CN111909242A - 高亲和力特异性结合β-catenin蛋白的多肽及其应用和合成方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了高亲和力特异性结合β‑catenin蛋白的多肽及其应用和合成方法，多肽的氨基酸序列为LEHRERSLQT(X1)RDIQRML(X2)P，其中，X1为亮氨酸、正亮氨酸或高亮氨酸，X2为苯丙氨酸、1‑萘基丙氨酸、2‑萘基丙氨酸、2‑蒽基丙氨酸或9‑蒽基丙氨酸；该多肽用于抑制癌细胞生长；本发明的多肽能够实现多种肿瘤治疗目标；本发明的多肽通过抑制癌细胞内β‑catenin蛋白和BCL9的相互结合，抑制β‑catenin蛋白介导的Wnt信号通路的开启，从而抑制肿瘤肿瘤生长，诱导细胞自我凋亡，实现肿瘤疾病治疗目标；该多肽的合成方法简单易得，终产物产量效率高，具备量产潜力，极具药物临床转化潜力。

Description

高亲和力特异性结合β-catenin蛋白的多肽及其应用和合成 方法

技术领域

本发明属于药物化学与多肽化学领域，尤其涉及高亲和力特异性结合 β-catenin蛋白的多肽及其应用和合成方法。

背景技术

恶性肿瘤已成为日益常见且严重威胁人类生命和生活质量的主要疾病之一。 原发性肝癌(Primary hepatic carcinoma)是一种肝细胞异常增生而导致的恶性肿瘤， 恶性度高且病情进展快，预后差，常危及患者生命，其死亡率在我国恶性肿瘤中 居第五位。结直肠癌、肝癌均属于消化道肿瘤，均是我国死亡率前10的恶性肿 瘤可以看出与饮食密切相关的消化道肿瘤已经严重威胁我国居民健康。目前国内 外针对肝癌和结直肠癌的临床治疗手段主要是手术切除、放化疗以及靶向治疗等， 传统的治疗手段靶向性不足，导致治疗效果有限，同时受到高复发率和强副作用 的掣肘。因此，开发靶向药物治疗在我国具有重大的临床价值和社会价值。

β-catenin是经典Wnt信号通路中的主要信号转导分子，对胚胎发育和组织稳 态十分重要，持续性的Wnt/β-catenin激活，被发现广泛存在于在癌症的发生与发 展过程中。β-catenin的主要结构特征为具有由530个氨基酸残基构成的大的中央 “犰狳重复结构域”(ARD)，其包含12个串联重复序列。ARD为细长的超螺旋 结构，完全由α螺旋和无序的连接环组成，并通过与辅因子相互作用实现β-catenin 功能。β-catenin中ARD侧翼的N端和C端区域都是非结构化的，在N端有多 个磷酸化位点参与β-catenin相关的细胞周期调节。

经典Wnt信号通路主要通过调节细胞质中β-catenin稳定性来调控靶基因表 达。在没有Wnt配体的情况下，细胞质中的β-catenin被磷酸化和泛素化修饰形成 “降解复合物”，这是一种多蛋白复合物，由Axin，APC，Ser/Thr激酶GSK-3β 或CK1，蛋白磷酸酶2A(PP2A)以及E3-泛素连接酶β-TrCP组成，它通过泛素 化途径依赖的蛋白酶体作用可以快速稳定地降解β-catenin蛋白。然而，Wnt受体 的激活阻断了降解复合物对β-catenin的泛素化，导致细胞质中β-catenin的稳定和 积累。此时，BCL9/BCL9-2通过与β-catenin的ARD的N端区域结合使得β-catenin 转位进细胞核。进入细胞核后，β-catenin与TCF家族转录因子和其他辅因子结 合，以激活负责细胞增殖和分化的靶基因的转录。在这些过程中，错综复杂的 Wnt/β-catenin信号通路由β-catenin蛋白磷酸化调控，异常的β-catenin蛋白磷酸化会导致癌症和其他疾病。Wnt信号传导的失调在许多疾病中是常见的现象，并且 可能是许多疾病进展的主要驱动因素，尤其是癌症。通常，在肿瘤发生期间， β-catenin与辅因子BCL9相互作用，随后将促使β-catenin蛋白穿梭进入细胞核以 激活其下游靶标。

