CN112245587B - 含nad和胆碱酯酶抑制剂的药物组合物及其用途 - Google Patents
含nad和胆碱酯酶抑制剂的药物组合物及其用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112245587B CN112245587B CN202011125738.2A CN202011125738A CN112245587B CN 112245587 B CN112245587 B CN 112245587B CN 202011125738 A CN202011125738 A CN 202011125738A CN 112245587 B CN112245587 B CN 112245587B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nad
- pharmaceutical composition
- rivastigmine
- galantamine
- dosage form
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 31
- 239000000544 cholinesterase inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 29
- ASUTZQLVASHGKV-JDFRZJQESA-N galanthamine Chemical compound O1C(=C23)C(OC)=CC=C2CN(C)CC[C@]23[C@@H]1C[C@@H](O)C=C2 ASUTZQLVASHGKV-JDFRZJQESA-N 0.000 claims abstract description 66
- XSVMFMHYUFZWBK-NSHDSACASA-N Rivastigmine Chemical compound CCN(C)C(=O)OC1=CC=CC([C@H](C)N(C)C)=C1 XSVMFMHYUFZWBK-NSHDSACASA-N 0.000 claims abstract description 34
- 229960004136 rivastigmine Drugs 0.000 claims abstract description 34
- 229960003980 galantamine Drugs 0.000 claims abstract description 33
- ASUTZQLVASHGKV-UHFFFAOYSA-N galanthamine hydrochloride Natural products O1C(=C23)C(OC)=CC=C2CN(C)CCC23C1CC(O)C=C2 ASUTZQLVASHGKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 229940122041 Cholinesterase inhibitor Drugs 0.000 claims abstract description 16
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 39
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 20
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 8
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 claims description 6
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 239000008299 semisolid dosage form Substances 0.000 claims description 4
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 claims description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 2
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 claims description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 2
- ADEBPBSSDYVVLD-UHFFFAOYSA-N donepezil Chemical compound O=C1C=2C=C(OC)C(OC)=CC=2CC1CC(CC1)CCN1CC1=CC=CC=C1 ADEBPBSSDYVVLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 49
