CN111887096A - 一种金黄色大球盖菇菌株及其栽培方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一株金黄色大球盖菇菌种，具体涉及具体涉及一株性状稳定适合规模化栽培且颜色为淡黄色至金黄色的大球盖菇菌株，属生物技术领域。金黄色大球盖菇（Stropharia rugosoannulata Farl.ex Murrill）ZJJQG001菌株，已于2020年5月28日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC），保藏编号为：CGMCC NO.19645。本发明从菌种选育、鉴定、制种、栽培综合阐述了金黄色大球盖菇整个选育至栽培过程。本发明的优点在于利用菌株CGMCC NO.19645制作菌种，发菌快，污染少，菌丝壮；子实体菌盖颜色为金黄色，且性状稳定；成熟开伞后菌褶颜色与酒红色球盖菇菌褶比较色较浅，浅灰色；耐高温，在35℃左右能正常出菇，且高品质率达80%以上，温度过高会致使颜色较浅，低温颜色鲜艳金黄色；产量高，能实现规模化栽培，具有较高的应用价值。

Description

一种金黄色大球盖菇菌株及其栽培方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种金黄色大球盖菇菌株及其栽培方法。

背景技术

大球盖菇（Stropharia rugosoannulata Farl. ex Murrill）隶属于担子菌门(Basidomycota)，层菌纲(Hymenomycetes)，伞菌目(Agaricales)，球盖菇科(Strophariaceae)，球盖菇属(Stropharia)。别名皱环球盖故、酒红色球盖菇、皱球盖等，更有商品名赤松茸，1922年MURRILL发现于美国并命名，后相继在欧洲各国、日本等地发现，我国西南三省等地也有野生大球盖菇分布。1969年德国人成功人工驯化栽培大球盖菇，到20世纪80年代我国引进栽培，在广西、福建、浙江等地试种成功。众多研究表明大球盖菇子实体中含有丰富的蛋白质、维生素、矿物质和多糖等营养成分，是欧美各国人工栽培的著名食用菌之一，也是联合国粮农组织(FAO)向发展中国家推荐栽培的食用菌之一。据报道,该真菌多糖还具有预防冠心病、助消化、缓解精神疲劳等功效,而且对小白鼠S-180肉瘤及艾氏腹水癌的抑制率均达70%以上。

大球盖菇是生物化解农作物下脚料的能手，它以谷物的秸秆和粪肥为主要栽培料，栽培出蘑菇的同时又解决了环境污染问题，成为生态农业的生力军。大球盖菇产量高，生产成本低，营养丰富，易被消费者接受，同时又能有效消纳秸秆，减少面源污染，培肥地力，“变废为宝”，改善生态环境，增加农民收入，因此是精准扶贫、种植结构调整、林业产业和矿区经济转型的好项目，各地纷纷出台的优惠扶持政策，促进了大球盖菇的迅速发展。目前除鲜品外，还有腌渍品、干品为主流产品，深加工研究也在不断应用，加工品种在不断扩大，目前大球盖菇正处在蓬勃发展的关键时期。大球盖菇的生态价值突出大球盖菇的开发潜力大大球盖菇具有食用、保健、医药三大功用，市场前景非常乐观。大球盖菇的生态价值突出、开发潜力大，具有巨大的发展前景。然而，目前市场上的品种为菌盖红褐色至葡萄酒红色，或暗褐色，且市场在逐年上升，品种单一致使上升较慢，消费者没有更多选择的品种。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种金黄色大球盖菇菌株；第二目的在于提供所述的金黄色大球盖菇菌株（Stropharia rugosoannulata）ZJJQG001的栽培方法。

除非另有说明外，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。

本发明的第一目的是这样实现的，金黄色大球盖菇菌株（Strophariarugosoannulata）ZJJQG001，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2020年5月28日，保藏编号：CGMCC No.19645，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