现有技术中并没有针对β-catenin和BCL9抑制剂的开发，也没有类似的多肽 可以抑制β-catenin和BCL9的结合，因此β-catenin和BCL9抑制剂的开发在癌症 治疗方面具有很大的潜力。

发明内容

本发明的目的是提供高亲和力特异性结合β-catenin蛋白的多肽及其应用和 合成方法，能抑制癌细胞内β-catenin和BCL9的相互结合，抑制肿瘤生长，诱导 细胞自我凋亡。

本发明采用以下技术方案：一种高亲和力特异性结合β-catenin蛋白的多肽， 多肽的氨基酸序列为LEHRERSLQT(X1)RDIQRML(X2)P，其中，X1为亮氨酸、 正亮氨酸或高亮氨酸，X2为苯丙氨酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、2-蒽基丙 氨酸或9-蒽基丙氨酸。

一种高亲和力特异性结合β-catenin蛋白的多肽的应用，用于抑制癌细胞生长。

进一步地，用于抑制癌细胞β-catenin/Wnt信号通路，抑制肿瘤生长，诱导细 胞自我凋亡。

进一步地，用于抑制癌细胞中β-catenin和BCL9的相互结合，进而抑制 β-catenin/Wnt信号通路。

一种高亲和力特异性结合β-catenin蛋白的多肽的合成方法，通过模拟替代 BCL9侧链的四个关键残基，与β-catenin的第一个ARD的H2和H3螺旋通过疏 水相互作用获得；该多肽竞争结合肿瘤细胞内的β-catenin蛋白，作用于体内 β-catenin/BCL9复合体，可竞争替代体内BCL9位置对β-catenin的功能进行抑制。

进一步地，BCL9的四个关键残基为L366、I369、L373和F374。

本发明的有益效果是：本发明的多肽能够实现多种肿瘤治疗目标；本发明的 多肽通过抑制癌细胞内β-catenin蛋白和BCL9的相互结合，抑制β-catenin蛋白介 导的Wnt信号通路的开启，从而抑制肿瘤肿瘤生长，诱导细胞自我凋亡，实现肿 瘤疾病治疗目标；该多肽的合成方法简单易得，终产物产量效率高，具备量产潜 力，极具药物临床转化潜力。

附图说明

图1A为本发明BBI的完整和详细结构；图1B为BBI的合成表征图；图1C 为基于等温滴定量热的BBI与β-catenin相互作用表征；图1D为基于荧光偏振的 BBI与β-catenin相互作用表征；图1E为竞争性荧光偏振证明BBI可以竞争性抑 制β-catenin/BCL9相互作用；图1F为BBI抑制Hep3B细胞活性；

图2A为本发明中ITC技术在25℃下测定的pY142β-catenin蛋白对BCI的 结合亲和力；图2B为本发明中FP技术在25℃下测定的pY142β-catenin蛋白对 BCI的结合亲和力；图2C为本发明中通过MTT测量穿模肽R8修饰的BCI对含 有Y142Eβ-catenin的Hep3B细胞活力的影响；

图3为本发明中CA和BCI通过协同靶向β-catenin用于体内肿瘤抑制Hep3B 异种移植模型中CA和Au-BCI的抗肿瘤活性；图3A为Hep3B异种移植物在各 种处理下的生长曲线；图3B为将数据点绘制为平均值±s.d(n＝5)；通过 Kruskal-Wallis检验判断出统计学上是否具有显著差异，给药12天后从小鼠收集 的肿瘤的照片；图3C为将数据点绘制为平均值±s.d(n＝5)；通过Kruskal-Wallis 检验判断出统计学上是否具有显著差异，给药12天后从小鼠收集的肿瘤的重量； 图3D为代表性肿瘤中的Ki67，细胞周期蛋白D1和β-catenin的免疫组化(IHC) 图像；图3E为IHC评分；

