CN111876330B - 一种适用于核酸检测的病毒运送培养基及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种适用于核酸检测的病毒运送培养基及其制备方法，所述病毒运送培养基为包含以下浓度组分的水溶液：Na₂HPO₄·12H₂O 67～68g/L，KH₂PO₄1.6～1.7g/L，Na₂EDTA·2H₂O 0.8～1.2mM，NaN₃0.8～1.5g/L。本发明通过配方的优化使得所述病毒运送培养基具有病毒核酸保存效果好、防腐杀菌性能优良、杀菌范围广、价格低廉和成分明确等优点，可以在4℃条件下长时间保持病毒基因组的完整性，完全能够满足日益增长的临床病毒核酸检测需求。

Description

一种适用于核酸检测的病毒运送培养基及其制备方法

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种适用于核酸检测的病毒运送培养基及其制备方法。

背景技术

病毒是由核酸分子(DNA或RNA)和蛋白质外壳构成(部分病毒还有脂质和糖蛋白构成的包膜)的非细胞型生物，个体微小，具有严格的寄生性，必须在活细胞内才能进行复制增殖。

很多常见病毒(如腺病毒、呼吸道合胞病毒、肠道病毒等)可以引起多种临床症状，一些不同的病毒又可引起相同的临床表现，通常很难单纯从临床症状进行区分，因此实验室的病原学诊断对于病毒的最终确诊极为重要。目前，随着分子生物技术的飞速发展，病毒核酸检测方法日新月异，由于其简便快速、高通量、高敏感度以及高特异性的优势，成为了病毒感染临床诊断的主要方法。其中实时荧光定量PCR因其技术成熟、操作简单、通量高等特点成为目前实验室核酸检测的首选平台。为确保病原微生物检验结果准确，除了标本的正确选择和采集外，样本的适当保存及运输等检验前阶段对于病原微生物检验的质量保证是十分重要的。

通常，在确定病毒标本类型并进行采集后应将标本尽快送检，理想情况是室温下30min内送检，4℃环境下可在2～4h内送检，来不及处理的标本在4℃保存不应超过48h。但是病毒标本采集后可能由于多种原因导致标本不能在短时间内进行病毒核酸检测：如在一些无条件开展核酸检测的地区，一般会将采集到的临床病毒标本每隔一段时间(一般为1天)统一送到上级医院实验室或第三方病毒实验室进行检测。由于无法随时送检，且运送过程也需要一定的时间，所以标本从采集到送至实验室进行检测通常大于24h。如果遇到不易确诊的病毒或者新型病毒，标本需要转送至级别更高的实验室进行检测，这时，从采集到检测的时间将会更长，可能达到数周甚至数月。另外，在对某地区进行病毒流行病学调查时，需要将不同时间采集的样品保存一段时间，而后集中统一进行实验检测，这段时间通常较长且多数情况无-80℃的储存条件。为应对以上种种实际情况，拥有能够在4℃条件下长期维持病毒基因组稳定性的病毒运送培养基显得极为重要。

目前国内运送培养基的生产厂家主要有：友康恒业生物科技(北京)有限公司、青岛高科技工业园海博生物技术有限公司、广东和信健康科技有限公司、广州阳普医疗科技股份有限公司等等；进口的运送培养基主要有Copan的UTM运送培养基等。现有的病毒运送培养基主要是依据病毒培养而设计的，其成分以维持pH7.4左右的等渗缓冲盐类加上小牛血清或BSA等蛋白质以及抑制其它微生物生长的抗生素等组成，以保持病毒颗粒完整，维持其生物学活性。但是目前病毒的诊断以核酸检测为主流，因此其运送培养基的目的是能够保持核酸的完整与稳定，并不要求保持病毒的生物学活性(许多病毒临床标本在检测前需要进行灭活处理)，因此只需要保证病毒基因组不被降解即可。而目前市场各类病毒运送培养基的成分复杂、不清晰，其使用定位与临床病毒核酸检测需求并不契合；且目前的病毒运送培养基成本高昂，这与日益增长的检测需求相矛盾。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种适用于核酸检测的病毒运送培养基及其制备方法，所述病毒运送培养基成分简单明确，价格低廉，且能更好地保持生物样本中病毒核酸的完整性，能够满足日益增长的临床病毒核酸检测需求。