——金黄色大球盖菇菌株（Stropharia rugosoannulata）ZJJQG001的获得与鉴定

1、品种选育与保藏

采集酒红色大球盖菇栽培过程中自然变异生长的金黄色大球盖菇子实体，在超菌台内通过加富培养基斜面试管接种组织块，25℃暗培养7天纯化，继续培养25天左右挑选长势较好试管，制作栽培菌种，25℃培养，待长满菌袋栽培出菇；出菇后选取金黄色子实体性状较好片区继续采摘子实体组织分离菌种；通过多次不断的栽培出菇选育，最终获得一株栽培出菇金黄色性状稳定遗传的菌株ZJJQG001。斜面试管保藏，将菌丝长满试管三分之二时放入冰箱4℃保藏；无菌水保藏，切取菌丝块置于无菌蒸馏水冻存管内放入4℃冰箱保存。

2、菌株ZJJQG001的鉴定

用CTAB法分别提取ZJJQG001菌丝及栽培出菇子实体基因组DNA，并以1%的琼脂糖凝胶电泳后经GelRed染色后进行检测；以提取到的总DNA为模板，采用Mix混合试剂（湖南擎科生物技术有限公司），以ITS4（5’—TCCTCCGCTTATTGATATGC—3’）和ITS5（5’—GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG—3’）为引物扩增Internal Transcribed Spacer (ITS)序列。PCR扩增体系为(25 μL)：2×Mix 12.5μl， 10 μM引物各0.5 μL，ddH2O 11 μL，DNA模板0.5μL。反应程序为：95℃预变性5 min，进入35个扩增循环：95℃变性 40 sec，50℃退火40sec，72℃延伸1 min，然后72℃延伸10 min，4℃保藏；以1%的琼脂糖凝胶电泳后进行检测，送至擎科生物技术完成测序。

所得到的ZJJQG001菌丝及栽培出菇子实体测序结果经过双向拼接后获得ZJJQG001-菌丝——734bp序列（如SEQ ID：No.1所示）和ZJJQG001-子实体——735bp序列（如SEQ ID：No.2所示）。

将两条序列提交GeneBank，应用BLAST（ww.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST）进行同源性搜索，与数据库中各菌株序列进行相似性分析，与数据库中已有的Stropharia rugosoannulata的各个菌株相应序列一致性（Identities）都达到97%~100%。从GeneBank数据库下载同属的5物种和香菇的ITS序列，且使用MEGA7软件构建NJ系统发育树，使用默认参数，Bootstrap检验为1000次。

从系统发育树（图1）中可以看出ZJJQG001的菌丝、子实体均与GeneBank数据库中的大球盖菇同属物种聚为一枝，且与同属物种分支的支持率为100% 所以综合BLAST比对和系统发育树的结果，可以得出测序的ZJJQG001为大球盖菇（Stropharia rugosoannulata）。

本发明的第二目的是这样实现的，包括栽培种制备和大田栽培步骤，具体包括：

A、栽培种制备：

1）原种制备：将金黄色大球盖菇（Stropharia rugosoannulata）接种到原种培养基上于温度20~30℃暗培养得到原种；

2）栽培种制备：将原种接种到栽培种培养基上于温度20~30℃暗培养得到栽培种；

所述的原种培养基配方为：木屑60~80份、小麦10~30份、玉米面5~10份、石膏1~3份；

所述的栽培种培养基配方为：木屑50~70份、稻草10~30份、麦麸5~15份、玉米面5~10份、石膏1~3份；

B、大田栽培：

1）发酵料制备：

将培养料含水量调至65~70%，建堆发酵得到发酵料a；所述的培养料为稻草、蔗渣、棉籽壳、玉米芯或木屑中的一种或几种；

2）铺料播种：

a、做床：场地灭菌灭虫后，将培养料调节水分至75%开始做床，先撒一层1~3cm的石灰粉，然后铺设8~10cm的培养料得到料床；

b、铺料播种：发酵料a温度降至25℃以下后在料床上以3层料2层菌种的方式进行播种，播种后覆盖3~4cm的土，再加3~5cm的覆盖物；

c、管理：播种后2~3后开始萌发，15~25天的时候保持土壤的湿度为50~80%，空气湿度在60~70%；在50~60天后即进行催菇，具体是将温度调至15~20℃，保持通风；催菇5~8天后，保持温度为14~25℃，空气湿度为90~95%，保持通风；