- 229960003530 donepezil Drugs 0.000 abstract description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 23
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 74
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 74
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 72
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 66
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 45
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 23
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 14
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 14
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 14
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 11
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 8
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 6
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 6
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 6
- 102000008221 Superoxide Dismutase-1 Human genes 0.000 description 5
- 108010021188 Superoxide Dismutase-1 Proteins 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- HPOIPOPJGBKXIR-UHFFFAOYSA-N 3,6-dimethoxy-10-methyl-galantham-1-ene Natural products O1C(C(=CC=2)OC)=C3C=2CN(C)CCC23C1CC(OC)C=C2 HPOIPOPJGBKXIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LPCKPBWOSNVCEL-UHFFFAOYSA-N Chlidanthine Natural products O1C(C(=CC=2)O)=C3C=2CN(C)CCC23C1CC(OC)C=C2 LPCKPBWOSNVCEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- BGLNUNCBNALFOZ-WMLDXEAASA-N galanthamine Natural products COc1ccc2CCCC[C@@]34C=CCC[C@@H]3Oc1c24 BGLNUNCBNALFOZ-WMLDXEAASA-N 0.000 description 4
- IYVSXSLYJLAZAT-NOLJZWGESA-N lycoramine Natural products CN1CC[C@@]23CC[C@H](O)C[C@@H]2Oc4cccc(C1)c34 IYVSXSLYJLAZAT-NOLJZWGESA-N 0.000 description 4
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 4
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 102100031455 NAD-dependent protein deacetylase sirtuin-1 Human genes 0.000 description 3
- 108010041191 Sirtuin 1 Proteins 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 3
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 2
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000014303 Amyloid beta-Protein Precursor Human genes 0.000 description 2
