CN111777639A - 十六烷氧基丙基膦酸酯的形态 - Google Patents

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Abstract

本发明描述了膦酸酯化合物的合成方法。根据本发明的方法允许大规模的制备具有高纯度和稳定性的膦酸酯的化合物。还公开了膦酸酯化合物的形态学形态。

Description

十六烷氧基丙基膦酸酯的形态
本申请是申请日为2014年10月10日，申请号为201480071309.8，发明名称为“十六烷氧基丙基膦酸酯的形态”的中国专利申请的分案申请。
相关申请
本申请要求2013年11月15日提交的美国临时申请号61/904,857的优先权和利益，其全 部内容通过引用全部并入到本申请中。
技术领域
本发明涉及膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十 六烷氧基)丙基]酯的固体晶型，以及相关组合物和方法。在本发明中提供的方法提供了具 有高纯度、高产量和高稳定性的化合物1的形态的合成及其晶体。
背景技术
在制药开发中，需要可重复的制备方法以获得在化学和形态上的纯净形式的药物活性 组分。获得均质固体状态的药物活性组分是遵守成品制剂的工业制备需求的先决条件。具 有不同形态的相同活性组分的固体形态在溶解速率、生物利用度和化学稳定性方面可显示 出显著的不同。因此，从工业化学和制药技术的观点来看，就操作技术而言，活性组分的 不同固体形态可具有显著不同的特性，例如，过滤或干燥速率、可溶性、压片期间的行为。 在此提及的特性对工业生产过程的功效、经济性、可重复性以及复杂性具有直接的影响并 可产生形态均匀的产品。
人们通常认为，与无定型形式相比，药物活性组分的晶体形式具有提高的化学稳定性 药物活性。由于在成品剂型的制造和保质期期间不同的分解过程，在稳定性方面的这种差 异一般很重要。因此，在制药开发期间，医药产品的制造者优选使用活性组分的晶体形式。
药物活性组分的多晶型可以以多种途径进行利用。例如，使用具有合适稳定性以及杂 质分布(纯度)的晶体形式用于制造成品剂型是至关重要的。同样重要的是，晶体活性组 分应该具有适当的用于大规模制造的操作和工业规模的制药技术的特性。然而，在设计不 同成品剂型期间，也可以利用多晶型的不同特性，例如溶解速率和颗粒大小等。具有低溶 解速率的多晶型可有助于延迟释放剂型的特性，而在立即释放剂型的制剂期间，本领域的 技术人员可能会欣赏具有较高溶解性或较高溶解速率的形式。而且，制备特定的多晶型不 是本领域的常规实践。本发明旨在提供具有期望特性的独特的化合物1的多晶型。
发明内容
本发明在某种程度上提供了一种用于制造工业规模的固体形态(例如晶体形式)的膦 酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯 (化合物1)的方法。在一些实施方式中，本发明提供了合成化合物的方法以提供具有高 产量和高纯度的该化合物。在一些实施方式中，与无定型形式相比，通过本发明的方法合 成的化合物1的晶型是稳定的。
本发明的一个目的是提供用于制备良好产量、大量以及具有期望纯度的固体形态的膦 酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯 (“化合物1”)的新方法。本发明提供的是[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基) 乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]膦酸酯(“化合物1”)的新的固体形态(例如晶体形 式)。
一个实施方式涉及多晶型或形态学形态II(术语“多晶型”或“形态学形态”在本申请中可以交换地使用)。在一些实施方式中，包括本发明的形态学形态II的组合物实质上是没有杂质的，即没有足够量的杂质存在于形态II的样品中。在一些实施方式中，包括形态学形态II的组合物实质上不含无定型的化合物1。本发明的实施方式还提供了形态II实质 上不含水合物形式。在一些实施方式中，包括形态II的组合物是无水的。
在一些实施方式中，包括本发明的形态学形态II的组合物在室温以小于约3mg/mL溶解 于1:1的甲醇:水的比例，并在约63℃以小于14mg/mL溶解。包括本发明的形态II的组合物 可具有包括在约2.81和约5.63度2θ处的主峰的X-射线衍射图谱。
在一个实施方式中，包括本实施方式的形态学形态II的化合物的组合物的特征在于与 图1、图7、图13、图14、图20、图21或图25中展示的实质上相似的X-射线衍射图谱、与图2中展示的实质上相似的指示和/或具有与图4、图15、图16或图22-24中展示的实质上相似的差示扫描量热法(DSC)的热谱。
本发明的一个实施方式提供了具有通式II或III的化合物的形态学形态II，所述形态学形 态II由具有以选自2.81、5.63、11.30、12.05、13.22、13.45、13.81、14.32、14.92、15.64、 16.25、16.41、17.00、17.67、17.87、18.15、18.35、18.50、19.00、19.57、19.85、20.22、 20.96、21.06、21.89、22.76、23.70、23.95、24.32、24.70、25.54、26.12、26.52、26.81、 27.07、27.48、27.71、29.11、29.36和29.61的度2θ(±0.2)表达的两个或多个(例如，三 个或多个、四个或多个、五个或多个、六个或多个、七个或多个、八个或多个、九个或多 个、或十个或多个)峰的X-射线衍射图谱表征或具有与图1、图7、图13、图14、图20、图 21或图25中展示的实质上相似的X-射线衍射图谱。在一个实施方式中，包括形态学形态II 的组合物具有与图2中展示的实质上相似的指示和/或与图4、图15、图16或图22-24中展示 的实质上相似的DSC热谱。在一些实施方式中，包括形态II的组合物的特征在于与图6中展 示的1H NMR实质上相似的1H NMR。
本发明提供了通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态学形态II，其特征 在于具有以选自2.81、5.63、11.30、12.05、13.22、13.45、13.81、14.32、14.92、15.64、 16.25、16.41、17.00、17.67、17.87、18.15、18.35、18.50、19.00、19.57、19.85、20.22、 20.96、21.06、21.89、22.76、23.70、23.95、24.32、24.70、25.54、26.12、26.52、26.81、 27.07、27.48、27.71、29.11、29.36和29.61度2θ(±0.2)表达的两个或多个(例如，三个 或多个、四个或多个、五个或多个、六个或多个、七个或多个、八个或多个、九个或多个、 或十个或多个)峰的X-射线衍射图谱，或具有与图1、图7、图13、图14、图20、图21或图25中展示的实质上相似的X-射线衍射图谱，和/或特征在于与图6中展示的实质上相似的1HNMR，以约100mg每周两次的剂量或以约200mg每周一次的剂量给药。在一个实施方式中， 具有与图2中展示的实质上相似的指示和/或与图4、图15、图16或图22-24中展示的实质上 相似的DSC热谱的包括形态学形态II的组合物以约100mg每周两次的剂量或以约200mg每 周一次的剂量给药。
本发明提供了通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态学形态II，所述形 态学形态II的特征在于具有以选自2.81、5.63、11.30、12.05、13.22、13.45、13.81、14.32、 14.92、15.64、16.25、16.41、17.00、17.67、17.87、18.15、18.35、18.50、19.00、19.57、 19.85、20.22、20.96、21.06、21.89、22.76、23.70、23.95、24.32、24.70、25.54、26.12、 26.52、26.81、27.07、27.48、27.71、29.11、29.36和29.61度2θ(±0.2)表达的两个或多个 (例如，三个或多个、四个或多个、五个或多个、六个或多个、七个或多个、八个或多个、 九个或多个、或十个或多个)峰的X-射线衍射图谱，或具有与图1、图7、图13、图14、图20、图21或图25中展示的实质上相似的X-射线衍射图谱，和/或特征在于与图6中展示的实质上相似的1H NMR，以约1-4mg/kg(例如，约1.0-1.1mg/kg、约1.1-1.2mg/kg、约1.2-1.3mg/kg、约1.3-1.4mg/kg、约1.4-1.5mg/kg、约1.5-1.6mg/kg、约1.6-1.7mg/kg、约1.7-1.8mg/kg、 约1.8-1.9mg/kg、约1.9-2.0mg/kg、约2.0-2.1mg/kg、约2.1-2.2mg/kg、约2.2-2.3mg/kg、约 2.3-2.4mg/kg、约2.4-2.5mg/kg、约2.5-2.6mg/kg、约2.6-2.7mg/kg、约2.7-2.8mg/kg、约2.8-2.9 mg/kg、约2.9-3.0mg/kg、约3.0-3.1mg/kg、约3.1-3.2mg/kg、约3.2-3.3mg/kg、约3.3-3.4mg/kg、 约3.4-3.5mg/kg、约3.5-3.6mg/kg、约3.6-3.7mg/kg、约3.7-3.8mg/kg、约3.8-3.9mg/kg或约 3.9-4.0mg/kg)的剂量给药。
在一些实施方式中，包括形态学形态II的组合物以约1-4mg/kg(例如，1.0-1.1mg/kg、 约1.1-1.2mg/kg、约1.2-1.3mg/kg、约1.3-1.4mg/kg、约1.4-1.5mg/kg、约1.5-1.6mg/kg、约 1.6-1.7mg/kg、约1.7-1.8mg/kg、约1.8-1.9mg/kg、约1.9-2.0mg/kg、约2.0-2.1mg/kg、约2.1-2.2 mg/kg、约2.2-2.3mg/kg、约2.3-2.4mg/kg、约2.4-2.5mg/kg、约2.5-2.6mg/kg、约2.6-2.7mg/kg、 约2.7-2.8mg/kg、约2.8-2.9mg/kg、约2.9-3.0mg/kg、约3.0-3.1mg/kg、约3.1-3.2mg/kg、约 3.2-3.3mg/kg、约3.3-3.4mg/kg、约3.4-3.5mg/kg、约3.5-3.6mg/kg、约3.6-3.7mg/kg、约3.7-3.8 mg/kg、约3.8-3.9mg/kg或约3.9-4.0mg/kg)的剂量给药，所述组合物具有与图2中展示的实 质上相似的指示，和/或与图4、图15、图16或图22-24中展示的实质上相似的DSC热谱。
本发明提供了式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态学形态H，形态学形 态H的特征在于具有与图18中展示的实质上相似的X-射线衍射图谱，以约100mg每周两次 的剂量或以约200mg每周一次的剂量给药。在一个实施方式中，包含式II或III的化合物的 形态学形态H的组合物以约100mg每周两次的剂量或以约200mg每周一次的剂量给药，具 有与图3中展示的实质上相似的指示和/或与图17中展示的实质上相似的DSC热谱。
在一些实施方式中，包括形态学形态H的组合物的特征在于，与图18中展示的实质上 相似的X-射线衍射图谱，具有与图3中展示的实质上相似的指示，和/或与图17中展示的实 质上相似的DSC热谱，以约1-4mg/kg(例如，1.0-1.1mg/kg、约1.1-1.2mg/kg、约1.2-1.3mg/kg、约1.3-1.4mg/kg、约1.4-1.5mg/kg、约1.5-1.6mg/kg、约1.6-1.7mg/kg、约1.7-1.8mg/kg、 约1.8-1.9mg/kg、约1.9-2.0mg/kg、约2.0-2.1mg/kg、约2.1-2.2mg/kg、约2.2-2.3mg/kg、约 2.3-2.4mg/kg、约2.4-2.5mg/kg、约2.5-2.6mg/kg、约2.6-2.7mg/kg、约2.7-2.8mg/kg、约2.8-2.9 mg/kg、约2.9-3.0mg/kg、约3.0-3.1mg/kg、约3.1-3.2mg/kg、约3.2-3.3mg/kg、约3.3-3.4mg/kg、 约3.4-3.5mg/kg、约3.5-3.6mg/kg、约3.6-3.7mg/kg、约3.7-3.8mg/kg、约3.8-3.9mg/kg或约 3.9-4.0mg/kg)的剂量给药。
在一些实施方式中，形态II与形态H不同。例如，图25显示了两个形态II样品(上面的 两个图谱)和一个形态H样品(下面的样品)的X射线粉末衍射图谱的比较。从比较可以看出，形态II与形态H的不同之处在于形态II在约例如24.8°2Θ和22.9°2Θ处存在明显的峰。相 比之下，在一些实施方式中，形态II不具有在形态H中可见的实质的峰，例如在约24.1°2Θ、 21.5°2Θ、20.9°2Θ和12.6°2Θ处。
在一些实施方式中，本发明提供了被配制为药物组合物(见表11和12)的化合物1的 形态II(或其药学上可接受的盐)。在一个实施方式中，将化合物1的形态II(或其药学上可接受的盐)配制为制剂1的片剂(见表11)。在另一个实施方式中，将化合物1的形态II (或其药学上可接受的盐)配制为制剂2(见表11)的片剂。而在另一个实施方式中，将 化合物1的形态II(或其药学上可接受的盐)配制为制剂3的悬浮液(见表12)。而在另一 个实施方式中，将化合物1的形态II(或其药学上可接受的盐)配制为制剂4的悬浮液(见 表12)。
包括根据本发明的化合物的形态II的组合物可通过纯化方法来生产，所述方法包括从 甲醇中重结晶膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六 烷氧基)丙基]酯(化合物1)。
在一些优选的实施方式中，由本发明所述的方法生产的化合物1通过一系列的五种截 然不同的重结晶来纯化。例如，化合物1可首先通过三种截然不同的连续的重结晶从甲醇 中纯化。然后，化合物1可从正庚烷和甲醇中重结晶。在一些优选的实施方式中，比起正 庚烷/甲醇重结晶，甲醇重结晶能够除去不同系列的杂质。最后，化合物1可从甲醇中再次 被纯化。在一些优选的实施方式中，从甲醇中的最后重结晶用形态学形态II的种子接种， 并以保证形态II的形成的缓慢的、受控制的冷却进行。