图4为本发明Au-BCI在细胞水平协同CA靶向β-catenin用于抑制模拟Y142 磷酸化的肿瘤细胞；图4A为本发明通过MTT测量BCI金纳米颗粒对含有Y142E β-catenin的Hep3B细胞活力的影响；图4B为本发明WB实验测定BCI可以联 合CA抑制Wnt/β-catenin信号通路；

图5为本发明CA和BCI通过协同靶向β-catenin用于体内抑制模拟Y142磷 酸化的肿瘤；图5A为本发明用CA/Au-BCI组合或对照(n＝5)处理的异种移 植物的生长曲线；图5B为本发明通过Kruskal-Wallis检验判断出统计学上是否具 有显著差异，在小鼠处死后收集的肿瘤的图像；图5C为本发明通过Kruskal-Wallis 检验判断出统计学上是否具有显著差异，在小鼠处死后收集的肿瘤的重量；图5D 为本发明肿瘤H&E染色；图5E为代表性肿瘤的Ki67，β-catenin和细胞周期蛋 白D1的IHC染色(比例尺：50μm)，通过t检验计算p值(*，p<0.05；**，p<0.01； ***，p<0.001)的结构示意图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。

本发明公开了一种高亲和力特异性结合β-catenin蛋白的多肽，该多肽的氨基 酸序列为LEHRERSLQT(X1)RDIQRML(X2)P，其中X1为亮氨酸(L)、正亮氨 酸(NLE)或高亮氨酸(HLE)；X2为苯丙氨酸(F)、1-萘基丙氨酸(1-NAL)、 2-萘基丙氨酸(2-NAL)、2-蒽基丙氨酸(2-Anla)或9-蒽基丙氨酸(9-Anla)。

本发明还公开了一种高亲和力特异性结合β-catenin蛋白的多肽的应用，用于 抑制癌细胞生长，具体的是用于抑制癌细胞β-catenin/Wnt信号通路，抑制肿瘤生 长，诱导细胞自我凋亡，更具体的是用于抑制癌细胞中β-catenin和BCL9的相互 结合，进而抑制β-catenin/Wnt信号通路。

本发明还公开了一种高亲和力特异性结合β-catenin蛋白的多肽的合成方法， 利用多肽固相合成法，将多肽羧基端第一个氨基酸的羧基先通过化学方法与作为 固定相的树脂连接，接着按照多肽的序列依次添加氨基酸进行反应以实现多肽从 羧基端向氨基端的延伸。通过模拟替代BCL9侧链的四个关键残基，与β-catenin 的第一个ARD的H2和H3螺旋通过疏水相互作用获得；该多肽竞争结合肿瘤细 胞内的β-catenin蛋白，作用于体内β-catenin/BCL9复合体，可竞争替代体内BCL9 位置对β-catenin的功能进行抑制。其中，BCL9的四个关键残基为L366、I369、 L373和F374，残基L366和F374的结合口袋相对较深和较宽，因此它们可以容 纳更长或更大的侧链以实现更强的疏水相互作用。

体内BCL9的四个关键残基的侧链与β-catenin的第一个ARD(D弧回折序列) 的H2和H3螺旋通过疏水作用构成β-catenin/BCL9复合体，激活β-catenin介导 的Wnt信号通路，导致肿瘤细胞的恶性增值，致使肿瘤进展。

β-catenin/BCL9抑制剂分为两种类型，一类为：X1为亮氨酸(L)，X2为苯 丙氨酸(F)所构成的多肽，在此命名为BBI，即LEHRERSLQTLRDIQRMLFP， 如SEQ ID NO.1所示；除此之外的组合均命名为BCI，具体如下：

第一类为：X1为亮氨酸(L)；X2为1-萘基丙氨酸(1-NAL)、2-萘基丙氨 酸(2-NAL)、2-蒽基丙氨酸(2-Anla)或9-蒽基丙氨酸(9-Anla)所构成的多肽；

第二类为：X1为正亮氨酸(NLE)；X2为苯丙氨酸(F)、1-萘基丙氨酸(1-NAL)、 2-萘基丙氨酸(2-NAL)、2-蒽基丙氨酸(2-Anla)或9-蒽基丙氨酸(9-Anla)所 构成的多肽；