- 108010079054 Amyloid beta-Protein Precursor Proteins 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 2
- 230000007370 cognitive improvement Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 208000006888 Agnosia Diseases 0.000 description 1
- 241001047040 Agnosia Species 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-O NAD(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-O 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 102000011990 Sirtuin Human genes 0.000 description 1
- 108050002485 Sirtuin Proteins 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007450 amyloidogenic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000007131 anti Alzheimer effect Effects 0.000 description 1
- 201000007201 aphasia Diseases 0.000 description 1
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000010326 executive functioning Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 206010027175 memory impairment Diseases 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000019581 neuron apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
- A61K31/27—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carbamic or thiocarbamic acids, meprobamate, carbachol, neostigmine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7084—Compounds having two nucleosides or nucleotides, e.g. nicotinamide-adenine dinucleotide, flavine-adenine dinucleotide
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明属于药物组合物领域，具体涉及含NAD的药物组合物及其用途。本发明提供了一种含NAD的药物组合物，所述药物组合物包含NAD和胆碱酯酶抑制剂。所述胆碱酯酶抑制剂选自多奈哌齐、卡巴拉汀或加兰他敏中的一种或以上，优选地，所述胆碱酯酶抑制剂选自卡巴拉汀。所述药物组合物增强了NAD对阿尔兹海默症的效果，扩大了NAD的治疗范围。
Description
技术领域
本发明属于药物组合物领域，具体涉及含NAD的药物组合物及其用途。
背景技术
阿尔茨海默症是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。临床上以记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征。十个65岁及以上的老人里就有一个患有阿尔兹海默症，随着年龄增大，患病率还会提高。
目前常见的阿尔茨海默病药物有两类。其中一类称为胆碱酯酶抑制剂，包括多奈哌齐、卡巴拉汀和加兰他敏，一些安慰剂对照、大样本随机对照试验对这3种胆碱酯酶抑制剂进行了研究，结果显示药物对轻到中度阿尔茨海默病患者认知功能、总体转归均有效(I级)。
阿尔茨海默症与淀粉样β蛋白密切相关。相关研究发现SIRTs与阿尔茨海默病中淀粉样β蛋白前体(APP)的非淀粉样生成途径有关。研究表明，增加核NAD+的合成和激活SIRT1可以防止神经元轴突变性。同样，NAD+对SIRT1的激活显着降低了寡聚淀粉样β蛋白的水平。总的来说，研究发现了增加核NAD+的合成和激活SIRT1有助于减少阿尔茨海默氏病患者的发病风险。但是有研究指出NADH在先前报道的范围内不太可能实现认知改善，并提出了反对该化合物在阿尔兹海默症中有效性的理论论据(Rainer M,Kraxberger E,Haushofer M,et al.No evidence for cognitive improvement from oral nicotinamide adeninedinucleotide(NADH)in dementia[J].Journal of neural transmission,2000,107(12):1475-1481)。