本发明还提供了用于合成包括化合物1的形态学形态II的组合物的方法。合成包括本发 明的形态学形态II的组合物的方法包括以下步骤：
a.将(S)-N1-[(2-羟基-3-三苯基甲氧基)丙基]胞核嘧啶(化合物2)、P-[[[4-甲基苯基) 磺酰基]氧基]甲基]-单[3-(十六烷氧基)丙基]酯钠盐(化合物4)、叔丁醇镁和二甲基甲酰胺 (DMF)的混合物加热；
b.冷却并加入醋酸异丙酯；
c.用HCl溶液和NaCl溶液顺次洗涤；
d.用甲醇稀释浓缩物，形成含有膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲 基)-2-(三苯基甲氧基)乙基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯(化合物3)的混合物；
e.在甲醇中稀释含有化合物3的浓缩物；
f.添加HCl气体并将温度保持在低于约20℃；
g.过滤以除去杂质并在丙酮中制备浆液；
h.过滤所述浆液并用丙酮洗涤；
i.从甲醇中重结晶；
j.从甲醇中第二次重结晶；
k.从甲醇中第三次重结晶；
l.从正庚烷和甲醇中重结晶；
m.在甲醇中溶解粗产品；
n.向溶液中加入膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基] 单[3-(十六烷氧基)丙基]酯(化合物1)的留种并搅拌；
o.冷却、过滤、并用甲醇洗涤溶液以及干燥；
由此合成膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六 烷氧基)丙基]酯(化合物1)的形态学形态II。
本发明提供的合成的形态II具有大于或等于约91％wt/wt、大于或等于约95％wt/wt、或 大于或等于约99％wt/wt的纯度。
本发明还提供了一种用于合成包括化合物1的形态学形态II的组合物的方法。合成包括 本发明的形态学形态II的组合物的方法包括如下步骤：
将(S)-N1-[(2-羟基-3-三苯基甲氧基)丙基]胞核嘧啶(化合物2)、P-[[[4-甲基苯基)磺酰 基]氧]甲基]-单[3-(十六烷氧基)丙基]酯钠盐(化合物4)、叔丁醇镁和二甲基甲酰胺(DMF) 的混合物在约75-85℃之间加热约3小时；
a.将所述混合物冷却到约25-35℃并加入醋酸异丙酯；
b.进一步将溶液冷却到约15-25℃并用HCl溶液和NaCl溶液顺次洗涤；
c.通过真空蒸馏除去醋酸异丙酯，从而使有机相形成浓缩物；
d.用甲醇稀释所述浓缩物，并进一步除去醋酸异丙酯，从而再次浓缩并形成含有膦酸 [[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)-2-(三苯基甲氧基)乙基]甲基]单[3-(十六烷 氧基)丙基]酯(化合物3)的混合物；
e.在甲醇中稀释含有化合物3的浓缩物；
f.以使温度维持在约-5至15℃之间的速率加入HCl；
g.在过滤除去固体杂质之前，将反应在约10-20℃维持2小时；
h.用水稀释滤液并用NaOH调节pH到约2.3-2.7；
i.在丙酮中制备浆液之前，在约35-45℃下将固体进行过滤并洗涤约1小时；
j.过滤所述浆液并用丙酮洗涤；
k.在等于或小于约40℃的温度下将丙酮洗涤后的粗产品干燥约12小时；
l.在甲醇中将所述粗产品在约60-70℃下加热；
m.抛光过滤(polish filtered)，冷却至约58-62℃，搅拌一小时，冷却到约48-52℃约 六小时，然后冷却到到约17-23℃两小时，过滤，然后用甲醇洗涤；
n.重复步骤l-m两次或多次；
o.在甲醇中在约64℃下加热该产品，并在40分钟以上的时间内缓慢加入正庚烷，同时保持温度高于50℃；
p.在约55℃的温度下保持30min并在6h以上的时间段冷却到40℃；
q.在40℃下搅拌2h，然后在六小时以上的时间冷却到20℃；
r.在20℃搅拌2小时；
s.过滤并用正庚烷和甲醇洗涤，然后在真空条件下干燥；
t.在冷却到约59-61℃之前，将固体溶解在甲醇中，然后搅拌约20分钟；
u..向溶液中加入膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基] 单[3-(十六烷氧基)丙基]酯(化合物1)的留种，并搅拌2小时；
v.通过8小时的时间的搅拌将溶液冷却到约47-53℃，然后搅拌约两小时；
w.将搅拌的溶液在约六小时以上的时间里进一步冷却到约17-23℃，并进一步搅拌约 两小时；
x.过滤并用甲醇洗涤所述溶液；
y.在等于或小于约40℃的温度下干燥约二十四小时；从而合成膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2- 氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯(化合物1)的形态 学形态II。
本发明提供了制备化合物1的形态II的方法，包括将(S)-N1-[(2-羟基-3-三苯基甲氧基)丙 基]胞核嘧啶(化合物2)、P-[[[4-甲基苯基)磺酰基]氧基]甲基]-单[3-(十六烷氧基)丙基]酯钠 盐(化合物4)与叔丁醇镁和二甲基甲酰胺(DMF)混合的步骤。
本发明提供了一种通过实施晶化步骤合成化合物1的晶体形态II的方法。例如，含有化 合物1的溶液(例如甲醇溶液)可用约0.5％、约3％或约7％的膦酸种子接种(例如，所述种 子可以是化合物1的形态I或形态II)。然后该溶液可以被允许晶化。在某些实施方式中， 伴随着在结晶的过程中的低速搅拌或搅动，化合物1的晶体形态I结晶。在一个实施方式中， 搅拌的速率影响制备的形态类型。在另一个实施方式中，搅拌的速率不影响制备的形态类 型。这些实施方式通过包括甲醇的方法提供了形态II的晶化。这些实施方式进一步提供了 通过用膦酸的形态II或形态I接种来形成形态学形态II的晶化方法。另外，在一些实施方式 中，通过缓慢冷却甲醇提供形态II。例如，在一些优选的实施方式中，化合物1可溶解在65℃ (例如大约的回流温度)的甲醇中并在约65℃保持1小时，然后在接种形态II之前冷却到 61℃。可在60℃下搅拌混合物1小时并在8个小时以上的时间里冷却到50℃。可以将混合物 在50℃保持2小时，然后进一步在至少6小时里(例如过夜)从50℃冷却到20℃，并在过滤 之前在20℃搅拌至少两小时。在一些优选的实施方式中，缓慢冷却程序可帮助保证形态II 的形成。
在一个实施方式中，本发明提供了没有接种的用约100Kg的起始材料制备在没有接种 的情况下生产的形态II。在没有接种的情况下生产形态II的方法包括快速冷却甲醇重结晶， 其导致与当所述方法包括接种和缓慢冷却时形态II的颗粒大小相比更小的颗粒大小，。
在一些实施方式中，包括根据本发明的方法合成的形态II的组合物实质上没有杂质。 在一些实施方式中，包括根据本实施方式的方法合成的形态II的组合物具有大于或等于约 99％wt/wt的纯度。在一些优选的实施方式中，实质上的(例如约100％的纯度)纯度是一 系列的重结晶的结果，所述一系列的重结晶可除去大量的杂质。在一些实施方式中，虽然 任何特殊的重结晶技术都可除去杂质，但与其他重结晶相比，某些重结晶可更有效地除去 某些特定的杂质。例如，在一些实施方式中，从甲醇中的三次初始重结晶除去了某些杂质。 接下来，在一些实施方式中，从正庚烷和甲醇中重结晶能去除残留在化合物1中的另外(例 如不同的)的杂质，所述杂质不能被单独的甲醇重结晶完全除去。采用接种以及缓慢的冷 却的最后重结晶可除去另外的痕量杂质并产生化合物1的形态II。
在一些实施方式中，包括通过本发明的方法合成的形态II的组合物可以是水合物。在 一些实施方式中，包括通过本发明的化合物的形态II的组合物不是水合物。在一些实施方 式中，包括通过本发明的方法合成的形态II的组合物实质上不含水合物形式。在一些实施 方式中，包括形态II的组合物被部分水合或为部分水合物。
在一些实施方式中，在暴露在约43％RH约12天后，包括本发明的形态II的组合物部分 地转化为水合物。在一些实施方式中，包括本实施方式的形态II的组合物在DSC热谱中在 约41-43℃(最高峰)显示出少量吸热，接着在约90和95℃(最高峰)显示出重叠大量吸热。包括本实施方式的形态II的组合物的最后吸热在约196℃启动。
本发明提供了一种具有式II或III的化合物的形态II的合成方法，所述形态II的特征在于 具有以选自2.81、5.63、11.30、12.05、13.22、13.45、13.81、14.32、14.92、15.64、16.25、 16.41、17.00、17.67、17.87、18.15、18.35、18.50、19.00、19.57、19.85、20.22、20.96、 21.06、21.89、22.76、23.70、23.95、24.32、24.70、25.54、26.12、26.52、26.81、27.07、 27.48、27.71、29.11、29.36和29.61度2θ(±0.2)表达的两个或多个(例如，三个或多个、 四个或多个、五个或多个、六个或多个、七个或多个、八个或多个、九个或多个、或十个 或多个)峰的X-射线衍射图谱。
本发明进一步提供了具有式II或III的化合物的形态II的合成方法，所述形态II的特征在 于具有与图1、图7、图13、图14、图20、图21或图25展示的实质上相似的X射线衍射图谱。
本发明的一些实施方式中提供了一种具有式II或III的化合物的形态II的合成方法，所述 形态II的特征在于具有与图4、图15或图16展示的实质上相似的DSC热谱。
本发明提供了稳定晶型的式II或III的化合物的形态II。
本发明提供了合成(S)-N1-[(2-羟基-3-三苯基甲氧基)丙基]胞核嘧啶(化合物2)的方法， 包括以下步骤：
a.将(S)-三苯甲基缩水甘油醚、胞核嘧啶、碳酸钾和N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的混合物进行加热；
b.将反应混合物冷却，并用甲苯淬灭；
c.将由此得到的步骤b的浆液进行冷却，过滤，用甲苯洗涤；
d.在使固体在甲苯中形成悬浮液，过滤，然后用丙酮洗涤；
e.在水/丙酮中研磨所述固体，过滤，用丙酮洗涤并悬浮于丙酮中；
f.任选地重复步骤d-e以除去残留的胞核嘧啶和工艺相关的杂质；以及
g.真空干燥滤饼，从而产生(S)-N1-[(2-羟基-3-三苯基甲氧基)丙基]胞核嘧啶(化合物 2)。
在一个实施方式中，合成的化合物的HPLC(AUC)纯度等于或大于91％wt/wt，等于或大于91％wt/wt，或等于或大于99％wt/wt。
本发明还提供了一种合成(S)-N1-[(2-羟基-3-三苯基甲氧基)丙基]胞核嘧啶(化合物2) 的方法，包括以下步骤：
a.将(S)-三苯甲基缩水甘油醚、胞核嘧啶、碳酸钾和N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的混合物在约85-95℃加热约9小时；
b.将步骤a的反应混合物冷却到约66-70℃并用甲苯淬灭；
c.将步骤b得到的浆液冷却到约-10至5℃，过滤，用甲苯洗涤；
d.使固体在甲苯(168.8kg)中在约15-25℃形成悬浮液，过滤，然后用丙酮洗涤；
e.在约17-22℃下在水/丙酮(90.0kg/54.0kg)中研磨所述固体，过滤，并用丙酮(36.0 kg)洗涤；
f.使过滤的滤饼在丙酮(178.9kg)中悬浮，并在接近约35-45℃下加热约3小时，用丙酮(36.0kg)洗涤。
g.根据需要清洗和研磨被任选地重复从而除去残留的胞核嘧啶以及工艺相关的杂 质。将滤饼在等于或小于约40℃下真空干燥约12小时从而获得约45.0kg(约65.0％) 的化合物2。合成的化合物的HPLC(AUC)纯度等于或大于99％。
本发明中展示的许多独特的功能和益处将对本领域的技术人员变得很明显，并在下面 的详细描述中进行了详细阐述。本发明的第一个益处是提高了母体化合物(化合物1)的 纯度。容易理解地，在化学和制药领域，当对化合物进行表征以及将化合物用作药剂施用 时，纯度是极其重要的。在一些优选的实施方式中，现有技术提供了化合物1的五种不同的重结晶。在一些优选的实施方式中，前三次重结晶是在甲醇中并用来从化合物1中除去某些杂质(例如下面的化合物A和B)。在一些优选的实施方式中，从正庚烷和甲醇中的第 四次重结晶(例如化合物1)被用来除去在前三次甲醇重结晶后残留的其他杂质(例如下 面的化合物C和D)。因此，该技术提供了一种用不同的和正交的纯化方法来有效地除去化 合物1中的杂质并获得实质上(例如>99％或>99.9％)纯净的化合物1的组合物的系统。
本发明的第二个益处是能产生用于制药生产(例如商业制药生产)的化合物1的特定 的多晶型。在一些优选的实施方式中，第五次重结晶(例如从甲醇中缓慢冷却以及用形态II接种)能够可靠地并且一致地产生形态II。本领域的技术人员将容易地意识到给定化合物 (例如化合物1)可以以多种不同的多晶型存在。这些多晶型可具有显著不同的物理特性， 例如密度、溶解性以及甚至是化学反应性。相同化合物的不同多晶型间的异质性多晶型可 使可靠地提供给定制剂(例如化合物1)准确无误的以及精确的剂量的努力混乱。例如， 如果相同化合物的两种不同的多晶型具有不同的密度，那么很难制备包括可靠地具有在摩 尔基础上的化合物本身的相同量的药物组合物。相似地，如果不同的多晶型具有不同的溶 解性曲线，那么它们在身体内可起到不同的作用(例如，不同的多晶型在血液中可能溶解 更快或更慢)。这可以使可靠地提供例如立即释放或缓释剂型的尝试复杂化。换句话说， 多晶型是在不同药剂的性能中遇到不一致性的原因。参见例如Caira,M.R.Crystalline Polymorphism in Organic Compounds。因此，给定化合物(例如化合物1)的多晶型可具有 不是化合物本身固有的独特的特性。
因此，制备特定的多晶型不是常规实践。的确，在一些情况下，获得特定的多晶型可 能是不可预测的和/或不可靠的，并且用于生产它们的方法不能持续或可靠产生它们。参见 Polymorphism in Pharmaceutical Solids,2nd Ed.,Drugs and thePharmaceutical Sciences (2009),Informa Healthcare USA,Inc.,New York,NY,Chapter 3,page 52,Introduction and Chapter 4,page 77,first full paragraph andpage 87,first full paragraph。