第三类为：X1为高亮氨酸(HLE)；X2为苯丙氨酸(F)、1-萘基丙氨酸(1-NAL)、 2-萘基丙氨酸(2-NAL)、2-蒽基丙氨酸(2-Anla)或9-蒽基丙氨酸(9-Anla)所 构成的多肽。

BCI的序列如下：

LEHRERSLQTLRDIQRML(1-NAL)P，SEQ ID NO.2所示；

LEHRERSLQTLRDIQRML(2-NAL)P，SEQ ID NO.3所示；

LEHRERSLQTLRDIQRML(2-Anla)P，SEQ ID NO.4所示；

LEHRERSLQTLRDIQRML(9-Anla)P，SEQ ID NO.5所示；

LEHRERSLQT(NLE)RDIQRMLFP，SEQ ID NO.6所示；

LEHRERSLQT(NLE)RDIQRML(1-NAL)P，SEQ ID NO.7所示；

LEHRERSLQT(NLE)RDIQRML(2-NAL)P，SEQ ID NO.8所示；

LEHRERSLQT(NLE)RDIQRML(2-Anla)P，SEQ ID NO.9所示；

LEHRERSLQT(NLE)RDIQRML(9-Anla)P，SEQ ID NO.10所示；

LEHRERSLQT(HLE)RDIQRMLFP，SEQ ID NO.11所示；

LEHRERSLQT(HLE)RDIQRML(1-NAL)P，SEQ ID NO.12所示；

LEHRERSLQT(HLE)RDIQRML(2-NAL)P，SEQ ID NO.13所示；

LEHRERSLQT(HLE)RDIQRML(2-Anla)P，SEQ ID NO.14所示；

LEHRERSLQT(HLE)RDIQRML(9-Anla)P，SEQ ID NO.15所示。

BBI的完整和详细结构，如图1A所示，BCL9的短肽中的三个疏水性和两 个带电残基可以嵌入β-catenin的结合位点凹槽。BBI结构的螺旋很有可能阻断 Wnt信号传导的活性。因此，化学合成了BBI，所合成的BBI分子量为3122.3Da， 通过LC-MASS鉴定了合成的多肽的分子量，如图1B所示，通过ITC测定靶蛋 白结合能力，它可以有效地结合β-catenin，结合力约为1μM，如图1C和1D所示。

基于荧光偏振的竞争性结合测定的结果显示，BBI相较于BCL9蛋白具有显 着竞争β-catenin结合的能力，如图1E所示。连接细胞穿透肽(RRRRRRRR，即 R8)，在细胞系Hep3B中，BBI-R8表现出强大的抑制过度活化的Wnt信号传导 的能力，如图1F所示。

单独的BBI几乎对癌细胞增殖没有作用，如图1F所示这可能归因于多肽的 被动进入细胞能力较弱和多肽的自身易被降解。这些结果表明BBI可以通过竞争 性抑制BCL9与β-catenin结合来阻断Wnt信号传导，从而抑制癌细胞的增殖。因 此，BBI多肽是一种新型癌细胞抑制剂，可以作为潜在抗肿瘤药物来开发。

BCI通过模拟BCL9的四个关键残基的侧链，来占据β-catenin的第一个ARD 的H2和H3螺旋形成的疏水沟，实现竞争结合β-catenin。BCI通过模拟BCL9的 四个关键残基的侧链，与由β-catenin的第一个ARD的H2和H3螺旋形成的疏水 沟之间，通过疏水相互作用进行结合。其中，BCL9的四个关键残基为L366、I369、 L373和F374，残基L366和F374的结合口袋相对较深和较宽，因此它们可以容 纳更长或更大的侧链以实现更强的疏水相互作用。鉴于此，将L366突变为正亮 氨酸(Nle)或高亮氨酸(Hle)，并将F374分别突变为1-萘基丙氨酸(1-Nla)， 2-萘基丙氨酸(2-Nla)或9-蒽丙氨酸(9-Anla)，并进行分子对接模拟以计算 β-catenin与这些BCL9变体中的每一种之间形成的复合物的结合面积和自由能。 模拟结果预测显示：替换X1(L366)和X2(F374)位点是我氨基酸为非天然氨 基酸，将BBI中的L366突变为Hle366，F374突变为2-Nla374后，测试发现将 增加复合物的结合区域并降低其自由能，这表明更高的结合亲和力，如表1所示。