具体技术方案为：

一种病毒运送培养基，所述病毒运送培养基为包含以下浓度组分的水溶液：

在其中一些实施例中，所述病毒运送培养基为包含以下浓度组分的水溶液：

在其中一些实施例中，所述病毒运送培养基为包含以下浓度组分的水溶液：

在其中一些实施例中，优选所述病毒运送培养基为包含以下浓度组分的水溶液：

发明人经过研究发现，当所述病毒运送培养基包含上述浓度的组分时，可以具有更好的pH值缓冲能力，有利于维持病毒宿主细胞的基本形态，防止细胞裂解，从而使病毒保存于细胞内，能更好地保持病毒核酸的完整性。

在其中一些实施例中，所述病毒运送培养基中还含有酚红，所述酚红在所述病毒运送培养基中的浓度为0.01～0.02g/L。

在其中一些实施例中，所述酚红在所述病毒运送培养基中的浓度为0.013～0.017g/L。

在其中一些实施例中，优选所述酚红在所述病毒运送培养基中的浓度为0.015g/L。

在其中一些实施例中，所述病毒运送培养基的pH值为7.2～7.4。

本发明还提供了上述病毒运送培养基的制备方法，包括以下步骤：

(1)配置Na₂EDTA·2H₂O充分溶解的Na₂EDTA·2H₂O水溶液，并使Na₂EDTA·2H₂O水溶液中Na₂EDTA·2H₂O的浓度高于培养基配方中Na₂EDTA·2H₂O的浓度；

(2)按培养基配方称取Na₂HPO₄·12H₂O和KH₂PO₄，充分溶解，然后按培养基配方中Na₂EDTA·2H₂O的浓度加入适量步骤(1)获得的Na₂EDTA·2H₂O水溶液；

(3)按配方向步骤(2)获得的溶液中加入叠氮化钠和酚红，混匀，得所述毒运送培养基。

在其中一些实施例中，步骤(1)所述Na₂EDTA·2H₂O水溶液的浓度为0.4～0.6M。

在其中一些实施例中，优选步骤(1)所述Na₂EDTA·2H₂O水溶液的浓度为0.5M。

在其中一些实施例中，步骤(1)所述Na₂EDTA·2H₂O水溶液的pH值为7.9～8.2。

在其中一些实施例中，优选步骤(1)所述Na₂EDTA·2H₂O水溶液的pH值为8。

在其中一些实施例中，所述步骤(3)还包括对混匀后的溶液进行除菌，得所述病毒运送培养基。

在其中一些实施例中，优选所述除菌方法为过滤除菌。

本发明还提供了上述病毒运送培养基在病毒运送和/或保存中的应用。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明通过明确病毒运送培养基的使用定位以及检测目的需求，对病毒运送培养基的配方进行了改进，配方中组分的相互配合使所述病毒运送培养基在不使用价格昂贵且成分复杂的原料后仍然能够很好地保持病毒核酸的完整性，保证后续核酸检测的成功率和准确性。通过对配方的改进，能同时提高所述培养基的盐平衡和pH值缓冲能力：通过Na⁺、K⁺和PO₄ ^3-离子之间的平衡使Na⁺、K⁺和PO₄ ^3-形成的等渗环境能更好地维持病毒宿主细胞的基本形态，防止细胞裂解，让病毒保存于细胞内，避免病毒直接暴露在溶液中；同时配方浓度范围内PO₄ ^3-的共轭酸碱对又可以有效维持生物样本的pH值为7.2～7.4，避免出现因采样对象身体状况的差异导致的某些患者生物样本的pH值不利于病毒核酸保存的情况(正常人的生物样本中性偏酸，但有些患者由于疾病影响会导致生物样本的酸碱度偏离较大，使病毒核酸容易发生降解)，使病毒在运送过程中始终处于适合病毒核酸保存的环境中，从而更好地维持病毒基因组的完整性。此外，EDTA在本发明病毒运送培养中可以发挥良好的螯合作用，抑制核酸酶的活性，进一步防止病毒核酸被核酸酶降解。

本发明通过配方的优化使所述病毒运送培养基具有病毒核酸保存效果好、防腐杀菌性能优良、杀菌范围广、价格低廉和成分明确等优点，可以在4℃条件下长时间保持病毒基因组的完整性，很好的匹配常规冰箱保存温度，完全能够满足日益增长的临床病毒核酸检测需求。

