一种补水玻尿酸组合水位发酵美白液提取工艺
技术领域
本发明涉及提取工艺技术领域,具体为一种补水玻尿酸组合水位发酵美白液提取工艺。
背景技术
玻尿酸是D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的双糖单位玻尿酸,又称糖醛酸、透明质酸,基本结构是由两个双糖单位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的大型多糖类,与其它粘多糖不同,它不含硫。
玻尿酸具有独特的保护皮肤作用,可保持皮肤滋润光滑,细腻柔嫩,富有弹性,具有防皱、抗皱、美容保健和恢复皮肤生理功能的作用,从而在日化美妆行业具有广泛的运用,同时玻尿酸的制备提取过程是比较复杂的,在提取的过程中需要糖类和A族链球菌发酵制成,但是通常发酵过程中的发酵培养基中的糖类是一次性加入的,随着玻尿酸的生成,发酵液的粘度增加,造成溶氧量下降和产量降低的现象,同时发酵原液中含有菌体和蛋白质,需要过滤除去细菌和蛋白质,单次过滤会造成蛋白质和菌体去除不彻底的现象,同时发酵制备得到玻尿酸后,没有什么味道,而且只具有抗皱和改善皮肤的作用,在美白方面较差。
发明内容
本发明的目的在于提供一种补水玻尿酸组合水位发酵美白液提取工艺,以解决上述背景技术中提出的问题。
为了解决上述技术问题,本发明提供如下技术方案:一种补水玻尿酸组合水位发酵美白液提取工艺,包括以下步骤:步骤一,原料准备;步骤二,菌株培养;步骤三,种子培养;步骤四,摇瓶培养;步骤五,发酵培养;步骤六,乙醇沉淀;步骤七,加水溶解;步骤八,溶液过滤;步骤九,二次过滤;步骤十,助剂加入;步骤十一,成品储存;
其中在上述步骤一中,首先将固体培养基、种子培养基、发酵培养基、和A族链球菌准备好;
其中在上述步骤二中,将步骤一中准备好的A族链球菌接种到固体培养基上放入恒温箱内,在37℃的恒温下培养24h,得到单克隆菌种;
其中在上述步骤三中,将步骤二中得到的单克隆菌种利用接种针接种到容积为500ml的三角瓶内,三角瓶内装有100ml的种子培养基,将三角瓶放入摇床中培养一段时间,得到种子培养菌液;
其中在上述步骤四中,将步骤三中制备得到的菌液抽取10ml出来,注入装有100ml发酵培养基的容积为500ml的三角瓶内部,随后将三角瓶放入摇床中震荡培养一段时间,得到发酵培养菌液;
其中在上述步骤五中,取用20L的发酵罐,空罐灭菌后加入10L的发酵培养基,然后将发酵罐利用110-120℃的高温灭菌30min,随后将步骤四中培养得到的发酵培养液加入发酵罐中,发酵过程中要按照一定转速不停搅拌,同时要不停地向发酵罐内通入氧气,发酵过程中按照一定重量份数分批次补加原料,发酵一段时间后即得到发酵原液;
其中在上述步骤六中,将步骤五中得到的发酵原液装入搅拌机内,随后一边搅拌一边向搅拌机内注入适量的乙醇,充分搅拌后反应一段时间后,形成沉淀物,等待搅拌机内上层液体澄清后,将上层液体抽出,留下沉淀物;
其中在上述步骤七中,向步骤六中制备得到的沉淀物中加入适量的水,开动搅拌机,直至沉淀物完全溶于水为止;
其中在上述步骤八中,将步骤七中溶解得到的水溶液注入抽滤装置中,向装置中加入适量的珍珠岩,随后进行抽滤,去除溶液中的菌体和蛋白质;
其中在上述步骤九中,将步骤八中经过一次过滤的溶液再次放入抽滤装置,向装置中加入适量的硅藻泥,再次进行抽滤,二次过滤去除溶液中的菌体和蛋白质;