C、采收：在菌盖外的一层菌膜破裂，菌盖内卷不开伞，菌盖呈钟形时即进行采收。

本发明所培育新品种即解决了品种单一的问题，使消费者多了一份选择，能够有力的推动大球盖菇产业发展，推动食用菌产业的发展。随着大球盖菇产业的迅速发展，本专利所保藏的金黄色大球盖菇新品种，其颜色为金黄色，填补市场品种空白，并作出营养成分检测分析。为大球盖菇产业的发展解决了品种单一的问题，可加速产业的发展与壮大，具有较高的研究价值。

金黄色大球盖菇，是由常规的酒红色大球盖菇在长期栽培过程中发生变异而产生的一个新品种，其最大的区别在于菌盖颜色的改变以及开伞后菌褶颜色较浅，属于优良变异；俗话美食讲究“色、香、味”俱全，最先为“色”，那么我们所选育的新品种金黄色大球盖菇在“香、味”相同的前提下，其最新的特点“色”——金黄色，已经作为一个最突出的亮点占据绝大的优势，其次开伞后菌褶颜色浅灰色较酒红色球盖菇菌褶色较浅。大球盖菇目前已逐渐被市场所接受，市场也在不断的发展，现只有酒红色大球盖菇，因此我们选育的金黄色大球盖菇一旦推向市场将会很受欢迎，具有巨大的市场潜力。

本发明通过对酒红色大球盖菇在栽培过程中自然变异产生的金黄色大球盖菇进行组织分离获得初始菌种，最终不断选育得到一株性状稳定适合商业栽培的金黄色大球盖菇菌种。对其进行了形态学、生理生化性质和ITS-RNA分析，该菌株命名为金黄色大球盖菇（Stropharia rugosoannulata）ZJJQG001，属于球盖菇科(Strophariaceae)，球盖菇属(Stropharia)，于2020年5月28日，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC），保藏编号为：CGMCC NO.：19645。

本发明的金黄色大球盖菇（Stropharia rugosoannulata）ZJJQG001的主要形态特征和生理生化性质为：

该菌株的菌落在加富PDA培养基上培养，菌落近圆形，菌丝纯白色，浓密，部分扭结成束；在光学显微镜下菌丝无色透明，多分枝，锁状联合明显，菌丝直径2~4.5μm，具有较多近圆形膨大，膨大直径20~40.5μm；子实体孢子深褐色，长椭圆形，6.8~8.5μm×11.6~14.6μm。

本发明优点：

1、利用菌株CGMCC NO.：19645制作菌种，发菌快，污染少，菌丝壮；

2、子实体菌盖颜色为金黄色，且性状稳定；

3、成熟开伞后菌褶颜色与酒红色球盖菇菌褶比较色较浅，浅灰色；

4、耐高温，在35℃左右能正常出菇，且高品质率达80%以上，温度过高会致使颜色较浅，低温颜色鲜艳金黄色；

5、产量高，能实现规模化栽培，具有较高的应用价值。

附图说明

图1为系统发育树示意图；

图2为出菇照片示意图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。

本发明所述的金黄色大球盖菇菌株（Stropharia rugosoannulata）ZJJQG001，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2020年5月28日，保藏编号：CGMCC No.19645。

本发明所述的金黄色大球盖菇菌株（Stropharia rugosoannulata）ZJJQG001的栽培方法，其特征在于包括栽培种制备和大田栽培步骤，具体包括：

