CN111793640A - 烟草植物及使用此类植物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开提供了涉及生物碱在烟草中从根到叶的转运的多个序列、使用此类序列的方法、携带对此类序列的修饰的烟草植物、以及从此类植物制造的烟草产品。

Description

烟草植物及使用此类植物的方法

本申请是申请号为201480075000.6(国际申请号PCT/US2014/069074)，申请日：2014年12月08日，优先权日：2013年12月06日的中国发明专利申请(发明名称：在叶中具有改变量的一种或多种生物碱的烟草植物及使用此类植物的方法)的分案申请。

技术领域

本发明公开一般性地涉及烟草植物。

背景

人们一直试图培育低生物碱的烟草品种。然而，这样的品种大多生成低质量的叶，尚无具有降低的叶生物碱含量的商业烟草品系。因此，需要鉴定这样的烟草基因，可调变其表达使得烟叶中的生物碱概貌，尤其是叶的烟碱类生物碱概貌能够得以改变。

概述

描述了涉及生物碱在烟草中从根到叶的转运的多个序列。还描述了使用这类序列的方法。

在一个方面，提供了烟草杂种、品种、品系、或栽培种。这样的烟草杂种、品种、品系、或栽培种包括具有在诸如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的一个或多个内源核酸中的突变的植物。在一些实施方案中，来自所述植物的烟叶相对于来自缺乏突变的植物的烟叶展现出至少一种生物碱的量降低。在一些实施方案中，来自所述植物的调制叶相对于来自缺乏突变的植物的调制叶展现出至少一种烟草特异性亚硝胺(TSNA)的量降低。还提供了由这样的烟草杂种、品种、品系、或栽培种产生的种子，其中所述种子包括在具有诸如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的序列的一个或多个内源核酸中的突变。

在另一方面，提供了产生烟草植物的方法。这样的方法一般包括下列步骤：在普通烟草(Nicotiana tabacum)细胞中诱导突变以产生诱变细胞，从该诱变细胞获得一株或多株植物，和从所述植物中鉴定包含在诸如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的一个或多个内源核酸中的突变的至少一株植物。这种方法可进一步包括鉴定至少一株包含显示至少一种生物碱的量降低的叶(相对于来自缺乏突变的植物的叶)的植物。这种方法还可包括鉴定至少一株这样的植物，其中所得的调制叶相对于来自缺乏突变的植物的调制叶展现出至少一种TSNA量降低。

诱变可使用化学诱变剂或电离辐射来诱导。代表性的化学诱变剂包括但不限于，亚硝酸、叠氮化钠、吖啶橙、溴化乙锭、和乙基甲磺酸(EMS)。代表性的电离辐射包括但不限于，x射线、γ射线、快中子照射、和UV照射。可以使用TALEN或锌指技术诱导突变。

在另一方面，提供了生产烟草植物的方法。这种方法也包括使第一烟草品系的至少一株植物与第二烟草品系的至少一株植物杂交以及选择具有突变的后代烟草植物的步骤。通常，第一烟草品系的植物在一个或多个内源核酸中，诸如具有SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的序列的内源核酸中具有突变。这种方法可进一步包括选择具有展现出至少一种生物碱量降低的叶(相对于来自缺乏突变的植物的叶)的后代烟草植物。这种方法还可包括选择其中调制叶展现出至少一种TSNA量降低(相对于来自缺乏突变的植物的调制叶)的后代烟草植物。

在另一方面，提供了烟草产品。这种烟草产品一般包括来自这样的烟草植物的调制叶，所述烟草植物在一个或多个内源核酸中，例如在具有SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的序列的一个或多个内源核酸中具有突变。在一些实施方案中，所述烟草产品内包含的调制叶相对于包含在来自缺乏突变的植物的烟草产品内的调制叶展现出至少一种生物碱的量降低。在一些实施方案中，所述烟草产品内的调制叶相对于包含在来自缺乏突变的植物的烟草产品内的调制叶展现出至少一种TSNA的量降低。

在另一方面，提供了生产烟草产品的方法。这种方法通常包括提供来自烟草植物的调制叶，以及利用所述调制叶制造烟草产品，所述烟草植物在一个或多个内源核酸中，例如具有如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的序列中具有突变。在一些实施方案中，所述调制叶相对于来自缺乏突变的植物的调制叶展现出至少一种生物碱的量降低。在一些实施方案中，所述调制叶相对于来自缺乏突变的植物的调制叶展现出至少一种TSNA的量降低。

如本文中所述的突变可以是，但不限于，点突变、插入、缺失、或取代。

在又一个方面，提供了包含植物表达载体的转基因烟草植物。一般来说，表达载体包含至少25个核苷酸的长度并且与诸如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的序列具有至少91％序列同一性的核酸分子。在一些实施方案中，相对于来自不表达所述核酸分子的烟草植物的叶，核酸分子的表达导致叶展现出至少一种生物碱的量降低。在一些实施方案中，相对于来自不表达所述核酸分子的烟草植物的调制叶，核酸分子的表达导致调制叶展现出至少一种TSNA的量降低。还提供了由这种转基因烟草植物产生的种子，其中种子包含所述表达载体。

在一个方面，提供了转基因烟草植物，其包含长度至少为25个核苷酸的异源核酸分子，其中所述核酸分子在严格条件下与诸如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的核酸序列杂交。在一些实施方案中，所述异源核酸分子的表达导致叶展现出至少一种生物碱的量降低(相对于来自不表达该异源核酸分子的烟草植物的叶)。在一些实施方案中，所述异源核酸分子的表达导致调制叶展现出至少一种TSNA的量降低(相对于来自不表达该异源核酸分子的烟草植物的调制叶)。还提供了由此类转基因烟草植物产生的种子，其中所述种子包含所述异源核酸分子。

在一个方面，提供了包含载体的来自转基因烟草植物的叶。通常，载体包含与诸如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的核酸序列的25个或更多个连续核苷酸具有至少91％序列同一性的核酸分子。在一些实施方案中，核酸分子的表达导致叶展现出至少一种生物碱的量相对于来自不表达所述核酸分子的烟草植物的叶降低。在一些实施方案中，核酸分子的表达导致调制叶展现出至少一种TSNA的量相对于来自不表达所述核酸分子的烟草植物的调制叶降低。

在另一方面，提供了产生转基因植物的方法。这样的方法一般包括在植物中表达转基因。所述转基因编码抑制诸如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的核酸序列表达双链RNA分子。所述双链RNA分子包含与诸如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的序列具有至少91％或更大的序列同一性的至少25个连续核苷酸。在一些实施方案中，，转基因的表达导致植物的叶展现出至少一种生物碱的量相对于来自不表达所述转基因的植物的叶降低。在一些实施方案中，转基因的表达导致调制叶展现出至少一种TSNA的量相对于来自不表达所述核酸分子的植物的调制叶的降低。在一些实施方案中，双链RNA分子具有诸如SEQ ID NO:51-56的序列。

在另一方面，提供了改变烟草植物中的叶成分的方法。这种方法通常包括将与启动子可操作连接的异源核酸分子导入烟草细胞中产生转基因烟草细胞、以及从所述转基因烟草细胞再生转基因烟草植物的步骤。一般来说，所述异源核酸分子包含至少25个核苷酸的长度并且与诸如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的核酸序列具有至少91％序列同一性。这样的转基因烟草植物展现出改变的叶成分。这样的方法可进一步包括选择至少一株这样的转基因烟草植物，该植物具有展现出至少一种生物碱的量降低(相对于来自不表达异源核酸分子的烟草植物的叶)的叶。此类方法可进一步包括选择至少一株这样的转基因烟草植物，该植物的调制叶展现出至少一种TSNA的量降低(相对于来自不表达异源核酸分子的烟草植物的调制叶)。

在另一方面，提供了包含载体的来自转基因烟草植物的调制烟叶。通常，载体包含与诸如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的核酸序列的25个或更多个连续核苷酸具有至少91％序列同一性(例如，至少92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的核酸分子。在一些实施方案中，核酸分子的表达导致叶展现出至少一种生物碱的量降低(相对于来自不表达所述核酸分子的烟草植物的叶)。在一些实施方案中，核酸分子的表达导致调制叶展现出至少一种TSNA的量降低(相对于来自不表达所述核酸分子的烟草植物的调制叶)。在一些实施方案中，所述核酸呈有义取向，而在一些实施方案中，所述核酸呈反义取向。

在又另一个方面，提供了包含植物表达载体的转基因烟草植物。通常，表达载体包含与诸如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的序列、或与这些序列的编码功能多肽的任何片段具有至少95％序列同一性的核酸分子。在一些实施方案中，相对于来自不表达所述核酸分子或其功能片段的烟草植物的叶，核酸分子或其功能片段的表达导致叶展现出至少一种生物碱的量增加。还提供了由这种转基因烟草植物产生的种子，其中所述种子包含所述表达载体。

在另一个方面，提供了包含异源核酸分子的转基因烟草植物。通常，所述核酸分子在严格条件下与诸如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的核酸序列、或其编码功能多肽的片段杂交。在一些实施方案中，异源核酸分子或其功能片段的表达导致叶相对于来自不表达异源核酸分子或其功能片段的烟草植物的叶展现出至少一种生物碱的量增加。还提供了由这种转基因烟草植物产生的种子，其中所述种子包含异源核酸分子。

在一个方面，提供了包含载体的来自转基因烟草植物的叶。典型地，此类载体包含与诸如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的核酸序列、或其编码功能多肽的片段具有至少95％序列同一性的核酸分子。在一些实施方案中，核酸分子或其功能片段的表达导致叶相对于来自不表达所述核酸分子或其功能片段的烟草植物的叶展现出至少一种生物碱的量的增加。

在另一方面，提供了改变烟草植物中的叶成分的方法。此类方法一般包括将与启动子可操作连接的异源核酸分子导入烟草细胞中产生转基因烟草细胞、以及从所述转基因烟草细胞再生转基因烟草植物的步骤，其中所述转基因植物具有改变的叶成分。所述异源核酸分子一般与诸如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的核酸序列、或其编码功能多肽的片段具有至少95％的序列同一性。此类方法可进一步包括选择至少一株这样的转基因烟草植物：该植物具有相对于来自不表达异源核酸分子或其功能片段的烟草植物的叶展现出至少一种生物碱的量增加的叶。在一些实施方案中，使用粒子轰击、土壤杆菌介导的转化、显微注射、聚乙二醇介导的转化、脂质体介导的DNA摄取、或电穿孔，将异源核酸分子导入烟草细胞中。

在一个方面，提供了包含载体的来自转基因烟草植物的调制烟叶。一般来说，所述载体包含与诸如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90的核酸序列、或其编码功能多肽的片段具有至少95％序列同一性的核酸分子。在一些实施方案中，核酸分子或其功能片段导致烟叶相对于来自不表达所述核酸分子或其功能片段的烟草植物的叶展现出至少一种生物碱的量增加。

代表性的生物碱包括但不限于，烟碱、降烟碱、新烟碱、麦斯明(myosmine)、和新烟草碱。一般来说，采用高效液相色谱(HPLC)-质谱法(MS)或高效薄层色谱法(HPTLC)确定一种或多种生物碱的量。

适合于在本文中描述的方法中使用的烟草植物可以是白肋烟型(Burley type)、深色型(dark type)、烤烟型(flue-cured type)、马里兰型(Maryland type)、或东方型(Oriental type)。适合于在本文中描述的方法中使用的烟草植物一般来自普通烟草，并且可来自任何数目的普通烟草品种。品种可以是BU 64、CC 101、CC 200、CC 13、CC 27、CC 33、CC 35、CC 37、CC 65、CC 67、CC 301、CC 400、CC 500、CC 600、CC 700、CC 800、CC 900、CC1063、Coker 176、Coker 319、Coker 371Gold、Coker 48、CU 263、DF911、Galpao烟草、GL26H、GL 338、GL 350、GL 395、GL 600、GL 737、GL 939、GL 973、GF 157、GF 318、RJR 901、HB04P、K 149、K 326、K 346、K 358、K394、K 399、K 730、NC 196、NC 37NF、NC 471、NC 55、NC92、NC2326、NC 95、NC 925、PVH 1118、PVH 1452、PVH 2110、PVH 2254、PVH 2275、VA116、VA119、KDH 959、KT 200、KT204LC、KY 10、KY 14、KY 160、KY 17、KY 171、KY 907、KY907LC、KTY14 x L8 LC、Little Crittenden、McNair 373、McNair 944、msKY 14xL8、Narrow LeafMadole、NC 100、NC 102、NC 2000、NC 291、NC 297、NC 299、NC 3、NC 4、NC 5、NC 6、NC7、NC606、NC 71、NC 72、NC 810、NC BH 129、NC 2002、Neal Smith Madole、OXFORD 207、‘Perique’烟草、PVH03、PVH09、PVH19、PVH50、PVH51、R 610、R 630、R 7-11、R 7-12、RG 17、RG 81、RG H51、RGH 4、RGH 51、RS 1410、Speight 168、Speight 172、Speight 179、Speight210、Speight 220、Speight 225、Speight 227、Speight 234、Speight G-28、Speight G-70、Speight H-6、Speight H20、Speight NF3、TI 1406、TI 1269、TN 86、TN86LC、TN 90、TN90LC、TN 97、TN97LC、TN D94、TN D950、TR(Tom Rosson)Madole、VA 309、或VA359。

在另一方面，提供了筛选植物的方法。此类方法一般包括提供来自如本文所述的突变植物的植物材料，和确定植物组织中一种或多种生物碱的量。在一些实施方案中，植物组织为叶。在一些实施方案中，植物组织为根。此类方法可进一步包括确定植物组织中一种或多种TSNA的量。

除非另外定义，本文中所用的所有技术术语和科学术语具有与主题方法和组合物所属领域的普通技术人员的通常理解相同的含义。下文中描述了合适的方法和材料，但类似于或等同于本文中所描述者的方法和材料也可以用于实施或测试主题方法和组合物。另外，材料、方法和实施例仅仅是说明性的，并且不意图构成限定。本文中所提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献都通过提述完整并入。

本申请涉及以下实施方案：

1.一种产生烟草植物的方法，所述方法包括下列步骤：

(a)使第一烟草品系的至少一株植物与第二烟草品系的至少一株植物杂交，所述第一烟草品系的植物在一个或多个内源核酸中具有突变，所述内源核酸与选自SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、17、19、21、23、25、27、29、31、33、37、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88和90的序列具有至少95％同一性，其中所述突变导致由所述内源核酸编码的转运蛋白的表达或功能相对于缺乏所述突变的相应植物降低；和

(b)选择具有所述突变的后代烟草植物。

2.实施方案1的方法，进一步包括选择包含这样的叶的后代烟草植物：所述叶相对于来自缺乏所述突变的植物的叶展现出至少一种生物碱降低至少5％。

3.实施方案2的方法，进一步包括选择包含这样的叶的后代烟草植物：所述叶在调制后，相对于来自缺乏所述突变的植物的调制叶展现出至少一种TSNA降低至少5％。

4.实施方案1的方法，其中所述一种或多种内源核酸与选自SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、17、19、21、23、25、27、29、31、33、37、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88和90的序列具有100％同一性。

5.一种包含来自烟草植物的调制叶的烟草产品，所述烟草植物在一个或多个内源核酸中具有突变，所述内源核酸与选自SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、17、19、21、23、25、27、29、31、33、37、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88和90的序列具有至少95％同一性，其中所述突变导致所述内源核酸编码的转运蛋白的表达或功能相对于缺乏所述突变的相应植物降低，并且其中所述调制叶包含所述突变。

6.实施方案5的烟草产品，其中所述叶相对于来自缺乏所述突变的植物的叶展现出至少一种生物碱降低至少5％。

7.实施方案6的烟草产品，其中所述至少一种生物碱选自烟碱、降烟碱、新烟碱、麦斯明和新烟草碱。

8.实施方案6的烟草产品，其中所述调制叶相对于来自缺乏所述突变的植物的调制叶展现出至少一种TSNA降低至少5％。

9.实施方案8的烟草产品，其中所述至少一种TSNA选自N’-亚硝基降烟碱、4-(甲基亚硝基氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮、N’-亚硝基新烟草碱、N’-亚硝基新烟碱和4-(甲基亚硝基氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁醛。

10.实施方案5的烟草产品，其中所述突变选自点突变、插入、缺失和取代。

11.实施方案5的烟草产品，其中所述调制叶是使用选自晾制、熏制、调制和晒制的方法调制的。

12.实施方案5的烟草产品，其中所述烟草植物是选自白肋烟型(Burley type)、深色型(dark type)、烤烟型(flue-cured type)、马里兰型(Maryland type)和东方型(Oriental type)的类型。

13.实施方案5的烟草产品，其中所述烟草产品是无烟烟草产品。

14.实施方案13的烟草产品，其中所述无烟烟草产品选自咀嚼烟草、湿鼻烟(snus)、烟袋(pouch)、烟膜(film)、烟片(tablet)、涂层烟钉(coated dowel)和烟杆(rod)。

15.实施方案5的烟草产品，其中所述烟草产品选自小雪茄、无通气凹槽(non-ventilated recess)过滤嘴香烟、通气凹槽(vented recess)过滤嘴香烟、雪茄、鼻烟、烟斗烟草、雪茄烟草、香烟烟草、烟叶、烟丝和切碎烟草。

16.实施方案5的烟草产品，其中所述烟草产品包含滤芯或杆元件。

17.实施方案5的烟草产品，其中所述烟草产品包含选自粘合剂、增塑剂、稳定和调味剂的成分。

18.实施方案5的烟草产品，其中所述一种或多种内源核酸与选自SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、17、19、21、23、25、27、29、31、33、37、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88和90的序列具有100％同一性。

19.一种产生烟草产品的方法，该方法包括：

(a)提供来自在一个或多个内源核酸中具有突变的烟草植物的调制叶，所述内源核酸与选自SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、17、19、21、23、25、27、29、31、33、37、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88和90的序列具有至少95％同一性，其中所述突变导致由所述内源核酸编码的转运蛋白的表达或功能相对于缺乏所述突变的相应植物降低，并且其中所述调制叶包含所述突变；和

(b)利用来自步骤(a)的所述调制叶制造烟草产品。

20.实施方案19的方法，其中所述调制叶相对于来自缺乏所述突变的植物的调制叶展现出至少一种生物碱降低至少5％。

21.实施方案19的方法，其中所述调制叶相对于来自缺乏所述突变的植物的调制叶展现出至少一种TSNA降低至少5％。

22.实施方案1-3或19-21中任一实施方案所述的方法，其中所述突变选自点突变、插入、缺失、和取代。

23.实施方案19的方法，其中所述一种或多种内源核酸与选自SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、17、19、21、23、25、27、29、31、33、37、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88和90的序列具有100％同一性。

附图说明

图1为本文中所述的新Nup序列与先前已知的普通烟草Nup1和Nup2的比对。Nup1预测的跨膜螺旋由方框表示。

图2为本文中描述的四种新的MDR序列与代表性MDR多肽(登录号XP_004233862)的比对。加框的区域表示保守性ATP酶结构域。

图3为新的MATE序列与普通烟草MATE1的比对。方框指示预测的跨膜结构域；预测的N端定位显示为阴影，其中预测的保守性切割位点以箭头示出。

图4A为新的MDR序列之一的C11099与来自番茄的推定的ABC转运蛋白B家族成员8类似物的比对，图4B为鉴定的其他转运蛋白序列之一的C43677与来自番茄的双向糖转运蛋白SWEET12类似物的比对。

图5为显示花烟草和普通烟草的叶和根中烟碱的量的曲线图。

图6为用于在如本文所述的转基因植物中表达RNAi分子的构建体的示意图。

图7为用于TALEN诱变的构建体的示意图。

图8A为在采用浮盘方案进行烟碱补料之后叶和根烟碱含量的比率，图8B为个体植物的根和叶烟碱含量。

图9A为在采用无底盆补料方案进行烟碱补料之后个体植物的叶烟碱含量，图9B为相同植物在补料前后的叶烟碱含量。

发明详述

先前人们修饰产生低生物碱烟草品种的途径的尝试有时导致叶的质量较低。目前尚不存在这样的商业烟草品系，其具有降低的叶生物碱含量，而与含有标准生物碱含量的调制叶(例如，来自野生型烟草植物的叶)相比，又能提供相同质量的调制叶。

本公开的基础是从普通烟草发现了编码生物碱转运蛋白和调节多肽的新核酸。在本文中描述和表征了这些核酸SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90以及由它们编码的多肽SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、或91。在此发现的基础上，可在普通烟草中调变这些核酸序列的表达水平和/或这些多肽的功能，并评估由此对植物中生物碱转运的影响。调变多肽功能和/或基因表达可改进烟叶和所得烟草产品中的生物碱组成的控制。

核酸和多肽

本文中提供了新的核酸(参见，例如，SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90)。如本文中使用的，核酸可包括DNA和RNA，并且包括含有一种或多种核苷酸类似物或骨架修饰的核酸。核酸可以是单链或双链的，一般取决于其预期用途。本文中提供的新的核酸编码新的多肽(参见，例如，SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、或91)。

还提供了分别与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90不同的核酸以及与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、或91和不同的多肽。与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90以及SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、或91在序列上不同的核酸和多肽可分别与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90以及SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、或91具有至少50％序列同一性(例如，至少55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性)。

在计算序列同一性百分比时，将两个序列比对，并确定两个序列之间的核苷酸或氨基酸残基的相同匹配数。相同匹配数除以比对区域的长度(即，比对的核苷酸或氨基酸的数目)，然后乘以100，得到序列同一性百分比的值。应当理解的是，比对区域的长度可以是一个或两个序列的一部分，至多为最短序列的全长大小。同样应当理解的是，单个序列可与一个以上的其他序列比对，因此在每个比对的区域上可具有不同的序列同一性百分比的值。

可以使用计算机程序ClustalW和缺省参数进行两个或更多个序列的比对来确定序列同一性百分比，ClustalW可以让核酸或多肽序列在序列全长上进行比对(全局比对)。Chenna等人，2003，Nucleic Acids Res.、31(13):3497-500。ClustalW计算出查询序列与一个或多个主题序列之间的最佳匹配，将它们进行比对，如此可确定同一性、相似性和差异。在查询序列和/或主题序列中可插入一个多个残基空位，使序列比对最大化。对于核酸序列的快速两两比对，可使用缺省参数(即，字大小：2；窗口大小：4；评分方法：百分比；顶对角线数：4；和空位罚分：5)；对于多个核酸序列的比对，可使用下列参数：空位开放罚分：10.0；空位延伸罚分：5.0；和加权转变：是。对于多肽序列的快速两两比对，可使用下列参数：字大小：1；窗大小：5；评分方法：百分比；顶对角线数：5；和空位罚分：3。对于多肽序列的多重比对，可使用下列参数：权重矩阵：blosum；空位开放罚分：10.0；空位延伸罚分：0.05；亲水空位：开启；亲水残基：Gly、Pro、Ser、Asn、Asp、Gln、Glu、Arg、和Lys；以及残基特异性空位罚分：开启。例如，可以万维网上的的贝勒医学院检索网站(Baylor College of MedicineSearch Launcher website)和欧洲生物信息学研究所网站(European BioinformaticsInstitute website)运行ClustalW。

可在核酸分子(例如，SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90)中导入变化，由此导致所编码的多肽的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、或91)的变化。例如，可采用诱变(例如，定点诱变、PCR介导的诱变)，或通过化学合成具有此类变化的核酸分子而在核酸编码序列中导入变化。这种核酸变化可导致一个或多个氨基酸残基处的保守和/或非保守氨基酸取代。“保守氨基酸取代”是其中用具有相似侧链的不同氨基酸残基替换一个氨基酸残基的取代(参见,例如Dayhoff等人(1978、in Atlas of ProteinSequence and Structure、5(Suppl.3):345-352)，其提供了氨基酸取代的频率表)，而非保守取代是其中用没有相似侧链的氨基酸残基替换氨基酸残基的取代。

如本文中使用的，“分离的”核酸分子是这样的核酸分子(例如，cDNA或通过PCR或限制性核酸内切酶消化所产生的基因组DNA片段)：其游离于在该分离核酸分子所来源的生物基因组中的天然位于该核酸分子一端或两端的侧翼的序列。这种分离的核酸分子通常被导入载体(例如，克隆载体、或表达载体)中，以便于操作或产生融合核酸分子，这将在下文更详细地论述。另外，分离的核酸分子可包括工程化的核酸分子，如重组和合成的核酸分子。

如本文中使用的，“纯化的”多肽是已从天然地伴随它的细胞组分中分离或纯化出来的多肽。一般来说，当多肽按干重计至少70％(例如，至少75％、80％、85％、90％、95％、或99％)游离于与其天然伴随的多肽或天然存在分子时，其被视为是“纯化的”。由于化学合成的多肽自然地与天然伴随它的组分相分离，所以合成多肽是“纯化的”。

可使用本领域中的常规技术分离核酸。例如，可使用任何方法分离核酸，所述方法包括但不限于，重组核酸技术、和/或聚合酶链反压(PCR)。通用的PCR技术描述于例如PCRPrimer:A Laboratory Manual、Dieffenbach&Dveksler、Eds.、Cold Spring HarborLaboratory Press、1995。重组核酸技术包括例如，限制酶消化和连接，其可用于分离核酸。还可化学合成分离的核酸，其形式为单个核酸分子或为一系列寡核苷酸。

可通过已知的方法如DEAE离子交换、凝胶过滤、和羟基磷灰石色谱法，从天然来源(例如，生物样品)中纯化多肽。还可以通过例如在表达载体中表达核酸来纯化多肽。另外，可通过化学合成获得纯化的多肽。可以采用任何适当的方法，例如柱色谱法、聚丙烯酰胺凝胶电泳或HPLC分析来测量多肽的纯度范围。

还提供了含有核酸(例如，编码多肽的核酸)的载体。可商购或可通过本领域中常规的重组DNA技术产生载体，包括表达载体。含有核酸的载体可具有与这种核酸可操作连接的表达元件，并可进一步包括编码选择标志物(例如，抗生素抗性基因)的序列。含有核酸的载体可编码嵌合或融合多肽(即，与异源多肽可操作连接的多肽，其可以在多肽的N端或C端)。代表性异源多肽为可在编码的多肽的纯化中使用的那些多肽(例如，6xHis标签，谷胱甘肽S转移酶(GST))。

表达元件包括指导和调节核酸编码序列的表达的核酸序列。表达元件的一个实例是启动子序列。表达元件还可包括调节核酸表达的内含子、增强子序列、反应元件、或诱导型元件。表达元件可以是细菌、酵母、昆虫、哺乳动物、或病毒来源的，并且载体可以含有不同来源的元件的组合。如本文中使用的，可操作连接意指启动子或其他表达元件相对于核酸以指导或调节核酸表达的这样一种方式位于载体中(例如，合框)。众多将核酸导入宿主细胞中的体内和体外方法是本领域技术人员熟知的，包括但不限于，电穿孔、磷酸钙沉淀、聚乙二醇(PEG)转化、热激、脂质体转染、显微注射、和病毒介导的核酸转移。

如本文中描述的载体可导入宿主细胞中。如本文中使用的，“宿主细胞”是指核酸导入其中的特定细胞，并且也包括携带载体的这种细胞的后代。宿主细胞可以是任何原核或真核细胞。例如，核酸可以在诸如大肠杆菌的细菌细胞中、或在昆虫细胞、酵母或哺乳动物细胞(如中华仓鼠卵巢细胞(CHO)或COS细胞)中表达。其他适合的宿主细胞是本领域技术人员已知的。

可以利用适当的寡核苷酸对(例如，引物)使用许多扩增技术检测核酸(参见，例如，PCR Primer:A Laboratory Manual，1995，Dieffenbach&Dveksler，Eds.，Cold SpringHarbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY；和美国专利Nos.4,683,195；4,683,202；4,800,159；和4,965,188)。针对原始PCR的许多改良已经产生并可用来检测核酸。

还可利用杂交来检测核酸。核酸之间的杂交由Sambrook等人详细论述(1989、Molecular Cloning:A Laboratory Manual、2nd Ed.、Cold Spring Harbor LaboratoryPress、Cold Spring Harbor、NY；部分7.37-7.57、9.47-9.57、11.7-11.8、和11.45-11.57)。Sambrook等人公开了针对小于约100个核苷酸的寡核苷酸探针的适当的Southern印迹条件(部分11.45-11.46)。利用部分11.46中提供的公式，可以计算出在长度小于100个核苷酸的序列与第二序列之间的Tm。Sambrook等人另外公开了针对大于约100个核苷酸的寡核苷酸探针的适当的Southern印迹条件(参见部分9.47-9.54)。利用Sambrook等人在部分9.50-9.51中提供的公式，可以计算出在长度大于100个核苷酸的序列与第二序列之间的Tm。

含有核酸的膜预杂交和杂交的条件、以及洗涤含有核酸的膜以去除过量的和非特异性结合的探针的条件可在杂交严格性中起着重要作用。适当时，可以在中等或高严格条件下进行这样的杂交和洗涤。例如，通过降低洗涤溶液中的盐浓度和/或通过增加进行洗涤时的温度，可以使洗涤条件更严格。仅仅作为举例，高严格条件一般包括在0.2X SSC中在65℃洗涤膜。

另外，杂交量的解释可受到例如标记的寡核苷酸探针比活性、与探针杂交的模板核酸上的探针结合位点的数目、以及放射自显影片或其他检测介质的暴露量的影响。本领域普通技术人员容易理解的是，虽然可以采用许多杂交和洗涤条件来检验探针核酸分子与固定的靶核酸的杂交，更重要的是检验在相同杂交、洗涤、和暴露条件下探针与靶核酸的杂交。优选的是，靶核酸在同一张膜上。

如果核酸分子与一种核酸的杂交比与另一种核酸的杂交多至少5倍(例如，至少6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、50倍、或100倍)，则所述核酸分子被认为与这种核酸而不是与所述另一种核酸杂交。可直接在膜上或使用例如PhosphorImager或Densitometer(Molecular Dynamics，Sunnyvale，CA)从放射自显影片对杂交量进行定量。

可使用抗体检测多肽。使用抗体检测多肽的技术包括酶联免疫吸附测定法(ELISA)、Western印迹、免疫沉淀和免疫荧光。抗体可以是多克隆或单克隆的。可以利用本领域中熟知的方法产生对多肽具有特异性结合亲和力的抗体。可利用本领域已知的方法将抗体附接到诸如微量滴定板的固体支持物上。在多肽的存在下，形成抗体-多肽复合物。

通常利用可检测标记来完成检测(例如，扩增产物、杂交复合物、或多肽的检测)。术语“标记”旨在涵盖直接标记以及间接标记的使用。可检测标记包括酶、辅基、荧光物质、发光物质、生物发光物质、和放射性物质。

本文中描述的某些核酸(例如，SEQ ID NO:1、3、5、7、或82)预期编码属于烟碱摄取通透酶(nicotine uptake permease、Nup)序列家族的多肽(例如，SEQ ID NO:2、4、6、8、或83)。Nup多肽是更大的嘌呤通透酶家族的成员。参见，例如，Hildreth等人，2011，PNAS USA，108:18279-84。除了本文中公开的新的Nup核酸和多肽序列之外，来自普通烟草的代表性Nup1和Nup2序列显示在登录号GU174268.1和GU174267.1中。

本文中描述的某些核酸(例如，SEQ ID NO:9、11、13、15、70、72、74、76、78、或80)预期编码属于多药耐药(MDR)序列家族的多肽(例如，SEQ ID NO:10、12、14、16、71、73、75、77、79、或81)。多药转运蛋白构成一大类膜蛋白，存在于大多数生物的细胞中。这些蛋白结合多种具有潜在细胞毒作用的化合物，并通过一个ATP或质子依赖性的过程将它们从细胞中去除(Zhelenova等人，2000，Trends Biochem.Sci.，25:39-43)。从前将多药转运蛋白划分为四个超家族：ATP结合盒(ABC)超家族、主要协助转运蛋白超家族、小多重耐药家族、耐药节结化细胞分化家族(下文更详细地论述的MATE家族最近被鉴定为多药转运蛋白的第五超家族)。属于ATP结合盒超家族和主要协助转运蛋白超家族的外排泵蛋白是多药耐药性(MDR)的最突出的促成因素。

本文中描述的某些核酸(例如，SEQ ID NO:17、19、21、23、25、27、29、31、86、88、或90)预期编码属于多药和毒性化合物外排型(MATE)序列家族的多肽(例如，SEQ ID NO:18、20、22、24、26、28、30、32、87、89、或91)。MATE多肽家族的特征是：存在12个推定的跨膜区段，以及不存在对其他多药转运蛋白超家族特异的“特征序列”(Brown等人，1999，Mol.Microbiol.，31:394-5)。MATE蛋白被认为用作质子依赖性外排转运蛋白，在细菌和植物中大量存在。

本文中描述的某些核酸(例如，SEQ ID NO:33和35)预期编码属于多向耐药性(PDR)序列家族的多肽(例如，SEQ ID NO:34和36)。参见，例如，Moons、2008、Planta、229:53-71。PDR家族仅发现于真菌和植物中，最初在酿酒酵母中由于编码非特异性药物外排转运蛋白的基因的表达增加而得以被表征。已鉴定了若干PDR多肽，它们赋予对一大组在功能和结构上不相关的毒性化合物(例如，抗真菌和抗癌药物)的抗性，并转运弱有机酸。另外，已在若干植物物种(包括，例如，拟南芥和水稻)中鉴定了多种PDR基因。

具有降低的叶中生物碱量的植物及制造方法

提供了在一种或多种如本文中描述的内源核酸(例如，SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90)中具有突变的烟草杂种、品种、品系、或栽培种。来自在一种或多种内源核酸(例如，SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90)中具有突变的植物的叶可展现出至少一种生物碱量的降低(例如，与来自没有所述突变的植物的叶相比)。另外，来自在一种或多种内源核酸(例如，SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90)中具有突变的植物的叶可展现出至少一种烟草特异性亚硝胺(TSNA)量的降低(例如，与来自没有所述突变的植物的叶相比)。

本文中提及的生物碱一般包括吡啶生物碱类，包括烟碱、降烟碱、新烟碱、麦斯明、和新烟草碱。参见，例如，Sheng等人，2005，Chromatographia，62:63-8。TSNA在调制过程中产生。亚硝酸盐可能由于细菌还原硝酸盐而累积，而亚硝酸盐(亚硝基化物质的来源)与生物碱之间发生化学反应而形成TSNA。代表性TSNA包括，例如，N’-亚硝基降烟碱(NNN)、4-(甲基亚硝基氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)、N’-亚硝基新烟草碱(NAT)、N’-亚硝基新烟碱(NAB)、和4-(甲基亚硝基氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁醛(NNAL)。

检测生物碱或TSNA的方法以及确定一种或多种生物碱或TSNA量的方法是本领域已知的。例如，可采用高效液相色谱(HPLC)–质谱法(MS)(HPLC-MS)或高效薄层色谱法(HPTLC)来检测一种或多种生物碱的存在和/或确定一种或多种生物碱的量。另外，可采用多种色谱方法(例如，气相色谱/热能分析(GC/TEA)、液相色谱/质谱法(LC/MS)、和离子色谱法(IC))来检测一种或多种TSNA的存在和/或确定一种或多种TSNA的量。

制造具有突变的烟草植物的方法是本领域已知的。突变可以是随机突变或靶向突变。对于随机诱变，可使用例如化学诱变剂、电离辐射、或快中子轰击使细胞(例如，普通烟草细胞)诱变(参见，例如，Li等人，2001、Plant J.、27:235-42)。代表性化学诱变剂包括但不限于，亚硝酸、叠氮化钠、吖啶橙、溴化乙锭、和甲磺酸乙酯(EMS)，而代表性电离辐射包括但不限于，x射线、γ射线、快中子照射、和UV照射。针对每种植物组织类型以实验方式确定诱变性化学品或辐射的剂量，以获得在阈值水平(以致死或生殖不育为特征)以下的突变频率。基于预期的突变频率，估计诱变处理所产生的M₁代种子的数目或M₁植物群的大小。对于靶向诱变，代表性技术包括TALEN(参见，例如，Li等人，2011，Nucleic Acids Res.、39(14):6315-25)或锌指(参见，例如，Wright等人，2005、The Plant J.、44:693-705)。无论是随机还是靶向，突变可以是点突变、插入、缺失、取代、或其组合。

多肽中的保守结构域对于多肽的功能以及细胞或亚细胞定位可能是重要的。图1显示了包括本文描述的新Nup序列在内的若干Nup序列的比对，其中方框指示预测的跨膜螺旋。图2显示了包括本文中描述的新MDR序列在内的若干MDR序列与方框所指示的保守性ATP酶结构域的比对。图3显示了包括本文中描述的新的MATE序列在内的若干MATE序列的比对。图3中的方框指示预测的跨膜结构域，其中预测的N端信号肽显示为阴影，预测的保守性切割位点以箭头示出。另外，图4A显示了在新的MD序列之一的C11099与来自番茄的推定的ABC转运蛋白B家族成员8类似物序列之间的比对。如下文表5中所示的，这些序列在核苷酸水平上具有84％序列同一性，且在氨基酸水平上具有85％序列同一性。此外，图4B显示了在下述二者之间的比对：标示为“其他”转运蛋白序列的一种新序列C43677，与来自番茄的双向糖转运蛋白SWEET12类似物序列。如下文表8中所示，这些序列在核苷酸水平上的具有71％序列同一性，在氨基酸水平上具有67％序列同一性。

如本文中论述的，可以使一个或多个核苷酸突变，使得编码的多肽的表达和/或功能相对于相应的野生型多肽的表达和/或功能发生改变。应当理解的是，例如，在一个或多个高度保守区域(参见，例如，在图1、2、3、和4中所示的比对)中的突变很可能会改变多肽的功能，而在这些保守区域之外的突变很可能对多肽功能影响很小或没有影响。另外，单个核苷酸突变可产生终止密码子，导致截短的多肽，并且取决于截短的程度，可导致功能丧失。

优选地，在本文中公开的新核酸之一中的突变导致包含所述突变的烟草植物中的转运蛋白活性降低或甚至完全消除。转运蛋白编码序列中的突变的适合类型包括但不限于，核苷酸的插入、核苷酸的缺失、或野生型转运蛋白编码序列中的转换或颠换。编码序列中的突变可导致一个或多个氨基酸的插入、一个或多个氨基酸的缺失、和/或在编码的多肽中的非保守氨基酸取代。在一些情况下，转运蛋白的编码序列包含一个以上的突变或一种以上类型的突变。