本发明提供了持续和可靠地获得特定多晶型(例如化合物1的形态II)的方法。在一些 优选的实施方式中，通过以适当量的形态II的种晶接种从甲醇中的最后的重结晶产生形态 II。而且，在一些优选的实施方式中，重结晶通过缓慢冷却斜率进行以确保化合物1的形态 II的形成。在一些优选的实施方式中，将形态II接种和缓慢冷却程序结合能够可靠地以及可 预测地确保从最后的甲醇重结晶中形成形态II。
在一些实施方式中，式II或III的化合物(例如，化合物1)可以为无定型形式。
在一个或多个方面，本发明提供了膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基) 乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯(化合物1)的形态II。
在另一方面，本发明提供了用于治疗病毒性感染的组合物，其包括形态学形态II的膦 酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯 (化合物1)。在一些实施方式中，本发明提供了用于治疗病毒性感染的组合物，其包括 在此公开的任何化合物(例如，化合物1)或形态学形态(例如，形态I、II或H)。
在另一方面，本发明提供了包括形态学形态膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶 基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯(化合物1)的形态学形态II的组合物 在制备用于治疗病毒性感染的药物中的用途。在一些实施方式中，本发明提供了在制备用 于治疗病毒性感染的药剂中使用的的组合物，其包括在此公开的任何化合物(例如，化合 物1)或形态学形态(例如，形态I、II或H)。
现有技术的附加特征和益处(例如对于合成化合物1，提高了制备产量以及减少了时 间)对本领域的技术人员是显而易见的。
除非另有说明，在本发明中使用的所有的技术和科学术语具有本发明所属领域的普通 技术人员所理解的相同的意思。在矛盾的情况下，以本发明的说明书(包括定义)来限制。 在说明书中，单数形式也包括复数，除非上下文另有规定。虽然与本发明描述的相似或等 同的方法和材料可被用于本发明的实践或试验，但下面描述了合适的方法和材料。在本发 明中提及的所有的出版物、专利申请、专利和其他文献通过引用并入到本发明中。本发明 引用的参考文献不被认为是本发明的现有技术。此外，材料、方法和实施方式仅是示意性 的说明并不旨在限制本发明。
附图说明
本发明的附加特征和益处从下面详细的描述和权利要求看将是显而易见的。
图1化合物1形态II(样品1)样品的XRPD散射图。
图2显示了用Cu-Kα辐射收集的化合物1形态II(样品1)的XRPD的指示结果。
图3显示了用Cu-Kα辐射收集的化合物1形态H的XRPD的指示结果。
图4显示了化合物1形态II(样品1)的DSC热谱。
图5显示了化合物1形态II的颗粒大小分布，体积加权平均值为25.663。
图6显示了化合物1形态II(样品1)的1H NMR谱。
图7显示了化合物1形态II的样品(样品2)的XRPD散射图。
图8显示了化合物1形态II(样品2)的DSC热谱。
图9显示了化合物1形态I、II(样品1)和H的XRPD图谱的比较。
图10显示了化合物1药物产品样品片剂1(上面的区域)和片剂2(下面的区域)) 的XRPD的叠图。
图11显示了具有形态II、形态I(样品1)和形态H的化合物1的药物产品样品的XRPD的叠图。
图12显示了化合物1形态II(样品1)在甲醇中的溶解曲线和介稳区(MSZ)。
图13显示了形态II片剂1的XRPD。
图14显示了形态II片剂2的XRPD。
图15显示了形态II片剂1的DSC热谱。在约90、93和165℃显示吸热。
图16显示了形态II片剂2的DSC热谱。在约89、94和165℃显示吸热。
图17显示了形态H的热分析(DSC热谱)。
图18显示了具有峰移的化合物1的两个形态H样品的XRPD叠图(～15-30 2-θ)。
图19显示了通过从甲醇和快速冷却重结晶产生化合物1形态II的样品(十字形)与用接种和慢速冷却产生的样品3(圆形)和4(三角形)的颗粒尺寸分布重叠的比较。
图20显示了化合物1形态II(样品3)的样品的XRPD散布图。
图21显示了化合物1形态II样品(样品3)的第二个XRPD散布图。
图22显示了化合物1形态II(样品3)的DSC热谱。
图23显示了化合物1形态II(样品3)的特写DSC热谱。
图24显示了化合物1形态II(样品3)的另一DSC热谱。
图25显示了化合物1形态II(样品3)；化合物1形态II(样品1)；以及化合物1形 态H的XRPD的叠图比较。
图26显示了化合物1形态II(样品3)；化合物1形态II以及化合物1形态H的DSC 热谱叠图比较。
图27显示了两次快速冷却甲醇重结晶后的化合物1的色谱图。色谱图显示化合物1具有98.5％的纯度。
图28显示了采用形态控制的三次慢速冷却甲醇重结晶后的化合物1，形态II的色谱图。 色谱图显示化合物1具有99.5％的纯度。
图29显示了采用形态控制的一次庚烷/甲醇重结晶接着一次甲醇慢速冷却重结晶后的 化合物1，形态II的色谱图。色谱图显示化合物1具有100％的纯度。
图30显示了庚烷/甲醇重结晶接着三次甲醇重结晶后的化合物1，形态II的色谱图。 色谱图显示化合物1具有100％的纯度。
具体实施方式
当化合物被用于制药目的时，化合物的固体形态(例如，例如晶体状态)可能是很重 要的。与无定型固体相比，晶体化合物的固体物理特性可从一种固体形态改变为另一种固 体形态，这可能影响其用于制药用途的适用性。此外，晶体化合物的不同固体形态可能包 含不同类型和/或不同量的杂质。化合物的不同固体形态还可具有在暴露于热、光和/或湿 气(例如，大气的湿气)一段时间后不同的化合物稳定性，或不同的溶解。仍然需要膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯 (“化合物1”)的固体晶型，该固体晶型在用于药物和药品开发时，不吸湿并显示出改 善的化学稳定性。
以不止一种晶体形态存在的物质的能力被定义为多晶型性，特定物质的不同晶体形态 被称为彼此的“多晶型”。总之，多晶型性被物质(或其盐或水合物)分子的能力所影响来改变它的构象或形成不同的分子间或分子内的相互作用(例如，不同的氢键结构)，在 不同的多晶型的晶格中，这反映在不同的原子排列中。相比之下，物质的整体外部形态被 称为“形态”，这指的是晶体的外部形状和存在的平面，而不提及内部结构。基于不同的 条件，例如，生长速率、搅拌和存在的杂质，特定的晶体多晶型可展示出不同的形态。
物质不同的多晶型可具有不同能量的晶格，因此，在固体状态下，它们可显示出不同 的物理特性，例如形状、密度、熔点、颜色、稳定性、可溶性、溶解速率等等，相反，这 些可影响特定的多晶型的稳定性、溶解速率和/或生物利用度和将它用作制药以及在药物组 合物中的适用性。见例如，Polymorphism in Pharmaceutical Solids,2nd Ed.,Drugs andthe Pharmaceutical Sciences(2009),Informa Healthcare USA,Inc.,New York,NY,Chapter 3,page 52,Introduction and Chapter 4,page 77,first full paragraph andpage 87,first full paragraph and Caira M.R.,Crystalline Polymorphism ofOrganic Compounds。
美国专利申请8569321公开了化合物1的晶体的物理形态，其被指定为形态A。本发明 包括化合物1的新的多晶型形态(其为稳定的多晶型)和其制备方法。
已经在约100kg的规模下使用从甲醇中快速冷却晶化步骤生产化合物1。没有接种的 情况下生产形态II的方法涉及快速冷却甲醇重结晶，相比于包括接种和慢速冷却步骤的方 法产生的形态II的颗粒大小，其会产生更小的颗粒尺寸。
本发明涉及(i)表征筛选的化合物1形态学形态，以评价形态学形态中的固体 形态和颗粒的差异，(ii)固体形态筛选，集中在工艺溶剂上以评价化合物1产生不同晶 体形态的倾向，以及(iii)改善的结晶方法，其更加受控和具有可重复性。
本发明提供了取代膦酸酯的合成方法。在某些方面，本发明提供了具有通式I的结构 的化合物或其对映异构体、非对映异构体、外消旋体或混合物的制备方法：
Figure BDA0002508295000000131
其中：
R1为未取代或取代的C1-C6烷氧基-，或未取代或取代的C1-C30烷氧基-C1-C6-烷氧基-。
在另一个实施方式中，R1为C10-C30烷氧基-C2-C4-烷氧基-。
在另一个实施方式中，R1为十六烷氧基丙氧基-。
在此提供了化合物1的新的晶体形态。
在一个实施方式中，本发明提供了具有通式II的结构的化合物或其对映异构体、非对 映异构体、外消旋体或混合物，或其药学上可接受的盐的制备方法：
Figure BDA0002508295000000141
在一个实施方式中，本发明提供了用于制备具有通式III的结构的化合物或其药学上可 接受的盐的方法：
Figure BDA0002508295000000142
形态学形态I、II和H
在此描述的为化合物1的多晶型形态I、II和H(在此也分别被称为“多晶型I”、“多晶型II”和“多晶型H”)。
化合物1的形态II可以高度晶化的形式生产，这在制备制药制剂中是非常有用，并将改 善化合物的一般处理、操作和储存。在一个实施方式中，具有式II或III的化合物的形态II 的晶型被称为“多晶型II”、“形态学形态II”或“形态II。”(“多晶型”、“形态学形 态”、或“形态”在整个公开中交替使用)。如在本此描述的，多晶型II或形态II显示出了 可被利用以获得新的药理学性质的物理特性，并可用于药物和药品的开发。
多晶型II(或“形态学形态II”或“形态II”)具有涉及其游离酸形式以及涉及其他多 晶型的许多有益的物理特性。相比于通式II或III的化合物的其他多晶型(例如，形态I和/ 或形态H)，形态II具有低的吸水性。相比于化合物1的其他多晶型(例如，形态I和/或形态H)，形态II具有低的吸水性。为了药物制剂的一致性(例如，压片)，通常要求活性药 物组分(API)化合物的多晶型形态最低限度吸湿。具有高度吸湿的药物形式也可能不稳 定，因为药物的溶解速率(以及其他物理-化学特性)可随着其被储存的具有各种湿度的环 境所改变。而且，吸湿性可影响化合物的大规模处理和制造，因为当制备包括吸湿活性剂 的药物组合物时，很难测定该吸湿活性剂的重量。例如，在大规模的片剂或其他药用制剂 制备中，高度吸湿性化合物可导致批次生产的不一致性，产生临床和/或处方困难。相比于 通式II或III的化合物的其他多晶型(例如，形态I和/或形态H)，形态II可具有低的吸湿性。 如此，形态学形态II被储存可评估的时期或条件下(例如，相对低的湿度条件)，而没有 实质上或任何不利的制剂改变。
在一个实施方式中，本发明提供了化合物1的形态学形态II。本发明提供了无水的形态 学形态II。
在一些实施方式中，化合物1实质上是没有杂质的。在一些实施方式中，化合物1或其 药学上可接受的盐的纯度等于或大于92％(例如，≥92％、≥93％、≥94％、≥95％、≥96％、 ≥97％、≥98％、≥99％或≥99.5％)。而在其他实施方式中，化合物1或其药学上可接受的 盐具有等于或大于91％(例如，≥91％、≥92％、≥93％、≥94％、≥95％、≥96％、≥97％、 ≥98％、>99％或>99.5％)的纯度。在一个实施方式中，化合物1或其药学上可接受的盐的 纯度约为99％。在一个实施方式中，化合物1多晶型为水合物。在另一个实施方式中，化合 物1多晶型不是水合物。而在另一个实施方式中，所述化合物为溶剂合物，例如，甲醇溶 剂合物，乙醇溶剂合物或异丙醇溶剂合物。
在一些实施方式中，通式I、II和/或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的纯度为等 于或大于92％(例如，≥92％、≥93％、≥94％、≥95％、≥96％、≥97％、≥98％、≥99％或≥ 99.5％)。在其他实施方式中，所述化合物以形态II或其药学上可接受的盐的形式存在。而 在其他实施方式中，化合物1为形态II并具有等于或大于91％(例如，≥91％、≥92％、≥93％、 ≥94％、≥95％、≥96％、≥97％、≥98％、>99％或>99.5％)的纯度。在一个实施方式中， 通式I、II和/或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的纯度约为99％。在一个实施方式中， 通式I、II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)从在此描述的合适的重结晶溶剂中重结 晶粗化合物获得。
本发明提供了通过改变温度和甲醇:水的比例合成化合物1或其药学上可接受的盐。本 发明提供了通过改变温度和甲醇:水的比例合成通式II或III的化合物(或其药学上可接受的 盐)的形态II。在改变温度和甲醇:水的比例的情况下，形成水合物形式(例如，形态H) 或水合物形式(例如，形态H)和无水形式(例如，形态II)的混合物。
在一些实施方式中，在晶化过程期间，通过在不同的甲醇-水浓缩液中构建悬浮液，获 得通式II和/或III的化合物((或其药学上可接受的盐)的无水形式(例如，形态II)。在 一个实施方式中，从低于室温的悬浮液(例如，在环境温度下制备的悬浮液)中，约98:2或 99:1的甲醇:水的比例回收无水的形态学形态(例如，形态II)。相比之下，在另一个实施方式中，约97:3或更高的甲醇:水的比例以含有形态II的混合物或作为形态H的纯净形式回收 水合物形态学形态(例如，形态H)。本发明提供了等于或不高于约1和3％之间的水浓度对合成通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的无水形式(例如，形态II)是必要的。这些实施方式的水含量的变化依赖于甲醇中的水含量，并且用于通式II或III的化合物((或其药学上可接受的盐)的无水形式(例如，形态II)的合成的含水量大于1至3％。
