CN111926022A - 水稻耐盐胁迫基因OsNBR1的克隆及应用 - Google Patents

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CN111926022A CN202010755275.1A CN202010755275A CN111926022A CN 111926022 A CN111926022 A CN 111926022A CN 202010755275 A CN202010755275 A CN 202010755275A CN 111926022 A CN111926022 A CN 111926022A
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osnbr1
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ala
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徐正一
南楠
刘雨同
于晓明
黄双占
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8273—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for drought, cold, salt resistance

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Abstract

本发明公开了一种水稻耐盐胁迫基因OsNBR1，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示；一种植物表达载体，它插入了所述的水稻耐盐胁迫基因OsNBR1；所述的水稻基因OsNBR1在提高水稻对盐胁迫耐受能力方面的应用。本发明通过农杆菌介导的转化方法，将OsNBR1过表达载体成功转化水稻，获得了纯合的T2代转基因水稻植株；发现在盐胁迫条件下，OsNBR1过表达植株OsNBR1OX‑1、OsNBR1OX‑2和OsNBR1OX‑3的存活率显著高于野生型Kitaake的存活率，说明水稻中的基因OsNBR1能够提高水稻对盐胁迫的耐受性。

Description

水稻耐盐胁迫基因OsNBR1的克隆及应用
技术领域
本发明属于植物分子生物学与植物基因工程技术领域，具体涉及水稻耐盐胁迫基因OsNBR1的克隆及应用。
背景技术
土壤盐碱化使得耕地面积缩减，也是导致粮食危机的原因之一。据联合国教科文组织和联合国粮农组织的不完全统计，全世界有约9.45亿公顷的土地受盐害的影响，大约占了全球农业用地面积的20%。中国是盐碱地大国，现有内陆盐碱面积近1亿公顷，滩涂面积234万公顷，盐碱地面积位居世界第三，主要分布在西北、东北、华北及滨海地区。中国东北地区盐碱土的主要形式是苏打盐碱地，面积高达756万公顷。其中，吉林省西部12个市县盐碱土面积为160多万公顷。面对人口数目不断增长，可使用的耕地面积有限，土地的不合理灌溉利用使土壤次生盐渍化现象日益严重和水稻产量很难显著提高等实际生产问题，开发利用好沿海滩涂以及内陆的盐碱地资源是保障耕地面积的有效途径之一。水稻是中度盐敏感作物[6]，生长在水环境中，种植水稻可以对土壤的可溶性盐碱起到淋溶的作用。因此，水稻是开发沿海滩涂和盐碱地的首选粮食作物。
通过遗传改良提高水稻耐盐能力是提高水稻种植面积和产量的有效途径之一。目前在育种上利用的耐盐QTL主要是位于水稻第1号染色体上的qSKC-1和Saltol两个位点。随着分子生物技术的发展，利用突变体来分离和挖掘水稻的耐盐胁迫基因，并且用于水稻基因工程进行辅助育种和耐盐胁迫改良对有效控制盐胁迫对水稻的危害、提高水稻产量和改良水稻品质具有极其重要的意义。NBR1（NEIGHBOR OF BRCA1）是进化上保守的参与生物体选择性自噬的一类蛋白，作为受体参与过氧化物酶体、线粒体、蛋白聚集体等选择性自噬过程。目前已有研究表明NBR1通过参与蛋白聚集体的降解参与热胁迫等非生物胁迫过程，并且这些研究集中在模式植物拟南芥，但还未见利用基因OsNBR1提高水稻抗盐性的报道。
发明内容
本发明目的是为解决土壤次生盐渍化现象日益严重、水稻产量很难显著提高的问题，而提供一种水稻耐盐胁迫基因OsNBR1的克隆及应用。
一种水稻耐盐胁迫基因OsNBR1，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示。
一种植物表达载体，它插入了所述的水稻耐盐胁迫基因OsNBR1。
所述的水稻耐盐胁迫基因OsNBR1在提高水稻盐胁迫耐受能力方面的应用。