例如，编码序列中的氨基酸插入或缺失可能破坏所编码的多肽的构象。氨基酸插入或缺失还可能破坏对于识别结合配体(即，被转运的分子)或对于多肽的活性(即，转运蛋白活性)而言重要的部位。本领域已知，与较小量的氨基酸插入或缺失相比，较大量的连续氨基酸插入或缺失更可能致使基因产物无功能。另外，一个或多个突变(例如，点突变)可改变转运蛋白多肽的定位、导入终止密码子以产生截短的多肽、或破坏多肽内的活性部位或结构域(例如，催化部位或结构域、结合部位或结构域)。

仅仅作为举例，MATE转运蛋白序列(例如，图3；例如，C9954(SEQ ID NO:26)、C46276(SEQ ID NO:22)、C48594(SEQ ID NO:24)、和DC38072(SEQ ID NO:20))可被突变，将残基24处的带电氨基酸改变为不带电氨基酸。这样的突变可破坏转运多肽通常向细胞表面上的靶向，从而可改变一种或多种生物碱在植物内的转运(例如，进入木质部和/或从根到叶的转运)。另外，MDR转运蛋白(例如，C11099(SEQ ID NO:16))可被突变使得核苷酸124处的T改变为A，从而在第八个氨基酸残基之后产生终止密码子。这样的突变将会显著降低或基本上消除植物中的转运蛋白多肽；可类似地对本文中公开的任何转运蛋白序列施加导入终止密码子的突变。此外，MDR(例如，图2和4A)和PDR(例如，SEQ ID NO:33-36)多肽家族的转运需要ATP水解；ATP酶结构域是高度保守的，并且水解需要的氨基酸残基是已知的(例如，位于图2的残基676-682处的Walker A氨基酸基序(GXXGXGK))。因此，MDR多肽(例如，DC3222(SEQ ID NO:10)、C11099(SEQ ID NO:16)、DC62783(SEQ ID NO:12)、和DC26451(SEQID NO:14))或PDR多肽(例如，C53160(SEQ ID NO:34)、C22474(SEQ ID NO:36))可在WalkerA基序内突变(例如，在保守赖氨酸(K)氨基酸处)，结果将产生不能水解ATP并且不能进行转运或至少缺乏转运能力的多肽。

对于非保守氨基酸取代，一种类型的氨基酸可替换为不同类型的氨基酸。非保守取代可实质性地改变基因产物的电荷或疏水性。非保守氨基酸取代还可实质性地改变残基侧链的体积，例如，将丙氨酸残基取代为异亮氨酸残基。非保守取代的实例包括碱性氨基酸取代为非极性氨基酸，或极性氨基酸取代为酸性氨基酸。

转运蛋白多肽等跨膜多肽含有决定所述多肽定位在细胞内何处的特定序列。例如，先前描述的MATE1蛋白含有将其靶向到液泡上的序列，而本文描述的新MATE序列具有不同的N端结构域(参见图3中的比对)。在多肽插入膜之后，靶肽序列常常被切割(例如，通过识别特异性核苷酸基序的特异性蛋白酶)。通过突变靶序列或切割基序，可以改变多肽的靶向。

诱变之后，从诱变的细胞再生M₀植物，并且可以筛选这些植物或这个群体的后续世代(例如，M₁、M₂、M₃，等)在感兴趣序列(例如，SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90)中的突变。可以使用本领域中的常规方法(例如，杂交、扩增、其组合)或通过评估表型(例如，检测和/或确定根和/或叶中的一种或多种生物碱和/或一种或多种TSNA的量)筛选携带感兴趣序列中的突变的植物。通常，与缺乏突变的相应植物(例如，具有相同品种背景者)相比，在本文中公开的一个或多个核酸序列(例如，SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90)中存在突变导致突变植物的叶中一种或多种生物碱和/或突变植物的调制叶中一种或多种TSNA的降低。

如本文中使用的，“降低的”或“降低”是指相对于来自缺乏突变的烟草植物的类似处理的烟叶(例如，青的或调制的)，在青叶或调制叶中一种或多种生物碱、和/或青叶或调制叶中一种或多种TSNA的量减少(例如，统计学显著性减少)至少约5％到约95％(例如，约5％到约10％、约5％到约20％、约5％到约50％、约5％到约75％、约10％到约25％、约10％到约50％、约10％到约90％、约20％到约40％、约20％到约60％、约20％到约80％、约25％到约75％、约50％到约75％、约50％到约85％、约50％到约95％、以及约75％到约95％)。如本文中使用的，统计显著性是指采用统计显著性的适当量度时(例如，单尾双样本t检验)的p值小于0.05，例如，p值小于0.025或p值小于0.01。

M₁烟草植物对于突变等位基因来说可以是杂合且展现出野生型表型。在这样的情况下，这种植物的第一代自花授粉后代的至少一部分展现出野生型表型。或者，M₁烟草植物可具有突变体等位基因并展现出突变体表型。这样的植物可以是杂合的，但由于诸如负显性抑制之类的现象，尽管存在野生型等位基因亦展现出突变体表型；或者由于在两个等位基因中的独立诱导的突变，这样的植物可以是纯合的。

携带突变体等位基因的烟草植物可在植物育种计划中使用，以建立新的且有用的栽培种、品系、品种和杂种。因此，在一些实施方案中，使含有至少一个突变的M₁、M₂、M₃或更后的世代的烟草植物与第二普通烟草植物杂交，并鉴定出其中存在突变的杂交后代。应当理解的是，第二普通烟草植物可以是本文中描述的物种和品种之一。还应当理解的是，第二普通烟草植物可含有与其杂交的植物相同的突变、不同的突变、或在该基因座处为野生型。另外地或可替代地，第二烟草品系可展现出表型性状，如抗病性、高产量、高分级指标、可烤性(curability)、烘烤质量、机械收割、保持能力、叶子质量、高度、植物成熟(例如，早期成熟、早期到中期成熟、中期成熟、中期到晚期成熟、或晚期成熟)；茎长(例如，短、中等的或长茎)；和/或每株植物的叶子数量(例如，叶子数量少(例如5-10片叶子)、中等(例如11-15片叶子)、或多(例如16-21片叶子)。

采用已知的程序进行育种。可以在标记辅助选择(MAS)育种计划中采用DNA指纹图谱、SNP或类似技术，将突变体基因转移到或选育到如本文中所述的其他烟草中。可采用本文中描述的方法筛查杂交后代是否有突变，并且可以选择在本文描述的核酸序列(例如，SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90)中具有突变的植物。例如，可使用本文中列出的技术之一，采用从本文中描述的序列或其片段开发的标记来筛选F₂或回交世代植物。还可以筛选来自后代植物的叶(青的或调制的，视情况而定)的一种或多种生物碱和/或一种或多种TSNA的量，并可选择相比于缺乏突变的相应植物具有降低量的那些植物。鉴定为具有突变体等位基因和/或突变体表型的植物可以回交或自花授粉，以建立第二种群供筛选。可以重复回交或其他育种程序，直到轮回亲本的期望表型得以回收时为止。

成功的回交产生能育的并在需要时可与亲本之一回交的F₁植物。在一些实施方案中，利用标准方法(例如，采用基于本文中公开的核酸序列的引物的PCR)筛选F₂世代中的植物种群是否有突变或变体基因表达。然后使选出的植物与亲本之一杂交，并使第一回交(BC₁)世代植物自花授粉以产生BC₁F₂种群，对该种群再次筛选变体基因表达。重复回交、自花授粉、和筛选的过程，例如至少重复四次，直到最后筛选产生能育的并与轮回亲本合理地相似的植物时为止。在需要时使此植物自花授粉，随后再次筛选后代，以证实所述植物含有突变并展现出变体基因表达。可采用标准方法产生选择植物的原原种(breeder’s seed)，所述标准方法包括，例如田间试验、无效状态的证实、和/或对叶(例如，调制叶)进行化学分析用来确定生物碱水平。

采用本文中描述的突变体烟草植物的植物育种计划的结果是新的且有用的栽培种、品种、品系、和杂种。如本文中使用的，术语“品种”是指植物的群体，这些植物有共同的恒定特征，使它们与同一物种的其他植物区分开来。品种常常以商品形式销售，尽管不总是如此。品种具有一种或多种独特性状，但品种的另一特征是个体之间有非常小的总体变异。通过若干世代的自花授粉和选择、或利用组织或细胞培养技术从单亲本进行营养繁殖，可以建立“纯系”品种。与品种不同，“品系”最常表示一组以非商业方式，例如在植物研究中应用的植物。品系就感兴趣的一个或多个性状而言在个体之间显示出很小的变异，不过就其他性状而言在个体之间可能存在一定变异。

一个品种可实质衍生自另一个品系或品种。正如国际植物新品种保护公约(1961年12月2日，在1972年11月10日、1978年10月23日、和1991年3月19日在日内瓦修订)定义，品种“实质衍生”自初始品种，条件是：a)它主要是衍生自初始品种、或衍生自主要衍生自初始品种的品种，同时保留表达由初始品种的基因型或基因型组合导致的关键特性；b)它与初始品种明显可区分；并且c)除衍生行为导致的差异外，在由初始品种的基因型或基因型组合导致的关键特性的表达上与初始品种相同。例如，实质衍生的品种可以通过天然或诱导的突变体、体细胞克隆变体、来自原始品种的变体个体植物的选择、回交、或转化而获得。

可以通过阻止第一品种的母本植物(即，种子亲本)自花授粉、容许来自第二品种的父本植物的花粉对母本植物授精、并允许F₁杂交种子在雌性植物上形成，来产生烟草杂种。可以通过在花发育早期使花去雄来阻止雌性植物的自花授粉。或者，可以采用某种形式的雄性不育来阻止母本植物上的花粉形成。例如，可以通过细胞质雄性不育(CMS)、细胞核雄性不育、遗传雄性不育、分子雄性不育(其中转基因抑制了小孢子发生和/或花粉形成)、或自身不相容性来产生雄性不育。含有CMS的母本植物特别有用。在母本植物是CMS的实施方案中，父本植物一般含有育性恢复基因以确保F₁杂种是可育的。在母本是CMS的其他实施方案中，可使用不含育性恢复基因的父本。由这种亲本产生的F₁杂种是雄性不育的。雄性不育杂种的种子可与雄性可育的种子间种以在所得雄性不育植物上提供结实用的花粉。

本文所述的品种、品系和栽培种可用于形成单交烟草F₁杂种。在这样的实施方案中，可将亲本品种的植株培养成基本上均一的邻接群体，以便于父本植物天然异花授粉至母本植物。通过常规手段选择性地收获母本植物上形成的F₂种子。也可以大批量培养两个亲本植物品种，并收获母本上形成的F₁杂种种子和因自花授粉而在父本上形成的种子的混合物。或者，可进行三元杂交，其中将单交F₁杂种用作母本，并与另一不同的父本杂交。又或者，可产生双杂交种，其中两个不同单交的F₁后代自身进行杂交。当形成双杂交种时，自身不相容性对于防止母本的自花授粉可能特别有用。

在本文中描述的方法中使用的烟草植物可以是白肋烟型、深色型、烤烟型、马里兰型、或东方型。在本文中描述的方法中使用的烟草植物一般来自普通烟草，并且可来自多个普通烟草品种。品种可以是BU 64、CC 101、CC 200、CC 13、CC 27、CC 33、CC 35、CC 37、CC65、CC 67、CC 301、CC 400、CC 500、CC 600、CC 700、CC 800、CC 900、CC 1063、Coker 176、Coker 319、Coker 371Gold、Coker 48、CU 263、DF911、Galpao烟草、GL 26H、GL 338、GL350、GL 395、GL 600、GL 737、GL 939、GL 973、GF 157、GF 318、RJR 901、HB 04P、K 149、K326、K 346、K 358、K394、K 399、K 730、NC 196、NC 37NF、NC 471、NC 55、NC 92、NC2326、NC95、NC 925、PVH 1118、PVH 1452、PVH 2110、PVH 2254、PVH 2275、VA116、VA119、KDH 959、KT200、KT204LC、KY 10、KY 14、KY 160、KY 17、KY 171、KY 907、KY907LC、KTY14 x L8 LC、Little Crittenden、McNair 373、McNair 944、msKY 14xL8、Narrow Leaf Madole、NC 100、NC 102、NC 2000、NC 291、NC 297、NC 299、NC 3、NC 4、NC 5、NC 6、NC7、NC 606、NC 71、NC72、NC 810、NC BH 129、NC 2002、Neal Smith Madole、OXFORD 207、‘Perique’烟草、PVH03、PVH09、PVH19、PVH50、PVH51、R 610、R 630、R 7-11、R 7-12、RG 17、RG 81、RG H51、RGH 4、RGH 51、RS 1410、Speight 168、Speight 172、Speight 179、Speight 210、Speight 220、Speight 225、Speight 227、Speight 234、Speight G-28、Speight G-70、Speight H-6、Speight H20、Speight NF3、TI 1406、TI 1269、TN 86、TN86LC、TN 90、TN90LC、TN 97、TN97LC、TN D94、TN D950、TR(Tom Rosson)Madole、VA 309、或VA359。

除了突变之外，另一种可降低烟叶中生物碱量的方式是使用抑制性RNA(例如，RNAi)。因此，提供了含有编码至少一个RNAi分子的转基因的转基因烟草植物，所述RNAi分子在表达时使本文中描述的内源核酸(例如，SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90)中的至少之一沉默。如本文中描述的，来自这种转基因植物的叶展现出至少一种生物碱量的降低(例如，与来自缺乏或不表达RNAi的植物的叶相比)。另外，来自这种转基因植物的叶展现出至少一种烟草特异性亚硝胺(TSNA)量的降低(例如，与来自缺乏或不表达RNAi的植物的叶相比)。

RNAi技术是本领域已知的，是转录后基因沉默的非常有效的形式。RNAi分子一般含有长度约18个核苷酸(例如，长度约19或20个核苷酸)，乃至长度约700个核苷酸的核苷酸序列，在有义和反义方向均与靶基因互补。有义和反义链可通过短“环”序列(例如，长度约5个核苷酸到长度约800个核苷酸)连接，并表达为单个转录本，或者有义和反义链可在不同的载体或构建体上递送到靶细胞中并在其中的表达。许多公司提供RNAi设计与合成服务(例如，Life Technologies，Applied Biosystems)，针对本文中描述的若干新序列的代表性RNAi分子提供在SEQ ID NO:51-56中。

可利用植物表达载体来表达RNAi分子。RNAi分子一般在长度上为至少25个核苷酸并与本文中公开的核酸序列(例如，SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90)之一具有至少91％序列同一性(例如，至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)，或者在严格条件下与本文中公开的核酸序列(例如，SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90)之一杂交。在严格条件下的杂交如上文所述。

将核酸(例如，异源核酸)导入植物细胞中的方法是本领域已知的，并且包括例如粒子轰击、土壤杆菌介导的转化、显微注射、聚乙二醇介导的转化(例如，原生质体转化，参见，例如，Yoo等人(2007，Nature Protocols，2(7):1565-72))、脂质体介导的DNA摄取、或电穿孔。转化之后，转基因植物细胞可被再生为转基因烟草植物。如本文中描述的，转基因的表达导致叶中展现出至少一种生物碱的量减少，和/或所得的调制叶中至少一种TSNA的量降低，相对于来自不表达转基因的植物的叶。可以对再生的转基因植物的叶筛选调制叶中一种或多种生物碱和/或一种或多种TSNA的量，并且可以选择与相应的非转基因植物相比在所得调制叶中具有降低量的至少一种生物碱和/或至少一种TSNA的植物，以供在例如本文论述的育种计划中使用。

赋予诸如除草剂抗性(有时被称为除草剂耐受性)、抗虫性、或胁迫耐受性之类的性状的核酸也可存在于本文描述的新的烟草植物中。赋予针对抑制生长点或分生组织的除草剂(例如咪唑啉酮或磺酰脲)的抗性的基因可能是适合的。这个类别中的示例性基因编码突变体ALS和AHAS酶，如在例如美国专利Nos.5,767,366和5,928,937中描述的。美国专利Nos.4,761,373和5,013,659涉及抵抗不同的咪唑啉酮或磺酰脲除草剂的植物。美国专利No.4,975,374涉及含有编码抵抗除草剂的抑制作用的突变体谷氨酰胺合成酶(GS)的基因的植物细胞和植物，已知这些除草剂(例如膦丝菌素和甲硫氨酸亚砜亚胺)抑制GS。美国专利No.5,162,602公开了抵抗环己二酮和芳氧苯氧丙酸除草剂的抑制作用的植物。

抗草甘膦的基因也是适合的。参见，例如，美国专利Nos.4,940,835和4,769,061。这样的基因可赋予对草甘膦除草剂组合物的抗性，所述组合物包含但不限于草甘膦盐类，如三甲基硫盐、异丙胺盐、钠盐、钾盐和铵盐。参见，例如，美国专利Nos.6,451,735和6,451,732。抵抗磷酰基化合物(例如草铵膦或膦丝菌素、以及吡啶氧基丙酸或苯氧基丙酸和环己酮)的基因也是适合的。参见，例如，美国专利Nos.5,879,903；5,276,268；和5,561,236；以及欧洲申请No.0 242 246。

其他适合的除草剂包括抑制光合作用的那些，例如三嗪和苯基氰(腈水解酶)。参见美国专利No.4,810,648。其他适合的除草剂包括2,2-二氯丙酸、稀禾定、吡氟氯禾灵、咪唑啉酮除草剂、磺酰脲除草剂、三唑嘧啶除草剂、均三嗪除草剂以及溴草腈。其他适合者为对原卟啉原氧化酶(protox)酶赋予抗性的除草剂。参见，例如，美国专利No.6,084,155和US20010016956。

可得到对例如鳞翅目昆虫之类的昆虫赋予抗性的多种基因。示例性基因包括编码截短的Cry1A(b)和Cry1A(c)毒素的那些基因。参见，例如，描述于美国专利Nos.5,545,565；6,166,302以及5,164,180中的基因。参见例如，Vaeck等人，1997、Nature、328:33-37和Fischhoff等人，1987、Nature Biotechnology、5:807-813。特别有用的是编码展现出针对烟草天蛾(tobacco hornworm)；烟芽夜蛾(烟草蚜虫)和/或烟草斜纹夜蛾(tobaccocutworm)的杀虫活性的毒素的基因。

具有增加的叶生物碱量的植物及制造方法

可以在植物中过表达本文中描述的序列以增加叶中一种或多种生物碱(和/或一种或多种TSNA)的量。因此，提供了转基因烟草植物、或来自这种植物的叶，所述植物经过本文中描述的在能驱动植物中表达的启动子(例如，植物启动子)的控制之下的核酸分子(例如，SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90)或其功能片段的转化。如本文中论述的，在植物表达载体中的核酸分子可具有与本文中描述的序列不同的序列，其不同可表示为序列同一性百分比(例如，相对于SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90)或基于所述序列与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、或90杂交的条件。

作为利用全长序列的替代方案，可以采用编码具有期望功能性的多肽片段(在本文中称为“功能片段”)的序列的一部分。当采用核酸时，应当理解的是，具有功能性的并不是核酸片段，而是被编码的多肽片段。基于本文中的发明公开在以及在图1、2、3和4中所示的比对，本领域技术人员可以预测能够赋予期望的功能性的多肽的部分(例如，一个或多个结构域)。

在转化之后，转基因烟草细胞可被再生为转基因烟草植物。可以对再生的烟草植物的叶筛选一种或多种生物碱的量，并且可以选择与相应的非转基因植物中的量相比至少一种生物碱的量有所增加的植物，以供在例如本文论述的育种计划中使用。，核酸分子或其功能片段的表达可导致叶展现出至少一种生物碱的量相比来自不表达所述核酸分子或其功能片段的烟草植物的叶有所增加。还可将赋予除草剂抗性、抗虫性、或胁迫耐受性的核酸导入这样的烟草植物中。

烟草产品和制造方法

本文中描述的方法允许改变烟草植物中的叶成分。如本文中描述的，改变叶成分是指降低或增加叶中至少一种生物碱的量。如本文中描述的，这样的方法可包括诱变(例如，随机或靶向的)或产生转基因植物(例如，利用RNAi或过表达)。

来自这样的烟草的叶(例如，具有一种或多种生物碱量的降低或增加)可以调制、陈化、回潮和/或发酵。调制烟草的方法是熟知的，包括例如晾制、熏制、调制和晒制。陈化也是已知的，并且一般在木桶(例如，大桶)或硬纸盒中在约10％到约25％的含湿量在压实条件下进行几年(例如，2到5年)(参见，例如，美国专利No.4,516,590和5,372,149)。回潮例如包括如US 2004/0118422或US 2005/0178398中描述的加热、蒸发水分或巴氏消毒步骤，而发酵的典型特征为高初始含湿量、产热、和10％到20％的干重损失。参见，例如，美国专利Nos.4,528,993、4,660,577、4,848,373和5,372,149。在需要时，烟草还可以进一步加工(例如，切割、膨胀、混合、研磨或粉碎)，并用于烟草产品中。

烟草产品是本领域已知的，并且包括任何从烟草制成或衍生的旨在用于人类消费的产品，包括烟草产品的任何组分、部分、或辅助用品。代表性烟草产品包括但不限于，无烟烟草产品、烟草衍生的烟碱产品、小雪茄、无通气凹槽(non-ventilated recess)过滤嘴香烟、通气凹槽(vented recess)过滤嘴香烟、雪茄、鼻烟、烟斗烟草、雪茄烟草、香烟烟草、咀嚼烟草、烟叶、烟丝、和切碎烟草。代表性无烟烟草产品包括，例如，咀嚼烟草、湿鼻烟(snus)、烟袋(pouch)、烟膜(film)、烟片(tablet)、涂层烟钉(coated dowel)、烟杆(rod)，等等。代表性香烟和其他烟制品包括，例如，包括滤芯或杆元件在内的烟制品，其中可以点燃抽吸的材料杆元件可包括在烟草混合物之内的调制烟草。除了本文中描述的生物碱降低的烟草之外，烟草产品还可包含其他成分，例如但不限于，粘合剂、增塑剂、稳定剂、和/或调味剂。参见，例如，US 2005/0244521、US 2006/0191548、US 2012/0024301、US 2012/0031414、和US 2012/0031416，为烟草产品的实例。

将在下列实施例中进一步描述本发明，这些实施例并不限制权利要求书中记载的主题方法和组合物的范围。

实施例

实施例1—生物碱从根到叶的转运

以前的研究已显示，花烟草，普通烟草的一种亲缘植物，不转运生物碱到叶(Pakdeechanuan等人，2012，Plant Cell Physiol.，53(7):1247-54)。这种表型的证实如图5中所示。还测试了花烟草在打顶(topping)之后能够转运生物碱的可能性。参见表1。所有测试情形下均未发现生物碱转运到叶。

表1.打顶和未打顶的花烟草的叶和根的生物碱含量

LOQ，定量限；ND，未检测到

实施例2—RNA制备和测序

在打顶之前和之后从花烟草植物的根组织采集RNA，利用来自Illumina的True-Seq Library Construction Kit建立RNA测序文库。利用Illumina MiSeq平台完成花烟草RNA的测序。测序进程以150个周期的双端读段参数进行，并使用E-基因毛细管电泳仪确定文库质量和平均大小。通过ArrayXpress(Raleigh，NC)进行的RNA深度测序，确定TN90烟草中的根特异性基因表达。

在测序之后，修整所得序列，并将品质得分高于30的读段装配为重叠群。然后将单独的序列读段回贴(map)到这些重叠群上。测序进程1生成了针对总共69Mb序列数据的460万个回贴读段，测序进程2生成了针对总共37.5Mb序列数据的250万个回贴读段。这产生了106.5Mb序列读段，供花烟草基因表达分析中使用。

通过与具有95％序列同一性截止值的本塞姆氏烟草参考基因组相比较，确定全长编码序列。全长编码序列和由此编码的预测多肽显示在SEQ ID NO:1-50和70-91中。

实施例3—表达水平的分析

分析TN90和花烟草基因表达数据，以鉴定相比于普通烟草在花烟草中差异表达或未检出的转运相关基因。基于与其他组织的表达差异，针对根特异性表达将TN90表达数据过滤(>9倍以上的基因表达，p值<0.000001)。然后针对高的根表达(在打顶之后>100个读段)将结果过滤。然后针对基因本体论(GO)术语将基因过滤，所述术语表示次级代谢物的转运蛋白(例如，术语“转运”结合“药物”或“嘌呤”用于过滤结果)。利用相同的GO标准，将两个独立的测序轮次中在花烟草中未检出的基因过滤。然后比较这些数据集，以确定落入所有三个类别的基因(即，(i)高的根特异性表达、(ii)GO标准、和(iii)在花烟草中不表达)。

在表2中列出这些基因、以及它们在TN90烟草中的表达水平。

表2.在TN90中的基因表达

*，打顶之后的小时数；ND＝未检出

还分析了花烟草基因相对于TN90表达的表达水平，以确定可能在花烟草中高表达、而不在普通烟草中高表达的调节基因和/或生物合成基因。鉴定了四个靶标，在表3中列出。

表3.在花烟草中高表达的基因的表达

^a，在打顶之后72小时采集的根组织；*，打顶之后的小时数

实施例4—序列比对

预期涉及转运的基因落入五个主要类别：烟碱摄取通透酶(Nup)家族、多药和毒性化合物外排型(MATE)家族、多药耐药(MDR)家族、和多向耐药(PDR)家族、以及一组无关基因。将核苷酸序列和预测的多肽序列与保藏在公共数据库中的序列进行比较。这些比较的结果显示在表4(Nup序列)、表5(MDR序列)、表6(MATE序列)、表7(PDR序列)、表8(其他转运蛋白序列)、和表9(以高水平表达的花烟草基因)中。

表4.Nup序列

表5.MDR序列

表6.MATE序列

表7.PDR序列

表8.其他转运蛋白序列

表9.以高水平在花烟草中表达的基因

在花烟草中相对于普通烟草高表达的基因之一，C33728，似乎是富含AC的结合因子(ACBF)调节蛋白。这种多肽当被转移到烟草时，显示出与来自豆类的异源性木质部相关启动子的启动子中富含AC的重复区域结合，而且发现所述多肽在所有组织中表达，但最普遍地在植物的茎中表达(Séguin等人，1997，Plant Mol.Biol.，35(3):281-91)。该多肽含有三个不同的预测的RNA结合结构域，以及一个可能涉及基因活化的富谷氨酰胺区域。这些预测的结构域在下文的SEQ ID NO:50中以下划线表示。N端结构域富含谷氨酰胺。这种类型的结构域架构可见于许多剪接因子中(Lorkovic和Barta，2002，Nuc.Acids Res.，30:623-35)。

MDGDAVSSSSNGDAATDDVWSAIHALQQHQQQQQKMQQSPTQIQSSSEDNKTIWIGDLQQWMDESYLH SCFSQAGEVISVKIIRNKQTGQSERYGFVEFNTHAAAEKVLQSYNGTMMPNAEQPFRLNWAGFSTGEKRAETGSDF SIFVGDLASDVTDTMLRDTFASRYPSLKGAKVVVDANTGHSKGYGFVRFGDESERSRAMTEMNGVYCSSRAMRIGV ATPKKPSAQQQYSSQAVILSGGYASNGAATHGSQSDGDSSNTTIFVGGLDSDVTDEELRQSFNQFGEVVSVKIPAG KGCGFVQFSDRSSAQEAIQKLSGAIIGKQAVRLSWGRSPANKQMRTDSGSQWNGGYNGRQNYGGYGYGASQNQDSGMYATGAAYGASSNGYGNHQQPVS*(SEQ ID NO:50)

实例5—RNAi品系开发、质粒构建和转化

为了评估候选基因的功能，产生了两组转基因植物，一组利用全长编码序列，一组利用RNAi序列(参见图6)。为了表达全长编码序列或RNAi序列，使用了一种表达载体(SEQID NO:21)，其具有CsVMV启动子和NOS终止子、以及一个带有肌动蛋白2启动子指导下的卡那霉素选择标志物(NPT II)并具备NOS终止子的盒。利用DNA轰击或基因枪法，将携带感兴趣转基因的核酸构建体导入烟草叶盘中。参见，例如，Sanford等人，1993、MethodsEnzymol.、217:483-510；以及Okuzaki和Tabei，2012、Plant Biotechnology、29:307-310。

简言之，如下所述将含有转化盒的质粒DNA包被在1μm的金颗粒上(DNA/金)。1μm的金颗粒在180℃烘烤12小时，并制备储液(40mg/ml)。为了制备用于10次射弹的混合物，在1.5ml的管中将100μl的储液与40μl的表达载体DNA(1μg/μl)、100μl的2.5M CaCl₂、和40μl的0.1M亚精胺混合。将混合物在13,000×g下离心30秒，并用500μl 100％乙醇洗涤沉淀。DNA/金混合物悬浮在100μl的水中，加10μl到载体膜(macrocarrier)上，干燥，然后进行轰击。在PDS-1000/He系统(Bio-Rad Laboratories，Hercules，CA，USA)中，采用1,100psi破裂盘在部分真空下(711mmHg)对每个平板进行两次射弹轰击。

Narrow Leaf Madole(NLM)和Tennessee 90(TN90)烟草叶盘以RNAi构建体进行转化，而花烟草的烟草叶盘以全长候选基因构建体进行转化。将完整烟叶(约45×30mm长)置于MS培养基上过夜，在第二天用所述构建体对叶盘进行轰击。然后将叶子切成小片(约5×5mm)，置于TOM培养基(含20g蔗糖/L；1mg/L IAA和2.5mg/L BAP的MS培养基)上在27℃培育3-5天，然后转移到含300mg/l卡那霉素的TOM培养基(TOM-Kan)上培育。每2-3周将组织转移到新的TOM-Kan平板上，持续4-6周(27℃，16h光照)。在轰击4-6周之后再生抗卡那霉素的初生芽。将芽转移到MS卡那霉素平板上以生根。

评估来自T1植物(及后续世代)的叶和/或根，以确定一种或多种生物碱和/或一种或多种TSNA的量。

实施例6—RNAi分子的序列和表达构建体

RNAi分子序列在下文示出。加双下划线部分是环，其来自烟草QS基因序列。

pALCS-TDNA-R1 RNAi序列(22474；SEQ ID NO:51)

pALCS-TDNA-R4 RNAi序列(43677；SEQ ID NO:52)

pALCS-TDNA-R2 RNAi序列(11099；SEQ ID NO:53)

pALCS-TDNA-R7 RNAi序列(40974；SEQ ID NO:54)

pALCS-TDNA-R3 RNAi序列(46276；SEQ ID NO:55)

pALCS-TDNA-R5 RNAi序列(39106；SEQ ID NO:56)

表达盒的序列显示在下文，其中有关部分指示在左边缘。还参见图6。

转化盒序列(SEQ ID NO:57)：

实施例7—随机诱变和突变体的表征

对于EMS突变，将一克(大约10,000粒种子)Tennessee 90烟草(TN90)转化种子在0.1％

中洗涤十五分钟，然后在30ml的ddH₂O中浸泡两小时。然后将一百五十(150)μl的0.5％EMS(Sigma，目录号M-0880)混合到种子/ddH₂O溶液中，在罩子下在室温(RT；大约20℃)温育8-12小时(在30rpm旋转)。然后从种子去除液体，并将液体混合到1M NaOH中过夜，以去污和处置。然后用100ml ddH₂O洗涤种子两次，每次2-4小时。然后将洗涤的种子悬浮在0.1％琼脂:水溶液中。

将琼脂溶液中的EMS处理过的种子以约2000粒种子/浅箱均匀撒布在装有浸水的Carolina’s Choice Tobacco Mix^TM(Carolina Soil Company，Kinston，NC)浅箱上。然后用塑料包装覆盖这些浅箱，置于生长室中。一旦苗从土壤中萌出，即刺穿塑料包装，以便让湿度逐渐下降。两周之后完全移除塑料包装。将浅箱移动到温室，用NPK肥料进行施肥。将苗插入浮盘中，培育至移植大小。将植物移植到田间。在生长期间，植物进行自花授粉，形成M₁种子。在成熟期，从每株植物收获五个荚，对来自每株植物的种子集合给予单独命名。这形成M₁种群。

种植每株M₀植物的M₁种子的混合物，从M₁植物采集叶子并提取DNA。扩增靶基因并测序，以便进行突变鉴定。

实施例8—使用TALEN的靶向诱变

在特异性基因靶内或在启动子序列内发现了基因特异性TALEN识别序列，可用于靶向缺失或启动子插入以便降低基因表达或改变组织特异性表达。感兴趣区域的序列显示在下文(SEQ ID NO:61-69)。在感兴趣区域的相应序列中，基因C22474(Pdr5b)的特异性靶序列以下划线表示。感兴趣的所有TALEN区域的位置示意性地显示在图7中。黄色条表示包含内含子的初级转录物。绿色表示标记为启动子区域的上游区域。基于已知的基因组序列信息，这些TALEN位点对于单基因靶是特异的。每个基因的TALEN区域1和2用来破坏启动子或编码区的5’端，而其他区域只用来破坏编码序列。

C22474-TAL1(SEQ ID NO:61)

AATTCAAACCTGTCAAAACCATAAAAAGATATTGGACAAATGCTTTTAATATAATTGCCTTAGATTAATCTATATATATATATATATATATATAGGTAAATACTTACTTGTATCAGACATTTATCTTTATAAATATGTTATTCACTAAATCATAGTTAATTAATATATATTTTTACCTTAAGGGGCCGTTTGGTTGGGAAA

C22474-TAL2(SEQ ID NO:62)

TATCGCACTACTATTGAACCTATCGCCTTTTGAGTTTTGATATATAAATAGCGACGAACGTTTCTTAGATAATGGACTCATAACCTCCCTCTTCACAACTAGAAGAGCGTGAGACCTTTTCAATTAGAATTCGTAGGAAAAAATCAAACACAAATTCACAAAACAAAAATTTATTAAGATTTCAGCGACCAAGCCCGTGAG

C22474-TAL3(SEQ ID NO:63)

TCGTTTGAGAAAAACGGTCCTTAAATCGGTCATGGAAAGTGAGAATAATCAGGGCAATAAAAAAGTTGTTCATAAGGAAGTTGATGTTCGGAATCTGGGATTGAATGAGCGACAAGAGTTCATTGATCGATTTTTCAGGGTTGCTGAGGAAGATAATGAAAAGTTTCTGAGAAAGTTCAGAAATCGAATTGACAAGTAAGTTTCCAGTATTACT

C22474-TAL4(SEQ ID NO:64)

ACAAGCCACAAGCTACACTATCCAAAGAGCAGGCCAGCGATATGGAAGCTGAGCAAGAAGAAAGCACGGGAACCCCTAGACTTCGAATCAGCCAGTCGAAGAGAGATGATCTCCCTCGATCCTTATCTGCAGCAGATGGGAACAAGACAAGTATGATCTTTAGCCCATCAATAACAGAATCTGCTTGGGGAATATAAGTAATGCTTACAGT

C11099-TAL1(SEQ ID NO:65)

ATACGATAAGTCCTCTTAAAATTACCATACTTATAAAGTCATAAAAGTAGAAAGAAAAAGGACCTCTTTGAAAATTTTTATATAAAAGGGGCTGAAAATATGCGATAATGTCAAGTAGCAGTTTGGCTTCATATATTGGTCCATGTTATCGGAGTTGGTATTTATGTTAAATATTAAGTACTTTTTTATCATATCTATCA

C11099-TAL2(SEQ ID NO:66)

ACTCAATTTCTGCCACTTTATTATAAATAGTAAGTTAGTATTCCATTCTTGGTCAGAAAGGAGTATGGGAAATCAAGGTCTATTTTCTTAGTTACAGACCTAACAATTTCCATTGTCACCTTTTTTCAGCTGTTGGCGTGTAGAAACGGACCTTTGAGCATTGTTGATGCGTTTGACTTGTTTTAGAAAAGAAAAAAGAATG

C11099-TAL3(SEQ ID NO:67)

GGCTAGTTGTGGCTTGGAAGCTTGCACTAGTTATGATTGCTGTCCAACCTCTCACAATTCTATGCTTTTACACGCGAAAAGTCTTGCTATCCACCATCACAGCTAAGTTCGTCAAGGCACAATATCAAAGCACTCAAACTGCTGTGGAGGCTGTTTATAATCATAGGATTGTGACCTCGTTTGGGAGCATAAATAAGGTCCTTGAAATCTTTGATGAGGCACAGGATGAGTCAA

C43677-TAL1(SEQ ID NO:68)

TTTTTAACCACCTAGTGGATGCTAATATGGTGTCAGCATTAGAAGAAACTAATTCATGATTTAAGTTTTATAGGTTCAATTTTTAGATTTTTAATATTAAATATATTATATTTTAAAGTTATGAGTTAATATTTGTTGAAGTATTTGTTAAGTATAATTATAATAAATTTTAACACTAATATTTATATTTATGCTCTGCGTCAACAG

C43677-TAL2(SEQ ID NO:69)

TTTTTAACCACCTAGTGGATGCTAATATGGTGTCAGCATTAGAAGAAACTAATTCATGATTTAAGTTTTATAGGTTCAATTTTTAGATTTTTAATATTAAATATATTATATTTTAAAGTTATGAGTTAATATTTGTTGAAGTATTTGTTAAGTATAATTATAATAAATTTTAACACTAATATTTATATTTATGCTCTGCGTCAACAG

将感兴趣基因的靶序列送到Life Technology(Carlsbad，CA)，以确定转录激活因子样(TAL)效应蛋白的可能结合位点序列。由Life Technology合成TAL并克隆到发明人的植物表达载体pALCS1中，用作入门载体。根据用途，可以采用五种不同的方案来产生诱变的烟草品系：1)将一个或多个入门载体(含有靶TAL的pALCS1)直接转化到烟草原生质体中，以产生随机序列缺失或插入诱变烟草品系；2)将左右两侧由与靶插入序列同源的序列包夹的供体序列(例如，报告基因，例如，GUS基因)连同一个或多个入门载体(含靶TAL的pALCS1)共转化到烟草原生质体中，以产生含报告基因的诱变烟草品系；3)将包含具有点突变的靶TAL的供体序列连同一个或多个入门载体(含靶TAL的pALCS1)共转化到烟草原生质体中，以产生具有点突变的诱变烟草品系；4)含组织特异性启动子序列的供体序列，其产生以组织特异性方式表达内源基因的突变体烟草品系；和5)含有上述供体序列与报告基因构建体的组合的供体序列，其促进突变体烟草的筛选。