在另一个实施方式中，在悬浮液中以等于或小于5％(例如，≤5-4.9％、≤4.9-4.8％、≤ 4.8-4.7％、≤4.7-4.6％、≤4.6-4.5％、≤4.5-4.4％、≤4.4-4.3％、≤4.3-4.2％、≤4.2-4.1％、4.1-4.0％、 ≤4.0-3.0％或≤3.0-2.0％)的水存在的情况下，从室温的悬浮液中获得通式II或III的化合物 (或其药学上可接受的盐)的无水形态学形态(例如，形态II)。在一个实施方式中，从 室温的悬浮液中获得通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的无水形态学形态(例 如，形态II)的临界水浓度等于或小于5％。
而在另一实施方式中，在悬浮液中以等于或小于10％(例如，≤10-9％、≤9-8％、≤8-7％、 ≤7-6％、≤6-5％、≤5-4％、≤4-3％或≤3-2％)的水存在的情况下，从高于室温(例如，等 于或大于30℃)的悬浮液中获得通式II或III的化合物的无水形态学形态(例如，形态II)。 在一个实施方式中，从约45℃的悬浮液中获得通式II或III的化合物(或其药学上可接受的 盐)的无水的形态学形态(例如，形态II)的临界水浓度等于或小于10％。
在一些实施方式中，包括通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态学形 态II的组合物实质上不含形态I和/或形态H。例如，包括本发明的形态学形态II的组合物包 括等于或小于10％形态I和/或形态H。在一些实施方式中，形态II的组合物包括等于或小于 9％、等于或小于8％、等于或小于7％、等于或小于6％、等于或小于5％、等于或小于4％、 等于或小于3％、等于或小于2％、等于或小于1％、等于或小于0.9％、等于或小于0.8％、等 于或小于0.7％、等于或小于0.6％、等于或小于0.5％、等于或小于0.4％、等于或小于0.3％、 等于或小于0.2％、等于或小于0.1％、等于或小于0.05％、等于或小于0.01％或等于或小于 0.001％的形态I和/或形态H。
在一些实施方式中，如果储存在40％或更大相对湿度(RH)的条件下，那么包括本发 明的形态学形态II的组合物可转换成水合物的形式(例如，形态H)。在一些实施方式中，如果储存在40％或更大相对湿度(RH)的条件下几天，那么包括本发明的形态学形态II的组合物可部分地转换成形态学形态H。在一些实施方式中，暴露到约43％的相对湿度(RH)的条件下约12天，包括形态学形态II的组合物可部分地转化为水合物的形式(例如，形态H)。 包括本发明的形态学形态II的组合物的完全转换发生在约等于或大于80％RH、约等于或大 于81％RH、约等于或大于82％RH、约等于或大于83％RH、约等于或大于84％RH、约等于或大于85％RH、约等于或大于86％RH、约等于或大于87％RH、约等于或大于88％RH、 约等于或大于89％RH的条件下5-20天之间(例如，5天、6天、7天、8天、9天、10天、11 天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天)。
本发明提供了将形态II暴露到从约43到约85％RH的不同的RH压力条件下约12天导致从形态II到形态H的较少的转换。在一个实施方式中，在约85％RH下，发生形态II 到形态H的完全转换。见表1。本发明提供了将形态II暴露到较高的湿度下可充分转换成 水合物的形式。
表1：形态II到形态H的转换
Figure BDA0002508295000000171
a悬浮液实验用形态II(化合物1((化合物1))制备并用少量的形态H接种。样品被放置搅拌7-9天。
溶解度
本发明提供了在甲醇中具有低溶解度的形态学形态II。溶解度可基于提供完全溶解的 溶剂的总体积来评价。由于溶剂的增量增加和材料的溶解的动力学，实际的溶解度可能大于 计算值。如果在加入第一等分试样后，如果在实验期间溶解没有发生，溶解度以“小于”表示， 或如果发生了溶解，以“大于”表示。
表2：溶解度定义
术语 定义
低溶解度 <1mg/mL
有限的溶解度 1–20mg/mL
中度溶解度 20–100mg/mL
良好的溶解度 100–200mg/mL
高溶解度 >200mg/mL
在一些实施方式中，包括本发明的形态学形态II的组合物在室温下以等于或小于约5 mg/mL(例如，≤5-4mg/mL、≤4-3mg/mL、≤3-2mg/mL、≤2-1mg/mL或≤1-0.01mg/mL) 溶解于1:1的甲醇:水的比例。在一个实施方式中，包括本发明的形态学形态II的组合物在室温下以小于约3mg/mL溶解于于1:1的甲醇:水的比例。在一些实施方式中，包括本发明的形态学形态II的组合物在高于室温(例如，等于或超过30℃)下以等于或小于约15mg/mL(例如，≤15-14mg/mL、≤14-13mg/mL、≤13-12mg/mL、≤12-11mg/mL、≤11-10mg/mL、≤ 10-9mg/mL、≤9-8mg/mL、≤8-7mg/mL、7-6mg/mL或6-5mg/mL)溶解。在一个实施方 式中，包括本发明的形态学形态II的组合物在约63℃以小于约14mg/mL溶解。
表3：评价形态II的溶解度
Figure BDA0002508295000000181
a基于用于提供溶液的总溶剂来评价溶解度；由于所用溶剂部分的体积或缓慢的溶解速率， 真实的溶解度可能更大。溶解度四舍五入到最接近的mg/mL。
表4：形态II在甲醇中的溶解度以及介稳区(MSZ)*数据
Figure BDA0002508295000000191
a-将在Crystal16TM中运行的非GMP实验用作起始材料。
b-以0.5℃/min的冷却速率测定。
c-以0.03C/min的冷却速率测定。
*如果前面所述的溶液进一步冷却，通过在特定的点的成核形成新的固相，其被定义为介 稳区。
多晶型化合物1的颗粒尺寸
在另一个实施方式中，颗粒尺寸的分析和扫描电镜(SEM)图像提供了在不同晶化条 件下形成晶体的颗粒特征和特征变化。
本发明提供了具有通式II或III(或其药学上可接受的盐)的化合物的形态II的内部结构， 使得晶胞的尺寸和堆积不同于形态I和形态H的内部结构。本发明还提供了通式II或III(或 其药学上可接受的盐)的单晶型(例如，形态II)。本发明的形态II用XRPD指示、独特的 DSC特性、不同的颗粒尺寸和形态以及在甲醇中的较低的溶解度表征。
在一个实施方式中，形态II形成大的团聚体，同时伴随着较小的片状颗粒。SEM显示 本发明的形态I具有最大的团聚体(>500μm)并且相比于其他两批明显地表现出更光滑的 表面积。在一个实施方式中，颗粒不含有任何胶合的团聚体，并由大的、薄的片状颗粒组成。获得的晶体颗粒具有在约6-10μm的小颗粒模式和在约60-160μm的较大模式的双峰分布。在一个实施方式中，样品具有含有细颗粒尾巴的约90μm的单模式。在另一个实施方式中， 样品具有与从SEM图像观察到的一致的大的d90(样品的90％都小于该颗粒直径)。
本发明提供了用于晶化的起始材料的颗粒尺寸、重结晶所述材料的甲醇，以及来自约 45kg的重结晶批次的共研磨材料。起始材料具有由较小的片状颗粒组成的团聚体(约100 μm)。本发明的甲醇重结晶形态具有较大的初级颗粒，没有胶结的团聚体以及单个颗粒尺寸模式。共研磨样品与甲醇重结晶批次相似，但显示出稍微更小的颗粒分 布，表明在研磨步骤期间仅发生了较少的颗粒摩擦。
表5：化合物1形态II的样品1、3和4的颗粒尺寸分布
Figure BDA0002508295000000201
a.10％的颗粒总体积由不大于以μm指示的尺寸的颗粒组成。
b.50％的颗粒总体积由不大于以μm指示的尺寸的颗粒组成。
c.90％的颗粒总体积由不大于以μm指示的尺寸的颗粒组成。
一些实施方式提供了不同尺寸和形态的颗粒和团聚体。颗粒和团聚体的尺寸和形态根 据接种百分比变化。在一个实施方式中，通过用0.5％的化合物1接种的晶化方法合成的颗 粒和团聚体不同于通过用3％的化合物1接种的晶化方法合成的颗粒和团聚体。比较图22 和23。这些实施方式的颗粒尺寸分析提供了，相比于0.5％的接种的样品，由于可用于晶 体生长的较大数量的颗粒/表面积，3％接种的样品具有更小的d10(样品的10％都小于该颗 粒直径)、d50(样品的50％都小于该颗粒直径)和d90(样品的90％都小于该颗粒直径)值。在晶化期间，使用水合物例如形态H晶化的样品作为起始材料或含有过量水的样品作为起始材料产生团聚程度较低的样品。较高的水含量改变了溶解性或诱导时间，并避免了二次成核和团聚。
X射线衍射
在某些实施方式中，具有通式II或III的化合物的形态I、II和H基于在X射线粉末衍射分 析中它们各自的特征峰是可辨别的。X射线粉末衍射图谱(也被称为XRPD图谱)是涉及由 晶体原子的X射线衍射的科学技术，产生获得关于晶体结构信息的衍射模式。通过X射线衍 射分析容易取得晶体的内部结构。基于其不同的结构、物理和化学特性，多晶型具有不同 的晶体形态。
介稳区宽度(MSZW)是晶化过程中的关键参数，因为其揭示了系统的成核行为。MSZW为高度依赖于制备条件的成核的动力学限制参数。许多因素可影响MSZW的值，例 如，冷却速率、搅拌、外源颗粒和杂质的存在。MSZW随着搅拌速度的增加而降低，MSZW 在N>400rpm下加宽，并且由于冷却速率增加，MSZW也加宽。在一个实施方式中，对于 约0.5℃/min的快速冷却速率和约0.03℃/min的非常缓慢的冷却的速率形态II和形态I，在介 稳区观察到很大的不同。在另一个实施方式中，在较高的浓度(例如，约100mg/mL)下 观察到窄的亚稳态冷却速率。
本发明提供了具有通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态学形态II，所 述形态学形态II具有导致在甲醇中与多晶型形态I和/或形态H相比的较低溶解度的MSZW。 与本发明的形态I相比，在甲醇中的形态II的较低的溶解度与作为比形态I更稳定的形态的形 态II一致。
本发明的晶化可包括“接种”，目的是获得期望的终产品尺寸。接种也提供了获得更优 的多晶型形态的能力，获得期望的晶体形态，并获得多晶型以及伪多晶型 (pseudo-polymorphs)。在本发明的一些实施方式中，晶化过程涉及用具有通式II或III的化合 物(或其药学上可接受的盐)的形态I、II或H接种。本发明提供了晶化过程期间形态II的接种。
本发明的实施方式提供了具有包括在约2.81和约5.63度2θ处主峰的X射线衍射图谱的 形态学晶型(例如，形态II)。在一个实施方式中，包括具有通式II或III的化合物的形态学 形态的组合物的特征在于与图1或图20展示的实质上相似的X射线衍射图谱，与图2展示的 实质上相似的指示，以及与图4展示的实质上相似的DSC热谱。
本发明提供了具有通式II或III的化合物(表5)晶型(例如，形态II)的重结晶。在本 发明的实施方式中，主要提供了晶型II的单相，从XRPD图谱可以明显看出。在一个实施方 式中，样品的1H NMR谱图提供了作为分离的晶型II的化学结构的通式II或III(图6)。
在某些实施方式中，形态II显示出了具有在2.81、5.63、19.00、19.57、22.76和24.70±0.2 度2θ表达的从二(2)到七(7)特征峰的X射线粉末衍射图谱，或具有与图1或图20展示的 实质上相似的X射线衍射图谱，与图2展示的实质上相似的指示，以及与图4展示的实质上 相似的DSC热谱。在一个实施方式中，形态II的XRPD峰与表6展示的实质上相似。
表6：形态II的观察到的和显著的峰
Figure BDA0002508295000000211
Figure BDA0002508295000000221
本领域的技术人员意识到一些变化与2-西塔(2θ)的测量有关。通常，2θ值可在±0.1 到±0.2间变化。本领域的技术人员理解，值的这一变化对于低的2θ值最大，而对于高的2θ 值最小。本领域的技术人员意识到，即使2θ值有些偏差，不同的仪器可提供实质上相同的 XRPD图谱。而且，本领域的技术人员理解，相同的仪器可提供用于相同或不同样品的实 质上相同的XRPD图谱，即使分别收集的XRPD图谱的XRPD在2θ值中稍有偏差。该稍微的偏差可被例如通过样品的制备技术、使用的不同的仪器、仪器漂移以及其他实验因素引起。
衍射峰列表还可用dhkl(采用布拉格定律可将观察到的峰位置°2θ转换为dhkl值：dhkl＝λ/2 sin θ；衍射峰的密勒指数(hkl)由公开的参考图谱来确定，并且当不能得到参考图谱识别 (hkl)时，那么需要图谱的“指示”来确定(hkl))和相对强度而不是2θ和绝对强度。 作为2θ的峰的位置依赖于仪器的特点，例如波长。作为dhkl的峰的位置是固有的、独立于仪 器的材料属性。由于仪器和实验参数，绝对强度(即在一个给定的峰中观察到的X-射线的 数量)可改变。为了计算相对强度，每个峰的绝对强度被除以最强峰的绝对强度，然后转 换为百分比。因此，相的最强峰被称为“100％的峰”。峰面积是强度的可靠指示。
本领域的技术人员也理解相同样品的XRPD图谱(采用相同或不同的仪器)在不同的2θ 值处的峰强度可显示出不同。本领域的技术人员还理解相同多晶型的的不同样品的XRPD 图谱(采用相同或不同的仪器)在不同的2θ值处的峰强度可显示出不同。XRPD图谱可以 为实质上相同的图谱，即使它们具有在其峰强度下变化的对应的2θ信号。
在一个实施方式中，形态II显示出具有在2.81、5.63、11.30、12.05、13.22、13.45、13.81、 14.32、14.92、15.64、16.25、16.41、17.00、17.67、17.87、18.15、18.35、18.50、19.00、 19.57、19.85、20.22、20.96、21.06、21.89、22.76、23.70、23.95、24.32、24.70、25.54、 26.12、26.52、26.81、27.07、27.48、27.71、29.11、29.36和29.61度2θ(±0.2)表达的两个 或多个(例如，三个或多个、四个或多个、五个或多个、六个或多个、七个或多个、八个 或多个、九个或多个、或十个或多个)特征峰的X射线粉末衍射图谱，或具有与图1、图7、图13、图14、图20、图21或图25中展示的实质上相似的X射线衍射图谱，与图2中展示的实 质上相似的指示，以及与图4中展示的实质上相似的DSC热谱。
在另一个实施方式中，形态II显示出具有在2.81、5.63、11.30、12.05、13.22、13.45、 13.81、14.32、14.92、15.64、16.25、16.41、17.00、17.67、17.87、18.15、18.35、18.50、 19.00、19.57、19.85、20.22、20.96、21.06、21.89、22.76、23.70、23.95、24.32、24.70、 25.54、26.12、26.52、26.81、27.07、27.48、27.71、29.11、29.36和29.61度2θ(±0.2)表 达的三个或多个特征峰的X射线粉末衍射图谱，或具有与图1、图7、图13、图14、图20、 图21、或图25中展示的实质上相似的X射线衍射图谱，与图2中展示的实质上相似的指示， 以及与图4中展示的实质上相似的DSC热谱。
