比较了HLY72和Digitoxin,Istaroxime在心脏的分布情况。小鼠给予灌胃3mg/kg的HLY72,3mg/kg的Digitoxin,3mg/kg的Istaroxime，分别在0.5，1，2，4，8，24小时时检测心脏血和门静脉血中这三个分子的浓度。结果显示：(1)HLY72在心脏的浓度随时间推移迅速减少，(2)相对于门静脉血，HLY72在心脏的分布比例低，(3)相对于Digitoxin,在都注射3mg/kg的浓度，在脑分布量接近的情况下，不管是绝对数值还是相对数值，HLY72在心脏的分布都远远的低(图11)。这就意味着HLY72在作用脑的同时对心脏的影响可以忽略(相对于Digitoxin)。
实施例11 HLY72和Hybj-12a的药代动力学
最后我们对HLY72和Hybj-12a做了药代动力学分析。小鼠灌胃3mg/kg的HLY72或Hybj-12a和静脉注射1mg/kg的HLY72或Hybj-12a后的0.25，0.5，1，2，4，8，24小时取血液分析。实验结论：小鼠灌胃给予3mg/kg化合物HLY72后，血浆HLY72的浓度达峰时间Tmax为0.33h，半衰期T1/2为1.43h，在ICR小鼠体内的口服生物利用度为49.8％。小鼠灌胃给予3mg/kg化合物Hybj-12a后，血浆Hybj-12a的浓度达峰时间Tmax为2.17h，半衰期T1/2为2.59h，在ICR小鼠体内的口服生物利用度为104％(图12)。因此，药代动力学明确显示这两个小分子都能快速的吸收，很快的消退，无蓄积现象，与Digitoxin比有很明显的优越性。
结论
1 HLY72系列小分子是新的Na/K-ATPase的抑制剂
Na/K-ATPase的抑制剂分为两类：(1)强心甾类(cardiotonic steroids)，主要包括：乌本苷(Ouabain),夹竹桃甙(Oleandrin)，地高辛(Digoxin)，洋地黄毒苷(Digitoxin)，蟾蜍甾烯(bufadienolides)等。(2)非甾类Na/K-ATPase调节剂(Non-steroidal Na/K-ATPase modulators)。这些分子主要存在于植物和个别动物之中。而最近几十年发现，内源的强心甾类在哺乳动物(包括人)的血液，肾上腺，下丘脑中发现，意味着在正常生理条件下人也通过自身的强心甾类调控Na/K-ATPase，其中的复杂调控机制还会慢慢的被揭示。HLY72系列分子为本发明的新的Na/K-ATPase的抑制剂，结构与已知的抑制剂不同，本发明对其特点做了系列的研究。
2 Digitoxin和Oleandrin等Na/K-ATPase的抑制剂可以用来治疗肥胖及相关疾病
作为Na/K-ATPase的抑制剂，Digitoxin是用于治疗心衰的药物，而Oleandrin用于治疗癌症处于临床实验阶段。本发明发现小分子HLY72系列靶向Na/K-ATPase治疗肥胖过程中，用到了Digitoxin和Oleandrin等Na/K-ATPase的抑制剂，结果表明这些抑制剂也能用于治疗肥胖及相关疾病。而且本发明第一次发现了Na/K-ATPase的抑制剂Digitoxin有促进白色脂肪分解的作用。
3 Na/K-ATPase的抑制剂治疗心衰的新启示
本发明的数据表明Na/K-ATPase的抑制剂对进食量和脂解的作用是不一样的。
4 HLY72系列小分子药代性能优越
HLY72和Hybj-12a的药代数据表明：吸收快消除快，无体内蓄积现象，性能优越；而Digitoxin在体内消除慢，要几天才能消除。同时HLY72在心脏的分布比例相对于Digitoxin远远的低，这些特点有助于减少对心脏等的作用。
展望
肥胖现象在包括发达国家和发展中国家在内的全球范围内的增加不能直接归结于遗传因素，因为对于整个人群体的基因，在这短短几十年内时间是不会有太大的改动。非常容易地获得食物，而且是高能量可口的食物，以及生活状态的改变，比如长时间的坐着而少动等，以及环境的改变，可能是比遗传更为重要的原因。所以通过各种层面，不管是稳态机制面上还是非稳态能量调控层面，降低能量输入作为重要减肥策略是合乎逻辑的。统计过去60年中，25个退出市场的减肥药，其中23个作用于脑，有降低食欲的作用，主要作用于肾上腺受体，多巴胺受体，色胺受体，大麻素受体等。安全有效的调控肥胖问题和能量平衡是非常不容易的。但从另一个层面，这些失败的例子也反映了个问题：很多有效的减肥策略依然是通过减少能量的输入(降低进食量)，而且这些药物之所以有效主要是由于作用于中枢系统，因为控制中枢才能够更好地控制整个个体的状态，通过中枢改变整体和通过局部改变整体的效果是可想而知的。而HLY72系列小分子可以通过血脑屏障，并且HLY72的药代和分布性能在治疗肥胖方便比Digitoxin更优越。

Claims (10)

1.一种Na/K-ATP酶抑制剂的用途，其特征在于，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量。
在另一优选例中，所述组合物或制剂还用于选自下组的一种或多种用途：
(i)降低哺乳动物进食量；
(ii)减少哺乳动物的饮水量；
(iii)降低哺乳动物的体重；
(iv)治疗肥胖或其相关疾病；
(v)增强脂肪代谢。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述Na/K-ATP酶抑制剂选自下组：HLY72及其衍生物、强心甾类Na/K-ATP酶抑制剂、非甾类Na/K-ATP酶抑制剂、或其组合。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述Na/K-ATP酶抑制剂选自下组：HLY72及其衍生物、非甾类Na/K-ATP酶抑制剂、或其组合。
4.如权利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述HLY72及其衍生物的结构如式I所示：
Figure FDA0002061757620000011
式中，
