CN112912143A - 小分子mdm2蛋白降解剂 - Google Patents

Abstract

本披露提供了由式(I)表示的化合物：其中R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R⁴、A、L、X、Y和Z如说明书中阐述的所定义。本披露还提供了具有式(I)的化合物，用于治疗对MDM2蛋白的降解有反应的癌症或任何其他疾病、病症或障碍。

Description

小分子MDM2蛋白降解剂

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年10月8日提交的美国临时专利申请号62/742,627的权益，将其通过引用以其全文并入本文。

政府利益的声明

本发明是在由美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)授予的CA219345下由政府支持进行的。政府拥有本发明的某些权利。

发明背景

技术领域

本披露提供了MDM2蛋白降解剂、和治疗其中MDM2的降解提供益处的病症和疾病的治疗方法。

背景技术

p53肿瘤抑制因子是响应于多种细胞损伤的生长停滞、衰老和凋亡的主要介质。由不同应激类型快速诱导的高p53蛋白水平可防止携带潜在诱变且受损的DNA的细胞出现不适当繁殖。p53可经由在细胞核和线粒体中的双重转录依赖性和非依赖性功能来杀死细胞。已经证明了细胞p53蛋白水平是其功能的最重要的决定因素。在正常的非应激细胞中，p53是非常不稳定的蛋白质，半衰期为5至30分钟，并且由于主要由MDM2介导的持续降解而以非常低的细胞水平存在。相反地，许多细胞应激途径(例如DNA损伤、缺氧、端粒缩短和致癌基因激活)的标志是经由阻止p53降解而使其快速稳定。通过限制p53肿瘤抑制因子功能，MDM2已成为p53的主要细胞拮抗剂。Moll和Petrenko,Molecular Cancer Research[分子癌症研究]1:1001-1008(2003)。

p53使MDM2转录激活，而MDM2通过至少三种机制抑制p53活性。Wu等人,Genes Dev.[基因与发育]7:1126(1993)。第一，MDM2蛋白直接与p53反式激活结构域结合，从而抑制p53介导的反式激活。第二，MDM2蛋白含有核输出信号序列，并且与p53结合后诱导p53的核输出，从而阻止p53与靶DNA结合。第三，MDM2蛋白是E3泛素连接酶，并且与p53结合后能够促进p53降解。

靶向p53-MDM2相互作用的小分子抑制剂具有用于治疗癌症和其他疾病的治疗潜力。Chene,Nat.Rev.Cancer[自然综述：癌症]3:102(2003)和Vassilev等人,Science[科学]303:844(2004)。p53-MDM2相互作用的拮抗剂描述于：美国专利号7,759,383、7,737,174、8,518,984、8,680,132、8,629,141、6,617,346、6,734,302、7,132,421、7,425,638、7,579,368、7,060,713、7,553,833、6,916,833、7,495,007、7,638,548、7,576,082、7,625,895、和7,083,983；以及美国专利申请公开号2005/0288287、2009/0143364、2009/0312310、2006/0211718、2010/0048593、

2005/0227932、2008/0261917、2009/0227542、2008/0171723、2006/0211757、2005/0137137、2002/0132977、和2009/0030181。

基于邻苯二甲酰亚胺的药物(例如沙利度胺或来那度胺)与蛋白质降解机制例如cereblon(CRBN；泛素E3连接酶复合物的一部分)结合。这可能会促进对疾病进展必不可少的两个转录因子(IKZF1和IKZF3)的募集，从而导致药物诱导的泛素化和被蛋白酶体降解。参见例如Ito等人,Science[科学]327:1345-1350(2010)和Winter等人,Science[科学]348:1376-1381(2015)。

高亲和力的VHL配体(参见Bondeson等人,Nat.Chem.Biol.[自然化学生物学]11:611-617(2015))可能将靶蛋白募集到E3泛素连接酶上，从而导致药物诱导的泛素化和降解。参见例如van Hagen等人,Nucleic Acids Research[核酸研究]38:1922-1931(2010)；Buckley等人,J.Am.Chem.Soc.[美国化学会志]134:4465-4468(2012)；Buckley等人,Angew,Chem.Int.Ed.Engl.[应用化学英文国际版]51:11463-11467(2012)；Lipkowitz和Weissman,Nat Rev Cancer[癌症自然评论]11:629-643(2011)；和Zengerle等人,ACSChem.Biol.[ACS化学生物杂志]10:1770-1777(2015)。

持续需要新的药剂(例如小分子)用于治疗对MDM2-p53相互作用的破坏或防止有反应的癌症和其他疾病。

发明内容

在一方面，本披露提供了由以下式I或式II表示的异双功能化合物、和其药学上可接受的盐和溶剂化物，统称为“本披露的化合物”。本披露的化合物是MDM2蛋白降解剂，并因此可用于治疗其中MDM2的抑制和/或降解提供益处的疾病或病症。

在另一方面，本披露提供了通过向有需要的受试者(例如人)施用治疗有效量的本披露的化合物来治疗病症或疾病的方法。可通过降解MDM2蛋白来治疗目的疾病或病症，例如，癌症、慢性自身免疫性障碍、炎性病症、增生性障碍、脓毒症或病毒感染。还提供了在受试者中防止(例如在癌症中的)不希望的增殖细胞的增殖的方法，该方法包括向有风险发展为以不希望的增殖细胞为特征的病症的受试者施用治疗有效量的本披露的化合物。在一些实施例中，本披露的化合物通过诱导不希望的细胞的凋亡来减少这些细胞的增殖。

在另一方面，本披露提供了一种在受试者中降解MDM2蛋白的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的至少一种本披露的化合物。

在另一个实施例中，本披露提供了一种减少有需要的受试者(例如人患者)的细胞内的MDM2蛋白的方法，该方法包括向该受试者施用本披露的化合物。

在另一方面，本披露提供了一种包含本披露的化合物和赋形剂和/或药学上可接受的载体的药物组合物。

在另一方面，本披露提供了一种包含本披露的化合物和赋形剂和/或药学上可接受的载体的组合物，用于治疗其中MDM2蛋白的降解提供益处的疾病或病症，例如癌症。

在另一方面，本披露提供了一种组合物，该组合物包含：(a)本披露的化合物；(b)第二治疗活性剂；和(c)任选地赋形剂和/或药学上可接受的载体。

在另一方面，本披露提供了本披露的化合物，用于在治疗目的疾病或病症(例如癌症)中使用。

在另一方面，本披露提供了本披露的化合物用于制造治疗目的疾病或病症(例如癌症)的药物的用途。

在另一方面，本披露提供了一种试剂盒，该试剂盒包含本披露的化合物、和任选地包含可用于治疗目的疾病或病症的第二治疗剂的包装组合物、以及含有治疗疾病或病症(例如癌症)的使用说明的包装插入物。

在另一方面，本披露提供了一种治疗患有血液癌症的受试者的方法，该方法包括：

(a)确定取自该受试者的生物样品中是否存在MDM2的过表达；和

(b)如果该生物样品中存在MDM2的过表达，则向该受试者施用治疗有效量的本披露的化合物中的化合物。

本披露的另外的实施例和优点将在以下的描述中予以部分阐述，并且将从描述中得出，或者可以通过本披露的实践来了解。本披露的这些实施例和优点将借助于所附权利要求中特别指出的元件以及组合来实现和获得。

应理解的是，前面的概述和下面的详述两者都只是示例性和说明性的，并且不限制如所要求的本发明。

附图说明

图1是显示化合物4和化合物6在SCID小鼠的LNCaP前列腺癌异种移植模型中的体内抗肿瘤活性的线形图。每周一次以50mg/kg I.V.施用药物，持续5周。每组有七只小鼠，每只小鼠带有一种肿瘤。

图2是显示化合物4和化合物6在SCID小鼠的22rv1前列腺癌异种移植模型中的体内抗肿瘤活性的线形图。每周一次以50mg/kg I.V.施用药物，持续3周。每组有七只小鼠，并且每只小鼠带有一种肿瘤。

图3是显示化合物4和化合物6在SCID小鼠的RS4；11ALL癌异种移植模型中的体内抗肿瘤活性的线形图。每周三次以25mg/kg I.V.施用药物，持续2周；或每周五次以50mg/kg经口服管饲施用药物，持续2周。每组有五只小鼠，每只小鼠带有一种肿瘤。

图4是显示化合物6在NOD-SCID小鼠的RS4；11骨髓移植模型中的体内抗肿瘤活性的卡普兰-迈耶(Kaplan-Meier)存活图。以指示的途径和时间表施用药物。每组有9-10只小鼠。使用曼特尔-考克斯(Mantel-Cox)对数秩检验确定P值。

图5是显示化合物4和化合物6在NOD-SCID小鼠的RS4；11骨髓移植模型中的体内抗肿瘤活性的卡普兰-迈耶(Kaplan-Meier)存活图。以指示的途径和时间表施用药物。每组有9或10只小鼠。使用曼特尔-考克斯(Mantel-Cox)对数秩检验确定P值。

图6是免疫印迹的图示，其显示用化合物B、化合物C、化合物4和化合物6治疗2小时后，RS4；11细胞中的MDM2、p53和GAPDH蛋白水平。

图7是免疫印迹的图示，其显示用化合物A、化合物4和化合物D治疗两小时后，22RV1细胞中的MDM2、p53和GAPDH蛋白水平。

具体实施方式

I.本披露的化合物

本披露的化合物是促进MDM2降解的异双功能化合物。在一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物：

其中：

R^1a和R^1b独立地选自由以下组成的组：氢、氟和氯；

R^2a和R^2b独立地选自由以下组成的组：氢、氟和氯；

R^3a是-CH₂C(CH₃)₃；

R^3b是氢；或

R^3a和R^3b与它们所附接的碳原子一起形成未经取代的或被一个或两个甲基基团取代的环丁基、环戊基或环己基基团；

R⁴选自由以下组成的组：氢、甲基和乙基；

X选自由以下组成的组：

其中向右边伸出的键附接至-C(＝O)-Y-L-Z-A；

每个R⁵独立地选自由以下组成的组：氢和甲基；

R⁶选自由以下组成的组：氢、氟、氯、甲基和甲氧基；

Y选自由以下组成的组：

-N(H)-、

其中向右边伸出的键附接至-L-Z-A；

R⁷选自由以下组成的组：氢、羟基和甲基；

L选自由以下组成的组：-(CH₂)_m-和-(CH₂CH₂O)_n-

m是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；

n是2、3、4、5或6；

Z选自由以下组成的组：-C≡C-、-NH-、-O-、和

或

Z不存在；

A选自由以下组成的组：

或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中R^3a是-CH₂C(CH₃)₃并且R^3b是氢，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中R^3a和R^3b与它们所附接的碳原子一起形成未经取代的环己基基团，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中R^3a和R^3b与它们所附接的碳原子一起形成未经取代的环己基基团，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中R^3a和R^3b与它们所附接的碳原子一起形成未经取代的环丁基基团，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中R^3a和R^3b与它们所附接的碳原子一起形成3,3-二甲基环丁基基团，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中R^3a和R^3b与它们所附接的碳原子一起形成未经取代的环戊基基团，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中R^3a和R^3b与它们所附接的碳原子一起形成被一个或两个甲基基团取代的环己基基团，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中R^3a和R^3b与它们所附接的碳原子一起形成4,4-二甲基环己基基团，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中Y是-N(H)-，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中Y是Y-2，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在另一个实施例中，R⁷是氢。在另一个实施例中，R⁷是甲基。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中Y是Y-3，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中L是-(CH₂)_m-，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在另一个实施例中，m是0、1、2或3。在另一个实施例中，m是0。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中L是-(CH₂CH₂O)_n-，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中Z是-C≡C-，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中Z是

或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中Z是-NH-，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中Z是-O-，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中Z不存在，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中A是A-1，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中A是A-2，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中A是A-3，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中A是A-4，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I表示的化合物，其中A是A-5，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式II表示的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中R^2a、R^2b、R⁴和X如与式I相关所定义。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中R^2a选自由氟和氯组成的组，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中R^2b选自由氟和氯组成的组，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中R⁴是氢。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中R⁴是甲基。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中X是X-1，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中X是X-2，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中X是X-3，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中X是X-4，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中X是X-5，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中X是X-6，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中X是X-7，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中X是X-8，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中X是X-9，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中X是X-10，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中X是X-11，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中R⁵是氢，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是由式I或II表示的化合物，其中R⁵是甲基，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是表1的化合物中的任一种或多种、以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。

在另一个实施例中，本披露的化合物是表1A的化合物中的任一种或两种、以及其药学上可接受的盐和溶剂化物。

表1B提供了由

专业版17.0.0.206产生的表1和表1A的化合物的化学名称。如果它们的化学结构和化学名称之间有任何歧义，则本披露的化合物由其化学结构定义。

表1

表1A

表1B

在另一个实施例中，本披露提供了一种包含本披露的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。

本披露的化合物是异双功能分子。在一个实施例中，分子的螺-羟吲哚部分，即

是对映异构体富集的，例如，如通过手性HPLC测量的，异双功能化合物的这部分的对映异构体过量或“ee”为约5％或更多。在另一个实施例中，ee为约10％。在另一个实施例中，ee为约20％。在另一个实施例中，ee为约30％。在另一个实施例中，ee为约40％。在另一个实施例中，ee为约50％。在另一个实施例中，ee为约60％。在另一个实施例中，ee为约70％。在另一个实施例中，ee为约80％。在另一个实施例中，ee为约85％。在另一个实施例中，ee为约90％。在另一个实施例中，ee为约91％。在另一个实施例中，ee为约92％。在另一个实施例中，ee为约93％。在另一个实施例中，ee为约94％。在另一个实施例中，ee为约95％。在另一个实施例中，ee为约96％。在另一个实施例中，ee为约97％。在另一个实施例中，ee为约98％。在另一个实施例中，ee为约99％。