本发明提供了一种水稻耐盐胁迫基因OsNBR1，其核苷酸序列如序列表SEQ IDNO.1所示；一种植物表达载体，它插入了所述的水稻耐盐胁迫基因OsNBR1；所述的水稻耐盐胁迫基因OsNBR1在提高水稻盐胁迫耐受能力方面的应用。本发明通过农杆菌介导的转化方法，将OsNBR1过表达载体成功转化水稻，获得了纯合的T2代转基因水稻植株；发现在盐胁迫条件下，OsNBR1过表达植株OsNBR1OX-1、OsNBR1OX-2和OsNBR1OX-3的存活率显著高于野生型Kitaake的存活率，说明水稻中的基因OsNBR1能够提高水稻对盐胁迫的耐受性。
附图说明
图1 遗传转化载体pCsV1300的结构示意图；
图2 转基因水稻植株与野生型Kitaake中水稻耐盐胁迫相关基因OsNBR1表达量检测结果示意图；
图3 转基因水稻植株与野生型Kitaake盐胁迫处理后的表型示意图；
图4 转基因水稻植株与野生型Kitaake盐胁迫处理后的存活率统计示意图。
具体实施方式
实施例1水稻耐盐胁迫基因OsNBR1的克隆
前期研究发现：利用水稻基因激活标签突变体库（activation-tagging pool；Oryza sativa L. var Kitaake背景）进行盐胁迫筛选，从中筛选到了一个对盐胁迫敏感的突变体L10，其存活率显著低于野生型Kitaake。通过交错式热不对称 PCR（thermal asymmetricinterlaced polymerase train reaction，简称TAIL-PCR）的方法，确定了T-DNA插入到基因OsNBR1（OsKitaake04g168900）的第六个外显子中，通过RT-PCR的方法没有检测到OsNBR1的转录本，说明T-DNA的插入影响了OsNBR1的正常转录，因此，L10是OsNBR1的缺失性突变体，由于OsNBR1的突变导致L10对盐胁迫耐受性下降，说明OsNBR1在水稻盐胁迫应答过程中起到积极的作用。在数据库Phytozome 12（https://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html）中，我们查找到OsNBR1基因全长cDNA序列。OsNBR1基因开放阅读框（ORF）核苷酸序列长度为2646 bp，编码一种由881个氨基酸组成的蛋白。
1、RNA的提取
利用TRIzol Reagent（Invitrogen, USA）提取水稻叶片的总RNA。
1）将水稻品种水稻Kitaake（Oryza sativa L. var Kitaake）于人工气候室（200μM photons m-2s-1光强；14 h/10 h光周期；25℃温度；60%相对湿度），培养至三叶一心期，取水稻叶片，放入装有2粒磁珠的2 ml管中，置于液氮中；
2）使用组织破碎仪进行磨样，磨样所需的适配器需放入液氮中提前进行预冷，将装有样品的管子装入适配器中，上机，频率为1400 rpm/s，磨样时间一般为90 s，将样品磨至粉末。
3）向样品管中加入1ml TRIzol Reagent提取液，使用涡旋仪将样品和提取液迅速混匀。
4）将裂解液放置15-25℃条件下10 min，以保证样品被充分裂解，同时用磁铁将磁珠吸出。
5）移至台式高速离心机，12,000 ×g 4℃离心10 min。
6）吸取上清液至新的1.5 ml管中，每个样品中加入0.2 ml的氯仿。盖紧盖子，使用涡旋仪充分震荡每个样品30 s，15-25℃静置2-15 min。。
7）在2-8℃条件下，12,000×g离心15 min。
8）离心后会产生3个分层，将最上层无色液体转移到新的离心管中。
9）每个样品中加入500 ml的异丙醇，上下颠倒，充分混匀。在15-25℃放置5-10min，使RNA充分沉淀。
10）在2-8℃条件下，12,000×g离心10 min，去除上清。
11）加入1 ml用DEPC水配制的75%乙醇，上下颠倒充分漂洗RNA沉淀。
12）在2-8℃条件下，7500×g离心5 min，去除上清。
13）在2-8℃条件下，7500×g离心短暂离心，用枪将多余的乙醇吸走，在空气中干燥5-10 min（不能太干，否则不易溶解）。
14）加入30 μl DEPC处理水，将RNA充分溶解，
15）用NanoDrop 2000测定各样品浓度，A260/A280值在2.0-2.2为合格。取2 μl RNA进行琼脂糖凝胶电泳进行检测。样品保存于-80℃超低温冰箱，待用。
2、cDNA的合成
取2 μg RNA 进行反转录，使用TransScript One-Step gDNA Removal and cDNASynthesis SuperMix反转录试剂盒（TransGen Biotech, China），将RNA反转录为cDNA。
cDNA合成反应体系如下表1：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
将上述液体轻轻混匀，简单离心。反应条件为42℃ 30 min，85℃ 5 s终止反应，用NanoDrop 2000测定cDNA浓度。
3、OsNBR1基因cDNA全长的获得