可见，关于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对阿尔兹海默症的治疗并不明确，制约了烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在临床中的应用。
发明内容
(一)解决的技术问题
本发明提供了一种含NAD(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)和胆碱酯酶抑制剂的药物组合物，增强了NAD对阿尔兹海默症的效果，扩大了NAD的治疗范围。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明在一个实施例中提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含NAD和胆碱酯酶抑制剂。
优选地，所述胆碱酯酶抑制剂选自多奈哌齐、卡巴拉汀或加兰他敏中的一种或以上。
优选地，所述胆碱酯酶抑制剂选自卡拉巴汀；优选地，NAD与卡巴拉汀的摩尔比为1:10至10:1；优选地，NAD与卡巴拉汀的摩尔比为1:5至5:1；优选地，NAD与卡巴拉汀的摩尔比为2:1至8:1；优选地，NAD与卡巴拉汀的摩尔比为5:1。
优选地，所述胆碱酯酶抑制剂选自多奈哌齐；优选地，NAD与多奈哌齐的摩尔比为1:10至10:1；优选地，NAD与多奈哌齐的摩尔比为1:5至5:1；优选地，NAD与多奈哌齐的摩尔比为2:1至8:1；优选地，NAD与多奈哌齐的摩尔比为5:1。
优选地，所述胆碱酯酶抑制剂选自加兰他敏；优选地，NAD与加兰他敏的摩尔比为1:10至10:1；优选地，NAD与加兰他敏的摩尔比为1:5至5:1；优选地，NAD与加兰他敏的摩尔比为1:3至3:1；优选地，NAD与加兰他敏的摩尔比为1:1。
在一个实施例中，本发明提供一种药物制剂，所述制剂包含所述药物组合物。
优选地，所述制剂选自液体剂型、固体剂型、半固体剂型或气体剂型。
所述液体剂型包括溶液剂、注射剂、输液剂、口服液等；固体剂型包括片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂等；半固体剂型包括软膏剂、凝胶剂等；气体剂型包括气雾剂、喷雾剂等。
在另一个实施例中，本发明提供了一种所述药物组合物或所述药物制剂在制备治疗阿尔兹海默症药物中的应用。
(三)有益效果
本发明提供了一种含NAD(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)的药物组合物，增强了NAD对阿尔兹海默症的效果，扩大了NAD的治疗范围。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为NAD及各胆碱酯酶抑制剂单独给药对HT-22神经元细胞活力的影响；
图2为L-谷氨酸(L-glu)诱导下细胞活力检测；
图3为NAD与各胆碱酯酶抑制剂联合用药细胞活力检测；
图4为NAD与各胆碱酯酶抑制剂联合用药ROS水平检测；
图5为NAD与各胆碱酯酶抑制剂联合用药ROS显微荧光成像；
图6为NAD与各胆碱酯酶抑制剂联合用药qRT-PCR实验。
注：图中“*”表示某实验组与对照组(Control组)比较的显著性；“#”表示某实验组与诱导组(L-glu组)比较的显著性。对比对象不同故符号不同。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下面通过具体的实施例进行详细的说明。
实施例1：NAD及各胆碱酯酶抑制剂单独给药对HT-22神经元细胞活力的影响
1、细胞铺板。HT-22细胞生长至90％汇合度后用胰酶消化，离心后在细胞计数板上计数得到其密度，经过计算后以10000个细胞/孔将细胞分至96孔板中，每孔100μL DMEM完全培养基。
2、加药处理。待96孔板中细胞过夜贴壁，在显微镜下观察确认细胞状态良好后，每孔100μL更换为DMEM-SF无血清培养基，各药物按照如下浓度进行加药处理：
卡巴拉汀：0，0.05，0.5，10，50，500，1000μM
多奈哌齐：0，0.1，1，5，10，50，100μM
加兰他敏：0，0.05，0.1，0.5，5，10，100μM
NAD：0，0.05，0.1，1，10，100，500，1000μM
3、细胞活力检测。
①配置MTT溶液。加药处理18h后，按照3mg/mL称取所需量的MTT粉末溶于新鲜的DMEM-SF培养基中，将溶解好MTT的培养基按照20μL/孔加入到96孔板中，此时每孔总体积为120μL，即MTT终浓度为0.5mg/mL。
②检测。MTT加入原96孔板反应4h后从培养箱取出，用1×PBS缓冲液清洗3次后，每孔加入150μL DMSO溶解，摇床震荡15min，结束后用酶标仪在550nm处检测吸光度。
如图1所示，从以上实验结果来看：