A、栽培种制备：

1）原种制备：将金黄色大球盖菇（Stropharia rugosoannulata）接种到原种培养基上于温度20~30℃暗培养得到原种；

2）栽培种制备：将原种接种到栽培种培养基上于温度20~30℃暗培养得到栽培种；

所述的原种培养基配方为：木屑60~80份、小麦10~30份、玉米面5~10份、石膏1~3份；

所述的栽培种培养基配方为：木屑50~70份、稻草10~30份、麦麸5~15份、玉米面5~10份、石膏1~3份；

B、大田栽培：

1）发酵料制备：

将培养料含水量调至65~70%，建堆发酵得到发酵料a；所述的培养料为稻草、蔗渣、棉籽壳、玉米芯或木屑中的一种或几种；

2）铺料播种：

a、做床：场地灭菌灭虫后，将培养料调节水分至75%开始做床，先撒一层1~3cm的石灰粉，然后铺设8~10cm的培养料得到料床；

b、铺料播种：发酵料a温度降至25℃以下后在料床上以3层料2层菌种的方式进行播种，播种后覆盖3~4cm的土，再加3~5cm的覆盖物；

c、管理：播种后2~3后开始萌发，15~25天的时候保持土壤的湿度为50~80%，空气湿度在60~70%；在50~60天后即进行催菇，具体是将温度调至15~20℃，保持通风；催菇5~8天后，保持温度为14~25℃，空气湿度为90~95%，保持通风；

C、采收：在菌盖外的一层菌膜破裂，菌盖内卷不开伞，菌盖呈钟形时即进行采收。

A步骤中暗培养的温度为25℃。

A步骤中所述的原种培养基配方为：木屑70份、小麦20份、玉米面8份、石膏2份。

A步骤中所述的栽培种培养基配方为：木屑60份、稻草20份、麦麸10份、玉米面8份、石膏2份；

B步骤2）中所述的3层料2层菌种的方式具体是第一层料：8~10cm厚，料层平整，厚度均匀，第一层播种：菌种块间距10cm，深度为2cm，播完种后；在菌种上铺第二层8~10cm厚料，整理成拱形垄状，播第二层菌种；第二层菌种播种完成后，在菌种上铺第三层料，厚2~4cm将菌种盖严。

B步骤2）中所述的覆盖物为稻草和/或松针。

下面以具体实施对本发明做进一步说明：

1、金黄色大球盖菇菌种制作

按配方：木屑70%、小麦20%、玉米面8%、石膏2%，拌料装瓶，制作原种瓶灭菌、冷却，将金黄色大球盖菇ZJJQG001长满试管切小块接入，放置于25℃暗培养，待长满后即可使用。按配方：木屑60%、稻草20%、麦麸10%、玉米面8%、石膏2%，使用聚丙烯菌种袋（规格17cm×35cm）装袋，每袋约1000g，制作栽培种灭菌、冷却，将长好原种接入，25℃暗培养，待长满后即可作为栽培种使用。

2、金黄色大球盖菇大田栽培

A、发酵料制备：

因地制宜，就地取材，灵活调整选取栽培料预湿，培养料含水量65%-70%；建堆，建成底宽1-2m，顶宽1m左右，高1-1.5m；翻堆：当料堆内温度达65℃时（堆顶以下20cm处），保持48h左右，可以翻堆，一般翻堆2次即可。

B、铺料播种

①做床：场地杀菌灭虫后，培养料调节水份75%，发酵料温度降至25℃一下时开始铺料。床宽1-1.5m，过道30cm（南北走向为好）。辅料前床面撒一层石灰粉。

②铺料、播种：播种前，菌种外袋过石灰水（杀灭菌袋表面的杂菌），在脱袋播种。播种方式：以3层料2层菌种的方式播种。第一层料：8-10cm左右，料层平整，厚度均匀。第一层播种：菌种（鸽子蛋大小）块间距10cm，用手按入料内2cm。播完种后，在菌种上铺第二层8-10cm厚料，整理成拱形垄状，播第二层菌种。第二层菌种播种完成后，在菌种上铺第三层料，厚3cm左右将菌种盖严。