本发明病毒运送培养基的制备方法中先配置Na₂EDTA·2H₂O的浓度高于病毒运送培养基配方中Na₂EDTA·2H₂O浓度的Na₂EDTA·2H₂O水溶液，并调节Na₂EDTA·2H₂O水溶液的pH值为7.9～8.2，再将所述Na₂EDTA·2H₂O水溶液用于后续病毒运送培养基的制备。Na₂EDTA·2H₂O是一种难溶于水的物质，通常需要将pH调至7.9～8.2以保证充分溶解，而病毒基因组(DNA或RNA)在过酸或者过碱情况下容易发生降解，故病毒运送培养基的pH值为7.2～7.4更适合病毒核酸的保存，但在pH值为7.2～7.4的条件下，Na₂EDTA·2H₂O并不能完全溶解。因此，本发明制备方法先将Na₂EDTA·2H₂O在pH值为7.9～8.2的条件下充分溶解得到Na₂EDTA·2H₂O水溶液，再将所述Na₂EDTA·2H₂O水溶液加入到由Na₂HPO₄·12H₂O和KH₂PO₄制备成的磷酸缓冲液中，由于本发明配方的磷酸缓冲液具有良好的pH缓冲作用，所以既可以保证最终制备得到的病毒运送培养基的pH值维持在适合病毒核酸保存的范围之内(pH值为7.2～7.4)，又能保证病毒运送培养基中Na₂EDTA·2H₂O的充分溶解，从而使所述病毒运送培养基可以更好地保持病毒核酸的完整性，利于后续的核酸检测。

附图说明

图1为使用实施例3中三种病毒运送培养基对生物样本保存0W后ADV核酸定量检测结果。

图2为使用实施例3中三种病毒运送培养基对生物样本保存2W后ADV核酸定量检测结果。

图3为使用实施例3中三种病毒运送培养基对生物样本保存4W后ADV核酸定量检测结果。

图4为使用实施例3中三种病毒运送培养基对生物样本保存6W后ADV核酸定量检测结果。

图5为使用实施例3中三种病毒运送培养基对生物样本保存8W后ADV核酸定量检测结果。

图6为使用实施例3中三种病毒运送培养基对生物样本保存10W后ADV核酸定量检测结果。

图7为使用实施例3中三种病毒运送培养基对生物样本保存0～10W后ADV核酸定量结果Ct值均值趋势图。

图8为使用实施例3中三种病毒运送培养基对生物样本保存0W后FB核酸定量检测结果。

图9为使用实施例3中三种病毒运送培养基对生物样本保存2W后FB核酸定量检测结果。

图10为使用实施例3中三种病毒运送培养基对生物样本保存4W后FB核酸定量检测结果。

图11为使用实施例3中三种病毒运送培养基对生物样本保存6W后FB核酸定量检测结果。

图12为使用实施例3中三种病毒运送培养基对生物样本保存8W后FB核酸定量检测结果。

图13为使用实施例3中三种病毒运送培养基对生物样本保存10W后FB核酸定量检测结果。

图14为使用实施例3中三种病毒运送培养基对生物样本保存0～10W后FB核酸定量结果Ct值均值趋势图。

具体实施方式

本发明下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。

除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。

本发明的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。

在本发明中提及的“多个”是指两个或两个以上。“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B这三种情况。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。

实施例1

本实施例提供一种病毒运送培养基，所述病毒运送培养基为包含以下浓度组分的水溶液：

本实施例提供的病毒运送培养基具有很好的盐平衡及pH值缓冲作用，配方浓度下Na⁺、K⁺和PO₄ ^3-离子之间的平衡使Na⁺、K⁺和PO₄ ^3-形成的等渗环境能更好地维持病毒宿主细胞的基本形态，防止细胞裂解，让病毒保存于细胞内，避免病毒直接暴露在溶液中；同时配方浓度下PO₄ ^3-的共轭酸碱对又可以有效维持生物样本的pH值，使病毒在运送过程中始终处于适合病毒核酸保存的环境中，从而更好地保持病毒基因组的完整性；NaN₃具有优良的防腐杀菌性能，能有效防止各类微生物滋长；酚红作为培养基pH值的指示剂，当培养基中污染的细菌或真菌未能受到抑制而繁殖时，其产生的酸性代谢产物会使指示剂变色。