其中在上述步骤十中,将步骤九中经过二次过滤的溶液放入密封罐体内,随后向罐中加入重量份数为0.2-1份的柠檬香精和重量份数为3-5份的芦荟汁液,搅拌混合均匀从而得到美白液;
其中在上述步骤十一中,将步骤十中得到的美白液分瓶灌装后放入仓库储存。
根据上述技术方案,所述步骤一中,种子培养基由重量份数分别为10-15份的蛋白胨、10-20份的牛肉膏、1-3份的氯化钠、2-3份的磷酸氢二钾和0.3-0.5份的硫酸镁混合而成,发酵培养基由重量份数分别为10-20份的蔗糖、3-10份的葡萄糖、8-10份的蛋白胨、5-10份的酵母粉、2-3份的磷酸氢二钾、0.3-0.5份的硫酸镁和1-2份的碳酸氢钠混合而成
根据上述技术方案,所述步骤三中,摇床的转速为200r/min,培养时间为16h,培养温度为37℃。
根据上述技术方案,所述步骤四中,摇床的旋转速度为200-250r/min,培养时间为24-40h,培养温度为35-37℃。
根据上述技术方案,所述步骤五中,发酵罐中带有搅拌装置,搅拌装置转速为250-300r/min,通入氧气量为5L/min,发酵时间为24-40h,发酵过程中分三次补加蔗糖和葡萄糖,且每次间隔时间为8-10h,第一次加入重量份数为5-10份的葡萄糖和重量份数为10-20份的蔗糖,第二次加入重量份数为10-20份的葡萄糖和重量份数为20-40份的蔗糖,第三次加入重量份数为20-40份的葡萄糖和重量份数为40-80份的蔗糖。
根据上述技术方案,所述步骤六中,加入乙醇的重量份数是发酵原液重量份数的三倍,且反应时间为18h。
根据上述技术方案,所述步骤七中,搅拌机的转速为250-300r/min。
与现有技术相比,本发明所达到的有益效果是:
1.该发明通过在发酵过程中分批次的补加葡萄糖和蔗糖,避免一次性投料太多造成的细胞大量生长、耗氧过多出现的产物转换率下降现象,有利于提高玻尿酸的产量和转化率。
2.该发明通过两次过滤大大降低了溶液中菌体和蛋白质的含量,提高了产品的质量。
3.该发明通过柠檬香精和芦荟汁的加入,提升了溶液整体的香味,同时增加了溶液的美白效果,提升了该产品的美容功效。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解,并且构成说明书的一部分,与本发明的实施例一起用于解释本发明,并不构成对本发明的限制。在附图中:
图1是本发明的工艺流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
请参阅图1,本发明提供一种技术方案:
实施例1:
一种补水玻尿酸组合水位发酵美白液提取工艺,包括以下步骤:步骤一,原料准备;步骤二,菌株培养;步骤三,种子培养;步骤四,摇瓶培养;步骤五,发酵培养;步骤六,乙醇沉淀;步骤七,加水溶解;步骤八,溶液过滤;步骤九,二次过滤;步骤十,助剂加入;步骤十一,成品储存;
其中在上述步骤一中,首先将固体培养基、种子培养基、发酵培养基、和A族链球菌准备好,种子培养基由重量份数分别为10份的蛋白胨、10份的牛肉膏、1份的氯化钠、2份的磷酸氢二钾和0.3份的硫酸镁混合而成,发酵培养基由重量份数分别为10份的蔗糖、3份的葡萄糖、8份的蛋白胨、5份的酵母粉、2份的磷酸氢二钾、0.3份的硫酸镁和1份的碳酸氢钠混合而成;
其中在上述步骤二中,将步骤一中准备好的A族链球菌接种到固体培养基上放入恒温箱内,在37℃的恒温下培养24h,得到单克隆菌种;