在另一个实施方式中，形态II显示出具有在2.81、5.63、11.30、12.05、13.22、13.45、 13.81、14.32、14.92、15.64、16.25、16.41、17.00、17.67、17.87、18.15、18.35、18.50、 19.00、19.57、19.85、20.22、20.96、21.06、21.89、22.76、23.70、23.95、24.32、24.70、 25.54、26.12、26.52、26.81、27.07、27.48、27.71、29.11、29.36和29.61度2θ(±0.2)表 达的四个或多个特征峰的X射线粉末衍射图谱，或具有与图1、图7、图13、图14、图20、 图21或图25中展示的实质上相似的X射线衍射图谱，与图2中展示的实质上相似的指示，以 及与图4中展示的实质上相似的DSC热谱。在另一个实施方式中，形态II显示出具有在2.81、 5.63、19.00、19.57、22.76和24.70度2θ(±0.2)表达的特征峰的X射线粉末衍射图谱，或 具有与图1、图7、图13、图14、图20、图21或图25中展示的实质上相似的X射线衍射图谱， 与图2中展示的实质上相似的指示，以及与图4、图15、图16或图22-24中展示的实质上相似 的DSC热谱。
在一个特定的实施方式中，形态II显示出具有选自在2.81、5.63、11.30、12.05、13.22、 13.45、13.81、14.32、14.92、15.64、16.25、16.41、17.00、17.67、17.87、18.15、18.35、 18.50、19.00、19.57、19.85、20.22、20.96、21.06、21.89、22.76、23.70、23.95、24.32、 24.70、25.54、26.12、26.52、26.81、27.07、27.48、27.71、29.11、29.36和29.61度2θ(±0.2) 表达的至少8个特征峰的X射线粉末衍射图谱，或具有与图1、图7、图13、图14、图20、图 21或图25中展示的实质上相似的X射线衍射图谱，与图2中展示的实质上相似的指示，以及 与图4、图15或图16中展示的实质上相似的DSC热谱。
在另一个特定的实施方式中，形态II显示出具有选自在2.81、5.63、11.30、12.05、13.22、 13.45、13.81、14.32、14.92、15.64、16.25、16.41、17.00、17.67、17.87、18.15、18.35、 18.50、19.00、19.57、19.85、20.22、20.96、21.06、21.89、22.76、23.70、23.95、24.32、 24.70、25.54、26.12、26.52、26.81、27.07、27.48、27.71、29.11、29.36和29.61组成的群 组的度2θ(±0.2)表达的至少9个特征峰的X射线粉末衍射图谱，或具有与图1、图7、图13、 图14、图20、图21或图25中展示的实质上相似的X射线衍射图谱，与图2中展示的实质上相 似的指示，以及与图4、图15、图16或图22-24中展示的实质上相似的DSC热谱。
在一个或多个实施方式中，包括形态II的化合物的组合物缺少形态H的XRPD峰特征 (例如在约12.6°2Θ处)和/或形态I的XRPD峰特征(例如在约15.6°2Θ处)。
XRPD指示
XRPD图谱使用X-Pert High Score Plus(v.2.2.1)指示。进行了指示和结构的细化计算 研究。允许的峰位置和观察到的峰的一致性表示一致的晶胞测定。图谱的成功指示表示样 品主要由单晶相组成。与指定的消光符号、单元腔室参数和导出量一致的空 间群在提供了每种形态的指示溶液的各个图片中被制成表格。为了验证 试验性的指示溶液，测定晶体腔室内的分子包装模序。
XRPD峰鉴定
在大多数情况下，选择约30°2θ范围内的峰。使用舍入算法将每个峰四舍五入到最接 近的0.1°或0.01°2θ，依赖于用于收集数据和/或固有峰的分辨率的仪器。关于晶格间距(d-spacing)列表，用于计算晶格间距的波长为
Figure BDA0002508295000000251
(Cu-Kα1和Cu-Kα2波长的 加权平均值)。
在每个晶格间距下，与晶格间距评价相关的多变性由U S P推荐标准 计算，并在单独的数据表中提供。每个USP的指导方针、可变水合物和溶剂合物可显示 出大于0.2°2θ的峰变动，并因此0.2°2θ的峰变动不适用于这些材料。对于仅具有一种 XRPD图谱而没有其他手段评价该样品是否提供良好的接近粉末的平均值的样品，峰的表 中含有仅被识别为“主峰”的数据。这些峰为全部观测的峰列表的一个子集。主峰选自由识 别为优选非重叠、低角峰的具有高强度的观察到的峰。
差示扫描量热(DSC)热谱
还可以基于DSC、指示(indexing)、SEM和/或颗粒大小分布来鉴定形态II。在本发明的一些实施方式中，基于差示扫描量热热谱中观察到的特征峰鉴定形态II。差示扫描量热热谱或DSC是一种热分析技术，其中增加样品和参比物的温度所需的热量方面的差异被测量作为温度函数。在一个实施方式中，形态II显示了在约43℃(最大峰值)处显示少量 吸热接着在约90和约95℃(最大峰值)处显示重叠的大量吸热特性的差示扫描量热热谱。 在约196℃处观察到最后的吸热的启动。在另一个实施方式中，，形态II显示出了实质上 与图4相同的差示扫描量热图谱。
在本发明的另一个实施方式中，在此提供了特征为固定形态的化合物1的形态II，这样 当从相对湿度从5.0％增加到95.0％的时候，固体形态经历小于1.5％重量的增加。
在一个实施方式中，通式II或III的形态II晶型从采用较慢的冷却曲线以及不搅拌的甲醇 晶化来制备。使用较慢的冷却曲线以及不搅拌制备的形态II的DSC热谱在约41℃处具有少 量的吸热，在约90和约95℃(最大峰值)处重叠吸热，以及在约200℃处启动最后的吸热。
本发明还提供了从在晶化期间包括水的方法中获得的水合物形态学形态H。水合物形 态学形态H具有在约41℃(最大峰值)处有少量吸热，在约70℃和约103℃(最大峰值)处大量吸热以及在约193℃处最后吸热的DSC特征。水合物形态学形态H的TGA在从约25 ℃到约100℃为约0.93％的重量损失。
扫描电子显微镜(SEM)
本发明提供了由本发明的方法合成的晶体通过SEM的分析。通过放置少量于铝架支 持的碳胶粘剂标签上来制备用于SEM的样品。然后使用Cressington 108自动溅射镀膜仪在接近20mA和0.13mbar(Ar)下将每个样品用Au/Pd溅射涂布。使用5.0kV的束流电压 在高真空下观察每个样品。
在一些实施方式中，使用装有Everhart Thornley(ET)探测器的FEI Quanta 200扫描电 子显微镜进行SEM。分别用xTm(v.2.01)和XT Docu(v.3.2)软件收集和分析图像。使用NIST可溯源标准校验放大率。通过放置少量于铝架上支持的碳胶粘剂标签上来制 备用于分析的样品。然后用Cressington 108自动溅射镀膜仪在接近20mA和0.13mbar(Ar) 下将样品用Au/Pd溅射涂布75秒(图26-30)。
表7：形态学形态II的特征
Figure BDA0002508295000000261
纯度
在某些实施方式中，形态II的样品含有杂质。杂质的非限制性的示例包括无定型形式， 其他多晶型形态(例如，H、I和III)，或例如相关杂质、溶剂、水或盐的残留的有机和无 机分子(例如，用于制备形态II或其片段的中间体)。在一个实施方式中，形态II的样品实 质上不含杂质，意思是没有显著量的杂质存在。在另一个实施方式中，形态II的样品含有 小于10％重量的总杂质。在另一个实施方式中，形态II的样品含有小于5％重量的总杂质。 在另一个实施方式中，形态II的样品含有小于1％重量的总杂质。而在另一个实施方式中， 形态II的样品含有小于0.1％重量的总杂质。
本发明提供了在晶化过程期间不形成水合物的情况下通过测定临界水浓度制备无水 形态(例如形态II)，在所述临界水浓度以下无水形态是稳定形态。临界水浓度通过改变悬 浮液中的甲醇-水的浓度来测定。
在一个实施方式中，在低于室温的悬浮液中，在99:1甲醇:水的条件下，回收形态II。 在另一个实施方式中，在97:3甲醇:水以及更大的浓度下，从悬浮液中回收形态H。这些实施方式提供了用于形成形态II的临界水浓度为1至3％水。在一些实施方式中，在初始 甲醇溶剂中的水没有被考虑在内，导致最终的水浓度略高于1和3％。在另外的实施方式、 实验中，通过改变悬浮液中的甲醇-水浓度，在室温或约45℃下进行。在一个实施方式中， 临界水浓度在室温下小于5％以及在约45℃下小于10％。形态II和形态H的混合物被观 察到转换为形态II或形态H，取决于在甲醇中的确切的水含量。本发明提供了在形态II 的晶化期间，在最高约45℃下临界水活性仍然很低，并且在最终的甲醇重结晶中的水含 量是控制以避免在有利于形成形态H的条件中操作的关键工艺参数。
在某些实施方式中，形态II的样品为实质上不含非晶态的通式II或III的化合物的晶态固 体。如在此使用的，“实质上不含非晶态的通式II或III的化合物”的意思是化合物含有非显 著量的非晶态的通式II或III的化合物。在另一个实施方式中，晶态的通式II或III的化合物的 样品包括实质上不含形态I和/或H的形态II。如在此使用的，术语“实质上不含形态I和/或H” 的意思是晶态的通式II或III的化合物的样品含有非显著量的形态I和/或H。在某些实施方式 中，样品重量的至少约90％为形态II，仅含有10％为形态I和/或H和/或非晶态的通式II或III 的化合物。在某些实施方式中，样品重量的至少约95％为形态II，仅含有5％为形态I和/或H 和/或非晶态的通式II或III的化合物。而在本发明的其他实施方式中，样品重量的至少约99％ 为形态II，仅含有1％的重量为形态I和/或H和/或非晶态通式II或III的化合物。而在本发明的 其他实施方式中，样品重量的至少约99.5％为形态II，仅含有0.5％的重量为形态I和/或H和/ 或非晶态的通式II或III的化合物。而在本发明的其他实施方式中，样品重量的至少约99.9％ 为形态II，仅含有0.1％重量为形态I和/或H和/或非晶态的通式II或III的化合物。
形态II可发生任何合理的互变异构体，或合理的互变异构体的混合物。如在此使用的， “互变异构体”是指存在于平衡中的两个或多个结构异构体中的一个并且容易从一个异构体 形式转换为另一个。
在一些实施方式中，重结晶化合物1(例如，通式II或通式III)的方法产生基本上不含 杂质的化合物1。在一些实施方式中，化合物1具有>95％的纯度、>96％的纯度、>97％的纯 度、>98％的纯度、>99％的纯度、>99.5％的纯度、>99.9％的纯度或>99.99％的纯度。纯度 可通过本领域已知的各种不同的技术(例如，高效液相色谱(HPLC))来测量。举例来讲，在一些优选的实施方式中，化合物1从甲醇和庚烷中重结晶一次，接着是随后的从甲 醇中重结晶三次；仅在第三次和最后一次的甲醇重结晶期间接种形态II。
化合物1重结晶的步骤(例如，化合物1形态II)可影响化合物1的相对纯度。例如，图27显示了在两次快速冷却甲醇重结晶后，化合物1的CAD(电雾式检测器)色谱图。例 如，化合物1具有98.5％的纯度。如图27中所示。
图28显示了在甲醇中三次缓慢冷却重结晶后化合物1的CAD的色谱图。如图28中所示， 化合物1具有99.5％的纯度。
图29显示了在庚烷/甲醇中一次重结晶，接着在甲醇中缓慢冷却重结晶后，化合物1的 CAD的色谱图。如图29中所示，化合物具有100％的纯度。
图30显示了在包括从庚烷/甲醇中一次重结晶接着从甲醇中三次重结晶后的优选实施 方式后，化合物1的CAD色谱图。如图30中所示，化合物1的纯度为100％。该重结晶方法在 实施方式3中进行了更详细地解释，并成为一个优选的纯化步骤。
因此，在一些优选的实施方式中，纯化化合物1的方法包括五个不同的重结晶步骤： 三次没有接种的甲醇重结晶，一次正庚烷/甲醇重结晶，以及一次接种的甲醇重结晶。在一 些实施方式中，前三次甲醇重结晶除去例如残留量的以下化合物(即化合物A和B)的杂质：
Figure BDA0002508295000000281
在一些实施方式中，上述化合物实质上很难通过其他方法(例如，色谱法)从含有化 合物1的组合物中除去。因此，在一些实施方式中，从甲醇中进行至少一次的重结晶作为第一次重结晶步骤是有利的，目的是除去上述杂质。
使用正庚烷和甲醇的重结晶除去由CAD可检测到的杂质，显示在图27和28中。在一些 实施方式中，CAD可检测到的杂质可以为，例如，以下化合物(即，化合物C和D)：
Figure BDA0002508295000000291
因此，在一些实施方式中，在没有进行上述重结晶的情况下，上面所示的化合物将存 在于含有化合物1的组合物中。任何组合方式的上述化合物可以以低量(例如，<2％的重量 或<1％的重量)存在。
在一些实施方式中，本发明包括含有形态II和各种其他形态学形态的组合物。其他的 形态学形态可包括形态I和形态H。在一些实施方式中，所述组合物包括>90％的形态II。在 一些实施方式中，所述组合物包括>95％的形态II。在一些实施方式中，所述组合物包括>99％ 的形态II。或者，在一些实施方式中，所述组合物包括<10％的形态I和/或形态H。在一些实 施方式中，所述组合物包括<5％的形态I和/或形态H。在一些实施方式中，所述组合物包括 <1％的形态I和/或形态H。
在一些实施方式中，本发明包括含有化合物1和其他杂质的组合物。在一些实施方式 中，杂质选自化合物A-D。在一些实施方式中，本发明包括含有>90％的化合物1的组合物。 在一些实施方式中，本发明包括含有>95％的化合物1的组合物。在一些实施方式中，本发 明包括含有>99％的化合物1的组合物。在一些实施方式中，本发明包括含有<10％的选自化 合物A-D的杂质的组合物。在一些实施方式中，本发明包括含有<5％的选自化合物A-D的杂 质的组合物。在一些实施方式中，本发明包括含有<1％的选自化合物A-D的杂质的组合物。
共晶