从生长室中Magenta盒内培植的TN90烟草的叶分离烟草原生质体。将来自3-4周大的植物的充分展开的叶(5cm)从叶中部切割成0.5到1mm的叶条。将叶条转移到制备的酶溶液(1％纤维素酶R10、0.25％离析酶R10、0.4M甘露醇、20mM KCl、20mM MES(pH 5.7)、10mMCaCl₂、0.1％BSA)中，将叶条的两个侧面浸入。使用干燥器在黑暗中将叶条进行真空浸润30分钟，在没有搅拌的条件下，在黑暗中在室温继续消化4小时到整夜。原生质体在100μm尼龙过滤器中过滤，用3ml Lymphoprep进行纯化。用W5n溶液(154mM NaCl、125mM CaCl₂、5mMKCl、2mM MES、991mg/l葡萄糖，pH 5.7)将原生质体离心和洗涤，并以5x 10⁵/ml的浓度悬浮在W5n溶液中。将原生质体在冰上保持30分钟，以便重力沉降到管的底部。移去W5n溶液，在室温下使原生质体重悬在P2溶液中。在15ml微量离心管中轻轻混合50μl DNA(10-20μg的质粒)、500μl原生质体(2x10⁵个原生质体)和550μl的PEG溶液(40％，v/v 10ml 4g PEG4000、0.2M甘露醇、0.1M CaCl₂)，在室温下温育混合物5分钟。

离心沉淀原生质体并将其重悬在1ml 2X 8EN1(8EN1:没有NH₄NO₃的MS盐、MS维生素、0.2％肌醇、4mM MES、1mg/l NAA、1mg/l IAA、0.5M甘露醇、0.5mg/l BAP、1.5％蔗糖)中。用等量的低熔点琼脂(LMA)使转化的原生质体成凝胶状，0.2ml的原生质体LAM滴落形成珠子。珠子中加入10ml 8EN1，7天后，取出5ml 8EN1并添加5ml 8EN2(具有0.25M甘露醇的8EN1)；又过7天之后(第14天)，取出10ml 8EN2并添加10ml 8EN2；再过7天(第21天)，取出5ml 8EN2并添加5ml 8EN3(具有3％蔗糖而没有甘露醇的8EN1)；再过7天(第28天)，取出10ml 8EN3并添加10ml 8EN3。将原生质体保持两周，直到微愈伤组织生长时为止。愈伤组织转移到NCM固体培养基上，直到达到约5mm时为止(通常约两周)。愈伤组织转移到TOM-Kan固体培养基上生根，并采用本文中描述的方法使转化的烟草植物再生。

表10.TAL效应子结合位点序列

加下划线＝TAL结合位点；TAL结合位点之间的非加下划线区域＝设计发生DNA切割的位置

实施例9—筛选植物的生物碱含量调节

在田间类似条件下的温室中，在装有Carolina’s Choice Tobacco Mix(CarolinaSoil Co.，Kinston，NC)10英寸盆中培育实施例5、6、7或8中鉴定的转基因和突变体烟草植物。在开花期，将植物打顶，并在2周之后从打开的叶和根采集组织样品。

利用研钵及研杵研磨组织。使用来自Arista Laboratories的认证方案，通过气相色谱和质谱联用确定生物碱含量。确定烟碱、降烟碱、新烟碱及新烟草碱的量以及总生物碱的含量。

实施例10—烟碱补加测定

通过与肥水一道补加烟碱来提高烟碱的量，可以测试转基因幼苗中的烟碱转运，而且与等候内源生物碱达到可测相比，表型确定可以大大提早。通过两种独立的方法进行补加测定。在第一种方法中，幼苗转移到Styrofoam浮盘中。让这些植物在100ppm肥水(Pete’s Professional)中生长，直到根开始从盘底出现时为止。然后使盘漂浮在加肥料的烟碱溶液(1mM烟碱、100ppm肥料)中，持续三天。收获根和叶组织，并如上所述提取和分析生物碱。计算根和叶的烟碱含量以及叶与根烟碱水平的比值(图8)。在第二种方法中，将植物转移到4英寸盆。在根生长至足以将土壤保持在一起之后，转移到去底的4英寸盆中。生长2周之后，用加肥料的烟碱溶液处理植物，每天两次，持续2天。在补加烟碱之前和之后收获叶子，并如前所述提取和分析生物碱。在补加之前和之后的叶烟碱含量显示在图9中。

在表达靶向PDR家族基因C22474的RNAi构建体(pALCS-TDNA-R1)的两种植物中发现烟碱水平降低：靶向MDR家族基因11099的RNAi构建体(pALCS-TDNA-R2)的一种植物显示出在饲喂之后的烟碱水平降低；并且靶向未分类基因C43677的RNAi构建体(pALCS-TDNA-R4)的一种植物也显示出叶中烟碱水平的降低。RNAi靶向位点的位置显示在图7中。

实施例11—普通烟草与耳状烟草的比较

普通烟草来源于两个不同的烟草属谱系的杂交。花烟草代表不转运生物碱的林烟草谱系成员(参见以上实施例3)。耳状烟草为其他谱系(绒毛状烟草)的非转运成员。进行RNA测序来确定在耳状烟草中缺失但在普通烟草中以高水平存在的转运相关基因。

简言之，打顶10天之后，从耳状烟草和普通烟草TN90的根样品采集根样品。由Ambry Genetics(Aliso Viejo，CA)提取RNA并完成测序。RNA测序产生了1.25亿个序列读段。生成耳状烟草的从头重叠群序列，并且使用以前从TN90获得的基因组序列供比较。将序列读段回贴到耳状烟草的从头重叠群序列，然后将剩余的未回贴读段回贴到TN90基因组，得到一系列预期将不存在于耳状烟草中的基因。基于基因本体论术语，选择与次级代谢物转运有关的基因。这些基因在各个时间点的表达水平显示在表11中。

表11.在TN90中的基因表达

*，打顶之后的小时数；ND＝未检测到

将核苷酸序列和预测的多肽序列与保藏在公共数据库中的序列进行比较。这些比较的结果在表12中示出。

表12.序列比对

应当理解的是,虽然在本文中结合许多不同的方面描述了主题方法和组合物，但前述各个方面的说明旨在展示而不是限制主题方法和组合物的范围。其他方面、优点、以及修改落在以下的权利要求书的范围之内。

序列表

<110>奥驰亚客户服务公司

<120>烟草植物及使用此类植物的方法

<130> 20210-0268W01

<150> 62/011,304

<151> 2014-06-12

<150> 61/912,752

<151> 2013-12-06

<160> 91

<170> FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> 1

<211> 796

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<220>

<221> misc_feature

<222> 793, 794, 795, 796

<223> n = A,T,C或G

<400> 1

atggaacatc aaggattaag caccaatatg aggagaatcc tcctgctgat taactgtcta 60

atactcgctg ttggtatctg tggtggtcct ctaatgatgc gtctatatta tagtagggtt 120

tggttacaaa ctgctggatg gccactcacc cttatacctc ttgccatcct atacttttat 180

cgtcgaaaaa ccgaaggctc taatgccaag ttttacttta taacaccccg aattttcatt 240

gcatcattcg tcattggcgt tgtcactggt cttgatgatt ttctctattc gtggggcggg 300

tcaaaactcc ctgtgtcaac ctcttcactt cttcttgctg ctcaacttgc cttcacggca 360

ataggtgctt tcttcatagt gaagctgaag ttcacaccct actctatcaa tgcagtggtt 420

ctgttgacag ttggtgctgt tttattgggt attcgatcta atggtgatcg accagagggt 480

gtgacaagta aagcctatat tcttggtttt atgatgacac ttctggcagc agctttatat 540

ggagtcattt tgccttgtat tgagttgatt tacttgaagg caaaacaagc tattactgct 600

acgttggtat tggagattca aatggtcatg tattttgcct tgtattgagt tgatttactt 660

gaaggcaaaa caagctatta ctgctacgtt ggtgttggag attcagatgg tcatgtgttt 720

tgctgctact gctttttgca ccgtaggaat gatcgccaat aacgattttc aggtactttt 780

ttcttccctt gtnnnn 796

<210> 2

<211> 215

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 2

Met Glu His Gln Gly Leu Ser Thr Asn Met Arg Arg Ile Leu Leu Leu

1 5 10 15

Ile Asn Cys Leu Ile Leu Ala Val Gly Ile Cys Gly Gly Pro Leu Met

20 25 30

Met Arg Leu Tyr Tyr Ser Arg Val Trp Leu Gln Thr Ala Gly Trp Pro

35 40 45

Leu Thr Leu Ile Pro Leu Ala Ile Leu Tyr Phe Tyr Arg Arg Lys Thr

50 55 60

Glu Gly Ser Asn Ala Lys Phe Tyr Phe Ile Thr Pro Arg Ile Phe Ile

65 70 75 80

Ala Ser Phe Val Ile Gly Val Val Thr Gly Leu Asp Asp Phe Leu Tyr

85 90 95

Ser Trp Gly Gly Ser Lys Leu Pro Val Ser Thr Ser Ser Leu Leu Leu

100 105 110

Ala Ala Gln Leu Ala Phe Thr Ala Ile Gly Ala Phe Phe Ile Val Lys

115 120 125

Leu Lys Phe Thr Pro Tyr Ser Ile Asn Ala Val Val Leu Leu Thr Val

130 135 140

Gly Ala Val Leu Leu Gly Ile Arg Ser Asn Gly Asp Arg Pro Glu Gly

145 150 155 160

Val Thr Ser Lys Ala Tyr Ile Leu Gly Phe Met Met Thr Leu Leu Ala

165 170 175

Ala Ala Leu Tyr Gly Val Ile Leu Pro Cys Ile Glu Leu Ile Tyr Leu

180 185 190

Lys Ala Lys Gln Ala Ile Thr Ala Thr Leu Val Leu Glu Ile Gln Met

195 200 205

Val Met Tyr Phe Ala Leu Tyr

210 215

<210> 3

<211> 975

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 3

atggaacatc aaggattaag caccactatg aggagaatcc tcctgctcat taactgttta 60

atactcgctg ttggtatctg cggtggtcct ctaatgatgc gtctatatta tgtcgaggga 120

ggttcaagag tatggtttag cagttggtta caaactgctg gatggccatt cacccttata 180

cctcttgcca tcctatactt ctatcgtcga aaaaccgaag gcgctaatgc caagtattac 240

ttgataacac cccgaatttt catcgcatca ttcatcattg gcgttgtcac tggtcttgat 300

gattttctct attcgtgggg cgggtcaaaa cttcctgtgt caacctcttc acttcttctt 360

gctgctcaac ttgccttcac ggcaataggt gctttcttca tagtgaagct gaagttcaca 420

ccctactcta tcaatgcagt ggttctgttg acagttggtg ctgttttatt aggtgttcga 480

tctaatggtg atcggccaga gggtgtgaca agtaaagcct atattcttgg ttttatgatg 540

acacttttgg cagcagcttt atatggagtc attttgcctt gtattgagtt gatttacttg 600

aaggcaaagc aagctattac tgctacatta gtattggaga ttcaaatggt catgtgtttt 660

gctgctactg ctttttgcac tgttggaatg atcgccaata acgactttca gtgcttcttt 720

gtgggtgtca ttggagtcat ttactgctct tcttctttga tgtctggggt tatgatcgca 780

gttctacttc ctgttactga ggtattagct gtagttttct ttagggaaaa tttttcaggt 840

gaaaagggcc ttgctctttt tctttctctt tggggtttcg tctcatactt ttacggagag 900

ttcagacaaa caaagaagca gaagaacaaa agtccaaaaa ctgagatgac aacaacgcat 960

accgagtctg tttaa 975

<210> 4

<211> 324

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 4

Met Glu His Gln Gly Leu Ser Thr Thr Met Arg Arg Ile Leu Leu Leu

1 5 10 15

Ile Asn Cys Leu Ile Leu Ala Val Gly Ile Cys Gly Gly Pro Leu Met

20 25 30

Met Arg Leu Tyr Tyr Val Glu Gly Gly Ser Arg Val Trp Phe Ser Ser

35 40 45

Trp Leu Gln Thr Ala Gly Trp Pro Phe Thr Leu Ile Pro Leu Ala Ile

50 55 60

Leu Tyr Phe Tyr Arg Arg Lys Thr Glu Gly Ala Asn Ala Lys Tyr Tyr

65 70 75 80

Leu Ile Thr Pro Arg Ile Phe Ile Ala Ser Phe Ile Ile Gly Val Val

85 90 95

Thr Gly Leu Asp Asp Phe Leu Tyr Ser Trp Gly Gly Ser Lys Leu Pro

100 105 110

Val Ser Thr Ser Ser Leu Leu Leu Ala Ala Gln Leu Ala Phe Thr Ala

115 120 125

Ile Gly Ala Phe Phe Ile Val Lys Leu Lys Phe Thr Pro Tyr Ser Ile

130 135 140

Asn Ala Val Val Leu Leu Thr Val Gly Ala Val Leu Leu Gly Val Arg

145 150 155 160

Ser Asn Gly Asp Arg Pro Glu Gly Val Thr Ser Lys Ala Tyr Ile Leu

165 170 175

Gly Phe Met Met Thr Leu Leu Ala Ala Ala Leu Tyr Gly Val Ile Leu

180 185 190

Pro Cys Ile Glu Leu Ile Tyr Leu Lys Ala Lys Gln Ala Ile Thr Ala

195 200 205

Thr Leu Val Leu Glu Ile Gln Met Val Met Cys Phe Ala Ala Thr Ala

210 215 220

Phe Cys Thr Val Gly Met Ile Ala Asn Asn Asp Phe Gln Cys Phe Phe

225 230 235 240

Val Gly Val Ile Gly Val Ile Tyr Cys Ser Ser Ser Leu Met Ser Gly

245 250 255

Val Met Ile Ala Val Leu Leu Pro Val Thr Glu Val Leu Ala Val Val

260 265 270

Phe Phe Arg Glu Asn Phe Ser Gly Glu Lys Gly Leu Ala Leu Phe Leu

275 280 285

Ser Leu Trp Gly Phe Val Ser Tyr Phe Tyr Gly Glu Phe Arg Gln Thr

290 295 300

Lys Lys Gln Lys Asn Lys Ser Pro Lys Thr Glu Met Thr Thr Thr His

305 310 315 320

Thr Glu Ser Val

<210> 5

<211> 1160

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 5

atggaagata aaggattaag caccaatatg aggagaatcc tcctactgat taactgtcta 60

atactcgctg ttggtatttg tggtggccct ctaatgatgc gtctatatta tgtcgaagga 120

ggtatggttg catgaggaga atactcctgt tggttaactg tctaatactc gctgttggtg 180

tttgtggtgg tcctcttatg atgcgcctat attatgtcga aggaggttca agagtatggt 240

tcagtagttg gttacaaact gctggatggc cactcaccct tatacctctt gccatcctat 300

acttctatcg tcgaaaaacc gaaggctcta atgccaagtt ttactttata acaccccgaa 360

ttttcattgc atcattcatc attggcgttg tcactggtgt tgatgatttt ctctattcgt 420

ggggcgggtc aaaactccct gtgtcaacct cttcacttct tcttgctgct caacttgcct 480

tcacggcagt aggtgctttc ttcatagtaa agttaaagtt cacaccctac tccatcaatg 540

cagtgatttt gttgacagtt ggtgctgttt tattgggtgt tcgatctaat ggtgatcgac 600

cagaaggtgt gacaagtaaa gcctatattc ttggttttat gatgacactt ctggcagcag 660

ctttgtatgg agtcattttg ccttgtattg agttgattta cttgaaggca aaacaagcta 720

ttactgctac gttggtgttg gagattcaga tggtcatgtg ttttgctgct actgcttttt 780

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gatattatac agtgatagta tggactgcca ttatttggca atgcttcttt gtgggtgtta 900

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ttgctttatt cctttctctt tggggtttcg tctcatactt ttacggagag ttcagacaaa 1080

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<210> 6

<211> 337

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 6

Met Arg Arg Ile Leu Leu Leu Val Asn Cys Leu Ile Leu Ala Val Gly

1 5 10 15

Val Cys Gly Gly Pro Leu Met Met Arg Leu Tyr Tyr Val Glu Gly Gly

20 25 30

Ser Arg Val Trp Phe Ser Ser Trp Leu Gln Thr Ala Gly Trp Pro Leu

35 40 45

Thr Leu Ile Pro Leu Ala Ile Leu Tyr Phe Tyr Arg Arg Lys Thr Glu

50 55 60

Gly Ser Asn Ala Lys Phe Tyr Phe Ile Thr Pro Arg Ile Phe Ile Ala

65 70 75 80

Ser Phe Ile Ile Gly Val Val Thr Gly Val Asp Asp Phe Leu Tyr Ser

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Trp Gly Gly Ser Lys Leu Pro Val Ser Thr Ser Ser Leu Leu Leu Ala

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Ala Gln Leu Ala Phe Thr Ala Val Gly Ala Phe Phe Ile Val Lys Leu

115 120 125

Lys Phe Thr Pro Tyr Ser Ile Asn Ala Val Ile Leu Leu Thr Val Gly

130 135 140

Ala Val Leu Leu Gly Val Arg Ser Asn Gly Asp Arg Pro Glu Gly Val

145 150 155 160

Thr Ser Lys Ala Tyr Ile Leu Gly Phe Met Met Thr Leu Leu Ala Ala

165 170 175

Ala Leu Tyr Gly Val Ile Leu Pro Cys Ile Glu Leu Ile Tyr Leu Lys

180 185 190

Ala Lys Gln Ala Ile Thr Ala Thr Leu Val Leu Glu Ile Gln Met Val

195 200 205

Met Cys Phe Ala Ala Thr Ala Phe Cys Thr Val Gly Met Ile Ala Ile

210 215 220

Ser Arg Glu Ala Lys Gln Phe Asn Leu Gly Glu Ala Arg Tyr Tyr Thr

225 230 235 240

Val Ile Val Trp Thr Ala Ile Ile Trp Gln Cys Phe Phe Val Gly Val

245 250 255

Ile Gly Val Ile Tyr Cys Ser Ser Ser Leu Met Ser Gly Val Met Ile

260 265 270

Ala Val Leu Leu Pro Val Thr Glu Val Leu Ala Val Val Phe Phe Arg

275 280 285

Glu Lys Phe Ser Gly Glu Lys Gly Leu Ala Leu Phe Leu Ser Leu Trp

290 295 300

Gly Phe Val Ser Tyr Phe Tyr Gly Glu Phe Arg Gln Thr Lys Lys Gln

305 310 315 320

Lys Asn Lys Ser Pro Glu Thr Glu Met Thr Met Met His Thr Glu Ser

325 330 335

Val

<210> 7

<211> 1223

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 7

ccttcggaga agaaaagcat ttcagcctga gtaacagaat actccaattt agtatccaaa 60

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gctgattagc tgcttaatac tcgctgttgg catatgtggt ggtcctctaa tgatgcgtct 180

atattatgtc gagggaggtt caagaatatg gcttagcagt tggttacaaa ctggtggatg 240

gccactcacc cttatacctc ttgccatcct atactattat cgtcgaaaaa ccgaaggctc 300

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<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

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Met Glu His Pro Gly Leu Ser Thr Asn Met Arg Arg Ile Leu Leu Leu

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Ile Ser Cys Leu Ile Leu Ala Val Gly Ile Cys Gly Gly Pro Leu Met

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Met Arg Leu Tyr Tyr Val Glu Gly Gly Ser Arg Ile Trp Leu Ser Ser

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Trp Leu Gln Thr Gly Gly Trp Pro Leu Thr Leu Ile Pro Leu Ala Ile

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Leu Tyr Tyr Tyr Arg Arg Lys Thr Glu Gly Ser Asn Ala Lys Phe Tyr

65 70 75 80

Leu Met Thr Pro Arg Ile Phe Ile Ala Ser Phe Val Ile Gly Val Ala

85 90 95

Thr Gly Leu Asp Asp Phe Leu Tyr Ser Trp Gly Gly Ser Lys Leu Pro

100 105 110

Val Ser Thr Ser Ser Leu Leu Leu Ala Ala Gln Leu Ala Phe Thr Ala

115 120 125

Val Gly Gly Ser Lys Leu Pro Val Ser Thr Ser Ser Leu Leu Leu Ala

130 135 140

Ala Gln Leu Ala Phe Thr Ala Val Gly Ala Phe Phe Ile Val Lys Leu

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Lys Leu Ser Pro Phe Ser Ile Asn Ala Val Val Leu Leu Thr Val Gly

165 170 175

Ala Val Leu Leu Gly Ile Arg Ser Asn Gly Asp Arg Pro Glu Gly Val

180 185 190

Thr Ser Lys Glu Tyr Ile Ile Gly Phe Met Met Thr Leu Leu Ala Ala

195 200 205

Ala Leu Tyr Gly Val Ile Leu Pro Cys Ile Glu Leu Ile Tyr Met Lys

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Ala Lys Gln Ala Ile Thr Ser Thr Leu Val Leu Glu Ile Gln Met Ile

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Met Cys Phe Ala Ala Thr Ala Phe Cys Thr Val Gly Met Ile Ala Asn

245 250 255

Lys Asp Phe Gln Ala Met Ser Arg Glu Ala Lys Gln Phe Asn Leu Gly

260 265 270

Glu Ala Arg Tyr Tyr Thr Val Ile Val Cys Thr Ala Ala Ile Trp Gln

275 280 285

Cys Phe Phe Val Gly Ile Ile Gly Val Ile Tyr Cys Ser Ser Ser Leu

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Met Ser Gly Val Met Ile Ala Val Leu Leu Pro Val Thr Glu Val Leu

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Ala Val Ile Phe Phe Lys Glu Asn Phe Ser Gly Glu Lys Gly Leu Ala

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Leu Phe Leu Ser Leu Trp Gly Phe Val Ser Tyr Phe Tyr Gly Glu Phe

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<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 9

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tcattagttt catttcctat ttctgttgtt ctcttcattg ttgccattaa aggttcgacc 600

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ctcctggata aatccagtgt gagtggcttt gcttcagctt ctctaatatc gaaagccttt 720

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gttccttcac tttccccact gcatagagca gagaaaatgt ctcaactttt cgaaagaaat 840

tggcctaaac ctgaagaaat atcaaagcat cctgtccgaa caacattgct gcgttgcttt 900

tggaaggaag ttatttttac tgccattctt gcagtaatta gggtatgtgt tatgtatgta 960

gggccaacac tcatacaaag atttgttgat tacacagcag gaaagaggac atctccttat 1020

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ccttatgaag gatactacct tataggaact ctcctaatag ccaaatttgt ggaagttcta 1140

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gtgttcactg caacatctct cttcaagatg ttgcaggaac cgatcagggc tttccctcaa 1800

tccatgatct cactttcaca agcaatgata tctcttgata gattggacaa atatatgatg 1860

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atgcaggtga aagatggagc tttttgctgg gatgatgaaa acagtaaaga agaattgaaa 1980

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gattcacaga cagatgcagt gattcagaaa atcatccgcg aggactttgc ggcctgtact 4440

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gatgcaggaa tagcaaaaga gtttgacaaa ccatctcgtt tgcttgaaag gccttcactt 4560

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<210> 10

<211> 1535

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 10

Met Cys Cys Phe Cys Gly Lys Ile Phe Pro Pro Phe Ile Phe Leu Ser

1 5 10 15

Pro Cys Pro Gln Arg Thr Leu Leu Ser Ser Ile Asp Val Leu Leu Leu

20 25 30

Leu Thr Phe Ile Val Phe Ala Val Gln Lys Leu Tyr Ser Lys Leu Arg

35 40 45

Ser Asn Glu His Ser Thr Ser Ser Ile Asp Lys Pro Leu Ile Ala His

50 55 60

Asn Arg Thr Ser Val Arg Thr Asn Leu Trp Phe Lys Leu Ser Leu Ile

65 70 75 80

Leu Ser Ala Ile Leu Ala Leu Ser Ser Ile Val Leu Cys Ile Leu Val

85 90 95

Ile Val Gly Asn Ser Gln Ser Pro Trp Lys Val Ile Asp Gly Leu Tyr

100 105 110

Trp Leu Phe Gln Ala Ile Thr His Val Val Ile Thr Ile Leu Ile Val

115 120 125

His Glu Lys Arg Phe His Ala Ile Ser His Pro Leu Ser Leu Arg Val

130 135 140

Phe Trp Ile Ala Asn Phe Val Val Met Ser Leu Phe Phe Gly Cys Gly

145 150 155 160

Val Thr Arg Leu Val Ser Leu Lys Glu Ile Asp Pro Asn Leu Arg Met

165 170 175

Asp Asp Ile Ser Ser Leu Val Ser Phe Pro Ile Ser Val Val Leu Phe

180 185 190

Ile Val Ala Ile Lys Gly Ser Thr Gly Val Ala Val Ile Ser Asp Ser

195 200 205

Glu Ser His Leu Ser Asp Glu Thr Asn Gly Tyr Glu Leu Leu Asp Lys

210 215 220

Ser Ser Val Ser Gly Phe Ala Ser Ala Ser Leu Ile Ser Lys Ala Phe

225 230 235 240

Trp Ile Trp Met Asn Pro Leu Leu Gln Lys Gly Tyr Lys Ser Pro Leu

245 250 255

Lys Ile Asp Glu Val Pro Ser Leu Ser Pro Leu His Arg Ala Glu Lys

260 265 270

Met Ser Gln Leu Phe Glu Arg Asn Trp Pro Lys Pro Glu Glu Ile Ser

275 280 285

Lys His Pro Val Arg Thr Thr Leu Leu Arg Cys Phe Trp Lys Glu Val

290 295 300

Ile Phe Thr Ala Ile Leu Ala Val Ile Arg Val Cys Val Met Tyr Val

305 310 315 320

Gly Pro Thr Leu Ile Gln Arg Phe Val Asp Tyr Thr Ala Gly Lys Arg

325 330 335

Thr Ser Pro Tyr Glu Gly Tyr Tyr Leu Ile Gly Thr Leu Leu Ile Ala

340 345 350

Lys Phe Val Glu Val Arg Thr Ser Pro Tyr Glu Gly Tyr Tyr Leu Ile

355 360 365

Gly Thr Leu Leu Ile Ala Lys Phe Val Glu Val Leu Thr Ser His Gln

370 375 380

Phe Asn Phe Asn Ser Gln Lys Leu Gly Met Leu Ile Arg Ala Thr Leu

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Leu Thr Ser Leu Tyr Lys Lys Gly Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Arg

405 410 415

Gln Ala His Gly Val Gly Gln Ile Val Asn Tyr Met Ala Val Asp Ala

420 425 430

Gln Gln Leu Ser Asp Met Met Leu Gln Leu His Ser Ile Trp Leu Met

435 440 445

Pro Leu Gln Val Ser Val Ala Leu Gly Ile Leu Tyr Thr Tyr Leu Gly

450 455 460

Ala Ser Thr Val Val Thr Leu Ala Gly Leu Ala Ala Val Met Val Phe

465 470 475 480

Val Val Phe Gly Thr Lys Arg Asn Asn Arg Phe Gln Phe Asn Ile Met

485 490 495

Lys Asn Arg Asp Ser Arg Met Lys Ala Thr Asn Glu Met Leu Asn Tyr

500 505 510

Met Arg Val Ile Lys Phe Gln Ala Trp Glu Glu His Phe Asn Lys Arg

515 520 525

Ile Glu Ser Phe Arg Glu Ser Glu Tyr Gly Trp Leu Ser Lys Phe Leu

530 535 540

Tyr Ser Ile Ala Gly Asn Ile Ile Val Leu Trp Ser Thr Pro Leu Leu

545 550 555 560

Val Ala Thr Leu Thr Phe Gly Ser Ala Ile Leu Leu Gly Ile Pro Leu

565 570 575

Gly Ala Gly Thr Val Phe Thr Ala Thr Ser Leu Phe Lys Met Leu Gln

580 585 590

Glu Pro Ile Arg Ala Phe Pro Gln Ser Met Ile Ser Leu Ser Gln Ala

595 600 605

Met Ile Ser Leu Asp Arg Leu Asp Lys Tyr Met Met Ser Lys Glu Leu

610 615 620

Val Asp Lys Ala Val Glu Arg Leu Glu Gly Cys Gly Gly Thr Ile Ala

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Met Gln Val Lys Asp Gly Ala Phe Cys Trp Asp Asp Glu Asn Ser Lys

645 650 655

Glu Glu Leu Lys Asn Val Asn Phe Glu Ile Arg Lys Gly Glu Leu Ala

660 665 670

Ala Val Val Gly Thr Val Gly Ala Gly Lys Ser Ser Leu Leu Ala Ser

675 680 685

Val Leu Gly Glu Met His Lys Leu Ser Gly Gln Val Thr Ile Cys Gly

690 695 700

Ser Thr Ala Tyr Val Ala Gln Thr Ser Trp Ile Gln Asn Gly Thr Ile

705 710 715 720

Gln Glu Asn Ile Leu Phe Gly Met Pro Met Asn Arg Asp Arg Tyr Lys

725 730 735

Glu Val Ile Arg Val Cys Cys Leu Glu Lys Asp Leu Glu Ile Met Glu

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Phe Gly Asp Gln Thr Glu Ile Gly Glu Arg Gly Ile Asn Leu Ser Gly

755 760 765

Gly Gln Lys Gln Arg Ile Gln Leu Ala Arg Ala Val Tyr Gln Asp Cys

770 775 780

Asp Ile Tyr Leu Leu Asp Asp Val Phe Ser Ala Val Asp Ala His Thr

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Gly Ser Glu Ile Phe Lys Glu Cys Val Arg Gly Ile Leu Lys Asp Lys

805 810 815

Thr Ile Leu Leu Val Thr His Gln Val Asp Phe Leu His Asn Val Asp

820 825 830

Leu Ile Leu Val Met Arg Asp Gly Met Ile Val Gln Ser Gly Lys Tyr

835 840 845

Asn Glu Ile Leu Glu Ala Gly Met Asp Phe Lys Glu Leu Val Ala Ala

850 855 860

His Glu Thr Ser Leu Glu Leu Val Asp Val Glu Thr Thr Lys Glu Ser

865 870 875 880

Asn Ala Ser Leu Glu Glu Ser Lys Ser Ser Arg Arg Leu Ser Lys Glu

885 890 895

Glu Asn Gly Asp Asp Lys Ser Gln Gln Ser Thr Ser Asp Arg Gly Asp

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Ser Lys Leu Ile Lys Glu Glu Glu Arg Glu Thr Gly Lys Val Ser Pro

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Arg Val Tyr Lys Leu Tyr Ile Thr Glu Ala Phe Gly Trp Trp Gly Val

930 935 940

Val Leu Val Ile Leu Phe Ser Phe Leu Trp Gln Ser Ser Leu Met Ala

945 950 955 960

Ser Asp Tyr Trp Leu Ala Tyr Glu Thr Ser Ala Asp Arg Ala Met Ser

965 970 975

Phe Asn Pro Ser Leu Phe Ile Gly Ile Tyr Gly Val Ile Ala Val Val

980 985 990

Ser Ser Leu Leu Ile Val Ile Arg Met Tyr Phe Val Thr Leu Met Gly

995 1000 1005

Leu Lys Thr Ala Gln Ile Phe Phe Gly Gln Ile Leu Tyr Ser Ile Leu

1010 1015 1020

His Ala Pro Met Ser Phe Phe Asp Thr Thr Pro Ser Gly Arg Ile Leu

1025 1030 1035 1040

Ser Arg Ala Ser Asn Asp Gln Thr Asn Ile Asp Val Phe Leu Pro Phe

1045 1050 1055

Phe Met Asn Leu Thr Leu Ala Met Phe Ile Thr Leu Leu Gly Ile Ile

1060 1065 1070

Ile Ile Thr Cys Gln Tyr Ser Trp Pro Thr Val Leu Leu Leu Ile Pro

1075 1080 1085

Leu Gly Trp Leu Asn Ile Trp Tyr Arg Gly Tyr Tyr Leu Ala Thr Ser

1090 1095 1100

Arg Glu Leu Thr Arg Leu Asp Ser Ile Thr Lys Ala Pro Val Ile His

1105 1110 1115 1120

His Phe Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Met Thr Ile Arg Cys Phe Arg

1125 1130 1135

Lys Gln Glu Met Phe Cys Asn Glu Asn Val Asn Arg Val Asn Ser Asn

1140 1145 1150

Leu Arg Met Asp Phe His Asn Asn Gly Ser Asn Glu Trp Leu Gly Phe

1155 1160 1165

Arg Leu Glu Leu Met Gly Ser Leu Leu Leu Cys Val Ser Ala Met Phe

1170 1175 1180

Met Ile Val Leu Pro Ser Ser Ile Ile Lys Pro Glu Asn Val Gly Leu

1185 1190 1195 1200

Ser Leu Ser Tyr Gly Leu Ser Leu Asn Ser Val Leu Phe Trp Ser Ile

1205 1210 1215

Phe Val Ser Cys Phe Val Glu Asn Lys Met Val Ser Val Glu Arg Leu

1220 1225 1230

Lys Gln Phe Ser Glu Ile Pro Ser Glu Ala Glu Trp Arg Lys Met Asp

1235 1240 1245

Phe Leu Pro Pro Ser Ser Trp Pro Ser Arg Gly Asn Val Glu Leu Glu

1250 1255 1260

Asn Val Gln Val Arg Tyr Arg Pro Asn Thr Pro Leu Val Leu Lys Gly

1265 1270 1275 1280

Val Thr Leu Ser Ile Arg Gly Gly Glu Lys Ile Gly Val Val Gly Arg

1285 1290 1295

Thr Gly Gly Gly Lys Ser Thr Leu Ile Gln Val Phe Phe Arg Leu Val

1300 1305 1310

Glu Pro Ala Ala Gly Arg Ile Ile Ile Asp Asp Val Asp Ile Ser Arg

1315 1320 1325

Leu Gly Leu His Asp Leu Arg Ser Arg Phe Gly Ile Ile Pro Gln Glu

1330 1335 1340

Pro Val Leu Phe Glu Gly Thr Val Arg Ser Asn Ile Asp Pro Ile Gly

1345 1350 1355 1360

Gln Tyr Ser Asp Asp Glu Ile Trp Lys Ser Leu Glu Arg Cys Gln Leu

1365 1370 1375

Lys Asp Val Val Ser Leu Lys Pro Glu Lys Leu Asp Ser Pro Gly Thr

1380 1385 1390

Phe Ser Phe Ser Thr Ala Ser Leu Leu Ser Tyr Thr Ile Asn Phe Leu

1395 1400 1405

Cys Leu Ala Ile Tyr Ile Leu Asn Thr Val Ile Gly Lys Ile Val Val

1410 1415 1420

Asp Asn Gly Asp Asn Trp Ser Val Gly Gln Arg Gln Leu Leu Cys Leu

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Gly Arg Val Met Leu Lys Arg Ser Arg Leu Leu Phe Met Asp Glu Ala

1445 1450 1455

Thr Ala Ser Val Asp Ser Gln Thr Asp Ala Val Ile Gln Lys Ile Ile

1460 1465 1470

Arg Glu Asp Phe Ala Ala Cys Thr Ile Ile Ser Ile Ala His Arg Ile

1475 1480 1485

Pro Thr Val Met Asp Cys Asp Arg Val Leu Val Ile Asp Ala Gly Ile

1490 1495 1500

Ala Lys Glu Phe Asp Lys Pro Ser Arg Leu Leu Glu Arg Pro Ser Leu

1505 1510 1515 1520

Phe Gly Ala Leu Val Gln Glu Tyr Ala Asn Arg Ser Ser Glu Leu

1525 1530 1535

<210> 11

<211> 3684

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 11

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tgttggacaa gaacagcaga gaggcaagct tcaaggctac gaataagata cttgaaagca 360

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ttcatcagtc agttgcctca gggttatgat acccaggtgg gggagagagg tgtacaaatg 1380

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<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

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Met Ser Thr Thr Thr Lys Ser Lys Ala Met Ile Gln Lys Lys Ser Tyr

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Leu Met Ile Leu Gly Phe Phe Gly Ala Val Cys Asp Gly Phe Ser Met

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Ala Leu Val Leu Val Phe Leu Ala Cys Gly Gln Trp Val Ala Cys Phe

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Leu Glu Gly Phe Cys Trp Thr Arg Thr Ala Glu Arg Gln Ala Ser Arg

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Leu Arg Ile Arg Tyr Leu Lys Ala Val Leu Arg Gln Asp Val Gly Tyr

115 120 125

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130 135 140

Ser Asp Ser Leu Val Ile Gln Asp Cys Ile Ser Glu Lys Val Pro Val

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Phe Leu Met Asn Val Ala Ala Phe Ile Gly Ser Tyr Val Val Gly Phe

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Leu Met Leu Trp Arg Leu Ala Leu Val Gly Phe Pro Phe Val Ile Phe

180 185 190

Leu Val Ile Pro Gly Leu Met Tyr Gly Arg Ala Leu Met Gly Ile Val

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Arg Lys Ile Arg Asp Glu Tyr Gly Lys Ala Gly Thr Val Val Glu Gln

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Ala Ile Ser Ser Val Arg Thr Val Tyr Ser Phe Val Gly Glu Asn Lys

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Thr Ile Ala Glu Tyr Ser Val Ala Leu Gln Gly Thr Val Glu Leu Gly

245 250 255

Leu Lys Gln Gly Leu Ala Lys Gly Leu Ala Ile Gly Ser Asn Gly Ile

260 265 270

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Met Tyr Asn Gly Ala His Gly Gly Thr Val Phe Ala Val Gly Ala Ala

290 295 300

Ile Ala Ile Gly Gly Leu Ser Leu Gly Ser Gly Leu Ser Asn Val Lys

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Tyr Phe Ser Glu Ala Ser Ala Ala Gly Glu Arg Val Met Glu Val Ile

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Lys Arg Val Pro Lys Ile Asp Ser Asp Asn Met Glu Gly Lys Thr Val

340 345 350

Ala Leu Val Gly Gly Ser Gly Ser Gly Lys Ser Thr Val Val Ala Leu

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Leu Gln Arg Phe Tyr Glu Pro Leu Ala Gly Glu Ile Phe Val Asp Gly