在另一个实施例中，分子的cereblon结合部分，即-A，是对映异构体富集的。在另一个实施例中，分子的cereblon结合部分是外消旋的。本披露涵盖本披露的化合物的所有可能的立体异构(例如，非对映异构)形式。例如，当分子的螺-羟吲哚部分是对映异构体富集的并且分子的cereblon结合部分是外消旋的时，本披露的化合物的所有可能的立体异构体涵盖在内。

本披露涵盖本披露的化合物的盐的制备和用途。如本文所用，药物的“药学上可接受的盐”是指本披露的化合物的盐或两性离子形式。本披露的化合物的盐可以在化合物的最后分离和纯化期间制备，或者通过使化合物与合适的酸反应而分开地制备。本披露的化合物的药学上可接受的盐可以是与药学上可接受的酸形成的酸加成盐。可用于形成药学上可接受的盐的酸的实例包括无机酸例如硝酸、硼酸、盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，以及有机酸例如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。本披露的化合物的盐的非限制性实例包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、2-羟基乙磺酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、抗坏血酸盐、羟乙基磺酸盐、水杨酸盐、甲磺酸盐、均三甲苯磺酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、葡萄糖酸盐、甲磺酸盐、乙烷二磺酸盐(乙二磺酸盐)、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和萘-1,5-二磺酸盐。另外，存在于本披露的化合物中的可用氨基基团可以被以下项季铵化：甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸盐；癸基、月桂基、肉豆蔻基和甾基的氯化物、溴化物和碘化物；以及苄基和苯乙基的溴化物。鉴于上述，本文中出现的任何参考的本披露的化合物旨在包括本披露的化合物中的化合物及其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。

在一个实施例中，本披露的化合物的盐从以下酸中的任一种制备：HCl、H₂SO₄、对甲苯磺酸、甲磺酸、苯磺酸、L-天冬氨酸、马来酸、H₃PO₄、L-谷氨酸、丙二酸、L-酒石酸、富马酸、柠檬酸、乳糖酸、乙醇酸、L-苹果酸、葡萄糖酸、DL-乳酸、琥珀酸或乙酸。

在另一个实施例中，本披露的化合物的盐从以下酸中的任一种制备：氢溴酸、二氯乙酸、樟脑磺酸、乙烷-1,2-二磺酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸或草酸。在另一个实施例中，本披露的化合物的盐从乙烷-1,2-二磺酸或萘-1,5-二磺酸制备。

在另一个实施例中，本披露的化合物选自由以下组成的组：

(1)(3'R,4'S,5'R)-6"-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-N-((1r,4R)-4-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)乙炔基)哌啶-1-羰基)环己基)-2"-氧代二螺[环己烷-1,2'-吡咯烷-3',3"-吲哚啉]-5'-甲酰胺的乙烷-1,2-二磺酸盐；

(2)(3'R,4'S,5'R)-6"-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-N-(4-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)乙炔基)哌啶-1-羰基)双环[2.2.2]辛-1-基)-2"-氧代二螺[环己烷-1,2'-吡咯烷-3',3"-吲哚啉]-5'-甲酰胺的乙烷-1,2-二磺酸盐；

(3)(3'R,4'S,5'R)-6"-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-N-((1r,4R)-4-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)乙炔基)哌啶-1-羰基)环己基)-2"-氧代二螺[环己烷-1,2'-吡咯烷-3',3"-吲哚啉]-5'-甲酰胺的萘-1,5-二磺酸盐；和

(4)(3'R,4'S,5'R)-6"-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-N-(4-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)乙炔基)哌啶-1-羰基)双环[2.2.2]辛-1-基)-2"-氧代二螺[环己烷-1,2'-吡咯烷-3',3"-吲哚啉]-5'-甲酰胺的萘-1,5-二磺酸盐。

本披露涵盖本披露的化合物的溶剂化物的制备和用途。典型地，溶剂化物不会显著改变化合物的生理活性或毒性，因此可充当药理等效物。如本文所用，术语“溶剂化物”是本披露的化合物与溶剂分子(例如像二溶剂化物、单溶剂化物或半溶剂化物)的组合、物理缔合和/或溶剂化，其中溶剂分子与本披露的化合物的比分别为约2:1、约1:1或约1:2。这种物理缔合涉及不同程度的离子和共价键合，包括氢键键合。在某些情况下，溶剂化物可以分离，例如当将一种或多种溶剂分子掺入结晶固体的晶格中时。因此，“溶剂化物”涵盖溶液相溶剂化物和可分离的溶剂化物两者。本披露的化合物可以与药学上可接受的溶剂(例如，水、甲醇和乙醇)一起以溶剂化形式存在，并且旨在本披露包括本披露的化合物的溶剂化形式和非溶剂化形式两者。一种类型的溶剂化物是水合物。“水合物”涉及溶剂化物的特定亚组，其中溶剂分子是水。典型地，溶剂化物可以充当药理等效物。溶剂合物的制备是本领域已知的。参见例如，M.Caira等人,J.Pharmaceut.Sci.[药物科学杂志],93(3):601-611(2004)，其描述了氟康唑与乙酸乙酯和水制备溶剂合物。E.C.van Tonder等人,AAPSPharm.Sci.Tech.[美国药学科学家协会年会],5(1):Article[文章]12(2004)和A.L.Bingham等人,Chem.Commun.[化学通讯]603-604(2001)描述了溶剂化物、半溶剂化物，水合物等的类似制备。制备溶剂化物的典型且非限制性的方法涉及例如在高于20℃的温度下将本披露的化合物溶解在所希望的溶剂(有机、水或其混合物)中，然后以足以形成晶体的速度将溶液冷却，并通过已知方法(例如过滤)分离晶体。可以使用例如红外光谱的分析技术来确认溶剂化物的晶体中溶剂的存在。

II.本披露的治疗方法

本披露的化合物降解MDM2蛋白，并且可用于治疗多种疾病和病症。特别地，本披露的化合物可用于治疗其中降解MDM2蛋白提供益处的疾病或病症(例如癌症和增殖性疾病)的方法。本披露的治疗方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的本披露的化合物。本发明的方法还涵盖向个体除了施用本披露的化合物外，还施用第二治疗剂。第二治疗剂选自已知可用于治疗折磨有需要的个体的疾病或病症的药物，例如已知可用于治疗特定癌症的化学治疗剂和/或放射物。

本披露提供了本披露的化合物作为MDM2蛋白降解剂用于治疗其中MDM2蛋白的降解具有有益影响的多种疾病和病症。典型地，本披露的化合物对MDM2的结合亲和力(IC₅₀)小于100μM，例如小于50μM，小于25μM、以及小于5μM、小于约1μM、小于约0.5μM或小于约0.1μM。在一个实施例中，本披露涉及一种治疗患有其中MDM2蛋白的降解提供益处的疾病或病症的个体的方法，该方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的本披露的化合物。

由于本披露的化合物是MDM2蛋白的降解剂，可以通过使用这些化合物来治疗许多由MDM2介导的疾病和病症。因此，本披露总体上涉及一种用于在患有或有风险患上对MDM2的降解有反应的病症或障碍的动物(例如人)中治疗该病症或障碍的方法，该方法包括向该动物施用有效量的一种或多种本披露的化合物。

本披露进一步涉及一种在有需要的动物中降解MDM2蛋白的方法，所述方法包括向该动物施用有效量的至少一种本披露的化合物。

本披露的方法可以通过施用本披露的化合物(作为纯净的化合物或药物组合物)来实现。可以在目的疾病或病症发作期间或之后施用本披露的化合物的药物组合物或纯净的化合物。典型地，药物组合物是无菌的，并且不含在施用时会引起不良反应的有毒、致癌或诱变的化合物。进一步提供了试剂盒，这些试剂盒包含本披露的化合物和任选地可用于治疗其中MDM2蛋白的降解提供益处的疾病和病症的第二治疗剂(分开包装或一起包装)、以及具有使用这些活性剂的说明书的插入物。

在一个实施例中，本披露的化合物与可用于治疗其中MDM2蛋白的降解提供益处的疾病或病症的第二治疗剂联合施用。第二治疗剂不同于本披露的化合物。本披露的化合物和第二治疗剂可以同时地或顺序地施用，以达到所希望的效果。另外，本披露的化合物和第二治疗剂可以从单一组合物或两种分开的组合物施用。

将第二治疗剂以提供其所希望的治疗效果的量施用。每种第二治疗剂的有效剂量范围是本领域已知的，并且在此类既定范围内向有需要的个体施用第二治疗剂。

本披露的化合物和第二治疗剂能以单一单位剂量一起施用或以多单位剂量分开施用，其中本披露的化合物在第二治疗剂之前施用，或反之亦然。可以施用一种或多种剂量的本披露的化合物和/或一种或多种剂量的第二治疗剂。因此，本披露的化合物可以与一种或多种第二治疗剂(例如但不限于抗癌剂)联合使用。

可由本披露的方法治疗的疾病和病症包括但不限于癌症和其他增生性障碍、炎性疾病、脓毒症、自身免疫性疾病和病毒感染。在一个实施例中，用本披露的化合物或包含本披露的化合物的药物组合物治疗人患者，其中以足以降解该患者的MDM2蛋白的量施用该化合物。

在另一方面，本披露提供了一种治疗受试者的癌症的方法，该方法包括施用治疗有效量的本披露的化合物。虽然不限于特异性机制，但是在一些实施例中，本披露的化合物通过降解MDM2蛋白治疗癌症。可治疗的癌症的实例包括但不限于表2中所列的癌症。

表2

在另一个实施例中，癌症是实体瘤。在另一个实施例中，癌症是血液癌症。示例性血液癌症包括但不限于表3中所列的癌症。在另一个实施例中，血液癌症是急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病(包括B细胞慢性淋巴细胞白血病)或急性骨髓性白血病。

表3

急性淋巴细胞白血病(ALL)	急性嗜酸性粒细胞白血病
		急性骨髓性白血病(AML)	急性红系白血病
慢性淋巴细胞白血病(CLL)	急性淋巴母细胞白血病
		小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)	急性巨核母细胞白血病
多发性骨髓瘤(MM)	急性单核细胞白血病
		霍奇金淋巴瘤(HL)	急性早幼粒细胞白血病
非霍奇金淋巴瘤(NHL)	急性髓性白血病
		套细胞淋巴瘤(MCL)	B细胞幼淋巴细胞白血病
边缘区B细胞淋巴瘤	B细胞淋巴瘤
		脾脏边缘区淋巴瘤	MALT淋巴瘤
滤泡性淋巴瘤(FL)	前体T淋巴母细胞淋巴瘤
		瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM)	T细胞淋巴瘤
弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)	肥大细胞白血病
		边缘区淋巴瘤(MZL)	成人T细胞白血病/淋巴瘤
毛细胞白血病(HCL)	侵袭性NK细胞白血病
		伯基特淋巴瘤(BL)	血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤
里克特转化型(Richter's transformation)

在本披露的方法中，向有需要的人类施用治疗有效量的典型地根据制药学实践配制的本披露的化合物。是否需要进行这种治疗取决于个体病例并且要接受医学评估(诊断)，要考虑到出现的体征、症状和/或功能障碍，发展特定体征、症状和/或功能障碍的风险，以及其他因素。

本披露的化合物可以通过任何合适的途径施用，例如通过口、颊、吸入、舌下、直肠、阴道、脑池内或经腰椎穿刺的鞘内、尿道、鼻、经皮(即经皮肤)、或肠胃外(包括静脉内、肌肉内、皮下、冠状动脉内、皮内、乳房内、腹膜内、关节内、鞘内、眼球后、肺内注射、和/或在特定部位手术植入)施用。肠胃外施用可以使用针头和注射器或使用高压技术来完成。

药物组合物包括其中以有效量施用本披露的化合物以实现其预期目的的药物组合物。确切的配方、施用途径和剂量由个体医师根据诊断的病症或疾病来确定。剂量和间隔可以单独调整以提供足以维持治疗效果的本披露的化合物的水平。

可以通过细胞培养物或实验动物的标准制药程序来确定本披露的化合物的毒性和治疗功效，例如用于确定化合物的最大耐受剂量(MTD)，该最大耐受剂量定义为在动物中不引起毒性的最高剂量。最大耐受剂量和治疗效果(例如抑制肿瘤生长)之间的剂量比是治疗指数。剂量可根据所采用的剂型和所使用的施用途径在该范围内变化。尤其根据本文所提供的详细披露，治疗有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内。

治疗所需的本披露的化合物的治疗有效量随着所治疗病症的性质、所希望的活性的时间长度、以及患者的年龄和病症而变化，并最终由主治医师来确定。可以单独调整剂量和间隔，以提供足以维持所希望的治疗效果的MDM2蛋白降解剂的血浆水平。所希望的剂量可以方便地以单个剂量施用，或以适当的间隔以多个剂量施用，例如每天施用一、二、三、四或更多个亚剂量。通常希望或需要多个剂量。例如，本披露的化合物可以按以下频率施用：四个剂量，递送为每天一个剂量，间隔四天(q4d x 4)；四个剂量，递送为每天一个剂量，间隔三天(q3d x 4)；每天递送一个剂量，间隔五天(qd x 5)；每周一个剂量，持续三周(qwk3)；每天五个剂量，休息两天，再每天五个剂量(5/2/5)；或者，确定适合该情况的任何剂量方案。

在本披露的方法中使用的本披露的化合物能以约0.005至约500毫克/剂量、约0.05至约250毫克/剂量、或约0.5至约100毫克/剂量的量施用。例如，本披露的化合物能以每剂量约0.005、0.05、0.5、5、10、20、30、40、50、100、150、200、250、300、350、400、450或500毫克(包括0.005至500毫克之间的所有剂量)的量施用。