本发明提供了通式II或III的形态II的共晶。本发明所述的共晶可以是通式II或III的药学 上可接受的盐、溶剂合物(掺有化学计量或非化学计量的量的溶剂的晶体结构)、水合物 (掺有化学计量或非化学计量的量的水的晶体结构)、络合物(一种物质的分子被另一种 物质分子的晶体结构完全封闭)和/或分子配合物(掺有化学计量的量的不止一种分子的独 特的晶体结构)。
共晶可用柠檬酸、富马酸、龙胆酸、马尿酸、马来酸、L-扁桃酸、乳清酸、草酸、糖精、琥珀酸、L-酒石酸、甲苯磺酸、氨水、L-精胺酸、氢化钙、二乙胺、二甲氨基乙醇、 乙二胺、1H-咪唑、L-赖氨酸、2-羟基乙基吗啉、N-甲基-葡糖胺、甲醇钾和叔丁醇锌形成。 盐/共晶筛选包括从四种溶剂中的汽化，接着在其他四种溶剂中的相平衡。
形态学形态II的合成方法
本发明提供了用于合成通式I、II和/或III的化合物的方法。根据以下以及在实施方式中 显示的方案，本发明还提供了用于合成本发明公开的各种化合物的详细的方法。
在通篇说明书中，当组合物被描述为具有、包括或含有特定组分时，考虑组合物还基 本上由所述组分或由所述组分组成。同样地，当方法或工艺被描述为具有、包括或含有具 体的工艺步骤时，所述工艺还基本上由或由上述工艺步骤组成。进一步地，应该理解步骤 的顺序或执行特定行为的顺序是无关紧要的，只要本发明仍具有可操作性。而且，两步或 行为或多步或行为可同时进行。
本发明的合成工艺可容许各种各样的官能团，因此可以使用各种取代起始材料。虽然 在某些情况下期望将化合物转换为其药学上可接受的盐或衍生物，但是所述工艺通常在整 个工艺的最后或接近最后时提供所述的最终化合物。
方案1(步骤1、2A和2B)：膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧 基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯(化合物1)的合成。
在一个实施方式中，本发明提供了一种通式II或通式III的化合物或其药学上可接受的 盐的形态学形态II的生产方法。所述方法提供了一种纯化方法，包括从甲醇中重结晶制备 膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基] 酯(化合物1)。
本发明提供了用于合成化合物1的形态学形态II的方法，包括步骤1和步骤2。
方案1
Figure BDA0002508295000000301
步骤1：(S)-N1-[(2-羟基-3-三苯基甲氧基)丙基]胞核嘧啶(化合物2)的合成。
Figure BDA0002508295000000311
通过将胞核嘧啶与(S)-三苯甲基缩水甘油醚(同物异名(S)-三苯甲基缩水甘油醚、三苯 甲基-(S)-缩水甘油醚、(S)-三苯甲基缩水甘油醚、(S)-(-)-三苯甲基缩水甘油醚、(S)-(-)-三苯 甲基缩水甘油醚、三苯甲基缩水甘油醚、(S)-2-((三苯甲基氧代)甲基)环氧乙烷、(S)-(-)-缩 水甘油三苯甲基醚、(S)-缩水甘油三苯甲基醚、(S)-2-(三苯基甲氧基甲基)环氧乙烷)在合 适的碱例如金属碳酸盐(例如碳酸钾)的存在下在合适的有机溶剂(例如N,N-二甲基甲酰 胺(DMF)或叔戊醇)中在合适的反应温度(例如约85至约95℃或约60至约120℃)下接 触至反应完全约4到14小时(例如，约8到10小时)来合成(S)-N1-[(2-羟基-3-三苯基甲氧基) 丙基]胞核嘧啶(化合物2)。在一个实施方式中，反应可以在约85至约95℃的温度下被加 热约9小时。
然后将加热后的反应混合物冷却。在一个实施方式中，加热后的反应混合物被冷却到 例如，约50-75℃或约66-70℃，然后用取代苯衍生物例如单-取代苯衍生物(例如甲苯)淬 灭。由此得到的悬浮液被进一步冷却到例如低于或接近0℃之间(例如，到约-10至5℃) 的温度。然后将冷去的悬浮液过滤，用取代苯衍生物(例如单-取代苯衍生物(例如甲苯)) 洗涤。然后，将在取代苯衍生物(单-取代苯衍生物(例如甲苯))中洗涤后获得的固体在 合适温度(例如，约15-25℃)制备成悬浮液，之后将该悬浮液过滤。然后用有机溶剂(例如酮，如，丙酮)洗涤冷却后的悬浮液。
然后将所述固体通过在合适比例(例如，90.0kg/54.0kg)的水/丙酮中在合适的温度 (例如，约17-22℃)下研磨来纯化、过滤以及用有机溶剂(例如酮，如，丙酮)(例如 约36.0kg)洗涤。实施方式提供了过滤步骤后获得的滤饼被悬浮于有机溶剂(例如酮，如， 丙酮)(例如约178.9kg)中，并被加热，例如，在将近35-45℃加热不止1小时，例如， 等于或大于约1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、 2.6、2.7、2.8、2.9或3.0小时，然后被过滤，以及用有机溶剂(例如酮，如，丙酮)(例如 约36.0kg)来洗涤。根据需要重复洗涤和研磨以除去残留物和/或杂质，例如残留的胞核嘧 啶和/或工艺相关的杂质。在等于或小于约40℃下真空干燥滤饼几个小时(例如，12小时) 以获得约45.0kg(约65.0％)的化合物2。在一些实施方式中，产品的纯度大于约99％(由 HPLC(AUC)测定)。在一个实施方式中，产品的1H-NMR与化合物2的标准结构一致。
步骤2A和2B：具有以下通式的膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基) 乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯(化合物1)的合成：
Figure BDA0002508295000000321
通过将化合物2与化合物4在合适的碱(例如，金属醇盐(例如，叔丁醇镁、叔丁醇钠、 叔丁醇锂、叔戊醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠)、金属氢化物(例如，氢化钠、氢化钾)或金 属酰胺(例如，双(三甲基硅基)氨基锂))的存在下在合适的有机溶剂(例如，N,N-二甲 基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、1-甲基-2-吡咯烷酮)在合适的反应温度(例 如，50到110℃)下接触直到完全反应(约0.25到5小时，例如约2到4小时)来制备通式II 或III的化合物。将粗反应混合物进行水处理。粗产物用合适的有机溶剂(例如、醋酸乙酯、 醋酸异丙酯、二氯甲烷等)来萃取，浓缩有机溶剂以获得粗化合物3。在甲醇中将含有化 合物3的浓缩物进行稀释，并再次浓缩以除去残留的有机溶剂(例如，醋酸乙酯、醋酸异 丙酯、二氯甲烷等。)。粗化合物3与合适的脱保护剂(例如，氯化氢、乙酰氯)在有机 溶剂(例如，甲醇)中接触直到完全反应一个或多个小时，例如一到六个小时。在一个实 施方式中，化合物3与合适的脱保护剂(例如，氯化氢、乙酰氯)在有机溶剂(例如，甲 醇)中接触直到完全反应二到三个小时。使用合适的溶剂系统(例如，甲醇/丙酮/水、乙 醇、甲醇)来重结晶粗化合物1。
在一个实施方式中，(S)-N1-[(2-羟基-3-三苯基甲氧基)丙基]胞核嘧啶(化合物2)、P-[[[4- 甲基苯基)磺酰基]氧基]甲基]-单[3-(十六烷氧基)丙基]酯钠盐(化合物4)、叔丁醇镁以及极 性(亲水的)非质子溶剂(例如，二甲基甲酰胺(DMF))的混合物在合适的温度下(例 如，在约75-85℃之间)被加热1小时以上，例如，等于或大于约1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、 1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0小时。其他极性非质子溶剂(例如四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、乙腈或二甲基亚砜)也被用在混合物中。
然后，将混合物溶液冷却到合适的温度，例如约25-35℃，之后加入有机溶剂(例如， 酯，如醋酸异丙酯(醋酸1-甲基乙酯))。然后，溶液被进一步冷却到合适的温度，例如约15-25℃，接下来用酸溶液(例如，HCl溶液)以及盐溶液(例如，NaCl溶液)洗涤。
通过真空蒸馏除去有机溶剂(例如，酯，如醋酸异丙酯(醋酸1-甲基乙酯))，有机相形成浓缩液。然后用醇类(例如，甲醇)稀释浓缩液以进一步除去醋酸异丙酯，并再次 浓缩形成含有膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)-2-(三苯基甲氧基)乙基] 甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯(化合物3)的混合物。通过以需要的速率加入HCl气体将 温度维持在约–5和15℃之间。将反应维持在低于约10-20℃下1小时以上，例如约2小时， 之后过滤除去固体杂质。然后滤出液用水稀释，并且接着pH用NaOH调节到约2.3-2.7。-固 体过滤，用水洗涤，然后在有机溶剂(例如，酮，如，丙酮)中在约35-45℃下约1小时制 备悬浮液。然后将悬浮液进行过滤，用有机溶剂(例如，酮，如，丙酮)洗涤。然后有机 溶剂(例如，酮，如，丙酮)洗涤后的粗产品在等于或小于约40℃下干燥几个小时，例如 约12小时并在醇类(例如，甲醇)中在约60-70℃加热。然后干燥的粗产品被抛光过滤， 冷却到约58-62℃，搅拌一小时，先冷却到约48-52℃约六小时，然后到约17-23℃两小时， 过滤，然后用醇类(例如，甲醇)洗涤。-洗涤、干燥、抛光过滤、冷却以及最后的过滤和 洗涤步骤可重复一次或多次以将固体溶解于醇类(例如，甲醇)中，之后将样品冷却到例 如约59-61℃。然后将冷却的产品搅拌几分钟，例如，约20分钟。向该溶液中加入膦酸 [[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯(例 如约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约 1.0％、约1.1％、约1.2％、约1.3％、约1.4％、约1.5％、约1.6％、约1.7％、约1.8％、约1.9％、 约2.0％、约2.1％、约2.2％、约2.3％、约2.4％、约2.5％、约2.6％、约2.7％、约2.8％、约2.9％、 约3.0％、约3.1％、约3.2％、约3.3％、约3.4％、约3.5％、约3.6％、约3.7％、约3.8％、约3.9％、 约4.0％、约4.1％、约4.2％、约4.3％、约4.4％、约4.5％、约4.6％、约4.7％、约4.8％、约4.9％、 约5.0％、约5.1％、约5.2％、约5.3％、约5.4％、约5.5％、约5.6％、约5.7％、约5.8％、约5.9％、 约6.0％、约6.1％、约6.2％、约6.3％、约6.4％、约6.5％、约6.6％、约6.7％、约6.8％、约6.9％、 约7.0％、约8.0％、约9.0％、约10.0％、约0.1-0.2％、约0.2-0.3％、约0.3-0.4％、约0.4-0.5％、 约0.5-0.6％、约0.6-0.7％、约0.7-0.8％、约0.8-0.9％、约0.9-1.0％、约1.0-2.0％、约2.0-3.0％、 约3.0-4.0％、约4.0-5.0％、约5.0-6.0％、约6.0-7.0％、约7.0-8.0％、约8.0-9.0％、约9.0-10.0％、 约7.0-8.0％、约8.0-9.0％或约9.0-10.0％的形态I、形态II或形态H的留种)的留种，然后搅拌1小时以上，例如，约2小时，然后通过搅拌约几个小时(例如，8小时)将溶液冷却到约 47℃-53℃，然后搅拌约一小时以上，例如，约2小时。在约50℃-65℃(例如，56℃-61 ℃)的温度之间加入种子。然后将搅拌的溶液进一步冷却到约17-23℃至少约1小时，例如 约6小时或更多，并进一步地搅拌约2小时；过滤并用甲醇洗涤；在约等于或小于40℃下干 燥约24小时。由此，本发明的方法提供了膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲 基)乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯(化合物1)的形态学形态II的合成。
在一些实施方式中，形态学形态II的组合物可包括相应的水合物(即形态H)。在一些 实施方式中，形态II的组合物具有痕量(例如，<1.5％、<1％、<0.5％、<0.4％、<0.3％、<0.2％、 <0.1％或.01％的形态H(例如，组合物实质上不含形态H)。例如，显示于图20中的化合物 1的XRPD图谱显示出了指示所述样品由晶体材料组成的尖峰。所述图谱在峰的位置(见例 如，图1)方面与形态II的样品1相似，表明所述样品由形态II组成。然而，在～12.6°2θ的 峰可能是由于少量的化合物1形态H的存在(见例如图3)。
在一些实施方式中(例如样品3)，形态II的DSC热谱可显示出在～42℃(～42℃启动)下最大的少量的吸热，在～90℃和～97(分别～89和96℃启动)，并在～202℃(～201℃启动)吸热(见例如，图22-24)。所述热谱与化合物1形态II的样品1相似(图4)。然而， 在样品3形态II的扫描(图22-24)中，在105℃观察到少量吸热。这可能是由于形态H的少 量存在。
例如，化合物1形态II的样品3具有下面的DSC谱：小、尖的吸热：最大～42℃(～42℃ 启动)；重叠尖的吸热：最大～90℃(～89℃启动)；最大～97℃(～96℃启动)；少量 吸热：～105℃；尖的吸热：最大～202℃(～201℃启动)。该图谱与形态II一致，外加可 能是由于形态H的痕量存在导致的在～105℃的附加的痕量少量吸热。
本发明提供了大于约99％wt/wt纯度的具有通式II或III的化合物或其药学上可接受的 盐的形态学形态II。在一些实施方式中，包括具有通式II或III的化合物或其药学上可接受的 盐的形态学形态II的组合物具有等于或超过约99％wt/wt、约98％wt/wt、约97％wt/wt、约 96％wt/wt、约95％wt/wt、约94％wt/wt、约93％wt/wt、约92％wt/wt或约91％wt/wt的纯度。 在一些实施方式中，本发明提供了具有通式II或III的化合物或其药学上可接受的盐的非水 合物的形态学形态II。在一些实施方式中，包括本发明的形态学形态II的组合物在室温下以 等于或小于约5mg/mL、约4mg/mL、约3mg/mL、约2mg/mL或约1mg/mL溶于1:1的甲醇: 水的比例以及在高于室温的温度下(例如，在约63℃下)以小于约20mg/mL、约19mg/mL、 约18mg/mL、约17mg/mL、约16mg/mL、约15mg/mL、约14mg/mL、约13mg/mL、约12 mg/mL、约11mg/mL或约10mg/mL溶解。在一些实施方式中，包括本发明的形态学形态II的组合物的特征在于具有包括在约2.81和约5.63度2θ主峰的X射线衍射图谱。在一个实施方 式中，包括由本发明的方法合成和/或晶化的形态学形态II的组合物的特征在于与图1中展示 的实质上相似的X射线衍射图谱。而在另一个实施方式中，包括由本发明的方法合成和/或 晶化的形态学形态II的组合物的特征在于与图13或17中展示的实质上相似的X射线衍射图 谱。本发明还提供了由本发明的方法合成和/或晶化的形态学形态II在DSC热谱中在约 41-43℃(最大峰值)显示出少量吸热，接着在约90和约95℃(最大峰值)显示重叠大量 吸热。在一个实施方式中，由本发明的方法合成和/或晶化的形态学形态II在DSC热谱中的 最后吸热在约196℃启动。