根据OsNBR1在数据库中的cDNA序列，利用Primer 5.0软件，设计可以扩增全长ORF的一对特异性引物（OsNBR1-F/OsNBR1-R），为了方便下一步载体的构建，在引物5’端添加限制性内切酶酶切位点，得到用于下一步PCR扩增获得水稻耐盐胁迫基因OsNBR1所用的一对引物（OsNBR1-Xba
Figure DEST_PATH_IMAGE004
-F/OsNBR1-BamH
Figure 523276DEST_PATH_IMAGE004
-R）。以反转录的cDNA为模板，成功获得预期大小的cDNA全长。PCR反应程序：95℃预变性5 min；95℃变性1 min，58℃退火30 s，72℃延伸3 min，32个循环；72℃后延伸10 min。
OsNBR1-Xba
Figure 67390DEST_PATH_IMAGE004
-F：5’-gctctagaATGTCTCGCCGCCGGGAC-3’
OsNBR1-BamH
Figure 949895DEST_PATH_IMAGE004
-R：5’-cgggatccGATGCCCAGTTCGTGCAGT-3’；
反应结束后，进行电泳，产物回收，将回收的片段连入载体pMD18-T，转化大肠杆菌，挑取单克隆进行测序，获得有完整阅读框、无错配、无移码的cDNA全长，其核苷酸序列如SEQID NO.1，氨基酸序列为SEQ ID NO.2。
实施例2 水稻耐盐胁迫基因OsNBR1超量表达载体的构建
1）用Xba
Figure 99117DEST_PATH_IMAGE004
和BamH
Figure 41665DEST_PATH_IMAGE004
双酶切双元载体pCsV1300，跑胶回收大片段（载体）；
2）用Xba
Figure 948441DEST_PATH_IMAGE004
和BamH
Figure 228113DEST_PATH_IMAGE004
双酶切实施例1中得到的包含有水稻耐盐胁迫基因OsNBR1的T载体，消化后跑胶回收包含有水稻耐盐胁迫基因OsNBR1的DNA片段（基因）；
3）把回收的载体与基因进行连接；
4）转化大肠杆菌感受态、挑取单克隆进行PCR检测；
5）对于检测为阳性的单克隆过夜培养，提取质粒进行酶切验证。
实施例3 农杆菌介导的水稻遗传转化体系与鉴定
1）选取成熟饱满的水稻品种Kitaake种子，去壳；75%酒精消毒1~2 min，倒去酒精；用灭菌蒸馏水冲洗2次；加入0.15%的升汞（含有0.1%的吐温20）浸泡15~18 min，其间摇动数次；倒掉升汞，用灭菌蒸馏水冲洗5次。将消过毒的种子接入诱导愈伤培养基，32℃光照培养5~10 d；
2）将实施例2得到的含有水稻耐盐胁迫基因OsNBR1表达载体转化到农杆菌中。在侵染的前2 d，取农杆菌在含50 mg/l kanamycin的LB培养基上划线，置于28℃培养；
3）侵染前，将活化的农杆菌刮入悬浮培养基中，28℃，180 rpm震荡培养3~3.5 h，然后用悬浮培养基调节菌液浓度至OD600=0.1~0.2。将诱导5~10 d的愈伤组织放入农杆菌悬浮液中，侵染1.5~10 min。倒掉菌液，用灭菌滤纸吸干愈伤表面的菌液。愈伤表面覆盖灭菌滤纸，超净台吹30 min，直到吹干。吹干后将愈伤转入表面覆盖有一层灭菌滤纸的共培养培养基，先20℃暗培养过夜，然后转入25℃培养箱继续暗培养2 d；
4）共培养完成后，将愈伤组织用镊子转移到空的灭菌容器中。用灭菌蒸馏水反复清洗愈伤7~8次，其中前面3次可快速清洗，后面3~4次清洗时每次浸泡3~5 min。最后用含有500mg/l 羧苄青霉素（Carbenicillin，Cn）的灭菌蒸馏水浸泡愈伤30 min；倒掉Cn溶液，用灭菌滤纸尽量吸干愈伤表面的水分，愈伤表面覆盖一层灭菌滤纸，超净台吹1 h；
5）将经过清菌后的愈伤摆放到含有潮霉素的筛选培养基上32℃，光照培养14 d；
6）筛选14 d后，将抗性愈伤转入分化培养基，28℃培养 (光周期为14 h光照/10 h黑暗)；
7）待抗性愈伤在分化培养基上形成3~4 cm高的再生苗时，将其转入生根培养基培养，至形成完整的转基因水稻植株。转基因水稻的自交后代，可以采用潮霉素进行纯合转基因植株的筛选。
实施例4 T2代纯合转基因水稻中OsNBR1表达水平检测
取生长至三叶一心期的野生型Kitaake和转基因水稻植株的叶片，提取RNA用于基因相对表达量的分析。利用Real-time PCR 仪（ABI, USA）进行RT-qPCR。RNA提取与cDNA的合成同实施例1。之后将cDNA稀释10倍，按照试剂盒THUNDERBIRD SYBR qPCR Mix Without Rox（TOYOBO, Japan）说明进行RT-qPCR。通过Primer Express 3.0设计RT-qPCR所用的引物，以OsACT1为内参基因，所用引物如下：
qRT-OsNBR1-F：5’-TAGCACATCTAAGCCTGAGAATC-3’