其中在上述步骤三中,将步骤二中得到的单克隆菌种利用接种针接种到容积为500ml的三角瓶内,三角瓶内装有100ml的种子培养基,将三角瓶放入摇床中培养一段时间,得到种子培养菌液,摇床的转速为200r/min,培养时间为16h,培养温度为37℃;
其中在上述步骤四中,将步骤三中制备得到的菌液抽取10ml出来,注入装有100ml发酵培养基的容积为500ml的三角瓶内部,随后将三角瓶放入摇床中震荡培养一段时间,得到发酵培养菌液,摇床的旋转速度为200-250r/min,培养时间为24-40h,培养温度为35-37℃;
其中在上述步骤五中,取用20L的发酵罐,空罐灭菌后加入10L的发酵培养基,然后将发酵罐利用110-120℃的高温灭菌30min,随后将步骤四中培养得到的发酵培养液加入发酵罐中,发酵过程中要按照一定转速不停搅拌,同时要不停地向发酵罐内通入氧气,发酵过程中按照一定重量份数分批次补加原料,发酵一段时间后即得到发酵原液,发酵罐中带有搅拌装置,搅拌装置转速为250-300r/min,通入氧气量为5L/min,发酵时间为24-40h,发酵过程中分三次补加蔗糖和葡萄糖,且每次间隔时间为8-10h,第一次加入重量份数为5份的葡萄糖和重量份数为10份的蔗糖,第二次加入重量份数为10份的葡萄糖和重量份数为20份的蔗糖,第三次加入重量份数为20份的葡萄糖和重量份数为40份的蔗糖;
其中在上述步骤六中,将步骤五中得到的发酵原液装入搅拌机内,随后一边搅拌一边向搅拌机内注入适量的乙醇,充分搅拌后反应一段时间后,形成沉淀物,等待搅拌机内上层液体澄清后,将上层液体抽出,留下沉淀物,加入乙醇的重量份数是发酵原液重量份数的三倍,且反应时间为18h;
其中在上述步骤七中,向步骤六中制备得到的沉淀物中加入适量的水,开动搅拌机,直至沉淀物完全溶于水为止,搅拌机的转速为250-300r/min;
其中在上述步骤八中,将步骤七中溶解得到的水溶液注入抽滤装置中,向装置中加入适量的珍珠岩,随后进行抽滤,去除溶液中的菌体和蛋白质;
其中在上述步骤九中,将步骤八中经过一次过滤的溶液再次放入抽滤装置,向装置中加入适量的硅藻泥,再次进行抽滤,二次过滤去除溶液中的菌体和蛋白质;
其中在上述步骤十中,将步骤九中经过二次过滤的溶液放入密封罐体内,随后向罐中加入重量份数为0.2份的柠檬香精和重量份数为3份的芦荟汁液,搅拌混合均匀从而得到美白液;
其中在上述步骤十一中,将步骤十中得到的美白液分瓶灌装后放入仓库储存。
实施例2:
一种补水玻尿酸组合水位发酵美白液提取工艺,包括以下步骤:步骤一,原料准备;步骤二,菌株培养;步骤三,种子培养;步骤四,摇瓶培养;步骤五,发酵培养;步骤六,乙醇沉淀;步骤七,加水溶解;步骤八,溶液过滤;步骤九,二次过滤;步骤十,助剂加入;步骤十一,成品储存;
其中在上述步骤一中,首先将固体培养基、种子培养基、发酵培养基、和A族链球菌准备好,种子培养基由重量份数分别为15份的蛋白胨、20份的牛肉膏、3份的氯化钠、3份的磷酸氢二钾和0.5份的硫酸镁混合而成,发酵培养基由重量份数分别为20份的蔗糖、10份的葡萄糖、10份的蛋白胨、10份的酵母粉、3份的磷酸氢二钾、0.5份的硫酸镁和2份的碳酸氢钠混合而成;
其中在上述步骤二中,将步骤一中准备好的A族链球菌接种到固体培养基上放入恒温箱内,在37℃的恒温下培养24h,得到单克隆菌种;
其中在上述步骤三中,将步骤二中得到的单克隆菌种利用接种针接种到容积为500ml的三角瓶内,三角瓶内装有100ml的种子培养基,将三角瓶放入摇床中培养一段时间,得到种子培养菌液,摇床的转速为200r/min,培养时间为16h,培养温度为37℃;