卡巴拉汀对细胞活性基本无影响或影响较小，其中较好的浓度为中浓度5μM；多奈哌齐在1，5，10，50μM浓度下显著提高神经元活性，甚至其最低浓度对神经元活性也有一定提高；加兰他敏单独给药对细胞活性影响不大，但其最高浓度结果呈现出相反趋势。NAD对神经元活性的提高主要体现在中至高浓度(10，100，500，1000μM)，并且在中高浓度范围内基本上呈浓度依赖趋势，浓度进一步升高则细胞活性增加不明显。
实施例2：L-谷氨酸(L-glu)诱导实验
1、细胞铺板。HT-22细胞生长至90％汇合度后用胰酶消化，离心后在细胞计数板上计数得到其密度，经过计算后以10000个细胞/孔将细胞分至96孔板中，每孔100μL DMEM完全培养基。
2、加药处理。待96孔板中细胞过夜贴壁，在显微镜下观察确认细胞状态良好后，加药处理：
①L-Glu配制(现配现用)。称取所需量的L-Glu溶解于新鲜的DMEM-SF(100μL/孔)无血清培养基中使其浓度为20mM待用；
②将各药物按照如下浓度分别溶解于①中配制好的溶液中：
卡巴拉汀：0，0.05，0.5，10，50，500μM
多奈哌齐：0，0.1，1，5，10，50μM
加兰他敏：0，0.05，0.5，5，50，100μM
NAD：0，0.05，0.1，1，10，100，500，1000μM
3、细胞活力检测。
①配置MTT溶液。加药处理18h后，按照3mg/mL培养基称取所需量的MTT粉末溶于新鲜的DMEM-SF培养基中，将溶解好MTT的培养基按照20μL/孔加入到96孔板中，此时每孔总体积为120μL，即MTT终浓度为0.5mg/mL。
②检测。MTT加入原96孔板反应4h后从培养箱取出，用1×PBS缓冲液清洗3次后，每孔加入150μL DMSO溶解，摇床震荡15min，结束后用酶标仪在550nm处检测吸光度。
以前期各阳性药物及NAD分别单独给药的实验结果为基础，进行了L-谷氨酸(L-glu)诱导实验。通过对实验数据的分析，如图2所示，我们可以得知L-glu的诱导有效降低了细胞活力。卡巴拉汀在低到中浓度可抵抗L-glu诱导的神经元衰亡，其高浓度则无提高作用，与其单独作用趋势大致一致；多奈哌齐组在加入了L-glu后其中浓度提升细胞活力的作用消失，反而在高浓度对细胞活力出现了一定的挽救作用；加兰他敏出现了与多奈哌齐类似的情况，低到中浓度下被L-glu拮抗，直至高浓度才显示出其挽救神经元活力的作用，但总体趋势与其单独给药相似；由结果可以看到，无论是其单独作用还是与L-glu联合用药，NAD在中高浓度显著提升神经元细胞的活力，与实施例1对细胞活性影响的趋势相近。
实施例3：联合用药检测细胞活力实验
1、细胞铺板。HT-22细胞生长至90％汇合度后用胰酶消化，离心后在细胞计数板上计数得到其密度，经过计算后以10000个细胞/孔将细胞分至96孔板中，每孔100μL DMEM完全培养基。
2、加药处理。待96孔板中细胞过夜贴壁，在显微镜下观察确认细胞状态良好后，加药处理：
①L-Glu配制(现配现用)。称取所需量的L-Glu溶解于新鲜的DMEM-SF(100μL/孔)无血清培养基中使其浓度为20mM待用；
②将各药物按照如下浓度分别溶解于①中配制好的溶液中：
卡巴拉汀(Riva60)：60μM
多奈哌齐(Donep60)：60μM
加兰他敏(Galan100)：100μM
NAD：60μM，100μM
阳性药+NAD:Rivastigmine 10μM+NAD 50μM(RN50)；Donepezil 10μM+NAD 50μM(DN50)；Galantamine 50μM+NAD 50μM(GN50)
3、细胞活力检测。
①配置MTT溶液。加药处理18h后，按照3mg/mL培养基称取所需量的MTT粉末溶于新鲜的DMEM-SF培养基中，将溶解好MTT的培养基按照20μL/孔加入到96孔板中，此时每孔总体积为120μL，即MTT终浓度为0.5mg/mL。
②检测。MTT加入原96孔板反应4h后从培养箱取出，用1×PBS缓冲液清洗3次后，每孔加入150μL DMSO溶解，摇床震荡15min，结束后用酶标仪在550nm处检测吸光度。
如图3所示，L-glu显著下调了HT-22神经元的细胞活力，60μM的卡巴拉汀和多奈哌齐对细胞活力无显著性提升，而与50μM的NAD联用则明显提升了细胞活力，但多奈哌齐与NAD的联用与NAD单独用药无显著性趋势；另外，100μM的加兰他敏单独处理以及其与NAD的联合用药均显著提高了神经元活力，且联用组与加兰他敏单独处理组相比具有显著性提高。此结果提示胆碱酯酶抑制剂与NAD联用可以协同提高神经元活力，且卡巴拉汀或加兰他敏与NAD连用效果更佳。
实施例4：联合用药ROS水平检测实验
1、细胞铺板。HT-22细胞生长至90％汇合度后用胰酶消化，离心后在细胞计数板上计数得到其密度，经过计算后以10000个细胞/孔将细胞分至黑色避光96孔板。每孔100μLDMEM完全培养基。
2、加药处理。待96孔板中细胞过夜贴壁，在显微镜下观察确认细胞状态良好后，加药处理：
①L-Glu配制(现配现用)。称取所需量的L-Glu溶解于新鲜的DMEM-SF(100μL/孔)无血清培养基中使其浓度为20mM待用；
②将各药物按照如下浓度分别溶解于①中配制好的溶液中：
卡巴拉汀(Riva60)：60μM