qRT-OsNBR1-R：5’-AAGGTCCATAAAGACCGACTG-3’
OsACT1-F：5’-CTCCCCCATGCTATCCTTCG-3’
OsACT1-R：5’-TGAATGAGTAACCACGCTCCG-3’
RT-qPCR的结果显示，与野生型相比，3个独立的OsNBR1过表达植株（OsNBR1OX-1、OsNBR1OX-2和OsNBR1OX-3）中OsNBR1的表达水平增加约10倍以上（如图2所示）。
实施例5 OsNBR1过表达植株的耐盐性测试
将生长至三叶一心期的野生型Kitaake和纯合的OsNBR1过表达转基因植株（OsNBR1OX- 1、OsNBR1OX-2和OsNBR1OX-3）移至含有100 mM NaCl的营养液中，处理6 d后观察表型及统计存活率，发现与野生型Kitaake相比，OsNBR1过表达植株对盐胁迫的耐受性增强，其存活率显著的高于野生型Kitaake（如图3~4）。
根据上述实施例，通过前期对activation-tagging pool进行盐胁迫筛选过程中，得到一个在盐胁迫应答过程中扮演重要角色的基因OsNBR1；本发明通过农杆菌介导的转化方法，将OsNBR1过表达载体成功转化水稻，获得了纯合的T2代转基因水稻植株。我们发现在盐胁迫下，OsNBR1过表达植株OsNBR1OX-1、OsNBR1OX-2和OsNBR1OX-3的存活率显著高于野生型Kitaake的存活率。上述结果说明水稻基因OsNBR1能够提高水稻对盐胁迫的耐受性。
序列表
<110> 东北师范大学
<120> 水稻耐盐胁迫基因OsNBR1的克隆及应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 2646
<212> DNA
<213> 水稻(KitaakeOryza sativa L. var Kitaake)
<400> 1
atgtctcgcc gccgggacgc tgcgccgacg gcgcgcgagg gcgagaggga tctcgtcgtg 60
aaggtaaaat tcggtggcac tcttaagcgg ttcactgctt ttgtgaatgg tccgcacttt 120
gatcttaatc tggctgctct tcggtcaaag attgcgagtg cttttaagtt caatccagat 180
actgagtttg tactcaccta tactgatgag gatggggatg ttgtcatact ggatgatgat 240
agtgatttat gtgatgctgc cattagtcag agactgaacc ctcttaggat taatgttgag 300
ttgaagagca gcagtgatgg ggtacatcag acaaaacagc aggtattgga ttccatatct 360
gtaatgtcca ctgctctgga agatcaattg gctcaggtga aattagctat cgatgaagct 420
ttaaaatttg taccagaaca agttcccact gtccttgcaa aaatatcaca tgacttgcgt 480
tctaaagctg catcatcagc gccatcattg gctgatttgc tggaccggct tgctaaactg 540
atggcaccaa agagcaaaat gcagtcttcc agtggttctg ctgatggttc atctggctcc 600
tctagtggta ggggacaaac tttgggaagt ttgaatatta aaaatgacac tgagctcatg 660
gctgtttcag cttcgaaccc tctggatatg cataactctg gatcaactaa atcacttggt 720
cttaagggtg tgcttcttga tgacatcaaa gctcaagctg aacatgtatc gggatatcct 780
tattatgtgg ataccctttc aggctgggta aaagttgata acaagggaag taccaatgcc 840
caaagtaagg gcaagtctgt tacatcctct gctgtgccac aagttactag cattggtcat 900
ggtgcaccta ctgttcattc tgctcctgct tcagattgcg gtgaagggtt aagaagtgat 960
cttttctgga cacaactagg cctttcttct gagtcctttg ggcctaatgg ccagattggt 1020
ggtgatttga actcgacatg ccctcctcca ccactgtttc cccgttaccc acttcagtct 1080
ctccgagctg ataaaagcag tatcaagggt ggttgctctt accctccgtg catctgcaaa 1140