各R0各自独立地选自下组：H、卤素、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C2-C8链烯基、取代或未取代的C2-C8链炔基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的-OC1-C8烷基、R3-C(O)-、R4-C(O)-O-CH2-、-O-R8、R5(R6)N-、取代或未取代的5-20元杂环基、-OH、和取代或未取代的苄基；其中，所述杂环基含有1-3个选自N、O、S的杂原子，并且所述取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：-OH、氧代(＝O)、-CN、硝基、羧基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、和-NRcRd；n为1、2、3或4，优选地1、2或3，更优选1或2；R8选自下组：H、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C2-C6烯基、取代或未取代的C2-C6炔基、和取代或未取代的C3-C6环烷基；并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：-OH、-CN、硝基、羧基、卤素、C1-C3烷基和C1-C3卤代烷基；R1选自下组：H、取代或未取代的C1-C30烷基、取代或未取代的C2-C20链烯基、取代或未取代的C2-C20链炔基、取代或未取代的C1-C20烷氧基、取代或未取代的C3-C8环烷基、-OH、取代或未取代的-(CH2)m-C6-C12芳基或C4-C10杂芳基、和取代或未取代的苄基；所述杂芳基含有1-3个选自N、O、S的杂原子，并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：卤素、-OH、氧代(＝O)、-CN、-NRcRd、和硝基；
各R2各自独立地选自下组：-O-R7，其中R7选自下组：H、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C2-C8链烯基、取代或未取代的C2-C8链炔基、-(CH2)m-取代或未取代的C6-C12芳基或C4-C10杂芳基或取代未取代的C2-C6链炔基和取代或未取代的C3-C8环烷基；所述杂芳基含有1-3个选自N、O、S的杂原子，并且所述的取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：C1-C8烷氧基、C1-C8烷基、卤素、-OH、氧代(＝O)、-CN、-NRcRd、和硝基；m为0-6的正整数，优选1、2、3或4；
R9选自下组：H、＝X、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C2-C6链烯基、取代或未取代的C2-C6链炔基、卤素、取代或未取代的C1-C3烷氧基和取代或未取代的C3-C6环烷基，所述取代指基团中的H被选自下组的一个或多个取代基取代：-OH、氧代(＝O)、-CN、硝基、羧基、卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基、和-NRcRd；X为O或S；
q为0、1、2、3或4；
R3和R4各自独立地选自下组：H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、卤素、-OH、-CN、-NRcRd、硝基、或其组合；
R5和R6各自独立地选自下组：H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环烷基、-OH、-CN；或者R5和R6与相邻的N一起构成4-8元的含氮杂环；
或者，各R2可以和相连的C原子共同形成含有至少一个氧原子的、取代或未取代的5-20元杂环基，并且所述5-20元杂环基含有1-3个选自N、O、S的杂原子，其中所述取代为具有一个或多个选自下组的取代基：C1-C8烷氧基、C1-C8烷基、卤素、-OH、-CN、-NRcRd、和硝基；
Rc、Rd各自独立地为H、C1-C3烷基、或C3-C6环烷基。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述HLY72及其衍生物选自下组：
Figure FDA0002061757620000021
Figure FDA0002061757620000031
6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述Na/K-ATP酶抑制剂包括α3特异性抑制剂。
7.一种药物组合物，其特征在于，包括：
(a1)用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的第一活性成分，所述第一活性成分为Na/K-ATP酶抑制剂；和
(a2)用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的第二活性成分，所述第二活性成分为其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物；和
(b)药学上可接受的载体。
8.一种药盒，其特征在于，所述药盒含有：
(i)第一容器，以及装于该第一容器中的活性成分(a1)Na/K-ATP酶抑制剂，或含有活性成分(a1)的药物；
(ii)第二容器，以及装于该第二容器中的活性成分(a2)其他的用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的药物，或含有活性成分(a2)的药物。
9.一种体外非治疗性的(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的方法，其特征在于，包括：
(i)给需要的对象施用Na/K-ATP酶抑制剂、权利要求7所述的药物组合物、或权利要求8所述的药盒。
10.一种筛选用于(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的候选药物的方法，其特征在于，包括步骤：
(a)在测试组中，在测试化合物及在表达Na/K-ATP酶的细胞的存在下，检测测试组中的Na/K-ATP酶的活性A1；
并且在不存在所述测试化合物且其他条件相同的对照组中，检测对照组中Na/K-ATP酶的活性A2；
(b)对A1和A2进行比较，如果A1显著低于A2，则表示所述测试化合物是(a)促进脂肪分解；和/或(b)降低脂肪含量的候选药物。
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