含有本披露的化合物的组合物或含有其的组合物的剂量可以是从约1ng/kg至约200mg/kg、约1μg/kg至约100mg/kg或约1mg/kg至约50mg/kg。组合物的剂量可以是任何剂量，包括但不限于约1μg/kg。组合物的剂量可以是任何剂量，包括但不限于约1μg/kg、约10μg/kg、约25μg/kg、约50μg/kg、约75μg/kg、约100μg/kg、约125μg/kg、约150μg/kg、约175μg/kg、约200μg/kg、约225μg/kg、约250μg/kg、约275μg/kg、约300μg/kg、约325μg/kg、约350μg/kg、约375μg/kg、约400μg/kg、约425μg/kg、约450μg/kg、约475μg/kg、约500μg/kg、约525μg/kg、约550μg/kg、约575μg/kg、约600μg/kg、约625μg/kg、约650μg/kg、约675μg/kg、约700μg/kg、约725μg/kg、约750μg/kg、约775μg/kg、约800μg/kg、约825μg/kg、约850μg/kg、约875μg/kg、约900μg/kg、约925μg/kg、约950μg/kg、约975μg/kg、约1mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约60mg/kg、约70mg/kg、约80mg/kg、约90mg/kg、约100mg/kg、约125mg/kg、约150mg/kg、约175mg/kg、约200mg/kg、或更多。上述剂量是一般情况的示例，但是可以存在其中需要更高或更低剂量的个别案例，并且这些在本披露的范围内。在实践中，医师确定最适合个体患者的实际给药方案，该给药方案随特定患者的年龄、体重和反应而变化。

本披露的化合物可以与第二治疗活性剂组合施用。在一些实施例中，第二治疗剂是表观遗传药物。如本文所用，术语“表观遗传药物”是指靶向表观遗传调节剂的治疗剂。表观遗传调节剂的实例包括组蛋白赖氨酸甲基转移酶、组蛋白精氨酸甲基转移酶、组蛋白脱甲基酶、组蛋白脱乙酰基酶、组蛋白乙酰化酶和DNA甲基转移酶。组蛋白脱乙酰基酶抑制剂包括但不限于伏立诺他(vorinostat)。

在另一个实施例中，化学治疗剂或其他抗增殖剂可以与本披露的化合物组合以治疗增殖性疾病和癌症。可以与本披露的化合物组合使用的疗法和抗癌药剂的实例包括手术、放射疗法(例如，γ射线、中子束放射疗法、电子束放射疗法、质子疗法、近距放射治疗和全身放射性同位素)、内分泌疗法、生物应答调节剂(例如干扰素、白介素、肿瘤坏死因子(TNF))、热疗和冷冻疗法、减轻任何不良作用的药剂(例如止吐剂)和任何其他批准的化学治疗药物。

抗增殖化合物的实例包括但不限于：芳香化酶抑制剂；抗雌激素；抗雄激素；戈那瑞林激动剂；拓扑异构酶I抑制剂；拓扑异构酶II抑制剂；微管活性剂；烷基化剂；类维生素A、类胡萝卜素或生育酚；环氧合酶抑制剂；MMP抑制剂；mTOR抑制剂；抗代谢剂；铂化合物；甲硫氨酸氨基肽酶抑制剂；双膦酸盐；抗增殖抗体；类肝素酶(heparanase)抑制剂；Ras致癌异形体(oncogenic isoform)的抑制剂；端粒酶抑制剂；蛋白酶体抑制剂；用于治疗恶性血液病的化合物；Flt-3抑制剂；Hsp90抑制剂；驱动蛋白纺锤体蛋白抑制剂；MEK抑制剂；抗肿瘤抗生素；亚硝基脲；靶向/降低蛋白质或脂质激酶活性的化合物、靶向/降低蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物、或任何其他抗血管生成化合物。

非限制性示例性芳香化酶抑制剂包括但不限于类固醇例如阿他美坦、依西美坦和福美司坦，以及非类固醇例如氨鲁米特、洛太米特(roglethimide)、吡鲁米特(pyridogluthethimide)、曲洛司坦、睾内酯、酮康唑(ketokonazole)、伏罗唑(vorozole)、法曲唑(fadrozole)、阿那曲唑和来曲唑。

非限制性抗雌激素包括但不限于他莫昔芬(tamoxifen)、氟维司群、雷洛昔芬和盐酸雷洛昔芬。抗雄激素包括但不限于比卡鲁胺。戈那瑞林激动剂包括但不限于阿巴瑞利(abarelix)、戈舍瑞林和乙酸戈舍瑞林。

示例性拓扑异构酶I抑制剂包括但不限于托泊替康、吉马替康、伊立替康、喜树碱及其类似物9-硝基喜树碱和大分子喜树碱缀合物PNU-166148。拓扑异构酶II抑制剂包括但不限于蒽环类药物，例如阿霉素、柔红霉素、表柔比星、伊达比星和奈莫柔比星；蒽醌类，例如米托蒽醌和洛索蒽醌；以及鬼臼毒素木脂素类(podophillotoxines)，如依托泊苷和替尼泊苷。

微管活性剂包括微管稳定化合物、微管去稳定化合物和微管蛋白阻聚剂，包括但不限于紫杉烷，例如紫杉醇和多西他赛；长春花生物碱，例如长春碱、硫酸长春花碱、长春新碱和硫酸长春新碱和长春瑞滨；替斯利得(discodermolides)；秋水仙素和埃博霉素及其衍生物。

示例性非限制性烷基化剂包括环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑和亚硝基脲，例如卡莫司汀和洛莫司汀。

示例性非限制性环氧合酶抑制剂包括Cox-2抑制剂，5-烷基取代的2-芳基氨基苯基乙酸和衍生物例如塞来昔布、罗非考昔、依托考昔、伐地昔布，或5-烷基-2-芳基氨基苯基乙酸例如罗美昔布。

示例性非限制性基质金属蛋白酶抑制剂(“MMP抑制剂”)包括胶原肽模拟物和非肽模拟物抑制剂、四环素衍生物、巴马司他、马立马司他(marimastat)、普马司他、美他司他(metastat)、BMS-279251、BAY 12-9566、TAA211、MMI270B和AAJ996。

示例性非限制性mTOR抑制剂包括抑制哺乳动物雷帕霉素靶标(mTOR)并具有抗增殖活性的化合物，例如西罗莫司、依维莫司、CCI-779和ABT578。

示例性非限制性抗代谢物包括5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、吉西他滨、DNA脱甲基化合物(例如5-氮杂胞苷和地西他滨)、甲氨蝶呤和依达曲沙、以及叶酸拮抗剂(例如培美曲塞)。

示例性非限制性铂化合物包括卡铂、顺铂(cis-platin，cisplatinum)和奥沙利铂。

示例性非限制性甲硫氨酸氨基肽酶抑制剂包括苯甲酰胺(bengamide)或其衍生物和PPI-2458。

示例性非限制性双膦酸盐包括依替膦酸、氯膦酸、替鲁膦酸、帕米膦酸、阿仑膦酸、伊班膦酸、利塞膦酸和唑来膦酸。

示例性非限制性抗增殖抗体包括曲妥珠单抗、曲妥珠单抗-DMl、西妥昔单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、PR064553和2C4。术语“抗体”包括完整的单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两种完整抗体形成的多特异性抗体、和抗体片段，只要它们表现出所希望的生物学活性即可。

示例性非限制性类肝素酶抑制剂包括靶向、降低或抑制硫酸肝素降解的化合物，例如PI-88和OGT2115。

如本文所用，术语“Ras致癌异形体的抑制剂”(例如H-Ras、K-Ras或N-Ras)是指靶向、降低或抑制Ras致癌活性的化合物，例如法尼基转移酶抑制剂，例如L-744832、DK8G557、替吡法尼和洛那法尼(lonafarnib)。

示例性非限制性端粒酶抑制剂包括靶向、降低或抑制端粒酶活性的化合物，例如抑制端粒酶受体的化合物，例如端粒抑素(telomestatin)。

示例性非限制性蛋白酶体抑制剂包括靶向、降低或抑制蛋白酶体活性的化合物，包括但不限于硼替佐米(bortezomid)。

如本文所用，短语“用于治疗恶性血液病的化合物”包括：FMS样酪氨酸激酶抑制剂，其是靶向、降低或抑制FMS样酪氨酸激酶受体(Flt-3R)活性的化合物；干扰素、I-β-D-阿拉伯呋喃糖胞嘧啶(ara-c)和白消安；和ALK抑制剂，其是靶向、降低或抑制间变性淋巴瘤激酶的化合物。

示例性非限制性Flt-3抑制剂包括PKC412、米哚妥林、星形孢菌素衍生物、SU11248和MLN518。

示例性非限制性HSP90抑制剂包括靶向、降低或抑制HSP90的内源性ATP酶活性的化合物；或经由泛素蛋白体途径降解、靶向、降低或抑制HSP90客户蛋白的化合物。靶向、降低或抑制HSP90的内源性ATP酶活性的化合物特别是抑制HSP90的ATP酶活性的化合物、蛋白质或抗体，例如17-烯丙基氨基、17-去甲氧基格尔德霉素(17AAG)(格尔德霉素衍生物)；其他与格尔德霉素有关的化合物；根赤壳菌素和HDAC抑制剂。

如本文所用，短语“靶向/降低蛋白质或脂质激酶活性、或蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物；或任何其他抗血管生成化合物”包括蛋白酪氨酸激酶和/或丝氨酸和/或苏氨酸激酶抑制剂或脂质激酶抑制剂，例如a)靶向、降低或抑制血小板源生长因子受体(PDGFR)的活性的化合物，例如靶向、降低或抑制PDGFR活性的化合物，例如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，例如伊马替尼、SUlOl、SU6668和GFB-111；b)靶向、降低或抑制成纤维细胞生长因子受体(FGFR)活性的化合物；c)靶向、降低或抑制胰岛素样生长因子受体I(IGF-IR)活性的化合物，例如靶向、降低或抑制IGF-IR的化合物；d)靶向、降低或抑制Trk受体酪氨酸激酶家族活性的化合物，或肝配蛋白B4抑制剂；e)靶向、降低或抑制Axl受体酪氨酸激酶家族活性的化合物；f)靶向、降低或抑制Ret受体酪氨酸激酶活性的化合物；g)靶向、降低或抑制Kit/SCFR受体酪氨酸激酶活性的化合物，例如伊马替尼；h)靶向、降低或抑制c-Kit受体酪氨酸激酶活性的化合物，例如伊马替尼；i)靶向、降低或抑制c-Abl家族成员、其基因融合产物(例如Bcr-Abl激酶)和突变体的活性的化合物，例如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，例如伊马替尼或尼罗替尼；PD180970；AG957；NSC 680410；PD173955；或达沙替尼；j)靶向、降低或抑制蛋白激酶C(PKC)成员和丝氨酸/苏氨酸激酶的Raf家族，MEK、SRC、JAK、FAK、PDK1、PKB/Akt成员，和Ras/MAPK家族成员，和/或细胞周期蛋白依赖性激酶家族(CDK)成员的活性的化合物，例如美国专利号5,093,330中披露的星形孢菌素衍生物，例如米哚妥林；其他化合物的实例包括UCN-01、沙芬戈、BAY 43-9006、苔藓抑素1、哌立福新；伊莫福新；RO 318220和RO 320432；GO 6976；Isis 3521；LY 333531/LY 379196；异喹啉化合物；法尼基转移酶抑制剂；PD184352或QAN697或AT7519；k)靶向、降低或抑制蛋白酪氨酸激酶活性的化合物，例如甲磺酸伊马替尼或酪氨酸磷酸化抑制剂，例如酪氨酸磷酸化抑制剂A23/RG-50810；AG 99；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 213；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 1748；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 490；酪氨酸磷酸化抑制剂B44；酪氨酸磷酸化抑制剂B44(+)对映异构体；酪氨酸磷酸化抑制剂AG555；AG 494；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 556、AG957和阿达斯汀(adaphostin)(4-{[(2,5-二羟基苯基)甲基]氨基}-苯甲酸金刚烷基酯；NSC 680410、阿达斯汀)；1)靶向、降低或抑制受体酪氨酸激酶的表皮生长因子家族(呈同二聚体或异二聚体的EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4)及其突变体的活性的化合物，例如CP 358774、ZD 1839、ZM 105180；曲妥珠单抗，西妥昔单抗，吉非替尼，埃罗替尼，OSI-774，Cl-1033，EKB-569，GW-2016，抗体E1.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6.3和E7.6.3，以及7H-吡咯并-[2,3-d]嘧啶衍生物；以及m)靶向、降低或抑制c-Met受体活性的化合物。

靶向、降低或抑制蛋白质或脂质磷酸酶活性的示例性化合物包括磷酸酶1、磷酸酶2A或CDC25的抑制剂，例如冈田酸或其衍生物。

其他抗血管生成化合物包括具有与蛋白质或脂质激酶抑制无关的另一活性机制的化合物，例如沙利度胺和TNP-470。

另外的非限制性示例性化学治疗化合物，其中一种或多种可以与本发明MDM2降解剂组合使用，包括：柔红霉素、阿霉素、Ara-C、VP-16、替尼泊苷、米托蒽醌、伊达比星、卡铂、PKC412、6-巯嘌呤(6-MP)、磷酸氟达拉滨、奥曲肽、SOM230、FTY720、6-硫代鸟嘌呤、克拉屈滨、6-巯嘌呤、喷司他丁、羟基脲、2-羟基-1H-异吲哚-1,3-二酮衍生物、1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪或其药学上可接受的盐、1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪琥珀酸酯、血管抑素、内皮抑素、邻氨基苯甲酰胺、ZD4190、ZD6474、SU5416、SU6668、贝伐单抗、rhuMAb、rhuFab、macugon；FLT-4抑制剂、FLT-3抑制剂、VEGFR-2IgGI抗体、RPI 4610、贝伐单抗、卟吩姆钠、阿奈可他(anecortave)、去炎松、氢化可的松、11-a-表氢化可的松(epihydrocotisol)、脱氧皮甾醇(cortexolone)、17a-羟孕酮、皮质酮、脱氧皮质酮、睾酮、雌酮、地塞米松、氟轻松、植物生物碱、激素化合物和/或拮抗剂、生物应答调节剂(如淋巴因子或干扰素)、反义寡核苷酸或寡核苷酸衍生物、shRNA和siRNA。