agtagcacat ctaagcctga gaatctctcc cattacccag ttcagtccct ccaagctgac 1200
agaagcctaa agggtggtca ctatttccct ccatgcacct gcaaaagtaa cacatccaag 1260
ccagataatc tctcaccagt cggtctttat ggaccttatt ctgaaggcag cagctgtaat 1320
aggtgcccat acagggatct aagtgataag cacgagagca tggcgcagca cacactgcat 1380
agatggatac agtgcgatgg ctgtggggtc actcctatcg ctggttctcg ctacaagtca 1440
aatattaaag atgattatga tttatgcaat acctgttttt ctcgaatggg caatgtgaat 1500
gaatatacca gaatagacag accatctttt gggagtagac gatgtagaga cctcaatcag 1560
aaccagatgc tctttccaca tcttcgacag ctacatgatt gccgcttcat taaggatgtt 1620
actgtccctg atggaacagt aatggcacca tcaaccccat ttacaaagat ttggcgcata 1680
cataacaatg gatcttccat gtggccatat gggacatgtc ttacctgggt tggtggacat 1740
ctatttgcac gcaacagctc agttaaatta gggatctcgg tggatggttt ccctattgat 1800
caagagatcg atgttggtgt tgattttgtc acacctgcaa agcctggtgg gtacgtgtcg 1860
tactggagat tggcatcacc cactggccag atgtttggtc agcgagtttg ggtttttatt 1920
caggtggagc acccggtcaa aaccagtagc aacaagcaga gtgctgctat aaacttgaac 1980
atgcccccag aaggaagcaa cacagaatgg aagcattctg ttgatgcaaa tattcagtct 2040
gcagatattg tgggtaaata ctctggaagc accataactg atcctcttgc acatgcacta 2100
taccatgaag ccaccaaacc gatggaacct gagcttgttt caagtgccgt accttctgta 2160
cctagagcat ttgaatcagt gctagtgcca gctactgatc tcctcacttc atctgctgga 2220
gctgaaaagg cttcgaagcc tgctgccacg cctggacctg cacctcaagc cgttcccctg 2280
ccaaaacctg ttagcattcc tgcatctgga cctgcgcctg ctcctgttag tgcgactacc 2340
gctgcacctg tcggagctgc tgctgctcct atcagtgagc ccactgcacc tgctgctgcc 2400
attggaatgc cctctgcaac tgctcgcgct gcttcttgcc tgcctaccga gccttcatct 2460
gatcacatca gtgccgtgga ggacaacatg ctgagagagc tggggcagat gggcttcggg 2520
caagtcgacc tgaacaagga aataattagg cggaacgagt acaacctgga gcagtccatt 2580
gatgaactct gtggcatcct cgaatgggat gcactccatg atgaactgca cgaactgggc 2640
atctga 2646
<210> 2
<211> 881
<212> PRT
<213> 水稻(KitaakeOryza sativa L. var Kitaake)
<400> 2
Met Ser Arg Arg Arg Asp Ala Ala Pro Thr Ala Arg Glu Gly Glu Arg
1 5 10 15
Asp Leu Val Val Lys Val Lys Phe Gly Gly Thr Leu Lys Arg Phe Thr
20 25 30
Ala Phe Val Asn Gly Pro His Phe Asp Leu Asn Leu Ala Ala Leu Arg
35 40 45