铺料量：20kg/平方 菌种量：700g左右

C、覆土

播种后立即覆土，覆土厚度：3cm-4cm为好（早出菇覆土薄）。

D、覆盖物

播种完成后，加覆盖物，稻草、松针等。要求：覆盖物过石灰水消毒。

E、发菌管理

播种后2-3天萌发，3-4天开始吃料了。播种早：防止高温烧菌，料温控制在20-30℃，不超过35℃。通常播种后20d内是不喷水或少喷水，根据料湿度而定。一般20d后菌丝吃料达1/2以上时，加大菇床四周喷水，保持土壤水分和空气湿度。

F、催菇

大约50-60天菌丝吃透培养料，覆土层充满菌丝体，菌丝束扭结增粗，即可进行催菇管理。方法：喷一次催菇重水，加大通风，降低棚内温度15-20℃，刺激原基形成。

G、出菇管理

大球盖菇原基分化到子实体成熟一般需要5-8天。保持温度14-25℃，空气相对湿度90-95%空气调节，注意通风，保持新鲜空气。

H、采收

菌盖外的一层菌膜刚破裂、菌盖内卷不开伞、菌盖呈钟形时为采收适宜期。采完一潮后，应及时补水，经过10-12d开始出第二潮，可连续采3-4潮。

SEQUENCE LISTING

<110> 云南省供销合作社科学研究所、中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所

<120> 一种金黄色大球盖菇菌株及其栽培方法

<130> 2020

<160> 4

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 734

<212> DNA

<213> ZJJQG001-菌丝核苷酸序列

<400> 1

aaatttttct tccccgtttt tgatatgctt aagttcagcg ggaagtccta cctgatttga 60

ggtcaaattg tcatatattg tccagagtta acagacgatt agaagcagtg ctataatcgg 120

taaacagtcc acagcgtaga taattatcac actaatagac tagtctacac aaggcaacca 180

gctaatgtat ttcaggagag ctgatttcaa aagagaaacc tgcaagctcc cacatccaag 240

ccatttatca accaaaaagc tgataaaggt tgagaattta atgacactca aacaggcatg 300

ctcctcggaa taccaaggag cgcaaggtgc gttcaaagat tcgatgattc actgaattct 360

gcaattcaca ttacttatcg catttcgctg cgttcttcat cgatgcgaga gccaagagat 420

ccgttgctga aagttgtata tagtttataa gacataagtc taataatgac attctgttac 480

attcttatgg tgtatatgaa acataggctt gaagacattc aaggaaagcc ggttaaagca 540

attcctcacg accgagttgc ctcggaaatc tgtcctcaag tctacaaaag gtgcacaggt 600

ggaaatataa agatgacaag gcgtgcacat gtctccgaaa agaccagcaa caaccaagcc 660

aggtttattc aataatgatc cttccgcagg ttcacctacg gaaaccttgt tacatttttt 720

tacttccaaa aaaa 734

<210> 2

<211> 735

<212> DNA

<213> ZJJQG001-子实体核苷酸序列

<400> 2

ttcaatttcc ttcccctttt agatatgctt aagttcaacg gagaaggcct acctgatttg 60

aggtcaaatt gtcatatatt gtccagagtt aacagacgat tagaagcagt gctataatcg 120

gtaaacagtc cacagcgtag ataattatca cactaataga ctagtctaca caaggcaacc 180

agctaatgta tttcaggaga gctgatttca aaagagaaac ctgcaagctc ccacatccaa 240

gccatttatc aaccaaaaag ctgataaagg ttgagaattt aatgacactc aaacaggcat 300

