CN111888347A - 海胆酮在制备乙酰胆碱酯酶抑制剂中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种海胆酮在制备乙酰胆碱酯酶抑制中的应用。其中，海胆酮对乙酰胆碱酯酶具有明显的抑制作用，在大脑中调节及控制AchE的活性，减少其对脑内乙酰胆碱的水解，进而提高患者机体内神经系统受体处的乙酰胆碱水平，延缓乙酰胆碱的水解速度，从而有效改善老年痴呆症。

Description

海胆酮在制备乙酰胆碱酯酶抑制剂中的应用

技术领域

本发明涉及海胆酮的新用途，具体涉及一种海胆酮在制备乙酰胆碱酯酶抑制剂中的应用。

背景技术

乙酰胆碱酯酶(AchE)是维持体内胆碱能神经冲动非常重要的水解酶，在生物神经传导中起关键性作用。在胆碱能突触间，该酶能降解神经递质乙酰胆碱终止对突触后膜的兴奋作用，保证神经信号的正常传递。大脑内乙酰胆碱酯酶增多则会导致乙酰胆碱含量降低，而乙酰胆碱的减少是阿尔兹海默症(AD)的关键病因。因此，目前医学上多采用乙酰胆碱酯酶抑制剂(Acetylcholinesteraseinhibitor，AchEI)来调节及控制AchE的活性，减少其对脑内乙酰胆碱的水解，进而提高患者机体内神经系统受体处的乙酰胆碱水平，从而实现对AD的防治和治疗作用。目前市场上抑制乙酰胆碱酯酶的药物主要有他克林(tacrine)、多奈哌齐(donepezil)、利凡斯的明(rivastigmine)、氢溴酸加兰他敏(galantaminehydrobromide)。除氢溴酸加兰他敏外，大多数为合成药物，已投入临床应用，虽然有一定的治疗效果，但在临床实践过程中发现这些现有的合成药物存在生物利用率低、活性不是特别高、选择性低、具有不同程度的毒性及副作用等缺点。

海胆酮(β,β-Caroten-4-one，英文名称Echinenone)是一种酮式类胡萝卜素，由四个异戊二烯单位以共轭双键的形式进行连接，首尾两端则各连接一个紫罗兰酮环，其中一个紫罗兰酮环上的氢被酮基取代，海胆酮主要从海胆及藻类等海洋生物中提取。目前，海胆酮已被用作可食用的橙色色素，抗氧化剂和维生素A原，而关于海胆酮作为AD药物的开发利用还没有相关文献报道。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的目的在于提供一种海胆酮用于制备乙酰胆碱酯酶抑制剂，取代了西药作为乙酰胆碱酯酶抑制剂，毒副作用小，尤其针对老年痴呆病效果明显。

为此，根据本发明的实施例，本发明提出了海胆酮在制备乙酰胆碱酯酶抑制剂中的应用。

根据本发明实施例，发明人在研究海胆酮生理活性的过程中，发现海胆酮对乙酰胆碱酯酶具有明显的抑制作用，在大脑中调节及控制AchE的活性，减少其对脑内乙酰胆碱的水解，进而提高患者机体内神经系统受体处的乙酰胆碱水平，延缓乙酰胆碱的水解速度，从而有效改善老年痴呆症。

根据本发明的实施例，本发明还提出了海胆酮在制备预防或治疗阿尔兹海默症的药物中的应用。

根据本发明实施例，发明人在研究海胆酮生理活性的过程中，发现海胆酮对乙酰胆碱酯酶具有明显的抑制作用，从而有效预防或治疗阿尔兹海默症，并且海胆酮毒副作用小。

另外，根据本发明上述实施例提出的应用，还可以具有如下附加的技术特征：

可选地，所述药物包括有效量的海胆酮和药学上可接受的辅料组成。

可选地，所述药物为胶囊剂、片剂、颗粒、口服剂或丸剂。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

图1为根据本发明实施例中海胆酮对乙酰胆碱酯酶的抑制作用。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的技术方案。应理解，本发明提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容的情况下，当亦视为本发明可实施的范畴。