第二治疗剂的其他实例(其中的一种或多种也可以与本发明MDM2降解剂组合)包括但不限于：治疗阿尔茨海默氏病，例如多奈哌齐和雷斯替明(rivastigmine)；治疗帕金森氏病，例如L-DOPA/卡比多巴、恩他卡朋、罗吡尼洛(ropinrole)、普拉克索、溴隐亭(bromocriptine)、培高利特(pergolide)、苯海索(trihexephendyl)和金刚烷胺；用于治疗多发性硬化症(MS)的药剂，例如β干扰素(例如

和

)、醋酸格拉替雷和米托蒽醌；用于治疗哮喘，例如沙丁胺醇和孟鲁司特；用于治疗精神分裂症的药剂，例如再普乐、维思通、思瑞康和氟哌啶醇；抗炎剂，例如皮质类固醇、TNF阻滞剂、IL-1RA、硫唑嘌呤、环磷酰胺和柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)；免疫调节剂，包括免疫抑制剂，例如环孢菌素、他克莫司、雷帕霉素、霉酚酸酯、干扰素、皮质类固醇、环磷酰胺、硫唑嘌呤和柳氮磺胺吡啶；神经营养因子，例如乙酰胆碱酯酶抑制剂、MAO抑制剂、干扰素、抗惊厥剂、离子通道阻滞剂、利鲁唑或抗帕金森氏剂；用于治疗心血管疾病的药剂，例如β受体阻滞剂、ACE抑制剂、利尿剂、硝酸盐、钙通道阻滞剂、或他汀类；用于治疗肝脏疾病的药剂，例如皮质类固醇、消胆胺、干扰素和抗病毒剂；用于治疗血液障碍的药剂，例如皮质类固醇、抗白血病药剂或生长因子；或用于治疗免疫缺陷障碍的药剂，例如γ球蛋白。

如本领域中所述的制备和施用上述第二治疗活性剂，其中的一种或多种可以与本披露的化合物组合使用。

本披露的化合物典型地与根据预期施用途径和标准药学实践选择的药物载体混合施用。根据本披露使用的药物组合物能以常规方式、使用一种或多种生理学上可接受的载体(包括赋形剂和/或助剂，其有助于处理本披露的化合物)进行配制。

这些药物组合物可以例如通过常规混合、溶解、制粒、制糖衣丸、乳化、包封、包埋或冻干的方法来制作。适当的配制品取决于所选的施用途径。当口服施用治疗有效量的本披露的化合物时，组合物典型地为片剂、胶囊、粉末、溶液剂或酏剂的形式。当以片剂形式施用时，组合物可以另外含有固体载体，例如明胶或佐剂。片剂、胶囊和粉末含有约0.01％至约95％，并且优选地约1％至约50％的本披露的化合物。当以液体形式施用时，可以添加液体载体，例如水、石油、或动物或植物来源的油。组合物的液体形式可以进一步含有生理盐水溶液、右旋糖或其他糖溶液或二醇。当以液体形式施用时，组合物含有按重量计约0.1％至约90％、并且优选地约1％至约50％的本披露的化合物。

在通过静脉内、经皮肤或皮下注射施用治疗有效量的本披露的化合物时，组合物呈无热原、肠胃外可接受的水溶液的形式。此类肠胃外可接受的溶液的制备应充分考虑pH、等渗性、稳定性等，是在本领域技术范围的。用于静脉内、经皮肤或皮下注射的优选组合物典型地含有等渗媒剂。

本披露的化合物可以容易地与本领域熟知的药学上可接受的载体组合。标准药物载体描述于Remington's Pharmaceutical Sciences[雷明顿药学大全]，Mack PublishingCo.[麦克出版公司]，伊斯顿，宾夕法尼亚州，第19版，1995。此类载体使得能将活性剂配制为片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮剂等，以供待治疗的患者口服摄食。用于口服使用的药物制剂可以通过以下方式来获得：将本披露的化合物添加至固体赋形剂中，任选地研磨所得混合物，并且在添加适合的助剂后(如果希望)加工颗粒混合物，以获得片剂或糖衣丸核心。

合适的赋形剂包括填充剂例如糖类(例如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇)、纤维素制品、磷酸钙(例如磷酸三钙或磷酸氢钙)、以及粘合剂例如淀粉糊(使用例如玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、或马铃薯淀粉)、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果希望，可以添加一种或多种崩解剂，如上述淀粉以及还有羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、或海藻酸或其盐(如海藻酸钠)。也可以添加缓冲剂和pH调节剂以稳定药物组合物。

助剂典型地是流动调节剂和润滑剂，例如像二氧化硅、滑石、硬脂酸或其盐(例如硬脂酸镁或硬脂酸钙)和/或聚乙二醇。糖衣丸核心具有合适的包衣，这些包衣可耐受胃液。为此目的，可以使用浓缩的糖溶液，这些糖溶液可以任选地含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了生产耐受胃液的包衣，可以使用合适的纤维素制品例如乙酰纤维素邻苯二甲酸酯或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯的溶液。可以将染料或颜料添加到片剂或糖衣丸包衣中，例如用于鉴定或以便表征活性化合物剂量的组合。

本披露的化合物可以经配制用于通过注射(例如，通过推注或连续输注)肠胃外施用。注射用配制品能以单位剂型(例如，于安瓿中或于多剂量容器中)呈现，并添加有防腐剂。组合物可以采取例如于油性或水性媒剂中的悬浮液、溶液或乳液的形式，并且可以含有配制剂，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。

用于肠胃外施用的药物组合物包括呈水溶性形式的活性剂的水溶液。另外，可以将本披露的化合物的悬浮液制备为适当的油性注射悬浮液。适合的亲脂性溶剂或媒剂包括脂肪油或合成脂肪酸酯。水性注射悬浮液可以含有提高悬浮液粘度的物质。任选地，悬浮液还可以含有适合的稳定剂或提高化合物的溶解度并允许制备高度浓缩的溶液的试剂。可替代地，本发明组合物可以呈粉末形式以供在使用前用适合的媒剂(例如，无菌无热原水)构造。

本披露的化合物还可以配制于直肠组合物中，例如栓剂或滞留型灌肠剂(例如，含有常规栓剂基质)。除了先前所述的配制品以外，还可以将本披露的化合物配制为持久制剂。此类长效配制品可通过植入(例如经皮下或肌内)或通过肌内注射进行施用。因此，例如，本披露的化合物可以用适合的聚合物的或疏水的材料(例如，作为可接受的油中的乳液)或者离子交换树脂来进行配制。

特别地，本披露的化合物能以含有赋形剂(例如淀粉或乳糖)的片剂的形式，或以单独的或与赋形剂混合的胶囊或珠囊(ovule)，或以含有调味剂或着色剂的酏剂或悬浮液的形式，口服、经颊或舌下施用。此类液体制剂可以用药学上可接受的添加剂(例如悬浮剂)来制备。还可以肠胃外(例如静脉内、肌内、皮下或冠状动脉内)注射本披露的化合物。对于肠胃外施用，本披露的化合物典型地以无菌水溶液的形式来使用，其可以含有其他物质，例如盐或单糖(例如甘露醇或葡萄糖)，以使溶液与血液等渗。

本披露提供了与治疗受试者的疾病有关的以下特定实施例。

实施例1.一种治疗有需要的受试者的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的本披露的化合物，其中该受试者患有癌症。

实施例2.如实施例1所述的方法，其中该癌症是表2的癌症中的任一种或多种。

实施例3.如实施例2所述的方法，其中该癌症是血液癌症。

实施例4.如实施例3所述的方法，其中该血液癌症是表3的癌症中的任一种或多种。

实施例5.如实施例1-4中任一项所述的方法，该方法进一步包括施用治疗有效量的用于治疗癌症的第二治疗剂。

实施例6.一种药物组合物，该药物组合物包含本披露的化合物和药学上可接受的载体，用于在治疗癌症中使用。

实施例7.如实施例6所述的药物组合物，其中该癌症是表2的癌症中的任一种或多种。

实施例8.如实施例7所述的药物组合物，其中该癌症是血液癌症。

实施例9.如实施例8所述的药物组合物，其中该血液癌症是表3的癌症中的任一种或多种。

实施例10.一种本披露的化合物，用于在治疗癌症中使用。

实施例11.用于如实施例10所述使用的化合物，其中该癌症是表2的癌症中的任一种或多种。

实施例12.用于如实施例11所述使用的化合物，其中该癌症是血液癌症。

实施例13.用于如实施例12所述使用的化合物，其中该血液癌症是表3的癌症中的任一种或多种。

实施例14.本披露的化合物用于制造治疗癌症的药物的用途。

实施例15.如实施例14所述的用途，其中该癌症是表2的癌症中的任一种或多种。

实施例16.如实施例15所述的用途，其中该癌症是血液癌症。

实施例17.如实施例16所述的用途，其中该血液癌症是表3的癌症中的任一种或多种。

III.本披露的试剂盒

在另一个实施例中，本披露提供了试剂盒，这些试剂盒包含以有助于其用于实践本披露的方法的方式包装的本披露的化合物(或包含本披露的化合物的组合物)。在一个实施例中，该试剂盒包含包装在容器(例如密封瓶或器皿)中的本披露的化合物(或包含本披露的化合物的组合物)，该容器带有粘贴在容器上或包括在试剂盒中的标签，该标签描述了化合物或组合物用于实践本披露的方法的使用。在一个实施例中，该化合物或组合物包装为单位剂型。该试剂盒可以进一步包含适于根据预期施用途径施用该组合物的装置。

IV.生物标志

在另一个实施例中，本披露提供了治疗患有癌症的受试者的方法，该方法包括(a)确定取自该受试者的生物样品中是否存在生物标记物；以及(b)如果该生物样品中存在生物标志，则向该受试者施用治疗有效量的本披露的化合物。参见例如Goossens等人,TranslCancer Res.[癌症转化研究]4:256-269(2015)；Kamel和Al-Amodi,Genomics ProteomicsBioinformatics[基因组蛋白质组学与生物信息学]15:220-235(2017)；以及Konikova和Kusenda,Neoplasma[赘生物]50:31-40(2003)。

如本文所用，术语“生物标志”是指可以在癌症患者体内或从癌症患者获得的生物样品中检测和/或定量的任何生物化合物，例如基因、蛋白质、蛋白质的片段、肽、多肽、核酸等。生物标志可以是整个完整的分子，或者可以是其一部分或片段。在一个实施例中，测量生物标志的表达水平。可以例如通过检测生物标志的蛋白质或RNA(例如mRNA)水平来测量生物标志的表达水平。在一些实施例中，可以例如通过抗体或其他特异性结合剂来检测或测量生物标志的部分或片段。在一些实施例中，生物标志的可测量方面与患者的给定状态(例如癌症的特定阶段)相关。对于在蛋白质或RNA水平检测到的生物标志，此类可测量方面可以包括例如：癌症患者或从癌症患者获得的生物样品中生物标志的存在、不存在或浓度，即表达水平。对于在核酸水平上检测到的生物标志，此类可测量方面可以包括：例如生物标志的等位基因版本、或生物标志的突变的类型、速率和/或程度(在本文中也称为突变状态)。

对于基于蛋白质或RNA的表达水平检测到的生物标志，例如，如果计算出不同组中生物标志物的平均表达水平或中值表达水平具有统计学显著性，则在不同表型状态之间测得的表达水平可以认为是不同的。统计学显著性的常用检验尤其包括：t检验、ANOVA、克鲁斯卡尔-沃利斯(Kruskal-Wallis)检验、威尔科克森(Wilcoxon)检验、曼-惠特尼(Mann-Whitney)检验、微阵列的显著性分析、优势比检验等。单独或组合的生物标志提供了受试者属于一种表型状态或另一种表型状态的相对可能性的量度。因此，它们尤其可用作疾病的标志、以及特定治疗性治疗方案可能会导致有益的患者结果的指标。

生物标志包括但不限于MDM2、p53、和US 2015/0301058中披露的任一种或多种其他生物标志。在一个实施例中，生物标志的可测量方面是其表达状态。在一个实施例中，生物标志的可测量方面是其突变状态。

在一个实施例中，生物标志是MDM2在一种表型状态的受试者(例如患有血液癌症的受试者)中与在另一表型状态的受试者(例如正常的未患病受试者或患有癌症但无MDM2过表达的患者)中相比存在差异。在一个实施例中，生物标志是MDM2的过表达。

生物标志标准可以预先确定、与从受试者获得生物样品同时确定、或在从受试者获得生物样品之后确定。用于本文描述的方法的生物标志标准可以例如包括来自没有癌症的受试者的样品的数据；来自患有非转移性癌症(例如乳腺癌)的受试者的样品的数据；以及来自患有转移性癌症(例如乳腺癌)的受试者的样品的数据。可以进行比较以针对不同类别的受试者(例如患病与未患病的受试者)建立预定的阈值生物标志标准。这些标准可以在相同测定中进行，或者可以是先前测定中已知的标准。

如果计算出生物标志的平均或中值表达或突变水平在不同的表型状态组之间是不同的(即更高或更低)，则这些组之间的生物标志存在差异。因此，生物标志提供了受试者(例如癌症患者)属于一种表型状态或另一种表型状态的指示。

除了个体生物化合物(例如MDM2外)，如本文所用的术语“生物标志”意指包括多种生物化合物的组、集合或阵列。例如，MDM2和p53的组合可以包含生物标志。术语“生物标志”可以包括一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、十五种、二十种、二十五种、三十种或更多种生物化合物。