实施例2

本实施例提供一种病毒运送培养基的制备方法，以实施例1所述病毒运送培养基的制备为例，包括以下步骤：

(1)配置0.5M的Na₂EDTA·2H₂O水溶液：称取18.61g Na₂EDTA·2H₂O加入去离子水中，用NaOH溶液调整pH至8.0，使Na₂EDTA·2H₂O充分溶解，然后加入去离子水定容至100mL；

(2)分别称取67.30g Na₂HPO₄·12H₂O和1.64g KH₂PO₄加入去离子水中，搅拌溶解，然后加入2mL步骤(1)获得的0.5M Na₂EDTA·2H₂O水溶液，加入去离子水定容至1000mL，充分混匀；

(3)向步骤(2)获得的溶液中加入1g NaN₃和0.015g酚红，充分混匀，在万级净化车间百级操作台内经MILLIPORE 0.2μm膜过滤，得所述病毒运送培养基。

实施例3

本实施例以实施例1所述病毒运送培养基为例研究本发明病毒运送培养基在不同保存时间内(0周～10周)对生物样本中DNA和RNA病毒的核酸的保存效果，同时以广州呼吸疾病健康研究院生产病毒运送培养基和友康恒业生物科技(北京)有限公司生产的商品病毒运送培养基分别作为对照组1和对照组2，即：

对照组1：广州呼吸疾病健康研究院产病毒运送培养基，所述培养基为包含以下组分浓度的水溶液：Na₂HPO₄·12H₂O 0.06g/L、KH₂PO₄ 0.06g/L、MgSO₄·7H₂O 0.2g/L、葡萄糖1g/L、NaCl 8g/L、CaCl₂ 0.14g/L、NaHCO₃ 0.35g/L、酚红0.02g/L、明胶2.5g/L、BSA(牛血清白蛋白)5g/L、蔗糖2.5g/L、氨基酸150mmol/L、Hepes溶液(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)10mmol/L、抗生素20mg/L。

对照组2：友康恒业生物科技(北京)有限公司商品病毒运送培养基，具体货号名称：MT0301-1病毒采样试剂盒。

对照组1和对照组2都是以保持病毒活性为目的的运送培养基，含有牛血清白蛋白及糖类等组分。

本实施例所使用的DNA病毒为广州金域呼吸道病毒研究中心的腺病毒(ADV)病毒培养物，RNA病毒为广州金域呼吸道病毒研究中心的乙型流感病毒(FB)病毒培养物。ADV+FB病毒混合液的Ct值：ADV(Ct值为17.82)，FB(Ct值为22.03)。

本实施例所使用的仪器如下：自动核酸提取仪(磁珠法，深圳市汇研科创生物科技有限公司生产)；ABI 7500实时荧光定量PCR仪(赛默飞世尔科技(中国)有限公司)。

本实施例所使用的试剂盒如下：呼吸道腺病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)，湖南圣湘生物科技有限公司；乙型流感病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)，上海之江生物科技股份有限公司。检测方法严格按照试剂盒说明书进行。

(一)生物样本采集与保存

1、在广州金域医学检验有限公司中随机抽取20名健康员工(10男，10女)，编号1-20，用2个合成纤维拭子分别采集每个人左右两侧咽部拭子标本，放入同一支含2mL PBS的采样管中；

2、将含拭子的采样管经剧烈震荡后取0.5mL分别加入实施例1所述病毒运送培养基、对照组1培养基和对照组2培养基中，共计60个样本；

3、考虑到健康人群标本中通常不含病毒，故往每个样本中各加入0.5mL ADV病毒液和0.3mL FB病毒液，随后将样本置于4℃保存。

(二)不同保存时间内3种病毒运送培养基保存的生物样本的病毒核酸提取及实时荧光定量PCR检测

1、分别于第0周(0W，即取样当天)、第2周(2W)、第4周(4W)、第6周(6W)、第8周(8W)、第10周(10W)共6个时间段使用自动核酸提取仪提取60个样本中的核酸，提取的核酸于-80℃保存，共计360份核酸样本；

2、将所有提取的核酸样本(共计360份)用实时荧光定量PCR仪分别检测每个样本中ADV和FB的核酸含量，且每个病毒标本设置3个重复孔。

(三)检测结果

1、DNA病毒(ADV)检测结果

使用3种病毒运送培养基保存生物样本0～10W后样本中ADV核酸定量检测的Ct值分别如表1和表2所示，其中，每个样本设置有3个重复孔，表1和表2中的Ct值都以3个重复孔的均数±标准差(X±S)表示。