Ser Lys Ile Ala Ser Ala Phe Lys Phe Asn Pro Asp Thr Glu Phe Val
50 55 60
Leu Thr Tyr Thr Asp Glu Asp Gly Asp Val Val Ile Leu Asp Asp Asp
65 70 75 80
Ser Asp Leu Cys Asp Ala Ala Ile Ser Gln Arg Leu Asn Pro Leu Arg
85 90 95
Ile Asn Val Glu Leu Lys Ser Ser Ser Asp Gly Val His Gln Thr Lys
100 105 110
Gln Gln Val Leu Asp Ser Ile Ser Val Met Ser Thr Ala Leu Glu Asp
115 120 125
Gln Leu Ala Gln Val Lys Leu Ala Ile Asp Glu Ala Leu Lys Phe Val
130 135 140
Pro Glu Gln Val Pro Thr Val Leu Ala Lys Ile Ser His Asp Leu Arg
145 150 155 160
Ser Lys Ala Ala Ser Ser Ala Pro Ser Leu Ala Asp Leu Leu Asp Arg
165 170 175
Leu Ala Lys Leu Met Ala Pro Lys Ser Lys Met Gln Ser Ser Ser Gly
180 185 190
Ser Ala Asp Gly Ser Ser Gly Ser Ser Ser Gly Arg Gly Gln Thr Leu
195 200 205
Gly Ser Leu Asn Ile Lys Asn Asp Thr Glu Leu Met Ala Val Ser Ala
210 215 220
Ser Asn Pro Leu Asp Met His Asn Ser Gly Ser Thr Lys Ser Leu Gly
225 230 235 240
Leu Lys Gly Val Leu Leu Asp Asp Ile Lys Ala Gln Ala Glu His Val
245 250 255
Ser Gly Tyr Pro Tyr Tyr Val Asp Thr Leu Ser Gly Trp Val Lys Val
260 265 270
Asp Asn Lys Gly Ser Thr Asn Ala Gln Ser Lys Gly Lys Ser Val Thr
275 280 285
Ser Ser Ala Val Pro Gln Val Thr Ser Ile Gly His Gly Ala Pro Thr
290 295 300
Val His Ser Ala Pro Ala Ser Asp Cys Gly Glu Gly Leu Arg Ser Asp
305 310 315 320
Leu Phe Trp Thr Gln Leu Gly Leu Ser Ser Glu Ser Phe Gly Pro Asn
325 330 335
Gly Gln Ile Gly Gly Asp Leu Asn Ser Thr Cys Pro Pro Pro Pro Leu
340 345 350
Phe Pro Arg Tyr Pro Leu Gln Ser Leu Arg Ala Asp Lys Ser Ser Ile
355 360 365
Lys Gly Gly Cys Ser Tyr Pro Pro Cys Ile Cys Lys Ser Ser Thr Ser
370 375 380
Lys Pro Glu Asn Leu Ser His Tyr Pro Val Gln Ser Leu Gln Ala Asp
385 390 395 400
Arg Ser Leu Lys Gly Gly His Tyr Phe Pro Pro Cys Thr Cys Lys Ser
405 410 415
Asn Thr Ser Lys Pro Asp Asn Leu Ser Pro Val Gly Leu Tyr Gly Pro
420 425 430
Tyr Ser Glu Gly Ser Ser Cys Asn Arg Cys Pro Tyr Arg Asp Leu Ser
435 440 445
Asp Lys His Glu Ser Met Ala Gln His Thr Leu His Arg Trp Ile Gln
450 455 460
Cys Asp Gly Cys Gly Val Thr Pro Ile Ala Gly Ser Arg Tyr Lys Ser
465 470 475 480
Asn Ile Lys Asp Asp Tyr Asp Leu Cys Asn Thr Cys Phe Ser Arg Met