多奈哌齐(Donep60)：60μM
加兰他敏(Galan100)：100μM
NAD：60μM，100μM
阳性药+NAD:Rivastigmine 10μM+NAD 50μΜ(RN50)；Donepezil 10μM+NAD 50μM(DN50)；Galantamine 50μM+NAD 50μM(GN50)
3、细胞ROS水平检测。
①配置DCFH-DA溶液。加药处理18h后，按照10mM浓度将DCFH-DA活性氧探针溶于新鲜的DMEM-SF培养基中，将孔板中原培养基抽走，后将溶解好DCFH-DA的培养基按照35μL/孔加入到96孔板中，在培养箱中孵育25min。
②检测。反应结束后将孔板取出，用1×PBS缓冲液清洗2次后，最后一次在每孔中加入100μL 1×PBS，用酶标仪分别在488nm激发光和525nm发射光的条件下检测荧光强度。
从图4中可以看出，60μM的NAD、卡巴拉汀和加兰他敏均可以显著降低L-glu诱导的ROS产生，60μM的多奈哌齐轻微下调ROS水平但无统计意义。NAD分别与三种阳性药的联用均能够更大程度地抑制细胞活性氧的产生，且与同等浓度下各药物单独处理相比具有显著性趋势。这证明NAD可以和胆碱酯酶抑制剂卡巴拉汀、多奈哌齐及加兰他敏协同降低L-glu诱导的神经元ROS产生。
实施例5：联合用药ROS显微荧光成像实验
1、细胞铺板。HT-22细胞生长至90％汇合度后用胰酶消化，离心后在细胞计数板上计数得到其密度，经过计算后以5×105个细胞/孔将细胞分至12孔板中，每孔添加500μLDMEM完全培养基。
2、加药处理。待孔板中细胞过夜贴壁，在显微镜下观察确认细胞状态良好后，加药处理：
①L-Glu配制(现配现用)。称取所需量的L-Glu溶解于新鲜的DMEM-SF(100μL/孔)无血清培养基中使其浓度为20mM待用；
②将各药物按照如下浓度分别溶解于①中配制好的溶液中：
卡巴拉汀(Riva60)：60μM
多奈哌齐(Donep60)：60μM
加兰他敏(Galan100)：100μM
NAD：60μM，100μM
阳性药+NAD:Rivastigmine 10μM+NAD 50μΜ(RN50)；Donepezil 10μM+NAD 50μM(DN50)；Galantamine 50μM+NAD 50μM(GN50)
3、ROS荧光成像
①配置DCFH-DA溶液。加药处理18h后，按照10mM浓度将DCFH-DA活性氧探针溶于新鲜的DMEM-SF培养基中，将孔板中原培养基抽走，后将溶解好DCFH-DA的培养基按照500μL/孔加入到12孔板中，在培养箱中孵育25min。
②检测。反应结束后将孔板取出，用1×PBS缓冲液清洗2次后，最后一次在每孔中加入500μL 1×PBS，在荧光显微镜下观察并拍摄荧光显微图像。
如图5所示，不做处理的Control组细胞只具有微弱的ROS荧光，而L-glu处理的神经元出现了强烈的ROS绿色荧光。60μM的NAD以及60μM的卡巴拉汀(上)和多奈哌齐(中)和100μM的加兰他敏(下)单独处理能够不同程度的降低ROS荧光强度，50μM的NAD分别与三种阳性药联用后显示出更强的抑制ROS产生的作用，且与图4所示结果一致。
实施例6：联合用药qRT-PCR实验
1、细胞铺板。HT-22细胞生长至90％汇合度后用胰酶消化，离心后在细胞计数板上计数得到其密度，经过计算后以5×105个细胞/孔将细胞分至12孔板中，每孔添加500μLDMEM完全培养基。
2、加药处理。待孔板中细胞过夜贴壁，在显微镜下观察确认细胞状态良好后，加药处理：
①L-Glu配制(现配现用)。称取所需量的L-Glu溶解于新鲜的DMEM-SF(100μL/孔)无血清培养基中使其浓度为20mM待用；
②将各药物按照如下浓度分别溶解于①中配制好的溶液中：
卡巴拉汀(Riva60)：60μM
多奈哌齐(Donep60)：60μM
加兰他敏(Galan100)：100μM
NAD：60μM，100μM
阳性药+NAD:Rivastigmine 10μM+NAD 50μΜ(RN50)；Donepezil 10μM+NAD 50μM(DN50)；Galantamine 50μM+NAD 50μM(GN50)
3、总RNA提取及反转录
每孔各加入200μL Trizol RNA提取剂，轻轻吹打至体系呈均一、透明的溶液状，并移至1.5mL离心管中，每管加入40μL三氯甲烷后震荡并4℃离心10min，取上清液80μL并加入等量异丙醇至-20℃进行过夜层析。层析后的样品经过75％和100％乙醇洗涤后用超纯水进行溶解。检测RNA样品浓度后将等量(1μg)RNA样品通过qPCR反转录为cDNA作为后续qRT-PCR的模板。
4、qRT-PCR检测目的基因mRNA水平
将所得cDNA作为模板进行qRT-PCR实验，使用实时荧光定量PCR仪检测抗氧化因子SOD1和GSH的mRNA表达，所用引物如下：
mGSH-f：5’-CAATGTAAAATTGGGCTCGAA-3’；
mGSH-r:5’-GTTTCCCGTGCAATCAGTTC-3’；
mSOD1-f:5’-GCCTTGTGTATTGTCCCCAT-3’；
mSOD1-r:5’-ACCATCCACTTCGAGCAGAA-3’.