370 375 380

Val Ala Ile Glu Lys Leu Gln Leu Lys Trp Leu Arg Ser Gln Met Gly

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Leu Val Ser Gln Glu Pro Ala Leu Phe Ala Thr Thr Ile Lys Glu Asn

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Ile Leu Phe Gly Lys Glu Asp Ala Ser Met Glu Gln Val Ile Glu Ala

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Ala Lys Ala Ser Asn Ala His Asn Phe Ile Ser Gln Leu Pro Gln Gly

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Tyr Asp Thr Gln Val Gly Glu Arg Gly Val Gln Met Ser Gly Gly Gln

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Lys Gln Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Thr Ile Lys Ser Pro Arg Ile

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Leu Leu Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Ser Glu Ser Glu Arg

485 490 495

Val Val Gln Glu Ala Leu Asp Met Ala Ala Val Gly Arg Thr Thr Ile

500 505 510

Ile Ile Ala His Arg Leu Ser Thr Ile Arg Asn Ala Asp Leu Ile Ala

515 520 525

Val Val Gln Asp Gly Gln Val Lys Glu Ile Gly Ser His Asp Asp Leu

530 535 540

Ile Glu Glu Glu Asn Gly Leu Tyr Thr Ser Leu Val Arg Leu Gln Gln

545 550 555 560

Thr Glu Lys Pro Ser Asp Glu Phe Tyr Ile Ala Pro Thr Asn Lys Asn

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Ser Ser Ala Asn Ser Ala Ala Gln Ser Arg Arg Val Asp Gln Asn Ala

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Thr Ile Ser Ser Thr Thr Glu Gln Leu Phe Pro Val Pro Ser Phe Lys

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Met Gly Glu Gln Leu Thr Lys Arg Val Arg Glu Arg Met Leu Ser Lys

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Met Leu Thr Phe Glu Ile Gly Trp Tyr Asp Lys Asp Glu Asn Ser Thr

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Val Met Ile Ala Val Gln Pro Leu Ile Ile Val Cys Tyr Tyr Cys Lys

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Ile Gly Leu Gly Thr Ser Asn Ser Leu Met Thr Cys Thr Trp Ala Leu

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Asp Ile Arg Ser Tyr His Leu Arg Ser Leu Arg Lys Gln Ile Ala Leu

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Lys Gln Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Ile Leu Lys Asn Pro Gly Val

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Leu Leu Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Ser Gln Ser Glu Lys

1140 1145 1150

Val Val Gln Asp Ala Leu Glu Arg Val Met Val Gly Arg Thr Ser Val

1155 1160 1165

Val Val Ala His Arg Leu Ser Thr Ile Gln Asn Cys Asp Thr Ile Ala

1170 1175 1180

Val Leu Asp Lys Gly Lys Ile Val Glu Lys Gly Thr His Ser Ser Leu

1185 1190 1195 1200

Leu Ala Lys Gly Pro Ser Gly Val Tyr Tyr Ser Leu Val Ser Leu Gln

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<210> 13

<211> 4023

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

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<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 14

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1 5 10 15

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Lys Val Ser Ile Tyr Tyr Val Tyr Leu Ala Ile Gly Ser Gly Ile Ala

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Lys Phe Ile Gln Phe Leu Ser Thr Phe Val Gly Gly Phe Ile Ile Ala

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Leu Ala Ile Ser Lys Tyr Asp Ser Lys Leu Lys Ile Ala Cys Ala Ala

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<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 15

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gtttgctggt atatgttagc catcttttta atagcttggg ttatggtaag actcaacaga 300

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tggcagtcat ggttgtggcc tttatggaag gttactgctg gagtaaaaca agtgagcggc 420

aagtgctaaa aattcggtac aagtatttgg aagccattct taggcaagaa gttggtttct 480

ttgattctca agaagctacc acatcggaaa tcactaacag catttcgaaa gacacttgtc 540

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cacttattct cctcataatc ccaggtttga tctatgggaa atatctactc catttgtctg 720

aaaagtcgtt caaggaatat gggaaagcaa atgctattgt atggcaggct cttagctcca 780

ttaaaactat atattcattt actggtgaga agagcgtgat tgaaaggtat tcttcgattc 840

ttgatcgaac cataatgctg ggaatgaagc aaggaattgc aaaaggtctt gctgttggaa 900

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tgcacaaagg agaaagtggt ggcagaattt atgcagctgg agtttctttt gtcttgggtg 1020

gactatcgct tgggatggca ctgcctgagg tgaaatactt gacagaagct tcagttgctg 1080

cctcaagaat atttgccagg attgatcgcg ttccagaaat tgatggggaa cacacaaggg 1140

gactcgttct agaaaatatt agaggagaag ttgaattcaa gaatgtaaac ttcacatatc 1200

cttgtcggcc agatagcgtt gtgctcaagg aattcaatct taaaattgaa gcaggaaaaa 1260

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ggttttatga tactaacgtt ggagctatat gtattgatgg tgtagatata aagtcattgc 1380

agttgaaatg gttgagaggg cagatggggt tagtaagtca agaacatgca ttatttggaa 1440

catctattaa gaagaatatt atgttaggga aaattgacgc aagcatggat gaagttgtgg 1500

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cactggttgt tgcccacaag ttatcaacag ttagaaatgc agacctcatt gcaatagtga 1800

gtagtggttg catcactgaa ctagggtcac acaatgagct tatcgagaaa gatggacact 1860

atggaagaat ggcaaaactt caaagacaat ttagctctgt tgatcaagaa caaagcgcca 1920

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atcctccccc ttccttctct cggctccttt tactaaactt acctgaatgg aagcaaggaa 2100

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<210> 16

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<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 16

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260 265 270

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275 280 285

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<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 17

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130 135 140

Lys Lys Thr Trp Thr Gly Trp Tyr Val Ile Met Asp

145 150 155

<210> 19

<211> 1304

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 19

atgccacctt cacctgaata tgtaacacaa aaatggccag catcaagcct catgcaaaat 60

gccgtttcag agctaaaatt gcaaagagga atactacttc ctttgatggc tatgaacttc 120

acatggtttg caaaaacagc catcacaact gcatttcttg gtaggcttgg agatctttat 180

ttagctggag gaacacttgg ttttactttt gcaaatgtaa ccggattttc agtactaaat 240

ggcctttgtg gtgcaatgga gcctatttgt ggacaagctt ttggagccaa gaattacaaa 300

cttcttcata agacccttgt tatggctact ttattattac tactaatcag cttgcctatt 360

tcatttttgt ggctaaatat tgatacgatc ctcattcaat ttggccaaca agaagatatt 420

tcaaatatgg ccaaaaagta tctcccatgt tactttcaag aactaagggt ataataggag 480

tttctatggc atattggata acagattttt tgatcatgat atttttgtct atttatgtag 540

tgatagcaga gaataaaaag ggaggaaaat ggaaagaagg aggatggtgg gatcaaagaa 600

ttcgcgattg gatcagacta ctaaaattat gtggaccatg ttgtcttact acttgtcttg 660

aatggtggtg ttatgaaatc ttggttttgt taacaggaca tctcccaaat gctaaacaag 720

caattggagt tatagccatt gtgttaaatt ttgattattt gctgttttct gttatgcttt 780

cgttatcaac gtgtgcatct attcgtgtgt ctaatgagct tggtgcagat agtcctggtc 840

ctgcttatcg cgcagcctat gtatcgttag ctacgagcat tgtttcaggt tttcttggtg 900

gtgctgttat ggctggtgca agaggaattt gggggccatt gtttagtcat aataaaggga 960

ttataaatgg cgttaagaaa atgatgttgt taatggcatt acttgaagtg gttaattttc 1020

cattagcagt ttgtggtgga attgtacgtg gaacggctag gccatggcta ggaatgtatg 1080

ctaatattag tggattttat ctgttagctt tgccattagg tgtggttttg gctttcaaga 1140

ttcatcttgg tcttactgga ttgttgacag ggtttgtggt tggagttgct gtttgtttgg 1200

ccttgttgtt ggtgtttatt gctcggattg attgggttca agaagctaag aaagcacaag 1260

tttttgcttg taatcttgaa gaaataggta atgatgataa ttga 1304

<210> 20

<400> 20

000

<210> 21

<211> 2790

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 21

gatcagtctg tacaatcatt ggtttcaccc ctcaggcgca ttagctaacg agttttgctc 60

gaaaagtgat caaaaccagg gagtcatggc tgaaggtggc aatgtagctt gtactgagag 120

aaaatgcaag ataccactct ttgttttctt tgaagatatt aggcatgtgt ttaaattcga 180

cgatcttgga atggaaatcc taagtatcgc gttccctgca gctctagcat tagctgctga 240

tcccattgct tctctcattg atactgcatt cattggtcat ttaggttcgg tggaaatcgc 300

tgcagtagga gtatcaattg ccatatttaa tcaagcctct aaagtcacaa tattcccttt 360

agttaacata acaacttctt tcgttgctga ggaagacact gttagaagaa ttaaagaaaa 420

agcagcaatt gctgacttgg agaaaggttc agaggagaag aatgatacaa aactgccagt 480

aactgatgat actgaccatg agaagctgga aaaatgtgca tccacaaaag ttgaaaccaa 540

agagtctgca ccagcaccag cacctgcagc agaattcaag acaacagcat gcaagtctcc 600

tgataatcaa agtaaaggca aagtcaaacg tgtgaagcga catattccat ctgcttcaac 660

tgcaattctt atgggctgca ttcttggcat tttgcaaaca atcttcctta tatttctcgc 720

aaaaccaatt ctaagcttaa tgggtgtgaa atctggatct gctatgcttt ccccagcaaa 780

gaagtattta atactgagag cacttggtgc tcctgcagtc ctcctttctc tggctatgca 840

aggcgttttc cgtggtttta aggatacaag aactccttta tatgctactg ttgctggaga 900

tttgacaaat atagttttgg acccaatctt tatctttgtt ttccgttggg gtgttagtgg 960

tgctgccatt gctcatgtgc tttctcagta cttgatatca attattctct tatgcaaact 1020

gatgacagaa gtcgaattat tacctcctag tgcaaaagat ctgcagttca gcaaatttct 1080

taaaaatgga ttttggttac tagcaagggt gatagctgtc acattttgtg tgacgttggc 1140

tgcgtcattg gctgcacgac taggcacaac accgatggct gcatttcaag tgtgcttaca 1200

gatctggtta acatcatctc tacttgctga tggattggct gtagcaggac aggcaatcct 1260

tgctagttct tttgctgaga aagactacca gaaggcaaag gctgcaggag tacgagtcct 1320

acagatggga tttgtgttgg gactaggact tgctttggtt gttggaattg gtctatattt 1380

tggatcagga gttttttcaa aggacaaaaa tgttatccgt ctcataacca ttgccatccc 1440

gtttgtcgct ggtacacaac caatcaactc attggcgttt gttttagatg gtgtcaactt 1500

tggagcaaat gattttgcat actctgcata ttccatggtt ttggttggtg cactaacagt 1560

aacctgtgag tttgtccttt ccaaaagcaa tggttacatt ggaatatgga ttgctttaac 1620

catattcatg gccctgcgta ccattgccgg tttatggagg atggggacag gaaccggacc 1680

ctggcgtttc ctgcggattc catcatcgtc tccagaagcc aagtcataga gttcctagca 1740

cttctgtggc tatttatatc atacattttc catctttctt tcctttgtac ttctcccttt 1800

tttcttttgc ttttgttgtt cttggtgatg cgtacagggt ggaaattgta cacactttct 1860

actcatatgt ttgtataata gtctgacttc agtgtcatta tcataagatt ttgtagctat 1920

atgcagatat atacatcttt gcatacgtaa actttaattg cttttatatt agctagtgcc 1980

atatcttcat gacataatgt tgtacgttta ggcatgcctg tccatcctga caacgttgca 2040

ggtaacatat tctccttcat ggtgtttatt tcgccagtac ctacatttta tgggatcgtt 2100

aagaagaaat caacagaagg ctatcaatca attccgtacg tggttgcact ctttagttca 2160

atgctttgga tttactatgc atttctcaag acaaacacga cccttatcat caccataaac 2220

tcctttggct gcattgcgga gactatttat attgctattt attttgctta tgcgacaaaa 2280

aaaacaagga tgcaaacgtt gagacttgtt ctaatgttga atttcggtgg ctttgggttg 2340

attcttttcc tcacccaaat tttatgcaaa ggagcaaaac gagctgaagt tattggatgg 2400

atttgcatgg cgttttctat tagtgtgttt gtagcacctc taagcattat ggggcgggta 2460

atacggacca aaagtgtgga gttcatgcca tttaacttgt cgttaaccct tacacttagt 2520

gctgtgataa acgccaagcc aaataatcag gcagaagaga agaaactacc cactgttgtg 2580

aagctggagg agttgcctac aaaagttaat tctgaggttt atccagttag tttaccatcc 2640

atgggcagtg aaaacggaga ggctaaagat ggtaaacatt ttgaagatgc ccaaatcaaa 2700

tctcctatta tttacctgga aattaaccta actactgata caccgaattc cggtacaact 2760

tgcaagtcag taagtctagg gcaaaagtaa 2790

<210> 22

<211> 547

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 22

Met Ala Glu Gly Gly Asn Val Ala Cys Thr Glu Arg Lys Cys Lys Ile

1 5 10 15

Pro Leu Phe Val Phe Phe Glu Asp Ile Arg His Val Phe Lys Phe Asp

20 25 30

Asp Leu Gly Met Glu Ile Leu Ser Ile Ala Phe Pro Ala Ala Leu Ala

35 40 45

Leu Ala Ala Asp Pro Ile Ala Ser Leu Ile Asp Thr Ala Phe Ile Gly

50 55 60

His Leu Gly Ser Val Glu Ile Ala Ala Val Gly Val Ser Ile Ala Ile

65 70 75 80

Phe Asn Gln Ala Ser Lys Val Thr Ile Phe Pro Leu Val Asn Ile Thr

85 90 95

Thr Ser Phe Val Ala Glu Glu Asp Thr Val Arg Arg Ile Lys Glu Lys

100 105 110

Ala Ala Ile Ala Asp Leu Glu Lys Gly Ser Glu Glu Lys Asn Asp Thr

115 120 125

Lys Leu Pro Val Thr Asp Asp Thr Asp His Glu Lys Leu Glu Lys Cys

130 135 140

Ala Ser Thr Lys Val Glu Thr Lys Glu Ser Ala Pro Ala Pro Ala Pro

145 150 155 160

Ala Ala Glu Phe Lys Thr Thr Ala Cys Lys Ser Pro Asp Asn Gln Ser

165 170 175

Lys Gly Lys Val Lys Arg Val Lys Arg His Ile Pro Ser Ala Ser Thr

180 185 190

Ala Ile Leu Met Gly Cys Ile Leu Gly Ile Leu Gln Thr Ile Phe Leu

195 200 205

Ile Phe Leu Ala Lys Pro Ile Leu Ser Leu Met Gly Val Lys Ser Gly

210 215 220

Ser Ala Met Leu Ser Pro Ala Lys Lys Tyr Leu Ile Leu Arg Ala Leu

225 230 235 240

Gly Ala Pro Ala Val Leu Leu Ser Leu Ala Met Gln Gly Val Phe Arg

245 250 255

Gly Phe Lys Asp Thr Arg Thr Pro Leu Tyr Ala Thr Val Ala Gly Asp

260 265 270

Leu Thr Asn Ile Val Leu Asp Pro Ile Phe Ile Phe Val Phe Arg Trp

275 280 285

Gly Val Ser Gly Ala Ala Ile Ala His Val Leu Ser Gln Tyr Leu Ile

290 295 300

Ser Ile Ile Leu Leu Cys Lys Leu Met Thr Glu Val Glu Leu Leu Pro

305 310 315 320

Pro Ser Ala Lys Asp Leu Gln Phe Ser Lys Phe Leu Lys Asn Gly Phe

325 330 335

Trp Leu Leu Ala Arg Val Ile Ala Val Thr Phe Cys Val Thr Leu Ala

340 345 350

Ala Ser Leu Ala Ala Arg Leu Gly Thr Thr Pro Met Ala Ala Phe Gln

355 360 365

Val Cys Leu Gln Ile Trp Leu Thr Ser Ser Leu Leu Ala Asp Gly Leu

370 375 380

Ala Val Ala Gly Gln Ala Ile Leu Ala Ser Ser Phe Ala Glu Lys Asp

385 390 395 400

Tyr Gln Lys Ala Lys Ala Ala Gly Val Arg Val Leu Gln Met Gly Phe

405 410 415

Val Leu Gly Leu Gly Leu Ala Leu Val Val Gly Ile Gly Leu Tyr Phe

420 425 430

Gly Ser Gly Val Phe Ser Lys Asp Lys Asn Val Ile Arg Leu Ile Thr

435 440 445

Ile Ala Ile Pro Phe Val Ala Gly Thr Gln Pro Ile Asn Ser Leu Ala

450 455 460

Phe Val Leu Asp Gly Val Asn Phe Gly Ala Asn Asp Phe Ala Tyr Ser

465 470 475 480

Ala Tyr Ser Met Val Leu Val Gly Ala Leu Thr Val Thr Cys Glu Phe

485 490 495

Val Leu Ser Lys Ser Asn Gly Tyr Ile Gly Ile Trp Ile Ala Leu Thr

500 505 510

Ile Phe Met Ala Leu Arg Thr Ile Ala Gly Leu Trp Arg Met Gly Thr

515 520 525

Gly Thr Gly Pro Trp Arg Phe Leu Arg Ile Pro Ser Ser Ser Pro Glu

530 535 540

Ala Lys Ser

545

<210> 23

<211> 2179

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 23

ataaatatga aactatatca tctaaacaat tgtcagttgt gagtgaatgt tatgaatgag 60

aaaggtttgg ctatagtaat tgggaagaca tggtggacca aggagctgat gcggataata 120

gaggaaattg cagacttggt gactatgatg tgaaccatgg ttagaggata ggggtaaatt 180

agtggagcgg gggacaagga atctggtggt tatataattg gcagtcttgg acgtatttgc 240

tatgctgctt taatttggag aacaaagcag caaaagatta gatatggcga tggaagaggc 300

actgctggat gtgaataata ataataataa taataataat aataaggtag tgtttgggaa 360

ggaggtgaag gaggtgagtc ggatagcaat gccgatgata gtggtgacgg tgtcacagta 420

ccttttgcgc gtttcaccaa tgataatgtt gggtcatctt ggtgaacttc aactttctag 480

tgcttctatt gctacttcac tttccaatgt taccggcttc agtcttatgt tagggatggg 540

gagtgcagtg gagacactat gtgggcaggc atatggagct cacaagtatg gaaatcttgg 600

aacttttact tatggtgcaa ttatttgtct attccttgta tgcataccag tttctgttct 660

gtggatcttc acggataggc ttcttatatt gatgggccaa gatcctgaaa tcgcaactga 720

agctggaaaa tacacgattt ggctcattcc tacgctattt ccatatgcta ttcttcagtc 780

acttgtccgg tacctgcagg cacagagttt aatcctacca atgcttttga gtgctgttgt 840

atctttatgc ttccaagtgc cgatatgttg ggtttttata ttcaaattgg atttggggaa 900

cgctggagca gcaatgtcaa ttggtttatc ctattggctg aatgtgatct tgcttatgct 960

ttatgtgaag tactcatcag cttgtgcaga aactcgggct tcattctcta gagatgtttt 1020

tctgactata ggggacttct tccgctttgc tatcccatct gctgtaatgg tttgcttgga 1080

atggtggtcg tttgaactaa tcattctcct ctctggtctg ttgccaaatc cagcgctaga 1140

gacttccgtt ctatccatat gctttacaac cacttcagtg cactaccata taccttattc 1200

tttcggtgcc gctgcaagca ctcgtgtttc aaatgagctt ggagcgggga ggccacaggc 1260

cgcgaaagtt gctcttggcg ctgtgctaat tctttctgtc acagaggttg ttcttgcaag 1320

tatttctata ttcgtggtcc gccatgtatg gggctatgta tttacctatg agaaagaagt 1380

aatcacttat gtagcagaaa ttactcctgt tctttgcatc tcaatcatca tggatggcac 1440

ccaagccgta ttatcaggag ttgcaagagg aagtgggtgg cagcatattg gagcatatgt 1500

gaatcttgga gcatattatt tggttggaat tccaacggct ctattgctgg gatttgtttt 1560

gcatctaaaa ggcaaaggcc tttggattgg attggtggct ggagcaactg tgcaatctat 1620

ttcgctttcc cttatcacag gcctcaccaa ttgggaaaaa caggccattg aagcaagaca 1680

tagaatcttt agtggaaggc ctgctgttga aaatcagaat taaagagcac atgcagatgc 1740

tataacatac atatcgaaat aaaccttcaa cttgctatga tttagcgaga atcaccactc 1800

atcatagtac caattggaca attttgaaag tgatcagcct cttagatgta aatgaacaac 1860

tttggcggat caattccaga tacggggatt ttccagtttc cttaagcatg ttgtttccaa 1920

gttgaatttg ttttgctttg ctaaatcgtt tagctgcggc ttcttgtaac ttgtaacgca 1980

aatttcttgt tcgaaaatat aaacagaaat tattgattct gatggtaagc aacccccact 2040

tccaaccaag aggttgtgag ttcgagtcac cccaagagca aggtggtagt gtgtacgcag 2100

accttacccc taccctgggg tagagaggct gtttccaata gaccctcggc ataaatcccc 2160

accttgctct tggggtgac 2179

<210> 24

<211> 479

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 24

Met Ala Met Glu Glu Ala Leu Leu Asp Val Asn Asn Asn Asn Asn Asn

1 5 10 15

Asn Asn Asn Asn Lys Val Val Phe Gly Lys Glu Val Lys Glu Val Ser

20 25 30

Arg Ile Ala Met Pro Met Ile Val Val Thr Val Ser Gln Tyr Leu Leu

35 40 45

Arg Val Ser Pro Met Ile Met Leu Gly His Leu Gly Glu Leu Gln Leu

50 55 60

Ser Ser Ala Ser Ile Ala Thr Ser Leu Ser Asn Val Thr Gly Phe Ser

65 70 75 80

Leu Met Leu Gly Met Gly Ser Ala Val Glu Thr Leu Cys Gly Gln Ala

85 90 95

Tyr Gly Ala His Lys Tyr Gly Asn Leu Gly Thr Phe Thr Tyr Gly Ala

100 105 110

Ile Ile Cys Leu Phe Leu Val Cys Ile Pro Val Ser Val Leu Trp Ile

115 120 125

Phe Thr Asp Arg Leu Leu Ile Leu Met Gly Gln Asp Pro Glu Ile Ala

130 135 140

Thr Glu Ala Gly Lys Tyr Thr Ile Trp Leu Ile Pro Thr Leu Phe Pro

145 150 155 160

Tyr Ala Ile Leu Gln Ser Leu Val Arg Tyr Leu Gln Ala Gln Ser Leu

165 170 175

Ile Leu Pro Met Leu Leu Ser Ala Val Val Ser Leu Cys Phe Gln Val

180 185 190

Pro Ile Cys Trp Val Phe Ile Phe Lys Leu Asp Leu Gly Asn Ala Gly

195 200 205

Ala Ala Met Ser Ile Gly Leu Ser Tyr Trp Leu Asn Val Ile Leu Leu

210 215 220

Met Leu Tyr Val Lys Tyr Ser Ser Ala Cys Ala Glu Thr Arg Ala Ser

225 230 235 240

Phe Ser Arg Asp Val Phe Leu Thr Ile Gly Asp Phe Phe Arg Phe Ala

245 250 255

Ile Pro Ser Ala Val Met Val Cys Leu Glu Trp Trp Ser Phe Glu Leu

260 265 270

Ile Ile Leu Leu Ser Gly Leu Leu Pro Asn Pro Ala Leu Glu Thr Ser

275 280 285

Val Leu Ser Ile Cys Phe Thr Thr Thr Ser Val His Tyr His Ile Pro

290 295 300

Tyr Ser Phe Gly Ala Ala Ala Ser Thr Arg Val Ser Asn Glu Leu Gly

305 310 315 320

Ala Gly Arg Pro Gln Ala Ala Lys Val Ala Leu Gly Ala Val Leu Ile

325 330 335

Leu Ser Val Thr Glu Val Val Leu Ala Ser Ile Ser Ile Phe Val Val

340 345 350

Arg His Val Trp Gly Tyr Val Phe Thr Tyr Glu Lys Glu Val Ile Thr

355 360 365

Tyr Val Ala Glu Ile Thr Pro Val Leu Cys Ile Ser Ile Ile Met Asp

370 375 380

Gly Thr Gln Ala Val Leu Ser Gly Val Ala Arg Gly Ser Gly Trp Gln

385 390 395 400

His Ile Gly Ala Tyr Val Asn Leu Gly Ala Tyr Tyr Leu Val Gly Ile

405 410 415

Pro Thr Ala Leu Leu Leu Gly Phe Val Leu His Leu Lys Gly Lys Gly

420 425 430

Leu Trp Ile Gly Leu Val Ala Gly Ala Thr Val Gln Ser Ile Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ile Thr Gly Leu Thr Asn Trp Glu Lys Gln Ala Ile Glu Ala

450 455 460

Arg His Arg Ile Phe Ser Gly Arg Pro Ala Val Glu Asn Gln Asn

465 470 475

<210> 25

<211> 1868

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<220>

<221> misc_feature

<222> 1427, 1428, 1429, 1430, 1431, 1432, 1433, 1434, 1435, 1436,

1437, 1438, 1439, 1440, 1441, 1442, 1443, 1444, 1445, 1446,

1447, 1448, 1449, 1450, 1451, 1452, 1453, 1454, 1455, 1456,

1457, 1458, 1459, 1460, 1461, 1462, 1463, 1464, 1582

<223> n = A,T,C或G

<220>

<221> misc_feature

<222> 1583, 1584, 1585, 1586, 1587, 1588, 1589, 1590, 1591, 1592,

1593, 1594, 1595, 1596, 1597, 1598, 1599, 1600, 1601, 1602,

1603, 1604, 1605, 1606, 1607, 1608, 1609, 1610, 1611, 1612,

1613, 1614, 1615, 1616, 1617, 1618, 1619, 1620, 1621

<223> n = A,T,C或G

<220>

<221> misc_feature

<222> 1622, 1623, 1624, 1625, 1626, 1627, 1711, 1712, 1713, 1714,

1715, 1716, 1717, 1718, 1719, 1720, 1721

<223> n = A,T,C或G

<400> 25

ggaagaggca ctgctggatg tgaataataa taataataat aataataata ataaggtagt 60

gtttgggaag gaggtgaagg aggtgagtcg gatagcaatg ccgatgatag tggtgacggt 120

gtcacagtac cttttgcgcg tttcaccaat gataatgttg ggtcatcttg gtgaacttca 180

actttctagt gcttctattg ctacttcact ttccaatgtt accggcttca gtcttatgtt 240

agggatgggg agtgcagtgg agacactatg tgggcaggca tatggagctc acaagtatgg 300

aaatcttgga acttttactt atggtgcaat tatttgtcta ttccttgtat gcataccagt 360

ttctgttctg tggatcttca cggataggct tcttatattg atgggccaag atcctgaaat 420

cgcaactgaa gctggaaaat acacgatttg gctcattcct acgctatttc catatgctat 480

tcttcagtca cttgtccggt acctgcaggc acagagttta atcctaccaa tgcttttgag 540

tgctgttgta tctttatgct tccaagtgcc gatatgttgg gtttttatat tcaaattgga 600

tttggggaac gctggagcag caatgtcaat tggtttatcc tattggctga atgtgatctt 660

gcttatgctt tatgtgaagt actcatcagc ttgtgcagaa actcgggctt cattctctag 720

agatgttttt ctgactatag gggacttctt ccgctttgct atcccatctg ctgtaatggt 780

ttgcttggaa tggtggtcgt ttgaactaat cattctcctc tctggtctgt tgccaaatcc 840

agcgctagag acttccgttc tatccatatg ctttacaacc acttcagtgc actaccatat 900

accttattct ttcggtgccg ctgcaagcac tcgtgtttca aatgagcttg gagcggggag 960

gccacaggcc gcgaaagttg ctcttggcgc tgtgctaatt ctttctgtca cagaggttgt 1020

tcttgcaagt atttctatat tcgtggtccg ccatgtatgg ggctatgtat ttacctatga 1080

gaaagaagta atcacttatg tagcagaaat tactcctgtt ctttgcatct caatcatcat 1140

ggatggcacc caagccgtat tatcaggagt tgcaagagga agtgggtggc agcatattgg 1200

agcatatgtg aatcttggag catattattt ggttggaatt ccaacggctc tattgctggg 1260

atttgttttg catctaaaag gcaaaggcct ttggattgga ttggtggctg gagcaactgt 1320

gcaatctatt tcgctttccc ttatcacagg cctcaccaat tgggaaaaac aggccattga 1380

agcaagacat agaatcttta gtggaaggcc tgctgttgaa aatcagnnnn nnnnnnnnnn 1440

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnngaaata aaccttcaac ttgctatgat ttagcgagaa 1500

tcaccactca tcatagtacc aattggacaa ttttgaaagt gatcagcctc ttagatgtaa 1560

atgaacaact ttggcggatc annnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 1620

nnnnnnnaag ttgaatttgt tttgctttgc taaatcgttt agctgcggct tcttgtaact 1680

tgtaacgcaa atttcttgtt cgaaaatata nnnnnnnnnn nttgattctg atggtaagca 1740

acccccactt ccaaccaaga ggttgtgagt tcgagtcacc ccaagagcaa ggtggtagtg 1800

tgtacgcaga ccttacccct accctggggt agagaggctg tttccaatag accctcggca 1860

taaatccc 1868

<210> 26

<400> 26

000

<210> 27

<211> 1869

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 27

ttaacctttt attatctcaa atgaaacctc gagatgacaa cttcatctag tatttatatg 60

cctagctaga agttactttc attgcattct acatattcat tgtcatggga aaaagcatga 120

agtctgaagt tgagcagccc ttgttggctg ctgctcatgg gggtagctcc gagctagagg 180

aggtgctctc cgactcccaa ttaccctact ttcgacgcct taggtatgcc tcttggatcg 240

aattccagct actttatcga cttgctgccc cttcagttgc cgtctacatg atcaacaatg 300

ccatgtccat gtctactcgg atcttttctg gccaactcgg gaacctacag cttgcagcag 360

cctctcttgg caatcaaggc atccaattat ttgcttatgg ccttatgcta ggaatgggca 420

gtgcagtgga aacgctttgt ggccaagcat atggagctca cagatatgaa atgctaggag 480

tctacctgca aagagcaaca gtagtacttt ccttaacagg cattccacta gctgtggttt 540

atttattttc caagaatata ctgctcgctc ttggtgaatc aaaactagtg gcatcagcag 600

cagcagtatt tgtttatggt ttgattccac aaatttttgc ttatgcggtg aacttcccaa 660

tacagaagtt cttgcaatcc cagagtattg ttgctcccag tgcctttatt tccctgggga 720

ctctgtttgt acacatattg ctcagttggg ttgttgtata caaaattgga ctgggattgc 780

taggggcgtc gttggtgctg agcttttctt ggtggataat tgtggtggct cagtttatat 840

atatactaaa aagtgaaagg tgtaaagcta cctgggcagg ttttcgatgg gaggccttta 900

gtggattatg ccaatttgtc aagttgtctg ctggttcggc tgttatgttg tgcttggaga 960

cttggtattt ccagattcta gtgttgctct cgggattact caagaatcct gagattgcct 1020

tggcttcaat ctctgtttgc ttggcagtga atggactgat gttcatggtt gcagtggggt 1080

tcaatgctgc tgctagtgtg agagtgagca atgagctagg agcagcacac ccaaagtcag 1140

cagcattctc agtgttcatg gtgacattca tttcatttct cattgctgtg gtggaagcca 1200

taattgtgct cagtttgcgc aatgttatca gctatgcatt caccgaaggt gaagttgtgg 1260

ccaaagaagt atctagtttg tgtccatatt tagctgtcac cctcattctc aatggcattc 1320

aaccagtctt atcgggtgtt gctgttggct gtggatggca ggcgtttgtt gcctacgtga 1380

atgtagggtg ttattatggt gtaggaattc cattgggatg tcttctcggc ttcaagtttg 1440

actttggtgc taagggaata tggactggga tgattggagg gactgtgatg caaaccatca 1500

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cattatgact tggaataata atacggggac atgaaattca aagttattca tgcagtactt 1680

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tccaattaa 1869

<210> 28

<211> 500

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 28

Met Gly Lys Ser Met Lys Ser Glu Val Glu Gln Pro Leu Leu Ala Ala

1 5 10 15

Ala His Gly Gly Ser Ser Glu Leu Glu Glu Val Leu Ser Asp Ser Gln

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Leu Pro Tyr Phe Arg Arg Leu Arg Tyr Ala Ser Trp Ile Glu Phe Gln

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Leu Leu Tyr Arg Leu Ala Ala Pro Ser Val Ala Val Tyr Met Ile Asn

50 55 60

Asn Ala Met Ser Met Ser Thr Arg Ile Phe Ser Gly Gln Leu Gly Asn

65 70 75 80

Leu Gln Leu Ala Ala Ala Ser Leu Gly Asn Gln Gly Ile Gln Leu Phe

85 90 95

Ala Tyr Gly Leu Met Leu Gly Met Gly Ser Ala Val Glu Thr Leu Cys

100 105 110

Gly Gln Ala Tyr Gly Ala His Arg Tyr Glu Met Leu Gly Val Tyr Leu

115 120 125

Gln Arg Ala Thr Val Val Leu Ser Leu Thr Gly Ile Pro Leu Ala Val

130 135 140

Val Tyr Leu Phe Ser Lys Asn Ile Leu Leu Ala Leu Gly Glu Ser Lys

145 150 155 160

Leu Val Ala Ser Ala Ala Ala Val Phe Val Tyr Gly Leu Ile Pro Gln

165 170 175

Ile Phe Ala Tyr Ala Val Asn Phe Pro Ile Gln Lys Phe Leu Gln Ser

180 185 190

Gln Ser Ile Val Ala Pro Ser Ala Phe Ile Ser Leu Gly Thr Leu Phe

195 200 205

Val His Ile Leu Leu Ser Trp Val Val Val Tyr Lys Ile Gly Leu Gly

210 215 220

Leu Leu Gly Ala Ser Leu Val Leu Ser Phe Ser Trp Trp Ile Ile Val

225 230 235 240

Val Ala Gln Phe Ile Tyr Ile Leu Lys Ser Glu Arg Cys Lys Ala Thr

245 250 255

Trp Ala Gly Phe Arg Trp Glu Ala Phe Ser Gly Leu Cys Gln Phe Val

260 265 270

Lys Leu Ser Ala Gly Ser Ala Val Met Leu Cys Leu Glu Thr Trp Tyr

275 280 285

Phe Gln Ile Leu Val Leu Leu Ser Gly Leu Leu Lys Asn Pro Glu Ile

290 295 300

Ala Leu Ala Ser Ile Ser Val Cys Leu Ala Val Asn Gly Leu Met Phe

305 310 315 320

Met Val Ala Val Gly Phe Asn Ala Ala Ala Ser Val Arg Val Ser Asn

325 330 335

Glu Leu Gly Ala Ala His Pro Lys Ser Ala Ala Phe Ser Val Phe Met

340 345 350

Val Thr Phe Ile Ser Phe Leu Ile Ala Val Val Glu Ala Ile Ile Val

355 360 365

Leu Ser Leu Arg Asn Val Ile Ser Tyr Ala Phe Thr Glu Gly Glu Val

370 375 380

Val Ala Lys Glu Val Ser Ser Leu Cys Pro Tyr Leu Ala Val Thr Leu

385 390 395 400

Ile Leu Asn Gly Ile Gln Pro Val Leu Ser Gly Val Ala Val Gly Cys

405 410 415

Gly Trp Gln Ala Phe Val Ala Tyr Val Asn Val Gly Cys Tyr Tyr Gly

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Val Gly Ile Pro Leu Gly Cys Leu Leu Gly Phe Lys Phe Asp Phe Gly

435 440 445

Ala Lys Gly Ile Trp Thr Gly Met Ile Gly Gly Thr Val Met Gln Thr

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Ile Ile Leu Leu Trp Val Thr Phe Arg Thr Asp Trp Asn Lys Glu Val

465 470 475 480

Glu Cys Ala Arg Lys Arg Leu Asp Lys Trp Glu Asn Leu Lys Gly Pro

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Leu Asn Lys Glu

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<211> 1870

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 29

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<210> 30

<211> 517

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 30

Met Glu Gly Ser Ser Lys Gln Pro Leu Leu Ser Pro Lys Asp Pro Gln

1 5 10 15

Ile Thr Asp Gln Ala Ser Asp Asn Tyr Leu Ile Arg Leu Ser His Thr

20 25 30

Ser Phe Ala Ser Ser Phe Val Ala Asp Ser Asp Asp Ile Pro Pro Ile

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Thr Gly Phe Arg Asp Phe Phe Arg Glu Phe Ser Val Glu Ser Lys Lys

50 55 60

Leu Trp Tyr Leu Ala Gly Pro Ala Ile Phe Thr Ser Leu Cys Gln Tyr

65 70 75 80

Ser Leu Gly Ala Val Thr Gln Thr Phe Ala Gly His Val Gly Thr Leu

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Glu Leu Ala Ala Val Ser Val Glu Asn Ser Val Ile Ala Gly Phe Ser

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Phe Gly Val Met Leu Gly Met Gly Ser Ala Leu Glu Thr Leu Cys Gly

115 120 125

Gln Ala Phe Gly Ala Gly Gln Ile Asp Met Leu Gly Val Tyr Met Gln

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Arg Ser Trp Val Ile Leu Asn Thr Thr Ala Val Ile Leu Met Leu Leu

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Tyr Ile Phe Ala Ala Pro Phe Leu Arg Leu Ile Gly Gln Thr Glu Asp

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Ile Ser Arg Glu Ala Gly Lys Met Ala Leu Tyr Met Ile Pro Gln Leu

180 185 190

Tyr Ala Tyr Ala Met Asn Phe Pro Ile Ala Lys Phe Leu Gln Ser Gln

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Ser Lys Ile Met Val Met Ala Trp Ile Ala Ala Ile Ala Leu Val Leu