可以使用本领域已知的许多方法中的任一种来进行患者中生物标志的表达水平或突变状态的确定。本领域已知的用于在患者或生物样品中定量特异性蛋白质和/或检测MDM2表达、或任何其他生物标志的表达或突变水平的任何方法可以在本披露的方法中使用。实例包括但不限于PCR(聚合酶链式反应)或RT-PCR、流式细胞术、RNA印迹、免疫印迹、ELISA(酶联免疫吸附测定)、RIA(放射免疫测定)、RNA表达的基因芯片分析、免疫组织化学或免疫荧光。参见例如Slagle等人Cancer[癌症]83:1401(1998)。本披露的某些实施例包括其中确定生物标志RNA表达(转录)的方法。本披露的其他实施例包括其中确定生物样品中蛋白质表达的方法。参见例如Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual[抗体：分子克隆:实验室手册],Cold Spring Harbor Laboratory[冷泉港实验室出版社],冷泉港,纽约,(1988)；Ausubel等人,Current Protocols in Molecular Biology[现行分子生物学方案],John Wiley&Sons[约翰·威利父子出版社],纽约,第3版(1995)；Kamel和Al-Amodi,Genomics Proteomics Bioinformatics[基因组蛋白质组学与生物信息学]15:220-235(2017)。对于RNA印迹或RT-PCR分析，使用无RNA酶技术从肿瘤组织样品中分离RNA。此类技术在本领域中是熟知的。

在本披露的一个实施例中，从患者获得生物样品，并且对该生物样品进行测定以确定生物标志，例如MDM2、表达或突变状态。在一个实施例中，流式细胞术用于确定MDM2表达。

在本披露的另一个实施例中，进行肿瘤细胞样品中生物标志转录的RNA印迹分析。RNA印迹分析是用于检测和/或定量样品中mRNA水平的标准方法。首先，使用RNA印迹分析从待测定样品中分离RNA。在分析中，首先在变性条件下经由在琼脂糖凝胶中的电泳按大小将RNA样品分离。然后将RNA转移到膜上、进行交联并与标记的探针杂交。典型地，RNA印迹杂交涉及在体外聚合放射性标记的或非同位素标记的DNA，或生成寡核苷酸作为杂交探针。典型地，在探针杂交之前，将含有RNA样品的膜预杂交或封闭，以防止探针包被膜，从而减少非特异性背景信号。杂交后，典型地，通过在几种不同的缓冲液中洗涤来去除未杂交的探针。洗涤和杂交条件的严格性可以由本领域普通技术人员设计、选择和实施。使用可检测标记的探针和合适的检测方法完成检测。放射性标记的和非放射性的探针及其使用是本领域熟知的。可以使用例如光密度法来定量所测定的生物标志的表达的存在和/或相对水平。

在另一个实施例中，使用RT-PCR确定生物标志的表达和/或突变状态。RT-PCR允许实时检测靶基因的PCR扩增进度。检测本披露的生物标志的表达和/或突变状态所需的引物和探针的设计在本领域普通技术人员的技术范围内。RT-PCR可用于确定肿瘤组织样品中编码本披露的生物标志的RNA的水平。在本披露的一个实施例中，在无RNA酶的条件下分离来自生物样品的RNA，然后通过用逆转录酶处理将其转化成DNA。逆转录酶将RNA转化为DNA的方法是本领域熟知的。以下参考文献中提供了PCR的描述：Mullis等人,Cold SpringHarbor Symp.Quant.Biol.[冷泉港定量生物学研讨会]51:263(1986)；EP 50,424；EP 84,796；EP 258,017；EP 237,362；EP 201,184；美国专利号4,683,202；4,582,788、4,683,194。

RT-PCR探针取决于PCR中水解与靶扩增子(生物标志基因)杂交的寡核苷酸所使用的DNA聚合酶的5'-3'核酸酶活性。RT-PCR探针是寡核苷酸，其具有附接到5'末端的荧光报告染料和偶联到3'末端的淬灭部分(反之亦然)。这些探针被设计为与PCR产物的内部区域杂交。在未杂交的状态下，荧光分子和淬灭分子接近阻止了对来自探针的荧光信号的检测。在PCR扩增期间，当聚合酶复制结合有RT-PCR探针的模板时，聚合酶的5'-3'核酸酶活性将该探针裂解。这使荧光染料和淬灭染料分离，并且不再发生FRET。因此，荧光在每个循环中以与探针裂解量成比例的方式增加。使用常规和普通技术利用可商购的设备可以测量或随时间跟踪从反应发出的荧光信号。

在本披露的另一个实施例中，通过免疫印迹分析来检测由生物标志编码的蛋白质的表达。免疫印迹(也称为免疫印迹)是一种在给定的组织匀浆或提取物中进行蛋白质检测的方法。它使用凝胶电泳按质量分离变性蛋白质。然后将蛋白质从凝胶中转移出并转移到膜(例如硝化纤维素或聚偏二氟乙烯(PVDF))上，在膜上使用与蛋白质特异性结合的第一抗体对其进行检测。然后可以通过与可检测标记(例如生物素、辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)缀合的第二抗体来检测结合的抗体。第二标记信号的检测指示蛋白质的存在。

在本披露的另一个实施例中，通过酶联免疫吸附测定(ELISA)来检测由生物标志编码的蛋白质的表达。在本披露的一个实施例中，“夹心ELISA”包括用捕获抗体包被板；添加样品，其中存在的任何抗原与捕获抗体结合；添加检测抗体，其也与抗原结合；添加酶联第二抗体，其与检测抗体结合；以及添加底物，其由第二抗体上的酶转化为可检测的形式。来自第二抗体的信号的检测指示存在生物标志抗原蛋白。

在本披露的另一个实施例中，通过使用基因芯片或微阵列评估生物标志的表达。此类技术在本领域所掌握的普通技术范围内。

本披露提供了与生物标志有关的以下特定实施例。

实施例I.一种治疗患有癌症的受试者的方法，该方法包括：

(a)确定取自该受试者的生物样品中是否存在MDM2的过表达；和

(b)如果该生物样品中存在MDM2的过表达，则向该受试者施用治疗有效量的本披露的化合物。

实施例II.一种鉴定患有癌症的受试者是否为接受本披露的化合物治疗的候选者的方法，该方法包括：

(a)确定取自该受试者的生物样品中是否存在MDM2的过表达；和

(b)如果存在MDM2的过表达，则鉴定该受试者为接受治疗的候选者；或

(c)如果不存在MDM2的过表达，则鉴定该受试者不是接受治疗的候选者。

实施例III.一种预测患有癌症的受试者的治疗结果的方法，该方法包括确定取自该受试者的生物样品中是否存在MDM2的过表达，其中：

(a)该生物样品中存在MDM2的过表达指示向该受试者施用本披露的化合物将在该受试者中产生治疗反应；和

(b)该生物样品中不存在MDM2的过表达指示向该受试者施用本披露的化合物将不会在该受试者中产生治疗反应。

实施例IV.一种方法，该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本披露的化合物，其中：

(a)该受试者患有癌症；和

(b)该癌症的特征为具有MDM2的过表达。

实施例V.如实施例I-IV中任一项所述的方法，其中该癌症是表2的癌症中的任一种或多种。

实施例VI.如实施例V所述的方法，其中该癌症是血液癌症。

实施例VII.如实施例VI所述的方法，其中该血液癌症是表3的血液癌症中的任一种或多种。

实施例VIII.如实施例VII所述的方法，其中该血液癌症是急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病或急性骨髓性白血病。

V.定义

如本文所用，术语“生物样品”是指来自患者的适于检测生物标志(例如MDM2表达状态)的任何组织或体液。有用的生物样品的实例包括但不限于活检组织和/或细胞，例如实体瘤、淋巴腺、发炎的组织、病症或疾病累及的组织和/或细胞、血液、血浆、浆液、脑脊液、唾液、尿液、淋巴液、脑脊髓液等。其他合适的生物样品对于相关领域的普通技术人员是熟悉的。可以使用本领域已知的任何技术来分析生物样品的生物标志表达和/或突变，并且可以使用完全在临床从业人员的常识范围内的技术来获得生物样品。在本披露的一个实施例中，生物样品包含血细胞和/或骨髓细胞。

术语“其中MDM2蛋白的降解提供益处的疾病或病症”涉及其中MDM2和/或MDM2作用例如对于该疾病或病症的发作、进展、表达是重要或必要的疾病或病症，或已知通过MDM2抑制剂或降解剂治疗的疾病或病症。此类病症的实例包括但不限于癌症、慢性自身免疫性疾病、炎性疾病、增殖性疾病、脓毒症和病毒感染。本领域普通技术人员能够容易地例如通过可方便地用于评估特定化合物活性的测定来确定化合物是否可用于治疗任何特定细胞类型的由MDM2介导的疾病或病症。

术语“第二治疗剂”是指不同于本披露的化合物并且已知可治疗目的疾病或病症的治疗剂。例如，当癌症是目的疾病或病症时，第二治疗剂可以是已知的化学治疗药物(像紫杉醇)或例如放射物。

术语“疾病”或“病症”表示通常被认为是病理状况或功能的、并且可以呈特定体征、症状和/或功能障碍的形式表现出的干扰和/或异常。如以下实例所证明的，本披露的化合物是MDM2蛋白的降解剂，并且可以用于治疗其中MDM2的降解提供益处的疾病和病症。

如本文所用，术语“治疗(treat、treating、treatment)”是指消除、减轻或改善疾病或病症和/或与其相关的症状。尽管不能排除，但是治疗疾病或病症并不要求完全消除该疾病、病症或与其相关的症状。如本文所用，术语“治疗”(“treat”、“treating”和“treatment”)可以包括“预防性治疗”，是指在未患疾病或病症或未复发该疾病或病症，但具有再次发展该疾病或病症或复发该疾病或病症的风险或易于再次发展该疾病或病症或复发该疾病或病症的受试者中，降低再次发展该疾病或病症或复发先前受到控制的疾病或病症的可能性。术语“治疗”和同义词是指向需要这种治疗的个体施用治疗有效量的本披露的化合物。

在本披露的含义内，“治疗”还包括预防复发或阶段性预防，以及急性或慢性体征、症状和/或功能障碍的治疗。治疗可以是对症治疗，例如以抑制症状。这可以在短期内实现，可以在中期内定向进行，也可以是例如在维持疗法的范围内长期治疗。

如本文所用，术语“治疗有效量”或“有效剂量”是指当通过本披露的方法向有需要的个体施用时，足以有效递送一种或多种活性成分用于对目的病症或疾病进行治疗的一种或多种活性成分的量。在癌症或其他增殖障碍的情况下，药剂的治疗有效量可以减少(即，在一定程度上延迟并且优选地停止)不希望的细胞增殖；减少癌细胞的数量；减少肿瘤大小；抑制(即，在一定程度上延迟并且优选地停止)癌细胞浸润到外周器官中；抑制(即，在一定程度上延迟并且优选地停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；减少靶细胞中的MDM2信号传导；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。在一定程度上，施用的化合物或组合物可以阻止生长和/或杀死现有的癌细胞，它可以抑制细胞生长和/或具有细胞毒性。

在一个实施例中，对于治疗癌症，治疗有效量是指本披露的化合物的量，该量(a)将受试者中的以下项减少5％或更多，例如10％或更多、15％或更多、20％或更多、25％或更多、30％或更多、35％或更多、40％或更多、45％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、或95％或更多：(1)肿瘤生长速率、(2)肿瘤质量、(3)组织和器官中异常细胞的积聚、或(4)转移数量；或(b)将受试者中的以下项增加5％或更多，例如10％或更多、15％或更多、20％或更多、25％或更多、30％或更多、35％或更多、40％或更多、45％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、或95％或更多：(1)肿瘤进展的时间、(2)肿瘤细胞凋亡、或(3)存活时间。

同样，术语“在受试者中的治疗反应”是指(a)将此受试者中的以下项减少5％或更多，例如10％或更多、15％或更多、20％或更多、25％或更多、30％或更多、35％或更多、40％或更多、45％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、或95％或更多：(1)肿瘤生长速率、(2)肿瘤质量、(3)组织和器官中异常细胞的积聚、或(4)转移数量；或(b)将该受试者中的以下项增加5％或更多，例如10％或更多、15％或更多、20％或更多、25％或更多、30％或更多、35％或更多、40％或更多、45％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、或95％或更多：(1)肿瘤进展的时间、(2)肿瘤细胞凋亡、或(3)存活时间。

因此，术语“容器”意指适合于存储、运输、分配和/或处理药物产品的任何接受器和封闭件。

术语“插入物”意指附带药物产品的信息，提供了如何施用产品的说明，以及允许医师、药剂师和患者做出与使用该产品相关的知情决定所需的安全性和功效数据。包装插入物通常被认为是药物产品的“标签”。

“并行施用”、“组合施用”、“同时施用”和类似短语意指两种或更多种药剂并行地向所治疗的受试者施用。“并行地(concurrently)”意指每种药剂同时地施用或以任何顺序在不同的时间点顺序地施用。然而，如果不同时施用，则意味着它们按顺序且以足够接近的时间向个体施用，以提供所希望的治疗效果并且可以协同作用。例如，本披露的化合物可以与第二治疗剂在相同时间施用或以任何顺序在不同时间点顺序地施用。可以按任何适当的形式并且通过任何合适的途径分开施用本披露的化合物和第二治疗剂。当本披露的化合物和第二治疗剂不是并行地施用时，应理解它们能以任何顺序向有需要的受试者施用。例如，可以在施用第二治疗剂治疗方式(例如，放射疗法)之前(例如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周前)、伴随其或在其之后(例如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周后)向有需要的个体施用本披露的化合物。在各种实施例中，将本披露的化合物和第二治疗剂间隔1分钟、间隔10分钟、间隔30分钟、间隔小于1小时、间隔1小时、间隔1小时至2小时、间隔2小时至3小时、间隔3小时至4小时、间隔4小时至5小时、间隔5小时至6小时、间隔6小时至7小时、间隔7小时至8小时、间隔8小时至9小时、间隔9小时至10小时、间隔10小时至11小时、间隔11小时至12小时、间隔不超过24小时或间隔不超过48小时施用。在一个实施例中，组合疗法的组分以约1分钟至约24小时的间隔施用。