结果如图6所示，L-glu显著抑制了抗氧化因子GSH(上)的转录，但对SOD1的转录无影响(可能损害了其酶活性)，60μM和100μM的NAD则显著提高被L-glu抑制的GSH和SOD1转录水平，但阳性药单独处理的实验组中，与L-glu诱导组相比，除了60μM多奈哌齐对SOD1产生上调作用外，其余各阳性药单独处理的实验组均对抗氧化因子GSH和SOD1的转录无显著性提升，然而在与50μM NAD联用后，均显著提高了二者的mRNA水平。
以上实验结果证明，NAD能够与三种胆碱酯酶抑制剂类AD阳性药卡巴拉汀、多奈哌齐及加兰他敏协同或部分协同，通过减轻氧化应激水平提高神经元活力，显示出良好的协同抗AD潜力。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (14)
1.一种治疗阿尔兹海默症的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物由NAD和胆碱酯酶抑制剂组成，所述胆碱酯酶抑制剂选自卡巴拉汀或加兰他敏；其中，所述NAD与胆碱酯酶抑制剂的摩尔比为1:10至10:1。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述胆碱酯酶抑制剂选自卡巴拉汀；所述NAD与卡巴拉汀的摩尔比为1:5至5:1。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述胆碱酯酶抑制剂选自卡巴拉汀；所述NAD与卡巴拉汀的摩尔比为2:1至8:1。
4.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述NAD与卡巴拉汀的摩尔比为5:1。
5.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述胆碱酯酶抑制剂选自加兰他敏；所述NAD与加兰他敏的摩尔比为1:5至5:1。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述NAD与加兰他敏的摩尔比为1:3至3:1。
7.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述NAD与加兰他敏的摩尔比为1:1。
8.一种治疗阿尔兹海默症的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂包含权利要求1-7任一项所述的药物组合物。
9.如权利要求8所述的药物制剂，其特征在于，所述制剂选自液体剂型、固体剂型、半固体剂型或气体剂型。
10.如权利要求9所述的药物制剂，其特征在于，所述液体剂型为溶液剂；所述固体剂型为片剂、胶囊剂、散剂或颗粒剂；所述半固体剂型为软膏剂或凝胶剂；所述气体剂型为气雾剂或喷雾剂。
11.如权利要求9所述的药物制剂，其特征在于，所述液体剂型为注射剂。
12.如权利要求9所述的药物制剂，其特征在于，所述液体剂型为输液剂。
13.如权利要求9所述的药物制剂，其特征在于，所述液体剂型为口服液。
14.如权利要求1-7所述的任一项药物组合物或权利要求8-13所述的任一项药物制剂在制备治疗阿尔兹海默症药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011125738.2A CN112245587B (zh) | 2020-10-20 | 2020-10-20 | 含nad和胆碱酯酶抑制剂的药物组合物及其用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011125738.2A CN112245587B (zh) | 2020-10-20 | 2020-10-20 | 含nad和胆碱酯酶抑制剂的药物组合物及其用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112245587A CN112245587A (zh) | 2021-01-22 |
| CN112245587B true CN112245587B (zh) | 2022-02-22 |
Family
ID=74245531
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011125738.2A Active CN112245587B (zh) | 2020-10-20 | 2020-10-20 | 含nad和胆碱酯酶抑制剂的药物组合物及其用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112245587B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114306366B (zh) * | 2021-11-30 | 2023-01-06 | 合肥康诺生物制药有限公司 | 含nad和cd38抑制剂的药物组合物及其用途 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020081923A1 (en) * | 2018-10-19 | 2020-04-23 | Disarm Therapeutics, Inc. | Inhibitors of sarm1 in combination with nad+ or a nad+ precursor |
-
2020
- 2020-10-20 CN CN202011125738.2A patent/CN112245587B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020081923A1 (en) * | 2018-10-19 | 2020-04-23 | Disarm Therapeutics, Inc. | Inhibitors of sarm1 in combination with nad+ or a nad+ precursor |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 电针并药物治疗面神经炎疗效观察;王少贞;《针灸临床杂志》;20130920;第29卷(第9期);13-15 * |
| 闭塞性脑血管病24例;张树田;《实用儿科临床杂志》;19950510;第10卷(第3期);155-156 * |
| 阿尔茨海默病相关治疗的研究进展;毕祥云；等;《中华保健医学杂志》;20170630;第19卷(第3期);275-277页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112245587A (zh) | 2021-01-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6083932A (en) | Pharmaceutical compositions derived from ginseng and methods of treatment using same | |
| Patris et al. | Citalopram versus fluoxetine: a double-blind, controlled, multicentre, phase III trial in patients with unipolar major depression treated in general practice | |