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His Thr Phe Phe Ser Trp Leu Phe Met Leu Lys Leu Gly Trp Gly Leu

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Val Gly Ala Ala Val Val Leu Asn Ser Ser Trp Trp Phe Ile Val Val

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275 280 285

Ser Leu Ala Ser Ala Val Met Leu Cys Leu Glu Thr Trp Tyr Phe Met

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Ala Leu Val Leu Phe Ala Gly Tyr Leu Lys Asn Ala Glu Val Ala Val

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Asp Ala Leu Ser Ile Cys Met Asn Ile Leu Gly Trp Ala Val Met Ala

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Ala Ile Gly Cys Asn Ala Ala Ile Ser Val Arg Val Ser Asn Glu Leu

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Gly Ala Ala His Pro Arg Thr Ala Lys Phe Ser Val Val Val Val Val

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Val Ser Ser Phe Leu Ile Gly Leu Leu Leu Ser Val Phe Leu Leu Val

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Phe Arg Arg Gln Tyr Pro Thr Leu Phe Ala Glu Ser Glu Ser Val Lys

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Arg Leu Val Tyr Glu Leu Thr Pro Leu Leu Ala Phe Cys Ile Val Val

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Asn Asn Ile Gln Pro Ala Leu Ser Gly Val Ala Ile Gly Ala Gly Trp

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Gln Ala Leu Val Ala Tyr Val Asn Ile Ala Cys Tyr Tyr Leu Phe Gly

435 440 445

Ile Pro Leu Gly Leu Leu Leu Gly Tyr Lys Leu Asn Met Gly Val Gln

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Gly Ile Trp Tyr Gly Met Val Ser Gly Thr Leu Ile Gln Thr Phe Ala

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Leu Phe Trp Ile Val Tyr Lys Thr Ser Trp Asn Lys Glu Ala Ser Ile

485 490 495

Ala Ala Glu Arg Ile Lys Met Trp Gly Gly Glu Ser Asn Gly Lys Ala

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Asp Asp Ala Glu Lys

515

<210> 31

<211> 398

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 31

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<210> 32

<400> 32

000

<210> 33

<211> 3411

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 33

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caaagagacc ttctcttttt cccttcatgg gcttatgcaa ttccctcatg gatcctcaaa 780

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tttgatccta atatttcaag atttttgaaa caattcttgc tgctcatagt tgtaaaccag 900

atggcatcag gattgtttag attcattggg gcagtaggaa ggaccatggg agttgctagc 960

acatttggag catttgctct tcttttacaa tttgcattgg gcggttttgt cctttcacga 1020

gatgatgtga aaagctggtg gatttggggt tactggactt cgccgatgat gtattcagtg 1080

aattcaattc ttgtgaacga atttgatggg aaaaaatgga atcatattgt gccaggtgga 1140

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tactggattg gtgttggggc acttgtcgga tttacagttg tgtttaactt ctgctacagt 1260

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ttcattggaa atccaaactt tatttgttaa tataaaaaaa aaaaaaaaaa a 3411

<210> 34

<211> 1008

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 34

Met Gly Phe Lys Cys Pro Glu Arg Lys Gly Val Ala Asp Phe Leu Gln

1 5 10 15

Glu Val Thr Ser Lys Lys Asp Gln Gln Gln Tyr Trp Ser Lys Arg Asn

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Glu Pro Tyr Arg Phe Ile Thr Ser Lys Glu Phe Ala Glu Ala Tyr Gln

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Ser Phe His Val Gly Arg Lys Leu Gly Asp Glu Leu Ala Thr Pro Phe

50 55 60

Asp Lys Thr Lys Cys His Pro Ala Ala Leu Thr Asn Glu Lys Tyr Gly

65 70 75 80

Ile Gly Lys Lys Glu Leu Leu Lys Val Cys Thr Glu Arg Glu Leu Leu

85 90 95

Leu Met Lys Arg Asn Ser Phe Val Tyr Met Phe Lys Phe Ser Gln Leu

100 105 110

Thr Ile Met Ala Leu Ile Thr Met Thr Leu Phe Phe Arg Thr Glu Met

115 120 125

Pro Arg Asp Thr Thr Asp Asp Gly Gly Ile Tyr Ala Gly Ala Leu Phe

130 135 140

Phe Val Val Ile Met Ile Met Phe Asn Gly Met Ser Glu Leu Ala Met

145 150 155 160

Thr Ile Phe Lys Leu Pro Val Phe Tyr Lys Gln Arg Asp Leu Leu Phe

165 170 175

Phe Pro Ser Trp Ala Tyr Ala Ile Pro Ser Trp Ile Leu Lys Ile Pro

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Val Thr Leu Val Glu Val Gly Leu Trp Val Ile Leu Thr Tyr Tyr Val

195 200 205

Ile Gly Phe Asp Pro Asn Ile Ser Arg Phe Leu Lys Gln Phe Leu Leu

210 215 220

Leu Ile Val Val Asn Gln Met Ala Ser Gly Leu Phe Arg Phe Ile Gly

225 230 235 240

Ala Val Gly Arg Thr Met Gly Val Ala Ser Thr Phe Gly Ala Phe Ala

245 250 255

Leu Leu Leu Gln Phe Ala Leu Gly Gly Phe Val Leu Ser Arg Asp Asp

260 265 270

Val Lys Ser Trp Trp Ile Trp Gly Tyr Trp Thr Ser Pro Met Met Tyr

275 280 285

Ser Val Asn Ser Ile Leu Val Asn Glu Phe Asp Gly Lys Lys Trp Asn

290 295 300

His Ile Val Pro Gly Gly Asn Glu Thr Leu Gly Ser Thr Val Val Lys

305 310 315 320

Ser Arg Gly Phe Phe Pro Glu Ala Tyr Trp Tyr Trp Ile Gly Val Gly

325 330 335

Ala Leu Val Gly Phe Thr Val Val Phe Asn Phe Cys Tyr Ser Leu Ala

340 345 350

Leu Ala Tyr Leu Asn Pro Phe Asp Lys Pro Gln Ala Val Leu Pro Glu

355 360 365

Asp Gly Glu Asn Ala Glu Asn Val Glu Val Ser Ser Gln Ile Thr Ser

370 375 380

Thr Asp Gly Gly Asp Ser Ile Thr Glu Ser Gln Asn Asn Asn Lys Lys

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Gly Met Val Leu Pro Phe Glu Pro His Ser Ile Thr Phe Asp Asp Val

405 410 415

Val Tyr Ser Val Asp Met Pro Gln Glu Met Lys Glu Gln Gly Ala Gly

420 425 430

Glu Asp Arg Leu Val Leu Leu Lys Gly Val Ser Gly Ala Phe Arg Pro

435 440 445

Gly Val Leu Thr Ala Leu Met Gly Val Ser Gly Ala Gly Lys Thr Thr

450 455 460

Leu Met Asp Val Leu Ala Gly Arg Lys Thr Gly Gly Tyr Ile Asp Gly

465 470 475 480

Asp Ile Lys Ile Ser Gly Tyr Pro Lys Lys Gln Glu Thr Phe Ala Arg

485 490 495

Ile Ser Gly Tyr Cys Glu Gln Asn Asp Ile His Ser Pro Tyr Val Thr

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Val Tyr Glu Ser Leu Val Tyr Ser Ala Trp Leu Arg Leu Pro Gln Asp

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Val Asp Glu Lys Thr Arg Lys Met Phe Val Asp Glu Val Met Glu Leu

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Val Glu Leu Arg Pro Leu Arg Ser Ala Leu Val Gly Leu Pro Gly Val

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Asn Gly Leu Ser Thr Glu Gln Arg Lys Arg Leu Thr Ile Ala Val Glu

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Asp Ile Phe Glu Ala Phe Asp Glu Leu Phe Leu Met Lys Arg Gly Gly

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Lys Tyr Phe Glu Ser Asn Pro Gly Val Ala Lys Ile Lys Glu Gly Tyr

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675 680 685

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Arg Arg Asn Lys Ala Leu Ile Ser Glu Leu Gly Val Pro Arg Pro Gly

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Ser Lys Asp Leu His Phe Glu Thr Gln Tyr Ser Gln Ser Phe Trp Thr

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Trp Asp Val Gly Lys Phe Phe Trp Tyr Leu Phe Ile Met Phe Phe Thr

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Leu Leu Tyr Phe Thr Phe Tyr Gly Met Met Ser Val Ala Val Thr Pro

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Asn Gln Asn Val Ala Ser Ile Val Ala Ala Phe Phe Tyr Gly Val Trp

900 905 910

Asn Leu Phe Ser Gly Phe Ile Val Pro Arg Pro Arg Met Pro Val Trp

915 920 925

Trp Arg Trp Tyr Tyr Trp Ala Asn Pro Val Ala Trp Thr Leu Tyr Gly

930 935 940

Leu Val Ala Ser Gln Phe Gly Asp Ile Gln Thr Thr Leu Ser Asp Asn

945 950 955 960

Glu Thr Val Glu Gln Phe Leu Arg Arg Tyr Phe Gly Phe Lys His Asp

965 970 975

Phe Leu Gly Val Val Ala Ala Val Leu Thr Ala Tyr Val Phe Val Phe

980 985 990

Ala Phe Thr Phe Ala Phe Ala Ile Lys Ala Phe Asn Phe Gln Arg Arg

995 1000 1005

<210> 35

<211> 4497

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 35

atggagggaa atgggggacc gagaaggctg gggagtagta ggagtagtat gagcagaacg 60

atgagtcgaa gcagaagcag agcaaattgg aatgtagaag acgtgttcaa tccaatgccg 120

agcagaagaa gcactcgtgg cgaagaagat gaagaagctc ttacgtgggc tgcgttagag 180

aaattgccta cttacgatcg tttgagaaaa acggtcctta aatcggtcat ggaaagtgag 240

aataatcagg gcaataaaaa agttgttcat aaggaagtcg atgttcggaa tctgggaatg 300

aatgagcgac aagagttcat tgatcgattt ttcagggttg ctgaggaaga taatgaaaag 360

ttcctgagaa agttcagaaa tcgaattgac aaagttggga ttacccttcc tacggtagaa 420

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aggatgaccc ttttattagg tccaccatct tctgggaaaa cgacccttct gttggctttg 660

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gctgaaatga ctgttaaaga aacccttgat ttctctgcta gatgccaagg agtcggctct 840

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gctgaaatcg atcttttcat gaaggcaaca gctatggagg gagttgaaag cagccttatt 960

actgattaca cgctcaggat tttgggactt gatgtgtgtc gggacaccat tgttggggat 1020

gaaatgatac gaggcatttc tggtggccag aagaagcgtg tcactacagg tgagatgatc 1080

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acatttcaga tagtgaaatg cttgcagcag attgtacatc tcactgaggc cactgttttg 1200

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agaaaggacc aagagcagta ctgggcaaat agacatagac cataccagta catttcagta 1440

actgaatttg caaagagatt caagcgcttc cacgtcggct tacgtataga aaatgagctc 1500

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gtccctacac tagagcttct aaagacaaac ttcgacaagg aatggctttt gatcaagaga 1620

aactcttttg tttacgtctt caagaccgtt caaatcatca ttgttgcatt cattggatca 1680

actgtgttct tgaggaccaa aatgcacact aatactgtag atgatggcgc tacctatgtt 1740

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gctttcactt taccaactgt gctcctaaag gtaccaattt ctgtgttcga gactattgtg 1920

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agggtttcgg gatattgtga acaaactgat atacactcac ctcaagtaac tatccatgag 3000

tctctgatat tttcggcttt cctccggctc cctaaagaag tcagcaaaga agataagatg 3060

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gcagctgtgc tgtttgttgg aatcaataat tgttcgaccg tacagccaat tgtagccgtc 3900

gaaagaaccg tcttttatag agaaagggct gctgggatgt attcagcttt accatatgct 3960

atggcacagg tatttgcaga aataccatac atactcgtcc aaactacata ctatactctt 4020

atagtgtatg ctatggtggc ctttgagtgg acggcagcta aattcttctg gttctatttt 4080

gtaaccttct tctccttcct atactggacg tactatggaa tgatgaccgt ttccatcaca 4140

cccaaccacc aagtagccgc gatctttgct gcagctttct atgcactttt caatcttttc 4200

tccggtttct tcatccccag accgagaatt cccaagtggt ggatatggta ttactggatc 4260

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tttttcgcct ttatgtacgc ttacgctatt aagacattga acttccaaac tagatag 4497

<210> 36

<211> 1498

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 36

Met Glu Gly Asn Gly Gly Pro Arg Arg Leu Gly Ser Ser Arg Ser Ser

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Met Ser Arg Thr Met Ser Arg Ser Arg Ser Arg Ala Asn Trp Asn Val

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Glu Asp Val Phe Asn Pro Met Pro Ser Arg Arg Ser Thr Arg Gly Glu

35 40 45

Glu Asp Glu Glu Ala Leu Thr Trp Ala Ala Leu Glu Lys Leu Pro Thr

50 55 60

Tyr Asp Arg Leu Arg Lys Thr Val Leu Lys Ser Val Met Glu Ser Glu

65 70 75 80

Asn Asn Gln Gly Asn Lys Lys Val Val His Lys Glu Val Asp Val Arg

85 90 95

Asn Leu Gly Met Asn Glu Arg Gln Glu Phe Ile Asp Arg Phe Phe Arg

100 105 110

Val Ala Glu Glu Asp Asn Glu Lys Phe Leu Arg Lys Phe Arg Asn Arg

115 120 125

Ile Asp Lys Val Gly Ile Thr Leu Pro Thr Val Glu Val Arg Tyr Glu

130 135 140

His Leu Thr Ile Glu Ala Asp Cys Tyr Ile Gly Asp Arg Ala Leu Pro

145 150 155 160

Thr Leu Pro Asn Ala Ala Arg Asn Ile Ala Glu Ser Ala Leu Ser Cys

165 170 175

Val Gly Ile Asn Leu Ala Glu Lys Thr Lys Leu Thr Ile Leu Lys Asp

180 185 190

Ala Ser Gly Ile Ile Lys Pro Ser Arg Met Thr Leu Leu Leu Gly Pro

195 200 205

Pro Ser Ser Gly Lys Thr Thr Leu Leu Leu Ala Leu Ala Gly Lys Leu

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Asp Pro Thr Leu Lys Val Arg Gly Glu Ile Thr Tyr Asn Gly His Gly

225 230 235 240

Leu Lys Glu Phe Val Pro Gln Lys Thr Ser Ala Tyr Ile Ser Gln Asn

245 250 255

Asp Val His Val Ala Glu Met Thr Val Lys Glu Thr Leu Asp Phe Ser

260 265 270

Ala Arg Cys Gln Gly Val Gly Ser Arg Tyr Glu Leu Leu Thr Glu Leu

275 280 285

Ala Arg Arg Glu Arg Asp Ala Gly Ile Phe Pro Glu Ala Glu Ile Asp

290 295 300

Leu Phe Met Lys Ala Thr Ala Met Glu Gly Val Glu Ser Ser Leu Ile

305 310 315 320

Thr Asp Tyr Thr Leu Arg Ile Leu Gly Leu Asp Val Cys Arg Asp Thr

325 330 335

Ile Val Gly Asp Glu Met Ile Arg Gly Ile Ser Gly Gly Gln Lys Lys

340 345 350

Arg Val Thr Thr Gly Glu Met Ile Val Gly Pro Thr Lys Thr Leu Phe

355 360 365

Met Asp Glu Ile Ser Thr Gly Leu Asp Ser Ser Thr Thr Phe Gln Ile

370 375 380

Val Lys Cys Leu Gln Gln Ile Val His Leu Thr Glu Ala Thr Val Leu

385 390 395 400

Met Ser Leu Leu Gln Pro Ala Pro Glu Thr Phe Asp Leu Phe Asp Asp

405 410 415

Ile Ile Leu Leu Ser Glu Gly Gln Ile Val Tyr Gln Gly Pro Arg Glu

420 425 430

His Val Leu Glu Phe Phe Glu Thr Cys Gly Phe Lys Cys Pro Glu Arg

435 440 445

Lys Gly Thr Ala Asp Phe Leu Gln Glu Val Thr Ser Arg Lys Asp Gln

450 455 460

Glu Gln Tyr Trp Ala Asn Arg His Arg Pro Tyr Gln Tyr Ile Ser Val

465 470 475 480

Thr Glu Phe Ala Lys Arg Phe Lys Arg Phe His Val Gly Leu Arg Ile

485 490 495

Glu Asn Glu Leu Ser Val Pro Tyr Asp Lys Thr Arg Ser His Pro Ala

500 505 510

Ala Leu Ile Phe Lys Lys Tyr Thr Val Pro Thr Leu Glu Leu Leu Lys

515 520 525

Thr Asn Phe Asp Lys Glu Trp Leu Leu Ile Lys Arg Asn Ser Phe Val

530 535 540

Tyr Val Phe Lys Thr Val Gln Ile Ile Ile Val Ala Phe Ile Gly Ser

545 550 555 560

Thr Val Phe Leu Arg Thr Lys Met His Thr Asn Thr Val Asp Asp Gly

565 570 575

Ala Thr Tyr Val Gly Ala Leu Leu Phe Gly Met Val Ile Asn Met Phe

580 585 590

Asn Gly Phe Ser Glu Leu Ser Met Ile Ile Gln Arg Leu Pro Val Phe

595 600 605

Tyr Lys His Arg Asp Leu Leu Phe His Pro Pro Trp Ala Phe Thr Leu

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Pro Thr Val Leu Leu Lys Val Pro Ile Ser Val Phe Glu Thr Ile Val

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Trp Met Val Met Thr Tyr Tyr Thr Ile Gly Tyr Ala Pro Glu Ala Ser

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Arg Phe Phe Lys Gln Ser Leu Leu Thr Phe Leu Ile Gln Gln Met Ala

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Ala Gly Leu Phe Arg Leu Thr Ala Gly Val Cys Arg Thr Met Ile Ile

675 680 685

Ala Asn Thr Gly Gly Ala Leu Met Leu Leu Leu Val Phe Leu Leu Gly

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Gly Phe Ile Leu Pro Arg Gly Ser Ile Pro Asp Trp Trp Arg Trp Gly

705 710 715 720

Tyr Trp Ile Ser Pro Leu Ser Tyr Gly Phe Asn Ala Phe Thr Val Asn

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Glu Met Phe Ala Pro Arg Trp Met Asn Lys Phe Ala Pro Asp Gly Thr

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Thr Arg Leu Gly Leu Gln Val Met Lys Asn Phe Asp Val Phe Thr Glu

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Arg Arg Trp Phe Trp Ile Gly Ala Ala Ala Leu Leu Gly Phe Thr Ile

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Leu Phe Asn Val Leu Phe Thr Leu Val Leu Met Tyr Leu Ser Pro Leu

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Asn Lys Pro Gln Ala Thr Leu Ser Lys Glu Gln Ala Ser Asp Met Glu

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Ala Asp Gln Glu Glu Ser Thr Gly Ser Pro Arg Leu Lys Ile Ser Gln

820 825 830

Ser Lys Arg Asp Asp Leu Pro Arg Ser Leu Ser Ala Ala Asp Gly Asn

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Lys Thr Arg Glu Met Glu Ile Arg Arg Met Ser Ser His Ile His Ser

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Ser Gly Leu Tyr Arg Asn Glu Asp Ala Asn Leu Glu Ala Ala Asn Gly

865 870 875 880

Val Ala Ala Lys Lys Gly Met Ile Leu Pro Phe Thr Pro Leu Ala Met

885 890 895

Ser Phe Glu Asp Val Ser Tyr Phe Val Asp Met Pro Pro Glu Met Lys

900 905 910

Asp Gln Gly Val Thr Glu Asp Lys Leu Gln Leu Leu Arg Glu Val Thr

915 920 925

Gly Ala Phe Arg Pro Gly Val Leu Thr Ala Leu Met Gly Val Ser Gly

930 935 940

Ala Gly Lys Thr Thr Leu Met Asp Val Leu Ala Gly Arg Lys Thr Gly

945 950 955 960

Gly Tyr Ile Glu Gly Asp Val Arg Ile Ser Gly Phe Pro Lys Asn Gln

965 970 975

Glu Thr Phe Ala Arg Val Ser Gly Tyr Cys Glu Gln Thr Asp Ile His

980 985 990

Ser Pro Gln Val Thr Ile His Glu Ser Leu Ile Phe Ser Ala Phe Leu

995 1000 1005

Arg Leu Pro Lys Glu Val Ser Lys Glu Asp Lys Met Ile Phe Val Asp

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Glu Val Met Asp Leu Val Glu Leu Asp Asn Leu Lys Asp Ala Ile Val

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Gly Leu Pro Gly Val Thr Gly Leu Ser Thr Glu Gln Arg Lys Arg Leu

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Thr Ile Ala Val Glu Leu Val Ala Asn Pro Ser Ile Ile Phe Met Asp

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Thr Val Arg Asn Thr Val Asp Thr Gly Arg Thr Val Val Cys Thr Ile

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Met Lys Arg Gly Gly Gln Val Ile Tyr Ala Gly Pro Leu Gly Arg His

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Ser Gln Lys Ile Ile Glu Tyr Phe Glu Ala Ile Pro Gly Val Gln Lys

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Ile Lys Glu Lys Tyr Asn Pro Ala Thr Trp Met Leu Glu Ala Ser Ser

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Ile Gly Thr Glu Ala Arg Leu Gly Met Asp Phe Ala Glu Tyr Tyr Arg

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Ser Ser Ala Leu His Gln Arg Asn Lys Ala Leu Val Lys Glu Leu Ser

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Ala Pro Pro Pro Gly Ala Lys Asp Leu Tyr Phe Thr Thr Gln Phe Ser

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Gln Pro Thr Trp Gly Gln Phe Lys Ser Cys Leu Trp Lys Gln Trp Trp

1220 1225 1230

Thr Tyr Trp Arg Ser Pro Asp Tyr Asn Leu Val Arg Phe Phe Phe Ser

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Leu Ala Ala Ala Leu Leu Ile Gly Thr Ile Phe Trp Asn Val Gly Ser

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Lys Arg Gln Ser Ser Gly Asp Leu Met Thr Val Ile Gly Ala Met Tyr

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Ala Ala Val Leu Phe Val Gly Ile Asn Asn Cys Ser Thr Val Gln Pro

1285 1290 1295

Ile Val Ala Val Glu Arg Thr Val Phe Tyr Arg Glu Arg Ala Ala Gly

1300 1305 1310

Met Tyr Ser Ala Leu Pro Tyr Ala Met Ala Gln Val Phe Ala Glu Ile

1315 1320 1325

Pro Tyr Ile Leu Val Gln Thr Thr Tyr Tyr Thr Leu Ile Val Tyr Ala

1330 1335 1340

Met Val Ala Phe Glu Trp Thr Ala Ala Lys Phe Phe Trp Phe Tyr Phe

1345 1350 1355 1360

Val Thr Phe Phe Ser Phe Leu Tyr Trp Thr Tyr Tyr Gly Met Met Thr

1365 1370 1375

Val Ser Ile Thr Pro Asn His Gln Val Ala Ala Ile Phe Ala Ala Ala

1380 1385 1390

Phe Tyr Ala Leu Phe Asn Leu Phe Ser Gly Phe Phe Ile Pro Arg Pro

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Arg Ile Pro Lys Trp Trp Ile Trp Tyr Tyr Trp Ile Cys Pro Val Ala

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Trp Thr Val Tyr Gly Ser Ile Val Ser Gln Tyr Gly Asp Val Glu Asp

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Thr Ile Gln Val Pro Gly Val Phe Pro Asn Pro Arg Ile Lys Asp Tyr

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Ile Lys Asp His Phe Gly Tyr Asn Ser Asp Phe Met Ala Pro Val Ala

1460 1465 1470

Val Val Leu Val Gly Phe Ala Ala Phe Phe Ala Phe Met Tyr Ala Tyr

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Ala Ile Lys Thr Leu Asn Phe Gln Thr Arg

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<210> 37

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<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 37

atggagatga aagtaaacga agcaatttca aagagtaaaa ttggcaaata cttcaagtta 60

gaagctagaa aaagctcttt tactaaagaa tttcgtgctg gtacggcgac gtttcttaca 120

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gctttagctt ctatgattgg gtcatttgct atgggtttat tagctaatct tcctttgggc 360

ttggccccag gtatgggccc aaatgcttat ttagcttata atttagtggg atttcatggg 420

tctggaaaaa tgtcatatca aactgttatg gcaattttct tagttgaagg ttgtgctttt 480

cttgctatag ctgtatttgg gcttcgtggg agaatagccc ggtttattcc tcagcctgta 540

agattggctt gtgcggctgg tattgggctt tttattgcat ttgtgggcct acaagcccat 600

caaggagtga gcctagtcgg cccagatcca tctactctat tgaccctcac tgcttgctct 660

agtacaaatc cggtgaccgg agaatgcacc ggcgggaaaa tgcaaagccc aactttttgg 720

ttaagttcag ttggatttat aattatgtgt tatggactaa tgaaggaaat taaaggtagt 780

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tatacaatgg ctgaaattgg tggatttgtt aatgaagaag gagaatttga aggtgaatat 1080

atagcatata tggtagatgc aggatcaaca atagttgcat caactctagg agtttcacct 1140

atagccacat ttgtagaatc atcagctggg attaaagaag gtggtaggac gggactaacg 1200

gcgattatcg ttggatttta ttttctattg tctttgtttt ttacaccttt gattgctagt 1260

gtaccacctt gggctatagg tccatctttg gtaatggttg gtgtgttgat gatgaaagtt 1320

gttaaagata ttgattggaa taatattaag catgcagtgc ctgcatttgt gactatggtt 1380

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gtttga 1566

<210> 38

<211> 521

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 38

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1 5 10 15

Tyr Phe Lys Leu Glu Ala Arg Lys Ser Ser Phe Thr Lys Glu Phe Arg

20 25 30

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Leu Leu Ala Asn Leu Pro Leu Gly Leu Ala Pro Gly Met Gly Pro Asn

115 120 125

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130 135 140

Ser Tyr Gln Thr Val Met Ala Ile Phe Leu Val Glu Gly Cys Ala Phe

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Leu Ala Ile Ala Val Phe Gly Leu Arg Gly Arg Ile Ala Arg Phe Ile

165 170 175

Pro Gln Pro Val Arg Leu Ala Cys Ala Ala Gly Ile Gly Leu Phe Ile

180 185 190

Ala Phe Val Gly Leu Gln Ala His Gln Gly Val Ser Leu Val Gly Pro

195 200 205

Asp Pro Ser Thr Leu Leu Thr Leu Thr Ala Cys Ser Ser Thr Asn Pro

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Val Thr Gly Glu Cys Thr Gly Gly Lys Met Gln Ser Pro Thr Phe Trp

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Leu Ser Ser Val Gly Phe Ile Ile Met Cys Tyr Gly Leu Met Lys Glu

245 250 255

Ile Lys Gly Ser Met Ile Tyr Gly Ile Leu Phe Val Thr Leu Val Ser

260 265 270

Trp Ile Arg Asn Thr Ala Val Thr Ile Phe Pro Asn Thr Thr Ser Gly

275 280 285

Asn Ser Ser Tyr Glu Tyr Phe Lys Lys Val Val Asp Phe His Lys Ile

290 295 300

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Val Trp Val Ala Leu Leu Thr Leu Leu Tyr Ile Asp Val Leu Ala Thr

325 330 335

Thr Gly Thr Leu Tyr Thr Met Ala Glu Ile Gly Gly Phe Val Asn Glu

340 345 350

Glu Gly Glu Phe Glu Gly Glu Tyr Ile Ala Tyr Met Val Asp Ala Gly

355 360 365

Ser Thr Ile Val Ala Ser Thr Leu Gly Val Ser Pro Ile Ala Thr Phe

370 375 380

Val Glu Ser Ser Ala Gly Ile Lys Glu Gly Gly Arg Thr Gly Leu Thr

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Ala Ile Ile Val Gly Phe Tyr Phe Leu Leu Ser Leu Phe Phe Thr Pro