本发明提供了通过接种约0.1-10％(例如，0.1-0.2％、约0.2-0.3％、约0.3-0.4％、约 0.4-0.5％、约0.5-0.6％、约0.6-0.7％、约0.7-0.8％、约0.8-0.9％、约0.9-1.0％、约1.0-2.0％、 约2.0-3.0％、约3.0-4.0％、约4.0-5.0％、约5.0-6.0％、约6.0-7.0％、约7.0-8.0％、约8.0-9.0％ 或约9.0-10.0％)的膦酸来合成晶体形态学形态II的膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶 基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯。一些实施方式提供了用约0.1％、约 0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1.0％、约1.1％、 约1.2％、约1.3％、约1.4％、约1.5％、约1.6％、约1.7％、约1.8％、约1.9％、约2.0％、约2.1％、 约2.2％、约2.3％、约2.4％、约2.5％、约2.6％、约2.7％、约2.8％、约2.9％、约3.0％、约3.1％、 约3.2％、约3.3％、约3.4％、约3.5％、约3.6％、约3.7％、约3.8％、约3.9％、约4.0％、约4.1％、 约4.2％、约4.3％、约4.4％、约4.5％、约4.6％、约4.7％、约4.8％、约4.9％、约5.0％、约5.1％、 约5.2％、约5.3％、约5.4％、约5.5％、约5.6％、约5.7％、约5.8％、约5.9％、约6.0％、约6.1％、 约6.2％、约6.3％、约6.4％、约6.5％、约6.6％、约6.7％、约6.8％、约6.9％、约7.0％、约7.0 –约8.0％、约8.0-约9.0％或约9.0％–约10％的膦酸种子接种的晶化方法。在另外的实施方式 中，在晶化过程中在缓慢或中度搅拌或搅动下形成晶体形态学形态。在一个实施方式中， 搅拌的速率影响产生的形态学形态的类型。在另一个实施方式中，搅拌的速率不影响产生 的形态学形态的类型。实施方式提供了由包括甲醇的方法形成形态学形态II的晶化。实施 方式进一步提供了通过用膦酸的形态II或形态I接种以形成形态学形态II的方法。
在一些实施方式中，化合物1的形态II实质上不含杂质。本发明提供了具有纯度等于或 大于91％的通式II或III的化合物的形态学形态II被用于治疗主体中的病毒感染(例如， dsDNA病毒)，其中所述感染对盐酸缬更昔洛韦(或更昔洛韦)有抗性，或其中所述主体显示出盐酸缬更昔洛韦(或更昔洛韦)的副作用。或者或此外，具有等于或大于91％wt/wt纯度或为形态II的形态学形态通式II或III的化合物，例如具有小于或等于9％wt/wt的其他形 态学形态或无定型形式，被用于治疗巨细胞病毒(CMV)，后续用更昔洛韦治疗，例如，其中CMV感染是急性的。患者可能是骨髓干细胞移植患者，特别是有来自更昔洛韦的骨髓毒性的风险(真实的或认为的)的患者。
在另一个实施方式中，主体为哺乳动物。在另一个实施方式中，主体为人。
在另一个实施方式中，将具有等于或大于91％纯度或以形态II存在的通式II或III的化合 物口服给药，例如，以约0.01mg/kg至约10mg/kg或更多的剂量给药，例如，最高约100 mg/kg。在另一个实施方式中，将具有等于或大于91％纯度或以形态II存在的所述通式II或 III的化合物，例如具有小于或等于9％wt/wt的其他形态学形态或无定型形式，向所述主体 以约0.01mg/kg、约0.05mg/kg、约0.1mg/kg、约0.5mg/kg、约1.0mg/kg、约1.5mg/kg、约 2.0mg/kg、约2.5mg/kg、约3.0mg/kg、约3.5mg/kg、约4.0mg/kg、约4.5mg/kg、约5.0mg/kg、 约5.5mg/kg、约6.0mg/kg、约6.5mg/kg、约7.0mg/kg、约7.5mg/kg、约8.0mg/kg、约8.5mg/kg、 约9.0mg/kg、约9.5mg/kg或约10mg/kg或更多或其中任何范围的剂量给药。
本发明提供了通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态学形态II，其特征 为具有在选自.81、5.63、11.30、12.05、13.22、13.45、13.81、14.32、14.92、15.64、16.25、 16.41、17.00、17.67、17.87、18.15、18.35、18.50、19.00、19.57、19.85、20.22、20.96、 21.06、21.89、22.76、23.70、23.95、24.32、24.70、25.54、26.12、26.52、26.81、27.07、 27.48、27.71、29.11、29.36和29.61度2θ(±0.2)处表达的两个或多个(例如，三个或多个、 四个或多个、五个或多个、六个或多个、七个或多个、八个或多个、九个或多个、或十个 或多个)峰的X射线衍射图谱，或具有与图1、图7、图13、图14、图20、图21或图25中展示的实质上相似的X射线衍射图谱，以约100mg每周两次的剂量或以约200mg每周一次的 剂量给药。在一个实施方式中，包括与具有图2中展示的实质上相似的指示和/或与图4、图15、图16或图22-24中展示的实质上相似的DSC热谱的形态学形态II的组合物以约100mg每周两次的剂量或以约200mg每周一次的剂量给药。
本发明提供了通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态学形态II，其特征 为具有在选自2.81、5.63、11.30、12.05、13.22、13.45、13.81、14.32、14.92、15.64、16.25、 16.41、17.00、17.67、17.87、18.15、18.35、18.50、19.00、19.57、19.85、20.22、20.96、 21.06、21.89、22.76、23.70、23.95、24.32、24.70、25.54、26.12、26.52、26.81、27.07、 27.48、27.71、29.11、29.36和29.61度2θ(±0.2)表达的两个或多个(例如，三个或多个、 四个或多个、五个或多个、六个或多个、七个或多个、八个或多个、九个或多个、或十个 或多个)峰的X射线衍射图谱，或具有与图1、图7、图13、图14、图20、图21或图25中展 示的实质上相似的X射线衍射图谱，以约1-4mg/kg(例如，1-1.1mg/kg、约1.1-1.2mg/kg、 约1.2-1.3mg/kg、约1.3-1.4mg/kg、约1.4-1.5mg/kg、约1.5-1.6mg/kg、约1.6-1.7mg/kg、约1.7-1.8mg/kg、约1.8-1.9mg/kg、约1.9-2.0mg/kg、约2.0-2.1mg/kg、约2.1-2.2mg/kg、约2.2-2.3 mg/kg、约2.3-2.4mg/kg、约2.4-2.5mg/kg、约2.5-2.6mg/kg、约2.6-2.7mg/kg、约2.7-2.8mg/kg、 约2.8-2.9mg/kg、约2.9-3.0mg/kg、约3.0-3.1mg/kg、约3.1-3.2mg/kg、约3.2-3.3mg/kg、约3.3-3.4mg/kg、约3.4-3.5mg/kg、约3.5-3.6mg/kg、约3.6-3.7mg/kg、约3.7-3.8mg/kg、约3.8-3.9 mg/kg或约3.9-4.0mg/kg)的剂量给药。
在一些实施方式中，包括具有与图2中展示的实质上相似的指示和/或与图4、图15、图 16或图22-24中展示的实质上相似的DSC热谱的形态学形态II的组合物以约1-4mg/kg(例 如，1.0-1.1mg/kg、约1.1-1.2mg/kg、约1.2-1.3mg/kg、约1.3-1.4mg/kg、约1.4-1.5mg/kg、 约1.5-1.6mg/kg、约1.6-1.7mg/kg、约1.7-1.8mg/kg、约1.8-1.9mg/kg、约1.9-2.0mg/kg、约 2.0-2.1mg/kg、约2.1-2.2mg/kg、约2.2-2.3mg/kg、约2.3-2.4mg/kg、约2.4-2.5mg/kg、约2.5-2.6 mg/kg、约2.6-2.7mg/kg、约2.7-2.8mg/kg、约2.8-2.9mg/kg、约2.9-3.0mg/kg、约3.0-3.1mg/kg、 约3.1-3.2mg/kg、约3.2-3.3mg/kg、约3.3-3.4mg/kg、约3.4-3.5mg/kg、约3.5-3.6mg/kg、约 3.6-3.7mg/kg、约3.7-3.8mg/kg、约3.8-3.9mg/kg或约3.9-4.0mg/kg)的剂量给药。
本发明还提供了化合物1或形态II的化合物1在用于治疗和/或预防性治疗主体(例如， 免疫缺陷主体)中的病毒感染的药物的制备中的用途，所述化合物具有等于或大于91％ wt/wt的纯度，例如，具有小于或等于9％wt/wt的其他形态学形态或无定型形式预防性治疗。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于治疗和/或预防性治疗主体(例如，免疫缺陷 主体)中的病毒感染的方法，所述方法包括向主体施用具有等于或大于91％wt/wt纯度或以 形态II存在的通式II或III的化合物，例如具有小于或等于9％wt/wt的其他形态学形态或无定 型形式。
在另一个实施方式中，本发明还提供了一种用于治疗和/或预防主体中的病毒感染的口 服制剂形式，包括具有等于或大于91％wt/wt的纯度或以形态II存在的通式II或III的化合物， 例如具有小于或等于9％wt/wt的其他形态学形态或无定型形式，其中，所述口服制剂形式 以约2mg/kg的所述化合物的剂量向人类给药，提供了所述化合物的AUC0-inf为约2000至约 4000h*ng/mL，例如，约2500至约3000h*ng/mL。
在另一个实施方式中，本发明还提供了一种用于治疗和/或预防性治疗主体中的病毒感 染的口服制剂形式，包括具有等于或大于91％wt/wt的纯度或以形态II存在的通式II或III的 化合物，例如具有小于或等于9％wt/wt的其他形态学形态或无定型形式，预防性治疗，其 中所述口服制剂形式以约1-2mg/kg、约2-3mg/kg、约3-4mg/kg的所述化合物的剂量向人类 给药，提供了所述化合物的Cmax为约100至约500ng/mL，例如，约200至约400h*ng/mL。
在另一个实施方式中，本发明还提供了一种用于治疗和/或预防性治疗主体中的病毒感 染的口服制剂形式，包括具有等于或大于91％wt/wt的纯度或以形态II存在的通式II或III的 化合物，例如具有小于或等于9％wt/wt的其他形态学形态或无定型形式，预防性治疗其中 所述口服制剂形式以约1-2mg/kg、约2-3mg/kg、约3-4mg/kg的所述通式II或III的化合物和 所述通式II或III的化合物的剂量向人类给药，并代谢为西多福韦，提供了所述西多福韦的Cmax小于所述通式II或III的化合物的Cmax约30％，例如小于所述通式II或III的化合物的Cmax约20％。
重结晶步骤
在一个或多个实施方式中，该技术包括纯化化合物1的五个区域重结晶步骤。例如， 在一些优选的实施方式中，下面的步骤用于连续重结晶：
第一次重结晶在60-70C溶解在MeOH中，搅拌5min。
冷却至60C并搅拌1h
在6h以上冷却至50C
在2h以上冷却至20C并搅拌2h
过滤
第二次重结晶在60-70℃溶解在MeOH中，搅拌5min。
冷却至60℃并搅拌1h
在6h以上冷却至50℃
在2h以上冷却至20℃并搅拌2h
过滤
第三次重结晶在60-70℃溶解在MeOH中，搅拌20min。
冷却至60℃，搅拌20min，加入留种，搅拌2h
在8h以上冷却至50℃并搅拌2h
在6h以上冷却至20并搅拌2h
过滤，干燥≤40C，研磨
第四次重结晶在60-70℃溶解在MeOH中，搅拌20min。
加入正庚烷保持在50℃以上，搅拌20min。
在6h以上冷却至40℃，搅拌1h
在6h以上冷却至20℃，搅拌2h
过滤
第五次重结晶在60-70℃溶解在MeOH中，搅拌20min。
冷却至61℃，加入留种，搅拌2h
在8h以上冷却至50℃，搅拌2h
在6h以上冷却至20℃，搅拌2h
过滤，干燥≤40℃，研磨
在一些实施方式中，可以使用其他重结晶步骤。例如，在一些实施方式中，在用正庚 烷和甲醇重结晶之前，化合物1可仅经过甲醇重结晶。然后接着采用包括用形态II接种的甲 醇最后重结晶。用于重结晶和纯化的可替代的步骤可以被本领域的技术人员预见，并且下 面的示例性的实施方式不构成限制：
重结晶实施方式A：
第一次重结晶在60-70℃溶解在MeOH中，搅拌5min。
冷却至60℃并搅拌1h
在6h以上冷却至50℃
在2h以上冷却至20℃并搅拌2h
过滤
第二次重结晶在60-70℃溶解在MeOH中，搅拌20min。
加入正庚烷保持在约50C，搅拌20min。
在4h以上冷却至35℃，搅拌1h
在6h以上冷却至20℃，搅拌2h
过滤
第三次重结晶在60-70℃溶解在MeOH中，搅拌20min。
冷却至61℃，加入留种，搅拌2h
在8h以上冷却至50℃，搅拌2h
在6h以上冷却至20℃，搅拌2h
过滤，干燥≤40℃，研磨
重结晶实施方式B：
第一次重结晶在60-70℃溶解在MeOH中，搅拌20min。
加入正庚烷保持在50℃以上，搅拌20min。
在6h以上冷却至4℃，搅拌1h
在6h以上冷却至20℃，搅拌2h
过滤
第二次重结晶在60-70℃溶解在MeOH中，搅拌20min.