gctcctcgga ataccaagga gcgcaaggtg cgttcaaaga ttcgatgatt cactgaattc 360

tgcaattcac attacttatc gcatttcgct gcgttcttca tcgatgcgag agccaagaga 420

tccgttgctg aaagttgtat atagtttata agacataagt ctaataatga cattctgtta 480

cattcttatg gtgtatatga aacataggct tgaagacatt caaggaaagc cggttaaagc 540

aattcctcac gaccgagttg cctcggaaat ctgtcctcaa gtctacaaaa ggtgcacagg 600

tggaaatata aagatgacaa ggcgtgcaca tgtctccgaa aagaccagca acaaccaagc 660

caggtttatt caataatgat ccttccgcag gttcacatac ggaaaccttg ttacattttt 720

taacttccaa agggg 735

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> ITS4

<400> 3

tcctccgctt attgatatgc 20

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> ITS5

<400> 4

ggaagtaaaa gtcgtaacaa gg 22

Claims (7)

1.一株金黄色大球盖菇菌株（Stropharia rugosoannulata）ZJJQG001，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2020年5月28日，保藏编号：CGMCC No.19645。

2.一种权利要求1所述的金黄色大球盖菇菌株（Stropharia rugosoannulata）ZJJQG001的栽培方法，其特征在于包括栽培种制备和大田栽培步骤，具体包括：

A、栽培种制备：

1）原种制备：将金黄色大球盖菇（Stropharia rugosoannulata）接种到原种培养基上于温度20~30℃暗培养得到原种；

2）栽培种制备：将原种接种到栽培种培养基上于温度20~30℃暗培养得到栽培种；

所述的原种培养基配方为：木屑60~80份、小麦10~30份、玉米面5~10份、石膏1~3份；

所述的栽培种培养基配方为：木屑50~70份、稻草10~30份、麦麸5~15份、玉米面5~10份、石膏1~3份；

B、大田栽培：

1）发酵料制备：

将培养料含水量调至65~70%，建堆发酵得到发酵料a；所述的培养料为稻草、蔗渣、棉籽壳、玉米芯或木屑中的一种或几种；

2）铺料播种：

a、做床：场地灭菌灭虫后，将培养料调节水分至75%开始做床，先撒一层1~3cm的石灰粉，然后铺设8~10cm的培养料得到料床；

b、铺料播种：发酵料a温度降至25℃以下后在料床上以3层料2层菌种的方式进行播种，播种后覆盖3~4cm的土，再加3~5cm的覆盖物；

c、管理：播种后2~3后开始萌发，15~25天的时候保持土壤的湿度为50~80%，空气湿度在60~70%；在50~60天后即进行催菇，具体是将温度调至15~20℃，保持通风；催菇5~8天后，保持温度为14~25℃，空气湿度为90~95%，保持通风；

C、采收：在菌盖外的一层菌膜破裂，菌盖内卷不开伞，菌盖呈钟形时即进行采收。

3.根据权利要求2所述的的栽培方法，其特征在于A步骤中暗培养的温度为25℃。

4.根据权利要求2所述的的栽培方法，其特征在于A步骤中所述的原种培养基配方为：木屑70份、小麦20份、玉米面8份、石膏2份。

5.根据权利要求2所述的的栽培方法，其特征在于A步骤中所述的栽培种培养基配方为：木屑60份、稻草20份、麦麸10份、玉米面8份、石膏2份。

6.根据权利要求2所述的的栽培方法，其特征在于B步骤2）中所述的3层料2层菌种的方式具体是第一层料：8~10cm厚，料层平整，厚度均匀，第一层播种：菌种块间距10cm，深度为2cm，播完种后；在菌种上铺第二层8~10cm厚料，整理成拱形垄状，播第二层菌种；第二层菌种播种完成后，在菌种上铺第三层料，厚2~4cm将菌种盖严。

7.根据权利要求2所述的的栽培方法，其特征在于B步骤2）中所述的覆盖物为稻草和/或松针。

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