除非另外说明，否则在描述本披露的上下文中(尤其是在权利要求的上下文中)，术语“一个/一种(a/an)”、“该”和类似指称对象的使用被解释为同时涵盖单数和复数。除非本文另外说明，否则本文有关值的范围的陈述仅意欲用作个别地提及在该范围内的每一独立值的简写方法，且每一独立值是并入说明书中，就如同在本文个别地陈述该值一般。除非另外要求，否则本文所提供的任何及所有实例或示例性语言(例如，“例如”)的使用旨在更好地说明本披露且并非对本披露范围的限制。说明书中的语言不应当被解释为指示任何未要求保护的要素为实践本披露所必需的。

如本文所用，术语“约”包括所列举的数字±10％。因此，“约10”意指9至11。

本披露涵盖通过经同位素标记(即放射性标记)的本披露的任何化合物，其中通过将一个或多个原子替换为具有不同原子质量或质量数的原子进行该同位素标记(即放射性标记)。可以掺入本披露的化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮硫、氧、氟和氯的同位素，例如²H(或氘(D))、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³⁵S、¹⁸F、和³⁶Cl，例如²H、³H和¹³C。在一个实施例中，将本披露的化合物内某位置处的一部分原子进行替换，即，本披露的化合物在某位置处富集具有不同原子质量或质量数的原子。在一个实施例中，至少约1％的原子被具有不同原子质量或质量数的原子替换。在另一个实施例中，至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约100％的原子被具有不同原子质量或质量数的原子替换。

本披露的化合物具有不对称中心，并且因此可以产生对映异构体、非对映异构体和其他立体异构形式。本披露涵盖使用所有此类可能形式、以及它们的外消旋和拆分形式及其混合物。鉴于本披露，可以根据本领域已知的方法分离单个对映异构体。当本文描述的化合物含有烯烃双键或几何不对称的其他中心时，并且除非另外指明，否则意图是这些化合物包括E和Z几何异构体两者。本披露还涵盖所有互变异构体。

如本文所用，术语“立体异构体”是单个分子在仅其原子在空间上定向不同的所有异构体的总称。它包括对映异构体和具有一个以上彼此互不为镜像的手性中心的化合物的异构体(非对映异构体)。

术语“手性中心”或“不对称碳原子”是指附接有四个不同基团的碳原子。

术语“对映异构体”和“对映异构体的”是指不能与其镜像重叠的分子，并且因此具有光学活性，其中对映异构体在一个方向上旋转平面偏振光，而其镜像化合物在相反方向上旋转平面偏振光。

术语“外消旋”是指等量的对映异构体的混合物，并且该混合物是非旋光的。在一个实施例中，本披露的化合物是外消旋的。

术语“绝对构型”是指手性分子实体(或基团)的原子的空间排列及其立体化学描述，例如R或S。

除非另外说明，否则说明书中使用的立体化学术语和惯例意味着与Pure&Appl.Chem[纯粹与应用化学]68:2193(1996)中描述的那些一致。

术语“对映异构体过量”或“ee”是指存在的一种对映异构体超出另一种对映异构体的数量的量度。对于R和S对映异构体的混合物，对映异构体过量百分比定义为|R-S|*100，其中R和S是混合物中对映异构体的各自摩尔或重量分数，使得R+S＝1。了解手性物质的旋光度后，对映异构体过量百分比定义为([α]_obs/[α]_max)*100，其中[α]_obs是对映异构体的混合物的旋光度，并且[α]_max是纯对映异构体的旋光度。使用多种分析技术(包括NMR波谱法、手性柱色谱法或光学旋光法)使测定对映异构体过量成为可能。

术语“非对映异构体过量”或“de”是指存在的非对映异构体超出另一种非对映异构体的数量的量度，并且通过类似于对映异构体过量来定义。使用多种分析技术(包括NMR波谱法和柱色谱法)使测定非对映异构体过量成为可能。

化合物的通用合成

鉴于本披露使用本领域技术人员已知的方法、或通过以下通用方案中所示的说明性方法来制备本披露的化合物。如果需要，可以在合成中采用适当的保护。参见Wuts,P.G.M.；Greene,T.W.,“Greene's Protective Groups in Organic Synthesis[有机合成中的Greene保护基团]”,第5版,J.Wiley&Sons[约翰·威利父子公司],纽约,2014。

通用方案1

在通用方案1中，化合物A与具有式B的化合物在有机溶剂中反应，以给出具有式I的化合物。合适的胺-酰胺偶联试剂和条件(例如HATU/碱、HBTU/碱或EDCI/HOBt/碱)是本领域熟知的。参见Montalbetti和Falque,Tetrahedron[四面体]61:10827-10852(2005)。

在通用方案2中，具有式C的化合物与具有式D的化合物在有机溶剂中反应，以给出具有式I的化合物。

通用方案2

在一个实施例中，本披露提供了具有式D的化合物(其中X、Y、L、Z和A如与式I相关所定义的)作为合成中间体用于制备本披露的化合物。

在另一个实施例中，本披露提供了：

(3-(4-((1-((1r,4r)-4-氨基环己烷-1-羰基)哌啶-4-基)乙炔基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮)作为合成中间体用于制备本披露的化合物。

实例

实例1

(3'R,4'S,5'R)-6”-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-N-((1r,4R)-4-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)乙炔基)哌啶-1-羰基)环己基)-2"-氧代二螺[环己烷-1,2'-吡咯烷-3',3"-吲哚啉]-5'-甲酰胺(化合物4)的合成

向中间体1(19g，1.0当量)和甲基4-氨基环己烷-1-甲酸酯(1.1当量)在DCM(500mL)中的溶液中添加DIPEA(1.2当量)和HATU(1.2当量)。然后将混合物在r.t.下搅拌2h。将混合物用水性NaHCO₃淬灭，并用乙酸乙酯萃取三次。将有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩以给出粗产物，将该粗产物通过柱色谱法纯化以产生纯的中间体2(82％产率，纯度>95％)。MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝602.36；计算值：602.53；R_t＝4.98min；¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ7.62(ddd,J＝8.0,6.3,1.6Hz,1H),7.40(dd,J＝8.2,2.5Hz,1H),7.21(ddd,J＝8.4,7.0,1.6Hz,1H),7.06-6.99(m,2H),6.72(d,J＝1.9Hz,1H),4.66(d,J＝9.4Hz,1H),4.50(d,J＝9.4Hz,1H),3.66(s,3H),3.66-3.52(m,4H),2.34(tt,J＝12.1,3.5Hz,1H),2.09-1.77(m,6H),1.77-1.43(m,8H),1.43-1.24(m,2H),1.14-0.99(m,1H),0.94(td,J＝13.2,4.5Hz,1H)。

向中间体3(30g)和胺4(HCl盐)(1当量)在DMF(450mL)中的溶液中添加DIPEA(2当量)。在r.t.下搅拌5-10分钟后，添加HATU(1.1当量)。然后将混合物搅拌30min。将反应用H₂O(1100mL)淬灭。将所得沉淀过滤，用水洗涤以给出粗产物(纯度＝93％-94％)。将固体进一步通过制备型HPLC纯化，以给出化合物4，呈TFA盐。MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝921.56；计算值：921.89；R_t＝5.09min；¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.22(d,J＝7.7Hz,1H),7.76(dd,J＝7.6,1.1Hz,1H),7.69-7.58(m,2H),7.54-7.46(m,2H),7.39(ddd,J＝8.6,7.2,1.5Hz,1H),7.17(td,J＝8.0,1.1Hz,1H),7.10(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),6.79(d,J＝1.9Hz,1H),5.17(dd,J＝13.3,5.2Hz,1H),5.10(d,J＝11.1Hz,1H),4.79(d,J＝11.2Hz,1H),4.56-4.41(m,2H),4.03-3.90(m,1H),3.87-3.75(m,1H),3.74-3.57(m,1H),3.46-3.35(m,1H),3.06-2.73(m,5H),2.62-2.44(m,2H),2.25-2.11(m,2H),2.04-1.85(m,6H),1.82-1.44(m,10H),1.33-1.16(m,3H),1.03-0.87(m,1H)。

实例2

3-(1-氧代-4-(哌啶-4-基乙炔基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(中间体4)的合成

向中间体6(50g，155mmol)、1-Boc-4-乙炔基哌啶5(43g)、Pd(PPh₃)₂Cl₂(8.7g，12.4mmol)和CuI(4.72g，24.8mmol)的混合物中添加750mL的DMF和750mL的TEA。将溶液在超声下用Ar吹扫并重填充三次。将溶液在80℃搅拌过夜。然后，向反应中添加水，并用乙酸乙酯萃取。将合并的乙酸乙酯(约5)层用盐水洗涤三次。然后将所得沉淀过滤，用己烷洗涤以给出中间体7。为了进一步纯化，将甲醇添加至产物中，并将混合物搅拌10min。然后将沉淀过滤并用己烷洗涤以给出纯的中间体7(70％-80％产率，纯度>95％)。

3-(1-氧代-4-(哌啶-4-基乙炔基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(中间体4)：将以上获得的中间体7(30g)悬浮于在二噁烷中的HCl(150mL)中。将溶液在室温下搅拌30min。然后将所得沉淀过滤，用己烷洗涤以给出纯的中间体4(90％产率，纯度>95％)。MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝352.31；计算值：351.41；R_t＝1.04min；¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ7.79(dd,J＝7.6,1.0Hz,1H),7.67(dd,J＝7.7,1.0Hz,1H),7.53(t,J＝7.7Hz,1H),5.19(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.59-4.41(m,2H),3.47-3.36(m,2H),3.24-3.09(m,3H),3.00-2.85(m,1H),2.84-2.73(m,1H),2.53(qd,J＝13.2,4.6Hz,1H),2.26-2.13(m,3H),2.04-1.90(m,2H)。

实例3

叔丁基4-乙炔基哌啶-1-甲酸酯(中间体5)的合成

在0℃下，将K₂CO₃(260g)添加至N-Boc-哌啶-4-醛(100g)在MeOH(500mL)中的溶液中。然后在0℃下缓慢添加1-重氮丙酮基膦酸二甲酯(108g)。在室温下搅拌4h后，将混合物用水淬灭，然后通过旋转蒸发去除大部分MeOH。将残余物用乙酸乙酯萃取，并将有机层用盐水洗涤、用Na₂SO₄干燥并浓缩以给出中间体5，将其不经进一步纯化而用于下一步骤。

实例4

3-(4-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(中间体6)的合成

向中间体10(150g)在MeOH(1500mL)中的溶液中逐滴添加浓H₂SO₄(80mL)。将反应混合物在回流下搅拌过夜。在冷却至室温后，通过旋转蒸发去除MeOH。然后添加水，并将混合物用Et₂O萃取三次。将有机层用盐水洗涤、用Na₂SO₄干燥、过滤并浓缩，以给出粗产物中间体11，将其不经进一步纯化而用于下一步骤。

向中间体11(160g)在苯(1300mL)中的溶液中添加N-溴琥珀酰胺(149g)和过氧化苯甲酰(16g)。将反应混合物在回流下搅拌过夜。在冷却至室温后，添加水性Na₂S₂O₃，并将混合物在室温下搅拌10-20min。将混合物用苯萃取两次。将有机层用盐水洗涤、用Na₂SO₄干燥、过滤并浓缩，以给出粗产物。然后添加乙酸乙酯，并将混合物搅拌几分钟。将所得沉淀过滤，并将滤液浓缩，以给出产物中间体12，将其不经进一步纯化而用于下一步骤。

向中间体12(183g)在CH₃CN(1000mL)中的溶液中添加3-氨基哌啶-2,6-二酮(1.2eq)和三乙胺(80g)，并将反应混合物在80℃下搅拌。如通过TLC检测到中间体12完全消耗之后，将混合物冷却至室温，然后添加乙酸乙酯(1000mL)和水(1000mL)。将混合物搅拌10-20min，并将所得沉淀过滤并用己烷洗涤。然后将固体在干燥器中在真空下干燥(过夜)以产生呈固体的中间体6(142g)，将其不经进一步纯化而用于下一步骤。

实例5

使用实例1-4和WO 2017/176957中所述的程序以及本领域已知的方法来制备以下本披露的化合物。

化合物1：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝996.00；计算值：996.02；R_t＝4.00min。

化合物2：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝921.46；计算值：921.89；R_t＝5.16min。

化合物3：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝897.53；计算值：897.87；R_t＝4.98min；¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ7.74(dd,J＝7.7,1.1Hz,1H),7.63-7.54(m,3H),7.49(t,J＝7.6Hz,1H),7.41(t,J＝7.2Hz,1H),7.21-7.12(m,2H),6.80(d,J＝1.8Hz,1H),5.24-5.11(m,2H),4.62-4.42(m,4H),3.69-3.55(m,1H),3.01-2.85(m,2H),2.85-2.74(m,1H),2.67-2.54(m,1H),2.51(t,J＝6.8Hz,2H),2.24-2.13(m,1H),2.10-1.98(m,1H),1.98-1.67(m,7H),1.64-1.40(m,4H),1.25-1.10(m,2H),0.88(s,9H)。

化合物5：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝936.54；计算值：936.91；R_t＝4.06min。