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420 425 430

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<210> 39

<211> 665

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 39

ggtaacatat tctccttcat ggtgtttatt tcgccagtac ctacatttta tgggatcgtt 60

aagaagaaat caacagaagg ctatcaatca attccgtacg tggttgcact ctttagttca 120

atgctttgga tttactatgc atttctcaag acaaacacga cccttatcat caccataaac 180

tcctttggct gcattgcgga gactatttat attgctattt attttgctta tgcgacaaaa 240

aaaacaagga tgcaaacgtt gagacttgtt ctaatgttga atttcggtgg ctttgggttg 300

attcttttcc tcacccaaat tttatgcaaa ggagcaaaac gagctgaagt tattggatgg 360

atttgcatgg cgttttctat tagtgtgttt gtagcacctc taagcattat ggggcgggta 420

atacggacca aaagtgtgga gttcatgcca tttaacttgt cgttaaccct tacacttagt 480

gctgtgataa acgccaagcc aaataatcag gcagaagaga agaaactacc cactgttgtg 540

aagctggagg agttgcctac aaaagttaat tctgaggttt atccagttag tttaccatcc 600

atgggcagtg aaaacggaga ggctaaagat ggtaaacatt ttgaagatgc ccaaatcaaa 660

tctcc 665

<210> 40

<400> 40

000

<210> 41

<211> 4212

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 41

atgtttttat aagagaaact aatcacctct ttccaaaaca aaagtatatc caatttatct 60

cagagccaaa agtccctttt tcatttatta tcttctcctc ttccttagag taggggaaaa 120

atagaaagaa gagaatggtg gaaagtgaga aaatgaatga cacaaagaat ctgagcaaga 180

gctattttga tgttttggga atttgctgta cttcagaagt tgttcttgtt gaaaaaattc 240

tcaagaatct tgaaggggtt aaagaggttt cagtaattgt cacaacaaag actgtcattg 300

ttattcatga ttctctcctc atttctcagc aacaaattgt taaagcattg aatcaagcaa 360

gattagaagc aagtataaga gtgaaaggag agaaaaacta ccaaaagaaa tggccaagtc 420

catttgcaat tggcagtgga atattgcttg gactctcatt tttgaagtac ttttttgcac 480

ctttccaatg gttagcactt gcagctgttg cagttgggat tcctccaatt atttttaggg 540

gtgtggctgc cgtgcgaaac ctcactcttg acatcaacat tcttgtttta atagcagtga 600

cgggatcaat tgttttacac gattattggg aagctggtac tattgtcttc ttattcacca 660

ttgcagaatg gctagagtca agggcaagtc acaaggctac tgctgctatg tcatcactgg 720

tcaatatagt ccctccaaca gcagttttag ctgaaagtgg agaagtcgta aatgttgatg 780

aagtcaagtt gaatagcatt cttgctgtta aagctggtga aactatacct attgatggag 840

ttgtaatgga aggggaatgt gacgtggacg agaaaacact gacaggcgag tcgtttccag 900

tttctaagca aatagattca acggtctggg ctggcactac aaatctaaat gcaattgtgg 960

ctatatcagc ttctttggca atagttccta ctgcattaag agttcacaat cgaaatgaat 1020

ggtatcgctt ggctttggtc acattggtga gtgcatgtcc gtgtgcactt gttctatcta 1080

caccagttgc catgtgttgc gcactttcaa aagcagcaac gtccggtctt ctgtttaaag 1140

gagcagagta ccttgagact cttgctaaaa tcaaaatcat ggcttttgac aaaacaggga 1200

ctataactag aggagaattt atggtgaccg agttcaaggt ttcaagtatt gagagcaagt 1260

caggtcatcc gatggcagcc gctctggtgg actatgcaca atcaaattcc gttgagccaa 1320

agcctgatag agttgagcag tttcaaaatt ttcctggtga agggatattt ggaagaattg 1380

atggaatgga aatctatgtc gggaatagga aaatttcttc aagagctgga tgtaccacag 1440

taccagaaat agagggtgat agtttccaag gaaagtctgt tggatacata tttttgggat 1500

catctcccgc tggaattttc ggtctttccg atgtttgtcg aattggtgta aaagaagcaa 1560

tgagagaact gaagcagatg ggtatcaaaa ccgcgatgct tactggtgat tgttatgcag 1620

ctgccaacca tgtgcaggat cagaaggaag ctccaacagc gatgataggc gacggcctta 1680

atgatgctcc tgcattagca acagctgaca ttggcatctc aatgggcatc tctgggtcag 1740

ctctcgcgaa agaaacaggc catgttatac taatgacaaa tgacatcgga agaataccaa 1800

aagctgcacg tcttgctaga agagttcgaa ggaagattgt tgagaatatg attatatcag 1860

tcgttacaaa ggccgccata gttgcattgg caatagcagg ttatccattg gtttgggctg 1920

ctgtcctcgc agatactggg acatgcttgc tagtgatttt gaacagcatg ctacttctac 1980

gaggaggcac acgcagacat gggaaaaaat gttggagatc ttctactcct tcgcatgctc 2040

cccaccacaa agacaaagct tcatgttgca agtcggaaaa tgctccccag ctgtgttgct 2100

ctgatattga gtcacaaaag aaatgtacga gtcaatcatg ctcgtccgag gtgtgtgttc 2160

caagatgtca acctgtctcc tcaggatcaa agtcatgtgg aaataatcag tgcccagact 2220

ccgttgaaaa tagtggtttt cattctcatc cccgtcctca atgctgctcg tcgaagatgg 2280

ctgctaaagc atgccaatct gcagtttcag aatcaaagtc atgtggaaat aatcagtgcc 2340

cagactccgt tgaaaatagt gaatcaaagt catgtggaaa taacaattgc tcggagtcca 2400

tttacaagag tagttgtcat tctttaacaa actctctagt atgttcttcc aagatgtctg 2460

ctccacaatg tcattctgcc acttcaagca acaaatcatg tggaagtacc aagtgctccg 2520

acttcagtga caaaaaatgt tgccaatatg acaaaattcc tcaaacgtgc tctaccaaga 2580

agtctgctcc aggatgtcaa tctgcagttt ctgggtctaa atcatgtgga gatagcaagt 2640

gttcagactc gaaagacaat agtagccatc cttcacatcc cgatcatcaa acatgcacgt 2700

ctaagttgtg tgctccacaa agccaatctg caacttcaag ctccaggaca tgtggaaata 2760

tgaagtgctc ggacaccaat agcaagaatt cttgttattc acataccaac tctgaatcat 2820

gctcttcaaa gatgtctggt ccatcatgca aaactgctaa ttcaggttca aggtcatgca 2880

gaaataagaa gtgcctagac tctgcaaccg agaacagttt tcattcacca cttactaatc 2940

cactcagtgg ggaaaagctt ttggagaaga aaagcttgga tttagtccga aaagataagg 3000

aatcaaatca tgatcttagt catggttgct ctgacgagga acatgatcat ctaaatttag 3060

acaaggcaca tgacagttgt gccttacaag aatgttgtta ttctgttcaa ggcaataaaa 3120

ctgatgtatc agaaactgga atccaggaag ctgctcattg tgacagcatc aatcaaacat 3180

gccaaactgc aatttcagga tcaatgacat gcggaaataa taagagtctg gactctctaa 3240

gcatccatgg ttgtcattcg catgataatc cactccacaa ggagaacaac ttggagcaga 3300

aaagcttgga tgttgttgga gaaggtataa aatcacctca tgctgtcggt catggctgtt 3360

cggacaagga acacgatcac tcgcatccag aaaaggcgta tgacagttgt gcaacagacg 3420

attgttgttt ttcagttcaa gtccatggca ttgacgacgt atcaagaagt gaaattcaag 3480

aaactgctca ttgtgacagc acaaaacaga gcacggtcat ccccagcagc tgcaaacatg 3540

aaccaaaaga tcaggtaaat cactgtggat ctcactctaa aagtattcca actgatgaag 3600

aactagccaa gctggttaga agatgctgca aatacaaacc atgccacgac gtccgttctg 3660

gctgcaggaa gcatgctgca gaatgtggtc caaccgttcg atcaaccatc aatatcttac 3720

gggacaacca tcatcatcat ctagactgca gtggtcgtaa ggtttgttcg ctgttggaga 3780

agagacacat tggtggatgc tgtgacagct tcagaaaaga atgttgtgcc aagaacaatc 3840

accttggagc aagttttgga ggaggtttat cagaaattga ttgggcatcg cttgggctaa 3900

tgccagttgt tagtgtacgt aacgaaggta agaagaaact tgttatcata gatatatgaa 3960

aaatcaactc atggataata aaggcgtagc accaaatatg tcggagtagc cccacccagt 4020

agatggaaaa gccagtagta ccaatcaagg aagccttgaa cggagcaggt tgcggtgaat 4080

tataatgtgc agaattgtgg ggtataaatt agatgattac aattgtggta aagtgtaatt 4140

atttattgta ctaattctat gtagctatct cccccgaata atggatccac tatgagaatt 4200

tatttagacc cg 4212

<210> 42

<211> 1274

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 42

Met Val Glu Ser Glu Lys Met Asn Asp Thr Lys Asn Leu Ser Lys Ser

1 5 10 15

Tyr Phe Asp Val Leu Gly Ile Cys Cys Thr Ser Glu Val Val Leu Val

20 25 30

Glu Lys Ile Leu Lys Asn Leu Glu Gly Val Lys Glu Val Ser Val Ile

35 40 45

Val Thr Thr Lys Thr Val Ile Val Ile His Asp Ser Leu Leu Ile Ser

50 55 60

Gln Gln Gln Ile Val Lys Ala Leu Asn Gln Ala Arg Leu Glu Ala Ser

65 70 75 80

Ile Arg Val Lys Gly Glu Lys Asn Tyr Gln Lys Lys Trp Pro Ser Pro

85 90 95

Phe Ala Ile Gly Ser Gly Ile Leu Leu Gly Leu Ser Phe Leu Lys Tyr

100 105 110

Phe Phe Ala Pro Phe Gln Trp Leu Ala Leu Ala Ala Val Ala Val Gly

115 120 125

Ile Pro Pro Ile Ile Phe Arg Gly Val Ala Ala Val Arg Asn Leu Thr

130 135 140

Leu Asp Ile Asn Ile Leu Val Leu Ile Ala Val Thr Gly Ser Ile Val

145 150 155 160

Leu His Asp Tyr Trp Glu Ala Gly Thr Ile Val Phe Leu Phe Thr Ile

165 170 175

Ala Glu Trp Leu Glu Ser Arg Ala Ser His Lys Ala Thr Ala Ala Met

180 185 190

Ser Ser Leu Val Asn Ile Val Pro Pro Thr Ala Val Leu Ala Glu Ser

195 200 205

Gly Glu Val Val Asn Val Asp Glu Val Lys Leu Asn Ser Ile Leu Ala

210 215 220

Val Lys Ala Gly Glu Thr Ile Pro Ile Asp Gly Val Val Met Glu Gly

225 230 235 240

Glu Cys Asp Val Asp Glu Lys Thr Leu Thr Gly Glu Ser Phe Pro Val

245 250 255

Ser Lys Gln Ile Asp Ser Thr Val Trp Ala Gly Thr Thr Asn Leu Asn

260 265 270

Ala Ile Val Ala Ile Ser Ala Ser Leu Ala Ile Val Pro Thr Ala Leu

275 280 285

Arg Val His Asn Arg Asn Glu Trp Tyr Arg Leu Ala Leu Val Thr Leu

290 295 300

Val Ser Ala Cys Pro Cys Ala Leu Val Leu Ser Thr Pro Val Ala Met

305 310 315 320

Cys Cys Ala Leu Ser Lys Ala Ala Thr Ser Gly Leu Leu Phe Lys Gly

325 330 335

Ala Glu Tyr Leu Glu Thr Leu Ala Lys Ile Lys Ile Met Ala Phe Asp

340 345 350

Lys Thr Gly Thr Ile Thr Arg Gly Glu Phe Met Val Thr Glu Phe Lys

355 360 365

Val Ser Ser Ile Glu Ser Lys Ser Gly His Pro Met Ala Ala Ala Leu

370 375 380

Val Asp Tyr Ala Gln Ser Asn Ser Val Glu Pro Lys Pro Asp Arg Val

385 390 395 400

Glu Gln Phe Gln Asn Phe Pro Gly Glu Gly Ile Phe Gly Arg Ile Asp

405 410 415

Gly Met Glu Ile Tyr Val Gly Asn Arg Lys Ile Ser Ser Arg Ala Gly

420 425 430

Cys Thr Thr Val Pro Glu Ile Glu Gly Asp Ser Phe Gln Gly Lys Ser

435 440 445

Val Gly Tyr Ile Phe Leu Gly Ser Ser Pro Ala Gly Ile Phe Gly Leu

450 455 460

Ser Asp Val Cys Arg Ile Gly Val Lys Glu Ala Met Arg Glu Leu Lys

465 470 475 480

Gln Met Gly Ile Lys Thr Ala Met Leu Thr Gly Asp Cys Tyr Ala Ala

485 490 495

Ala Asn His Val Gln Asp Gln Lys Glu Ala Pro Thr Ala Met Ile Gly

500 505 510

Asp Gly Leu Asn Asp Ala Pro Ala Leu Ala Thr Ala Asp Ile Gly Ile

515 520 525

Ser Met Gly Ile Ser Gly Ser Ala Leu Ala Lys Glu Thr Gly His Val

530 535 540

Ile Leu Met Thr Asn Asp Ile Gly Arg Ile Pro Lys Ala Ala Arg Leu

545 550 555 560

Ala Arg Arg Val Arg Arg Lys Ile Val Glu Asn Met Ile Ile Ser Val

565 570 575

Val Thr Lys Ala Ala Ile Val Ala Leu Ala Ile Ala Gly Tyr Pro Leu

580 585 590

Val Trp Ala Ala Val Leu Ala Asp Thr Gly Thr Cys Leu Leu Val Ile

595 600 605

Leu Asn Ser Met Leu Leu Leu Arg Gly Gly Thr Arg Arg His Gly Lys

610 615 620

Lys Cys Trp Arg Ser Ser Thr Pro Ser His Ala Pro His His Lys Asp

625 630 635 640

Lys Ala Ser Cys Cys Lys Ser Glu Asn Ala Pro Gln Leu Cys Cys Ser

645 650 655

Asp Ile Glu Ser Gln Lys Lys Cys Thr Ser Gln Ser Cys Ser Ser Glu

660 665 670

Val Cys Val Pro Arg Cys Gln Pro Val Ser Ser Gly Ser Lys Ser Cys

675 680 685

Gly Asn Asn Gln Cys Pro Asp Ser Val Glu Asn Ser Gly Phe His Ser

690 695 700

His Pro Arg Pro Gln Cys Cys Ser Ser Lys Met Ala Ala Lys Ala Cys

705 710 715 720

Gln Ser Ala Val Ser Glu Ser Lys Ser Cys Gly Asn Asn Gln Cys Pro

725 730 735

Asp Ser Val Glu Asn Ser Glu Ser Lys Ser Cys Gly Asn Asn Asn Cys

740 745 750

Ser Glu Ser Ile Tyr Lys Ser Ser Cys His Ser Leu Thr Asn Ser Leu

755 760 765

Val Cys Ser Ser Lys Met Ser Ala Pro Gln Cys His Ser Ala Thr Ser

770 775 780

Ser Asn Lys Ser Cys Gly Ser Thr Lys Cys Ser Asp Phe Ser Asp Lys

785 790 795 800

Lys Cys Cys Gln Tyr Asp Lys Ile Pro Gln Thr Cys Ser Thr Lys Lys

805 810 815

Ser Ala Pro Gly Cys Gln Ser Ala Val Ser Gly Ser Lys Ser Cys Gly

820 825 830

Asp Ser Lys Cys Ser Asp Ser Lys Asp Asn Ser Ser His Pro Ser His

835 840 845

Pro Asp His Gln Thr Cys Thr Ser Lys Leu Cys Ala Pro Gln Ser Gln

850 855 860

Ser Ala Thr Ser Ser Ser Arg Thr Cys Gly Asn Met Lys Cys Ser Asp

865 870 875 880

Thr Asn Ser Lys Asn Ser Cys Tyr Ser His Thr Asn Ser Glu Ser Cys

885 890 895

Ser Ser Lys Met Ser Gly Pro Ser Cys Lys Thr Ala Asn Ser Gly Ser

900 905 910

Arg Ser Cys Arg Asn Lys Lys Cys Leu Asp Ser Ala Thr Glu Asn Ser

915 920 925

Phe His Ser Pro Leu Thr Asn Pro Leu Ser Gly Glu Lys Leu Leu Glu

930 935 940

Lys Lys Ser Leu Asp Leu Val Arg Lys Asp Lys Glu Ser Asn His Asp

945 950 955 960

Leu Ser His Gly Cys Ser Asp Glu Glu His Asp His Leu Asn Leu Asp

965 970 975

Lys Ala His Asp Ser Cys Ala Leu Gln Glu Cys Cys Tyr Ser Val Gln

980 985 990

Gly Asn Lys Thr Asp Val Ser Glu Thr Gly Ile Gln Glu Ala Ala His

995 1000 1005

Cys Asp Ser Ile Asn Gln Thr Cys Gln Thr Ala Ile Ser Gly Ser Met

1010 1015 1020

Thr Cys Gly Asn Asn Lys Ser Leu Asp Ser Leu Ser Ile His Gly Cys

1025 1030 1035 1040

His Ser His Asp Asn Pro Leu His Lys Glu Asn Asn Leu Glu Gln Lys

1045 1050 1055

Ser Leu Asp Val Val Gly Glu Gly Ile Lys Ser Pro His Ala Val Gly

1060 1065 1070

His Gly Cys Ser Asp Lys Glu His Asp His Ser His Pro Glu Lys Ala

1075 1080 1085

Tyr Asp Ser Cys Ala Thr Asp Asp Cys Cys Phe Ser Val Gln Val His

1090 1095 1100

Gly Ile Asp Asp Val Ser Arg Ser Glu Ile Gln Glu Thr Ala His Cys

1105 1110 1115 1120

Asp Ser Thr Lys Gln Ser Thr Val Ile Pro Ser Ser Cys Lys His Glu

1125 1130 1135

Pro Lys Asp Gln Val Asn His Cys Gly Ser His Ser Lys Ser Ile Pro

1140 1145 1150

Thr Asp Glu Glu Leu Ala Lys Leu Val Arg Arg Cys Cys Lys Tyr Lys

1155 1160 1165

Pro Cys His Asp Val Arg Ser Gly Cys Arg Lys His Ala Ala Glu Cys

1170 1175 1180

Gly Pro Thr Val Arg Ser Thr Ile Asn Ile Leu Arg Asp Asn His His

1185 1190 1195 1200

His His Leu Asp Cys Ser Gly Arg Lys Val Cys Ser Leu Leu Glu Lys

1205 1210 1215

Arg His Ile Gly Gly Cys Cys Asp Ser Phe Arg Lys Glu Cys Cys Ala

1220 1225 1230

Lys Asn Asn His Leu Gly Ala Ser Phe Gly Gly Gly Leu Ser Glu Ile

1235 1240 1245

Asp Trp Ala Ser Leu Gly Leu Met Pro Val Val Ser Val Arg Asn Glu

1250 1255 1260

Gly Lys Lys Lys Leu Val Ile Ile Asp Ile

1265 1270

<210> 43

<211> 1296

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 43

atgggaagtg aagctttgga gttttttgct tgtgataata cttttcgata tgaaccaaaa 60

cgcataacaa tggaggagag tgatgatctt cccattaatg atggttcttg gtttgaagaa 120

gagattgatg ttgatctcaa atggtctttt gctttgaaca gtgtgctgca caaaggaaca 180

agcgagtacc aagatatcgc ccttttggac accaagcatt tcgggaaggt attggtgata 240

gatgggaaga tgcagagtgc agaagtggat gaatttatat atcatgaatg cttaattcat 300

ccagctctct tgtgtcaccc taacccaaaa aatgttttta taatgggagg tggtgaagga 360

tctgcagcaa gggaagctct cagacacaaa tctatggaga aagttgtcat gtgtgacatt 420

gatcaggagg ttgtggattt ctgcaggaag catctaacag caaaccatga ggcttttcgt 480

aacaagaagc ttaacttgat cattaacgat gccaaagctg agctagagca gaggcaagaa 540

aaatttgata ttatagttgg agatttagct gatccagttg aaggaggacc ttgttaccaa 600

ctctacacca aatctttcta cgaaaatatc cttaaaccta agctcaacga caatggcatc 660

ttcgttactc aggctggacc agcaggggtt ttcacacaca aggaagtttt ctcatccatt 720

tacaacacaa tcaagcaggt cttcaaatat gtgctggcat atacagctca tgtaccctct 780

tttgctgata catggggatg ggttatggct tctgaccaac cattctgtct tgatgctgga 840

aaactggaca agaaaatagc tgaaagaatt gaaggggaac tcttatatct taatggtgct 900

tctttcttct cttccaccat cttgaataag accgttgcca aaacgctgaa gaatgagact 960

catgtgtaca ctgaagatga tgcaaggttc attcatggac atggagtggc attcagaaat 1020

tgaggcaaca aattggtggg ggaactgtac agtcaagtgt ttggaaacaa agaaatatga 1080

agtagggggg tgttgaaagt tgaaacattg agagttctct caaagaaagt tgttagtagc 1140

ttttggtttg gttcagcaaa ataggcttag gcttcttctg gttgtcctat gactatacat 1200

ttactatttt atgtactgct cagaaatgaa aaacaaaaaa agaccttttt ccaatcatat 1260

gtcatatttt acatgtttgg taaatattat tcttat 1296

<210> 44

<211> 340

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 44

Met Gly Ser Glu Ala Leu Glu Phe Phe Ala Cys Asp Asn Thr Phe Arg

1 5 10 15

Tyr Glu Pro Lys Arg Ile Thr Met Glu Glu Ser Asp Asp Leu Pro Ile

20 25 30

Asn Asp Gly Ser Trp Phe Glu Glu Glu Ile Asp Val Asp Leu Lys Trp

35 40 45

Ser Phe Ala Leu Asn Ser Val Leu His Lys Gly Thr Ser Glu Tyr Gln

50 55 60

Asp Ile Ala Leu Leu Asp Thr Lys His Phe Gly Lys Val Leu Val Ile

65 70 75 80

Asp Gly Lys Met Gln Ser Ala Glu Val Asp Glu Phe Ile Tyr His Glu

85 90 95

Cys Leu Ile His Pro Ala Leu Leu Cys His Pro Asn Pro Lys Asn Val

100 105 110

Phe Ile Met Gly Gly Gly Glu Gly Ser Ala Ala Arg Glu Ala Leu Arg

115 120 125

His Lys Ser Met Glu Lys Val Val Met Cys Asp Ile Asp Gln Glu Val

130 135 140

Val Asp Phe Cys Arg Lys His Leu Thr Ala Asn His Glu Ala Phe Arg

145 150 155 160

Asn Lys Lys Leu Asn Leu Ile Ile Asn Asp Ala Lys Ala Glu Leu Glu

165 170 175

Gln Arg Gln Glu Lys Phe Asp Ile Ile Val Gly Asp Leu Ala Asp Pro

180 185 190

Val Glu Gly Gly Pro Cys Tyr Gln Leu Tyr Thr Lys Ser Phe Tyr Glu

195 200 205

Asn Ile Leu Lys Pro Lys Leu Asn Asp Asn Gly Ile Phe Val Thr Gln

210 215 220

Ala Gly Pro Ala Gly Val Phe Thr His Lys Glu Val Phe Ser Ser Ile

225 230 235 240

Tyr Asn Thr Ile Lys Gln Val Phe Lys Tyr Val Leu Ala Tyr Thr Ala

245 250 255

His Val Pro Ser Phe Ala Asp Thr Trp Gly Trp Val Met Ala Ser Asp

260 265 270

Gln Pro Phe Cys Leu Asp Ala Gly Lys Leu Asp Lys Lys Ile Ala Glu

275 280 285

Arg Ile Glu Gly Glu Leu Leu Tyr Leu Asn Gly Ala Ser Phe Phe Ser

290 295 300

Ser Thr Ile Leu Asn Lys Thr Val Ala Lys Thr Leu Lys Asn Glu Thr

305 310 315 320

His Val Tyr Thr Glu Asp Asp Ala Arg Phe Ile His Gly His Gly Val

325 330 335

Ala Phe Arg Asn

340

<210> 45

<211> 1122

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 45

atggatcatc atcctgctaa ctatgatctt gatgagaaat ctgatctcaa atatgttgat 60

tgggtcactt tcaagagcca ttcctccaaa aaagttgaga gcttgattct agccaggttt 120

cctaggtggg agtattggaa actttgcctc gtaaacaaga gatgttcgat gcttctaaag 180

agcggtgaga tatttgagat tcgtaaagag attggattta aagaaccttc agtattcatg 240

ttggcaagtg gggagactaa ctggtgggcg tttgatcgag agttcaagta ccggaggaaa 300

ttgcccgatt taccatcaga tgagtgcttc ccatttagtg ataaggaatc actttgtgta 360

ggcacacatt tgcttgtttc gggcagggaa atcgatggtc tcgttatttg gaggttcgaa 420

ttagcaacaa atagttggca caaaggcccc tctatggtta atccgaggtg tttatttgca 480

tcagcaactt gtggtaccac tgcttttgtt gctggtggtg ttggtattat gccgaataac 540

gaggtctatg acacagctga gagatacaac cccgatagta gattgtggga gccactaccg 600

aggatgaaga ggaatagaaa actttgttca ggatgctaca tggacaacag attctacgtg 660

atcgggggaa ggaataagaa cggtgagtta acgtgtggag aattcttcga cgaggctaag 720

aacaaatggg agctgattcc ggacatgttg aaggatgatc cggtacagga ctaccattca 780

ccgcccctcc ttgctgtcgt gaataacgag ctatactcgc tcgaggcttc ttcgaatcag 840

cttaaggttt acttgaaaaa aaccaacact tggaaacagt tagggccagt tccagtacga 900

gctgattcaa acaggggatg gggcattgca ttcaagtcac tggggaatga acttctagta 960

ataggagctg cttcgtcgtc agtgtcttat tctggtaatt ccatggctat atatacttgc 1020

tgtcctgatc ctgaggcaat ggagttgcag tggaaaccac ttgacagtgg tcgaaatcga 1080

cttagtagtt ttatcttaaa ctgttcagtc atggtagctt ga 1122

<210> 46

<211> 373

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 46

Met Asp His His Pro Ala Asn Tyr Asp Leu Asp Glu Lys Ser Asp Leu

1 5 10 15

Lys Tyr Val Asp Trp Val Thr Phe Lys Ser His Ser Ser Lys Lys Val

20 25 30

Glu Ser Leu Ile Leu Ala Arg Phe Pro Arg Trp Glu Tyr Trp Lys Leu

35 40 45

Cys Leu Val Asn Lys Arg Cys Ser Met Leu Leu Lys Ser Gly Glu Ile

50 55 60

Phe Glu Ile Arg Lys Glu Ile Gly Phe Lys Glu Pro Ser Val Phe Met

65 70 75 80

Leu Ala Ser Gly Glu Thr Asn Trp Trp Ala Phe Asp Arg Glu Phe Lys

85 90 95

Tyr Arg Arg Lys Leu Pro Asp Leu Pro Ser Asp Glu Cys Phe Pro Phe

100 105 110

Ser Asp Lys Glu Ser Leu Cys Val Gly Thr His Leu Leu Val Ser Gly

115 120 125

Arg Glu Ile Asp Gly Leu Val Ile Trp Arg Phe Glu Leu Ala Thr Asn

130 135 140

Ser Trp His Lys Gly Pro Ser Met Val Asn Pro Arg Cys Leu Phe Ala

145 150 155 160

Ser Ala Thr Cys Gly Thr Thr Ala Phe Val Ala Gly Gly Val Gly Ile

165 170 175

Met Pro Asn Asn Glu Val Tyr Asp Thr Ala Glu Arg Tyr Asn Pro Asp

180 185 190

Ser Arg Leu Trp Glu Pro Leu Pro Arg Met Lys Arg Asn Arg Lys Leu

195 200 205

Cys Ser Gly Cys Tyr Met Asp Asn Arg Phe Tyr Val Ile Gly Gly Arg

210 215 220

Asn Lys Asn Gly Glu Leu Thr Cys Gly Glu Phe Phe Asp Glu Ala Lys

225 230 235 240

Asn Lys Trp Glu Leu Ile Pro Asp Met Leu Lys Asp Asp Pro Val Gln

245 250 255

Asp Tyr His Ser Pro Pro Leu Leu Ala Val Val Asn Asn Glu Leu Tyr

260 265 270

Ser Leu Glu Ala Ser Ser Asn Gln Leu Lys Val Tyr Leu Lys Lys Thr

275 280 285

Asn Thr Trp Lys Gln Leu Gly Pro Val Pro Val Arg Ala Asp Ser Asn

290 295 300

Arg Gly Trp Gly Ile Ala Phe Lys Ser Leu Gly Asn Glu Leu Leu Val

305 310 315 320

Ile Gly Ala Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ser Gly Asn Ser Met Ala

325 330 335

Ile Tyr Thr Cys Cys Pro Asp Pro Glu Ala Met Glu Leu Gln Trp Lys

340 345 350

Pro Leu Asp Ser Gly Arg Asn Arg Leu Ser Ser Phe Ile Leu Asn Cys

355 360 365

Ser Val Met Val Ala

370

<210> 47

<211> 1101

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 47

actcatggtt tcaggtggga gttgttctga gcatgggtgt caacagcgcc tatgctctag 60

gatatgcagg cacaattatg gttcctttgg gttggactgg tggtgtaatt ggtcttgttt 120

tatcaactgt tatatcatta tatgcaagta ctcttatagc caagattcat gaatatgtat 180

gcaaatcttt tcttgataaa tattggattc atcatttagg gggacaagcc ttaaaggctt 240

tctatattct ctttagggat gaccatcaga tgaagctacc atacttcatc gcgattgctg 300

gattagcatg cgtcttattt gccattgctg ttcccacctt gtcatcacta aggatttggc 360

tggtgatttc atcagtgttc agtctaattt atctcagtat agcatttgcg ttgtctctta 420

aagatggtat gaaggctcct cctagggact atagcattcc aggatcaaag ataaacagaa 480

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ctaacatcag tgcattcttg caagctatca tcactttgca tatatttgca agtccaacat 720

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<210> 48

<211> 348

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 48

Met Gly Val Asn Ser Ala Tyr Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Thr Ile Met

1 5 10 15

Val Pro Leu Gly Trp Thr Gly Gly Val Ile Gly Leu Val Leu Ser Thr

20 25 30

Val Ile Ser Leu Tyr Ala Ser Thr Leu Ile Ala Lys Ile His Glu Tyr

35 40 45

Val Cys Lys Ser Phe Leu Asp Lys Tyr Trp Ile His His Leu Gly Gly

50 55 60

Gln Ala Leu Lys Ala Phe Tyr Ile Leu Phe Arg Asp Asp His Gln Met

65 70 75 80

Lys Leu Pro Tyr Phe Ile Ala Ile Ala Gly Leu Ala Cys Val Leu Phe

85 90 95

Ala Ile Ala Val Pro Thr Leu Ser Ser Leu Arg Ile Trp Leu Val Ile

100 105 110

Ser Ser Val Phe Ser Leu Ile Tyr Leu Ser Ile Ala Phe Ala Leu Ser

115 120 125

Leu Lys Asp Gly Met Lys Ala Pro Pro Arg Asp Tyr Ser Ile Pro Gly

130 135 140

Ser Lys Ile Asn Arg Ile Phe Thr Thr Ala Gly Ala Ala Ala Asn Ile

145 150 155 160

Ala Thr Val Arg Ala Pro Val Val Asp Asn Ser Leu Gly Ala Val Pro

165 170 175

Val His Ala Val Thr Tyr Ile Gly Tyr Trp Ala Tyr Gly Ser Ser Ser

180 185 190

Ser Ser Tyr Leu Leu Asn Asn Val Ser Gly Pro Val Trp Val Lys Ala

195 200 205

Leu Ala Asn Ile Ser Ala Phe Leu Gln Ala Ile Ile Thr Leu His Ile

210 215 220

Phe Ala Ser Pro Thr Tyr Glu Phe Leu Asp Thr Lys Tyr Gly Ile Lys

225 230 235 240

Gly Ser Ala Val Ala Val Arg Asn Leu Ala Phe Arg Thr Leu Val Arg

245 250 255

Gly Gly Tyr Ile Ala Ile Thr Thr Phe Leu Ser Ala Leu Leu Pro Phe

260 265 270

Leu Gly Asp Phe Met Ser Leu Thr Gly Ala Ile Ser Ser Ile Pro Leu

275 280 285

Thr Phe Ile Leu Pro Asn His Met Tyr Leu Val Ala Met Lys Lys Gln

290 295 300

Leu Ser Ser Leu Gln Arg Ser Trp His Leu Leu Asn Val Val Leu Phe

305 310 315 320

Ser Val Ile Ser Ala Ala Ala Leu Val Ala Ala Phe Arg Leu Ile Ala

325 330 335

Val Asp Ser Lys Thr Tyr Asn Ala Phe Ala Asp Leu

340 345

<210> 49

<211> 1562

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 49

gaagaagtgg taaaattgat aagtgaaatt ggagggaaaa atgaacggag gagatatgaa 60

tcagcaacag caacagcagc agcaacaaca acagcagcaa caacaacaac agtggatggc 120

gatgcagcag tatcagcagc aatggatggc gatgcagtat ccagcagcag caatggcgat 180

gcagcaacag atgatgtatg gtcagcaata catgccttac agcaacatca acaacagcag 240

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actgacgagg aacttaggca atcctttaat cagtttggag aagtggtctc tgtgaaaata 1020

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gagaattttg tagctggatt tattttatgc ttagtgagtc caagatatgt taaacctaaa 1500

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aa 1562

<210> 50

<211> 395

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 50

Met Asp Gly Asp Ala Val Ser Ser Ser Ser Asn Gly Asp Ala Ala Thr

1 5 10 15

Asp Asp Val Trp Ser Ala Ile His Ala Leu Gln Gln His Gln Gln Gln

20 25 30

Gln Gln Lys Met Gln Gln Ser Pro Thr Gln Ile Gln Ser Ser Ser Glu

35 40 45

Asp Asn Lys Thr Ile Trp Ile Gly Asp Leu Gln Gln Trp Met Asp Glu

50 55 60

Ser Tyr Leu His Ser Cys Phe Ser Gln Ala Gly Glu Val Ile Ser Val

65 70 75 80

Lys Ile Ile Arg Asn Lys Gln Thr Gly Gln Ser Glu Arg Tyr Gly Phe

85 90 95

Val Glu Phe Asn Thr His Ala Ala Ala Glu Lys Val Leu Gln Ser Tyr

100 105 110

Asn Gly Thr Met Met Pro Asn Ala Glu Gln Pro Phe Arg Leu Asn Trp

115 120 125

Ala Gly Phe Ser Thr Gly Glu Lys Arg Ala Glu Thr Gly Ser Asp Phe

130 135 140

Ser Ile Phe Val Gly Asp Leu Ala Ser Asp Val Thr Asp Thr Met Leu

145 150 155 160

Arg Asp Thr Phe Ala Ser Arg Tyr Pro Ser Leu Lys Gly Ala Lys Val

165 170 175

Val Val Asp Ala Asn Thr Gly His Ser Lys Gly Tyr Gly Phe Val Arg

180 185 190

Phe Gly Asp Glu Ser Glu Arg Ser Arg Ala Met Thr Glu Met Asn Gly

195 200 205

Val Tyr Cys Ser Ser Arg Ala Met Arg Ile Gly Val Ala Thr Pro Lys

210 215 220

Lys Pro Ser Ala Gln Gln Gln Tyr Ser Ser Gln Ala Val Ile Leu Ser

225 230 235 240

Gly Gly Tyr Ala Ser Asn Gly Ala Ala Thr His Gly Ser Gln Ser Asp

245 250 255

Gly Asp Ser Ser Asn Thr Thr Ile Phe Val Gly Gly Leu Asp Ser Asp

260 265 270

Val Thr Asp Glu Glu Leu Arg Gln Ser Phe Asn Gln Phe Gly Glu Val

275 280 285

Val Ser Val Lys Ile Pro Ala Gly Lys Gly Cys Gly Phe Val Gln Phe

290 295 300

Ser Asp Arg Ser Ser Ala Gln Glu Ala Ile Gln Lys Leu Ser Gly Ala

305 310 315 320

Ile Ile Gly Lys Gln Ala Val Arg Leu Ser Trp Gly Arg Ser Pro Ala

325 330 335

Asn Lys Gln Met Arg Thr Asp Ser Gly Ser Gln Trp Asn Gly Gly Tyr

340 345 350

Asn Gly Arg Gln Asn Tyr Gly Gly Tyr Gly Tyr Gly Ala Ser Gln Asn

355 360 365

Gln Asp Ser Gly Met Tyr Ala Thr Gly Ala Ala Tyr Gly Ala Ser Ser

370 375 380

Asn Gly Tyr Gly Asn His Gln Gln Pro Val Ser

385 390 395

<210> 51

<211> 646

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 51

ggatccaaag agcaggccag cgatatggaa gctgatcaag aagaaagcac gggaagccca 60

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gaacatttta ggaatttagg aaatgcttgt tcgtcatttg ttttgtgtcc tagcctattg 300

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atatagctca tttatgttta tagggaaagg agaaaagaga gagtcacatc atggcaactg 420

cgacaccatt tgcagcctca agatttgcat cctcatttct gtagaggcca ctagaatgga 480

tatgactgct cattcgtcgg atttccattt ctcttgtctt atttccatct gctgcagata 540

aggatcgagg gagatcatct ctcttcgact ggctgatttt aagtcttggg cttcccgtgc 600

tttcttcttg atcagcttcc atatcgctgg cctgctcttt tctaga 646

<210> 52

<211> 604

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 52

ggatccgttt tggtcctttg cataaaattt gggtaaggaa aagaatcaat ccaaagccac 60

cgaaattcaa cagtaggaca agtctcagtg tttgcatctg caaaaccatt ccaaatttca 120

caatccacga aactgtgtaa caataactaa aacataacga aataaatact aggagtataa 180

tctataggca caaaattgaa gttgtgcatg ttctttactt gaacatttta ggaatttagg 240

aaatgcttgt tcgtcatttg ttttgtgtcc tagcctattg tttattgttt gtttttatct 300

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tagggaaagg agaaaagaga gagtcacatc atggatgcac aacttcaatt ttgtgcctat 420

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tcggtggctt tggattgatt cttttcctta cccaaatttt atgcaaagga ccaaaacgtc 600

taga 604

<210> 53

<211> 603

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 53

ggatccaaag atttcaagga ccttatttat gctcccaaac gaggtcacaa tcctatgatt 60

ataaacagcc tccacagcag tttgagtgct ttgatattgt gccttgacga acttagctgt 120

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atgcttgttc gtcatttgtt ttgtgtccta gcctattgtt tattgtttgt ttttatcttc 300

actttagtga ggatacatat tctgagcaca ctctgaaaat atagctcatt tatgtttata 360

gggaaaggag aaaagagaga gtcacatcat ggcaagcttg gaagcttgca ctagttatga 420

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ataatcatag gattgtgacc tcgtttggga gcataaataa ggtccttgaa atctttgtct 600

aga 603

<210> 54

<211> 665

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 54

ggatccgtgt caacctcttc acttcttctt gctgctcaac ttgccttcac ggcaataggt 60

gctttcttca tagtgaagct gaaattcaca ccctactcta tcaatgcagt ggttctgttg 120

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agtagagctt atatttactc tttgttcttt acttgaacat tttaggaatt taggaaatgc 240

ttgttcgtca tttgttttgt gtcctagcct attgtttatt gtttgttttt atcttcactt 300

tagtgaggat acatattctg agcacactct gaaaatatag ctcatttatg tttataggga 360

aaggagaaaa gagagagtca catcatggca aagaaagata aacctttagt actagtgagg 420

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ctaga 665

<210> 55

<211> 600

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 55

ggatccacac catctaaaac aaacgccaat gagttgattg gttgtgtacc agcgacaaac 60

tggcgaagga gcacaaggta aaaagaacag ttaaagatag tgaaacaaaa gaagaacaaa 120

ttgaaacaaa catatagtac tactatttat tgaatgtata ccgggatggc aatggttatg 180

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ggaaaggaga aaagagagag tcacatcatg gcaatcaaag gacaaaaatg ttatccgtct 420

cataaccatt gccatcccgg tatacattca ataaatagta gtactatatg tttgtttcaa 480

tttgttcttc ttttgtttca ctatctttaa ctgttctttt taccttgtgc tccttcgcca 540

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<210> 56

<211> 687

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 56

ggatccatgg gctgatgttc atggtttcaa tggggttcaa tgctgctgct agtgtaaggg 60

tgagcaatga gttaggagca ccacacccaa agtcagcagc attcttagtg tttgtggtga 120

cattcatttc atttctcata gctgtggtgg aagccataat tatgctgtgt ttgcgcaatg 180

tgatcagcta tgcattcact aagggttact ctttgttctt tacttgaaca ttttaggaat 240

ttaggaaatg cttgttcgtc atttgttttg tgtcctagcc tattgtttat tgtttgtttt 300

tatcttcact ttagtgagga tacatattct gagcacactc tgaaaatata gctcatttat 360

gtttataggg aaaggagaaa agagagagtc acatcatggc aaagaaagat aaacctttag 420

tactagtgag gcttgaacgt ctgtgacatt taaagtccta agttagtttc tattgtaatt 480

gacccttagt gaatgcatag ctgatcacat tgcgcaaaca cagcataatt atggcttcca 540

ccacagctat gagaaatgaa atgaatgtca ccacaaacac taagaatgct gctgactttg 600

ggtgtggtgc tcctaactca ttgctcaccc ttacactagc agcagcattg aaccccattg 660

aaaccatgaa catcagccca ttctaga 687

<210> 57

<211> 3155

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成核酸构建体

<400> 57

aagcttccag aaggtaatta tccaagatgt agcatcaaga atccaatgtt tacgggaaaa 60

actatggaag tattatgtga gctcagcaag aagcagatca atatgcggca catatgcaac 120

ctatgttcaa aaatgaagaa tgtacagata caagatccta tactgccaga atacgaagaa 180

gaatacgtag aaattgaaaa agaagaacca ggcgaagaaa agaatcttga agacgtaagc 240

actgacgaca acaatgaaaa gaagaagata aggtcggtga ttgtgaaaga gacatagagg 300

acacatgtaa ggtggaaaat gtaagggcgg aaagtaacct tatcacaaag gaatcttatc 360

ccccactact tatcctttta tatttttccg tgtcattttt gcccttgagt tttcctatat 420

aaggaaccaa gttcggcatt tgtgaaaaca agaaaaaatt tggtgtaagc tattttcttt 480

gaagtactga ggatacaact tcagagaaat ttgtaagttt gtggatcctg caggctagcg 540

tgcactctag actcgacgaa ctgacgagct cgaatttccc cgatcgttca aacatttggc 600

aataaagttt cttaagattg aatcctgttg ccggtcttgc gatgattatc atataatttc 660

tgttgaatta cgttaagcat gtaataatta acatgtaatg catgacgtta tttatgagat 720

gggtttttat gattagagtc ccgcaattat acatttaata cgcgatagaa aacaaaatat 780

agcgcgcaaa ctatgataaa ttatcgcgcg cggtgtcatc tatgttacta gatcgggaat 840

tcctcgagca actattttta tgtatgcaag agtcagcata tgtataattg attcagaatc 900

gttttgacga gttcggatgt agtagtagcc attatttaat gtacatacta atcgtgaata 960

gtgaatatga tgaaacattg tatcttattg tataaatatc cataaacaca tcatgaaaga 1020

cactttcttt cacggtctga attaattatg atacaattct aatagaaaac gaattaaatt 1080

acgttgaatt gtatgaaatc taattgaaca agccaaccac gacgacgact aacgttgcct 1140

ggattgactc ggtttaagtt aaccactaaa aaaacggagc tgtcatgtaa cacgcggatc 1200

gagcaggtca cagtcatgaa gccatcaaag caaaagaact aatccaaggg ctgagatgat 1260

taattagttt aaaaattagt taacacgagg gaaaaggctg tctgacagcc aggtcacgtt 1320

atctttacct gtggtcgaaa tgattcgtgt ctgtcgattt taattatttt tttgaaaggc 1380

cgaaaataaa gttgtaagag ataaacccgc ctatataaat tcatatattt tcctctccgc 1440

tttgaattgt ctcgttgtcc tcctcacttt catcagccgt tttgaatctc cggcgacttg 1500

acagagaaga acaaggaaga agactaagag agaaagtaag agataatcca ggagattcat 1560

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gaactttctg gatctacttt atttgctgga tctcgatctt gttttctcaa tttccttgag 1680