为了更好的理解上述技术方案，下面更详细地描述本发明的示例性实施例。虽然显示了本发明的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。

本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。其中，海胆酮是购买标准品。

下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。

实施例1海胆酮对乙酰胆碱酯酶活性的抑制率的测定

1、试剂的准备：

Buffer C(pH 8.0，50mM Tris-HCl缓冲液)的配制：

准确称量6.05g Tris碱溶于900mL蒸馏水，以浓盐酸缓慢滴定至pH 8.0，待溶液冷却至室温后定容至1L。

Buffer D(pH 8.0，50mM Tris-HCl，0.1％牛血清白蛋白溶液)的配制：准确称量0.5g牛血清白蛋白溶于500mL buffer C中，4℃保存备用。

Buffer E(pH 8.0，50mM Tris-HCl，0.1M NaCl，20mM MgCl₂·6H2O缓冲液)的配制：称量1.17g NaCl和0.82g MgCl₂·6H2O，用200mL buffer C溶解，得到buffer E。

底物碘化乙酰胆碱溶液的配制：准确称量1.74mg碘化乙酰胆碱加入10ml超纯水溶解，配成浓度为0.6mM的溶液，现配现用。

显色剂5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)溶液(DTNB溶液)的配制：准确称量47.56mgDTNB，用200mL buffer E溶解，配成浓度为0.6mM的显色剂溶液，现配现用。

乙酰胆碱酯酶液的配制：取500U的乙酰胆碱酯酶粉加入1mL的PBS，即乙酰胆碱酯酶的酶活为500U/mL。取20μL的500U/mL乙酰胆碱酯液，加入980μL的PBS，即乙酰胆碱酯酶浓度为10U/mL，取40μL的10U/mL乙酰胆碱酯液，加入960μL的PBS，即乙酰胆碱酯酶浓度为0.4U/mL。乙酰胆碱酯液应现配现用。

2、海胆酮对乙酰胆碱酯酶的抑制率的测定

在96孔板中依次分别加入80μL buffer D，20μL 0.4U/mL乙酰胆碱酯酶液，20μL不同浓度(5，10，30，40，50μg/mL)的海胆酮样品，37℃孵育15min，再加入40μL 0.6mmol/L底物碘化乙酰胆碱水溶液，40μL 0.6mmol/L显色剂DTNB溶液，37℃酶促反应15min，加50μL无水乙醇中止反应，在405nm波长处测96孔板的吸光度A₁。用buffer D替代酶液，在同一波长下测定其吸光值A₂，用二氯甲烷与甲醇混合液(V/V，1:1)替代海胆酮溶液，测定吸光值A₃，用buffer D和二氯甲烷与甲醇混合液分别替代酶液和海胆酮溶液，测定吸光值A₄。选取氢溴酸加兰他敏为阳性对照。每组实验重复三次，按下式计算抑制率：

通过测定，我们得到如图1所示的结果，纵坐标表示抑制率，横坐标表示海胆酮的质量浓度。从图中可以看出，海胆酮对乙酰胆碱酯酶有一定的抑制作用，且随着海胆酮浓度的增大，抑制率也随之增大。阳性对照氢溴酸加兰他敏对乙酰胆碱酯酶的IC₅₀值为23.20μg/mL，其是一种常见的乙酰胆碱酯酶抑制剂。当海胆酮浓度为50μg/mL时，对乙酰胆碱酯酶的抑制率达到98.34％。通过回归曲线计算得海胆酮对乙酰胆碱酯酶的IC₅₀值为16.29μg/mL。可见，海胆酮对乙酰胆碱酯酶有较好的抑制作用，而本发明所述的测定方法能够准确的测出海胆酮对乙酰胆碱酯酶的抑制率。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不应理解为必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例进行接合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (4)

1.海胆酮在制备乙酰胆碱酯酶抑制剂中的应用。

2.海胆酮在制备预防或治疗阿尔兹海默症的药物中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物包括有效量的海胆酮和药学上可接受的辅料组成。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物为胶囊剂、片剂、颗粒、口服剂或丸剂。

Images