化合物6：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝947.54；计算值：947.93；R_t＝5.44min；¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ7.76(dd,J＝7.6,1.1Hz,1H),7.71-7.58(m,3H),7.55-7.44(m,2H),7.40(ddd,J＝8.6,7.3,1.6Hz,1H),7.16(td,J＝8.0,1.2Hz,1H),7.10(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),6.78(d,J＝2.0Hz,1H),5.17(dd,J＝13.3,5.2Hz,1H),5.11(d,J＝11.2Hz,1H),4.72(d,J＝11.2Hz,1H),4.55-4.40(m,2H),4.06-3.91(m,2H),3.40(t,J＝10.3Hz,2H),3.05-2.85(m,2H),2.85-2.72(m,2H),2.53(qd,J＝13.3,4.7Hz,1H),2.25-2.12(m,2H),2.02-1.71(m,19H),1.71-1.59(m,2H),1.59-1.44(m,1H),1.31-1.13(m,2H)。

化合物7：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝922.52；计算值：922.88；R_t＝4.24min。

化合物8：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝938.54；计算值：938.92；R_t＝4.38min。

化合物9：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝935.52；计算值：935.92；R_t＝5.47min。

化合物10：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝961.54；计算值：961.96；R_t＝5.92min。

化合物11：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝905.50；计算值：905.85；R_t＝5.07min；¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ7.76(dd,J＝7.7,1.0Hz,1H),7.66-7.58(m,2H),7.54-7.46(m,2H),7.39(ddd,J＝8.5,7.3,1.5Hz,1H),7.16(td,J＝8.1,1.2Hz,1H),7.11(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),6.78(d,J＝1.9Hz,1H),5.17(dd,J＝13.3,5.2Hz,1H),5.00(d,J＝11.0Hz,1H),4.79(d,J＝11.0Hz,1H),4.58-4.41(m,2H),4.00-3.84(m,2H),3.55-3.44(m,1H),3.42-3.33(m,1H),3.08-2.96(m,1H),2.97-2.86(m,1H),2.86-2.73(m,2H),2.53(qd,J＝13.2,4.7Hz,1H),2.37(s,6H),2.24-2.08(m,2H),2.03-1.81(m,5H),1.81-1.60(m,4H),1.58-1.42(m,1H),1.29-1.13(m,2H)。

化合物12：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝893.48；计算值：893.84；R_t＝4.85min；¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ7.76(dd,J＝7.6,1.1Hz,1H),7.69-7.60(m,2H),7.55-7.46(m,2H),7.40(ddd,J＝8.5,7.2,1.5Hz,1H),7.19(td,J＝8.1,1.2Hz,1H),7.10(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),6.79(d,J＝1.9Hz,1H),5.18(dd,J＝13.3,5.2Hz,1H),5.07(d,J＝11.0Hz,1H),4.80(dd,J＝11.1,2.1Hz,1H),4.57-4.41(m,2H),4.30(p,J＝7.6Hz,1H),4.04-3.87(m,1H),3.61-3.50(m,1H),3.46-3.35(m,1H),3.29-3.15(m,2H),3.05-2.85(m,2H),2.85-2.73(m,2H),2.65-2.40(m,3H),2.24-2.11(m,3H),2.06-1.80(m,6H),1.76(d,J＝12.6Hz,2H),1.73-1.58(m,2H),1.51(q,J＝13.8Hz,1H),1.27-1.13(m,2H)。

化合物13：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝945.55；计算值：975.98；R_t＝6.01min；¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ7.76(dd,J＝7.7,1.1Hz,1H),7.70(s,1H),7.67-7.60(m,2H),7.55-7.46(m,2H),7.40(ddd,J＝8.5,7.2,1.5Hz,1H),7.16(td,J＝8.1,1.2Hz,1H),7.11(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H),6.80(d,J＝1.9Hz,1H),5.17(dd,J＝13.3,5.2Hz,1H),5.09(d,J＝11.1Hz,1H),4.72(d,J＝11.1Hz,1H),4.56-4.40(m,2H),4.06-3.92(m,2H),3.40(t,J＝10.8Hz,2H),3.06-2.84(m,2H),2.84-2.73(m,1H),2.68(d,J＝14.1Hz,1H),2.53(qd,J＝13.2,4.7Hz,1H),2.24-2.12(m,1H),2.13-2.00(m,2H),2.00-1.87(m,8H),1.85(d,J＝3.4Hz,1H),1.84-1.72(m,6H),1.71-1.56(m,3H),1.50-1.28(m,3H),1.01(s,3H),0.76(s,3H)。

化合物14：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝931.58；计算值：931.48；R_t＝5.27min；¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ7.76(dd,J＝7.7,1.1Hz,1H),7.68(s,1H),7.62(dd,J＝7.7,1.1Hz,1H),7.55-7.44(m,3H),7.25-7.11(m,2H),7.10(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),6.78(d,J＝2.0Hz,1H),5.17(dd,J＝13.3,5.2Hz,1H),5.11(d,J＝11.2Hz,1H),4.70(d,J＝11.2Hz,1H),4.56-4.41(m,2H),4.05-3.91(m,2H),3.40(t,J＝11.1Hz,2H),3.05-2.85(m,2H),2.85-2.74(m,2H),2.53(qd,J＝13.2,4.7Hz,1H),2.23-2.13(m,2H),2.02-1.84(m,11H),1.86-1.71(m,8H),1.72-1.58(m,2H),1.52(q,J＝13.7Hz,1H),1.30-1.13(m,2H)。

化合物15：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝935.52；计算值：935.92；R_t＝4.81min。

化合物16：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝949.54；计算值：949.95；R_t＝4.86min。

化合物17：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝905.54；计算值：905.44；R_t＝4.83min；¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.18(d,J＝7.8Hz,1H),7.76(dd,J＝7.7,1.1Hz,1H),7.62(dd,J＝7.7,1.1Hz,1H),7.55-7.45(m,3H),7.24-7.11(m,3H),7.10(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),6.78(d,J＝1.9Hz,1H),5.16(dd,J＝13.3,5.2Hz,1H),5.12(d,J＝11.1Hz,1H),4.78(d,J＝11.2Hz,1H),4.56-4.40(m,2H),4.02-3.90(m,1H),3.86-3.75(m,1H),3.73-3.59(m,1H),3.46-3.34(m,2H),3.05-2.82(m,3H),2.84-2.73(m,1H),2.63-2.44(m,2H),2.25-2.12(m,2H),2.05-1.83(m,7H),1.83-1.43(m,11H),1.34-1.16(m,3H),1.03-0.88(m,1H)。

化合物22：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝935.48；计算值：935.92；R_t＝4.73min。

化合物23：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝907.48；计算值：907.87；R_t＝4.60min。

化合物24：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝943.47；计算值：943.90；R_t＝6.42min。

化合物25：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝861.56；计算值：861.41；R_t＝4.36min。

化合物26：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝877.53；计算值：877.86；R_t＝4.60min。

化合物27：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝843.55；计算值：843.42；R_t＝4.18min。

化合物28：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝945.48；计算值：945.87；R_t＝6.24min。

化合物29：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝921.57；计算值：921.89；R_t＝4.70min。

化合物30：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝935.56；计算值：935.92；R_t＝5.27min。

化合物31：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝961.59；计算值：961.96；R_t＝5.81min。

化合物32：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝893.53；计算值：893.84；R_t＝4.62min。

化合物33：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝919.54；计算值：919.88；R_t＝4.93min。

化合物34：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝1178.07；计算值：1178.30；R_t＝6.72min。

化合物35：LC-MS(ESI)m/z(M+2H)⁺＝629.12；计算值：629.16；R_t＝5.63min。

化合物36：LC-MS(ESI)m/z(M+2H)⁺＝635.46；计算值：635.66；R_t＝5.05min。

化合物37：LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝875.45；计算值：875.90；R_t＝6.11min。

化合物38LC-MS(ESI)m/z(M+H)⁺＝951.52；计算值：951.94；R_t＝7.33min；¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ7.90(s,1H),7.76(dd,J＝7.6,1.0Hz,1H),7.67-7.60(m,2H),7.51(t,J＝7.6Hz,1H),7.41-7.35(m,2H),7.32(t,J＝8.4Hz,1H),7.27-7.16(m,2H),5.17(dd,J＝13.3,5.2Hz,1H),4.70(d,J＝7.8Hz,1H),4.57-4.42(m,2H),4.31(d,J＝7.7Hz,1H),4.10-3.99(m,2H),3.94(d,J＝9.3Hz,1H),3.48-3.38(m,2H),3.07-2.97(m,1H),2.98-2.84(m,2H),2.84-2.72(m,2H),2.54(qd,J＝13.3,4.7Hz,2H),2.19(ddq,J＝10.4,5.3,2.6Hz,1H),2.06-1.91(m,10H),1.75-1.57(m,3H),1.35-1.26(m,2H),0.93(s,9H)。

实例6

细胞生长抑制

在4天的增殖测定中确定本披露的代表性化合物对细胞活力的作用。参见表4。在37℃下并在5％CO₂气氛下，将细胞保持在适当的含有10％FBS的培养基中。此外，表5中还包括MDM2抑制剂(化合物A；参见US 8,629,141的化合物实例22)和已知的MDM2降解剂(化合物D，参见WO 2017/0176957的化合物175)对不同细胞系的细胞活力的作用。与化合物A和化合物D相比，本披露的化合物4和化合物6在所有经测试的细胞系中惊人地更有效。化合物A的结构是：

化合物D的结构是：

将细胞以2,000-3,000个细胞/孔的密度接种在100μL培养基中的96孔平底(Corning COSTAR，康宁公司(Corning)，纽约，目录号3595)中。将化合物在适当的培养基中连续稀释，并且将100μL稀释的化合物添加到细胞板的适当孔中。添加化合物后，将细胞在37℃在5％CO₂的气氛中孵育4天。根据制造商的说明书，使用WST(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺苯基)-2H-四氮唑，单钠盐)细胞计数-8试剂盒(同仁分子技术公司(Dojindo Molecular Technologies,Inc.)，罗克维尔(Rockville)，马里兰州)确定细胞活力。

以10％(v/v)的最终浓度将WST-8试剂添加至每个孔中，然后将板在37℃下孵育1-2小时以显色。使用SPECTRAmax PLUS酶标仪(分子仪器公司(Molecular Devices)，森尼维耳市(Sunnyvale)，加利福尼亚州)在450nm处测量吸光度。将读数针对DMSO处理的细胞进行归一化，并使用GraphPad Prism 5软件(GraphPad软件公司(GraphPad Software)，拉荷亚(La Jolla)，加利福尼亚州)通过非线性回归(四参数S形曲线拟合，用可变斜率、最小二乘拟合且无约束)分析来计算半最大抑制浓度(IC₅₀)。

表4

表5

实例7

LNCaP和22Rv1人前列腺异种移植模型的体内功效研究用胰蛋白酶(0.25％)-EDTA(0.53mM)(GIBCO^TM，英杰公司(Invitrogen Corp.)收获LNCaP(人前列腺)肿瘤细胞，添加生长培养基并将细胞置于冰上。将细胞样品与锥虫蓝(GIBCO^TM，英杰公司(Invitrogen Corp.)1:1混合，并在血细胞计数器上计数以确定活/死细胞的数量。将细胞用1X PBS(GIBCO^TM，英杰公司(Invitrogen Corp.))洗涤两次，并重悬于1:1PBS和Matrigel(BD生命科学公司(BDBiosciences)，英杰公司(Invitrogen Corp.))的冰冷混合物中，使最终Matrigel蛋白浓度为5mg/ml。以0.1ml Matrigel中5x10⁶个细胞将LNCaP肿瘤接种到雄性C.B-17SCID小鼠中。将细胞s.c.注射到每只小鼠的肋腹区域。使用卡尺以二维测量在小鼠中生长的肿瘤的大小。肿瘤体积(mm³)＝(A x B²)/2，其中A和B分别是肿瘤的长度和宽度(以mm为单位)。在治疗期间，每周测量两次或三次肿瘤体积和体重。停止治疗后，每周至少测量一次肿瘤体积和体重。在开始治疗之前，允许肿瘤生长到100-200mm³的体积。将具有可接受大小范围内的肿瘤的小鼠随机分配到治疗组中，每组7只小鼠。将实验化合物在25％PEG 400:9％CremophorEL:66％PBS的溶液中静脉内给予，每周一次，持续5周。使用类似的方案，在小鼠的22Rv1人前列腺癌模型中评估化合物4和化合物6的抗肿瘤活性。参见图1和图2。

实例8

RS4；11人ALL异种移植模型中的体内功效研究使RS4；11肿瘤在悬浮液中生长。将细胞样品与锥虫蓝(GIBCO^TM，英杰公司(Invitrogen Corp.)1:1混合，并在血细胞计数器上计数以确定活/死细胞的数量。将细胞用1X PBS(GIBCO^TM，英杰公司(Invitrogen Corp.))洗涤两次，并重悬于1:1PBS和Matrigel(BD生命科学公司(BD Biosciences)，英杰公司(Invitrogen Corp.))的冰冷混合物中，使最终Matrigel蛋白浓度为5mg/mL。以0.1mLMatrigel中5x10⁶个细胞将RS4；11肿瘤接种到雌性C.B-17SCID小鼠中。将细胞s.c.注射到每只小鼠的肋腹区域。使用卡尺以二维测量在小鼠中生长的肿瘤的大小。肿瘤体积(mm³)＝(A x B²)/2，其中A和B分别是肿瘤的长度和宽度(以mm为单位)。在治疗期间，每周测量两次或三次肿瘤体积和体重。停止治疗后，每周至少测量一次肿瘤体积和体重。在开始治疗之前，允许肿瘤生长至60-140mm³的体积。将具有可接受大小范围内的肿瘤的小鼠随机分配到治疗组中，每组5只小鼠。将化合物4和化合物6在25％PEG 400:9％Cremophor EL:66％PBS的溶液中静脉内给予，每周三次，持续2周；并在PEG 200的溶液中口服给予，每周5次，持续2周。参见图3。