其中在上述步骤四中,将步骤三中制备得到的菌液抽取10ml出来,注入装有100ml发酵培养基的容积为500ml的三角瓶内部,随后将三角瓶放入摇床中震荡培养一段时间,得到发酵培养菌液,摇床的旋转速度为200-250r/min,培养时间为24-40h,培养温度为35-37℃;
其中在上述步骤五中,取用20L的发酵罐,空罐灭菌后加入10L的发酵培养基,然后将发酵罐利用110-120℃的高温灭菌30min,随后将步骤四中培养得到的发酵培养液加入发酵罐中,发酵过程中要按照一定转速不停搅拌,同时要不停地向发酵罐内通入氧气,发酵过程中按照一定重量份数分批次补加原料,发酵一段时间后即得到发酵原液,发酵罐中带有搅拌装置,搅拌装置转速为250-300r/min,通入氧气量为5L/min,发酵时间为24-40h,发酵过程中分三次补加蔗糖和葡萄糖,且每次间隔时间为8-10h,第一次加入重量份数为10份的葡萄糖和重量份数为20份的蔗糖,第二次加入重量份数为20份的葡萄糖和重量份数为40份的蔗糖,第三次加入重量份数为40份的葡萄糖和重量份数为80份的蔗糖;
其中在上述步骤六中,将步骤五中得到的发酵原液装入搅拌机内,随后一边搅拌一边向搅拌机内注入适量的乙醇,充分搅拌后反应一段时间后,形成沉淀物,等待搅拌机内上层液体澄清后,将上层液体抽出,留下沉淀物,加入乙醇的重量份数是发酵原液重量份数的三倍,且反应时间为18h;
其中在上述步骤七中,向步骤六中制备得到的沉淀物中加入适量的水,开动搅拌机,直至沉淀物完全溶于水为止,搅拌机的转速为250-300r/min;
其中在上述步骤八中,将步骤七中溶解得到的水溶液注入抽滤装置中,向装置中加入适量的珍珠岩,随后进行抽滤,去除溶液中的菌体和蛋白质;
其中在上述步骤九中,将步骤八中经过一次过滤的溶液再次放入抽滤装置,向装置中加入适量的硅藻泥,再次进行抽滤,二次过滤去除溶液中的菌体和蛋白质;
其中在上述步骤十中,将步骤九中经过二次过滤的溶液放入密封罐体内,随后向罐中加入重量份数为1份的柠檬香精和重量份数为5份的芦荟汁液,搅拌混合均匀从而得到美白液;
其中在上述步骤十一中,将步骤十中得到的美白液分瓶灌装后放入仓库储存。
实施例3:
一种补水玻尿酸组合水位发酵美白液提取工艺,包括以下步骤:步骤一,原料准备;步骤二,菌株培养;步骤三,种子培养;步骤四,摇瓶培养;步骤五,发酵培养;步骤六,乙醇沉淀;步骤七,加水溶解;步骤八,溶液过滤;步骤九,二次过滤;步骤十,助剂加入;步骤十一,成品储存;
其中在上述步骤一中,首先将固体培养基、种子培养基、发酵培养基、和A族链球菌准备好,种子培养基由重量份数分别为12.5份的蛋白胨、15份的牛肉膏、2份的氯化钠、2.5份的磷酸氢二钾和0.4份的硫酸镁混合而成,发酵培养基由重量份数分别为15份的蔗糖、6份的葡萄糖、9份的蛋白胨、7.5份的酵母粉、2.5份的磷酸氢二钾、0.4份的硫酸镁和1.5份的碳酸氢钠混合而成;
其中在上述步骤二中,将步骤一中准备好的A族链球菌接种到固体培养基上放入恒温箱内,在37℃的恒温下培养24h,得到单克隆菌种;
其中在上述步骤三中,将步骤二中得到的单克隆菌种利用接种针接种到容积为500ml的三角瓶内,三角瓶内装有100ml的种子培养基,将三角瓶放入摇床中培养一段时间,得到种子培养菌液,摇床的转速为200r/min,培养时间为16h,培养温度为37℃;