表1采集标本放置0～4W ADV核酸定量检测结果(X±S；Ct值)

表2采集标本放置6～10W ADV核酸定量检测结果(X±S；Ct值)

使用3种病毒运送培养基保存生物样本0～10W后样本中ADV核酸定量检测的Ct值趋势图分别如图1～图6所示。

分别计算3种病毒运送培养基对生物样本不同保存时间段(0W、2W、4W、6W、8W、10W)20个样本的ADV核酸定量结果Ct值的均值(表3)并作趋势图(图7)：

表3三种培养基不同保存时间ADV核酸荧光定量检验Ct值均值

将3种病毒运送培养基对生物样本不同保存时间段(0W、2W、4W、6W、8W、10W)的ADV核酸检测Ct值均值采用配对t检验进行两两比较，以P＜0.05视为有统计学意义，结果如表4所示：

表4不同保存时间ADV核酸定量t检验(P值)

结果分析如下：

实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光素标记的寡核苷酸探针，对整个PCR进程中每一个循环产生的荧光信号进行实时监测从而实现对起始模板的定量分析。Ct值：实时荧光定量PCR反应过程中，荧光信号由本底达到指数增长阶段的荧光阈值所对应的循环次数。通常，初始DNA模板量越多，PCR扩增达到荧光阈值所需的循环数越少，即Ct值越小。故本研究中采用Ct值大小来反应储存样本中病毒核酸的保存情况：1、Ct值小，病毒核酸降解较少，完整性保持相对较好；2、Ct值大，病毒核酸降解较多，完整性保持相对较差。

以上实验数据表明，0W时应用荧光定量PCR技术检测三种病毒运送培养基保存的生物样本中ADV起始核酸量的Ct值无差异(P>0.05)，即一开始采样后放入不同培养基中，三种培养基体系对于DNA病毒标本均有较良好的缓冲作用，对病毒标本的影响无显著差异。

对照组1培养基(呼研院病毒运送培养基)与对照组2培养基(友康商品病毒运送培养基)保存的ADV病毒标本的Ct值在2W时有显著差异(P<0.05)，而在4W、6W、8W、10W时无显著差异(P>0.05)。表明这两种培养基在标本长期保存中对于病毒基因组完整性影响没有显著区别，同时对于更长时间的病毒核酸保存，这两种培养基无明显差别。

本发明实施例1病毒运送培养基保存的生物样本在2W、4W、6W、8W、10W的ADV病毒标本测量Ct值与对照组1和对照组2相比均有显著差异(P<0.05)，且在2W、4W、6W、8W、10W五个时间段实施例1病毒运送培养基的ADV病毒标本检测Ct值总体上均小于其它两种病毒运送培养基。根据荧光定量PCR原理可知，本发明病毒运送培养基保存的生物样本中ADV病毒核酸降解较少，完整性保持更好。另外，对照组1和对照组2的运送培养基均以保持病毒活性为目的，其中含有小牛血清等蛋白质及糖类组分，生产成本远高于实施例1所述病毒运送培养基，因此，本发明实施例1所述病毒运送培养基更适合用于在4℃条件下长时间保持DNA病毒(如腺病毒ADV)核酸的完整性。

2、RNA病毒(FB)检测结果

使用3种病毒运送培养基保存生物样本0～10W后样本中FB核酸定量检测的Ct值分别如表5和表6所示，其中，每个样本设置有3个重复孔，表5和表6中的Ct值都以3个重复孔的均数±标准差(X±S)表示。

表5采集标本放置0～4W FB核酸定量检测结果(X±S；Ct值)

表6采集标本放置6～10W FB核酸定量检测结果(X±S；Ct值)

使用3种病毒运送培养基保存生物样本0～10W后样本中FB核酸定量检测的Ct值趋势图分别如图8～图13所示。

分别计算3种病毒运送培养基对生物样本不同保存时间段(0W、2W、4W、6W、8W、10W)20个样本的FB核酸定量结果Ct值的均值(表7)并作趋势图(图14)：

表7三种培养基不同保存时间FB核酸荧光定量检验Ct值均值

将3种病毒运送培养基对生物样本不同保存时间段(0W、2W、4W、6W、8W、10W)的FB核酸检测Ct值均值采用配对t检验进行两两比较，以P＜0.05视为有统计学意义，结果如表8所示：