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tgatggagag atccatgttc atgttacctg ggaaatgatt tgtatatgtg aattgaaatc 1860

tgaactgttg aagttagatt gaatctgaac actgtcaatg ttagattgaa tctgaacact 1920

gtttaaggtt agatgaagtt tgtgtataga ttcttcgaaa ctttaggatt tgtagtgtcg 1980

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ttttgtgtgt ttgcagctca taaaaggtac caaacaatga ttgaacaaga tggattgcac 2100

gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct atgactgggc acaacagaca 2160

atcggctgct ctgatgccgc cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt 2220

gtcaagaccg acctgtccgg tgccctgaat gaactgcagg acgaggcagc gcggctatcg 2280

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agggactggc tgctattggg cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct 2400

cctgccgaga aagtatccat catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg 2460

gctacctgcc cattcgacca ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg 2520

gaagccggtc ttgtcgatca ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc 2580

gaactgttcg ccaggctcaa ggcgcgcatg cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat 2640

ggcgatgcct gcttgccgaa tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac 2700

tgtggccggc tgggtgtggc ggaccgctat caggacatag cgttggctac ccgtgatatt 2760

gctgaagagc ttggcggcga atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct 2820

cccgattcgc agcgcatcgc cttctatcgc cttcttgacg agttcttttg agcgggactc 2880

tggcgatcgc cccgatcgtt caaacatttg gcaataaagt ttcttaagat tgaatcctgt 2940

tgccggtctt gcgatgatta tcatataatt tctgttgaat tacgttaagc atgtaataat 3000

taacatgtaa tgcatgacgt tatttatgag atgggttttt atgattagag tcccgcaatt 3060

atacatttaa tacgcgatag aaaacaaaat atagcgcgca aactaggata aattatcgcg 3120

cgcggtgtca tctatgttac tagatcggga ctagt 3155

<210> 58

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 58

tatgttattc actaaatcat agttaattaa tatatatttt tacctta 47

<210> 59

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 59

ttcacaacta gaagagcgtg agaccttttc aattagaatt cgtagga 47

<210> 60

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 60

tccttaaatc ggtcatggaa agtgagaata atcagggcaa taaaaaa 47

<210> 61

<211> 201

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 61

aattcaaacc tgtcaaaacc ataaaaagat attggacaaa tgcttttaat ataattgcct 60

tagattaatc tatatatata tatatatata tataggtaaa tacttacttg tatcagacat 120

ttatctttat aaatatgtta ttcactaaat catagttaat taatatatat ttttacctta 180

aggggccgtt tggttgggaa a 201

<210> 62

<211> 201

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 62

tatcgcacta ctattgaacc tatcgccttt tgagttttga tatataaata gcgacgaacg 60

tttcttagat aatggactca taacctccct cttcacaact agaagagcgt gagacctttt 120

caattagaat tcgtaggaaa aaatcaaaca caaattcaca aaacaaaaat ttattaagat 180

ttcagcgacc aagcccgtga g 201

<210> 63

<211> 214

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 63

tcgtttgaga aaaacggtcc ttaaatcggt catggaaagt gagaataatc agggcaataa 60

aaaagttgtt cataaggaag ttgatgttcg gaatctggga ttgaatgagc gacaagagtt 120

cattgatcga tttttcaggg ttgctgagga agataatgaa aagtttctga gaaagttcag 180

aaatcgaatt gacaagtaag tttccagtat tact 214

<210> 64

<211> 211

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 64

acaagccaca agctacacta tccaaagagc aggccagcga tatggaagct gagcaagaag 60

aaagcacggg aacccctaga cttcgaatca gccagtcgaa gagagatgat ctccctcgat 120

ccttatctgc agcagatggg aacaagacaa gtatgatctt tagcccatca ataacagaat 180

ctgcttgggg aatataagta atgcttacag t 211

<210> 65

<211> 200

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 65

atacgataag tcctcttaaa attaccatac ttataaagtc ataaaagtag aaagaaaaag 60

gacctctttg aaaattttta tataaaaggg gctgaaaata tgcgataatg tcaagtagca 120

gtttggcttc atatattggt ccatgttatc ggagttggta tttatgttaa atattaagta 180

cttttttatc atatctatca 200

<210> 66

<211> 202

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 66

actcaatttc tgccacttta ttataaatag taagttagta ttccattctt ggtcagaaag 60

gagtatggga aatcaaggtc tattttctta gttacagacc taacaatttc cattgtcacc 120

ttttttcagc tgttggcgtg tagaaacgga cctttgagca ttgttgatgc gtttgacttg 180

ttttagaaaa gaaaaaagaa tg 202

<210> 67

<211> 234

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 67

ggctagttgt ggcttggaag cttgcactag ttatgattgc tgtccaacct ctcacaattc 60

tatgctttta cacgcgaaaa gtcttgctat ccaccatcac agctaagttc gtcaaggcac 120

aatatcaaag cactcaaact gctgtggagg ctgtttataa tcataggatt gtgacctcgt 180

ttgggagcat aaataaggtc cttgaaatct ttgatgaggc acaggatgag tcaa 234

<210> 68

<211> 207

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 68

tttttaacca cctagtggat gctaatatgg tgtcagcatt agaagaaact aattcatgat 60

ttaagtttta taggttcaat ttttagattt ttaatattaa atatattata ttttaaagtt 120

atgagttaat atttgttgaa gtatttgtta agtataatta taataaattt taacactaat 180

atttatattt atgctctgcg tcaacag 207

<210> 69

<211> 207

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核苷酸

<400> 69

tttttaacca cctagtggat gctaatatgg tgtcagcatt agaagaaact aattcatgat 60

ttaagtttta taggttcaat ttttagattt ttaatattaa atatattata ttttaaagtt 120

atgagttaat atttgttgaa gtatttgtta agtataatta taataaattt taacactaat 180

atttatattt atgctctgcg tcaacag 207

<210> 70

<211> 2544

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 70

atggaattgg agaggggatt tccattgcta aaacagcagt acaaagcttt attaaagaag 60

aattttatag tggcatggag gaacaagaga gccacattcc ttcagttatt ctcatccctc 120

ttcttgatat tccttctttt tataatccaa aaagcaatag aagctcgctt ttcttcttcc 180

tcctcttacg agaacgtgcg ggacccacaa ccgttagtgt cgccgccaat cccgccctgt 240

gaacaaaaga acttcatccg tctcccctgc tatgattttg tttggagtgg ttctcagagt 300

ccaaaaatcg ggcagattgc gagcagaatt atggctaata atcctggccg gtctattcct 360

acctctaagg ttctgtcatt tagaacacga gatgaagtgg atgaatggct tttcaaaaac 420

cctatgcgtt gtcctggagc tctgcacttt gttgaaagga atgctagcat aatcagttat 480

ggcatacaga caaactccac tcctgttgtc aaacgaggag tctttgaaga tccaactttt 540

aaattccaaa tcccacttca actggcagca gaacgtgaaa ttgcaagatc tctgattgga 600

gatccaaact tcagttgggt tgtcagtttc aaagaatttg cacatcctgc ttttgaagtt 660

ttctcagcct tgggtgctgt tgggcctacc tttttcttgg ctgttgctat gtttggcttt 720

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atgatgggtc tctatgatac tgcctactgg ttgtcatggt tcacatggga gggattcatc 840

acacttatct cctctcttct catagttctc tttgggatga tgtttcaatt tgagtttttc 900

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ggttttgcat tcatgctgtc tgcttttatt agcaagtcat cttcaacaac aactgtgggt 1020

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gatgaagatg ttcttgaaga agagaacatt gttaaacgcc aagctacgca aggtgaagtt 1440

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gggcgtgcta ttatactgac cactcattca atggaagaag ctgacatctt aagtgaccgt 2100

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gacaaggaga agttgttgac ggacttcttt gctgagcttc aagatagaga gaaggaattt 2400

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gggctctcac ttcaagtaag ttga 2544

<210> 71

<211> 847

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 71

Met Glu Leu Glu Arg Gly Phe Pro Leu Leu Lys Gln Gln Tyr Lys Ala

1 5 10 15

Leu Leu Lys Lys Asn Phe Ile Val Ala Trp Arg Asn Lys Arg Ala Thr

20 25 30

Phe Leu Gln Leu Phe Ser Ser Leu Phe Leu Ile Phe Leu Leu Phe Ile

35 40 45

Ile Gln Lys Ala Ile Glu Ala Arg Phe Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Glu

50 55 60

Asn Val Arg Asp Pro Gln Pro Leu Val Ser Pro Pro Ile Pro Pro Cys

65 70 75 80

Glu Gln Lys Asn Phe Ile Arg Leu Pro Cys Tyr Asp Phe Val Trp Ser

85 90 95

Gly Ser Gln Ser Pro Lys Ile Gly Gln Ile Ala Ser Arg Ile Met Ala

100 105 110

Asn Asn Pro Gly Arg Ser Ile Pro Thr Ser Lys Val Leu Ser Phe Arg

115 120 125

Thr Arg Asp Glu Val Asp Glu Trp Leu Phe Lys Asn Pro Met Arg Cys

130 135 140

Pro Gly Ala Leu His Phe Val Glu Arg Asn Ala Ser Ile Ile Ser Tyr

145 150 155 160

Gly Ile Gln Thr Asn Ser Thr Pro Val Val Lys Arg Gly Val Phe Glu

165 170 175

Asp Pro Thr Phe Lys Phe Gln Ile Pro Leu Gln Leu Ala Ala Glu Arg

180 185 190

Glu Ile Ala Arg Ser Leu Ile Gly Asp Pro Asn Phe Ser Trp Val Val

195 200 205

Ser Phe Lys Glu Phe Ala His Pro Ala Phe Glu Val Phe Ser Ala Leu

210 215 220

Gly Ala Val Gly Pro Thr Phe Phe Leu Ala Val Ala Met Phe Gly Phe

225 230 235 240

Val Phe Gln Ile Asn Val Leu Ile Ile Glu Lys Glu Leu Lys Leu Arg

245 250 255

Gln Ala Met Thr Met Met Gly Leu Tyr Asp Thr Ala Tyr Trp Leu Ser

260 265 270

Trp Phe Thr Trp Glu Gly Phe Ile Thr Leu Ile Ser Ser Leu Leu Ile

275 280 285

Val Leu Phe Gly Met Met Phe Gln Phe Glu Phe Phe Leu Asn Asn Ser

290 295 300

Phe Ala Val Val Phe Leu Leu Phe Phe Leu Phe Gln Leu Asn Met Ile

305 310 315 320

Gly Phe Ala Phe Met Leu Ser Ala Phe Ile Ser Lys Ser Ser Ser Thr

325 330 335

Thr Thr Val Gly Phe Phe Thr Phe Ile Val Asp Leu Leu Ala Gln Gly

340 345 350

Leu Gln Leu Leu Ala Asp Ala Thr Ala Thr Pro Glu Asp Pro Gly Val

355 360 365

Ser Trp Ser Gly Arg Thr Lys Cys Ala Phe Asn Asp Thr Glu Cys Val

370 375 380

Ile Thr Met Asn Glu Ile Tyr Val Trp Leu Val Ser Thr Phe Phe Leu

385 390 395 400

Trp Phe Val Leu Ala Ile Tyr Leu Asp Asn Ile Ile Pro Asn Val Ser

405 410 415

Gly Val Arg Lys Ser Met Phe Tyr Phe Leu Asn Pro Gly Tyr Trp Thr

420 425 430

Gly Lys Gly Gly Asn Lys Val Lys Glu Gly Gly Ile Cys Ser Cys Thr

435 440 445

Gly Ser Val Pro Ser Leu Asp Ser Ile Ile Pro Asp Asp Glu Asp Val

450 455 460

Leu Glu Glu Glu Asn Ile Val Lys Arg Gln Ala Thr Gln Gly Glu Val

465 470 475 480

Asp Ser Asp Ile Ala Val Gln Leu His Gly Leu Val Lys Ile Phe Pro

485 490 495

Gly Thr Ala Lys Met Gly Cys Cys Lys Cys Gln Arg Lys Ser Pro Tyr

500 505 510

His Ala Leu Lys Gly Leu Trp Val Asn Leu Ala Lys Asp Gln Leu Phe

515 520 525

Cys Leu Leu Gly Pro Asn Gly Ala Gly Lys Thr Thr Ala Ile Asn Cys

530 535 540

Leu Thr Gly Ile Thr Pro Val Thr Ala Gly Asp Ala Leu Val Tyr Gly

545 550 555 560

Gln Ser Ile Arg Ser Ser Thr Gly Met Ser Asn Ile Arg Arg Met Ile

565 570 575

Gly Val Cys Pro Gln Phe Asp Ile Leu Trp Asp Ala Leu Ser Gly Gln

580 585 590

Glu His Leu His Leu Phe Ala Ser Ile Lys Gly Leu Pro Thr Ala Leu

595 600 605

Val Lys Glu Val Val Glu Lys Ser Leu Ala Glu Val Lys Leu Thr Asp

610 615 620

Ala Ala Arg Met Arg Ala Gly Ser Tyr Ser Gly Gly Met Lys Arg Arg

625 630 635 640

Leu Ser Val Ala Ile Ala Leu Ile Gly Glu Pro Lys Leu Leu Ile Leu

645 650 655

Asp Glu Pro Thr Thr Gly Met Asp Pro Ile Thr Arg Arg His Val Trp

660 665 670

Asp Ile Ile Glu Asp Ala Lys Lys Gly Arg Ala Ile Ile Leu Thr Thr

675 680 685

His Ser Met Glu Glu Ala Asp Ile Leu Ser Asp Arg Val Gly Ile Met

690 695 700

Ala Lys Gly Arg Leu Arg Cys Ile Gly Thr Ser Ile Arg Leu Lys Ser

705 710 715 720

Arg Phe Gly Thr Gly Phe Ile Ala Asn Val Ser Phe Ser Gly Gly Thr

725 730 735

Asn Gly Thr Pro Glu Thr Gly Asp Thr Leu Ser Thr Ser Gln Pro Glu

740 745 750

Ala Val Lys Gln Phe Phe Lys Ser Arg Leu Asp Val Val Pro Lys Glu

755 760 765

Glu Asn Lys Ser Phe Leu Thr Phe Ile Ile Pro His Asp Lys Glu Lys

770 775 780

Leu Leu Thr Asp Phe Phe Ala Glu Leu Gln Asp Arg Glu Lys Glu Phe

785 790 795 800

Gly Ile Thr Asp Ile Gln Leu Gly Leu Thr Thr Leu Glu Glu Val Phe

805 810 815

Leu Asn Ile Ala Arg Gln Ala Glu Leu Glu Asp Val Ala Glu Gly Ser

820 825 830

Phe Ala Thr Leu Thr Leu Asn Ser Gly Leu Ser Leu Gln Val Ser

835 840 845

<210> 72

<211> 3054

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 72

atggcggatg gtccagcgag cttctggact caagccaatg ctttgctcag aaagaatttg 60

acttttcaga tgggtagaaa ctttttcagc agtggatcaa ctctaaattc ctctgacatt 120

ttctatagct tagcctataa tatcttgggt tccgagtcgc agactgagct tatgaatttt 180

ctcgaggcag ctttcttctc caacttgcca gtctacaatc ttcgacctca atgtcctcca 240

aactctacat tttcttttcc attggaattt ggttctgtag ctgttcagca agagataagc 300

tgtgtgaaag gtatacactt gtggcgtaat agttcttatg agatcaatga tgagctttat 360

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ttctttaatt caaacagaaa tggtttcaat gtgaatattt ggtataactc tacgtataag 480

gatgacacag gcaatcgacc tatgtcattg acaagggttc ctcgttcagt gaatttggca 540

tcaaatgcct accttcagtc tttgcttgga tcttctgcaa gaatgctctt tgagtttgtc 600

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atcatgatga aaatgcatgg acttgcggat ggtccctatt ggatgatttc ttattcttat 780

tttttggtcg tatcttctat atacatgtta tgttttgtgg ttttcggctc attagtaggc 840

ttgaagttct ttttgcttaa tgattacagc atccagttcg tgttttactt catttacata 900

aacttgcaaa tgtcccttgc ttttctggtt gctgcgtttt tctcgaatgt taagacagct 960

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gagaaacctg atgttgctca ggagagggag agagttgaac agttactcga atcaagtaca 1440

actcatgcca tcatttgtga caatttgaaa aaggtttatc cagggaaaga cggaaaccct 1500

gagaaatttg cagtgagagg attgtcactt gctttgcctc aaggggaatg ttttggtatg 1560

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gagcacctac ttttctatgg aaggcttaaa aatcttaaag gagcagtcct gacacaagca 1800

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gggaaataca gtggaggtat gaagaggagg ctaagtgttg caatttcact gatcggagat 1920

cctaaggttg tctacatgga tgagcccagt actggactgg atccagcttc gcgacataac 1980

ttatggaatg ttgtcaagcg tgcaaagcaa gatagagcaa ttattctcac aacccattcc 2040

atggaagaag cagagcatct atgtgatcga ctaggaatat tcgttgatgg cagcttgcag 2100

tgcataggaa atcccaaaga ggcactttgg gtttgcaaat atcccatatc caattcagca 2160

tcagtagctc gatccattca taattttctc tcaaaattga atcactactc ttctcttcac 2220

atctgttctt cagcgatgat aggaacagaa gtagcaccta ctctctctgt cactagatct 2280

atcaacagtg ggagcaacct tgattccaat cacccttatt atcgacattc ttctgatgct 2340

ccagggatga ctctagttag cacaccattt gacggaagag aatactcaca atggagcaag 2400

tgcaacgaca tggtgacctc ttggttgctg aattcactca ccaaggagat aggagacaat 2460

ataatttatt ctagaactgc aaaggatctc tgcaacagcc ttgagcacat gtttggccaa 2520

tcgagtggag caaagctcta tcatctacag aaggagatct cagagttagc tcaaggaagt 2580

agtagcatag catgggcata ctgctacagg ctcaataagt ttcttgatga cttccaattt 2640

accaaatcac tcatttctca aggagcagtg aaggccaatg cattggtttc tgcaacaaaa 2700

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<210> 73

<211> 1017

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 73

Met Ala Asp Gly Pro Ala Ser Phe Trp Thr Gln Ala Asn Ala Leu Leu

1 5 10 15

Arg Lys Asn Leu Thr Phe Gln Met Gly Arg Asn Phe Phe Ser Ser Gly

20 25 30

Ser Thr Leu Asn Ser Ser Asp Ile Phe Tyr Ser Leu Ala Tyr Asn Ile

35 40 45

Leu Gly Ser Glu Ser Gln Thr Glu Leu Met Asn Phe Leu Glu Ala Ala

50 55 60

Phe Phe Ser Asn Leu Pro Val Tyr Asn Leu Arg Pro Gln Cys Pro Pro

65 70 75 80

Asn Ser Thr Phe Ser Phe Pro Leu Glu Phe Gly Ser Val Ala Val Gln

85 90 95

Gln Glu Ile Ser Cys Val Lys Gly Ile His Leu Trp Arg Asn Ser Ser

100 105 110

Tyr Glu Ile Asn Asp Glu Leu Tyr Lys Gly Tyr Arg Lys Gly Asn Pro

115 120 125

Glu Gly Lys Ile Asn Glu Ile Ile Ala Ala Tyr Asp Phe Phe Asn Ser

130 135 140

Asn Arg Asn Gly Phe Asn Val Asn Ile Trp Tyr Asn Ser Thr Tyr Lys

145 150 155 160

Asp Asp Thr Gly Asn Arg Pro Met Ser Leu Thr Arg Val Pro Arg Ser

165 170 175

Val Asn Leu Ala Ser Asn Ala Tyr Leu Gln Ser Leu Leu Gly Ser Ser

180 185 190

Ala Arg Met Leu Phe Glu Phe Val Lys Glu Met Pro Lys Ala Glu Thr

195 200 205

Lys Leu Lys Leu Asp Phe Ala Ser Leu Leu Gly Pro Leu Phe Phe Thr

210 215 220

Trp Val Val Leu Ile Ala Leu Val Tyr Glu Lys Gln Gln Lys Leu Arg

225 230 235 240

Ile Met Met Lys Met His Gly Leu Ala Asp Gly Pro Tyr Trp Met Ile

245 250 255

Ser Tyr Ser Tyr Phe Leu Val Val Ser Ser Ile Tyr Met Leu Cys Phe

260 265 270

Val Val Phe Gly Ser Leu Val Gly Leu Lys Phe Phe Leu Leu Asn Asp

275 280 285

Tyr Ser Ile Gln Phe Val Phe Tyr Phe Ile Tyr Ile Asn Leu Gln Met

290 295 300

Ser Leu Ala Phe Leu Val Ala Ala Phe Phe Ser Asn Val Lys Thr Ala

305 310 315 320

Thr Val Ile Gly Tyr Met Met Val Phe Ala Asn Gly Leu Leu Ala Ala

325 330 335

Phe Leu Phe Gln Phe Phe Leu Gln Asp Glu Ser Phe Pro Arg Gly Trp

340 345 350

Ile Ile Val Met Glu Ile Tyr Pro Gly Phe Ser Leu Phe Arg Gly Leu

355 360 365

Tyr Glu Phe Ser Gln Tyr Ala Phe Asn Ala Asn Tyr Met Gly Thr Asp

370 375 380

Gly Met Arg Trp Lys Asp Leu Ser Asp Gly Lys Asn Gly Met Lys Asp

385 390 395 400

Val Leu Ile Ile Met Ile Val Gln Trp Leu Val Phe Leu Phe Leu Ala

405 410 415

Tyr Tyr Ile Asp Gln Ile Ala Ser Ser Gly Lys Asp Pro Leu Phe Phe

420 425 430

Leu Trp Asn Ser Arg Lys Lys Pro Ser Pro Ser Phe Arg Lys His Ser

435 440 445

Leu Arg Arg Gln Gly Ser Lys Val Phe Val Gln Met Glu Lys Pro Asp

450 455 460

Val Ala Gln Glu Arg Glu Arg Val Glu Gln Leu Leu Glu Ser Ser Thr

465 470 475 480

Thr His Ala Ile Ile Cys Asp Asn Leu Lys Lys Val Tyr Pro Gly Lys

485 490 495

Asp Gly Asn Pro Glu Lys Phe Ala Val Arg Gly Leu Ser Leu Ala Leu

500 505 510

Pro Gln Gly Glu Cys Phe Gly Met Leu Gly Pro Asn Gly Ala Gly Lys

515 520 525

Thr Thr Phe Ile Asn Met Met Ile Gly Leu Val Lys Pro Ser Ser Gly

530 535 540

Thr Ala Tyr Ala Gln Gly Met Asp Ile Arg Lys Asp Met Asp Met Ile

545 550 555 560

Tyr Thr Asn Met Gly Val Cys Pro Gln His Asp Leu Leu Trp Glu Lys

565 570 575

Leu Thr Gly Arg Glu His Leu Leu Phe Tyr Gly Arg Leu Lys Asn Leu

580 585 590

Lys Gly Ala Val Leu Thr Gln Ala Val Glu Glu Ser Leu Lys Asn Val

595 600 605

Asn Leu Phe His Gly Gly Val Ala Asp Lys Gln Ala Gly Lys Tyr Ser

610 615 620

Gly Gly Met Lys Arg Arg Leu Ser Val Ala Ile Ser Leu Ile Gly Asp

625 630 635 640

Pro Lys Val Val Tyr Met Asp Glu Pro Ser Thr Gly Leu Asp Pro Ala

645 650 655

Ser Arg His Asn Leu Trp Asn Val Val Lys Arg Ala Lys Gln Asp Arg

660 665 670

Ala Ile Ile Leu Thr Thr His Ser Met Glu Glu Ala Glu His Leu Cys

675 680 685

Asp Arg Leu Gly Ile Phe Val Asp Gly Ser Leu Gln Cys Ile Gly Asn

690 695 700

Pro Lys Glu Ala Leu Trp Val Cys Lys Tyr Pro Ile Ser Asn Ser Ala

705 710 715 720

Ser Val Ala Arg Ser Ile His Asn Phe Leu Ser Lys Leu Asn His Tyr

725 730 735

Ser Ser Leu His Ile Cys Ser Ser Ala Met Ile Gly Thr Glu Val Ala

740 745 750

Pro Thr Leu Ser Val Thr Arg Ser Ile Asn Ser Gly Ser Asn Leu Asp

755 760 765

Ser Asn His Pro Tyr Tyr Arg His Ser Ser Asp Ala Pro Gly Met Thr

770 775 780

Leu Val Ser Thr Pro Phe Asp Gly Arg Glu Tyr Ser Gln Trp Ser Lys

785 790 795 800

Cys Asn Asp Met Val Thr Ser Trp Leu Leu Asn Ser Leu Thr Lys Glu

805 810 815

Ile Gly Asp Asn Ile Ile Tyr Ser Arg Thr Ala Lys Asp Leu Cys Asn

820 825 830

Ser Leu Glu His Met Phe Gly Gln Ser Ser Gly Ala Lys Leu Tyr His

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Leu Gln Lys Glu Ile Ser Glu Leu Ala Gln Gly Ser Ser Ser Ile Ala

850 855 860

Trp Ala Tyr Cys Tyr Arg Leu Asn Lys Phe Leu Asp Asp Phe Gln Phe

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Thr Lys Ser Leu Ile Ser Gln Gly Ala Val Lys Ala Asn Ala Leu Val

885 890 895

Ser Ala Thr Lys Thr Asp Gly Gln Thr Asn Gly Tyr Thr Glu Gly Asn

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Ser Ser Asn Gln Asn His Phe Phe Ser Lys Glu His Val Ser Glu Leu

915 920 925

Val Asn Ile Ile Lys Gln Val Gln Ile Gly Asn Gly Gly Asn Ala Gly

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Thr Glu Ile Asn Ala Asn Ala Val Ala Gly Ala Ser Glu His Met Cys

945 950 955 960

Phe Asp Ser Lys Ser Phe Leu Glu Val Arg Pro Leu His Ile Pro Leu

965 970 975

His Ile Ser Leu Pro Asn Ser Phe Gln Leu Phe Val Thr His Ile Gly

980 985 990

Arg Val Pro Leu Met Arg Arg Gly Gln Ala Phe Gly Glu Val Gly Asp

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Gly Leu Tyr Leu Pro Ser Leu Val Val

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<210> 74

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<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

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ttactgctgg attcactgtt atgcaaatgc agaaagaagg ttatgacagt tgatcagaag 120

tacactgttg gaacagaagt ccgtgtttcc tactcctaca tattgagcat catttgcacg 180

actatattat cgtgcactca tctcataatg ctcttgatat tgcaaaagag aaatggtgct 240

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ctgagaatct ggtggatttc cagcttcttt ctgtctattg ctcgtgcgac tcttgatgcc 420

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cttatttcat ctgcctgtct tctcggtatc tcaatccgag ggaagacagg cataattctt 540

gacatctcgg acagtacaac tgagccactt ttaaatggga agaatgaaaa ggatccagaa 600

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gtaaagggaa ggaatggagc caaaaaccca tctatctata aggccattta tgtatttgca 840

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caaactcgtg cagcttacca agatgctgat atatatcttc ttgatgaccc tttcagtgcc 1020

gttgatgctc acacaggcac gcacctcttt caggagtgct tgaggggggt tctcaaggac 1080

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gtgatgcaaa atggaagaat tgcacaagct ggaacttttg aagaactact gaaacaaaat 1200

attggatttg aagttctagt tggagcacac aaccaggctt tagaatcaat tttaacagtt 1260

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aacataaata cagaaactaa gcaggattca gaacacagtc tctgtgtaga gataacagaa 1380

aaagatggaa gacttgtgca ggatgaggag agagtaaaag gaagcattgg aaaggaagtt 1440

tactattctt acttgaccac catgaaaggt ggtgcctttg ttccaataat tcttatagcg 1500

caatcatcat ttcaagtgct tcagattgcc agcaactact ggatggcatc ggcattcccc 1560

acaggtgatg atgcagcacc aatagctgag aagatgaact tcatacttgt tgtttttgtg 1620

cttctcgctg ttggaagttc cctttgcgtg ctagtgcggg catcatttgt ggctataata 1680

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agtgttgtgg acttggaaat tgcactcaaa ttgggttggt gtgctctctc cattattcag 1860

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<211> 1104

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

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Met Ser Arg Cys Phe Trp Glu Asp Ala Ser Ile Ile Val Phe Leu Gly

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Lys Val Met Thr Val Asp Gln Lys Tyr Thr Val Gly Thr Glu Val Arg

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Cys Thr His Leu Ile Met Leu Leu Ile Leu Gln Lys Arg Asn Gly Ala

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His Cys Gln Phe Arg Phe Pro Val Leu Ser Ser Glu Ile Leu Gln Ser

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Thr Ser Asp Glu His Leu Gly Leu Ala Asp Tyr Val Asp Ile Ile Gly

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Leu Ile Ser Ser Ala Cys Leu Leu Gly Ile Ser Ile Arg Gly Lys Thr

165 170 175

Gly Ile Ile Leu Asp Ile Ser Asp Ser Thr Thr Glu Pro Leu Leu Asn

180 185 190

Gly Lys Asn Glu Lys Asp Pro Glu Asp Lys Arg Asp Ser Pro Tyr Gly

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Lys Ala Ser Leu Leu Gln Leu Ile Thr Phe Ser Trp Leu Asn Pro Leu

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Val Asp Phe Arg Asp Ser Ala Lys Phe Leu Ser Gly Ser Phe Asp Glu

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Ser Leu Lys Tyr Val Lys Gly Arg Asn Gly Ala Lys Asn Pro Ser Ile

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Met Asp Asp Phe Val Asn Phe Leu Asn Glu Lys Lys Leu Arg Gly Leu

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Gln Thr Arg Ala Ala Tyr Gln Asp Ala Asp Ile Tyr Leu Leu Asp Asp

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Pro Phe Ser Ala Val Asp Ala His Thr Gly Thr His Leu Phe Gln Glu

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Gly Arg Ile Ala Gln Ala Gly Thr Phe Glu Glu Leu Leu Lys Gln Asn

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Ile Gly Phe Glu Val Leu Val Gly Ala His Asn Gln Ala Leu Glu Ser

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Ile Leu Thr Val Glu Ser Ser Ser Arg Val Ser Glu Glu Ala Ile Thr

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Gly Ser Glu Met Asp Thr Asp Ser Asn Ile Asn Thr Glu Thr Lys Gln

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Leu Val Gln Asp Glu Glu Arg Val Lys Gly Ser Ile Gly Lys Glu Val

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Tyr Tyr Ser Tyr Leu Thr Thr Met Lys Gly Gly Ala Phe Val Pro Ile

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Ile Leu Ile Ala Gln Ser Ser Phe Gln Val Leu Gln Ile Ala Ser Asn

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Tyr Trp Met Ala Ser Ala Phe Pro Thr Gly Asp Asp Ala Ala Pro Ile

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Ala Glu Lys Met Asn Phe Ile Leu Val Val Phe Val Leu Leu Ala Val

530 535 540

Gly Ser Ser Leu Cys Val Leu Val Arg Ala Ser Phe Val Ala Ile Ile

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Gly Leu Gln Thr Ala Glu Lys Leu Phe Ser Asn Met Leu His Ser Ile

565 570 575

Leu Arg Ala Pro Met Ser Phe Phe Asp Ser Thr Pro Thr Gly Arg Ile

580 585 590

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Leu Lys Leu Gly Trp Cys Ala Leu Ser Ile Ile Gln Leu Leu Gly Thr

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Ile Ala Val Met Ser Gln Val Ala Trp Glu Val Phe Val Leu Phe Ile

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645 650 655

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675 680 685

Asn Gln Lys Asp Arg Phe Ala His Ala Asn Leu Ser Leu Ile Asp Gly

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Ile Ala Gly Leu Ala Val Thr Tyr Gly Ile Tyr Leu Asn Tyr Ser Gln

705 710 715 720

Ala Ala Val Ile Trp Asn Ile Cys Gly Thr Glu Asn Lys Met Ile Ser

725 730 735

Val Glu Arg Ile Leu Gln Tyr Ser Asp Leu Ala Ser Glu Ala Pro Leu

740 745 750

Val Ile Glu Asn Cys Arg Leu Ser Ser Thr Trp Pro Glu Thr Gly Thr

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Ile Ser Phe Gln Asn Leu Gln Ile Arg Tyr Ala Glu His Leu Pro Ser

770 775 780

Val Leu Lys Asn Ile Thr Cys Thr Phe Pro Gly Ser Lys Lys Val Gly

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Val Val Gly Arg Thr Gly Ser Gly Lys Ser Thr Leu Thr Gln Ala Leu

805 810 815

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820 825 830

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835 840 845

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885 890 895

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900 905 910

Leu Phe Cys Leu Gly Arg Ala Leu Leu Lys Lys Ser Ser Ile Leu Val

915 920 925

Leu Asp Glu Ala Thr Ala Ser Val Asp Ala Ala Thr Asp Ala Val Leu

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Gln Lys Ile Ile Ser Gln Glu Phe Arg Asn Arg Thr Val Ile Thr Ile

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Arg Glu Asp Ser Phe Phe Ser Lys Leu Ile Lys Glu Tyr Ser Met Arg

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Thr Leu Gly Glu Trp Ala Gly Leu Cys Lys Ile Asp Ser Glu Gly Lys

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Ala Arg Lys Val Val Gly Cys Gly Cys Val Val Val Lys Asp Tyr Gly

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<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

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Met Val Ser Asp Ala Ala Lys Lys Arg Asp Ala Gln Lys Lys Ala Ala

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Ala Ala Ala Arg Arg Gly Gly Lys Gly Ala Ala Ala Ser Ser Lys Thr

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Leu Thr Asn Gly Val Gly Asp Leu His Ile Ser Asp Arg Asn Cys Thr

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Gly Val Leu Cys Ser His Pro Leu Ser Arg Asp Ile Arg Ile Gln Ser

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Leu Ser Val Thr Phe His Gly His Asp Leu Ile Val Asp Ser Glu Leu

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Glu Leu Asn Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Leu Leu Gly Leu Asn Gly Cys

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Gly Lys Ser Thr Leu Leu Thr Ala Ile Gly Leu Arg Glu Leu Pro Ile

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Leu Leu Arg Gly Leu Cys Val Val Arg Arg Ile Leu Glu Glu Phe Arg

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<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

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ccttctggtt gtggcaaatc cactcttctt gatactttag cagggagatt ggattcgaac 480

acgagacaaa ctggagaaat cctcatcaat ggtcggaggc aagctcttgc ttttggcact 540

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Phe Pro Phe Ser Asn Ser Pro Pro Pro His Ile Ala Ala Ile Glu Ala

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Asn Asn Asn Thr Thr Gly Phe Ala Tyr Glu Glu Val Val Leu Pro Phe

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Tyr Val Gln Pro Gly Gln Val Leu Ala Ile Met Gly Pro Ser Gly Cys

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Gly Lys Ser Thr Leu Leu Asp Thr Leu Ala Gly Arg Leu Asp Ser Asn

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Thr Arg Gln Thr Gly Glu Ile Leu Ile Asn Gly Arg Arg Gln Ala Leu

165 170 175

Ala Phe Gly Thr Ser Ala Tyr Val Thr Gln Asp Asp Thr Leu Met Thr

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Thr Leu Thr Val Lys Glu Ala Ile Tyr Tyr Ser Ala Gln Leu Gln Leu

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Val Ala Ser Ile His Gln Pro Ser Ser Glu Val Phe Glu Leu Phe His

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Asn Leu Cys Leu Leu Ser Ser Gly Arg Thr Val Tyr Phe Gly Ser Ile

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Met Arg Asn Pro Ser Asp His Tyr Leu Arg Thr Ile Asn Lys Asp Phe

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Asp Ala Asp Ile Glu Lys Gly Val Gly Gly Lys Ala Thr Ala Thr Glu

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Gln Val Gln Arg Arg Val Leu Glu Ile Cys Gln Gln Asn Gly Gly Gln

325 330 335

Glu Ala Lys Lys Gly Asn Gln Ala Ser Phe Ile Thr Gln Cys Thr Val

340 345 350

Leu Thr Arg Arg Ser Phe Val Asn Met Tyr Arg Asp Leu Gly Tyr Tyr

355 360 365

Trp Leu Arg Phe Ala Ile Tyr Ile Ala Leu Cys Leu Cys Val Gly Thr

370 375 380

Ile Phe His Asp Ile Gly His Asp Tyr Gly Ser Ile Gln Phe Arg Ser

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Tyr Asp Glu Asn Arg Val Leu Ser Tyr Ile Gly Met Leu Gly Ala Val

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420 425 430

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<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

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atgaagacat attcaacagc agggacttca gtttacatta ttcagacaga taatcatatt 60

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aattttgaag actatgtctt gaatgttctt cgacttgata tatgttcaga cacattagtt 180

ggtaatgacg cgataagagg agtttcaggt gaacaaagga agataggaga aatgattgtt 240

ggtcccagga aaacactgtt catggatgag atttctaccg gacatgacag tagtacaagt 300

tccaaaatag tcaagtgcat acaaaatttt gttcatataa tggaaggaac tgtgatgatg 360

gctctttgtc gtccttcaca agagactttc gaattgttcg atgatcttgt attactatct 420

gaaggatatg tcctgtacca tggccctcga gaagatgtta ttccattttt tgagtggtta 480

ggatttcaat tgccagatcg taaggatgtc gttgatttta ttcaagaggt tgcatttgtc 540

ggatccgtca caggcacaat gtttctaaga acaaggttac atcccacaga tctggtgaac 600

gggaacttgt atctttcctg cttgtttttc ggtctggttc atatgatgct cgacggattc 660

tcagaactgt ctctctttat atatcggctc ccagtattct ataagcaaag agataatttc 720

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gggagatttt tcagctacat gtttttactc ttctcggtac accaaatggc gatgggtctc 900

tttcggttaa tagcttcttt gtcacgagat ataattattg caaatacttt tggatcagct 960

gtgctaatca tatttttact gggtggtttt atcttgccaa aagaaatgat caagccatgg 1020

ttcgtatggg cattttgggt gtcaccattg tcgtatggac agcgagcaat ttctgttaat 1080

gaattcactg cgacaagatg gattgagaag acaaccagcg gaaatgtcac gcttggttac 1140

agtgttctgc aatcgcacag cctaccgaca tctggttact ggtactggtt gggattggga 1200

gttctgttgc tctctgtgtt gcttctcaac attattctga ctgtagcctt gacttttctc 1260

aacccactaa gaaaatctag ggcaattatt ccaacagatg ccagtggtgt aaattcagtt 1320

cctggtggaa atagcaaccg tggccagggg gggactagac agtcagaatt gcgcctacct 1380

ttcaaacaag aaatgggaat accgcagaaa aggttgcagc tactgtccaa tgttagtaga 1440

gtattatcac ctggcgttct tattggattg gttggtgcaa gtggagcggg gaaaaccaca 1500

ttgatggatt gcctagctgg taggaagact actggatatg tagagggtga tattaggata 1560

tcaggctacc caaaaaaaca agagactttt gcgagaattt caggatatgt tgaacagaat 1620

gatatacatt ctcctcaagt gacagttttt gaatccctat gttttacgtc ttatctccgg 1680

ctctccaaaa aagtgaatga aaaacaaaga ctggagtttg ttgaagaaat aatggcatta 1740

ctggaacttg actctctaag gcatgcttta gttggcttgc ctggcatttc tggcttatca 1800

accgaccaaa gaagacgctt gacaattgca gtagaacttg tagcaaatcc tgcgatactt 1860

tttatggatg atcctacatc tggtcttgat gcacgagctg cttctattgt catgcgaact 1920

gttagtgatg tagcacatgg cggaagaatt gtggtctgct ctattcgcca tccaagtttt 1980

gatatttttg aaacatttga cgagcttctt ctaatgaaac acgggggaca actgatatat 2040

ggaggacagc gtgggaacaa ttcacaaact atgattaact atttccaggg tattgatggg 2100

atacccccaa ttcctaatgg ttgcaatcct gcaacgtgga tgcttcagat aagtacacca 2160

gctgctgaag caagaatagg acgagatttt gctgaaatat acagaagttc tgcactctac 2220

agggaagttg aagccagaac tatgcttcca ccagcagaaa actcaaaacc tctgaggttc 2280

acttccaaat ataacacatc tgtactttat cagcttaaaa tgtgcctgtg gaagcaaagt 2340

cttgtatact ggagaaatcc agcacattat aattgtgaga ttcttctcca caacttttta 2400

tttcttgggg tccagaattc ttcctccata cagcccattg tttcaatggg aagacccgtt 2460

ttccgtaggg agagagatgc agggatgtac tcctgcgtag tatatgcagc atctcagggg 2520

ctgattgagg ttatttatgt cctggcccag actgtactat ttggagccat tacctattct 2580

atgttgggct tagtgagggc agcaggcacg attttcattt acatcatgtt cttgcttctg 2640

accacctatt ttacctttta cggtatgatg gtggggtatg acttggttct atgtatcagc 2700

ttaagaattt ctggaatttg gcggattgaa ttgctgtcca ttgctatcga gttgctctcg 2760

tttggtcatc ggtttgttgc tgttatgttg ccggatctcc tcgcctattt cagaagcttg 2820

cttgttgttt ttcttcagtt aatttcggct gctagttact ttcggtgcta caccagtggt 2880

agcggtgata gccctttttg gtctttgggt cgtggtgttt tctgtgtttt cagggaaagt 2940

ctcaaagtgg ttggagacaa gttgggtgca cgagcactag caaaggagag caacctggac 3000

gagcgtcaac aaagggcggt gggaagcagt gtagtggtgg cagtctggga tgatagatta 3060

aaggcatgtc ctcagaggtc agtacgaggc cgcccgagga ttaggtgggg ctccttgact 3120

aaggttaaag cccaggagtt ggaaggaagg ttgtcggcaa tgggagcttg gagaagtagt 3180

gaggacgcaa acactatgtg gtcaacgacg gcagactata taaggaaggc ggcgagagag 3240

gtgttagggg tatcttcagg ccgcacctgt ggccacaaag gagactggtg gtggaatgca 3300

gttgtacaag gtaaagtgga agcgaagaag gtggcttacc tgcggttagt ggggagcact 3360

ggagaggagg agaagagagc gaacattgcg agatataagg tagctaggaa ggaggcaaag 3420

atggcagtga cggaggcaaa gacgacagct tttgctcgtt tgtatgagga actagggaac 3480

aaaggcgggg agaagaagtt actccgactc gctaaggtga gagagaggac ggctcgggat 3540

ctggacctag tgaggtgcat aaaagatgag gacgacaaag tttttttggg ggatgaccag 3600

ataaagagga gatggcagac ctactttcat aaacttctaa atgaggaagg ggatcaggat 3660

attgtattag gtgaattgag gaacgacgac aacccccatg aactaagtga ttgtcgggac 3720

attgaggtcg atgaggtcat ggaggcaatg caaggagatg aaaattgtcg gagaaagttt 3780

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<210> 81

<211> 1284

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 81

Met Lys Thr Tyr Ser Thr Ala Gly Thr Ser Val Tyr Ile Ile Gln Thr

1 5 10 15

Asp Asn His Ile Pro Glu Leu Ile Val Arg Glu Thr Val Asp Phe Ala

20 25 30

Ala Arg Cys Gln Gly Glu Asn His Asn Phe Glu Asp Tyr Val Leu Asn

35 40 45

Val Leu Arg Leu Asp Ile Cys Ser Asp Thr Leu Val Gly Asn Asp Ala

50 55 60

Ile Arg Gly Val Ser Gly Glu Gln Arg Lys Ile Gly Glu Met Ile Val

65 70 75 80

Gly Pro Arg Lys Thr Leu Phe Met Asp Glu Ile Ser Thr Gly His Asp

85 90 95

Ser Ser Thr Ser Ser Lys Ile Val Lys Cys Ile Gln Asn Phe Val His

100 105 110

Ile Met Glu Gly Thr Val Met Met Ala Leu Cys Arg Pro Ser Gln Glu

115 120 125

Thr Phe Glu Leu Phe Asp Asp Leu Val Leu Leu Ser Glu Gly Tyr Val

130 135 140

Leu Tyr His Gly Pro Arg Glu Asp Val Ile Pro Phe Phe Glu Trp Leu

145 150 155 160

Gly Phe Gln Leu Pro Asp Arg Lys Asp Val Val Asp Phe Ile Gln Glu

165 170 175

Val Ala Phe Val Gly Ser Val Thr Gly Thr Met Phe Leu Arg Thr Arg

180 185 190

Leu His Pro Thr Asp Leu Val Asn Gly Asn Leu Tyr Leu Ser Cys Leu

195 200 205

Phe Phe Gly Leu Val His Met Met Leu Asp Gly Phe Ser Glu Leu Ser

210 215 220

Leu Phe Ile Tyr Arg Leu Pro Val Phe Tyr Lys Gln Arg Asp Asn Phe

225 230 235 240

Phe Tyr Pro Ala Trp Val Trp Ser Leu Cys Ser Trp Ile Leu Ser Leu

245 250 255

Pro Tyr Ser Val Ile Glu Ala Leu Val Trp Ser Tyr Val Val Tyr Trp

260 265 270

Thr Val Gly Phe Ala Pro Gly Ala Gly Arg Phe Phe Ser Tyr Met Phe

275 280 285

Leu Leu Phe Ser Val His Gln Met Ala Met Gly Leu Phe Arg Leu Ile

290 295 300

Ala Ser Leu Ser Arg Asp Ile Ile Ile Ala Asn Thr Phe Gly Ser Ala

305 310 315 320

Val Leu Ile Ile Phe Leu Leu Gly Gly Phe Ile Leu Pro Lys Glu Met

325 330 335

Ile Lys Pro Trp Phe Val Trp Ala Phe Trp Val Ser Pro Leu Ser Tyr

340 345 350

Gly Gln Arg Ala Ile Ser Val Asn Glu Phe Thr Ala Thr Arg Trp Ile

355 360 365

Glu Lys Thr Thr Ser Gly Asn Val Thr Leu Gly Tyr Ser Val Leu Gln

370 375 380

Ser His Ser Leu Pro Thr Ser Gly Tyr Trp Tyr Trp Leu Gly Leu Gly

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Val Leu Leu Leu Ser Val Leu Leu Leu Asn Ile Ile Leu Thr Val Ala