其中在上述步骤四中,将步骤三中制备得到的菌液抽取10ml出来,注入装有100ml发酵培养基的容积为500ml的三角瓶内部,随后将三角瓶放入摇床中震荡培养一段时间,得到发酵培养菌液,摇床的旋转速度为200-250r/min,培养时间为24-40h,培养温度为35-37℃;
其中在上述步骤五中,取用20L的发酵罐,空罐灭菌后加入10L的发酵培养基,然后将发酵罐利用110-120℃的高温灭菌30min,随后将步骤四中培养得到的发酵培养液加入发酵罐中,发酵过程中要按照一定转速不停搅拌,同时要不停地向发酵罐内通入氧气,发酵过程中按照一定重量份数分批次补加原料,发酵一段时间后即得到发酵原液,发酵罐中带有搅拌装置,搅拌装置转速为250-300r/min,通入氧气量为5L/min,发酵时间为24-40h,发酵过程中分三次补加蔗糖和葡萄糖,且每次间隔时间为8-10h,第一次加入重量份数为7.5份的葡萄糖和重量份数为15份的蔗糖,第二次加入重量份数为15份的葡萄糖和重量份数为30份的蔗糖,第三次加入重量份数为30份的葡萄糖和重量份数为60份的蔗糖;
其中在上述步骤六中,将步骤五中得到的发酵原液装入搅拌机内,随后一边搅拌一边向搅拌机内注入适量的乙醇,充分搅拌后反应一段时间后,形成沉淀物,等待搅拌机内上层液体澄清后,将上层液体抽出,留下沉淀物,加入乙醇的重量份数是发酵原液重量份数的三倍,且反应时间为18h;
其中在上述步骤七中,向步骤六中制备得到的沉淀物中加入适量的水,开动搅拌机,直至沉淀物完全溶于水为止,搅拌机的转速为250-300r/min;
其中在上述步骤八中,将步骤七中溶解得到的水溶液注入抽滤装置中,向装置中加入适量的珍珠岩,随后进行抽滤,去除溶液中的菌体和蛋白质;
其中在上述步骤九中,将步骤八中经过一次过滤的溶液再次放入抽滤装置,向装置中加入适量的硅藻泥,再次进行抽滤,二次过滤去除溶液中的菌体和蛋白质;
其中在上述步骤十中,将步骤九中经过二次过滤的溶液放入密封罐体内,随后向罐中加入重量份数为0.5份的柠檬香精和重量份数为4份的芦荟汁液,搅拌混合均匀从而得到美白液;
其中在上述步骤十一中,将步骤十中得到的美白液分瓶灌装后放入仓库储存。
将上述实施例所得的美白液与传统美白液分别进行对比,得到结果如下表:
|
实施例1 |
实施例2 |
实施例3 |
对比例 |
味道 |
具有柠檬香味 |
具有柠檬香味 |
具有柠檬香味 |
无味 |
蛋白质去除率(%) |
100 |
99.9 |
100 |
94 |
基于上述,本发明的优点在于,本发明在发酵制备提取的过程中原料不是一次性加入,是分三次间隔补加,且三次的加入量依次递增,避免了一次性加入原料太多细菌繁殖过快,原液浓度变大,粘度变大,从而氧气的溶解量降低,并且通入的氧气消耗供不应求,从而造成菌体活性降低,从而玻尿酸的转换率降低的现象,有利于提高玻尿酸的产量和菌体的转化率,同时对溶液采取两次过滤,进一步的去除溶液中的菌体和蛋白质,提高了玻尿酸的纯度,提高了产品的质量,同时在溶液中加入的柠檬香精和芦荟汁,制成美白液,不仅提高了产品的香味,同时增加了产品美白的效果,极大地提升了产品的美容功效。
需要说明的是,在本文中,诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来,而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。