485 490 495
Gly Asn Val Asn Glu Tyr Thr Arg Ile Asp Arg Pro Ser Phe Gly Ser
500 505 510
Arg Arg Cys Arg Asp Leu Asn Gln Asn Gln Met Leu Phe Pro His Leu
515 520 525
Arg Gln Leu His Asp Cys Arg Phe Ile Lys Asp Val Thr Val Pro Asp
530 535 540
Gly Thr Val Met Ala Pro Ser Thr Pro Phe Thr Lys Ile Trp Arg Ile
545 550 555 560
His Asn Asn Gly Ser Ser Met Trp Pro Tyr Gly Thr Cys Leu Thr Trp
565 570 575
Val Gly Gly His Leu Phe Ala Arg Asn Ser Ser Val Lys Leu Gly Ile
580 585 590
Ser Val Asp Gly Phe Pro Ile Asp Gln Glu Ile Asp Val Gly Val Asp
595 600 605
Phe Val Thr Pro Ala Lys Pro Gly Gly Tyr Val Ser Tyr Trp Arg Leu
610 615 620
Ala Ser Pro Thr Gly Gln Met Phe Gly Gln Arg Val Trp Val Phe Ile
625 630 635 640
Gln Val Glu His Pro Val Lys Thr Ser Ser Asn Lys Gln Ser Ala Ala
645 650 655
Ile Asn Leu Asn Met Pro Pro Glu Gly Ser Asn Thr Glu Trp Lys His
660 665 670
Ser Val Asp Ala Asn Ile Gln Ser Ala Asp Ile Val Gly Lys Tyr Ser
675 680 685
Gly Ser Thr Ile Thr Asp Pro Leu Ala His Ala Leu Tyr His Glu Ala
690 695 700
Thr Lys Pro Met Glu Pro Glu Leu Val Ser Ser Ala Val Pro Ser Val
705 710 715 720
Pro Arg Ala Phe Glu Ser Val Leu Val Pro Ala Thr Asp Leu Leu Thr
725 730 735
Ser Ser Ala Gly Ala Glu Lys Ala Ser Lys Pro Ala Ala Thr Pro Gly
740 745 750
Pro Ala Pro Gln Ala Val Pro Leu Pro Lys Pro Val Ser Ile Pro Ala
755 760 765
Ser Gly Pro Ala Pro Ala Pro Val Ser Ala Thr Thr Ala Ala Pro Val
770 775 780
Gly Ala Ala Ala Ala Pro Ile Ser Glu Pro Thr Ala Pro Ala Ala Ala
785 790 795 800
Ile Gly Met Pro Ser Ala Thr Ala Arg Ala Ala Ser Cys Leu Pro Thr
805 810 815
Glu Pro Ser Ser Asp His Ile Ser Ala Val Glu Asp Asn Met Leu Arg
820 825 830
Glu Leu Gly Gln Met Gly Phe Gly Gln Val Asp Leu Asn Lys Glu Ile
835 840 845
Ile Arg Arg Asn Glu Tyr Asn Leu Glu Gln Ser Ile Asp Glu Leu Cys
850 855 860
Gly Ile Leu Glu Trp Asp Ala Leu His Asp Glu Leu His Glu Leu Gly
865 870 875 880
Ile

Claims (3)

1.一种水稻耐盐胁迫基因OsNBR1，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示。
2.一种植物表达载体，它插入了权利要求1所述的水稻耐盐胁迫基因OsNBR1。
3.如权利要求1所述的水稻耐盐胁迫基因OsNBR1在提高水稻盐胁迫耐受能力方面的应用。
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