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Leu Thr Phe Leu Asn Pro Leu Arg Lys Ser Arg Ala Ile Ile Pro Thr

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Asp Ala Ser Gly Val Asn Ser Val Pro Gly Gly Asn Ser Asn Arg Gly

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Gln Gly Gly Thr Arg Gln Ser Glu Leu Arg Leu Pro Phe Lys Gln Glu

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Met Gly Ile Pro Gln Lys Arg Leu Gln Leu Leu Ser Asn Val Ser Arg

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Val Leu Ser Pro Gly Val Leu Ile Gly Leu Val Gly Ala Ser Gly Ala

485 490 495

Gly Lys Thr Thr Leu Met Asp Cys Leu Ala Gly Arg Lys Thr Thr Gly

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Tyr Val Glu Gly Asp Ile Arg Ile Ser Gly Tyr Pro Lys Lys Gln Glu

515 520 525

Thr Phe Ala Arg Ile Ser Gly Tyr Val Glu Gln Asn Asp Ile His Ser

530 535 540

Pro Gln Val Thr Val Phe Glu Ser Leu Cys Phe Thr Ser Tyr Leu Arg

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Leu Ser Lys Lys Val Asn Glu Lys Gln Arg Leu Glu Phe Val Glu Glu

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Ile Met Ala Leu Leu Glu Leu Asp Ser Leu Arg His Ala Leu Val Gly

580 585 590

Leu Pro Gly Ile Ser Gly Leu Ser Thr Asp Gln Arg Arg Arg Leu Thr

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Val Ser Asp Val Ala His Gly Gly Arg Ile Val Val Cys Ser Ile Arg

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His Pro Ser Phe Asp Ile Phe Glu Thr Phe Asp Glu Leu Leu Leu Met

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Ala Ala Glu Ala Arg Ile Gly Arg Asp Phe Ala Glu Ile Tyr Arg Ser

725 730 735

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Val Val Tyr Ala Ala Ser Gln Gly Leu Ile Glu Val Ile Tyr Val Leu

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Val Arg Ala Ala Gly Thr Ile Phe Ile Tyr Ile Met Phe Leu Leu Leu

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Thr Thr Tyr Phe Thr Phe Tyr Gly Met Met Val Gly Tyr Asp Leu Val

885 890 895

Leu Cys Ile Ser Leu Arg Ile Ser Gly Ile Trp Arg Ile Glu Leu Leu

900 905 910

Ser Ile Ala Ile Glu Leu Leu Ser Phe Gly His Arg Phe Val Ala Val

915 920 925

Met Leu Pro Asp Leu Leu Ala Tyr Phe Arg Ser Leu Leu Val Val Phe

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Leu Gln Leu Ile Ser Ala Ala Ser Tyr Phe Arg Cys Tyr Thr Ser Gly

945 950 955 960

Ser Gly Asp Ser Pro Phe Trp Ser Leu Gly Arg Gly Val Phe Cys Val

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Phe Arg Glu Ser Leu Lys Val Val Gly Asp Lys Leu Gly Ala Arg Ala

980 985 990

Leu Ala Lys Glu Ser Asn Leu Asp Glu Arg Gln Gln Arg Ala Val Gly

995 1000 1005

Ser Ser Val Val Val Ala Val Trp Asp Asp Arg Leu Lys Ala Cys Pro

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Gln Arg Ser Val Arg Gly Arg Pro Arg Ile Arg Trp Gly Ser Leu Thr

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Lys Val Lys Ala Gln Glu Leu Glu Gly Arg Leu Ser Ala Met Gly Ala

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Trp Arg Ser Ser Glu Asp Ala Asn Thr Met Trp Ser Thr Thr Ala Asp

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Tyr Ile Arg Lys Ala Ala Arg Glu Val Leu Gly Val Ser Ser Gly Arg

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Lys Val Glu Ala Lys Lys Val Ala Tyr Leu Arg Leu Val Gly Ser Thr

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Gly Glu Glu Glu Lys Arg Ala Asn Ile Ala Arg Tyr Lys Val Ala Arg

1125 1130 1135

Lys Glu Ala Lys Met Ala Val Thr Glu Ala Lys Thr Thr Ala Phe Ala

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Arg Leu Tyr Glu Glu Leu Gly Asn Lys Gly Gly Glu Lys Lys Leu Leu

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Arg Leu Ala Lys Val Arg Glu Arg Thr Ala Arg Asp Leu Asp Leu Val

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Arg Cys Ile Lys Asp Glu Asp Asp Lys Val Phe Leu Gly Asp Asp Gln

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Ile Lys Arg Arg Trp Gln Thr Tyr Phe His Lys Leu Leu Asn Glu Glu

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Gly Asp Gln Asp Ile Val Leu Gly Glu Leu Arg Asn Asp Asp Asn Pro

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His Glu Leu Ser Asp Cys Arg Asp Ile Glu Val Asp Glu Val Met Glu

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Ala Met Gln Gly Asp Glu Asn Cys Arg Arg Lys Phe Phe Gly Gly Ile

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Val Lys Ile Glu

<210> 82

<211> 861

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 82

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<210> 83

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<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 83

Met Gly Asp Asn Asn His His Gln Val Phe Asp Val Ser Ala Asn Gly

1 5 10 15

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Gly Ser Val Trp Thr Ala Ser Ala His Ile Ile Thr Ala Val Ile Gly

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Ser Gly Val Leu Ser Leu Ala Trp Ala Thr Ala Gln Leu Gly Trp Val

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Ala Gly Pro Ala Val Leu Leu Leu Phe Ser Phe Val Thr Tyr Tyr Thr

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Ser Ala Leu Leu Ala Asp Cys Tyr Arg Ser Gly Asp Gln Val Ser Gly

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Lys Arg Asn Tyr Thr Tyr Met Asp Ala Val Arg Ala Asn Leu Gly Gly

100 105 110

Leu Gln Val Lys Ile Cys Gly Val Ile Gln Tyr Val Asn Leu Phe Gly

115 120 125

Val Ala Val Gly Tyr Thr Ile Ala Ser Ser Ile Ser Met Met Ala Val

130 135 140

Lys Arg Ser Asp Cys Phe His Lys His Gly His Arg Ala Ala Cys Asn

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Val Ser Ser Thr Pro Tyr Met Ile Met Phe Gly Val Met Glu Ile Leu

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Ala Ala Val Met Ser Phe Thr Tyr Ser Thr Ile Gly Leu Gly Leu Gly

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Val Ala Gln Val Ala Glu Thr Gly Lys Ile Gln Gly Ser Leu Thr Gly

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Ile Ser Ile Gly Thr Glu Val Thr Glu Met Gln Lys Ile Trp Arg Ser

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Phe Gln Ala Leu Gly Ala Ile Ala Phe Ala Tyr Ser Tyr Ser Leu Ile

245 250 255

Leu Ile Glu Ile Gln Ser Leu Thr Val Phe Asp His Val Asp Ile Ala

260 265 270

Leu Ser Gly Leu Asp His Val Glu Ser Val Leu Ala Phe Gly

275 280 285

<210> 84

<211> 1524

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 84

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<210> 85

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<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 85

Met Ala Glu Glu Lys Leu Ala Ser Asn Asn Gly Gln Pro Gln Ile Val

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130 135 140

Ala Pro Val Tyr Thr Ala Glu Val Ser Pro Ala Ser Ser Arg Gly Phe

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Leu Thr Ser Phe Pro Glu Val Phe Ile Asn Gly Gly Ile Leu Leu Gly

165 170 175

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180 185 190

Arg Phe Met Leu Gly Ile Gly Ala Val Pro Ser Val Phe Leu Ala Val

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405 410 415

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420 425 430

Gly Ala Phe Phe Leu Tyr Phe Gly Leu Ala Ala Val Ala Phe Val Phe

435 440 445

Phe Phe Thr Leu Met Pro Glu Thr Gln Gly Lys Thr Leu Glu Glu Met

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<210> 86

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<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 86

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gtttcttact ccatgtttgt catcactcaa gcttttgctg gtcatcttgg tgatcttgaa 240

cttgctgcta tgtccattgc tagtaatgtt gttcttggct tcgatttcgg cctcatgggt 300

tacagtacta atatatcagc attttctaaa atatacatac atatgttcat ggatatttta 360

ttgaactttg cgggtactag tgaaccctcg cttggtaaca tggtttcgcc tccgtttgct 420

actatacaaa agcttccgtt atgtcaaaaa gattcaacaa tttatccaat ttgcatagta 480

cgaagcttgg agaactggta ctacagggtg ctaattgtga tgactggtaa tttggaaaat 540

gctaaaattg ctgtggacgc attgtctata tgcatgaata tcaatggttg ggaactaatg 600

attcctcttg gattcttcgc tggaactgga agacaaaacc atagggccaa taaatcaata 660

attgtcaacc agttagtagc agttacacaa tcaatagtga ttggtttatt tttctggatt 720

ttgatcatat ttttccacaa tgaacttgct cttattttct caactagcca acctgttctt 780

gaagctgttc ataaactctc tatcctctta gccttcactg ttctcctcaa cagcgttcag 840

cccattctct cgggggttgc tgttggatct ggatggcaag catatgttgc atatataaat 900

ttgggttgct attatttact tggagtacct cttggtttca taatgggatg gggtttccac 960

tatggtgtca tgggcatctg ggctggaatg atctttggtg gaactgcaat tcagactttg 1020

attttggcta taatcacaat aagatgtgat tggaataaag agcaccaaca tcagcaaaag 1080

aaagaagaag aagaagaaga agaagaagaa gaagaagaag aagaagaagg aggaggagga 1140

agagaagaag aagaaggagg aggaggagga ggaggaggag aaagagactg a 1191

<210> 87

<211> 396

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 87

Met Ser Ser Asn Gly Lys Ile Glu Glu Asn Lys Val Pro Leu Leu Asp

1 5 10 15

Tyr Ala Ser Ser Asn Ile His Lys Ser Tyr Ile Leu Glu Gln Asn Gln

20 25 30

Asp Glu Gln Ser Phe Ala Asn Arg Phe Trp Ile Glu Thr Lys Lys Leu

35 40 45

Trp His Ile Val Gly Pro Ala Ile Phe Ser Arg Ile Val Ser Tyr Ser

50 55 60

Met Phe Val Ile Thr Gln Ala Phe Ala Gly His Leu Gly Asp Leu Glu

65 70 75 80

Leu Ala Ala Met Ser Ile Ala Ser Asn Val Val Leu Gly Phe Asp Phe

85 90 95

Gly Leu Met Gly Tyr Ser Thr Asn Ile Ser Ala Phe Ser Lys Ile Tyr

100 105 110

Ile His Met Phe Met Asp Ile Leu Leu Asn Phe Ala Gly Thr Ser Glu

115 120 125

Pro Ser Leu Gly Asn Met Val Ser Pro Pro Phe Ala Thr Ile Gln Lys

130 135 140

Leu Pro Leu Cys Gln Lys Asp Ser Thr Ile Tyr Pro Ile Cys Ile Val

145 150 155 160

Arg Ser Leu Glu Asn Trp Tyr Tyr Arg Val Leu Ile Val Met Thr Gly

165 170 175

Asn Leu Glu Asn Ala Lys Ile Ala Val Asp Ala Leu Ser Ile Cys Met

180 185 190

Asn Ile Asn Gly Trp Glu Leu Met Ile Pro Leu Gly Phe Phe Ala Gly

195 200 205

Thr Gly Arg Gln Asn His Arg Ala Asn Lys Ser Ile Ile Val Asn Gln

210 215 220

Leu Val Ala Val Thr Gln Ser Ile Val Ile Gly Leu Phe Phe Trp Ile

225 230 235 240

Leu Ile Ile Phe Phe His Asn Glu Leu Ala Leu Ile Phe Ser Thr Ser

245 250 255

Gln Pro Val Leu Glu Ala Val His Lys Leu Ser Ile Leu Leu Ala Phe

260 265 270

Thr Val Leu Leu Asn Ser Val Gln Pro Ile Leu Ser Gly Val Ala Val

275 280 285

Gly Ser Gly Trp Gln Ala Tyr Val Ala Tyr Ile Asn Leu Gly Cys Tyr

290 295 300

Tyr Leu Leu Gly Val Pro Leu Gly Phe Ile Met Gly Trp Gly Phe His

305 310 315 320

Tyr Gly Val Met Gly Ile Trp Ala Gly Met Ile Phe Gly Gly Thr Ala

325 330 335

Ile Gln Thr Leu Ile Leu Ala Ile Ile Thr Ile Arg Cys Asp Trp Asn

340 345 350

Lys Glu His Gln His Gln Gln Lys Lys Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu

355 360 365

Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Arg Glu Glu Glu

370 375 380

Glu Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Arg Asp

385 390 395

<210> 88

<211> 2223

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 88

atggattctt ctaaaaacaa catttaccag ccatttttag ataacaatgg aaattctagt 60

ttgtcacctc agttttctga aacccataat tttgaatcaa gcaatgagtt agaaactgta 120

cttttagaca ctgaaatacc actatggaat aaactccgtt tagctacatg gattgaaatg 180

aagctccttt ttcaccttgc tgcacctgct gttatggttt atatgattaa ttatattatg 240

tctatgtcaa ctcaaatatt ttctggtcat ttgggtaatc ttgagctggc tgctgcttca 300

cttggaaata ctggaattca agtttttgct tatggtctta tgttgggaat gggaagtgca 360

gttgaaacac tatgtgggca agcatttgga gcaaagaaat atgatatgtt aggagtttat 420

ctgcaaagat caacaattct cctaactcta acaggaattt tactcgcttt cgtgtacatt 480

ttctgcaagc caattctaat atttctaggc gaatcggaaa gaattgcttc agcagctgcc 540

ttattcgtgt acggtctaat tccccaaatt ttcgcctacg cgttaaattt cccaattcag 600

aagtttctac aagctcagag tattgtagcg ccaagtgcat acatttcagc tgcgacttta 660

gtgttgcatt tagtgatgag ttgggttgtg atttacaaga ttgggcttgg tctactcggg 720

gcgtctttga tactgagttt gtcatggtgg ataatcgtaa taggccaatt tgtgtatatt 780

gtgaaaagtg agaggtgtaa gcaaacatgg aatgggttca gtttgcaggc gttttccggc 840

ttgccggtgt ttttcaagtt atcagcagcg tctgcggtga tgttgtgctt ggagacatgg 900

tactttcaaa ttgtggtttt gctcgctgga ttgcttgaaa atcctgaatt gtctttggat 960

gctctttcta tttgcatgac aatttctggt tgggtattca tgatatcagt tggattcaat 1020

gcagcagcaa gtgtgagagt gagcaatgaa ctaggagcaa ggcatccaaa atcagcagct 1080

ttttctgttg ttgtggttac gtcgtggtct ttcattctct cggtgattgc tgcagtcatc 1140

gttcttgcat tgcgtaatct catcagttat gccttcactg gtggtgaagt tgttgctcaa 1200

gctgtctccg atctttgtcc attgctcgcg atttccctta tactcaatgg aattcaaccc 1260

gtcttgtcag gtgtggctgt tggctgtgga tggcaaactt ttgtggccta tgtaaatgtt 1320

ggctgctatt acattgtcgg agttccattg ggtgctctcc tcggcttcca tttcaaactt 1380

ggagctaagg gtatatggtc aggaatgctg ggaggtacgg tgatgcagac aatcattttg 1440

atatggatca ctgctcgaac cgattggaat aaagaggcca aggggttgga attcactctc 1500

agccacctca tccggttata tcgacctcga ctttttcgag gattaatcaa gctccaacac 1560

cgatcaacga agtccttttt tgcaagcatt gatgaggaca aagaccgagg ttggatgagc 1620

cggttcgtgc gggtaaggac ctgcgacctc atccctgagg agaaactgct gttccccgag 1680

aagtggaacc ctgatccggt tgcatggatg cctcacgtgg tccccgacct cgaagactgg 1740

ttcgaaagct ggctgcaact tcctcccatg ccgagcgctg ctggcgtgac atggcaaggg 1800

gcagatagga ggctaagaat catagtgagc tcatcttgcc tcggggatgt tgctgaaata 1860

aggcctacct cgcctgggga agaggtggat cccaaaccgg ttaaggacaa gaaaaggaga 1920

agggcctcac cctctgatac cccaaagtcc aagaagatta aggcccgtaa attgaaggac 1980

gattctgcca ctctatctgc cgacgtagtc caacagctac gagatgaaga agaggagggg 2040

gaagatgctg gttgtgatct ggtgcctcga aagaggggga gcgtcgaagc tccaaaaata 2100

gttgggccgg tgatggtcga ggagactcat ccttggaccg aggagatctc ggaaggtact 2160

ccgagcagag ttcccgagtc atcgggggcc caagatattc ccgtcgtgat gaaaaatcgg 2220

tga 2223

<210> 89

<211> 740

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 89

Met Asp Ser Ser Lys Asn Asn Ile Tyr Gln Pro Phe Leu Asp Asn Asn

1 5 10 15

Gly Asn Ser Ser Leu Ser Pro Gln Phe Ser Glu Thr His Asn Phe Glu

20 25 30

Ser Ser Asn Glu Leu Glu Thr Val Leu Leu Asp Thr Glu Ile Pro Leu

35 40 45

Trp Asn Lys Leu Arg Leu Ala Thr Trp Ile Glu Met Lys Leu Leu Phe

50 55 60

His Leu Ala Ala Pro Ala Val Met Val Tyr Met Ile Asn Tyr Ile Met

65 70 75 80

Ser Met Ser Thr Gln Ile Phe Ser Gly His Leu Gly Asn Leu Glu Leu

85 90 95

Ala Ala Ala Ser Leu Gly Asn Thr Gly Ile Gln Val Phe Ala Tyr Gly

100 105 110

Leu Met Leu Gly Met Gly Ser Ala Val Glu Thr Leu Cys Gly Gln Ala

115 120 125

Phe Gly Ala Lys Lys Tyr Asp Met Leu Gly Val Tyr Leu Gln Arg Ser

130 135 140

Thr Ile Leu Leu Thr Leu Thr Gly Ile Leu Leu Ala Phe Val Tyr Ile

145 150 155 160

Phe Cys Lys Pro Ile Leu Ile Phe Leu Gly Glu Ser Glu Arg Ile Ala

165 170 175

Ser Ala Ala Ala Leu Phe Val Tyr Gly Leu Ile Pro Gln Ile Phe Ala

180 185 190

Tyr Ala Leu Asn Phe Pro Ile Gln Lys Phe Leu Gln Ala Gln Ser Ile

195 200 205

Val Ala Pro Ser Ala Tyr Ile Ser Ala Ala Thr Leu Val Leu His Leu

210 215 220

Val Met Ser Trp Val Val Ile Tyr Lys Ile Gly Leu Gly Leu Leu Gly

225 230 235 240

Ala Ser Leu Ile Leu Ser Leu Ser Trp Trp Ile Ile Val Ile Gly Gln

245 250 255

Phe Val Tyr Ile Val Lys Ser Glu Arg Cys Lys Gln Thr Trp Asn Gly

260 265 270

Phe Ser Leu Gln Ala Phe Ser Gly Leu Pro Val Phe Phe Lys Leu Ser

275 280 285

Ala Ala Ser Ala Val Met Leu Cys Leu Glu Thr Trp Tyr Phe Gln Ile

290 295 300

Val Val Leu Leu Ala Gly Leu Leu Glu Asn Pro Glu Leu Ser Leu Asp

305 310 315 320

Ala Leu Ser Ile Cys Met Thr Ile Ser Gly Trp Val Phe Met Ile Ser

325 330 335

Val Gly Phe Asn Ala Ala Ala Ser Val Arg Val Ser Asn Glu Leu Gly

340 345 350

Ala Arg His Pro Lys Ser Ala Ala Phe Ser Val Val Val Val Thr Ser

355 360 365

Trp Ser Phe Ile Leu Ser Val Ile Ala Ala Val Ile Val Leu Ala Leu

370 375 380

Arg Asn Leu Ile Ser Tyr Ala Phe Thr Gly Gly Glu Val Val Ala Gln

385 390 395 400

Ala Val Ser Asp Leu Cys Pro Leu Leu Ala Ile Ser Leu Ile Leu Asn

405 410 415

Gly Ile Gln Pro Val Leu Ser Gly Val Ala Val Gly Cys Gly Trp Gln

420 425 430

Thr Phe Val Ala Tyr Val Asn Val Gly Cys Tyr Tyr Ile Val Gly Val

435 440 445

Pro Leu Gly Ala Leu Leu Gly Phe His Phe Lys Leu Gly Ala Lys Gly

450 455 460

Ile Trp Ser Gly Met Leu Gly Gly Thr Val Met Gln Thr Ile Ile Leu

465 470 475 480

Ile Trp Ile Thr Ala Arg Thr Asp Trp Asn Lys Glu Ala Lys Gly Leu

485 490 495

Glu Phe Thr Leu Ser His Leu Ile Arg Leu Tyr Arg Pro Arg Leu Phe

500 505 510

Arg Gly Leu Ile Lys Leu Gln His Arg Ser Thr Lys Ser Phe Phe Ala

515 520 525

Ser Ile Asp Glu Asp Lys Asp Arg Gly Trp Met Ser Arg Phe Val Arg

530 535 540

Val Arg Thr Cys Asp Leu Ile Pro Glu Glu Lys Leu Leu Phe Pro Glu

545 550 555 560

Lys Trp Asn Pro Asp Pro Val Ala Trp Met Pro His Val Val Pro Asp

565 570 575

Leu Glu Asp Trp Phe Glu Ser Trp Leu Gln Leu Pro Pro Met Pro Ser

580 585 590

Ala Ala Gly Val Thr Trp Gln Gly Ala Asp Arg Arg Leu Arg Ile Ile

595 600 605

Val Ser Ser Ser Cys Leu Gly Asp Val Ala Glu Ile Arg Pro Thr Ser

610 615 620

Pro Gly Glu Glu Val Asp Pro Lys Pro Val Lys Asp Lys Lys Arg Arg

625 630 635 640

Arg Ala Ser Pro Ser Asp Thr Pro Lys Ser Lys Lys Ile Lys Ala Arg

645 650 655

Lys Leu Lys Asp Asp Ser Ala Thr Leu Ser Ala Asp Val Val Gln Gln

660 665 670

Leu Arg Asp Glu Glu Glu Glu Gly Glu Asp Ala Gly Cys Asp Leu Val

675 680 685

Pro Arg Lys Arg Gly Ser Val Glu Ala Pro Lys Ile Val Gly Pro Val

690 695 700

Met Val Glu Glu Thr His Pro Trp Thr Glu Glu Ile Ser Glu Gly Thr

705 710 715 720

Pro Ser Arg Val Pro Glu Ser Ser Gly Ala Gln Asp Ile Pro Val Val

725 730 735

Met Lys Asn Arg

740

<210> 90

<211> 1404

<212> DNA

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 90

atgcttgagc gagcctctgt tatagaattg aaaaatctat tccggctagc agccccatca 60

gttattgttt atttgctcaa caatatcact tcaatgtcta cccaactatt ctgtggtcat 120

ctcggtaatc ttgaactcgc tgctgcttcc cttggcaatg aaggtattca actcttggcc 180

tatggcgtca tgttagggat ggggagtgca gtggagacac tatgtgggca ggcatatgga 240

gctcacaagt atggaagtct tggaatatat cttcaaagat caactatcct cttgatgtta 300

tccggaatac cgataatggt ggcttactta ttctcaaagc caattttaat ttttttagga 360

gaatcagaga aagttgcatc agcagctgca ctatttgttt atggtttaat tcctcaaata 420

tttgcttatg ctgccaattt tcctatccaa aagttcttgc aagcccaaag tattgtaaat 480

cccagcgcat atatagcagc agcgacatta gtcctccatc ttttcctaac atggattgtg 540

ctttatgtat ttgagtgggg attgtttgga ggagccttgg ttctaagtat ttcgtggtgg 600

atagtagtca ttgcacaatt tatgtacata ttgtggagtg atacatgcaa gaaaacatgg 660

agtggattta gtctgcaagc gttttctggg ctgtgggatt tctttaagtt gtcagctgct 720

tcatctgtga tgttgtgttt ggaggcgtgg tactttcaga ttttggtttt agttgctggt 780

ttgctaccaa atcctgaagt ggcattggat tctctagctg tttgtaacac aattcttgga 840

tgtgtgttca tgttatctgt tggtttcaac gctgctgcaa gtgtaagggt gagcaatgaa 900

ttgggagctg gacatccaaa atcagctgca ttttcagttg tggtggtaac attaagctcg 960

ttcgtgattg ctgtagtcat tgccatagta gtgatgttgc ttcgcgatgt gatgagttat 1020

gcattcacag gcggggaaac cattgctaaa gcatcctcag aacttgcacc actcttggct 1080

gcctcagtag ttctcaatgg tattcaacct gttttatctg gggtggccgt tgggtgtgga 1140

tggcaaggtt ttgtagctta cgttaacgtc ggatgttact acgttgttgg cattccattg 1200

ggtgttcttc ttggtttcaa attcaaactc ggagctaagg ggattatggc tgggcatgtt 1260

tggaggaaca gccatacaaa ctctaatctt actatgggcc acttttcgaa ccaattggga 1320

cgacgaggtc aggtggagaa aacgaaaaat cgattaaata agtggcgaga tagcagtaaa 1380

accccattgt tgaacgaatc atga 1404

<210> 91

<211> 467

<212> PRT

<213> 普通烟草(Nicotiana tabacum)

<400> 91

Met Leu Glu Arg Ala Ser Val Ile Glu Leu Lys Asn Leu Phe Arg Leu

1 5 10 15

Ala Ala Pro Ser Val Ile Val Tyr Leu Leu Asn Asn Ile Thr Ser Met

20 25 30

Ser Thr Gln Leu Phe Cys Gly His Leu Gly Asn Leu Glu Leu Ala Ala

35 40 45

Ala Ser Leu Gly Asn Glu Gly Ile Gln Leu Leu Ala Tyr Gly Val Met

50 55 60

Leu Gly Met Gly Ser Ala Val Glu Thr Leu Cys Gly Gln Ala Tyr Gly

65 70 75 80

Ala His Lys Tyr Gly Ser Leu Gly Ile Tyr Leu Gln Arg Ser Thr Ile

85 90 95

Leu Leu Met Leu Ser Gly Ile Pro Ile Met Val Ala Tyr Leu Phe Ser

100 105 110

Lys Pro Ile Leu Ile Phe Leu Gly Glu Ser Glu Lys Val Ala Ser Ala

115 120 125

Ala Ala Leu Phe Val Tyr Gly Leu Ile Pro Gln Ile Phe Ala Tyr Ala

130 135 140

Ala Asn Phe Pro Ile Gln Lys Phe Leu Gln Ala Gln Ser Ile Val Asn

145 150 155 160

Pro Ser Ala Tyr Ile Ala Ala Ala Thr Leu Val Leu His Leu Phe Leu

165 170 175

Thr Trp Ile Val Leu Tyr Val Phe Glu Trp Gly Leu Phe Gly Gly Ala

180 185 190

Leu Val Leu Ser Ile Ser Trp Trp Ile Val Val Ile Ala Gln Phe Met

195 200 205

Tyr Ile Leu Trp Ser Asp Thr Cys Lys Lys Thr Trp Ser Gly Phe Ser

210 215 220

Leu Gln Ala Phe Ser Gly Leu Trp Asp Phe Phe Lys Leu Ser Ala Ala

225 230 235 240

Ser Ser Val Met Leu Cys Leu Glu Ala Trp Tyr Phe Gln Ile Leu Val

245 250 255

Leu Val Ala Gly Leu Leu Pro Asn Pro Glu Val Ala Leu Asp Ser Leu

260 265 270

Ala Val Cys Asn Thr Ile Leu Gly Cys Val Phe Met Leu Ser Val Gly

275 280 285

Phe Asn Ala Ala Ala Ser Val Arg Val Ser Asn Glu Leu Gly Ala Gly

290 295 300

His Pro Lys Ser Ala Ala Phe Ser Val Val Val Val Thr Leu Ser Ser

305 310 315 320

Phe Val Ile Ala Val Val Ile Ala Ile Val Val Met Leu Leu Arg Asp

325 330 335

Val Met Ser Tyr Ala Phe Thr Gly Gly Glu Thr Ile Ala Lys Ala Ser

340 345 350

Ser Glu Leu Ala Pro Leu Leu Ala Ala Ser Val Val Leu Asn Gly Ile

355 360 365

Gln Pro Val Leu Ser Gly Val Ala Val Gly Cys Gly Trp Gln Gly Phe

370 375 380

Val Ala Tyr Val Asn Val Gly Cys Tyr Tyr Val Val Gly Ile Pro Leu

385 390 395 400

Gly Val Leu Leu Gly Phe Lys Phe Lys Leu Gly Ala Lys Gly Ile Met

405 410 415

Ala Gly His Val Trp Arg Asn Ser His Thr Asn Ser Asn Leu Thr Met

420 425 430

Gly His Phe Ser Asn Gln Leu Gly Arg Arg Gly Gln Val Glu Lys Thr

435 440 445

Lys Asn Arg Leu Asn Lys Trp Arg Asp Ser Ser Lys Thr Pro Leu Leu

450 455 460

Asn Glu Ser

465

Claims (23)

1.一种产生烟草植物的方法，所述方法包括下列步骤：

(a)使第一烟草品系的至少一株植物与第二烟草品系的至少一株植物杂交，所述第一烟草品系的植物在一个或多个内源核酸中具有突变，所述内源核酸与选自SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、17、19、21、23、25、27、29、31、33、37、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88和90的序列具有至少95％同一性，其中所述突变导致由所述内源核酸编码的转运蛋白的表达或功能相对于缺乏所述突变的相应植物降低；和

(b)选择具有所述突变的后代烟草植物。

2.权利要求1的方法，进一步包括选择包含这样的叶的后代烟草植物：所述叶相对于来自缺乏所述突变的植物的叶展现出至少一种生物碱降低至少5％。

3.权利要求2的方法，进一步包括选择包含这样的叶的后代烟草植物：所述叶在调制后，相对于来自缺乏所述突变的植物的调制叶展现出至少一种TSNA降低至少5％。

4.权利要求1的方法，其中所述一种或多种内源核酸与选自SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、17、19、21、23、25、27、29、31、33、37、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88和90的序列具有100％同一性。

5.一种包含来自烟草植物的调制叶的烟草产品，所述烟草植物在一个或多个内源核酸中具有突变，所述内源核酸与选自SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、17、19、21、23、25、27、29、31、33、37、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88和90的序列具有至少95％同一性，其中所述突变导致所述内源核酸编码的转运蛋白的表达或功能相对于缺乏所述突变的相应植物降低，并且其中所述调制叶包含所述突变。

6.权利要求5的烟草产品，其中所述叶相对于来自缺乏所述突变的植物的叶展现出至少一种生物碱降低至少5％。

7.权利要求6的烟草产品，其中所述至少一种生物碱选自烟碱、降烟碱、新烟碱、麦斯明和新烟草碱。

8.权利要求6的烟草产品，其中所述调制叶相对于来自缺乏所述突变的植物的调制叶展现出至少一种TSNA降低至少5％。

9.权利要求8的烟草产品，其中所述至少一种TSNA选自N’-亚硝基降烟碱、4-(甲基亚硝基氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮、N’-亚硝基新烟草碱、N’-亚硝基新烟碱和4-(甲基亚硝基氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁醛。

10.权利要求5的烟草产品，其中所述突变选自点突变、插入、缺失和取代。

11.权利要求5的烟草产品，其中所述调制叶是使用选自晾制、熏制、调制和晒制的方法调制的。

12.权利要求5的烟草产品，其中所述烟草植物是选自白肋烟型(Burley type)、深色型(dark type)、烤烟型(flue-cured type)、马里兰型(Maryland type)和东方型(Orientaltype)的类型。

13.权利要求5的烟草产品，其中所述烟草产品是无烟烟草产品。

14.权利要求13的烟草产品，其中所述无烟烟草产品选自咀嚼烟草、湿鼻烟(snus)、烟袋(pouch)、烟膜(film)、烟片(tablet)、涂层烟钉(coated dowel)和烟杆(rod)。

15.权利要求5的烟草产品，其中所述烟草产品选自小雪茄、无通气凹槽(non-ventilated recess)过滤嘴香烟、通气凹槽(vented recess)过滤嘴香烟、雪茄、鼻烟、烟斗烟草、雪茄烟草、香烟烟草、烟叶、烟丝和切碎烟草。

16.权利要求5的烟草产品，其中所述烟草产品包含滤芯或杆元件。

17.权利要求5的烟草产品，其中所述烟草产品包含选自粘合剂、增塑剂、稳定和调味剂的成分。

18.权利要求5的烟草产品，其中所述一种或多种内源核酸与选自SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、17、19、21、23、25、27、29、31、33、37、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88和90的序列具有100％同一性。

19.一种产生烟草产品的方法，该方法包括：

(a)提供来自在一个或多个内源核酸中具有突变的烟草植物的调制叶，所述内源核酸与选自SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、17、19、21、23、25、27、29、31、33、37、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88和90的序列具有至少95％同一性，其中所述突变导致由所述内源核酸编码的转运蛋白的表达或功能相对于缺乏所述突变的相应植物降低，并且其中所述调制叶包含所述突变；和

(b)利用来自步骤(a)的所述调制叶制造烟草产品。

20.权利要求19的方法，其中所述调制叶相对于来自缺乏所述突变的植物的调制叶展现出至少一种生物碱降低至少5％。

21.权利要求19的方法，其中所述调制叶相对于来自缺乏所述突变的植物的调制叶展现出至少一种TSNA降低至少5％。

22.权利要求1-3或19-21中任一项所述的方法，其中所述突变选自点突变、插入、缺失、和取代。

23.权利要求19的方法，其中所述一种或多种内源核酸与选自SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、17、19、21、23、25、27、29、31、33、37、41、43、45、47、49、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88和90的序列具有100％同一性。

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