表1计算机筛选BCI亲和力结果

下面对BCI的功能进行体内试验，其中BCI的中X1为Hle，X2为2-Nla。

1.BCI通过高亲和力特异性结合Y142磷酸化蛋白抑制肿瘤细胞增殖 为了验证模拟结果，合成了BCI，携带Hle 369和2-Nla 374的BCL9肽 (^352-374BCL9)的衍生物，并将其与β-catenin的结合从而与352-374BCL9(BBI) 进行比较。

ITC实验显示，BCI以70nM的亲和力结合β-catenin，其活性比352-374BCL9 (Kd＝680nM)高约10倍，如图2A所示。在竞争性结合实验中，BCI也胜过 352-374BCL9与β-catenin的结合，如图2B所示。尽管BCI具有与β-catenin的高 体外亲和力，但它对转染Y142Eβ-catenin的Hep3B细胞表现出非常弱的细胞毒 性，如图2C所示，可能是由于其不能穿过细胞膜。然而，当其通过C末端与 Arg残基簇(BCI-R8)缀合时，BCI对转染Y142Eβ-catenin的Hep3B细胞表现 出良好的剂量依赖性杀伤能力，IC50值在4至5μM之间，如图2C所示，值得注意的是，CA的加入进一步使转染Y142Eβ-catenin的Hep3B细胞对BCI敏感， 表明这两种药物以不同的机制靶向Y142Eβ-catenin。

2.BCI在动物水平协同CA显著抑制肿瘤进程

为了测试体内CA和BCI单独或组合的抗肿瘤活性，首先通过Au-S键合将 半胱氨酸标记的BCI肽缀合到基于金纳米颗粒的系统上，记作Au-BCI。这种 Au-BCI系统将通过EPR效应有效靶向肿瘤组织，通过内吞作用使其递送到细胞 质中和借助细胞内还原环境打开Au-S键释放BCI，并可以通过空间位阻抑制蛋 白水解酶来延长BCI的半衰期。接下来在小鼠异种移植模型中评估Au-BCI和CA (单独或组合)的抗肿瘤功效。单独的CA或Au-BCI以大致相同的效率适度地 抑制Hep3B肿瘤的生长，而CA/Au-BCI组合治疗几乎完全抑制肿瘤生长，如图 3A-C。这些结果说明CA和Au-BCI通过协同作用以抑制体内肿瘤生长。相应地， 与对照相比，CA-，Au-BCI-和CA/Au-BCI-组合治疗的肿瘤中β-catenin，细胞周 期蛋白D和Ki67的水平表达降低，如图3D和3E所示，表明这些药物制剂成功 阻断了Wnt/β-catenin通路。

3.BCI在动物水平显著抑制β-cateninY142磷酸化的肿瘤增殖

为了测试CA和Au-BCI组合治疗是否也具有针对pY142β-catenin驱动的肿 瘤功效，首先将Y142Eβ-catenin Hep3B细胞与CA和Au-BCI一起孵育。正如预 期的那样，Au-BCI和CA均可以有效抑制肿瘤增殖和降低β-catenin表达，如图4、 图4A、5B所示。为了进一步验证体内活性，构建了Y142Eβ-catenin Hep3B细胞 的异种移植模型，并在CA/Au-BCI组合处理存在或不存在的情况下跟踪肿瘤生 长18天。

在实验结束时，对照组的平均肿瘤体积增加约17倍，而CA/Au-BCI-组合 治疗的小鼠中的肿瘤几乎不生长，如图5A-C所示。此外，H&E染色显示组合处 理的小鼠中存在松散和坏死的肿瘤组织，而来自对照处理的小鼠中存在致密和实 体肿瘤组织，如图5D所示。相一致地是，与对照相比，在组合治疗的肿瘤组织 中β-catenin，细胞周期蛋白Cyclin D和ki67的表达也减少，如图5E所示。总之， 这些结果证明CA和BCI可以协同有效地靶向用于抑制体内肿瘤的WT和pY142 β-catenin。