表8不同保存时间FB核酸定量t检验(P值)

结果分析如下：

以上实验数据表明，0W时应用荧光定量PCR技术检测三种病毒运送培养基保存的生物样本中FB起始核酸量的Ct值无差异(P>0.05)，即一开始采样后放入不同培养基中，三种培养基体系对于RNA病毒标本均有较良好的缓冲作用，对病毒标本的影响无显著差异。

结合图14，对照组1培养基(呼研院病毒运送培养基)与对照组2培养基(友康商品病毒运送培养基)保存的FB标本的Ct值曲线一直交错在一起，4W、6W、8W时两者无显著差异，初步认为对于长时间内保存RNA病毒(FB病毒)核酸标本而言，两种培养基并无明显差异。

本发明实施例1病毒运送培养基在4W、6W、10W保存的FB标本的Ct均值与对照组1和对照组2培养基相比均有显著差异(P<0.05)。表7中的数据显示，从2W开始，本发明实施例1病毒运送培养基保存的标本的Ct均值一直稳定维持在较低水平，后期(6W～10W)Ct均值稳定在24.00左右，相较于其余两种培养基Ct均值波动幅度小，说明其能够更好地维持病毒核酸的稳定性。所以，相比于其余两种病毒运送培养基，本发明病毒运送培养基更适合用于在4℃条件下长时间保存RNA病毒(FB)核酸的完整性。

(四)总结

本实施例所选用的腺病毒(无膜DNA病毒)和乙型流感病毒(有膜RNA病毒)均为临床常见病毒，具有较好的代表性。综上所述，本实施例中所涉及的三种病毒运送培养基中，对照组1和对照组2病毒运送培养基维持病毒基因组稳定性的能力十分接近，而本发明病毒运送培养基维持病毒基因组稳定性的能力优于其余两种病毒运送培养基，且本发明病毒运送培养基配制简便，成本大幅降低，因此更适合临床、公共卫生和科学研究使用。本实施例对三种病毒运送培养基作了较为详细、客观的评价，为病毒运送培养基的使用和选择提供了科学依据。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对以上实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (11)

1.一种病毒运送培养基，其特征在于，所述病毒运送培养基为由以下浓度组分组成的水溶液：

2.根据权利要求1所述的病毒运送培养基，其特征在于，所述病毒运送培养基为由以下浓度组分组成的水溶液：

3.根据权利要求2所述的病毒运送培养基，其特征在于，所述病毒运送培养基为由以下浓度组分组成的水溶液：

4.根据权利要求1所述的病毒运送培养基，其特征在于，所述病毒运送培养基中还含有酚红，所述酚红在所述病毒运送培养基中的浓度为0.01～0.02g/L。

5.根据权利要求4所述的病毒运送培养基，其特征在于，所述酚红在所述病毒运送培养基中的浓度为0.013～0.017g/L。

6.根据权利要求1～5任一项所述的病毒运送培养基，其特征在于，所述病毒运送培养基的pH值为7.2～7.4。

7.根据权利要求1～6任一项所述的病毒运送培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)配置Na₂EDTA·2H₂O充分溶解的Na₂EDTA·2H₂O水溶液，并使Na₂EDTA·2H₂O水溶液中Na₂EDTA·2H₂O的浓度高于培养基配方中Na₂EDTA·2H₂O的浓度；

(2)按培养基配方称取Na₂HPO₄·12H₂O和KH₂PO₄，充分溶解，然后按培养基配方中Na₂EDTA·2H₂O的浓度加入适量步骤(1)获得的Na₂EDTA·2H₂O水溶液；

(3)按培养基配方向步骤(2)获得的溶液中加入叠氮化钠和酚红，混匀，得所述病毒运送培养基。

8.根据权利要求7所述的病毒运送培养基的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述Na₂EDTA·2H₂O水溶液的浓度为0.4～0.6M。

9.根据权利要求8所述的病毒运送培养基的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述Na₂EDTA·2H₂O水溶液的pH值为7.9～8.2。

10.根据权利要求7～9任一项所述的病毒运送培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)还包括对混匀后的溶液进行除菌，得所述病毒运送培养基。

11.根据权利要求1～6任一项所述的病毒运送培养基在病毒运送和/或保存中的应用。

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