| Liu et al. | Microglia Polarization from M1 toward M2 Phenotype Is Promoted by Astragalus Polysaccharides Mediated through Inhibition of miR‐155 in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis | |
| CN113143946A (zh) | 烟酰胺单核苷酸及其在抗肿瘤药物心肌损伤中的保护应用 | |
| Liu et al. | Inhibition of TRPA1 Ameliorates Periodontitis by Reducing Periodontal Ligament Cell Oxidative Stress and Apoptosis via PERK/eIF2α/ATF‐4/CHOP Signal Pathway | |
| CN112245587B (zh) | 含nad和胆碱酯酶抑制剂的药物组合物及其用途 | |
| WO2015140799A1 (en) | Methods for improving cognitive function via modulation of quinone reductase 2 | |
| EP4205732A1 (en) | Cannabinoid composition and application thereof in preparation of drug for treating neurodegenerative diseases such as parkinson's disease and alzheimer's disease | |
| US20240122873A1 (en) | Treatment of fragile x syndrome with cannabidiol | |
| AU2010258821A1 (en) | Genotype specific methods for treating human subjects using 4- methylpyrazole | |
| CN102755341A (zh) | 类叶升麻苷在制备防治阿尔茨海默病药物中的用途 | |
| CN103860575A (zh) | 京尼平苷作为乙酰胆碱酯酶抑制剂的应用 | |
| CN111569080A (zh) | Plga在制备ssri类抗抑郁药物微球中的应用 | |
| CN103191407A (zh) | 一种五肽及其代谢物用于制备抗痴呆产品的新用途 | |
| CN112245588A (zh) | 含nad和nmda受体拮抗剂的药物组合物及其用途 | |
| CN113244255A (zh) | 灯盏花素作为化疗药物心肌毒性预防和治疗药物的应用 | |
| CN1695604A (zh) | 防治神经退行疾病、注意力缺陷多动症和抑郁症的药物 | |
| CN109528719B (zh) | 长春西汀在制备预防和/或治疗急进高原导致的高原病的药物中的应用 | |
| EP2556833B1 (en) | Pharmaceutical composition for the treatment of alzheimer's disease, method for producing same and use thereof | |
| CN115919841B (zh) | 一种用于预防或治疗阿尔茨海默病的中药单体组合物及应用 | |
| WO2019124601A1 (ko) | NFAT5 및 NF-kB의 결합 억제제를 유효성분으로 포함하는 백내장 예방 또는 치료용 조성물 | |
| Kashio et al. | Taurine, Coenzyme Q10, and Hydrogen Water Prevents Germanium Dioxide-Induced Mitochondrial Dysfunction and Associated Sensorineural Hearing Loss in mouse | |
| Ussipbek et al. | Prospects of the application of coenzyme Q10 for correction of mitochondrial dysfunction | |
| CN108159035A (zh) | 肉桂酸类衍生物的新用途 | |
| CN110251494B (zh) | 2，7，2′-三羟基-4，4′，7′-三甲氧基-1，1′-双菲的用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 231100 southeast corner of the intersection of Huainan North Road and Huaihai Avenue, Changfeng Shuangfeng Economic Development Zone, Hefei City, Anhui Province Patentee after: Hefei Kangnuo Biopharmaceutical Co.,Ltd. Patentee after: KAIFENG KANGNUO PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Address before: 231100 southeast corner of the intersection of Huainan North Road and Huaihai Avenue, Changfeng Shuangfeng Economic Development Zone, Hefei City, Anhui Province Patentee before: Hefei Kangnuo biopharmaceutical Co.,Ltd. Patentee before: KAIFENG KANGNUO PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 231100 southeast corner of the intersection of Huainan North Road and Huaihai Avenue, Changfeng Shuangfeng Economic Development Zone, Hefei City, Anhui Province Patentee after: Kangnuo Biopharmaceutical Co.,Ltd. Patentee after: KAIFENG KANGNUO PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Address before: 231100 southeast corner of the intersection of Huainan North Road and Huaihai Avenue, Changfeng Shuangfeng Economic Development Zone, Hefei City, Anhui Province Patentee before: Hefei Kangnuo Biopharmaceutical Co.,Ltd. Patentee before: KAIFENG KANGNUO PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. |