序列表

<110> 西安交通大学医学院第一附属医院

<120> 高亲和力特异性结合β-catenin蛋白的多肽及其应用和合成方法

<141> 2020-07-28

<160> 15

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> PRT

<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum

<400> 1

Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr Leu Arg Asp Ile Gln Arg

1 5 10 15

Met Leu Phe Pro

20

<210> 2

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr Leu Arg Asp Ile Gln Arg

1 5 10 15

Met Leu Asn Ala Leu Pro

20

<210> 3

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr Leu Arg Asp Ile Gln Arg

1 5 10 15

Met Leu Asn Ala Leu Pro

20

<210> 4

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr Leu Arg Asp Ile Gln Arg

1 5 10 15

Met Leu Ala Pro

20

<210> 5

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr Leu Arg Asp Ile Gln Arg

1 5 10 15

Met Leu Ala Pro

20

<210> 6

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr Asn Leu Glu Arg Asp Ile

1 5 10 15

Gln Arg Met Leu Phe Pro

20

<210> 7

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr Asn Leu Glu Arg Asp Ile

1 5 10 15

Gln Arg Met Leu Asn Ala Leu Pro

20

<210> 8

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr Asn Leu Glu Arg Asp Ile

1 5 10 15

Gln Arg Met Leu Asn Ala Leu Pro

20

<210> 9

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr Asn Leu Glu Arg Asp Ile

1 5 10 15

Gln Arg Met Leu Ala Pro

20

<210> 10

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr Asn Leu Glu Arg Asp Ile

1 5 10 15

Gln Arg Met Leu Ala Pro

20

<210> 11

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr His Leu Glu Arg Asp Ile

1 5 10 15

Gln Arg Met Leu Phe Pro

20

<210> 12

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr His Leu Glu Arg Asp Ile

1 5 10 15

Gln Arg Met Leu Asn Ala Leu Pro

20

<210> 13

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr His Leu Glu Arg Asp Ile

1 5 10 15

Gln Arg Met Leu Asn Ala Leu Pro

20

<210> 14

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr His Leu Glu Arg Asp Ile

1 5 10 15

Gln Arg Met Leu Ala Pro

20

<210> 15

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr His Leu Glu Arg Asp Ile

1 5 10 15

Gln Arg Met Leu Ala Pro

20

Claims (6)

1.一种高亲和力特异性结合β-catenin蛋白的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列为LEHRERSLQT(X1)RDIQRML(X2)P，其中，X1为亮氨酸、正亮氨酸或高亮氨酸，X2为苯丙氨酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、2-蒽基丙氨酸或9-蒽基丙氨酸。

2.一种高亲和力特异性结合β-catenin蛋白的多肽的应用，其特征在于，用于抑制癌细胞生长。

3.根据权利要求2所述的一种高亲和力特异性结合β-catenin蛋白的多肽的应用，其特征在于，用于抑制癌细胞β-catenin/Wnt信号通路，抑制肿瘤生长，诱导细胞自我凋亡。

4.根据权利要求3所述的一种高亲和力特异性结合β-catenin蛋白的多肽的应用，其特征在于，用于抑制癌细胞中β-catenin和BCL9的相互结合，进而抑制β-catenin/Wnt信号通路。

5.一种高亲和力特异性结合β-catenin蛋白的多肽的合成方法，其特征在于，通过模拟替代BCL9侧链的四个关键残基，与β-catenin的第一个ARD的H2和H3螺旋通过疏水相互作用获得；该多肽竞争结合肿瘤细胞内的β-catenin蛋白，作用于体内β-catenin/BCL9复合体，可竞争替代体内BCL9位置对β-catenin的功能进行抑制。

6.根据权利要求5所述的一种高亲和力特异性结合β-catenin蛋白的多肽的合成方法，其特征在于，所述BCL9的四个关键残基为L366、I369、L373和F374。

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