实例9

存活研究

适应

雌性NOD SCID(NOD.CB17-Prkdc^scid/NCrHsd)小鼠获得自美国Envigo公司。在8-10周龄时，用从UM医院药房获得的并用无菌盐水(0.9％氯化钠NDC 0409-4888-06)溶解至浓度为15mg/mL的150mg/kg环磷酰胺(CPM)(NDC 10019-956-01，巴克斯特医疗保健公司(Baxter Healthcare Corporation)，迪尔菲尔德(Deerfield)，伊利诺斯州)对小鼠进行预处理。在两天间隔24小时向小鼠IP注射10ul/g体重的体积。适应开始时在每个笼子中提供食物胶(diet gel)以减轻治疗效果，随后在整个实验过程中提供食物胶。

细胞接种

第二天，即第二剂量CPM后24小时，经由侧尾静脉向每只动物注射0.15mL中的5x10⁶RS4；11细胞。RS4；11细胞获得自ATCC(证明无小鼠和人类病毒)，并在5％CO₂培养箱中、在补充有青霉素/链霉素(生命技术公司(Lifetech))和10％胎牛血清(Sigma(西格玛公司))的RPMI培养基中生长。为了注射，将细胞在PBS中洗涤两次，并以3.3x10⁷个RS4；11细胞/mL的浓度重悬在无菌盐水中。

治疗

细胞注射后十三天，将小鼠随机分配到9-10只小鼠的治疗组，并使其适应其笼伴侣。第二天，即细胞注射后两周(治疗第1天，肿瘤第15天)开始治疗。将化合物4和化合物6在25％PEG 400:9％Cremophor EL:66％PBS的溶液中静脉内给予，并在PEG 200的溶液中口服给予。评估

每天检查小鼠，并且每周称重3次。当疾病的第一体征出现后，每天对所有小鼠称重。即将发生疾病的体征是体重减轻、驼背和肮脏或苍白的外表、活动能力下降、后肢部分瘫痪、腹部肿胀、眼睛问题、呼吸问题。当动物体重减轻>20％、后肢完全瘫痪、或一个个体中出现多种症状时，对该动物实施安乐死。用过量的CO₂对小鼠实施安乐死。取出脾脏，放尺子一起拍照，称重并分为3部分，以进行：1)福尔马林固定，用于石蜡切片；2)包埋入在OCT培养基的模具中，用于冷冻切片；3)微量离心管中液氮速冻切片，用于后续分析。取出胸骨并固定在福尔马林中，用于骨髓石蜡切片。参见图4和图5。

实例10

蛋白质印迹分析

用化合物4和化合物6(MDM2降解剂)或用化合物B和化合物C(MDM2抑制剂)将RS4；11细胞处理2小时。使用特异性抗体探测MDM2和p53蛋白。将GAPDH用作上样对照。免疫印迹分析显示化合物4和化合物6降低了RS4；11细胞中的MDM2蛋白水平并增加了p53蛋白水平，而化合物B和化合物C增加了MDM2蛋白水平和p53蛋白水平。参见图6。化合物B(参见US 8,629,141的化合物实例24)和化合物C的结构是：

用化合物4和化合物D(MDM2降解剂)或用化合物A(MDM2抑制剂)将22RV1细胞处理2小时。使用特异性抗体探测MDM2和p53蛋白。将GAPDH用作上样对照。免疫印迹分析显示化合物4和化合物D降低了22RV1细胞中的MDM2蛋白水平并增加了p53蛋白水平，而化合物A增加了MDM2蛋白水平和p53蛋白水平。参见图7。

实例11

药代动力学

在小鼠中评估化合物4和6的药代动力学。表6提供了口服和IV剂量数以及相关的药代动力学参数。

表6

在单独的PK实验中，在分别于表7-10示出的时间点口服50mg/kg剂量后的小鼠中，评估了化合物D以及化合物4、6和14的血浆浓度。

表7

表8

表9

表10

应理解的是，前述实施例和示例并非旨在于任何方面限制本披露的范围，并且本文提出的权利要求旨在涵盖所有实施例和示例，无论在本文中是否明确示出。

本文引用的所有专利和出版物均通过引用以其全文完全并入。

Claims (85)

1.一种具有式I的化合物：

其中：

R^1a和R^1b独立地选自由以下组成的组：氢、氟和氯；

R^2a和R^2b独立地选自由以下组成的组：氢、氟和氯；

R^3a是-CH₂C(CH₃)₃；

R^3b是氢；或

R^3a和R^3b与它们所附接的碳原子一起形成未经取代的或被一个或两个甲基基团取代的环丁基、环戊基或环己基基团；

R⁴选自由以下组成的组：氢、甲基和乙基；

X选自由以下组成的组：

其中向右边伸出的键附接至-C(＝O)-Y-L-Z-A；

每个R⁵独立地选自由以下组成的组：氢和甲基；

R⁶选自由以下组成的组：氢、氟、氯、甲基和甲氧基；

Y选自由以下组成的组：

-N(H)-、

其中向右边伸出的键附接至-L-Z-A；

R⁷选自由以下组成的组：氢、羟基和甲基；

L选自由以下组成的组：-(CH₂)_m-和-(CH₂CH₂O)_n-

m是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；

n是2、3、4、5或6；

Z选自由以下组成的组：-C≡C-、-NH-、-O-和

或

Z不存在；

A选自由以下组成的组：

或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

2.如权利要求1所述的化合物，其中R^3a是-CH₂C(CH₃)₃并且R^3b是氢，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

3.如权利要求1所述的化合物，其中R^3a和R^3b与它们所附接的碳原子一起形成未经取代的环己基基团，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

4.如权利要求1所述的化合物，其中R^3a和R^3b与它们所附接的碳原子一起形成被一个或两个甲基基团取代的环己基基团，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

5.如权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中R⁴是氢。

6.如权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中R⁴是甲基。

7.如权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中X是X-1，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

8.如权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中X是X-2，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

9.如权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中X是X-3，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

10.如权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中X是X-4，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

11.如权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中X是X-5，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

12.如权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中X是X-6，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

13.如权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中X是X-7，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

14.如权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中X是X-8，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

15.如权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中X是X-9，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

16.如权利要求1-9、11、12或14中任一项所述的化合物，其中R⁵是氢，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

17.如权利要求1-9、11、12或14中任一项所述的化合物，其中R⁵是甲基，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

18.如权利要求1-17中任一项所述的化合物，其中Y是-N(H)-，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

19.如权利要求1-17中任一项所述的化合物，其中Y是Y-2，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

20.如权利要求19所述的化合物，其中R⁷是氢，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

21.如权利要求19所述的化合物，其中R⁷是甲基，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

22.如权利要求1-17中任一项所述的化合物，其中Y是Y-3，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

23.如权利要求1-22中任一项所述的化合物，其中L是-(CH₂)_m-，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

24.如权利要求23所述的化合物，其中m是0、1、2或3，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

25.如权利要求1-22中任一项所述的化合物，其中L是-(CH₂CH₂O)_n-，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

26.如权利要求1-25中任一项所述的化合物，其中Z是-C≡C-，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

27.如权利要求1-25中任一项所述的化合物，其中Z是

或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

28.如权利要求1-25中任一项所述的化合物，其中Z不存在，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

29.如权利要求1-28中任一项所述的化合物，其中A是A-1，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

30.如权利要求1-28中任一项所述的化合物，其中A是A-2，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

31.如权利要求1-28中任一项所述的化合物，其中A是A-3，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

32.如权利要求1所述的化合物，该化合物具有式II：

或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

33.如权利要求32所述的化合物，其中R^2a选自由氟和氯组成的组，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

34.如权利要求32所述的化合物，其中R^2b选自由氟和氯组成的组，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

35.如权利要求32-34中任一项所述的化合物，其中R⁴是氢。

36.如权利要求32-34中任一项所述的化合物，其中R⁴是甲基。

37.如权利要求32-36中任一项所述的化合物，其中X是X-1，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

38.如权利要求32-36中任一项所述的化合物，其中X是X-2，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

39.如权利要求32-36中任一项所述的化合物，其中X是X-3，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

40.如权利要求32-36中任一项所述的化合物，其中X是X-4，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

41.如权利要求32-36中任一项所述的化合物，其中X是X-5，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

42.如权利要求32-36中任一项所述的化合物，其中X是X-6，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

43.如权利要求32-36中任一项所述的化合物，其中X是X-7，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

44.如权利要求32-36中任一项所述的化合物，其中X是X-8，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

45.如权利要求32-36中任一项所述的化合物，其中X是X-9，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

46.如权利要求32-39、41、42或44中任一项所述的化合物，其中R⁵是氢，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

47.如权利要求32-39、41、42或44中任一项所述的化合物，其中R⁵是甲基，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

48.如权利要求1所述的化合物，该化合物选自由以下组成的组：表1的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

49.如权利要求48所述的化合物，该化合物是(3'R,4'S,5'R)-6"-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-N-((1r,4R)-4-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)乙炔基)哌啶-1-羰基)环己基)-2"-氧代二螺[环己烷-1,2'-吡咯烷-3',3"-吲哚啉]-5'-甲酰胺，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

50.如权利要求48所述的化合物，该化合物是(3'R,4'S,5'R)-6"-氯-4'-(3-氯-2-氟苯基)-N-(4-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)乙炔基)哌啶-1-羰基)双环[2.2.2]辛-1-基)-2"-氧代二螺[环己烷-1,2'-吡咯烷-3',3"-吲哚啉]-5'-甲酰胺，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

51.一种化合物，该化合物是2-((3R,5R,6S)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-1-((S)-1-(异丙基磺酰基)-3-甲基丁-2-基)-3-甲基-2-氧代哌啶-3-基)-N-(5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)戊-4-炔-1-基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

52.一种化合物，该化合物是(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-N-(4-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)乙炔基)哌啶-1-羰基)双环[2.2.2]辛-1-基)-5-新戊基吡咯烷-2-甲酰胺，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

53.如权利要求1-50中任一项所述的化合物，其中该药学上可接受的盐是乙烷-1,2-二磺酸盐或萘-1,5-二磺酸盐。

54.一种药物组合物，该药物组合物包含如权利要求1-53中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物、以及药学上可接受的载体。

55.一种治疗有需要的受试者的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的如权利要求1-53中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中该受试者患有癌症。

56.如权利要求55所述的方法，其中该癌症是表2的癌症中的任一种或多种。

57.如权利要求56所述的方法，其中该癌症是血液癌症。

58.如权利要求57所述的方法，其中该血液癌症是表3的癌症中的任一种或多种。

59.如权利要求55-58中任一项所述的方法，该方法进一步包括施用治疗有效量的可用于治疗癌症的第二治疗剂。

60.如权利要求54所述的药用组合物，用于在治疗癌症中使用。

61.如权利要求60所述的药物组合物，其中该癌症是表2的癌症中的任一种或多种。

62.如权利要求61所述的药物组合物，其中该癌症是血液癌症。

63.如权利要求62所述的药物组合物，其中该血液癌症是表3的癌症中的任一种或多种。

64.如权利要求1-53中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，用于在治疗癌症中使用。

65.用于如权利要求64所述使用的化合物，其中该癌症是表2的癌症中的任一种或多种。

66.用于如权利要求65所述使用的化合物，其中该癌症是血液癌症。

67.用于如权利要求66所述使用的化合物，其中该血液癌症是表3的癌症中的任一种或多种。

68.如权利要求1-53中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物用于制造治疗癌症的药物的用途。

69.如权利要求68所述的用途，其中该癌症是表2的癌症中的任一种或多种。

70.如权利要求69所述的用途，其中该癌症是血液癌症。

71.如权利要求70所述的用途，其中该血液癌症是表3的癌症中的任一种或多种。

72.一种试剂盒，该试剂盒包含如权利要求1-53中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，以及用于向患有癌症的受试者施用该化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的说明书。

73.如权利要求72所述的试剂盒，其中该癌症是表2的癌症中的任一种或多种。

74.如权利要求73所述的试剂盒，其中该癌症是血液癌症。

75.如权利要求74所述的试剂盒，其中该血液癌症是表3的癌症中的任一种或多种。

76.如权利要求72-75中任一项所述的试剂盒，该试剂盒进一步包含一种或多种另外的治疗剂。

77.一种治疗患有癌症的受试者的方法，该方法包括：

(a)确定取自该受试者的生物样品中是否存在MDM2的过表达；和

(b)如果生物样品中存在MDM2的过表达，则向该受试者施用治疗有效量的如权利要求1-53中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

78.一种鉴定患有癌症的受试者是否为接受如权利要求1-53中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗的候选者的方法，该方法包括：

(a)确定取自该受试者的生物样品中是否存在MDM2的过表达；和

(b)如果存在MDM2的过表达，则鉴定该受试者为接受治疗的候选者；或

(c)如果不存在MDM2的过表达，则鉴定该受试者不是接受治疗的候选者。

79.一种预测患有癌症的受试者的治疗结果的方法，该方法包括确定取自该受试者的生物样品中是否存在MDM2的过表达，其中：

(a)该生物样品中存在MDM2的过表达指示向该受试者施用如权利要求1-53中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐将在该受试者中产生治疗反应；和

(b)该生物样品中不存在MDM2的过表达指示向该受试者施用如权利要求1-53中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐将不会在该受试者中产生治疗反应。

80.一种方法，该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如权利要求1-53中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中：

(a)该受试者患有癌症；和

(b)该癌症的特征为具有MDM2的过表达。

81.如权利要求77-80中任一项所述的方法，其中该癌症是表2的癌症中的任一种或多种。

82.如权利要求81所述的方法，其中该癌症是血液癌症。

83.如权利要求82所述的方法，其中该血液癌症是表3的血液癌症中的任一种或多种。

84.如权利要求83所述的方法，其中该血液癌症是急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病或急性骨髓性白血病。

85.一种化合物，该化合物是3-(4-((1-((1r,4r)-4-氨基环己烷-1-羰基)哌啶-4-基)乙炔基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。

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