冷却至60℃，搅拌20min，加入留种，搅拌2h
在8h以上冷却至50℃并搅拌2h
在6h以上冷却至20℃并搅拌2h
过滤，干燥≤40℃，研磨
第三次重结晶在60-70℃溶解在MeOH中，搅拌20min。
冷却至61℃，加入留种，搅拌2h
在8h以上冷却至50℃，搅拌2h
在6h以上冷却至20℃，搅拌2h
过滤，干燥≤40℃，研磨
在一些实施方式中，可使用选择的重结晶步骤，这对本领域的技术人员来讲是显而易 见的。本领域的技术人员将意识到不同的晶化可或多或少地有效地除去不同类型的杂质。
表8：具有通式II或III的化合物在甲醇中的晶化试验
Figure BDA0002508295000000401
Figure BDA0002508295000000411
Figure BDA0002508295000000421
a晶化在非GMP条件下使用EasyMaxTM进行。温度、时间和速率都是近似的。晶化发生在甲醇中， 除非另有说明。给出的比例是体积比。所有的试验均使用化合物1的形态II样品作为起始材料，除非另 有说明。在每个晶化中使用慢速冷却(9-10小时)。样品在真空烘箱中在～40℃至～48℃之间干燥7小 时至1天，除非另有说明。规模为～5g。
b基于SEM图像观察。
c可能由于蒸发在反应器中观察到溶剂的重大损失。
药物组合物
在另一方面，在此提供了一种药物组合物，包括本发明的多晶型(例如多晶型形态II) 以及任选地药学上可接受的载体或稀释剂。在此还提供了一种药物组合物，包括本发明多 晶型(例如，多晶型或形态II)以及药学上可接受的载体或稀释剂。
术语“药物组合物”包括适于向哺乳动物例如人类给药的制剂。当将本发明的化合物作 为药物施用给哺乳动物例如人类时，其可以本身或作为含有例如约0.1％至约99.9％、约0.2 至约98％、约0.3％至约97％、约0.4％至约96％或约0.5至约95％的活性组分与药学上可接受 的载体结合的药物组合物被给药。在一个实施方式中，含有约0.5％至约90％的活性组分与 药学上可接受的载体结合的药物组合物适于向哺乳动物(例如人类)给药。一些实施方式 提供了用于治疗、阻止或预防病毒感染或病毒感染相关的疾病的药物组合物的制备方法， 所述药物组合物含有约0.1％至约99.9％、约0.2至约98％、约0.3％至约97％、约0.4％至约96％ 或约0.5至约95％的本发明的通式II或III的化合物。本发明提供了约0.1％至约99.9％、约0.2 至约98％、约0.3％至约97％、约0.4％至约96％或约0.5至约95％的通式II或III的化合物用于制 备含有有效量的化合物的药物的用途，所述药物用于治疗、阻止或预防病毒感染或病毒感 染相关的疾病。
在一些实施方式中，药物组合物包括通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐) 的无水的形态学形态(例如形态II)，其实质上不含形态I和/或形态H。包括本发明的形态 学形态II的药物组合物具有作为杂质的等于或小于约10％的形态I和/或形态H。在一些实施 方式中，包括形态II的药物组合物具有作为杂质的等于或小于约9％、约8％、约7％、约6％、 约5％、约4％、约3％、约2％、约1％、约0.9％、约0.8％、约0.7％、约0.6％、约0.5％、约0.4％、 约0.3％、约0.2％、约0.1％、约0.05％、约0.01％或约0.001％的形态I和/或形态H。
根据常规制药组合技术，在此描述的多晶型(例如，多晶型II)可与药学上可接受的 载体结合。如在此使用的，“药学上可接受的载体”可包括任何以及所有溶剂，稀释剂，或其他液态载剂、分散剂或助悬剂，表面活性剂，等渗剂，增稠剂或乳化剂，防腐剂，固 体粘合剂和润滑剂等等，与所需的特定剂型相适应。雷明顿制药科学，第十六版，E.W. 马丁(Remington’s Pharmaceutical Sciences,Sixteenth Edition,E.W.Martin)(MackPublishing Co.,Easton,Pa.,1980)公开了在配制药物组合物中使用的各种载体和用于制备其 的已知技术。除了目前任何常规的载体介质与所述化合物(例如产生不良的生物学效应或 否则是与任何其他成分相互作用的有害方式)不兼容外，其用途被考虑到本发明的范围内。 一些实施方式的材料可作为药学上可接受的载体，包括但不限于，糖(例如乳糖、葡萄糖 和蔗糖)、淀粉(例如玉米淀粉和马铃薯淀粉)、纤维素及其衍生物(例如，羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素)、粉末黄蓍胶、麦芽酒、明胶、滑石、辅剂(例如可可 脂和栓蜡)、油(例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油)、乙 二醇(例如丙二醇)、酯(例如油酸乙酯和月桂酸乙酯)、琼脂、缓冲剂(例如氢氧化镁 和氢氧化铝)、褐藻酸、无热源水、等渗盐水、林格氏液、乙醇和磷酸盐缓冲液以及其他 无毒兼容润滑剂(例如月桂基磺酸钠和硬脂酸镁)，以及着色剂、释放剂、涂层剂、甜味 剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也能存在于组合物中，根据配方来判断。
进一步地，依赖于预期给药的制剂形式，例如口服、鼻、直肠、阴道、肠胃外(包括静脉注射的注射或注入)给药，载体可采用多种形式的载体。在制备口服制剂形式的组合物中，可以使用任何常规制药媒介。常规制药媒介包括，例如在口服液体制剂(例如悬浮剂、溶液、乳状液和酏剂)和喷雾剂的情况下，水、乙二醇、油、醇类、调味剂、防腐剂、 着色剂等等，或例如在口服固体制剂(例如粉末、胶囊和片剂)的情况下，淀粉、糖、微 晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等等的载体。
包括本发明多晶型(例如，形态II)的药物组合物可被配制成具有任何所需的浓度。 在一些实施方式中，配制组合物从而使其包括至少治疗上有效的量。如在此使用的，“治 疗上有效的量”的意思是在患者中获得被观察到的临床改善的必需的量。在一些实施方式 中，配制组合物从而使其包括不会引起一种或多种不必要的副作用的量。
药物组合物包括适于口服、舌下、鼻、直肠、阴道、局部、口含以及肠胃外(包括皮下、肌肉、静脉注射)给药的那些，虽然最合适的路径将依赖于被治疗的状况的性质和严 重程度。组合物可方便地以单位剂型存在，并可由药学领域熟知的任何方法来制备。在某 些实施方式中，药物组合物以药丸、胶囊、含片或药片的形式被配制用于口服给药。在其 他实施方式中，药物组合物为悬浮剂的形式。
给药方案可影响所构成的治疗上有的效量。本发明的多晶型(例如，形态II)及其组 合物可在疾病发作之前或之后向主体给药。而且，几个分药剂以及交错药剂可每日或顺序 地被给药，或药剂可被连续注射，或可以团注。进一步地，由治疗或预防状况的急切程度显示需要做的治疗，药剂可按比例地被增加或减少。进一步地，药剂可与本领域已知的其他化疗剂被共给药。
“药物组合物”为含有适于向主体给药形式的本发明的化合物的制剂。在一个实施方 式中，药物组合物为散装或单位剂型。单位剂型为各种形式，包括例如胶囊、静脉注射袋、 药片、喷雾剂吸入器火小瓶上的单流向泵。单位组合物制剂中的活性组分(例如，本发明 的化合物或其盐、水合物、溶剂合物或异构体的配方)的数量为有效的量并根据涉及的特 定治疗而改变。本领域的技术人员将理解依赖于患者的年龄和身体状况，进行剂量的常规 改变有时是必要的。剂量还依赖于给药的路径。可以考虑包括口服、肺、直肠、肠胃外、经皮给药、皮下、静脉注射、肌肉、腹膜、吸入、口含、舌下、胸膜腔内、鞘内、鼻内等 等的各种途径，本发明的化合物局部或经皮给药的剂型包括粉末、喷雾、软膏、糊状、乳 霜、乳液、凝胶、溶液、药物贴片和吸入剂。在一个实施方式中，在无菌条件下与药学上 可接受的载体、以及与需要的任何的防腐剂、缓冲剂或推进剂混合活性化合物。
如在此使用的，短语“药学上可接受的”是指在健全医疗的判定范围内适合用于与人 类和动物的组织接触而没有过量的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，因而与合 理的利益/风险比率相称的那些化合物、材料、组合物、载体和/或剂型。
“药学上可接受的赋形剂或载体”意思是在制备药物组合物有用的赋形剂或载体通 常是安全的、无毒的，并且不是生物或其他不良的，包括兽药用途以及人类医药用途可接 受的赋形剂。在说明书和权利要求书中使用的“药学上可接受的赋形剂”包括一种以及不 止一种的该赋形剂。
配制本发明的药物组合物以适合其旨在的给药途径。给药途径的示例包括肠胃外(例 如，静脉注射、皮内、皮下)、口服(例如，吸入剂)、经皮(局部)以及经粘膜给药。 用于肠胃外、皮内、皮下用途的溶液或悬浮剂可包括下面的组分：无菌稀释剂(例如用于 注射的水)、盐溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂、抗菌剂(例 如苯甲醇或尼泊金甲酯)、抗氧化剂(例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠)、螯合剂(例如乙二 胺四乙酸)、缓冲剂(例如醋酸酯、柠檬酸盐类或磷酸盐类)以及调节渗透性(tonicity) 的制剂(例如氯化钠或葡萄糖)。pH可用酸或碱调节，例如盐酸或氢氧化钠。肠胃外制剂 可被封装于在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制备的多剂量瓶中。
在此使用的术语“治疗上有效的量”是指用于治疗、改善或预防可辨的疾病或身体状 况，或显示出可检测的治疗或抑制效果的制剂的量。该效果可被本领域已知的任何检测方 法来检测。用于主体的精确有效的量将依赖于主体的体重、身高以及健康身体条件的性质 和程度，以及给药所选择的治疗或结合的疗法。对于特定情况，治疗上有效的量可通过在 临床医生的技能和判断内的常规试验来决定。在优选的方面，被治疗的疾病或状况为病毒 感染。
对于任何化合物，治疗上有效的量最初在例如肿瘤细胞的细胞培养分析，或在动物模 型(通常为大鼠、小鼠、兔、狗或猪)中被评价。动物模型还可被用于确定给药的适当的浓度范围和途径。然后该信息被用来确定在人类中给药的有用剂量和途径。治疗/预防的功效和毒性可通过在细胞培养或试验动物中的标准的制药过程来确定，例如，ED50(在50％ 的群体中治疗有效的剂量)和LD50(50％的群体致死的剂量)。毒性和治疗效果之间的剂 量比为治疗指示，并且其可以表示为比例，LD50/ED50。优选表现出大的治疗指示的药物组 合物。依赖于使用的剂型、患者的敏感性以及给药途径，在该范围内剂量可变化。
调节剂量和给药来提供活性药剂足够的水平或维持期望的效果。可考虑在内的因素包 括疾病状态的敏感性，主体的总体健康状况，主体的年龄、体重和性别，饮食，给药的时 间和频率，药物组合、反应敏感性以及对治疗的耐受性/响应性。依赖于特定制剂的半衰期 和清除率，长效药物组合物可每3到4天、每周或两周一次给药。
含有本发明的活性化合物的药物组合物可以通常已知的方法来制备，例如通过传统的 混合、溶解、造粒、糖衣丸制备、捻成细粉、乳化、装入胶囊、包埋或冻干的方法。可用一种或多种药学上可接受的载体以常规方式配制药物组合物，所述药学上可接受的载体包括方便处理活性化合物到药学上能够使用的制备中的赋形剂和/或辅剂。当然，合适的制剂依赖于选择的给药途径。
适用于注射使用的药物组合物包括用于临时制备无菌注射溶液或分散液的无菌水溶 液(水溶性的)或分散剂和无菌粉末。对于静脉注射给药，合适的载体包括生理盐水、抑 菌水、聚氧乙烯蓖麻油EL(BASF，Parsippany,N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所 有的情况下，组合物必须无菌并且应该为存在容易的可注性程度的流体。在制备和储存条 件下必须是稳定的并被保存免于微生物(例如细菌和真菌)的污染行为。载体可以为溶剂 或含有例如水、乙醇、多羟基化合物(例如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇等等)的分散介 质，及其合适的混合物。例如，通过使用例如卵磷脂包衣，在分散的情况下通过维持所需 的粒度以及通过使用表面活性剂，可保持适当的流动性。通过各种抗细菌和抗真菌剂可获 得预防微生物的作用，例如，尼泊金酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等等。在 许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如，糖、多元醇(甘露醇、山梨醇)和氯化 钠。可通过包括在组合物中的能延长吸收的制剂(例如单硬脂酸铝和明胶)来获得注射组 合物的延长吸收。
无菌注射溶液可通过在含有一种或与上面列举的原料结合的合适的溶剂中掺入需要 量的活性化合物来制备，按需要，接着过滤灭菌。通常，通过掺入活性化合物到无菌的载 体中制备分散剂，所述无菌的载体含有碱性分散介质和来自上面列表中的那些需要的其他 原料。在用于制备无菌注射溶液制备的无菌粉末的情况下，制备方法为真空干燥和冻干， 获得活性组分以及来自其之前的过滤灭菌溶液的任何额外所需的组分。
口服组合物通常包括惰性稀释液或可食用的药学上接受的载体。其可被封装于明胶胶 囊中或压制到药片中。为了口服治疗给药目的，活性组合物可与赋形剂结合并以药片、片 剂或胶囊的形式使用。口服组合物也可用作为漱口剂使用的液体载体来制备，其中液体载 体中的化合物口服使用并发出飒飒声，然后咳出或吞下。制药相容粘合剂和/或辅料可作为 组合物的一部分包括在内。药片、药丸、胶囊、片剂等等可含有任何下面的原料或相似性 质的化合物：粘合剂(例如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶)、赋形剂(例如淀粉或乳糖)、崩解剂(例如褐藻酸、初生凝胶或玉米淀粉)、助流剂(例如胶质二氧化硅)、甜味剂(例 如糖或糖精)、或调味剂(例如薄荷、水杨酸甲酯或橙香精)。
对于通过吸入剂给药，化合物从压力容器或分配其中以喷雾剂喷雾的形式被传递，其 含有合适的推进物(例如气体，如二氧化碳)或喷雾器。
全身用药还可为经粘膜给药或经皮给药的方式。对于经粘膜给药或经皮给药，适于被 渗入屏障的渗透剂被使用到制剂中。该渗透剂通常在本领域中是已知的，并包括(例如用 于经粘膜给药)洗涤剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。经粘膜给药可通过鼻喷雾或栓剂的使 用来完成。对于经皮给药，活性化合物被配制成本领域通常已知的软膏、药膏、凝胶或乳 霜。
活性化合物可以用药学上可接受的载体来制备，所述药学上可接受的载体将保护化合 物免于从身体中快速消除，例如缓释剂，包括植入和微囊传递系统。可以使用生物降解、 生物兼容的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚羟基乙酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备这类制剂的方法对本领域的技术人员来讲是显而易见的。材料还可从Alza 公司和Nova制药有限公司商业获得。脂质体悬浮剂(包括靶向含有病毒抗原的单抗的被侵 染的细胞的脂质体)也可被用作药学上可接受的载体。
制备容易给药且剂量均匀的剂量单位形式的口服或肠胃外组合物是有益的。在此使用 的剂量单位形式是指适合作为单一剂量用于被治疗的主体的物理上不相关联的单元，每个 单元含有计算产生与所需药学载体相关的所需治疗效果的预定量的活性化合物。对本发明 的剂量单位形式的说明通过以及直接依赖于活性化合物的独特的特性并获得特定治疗效 果所规定。
包括具有通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态II的药物组合物可通过 比较组合物的X射线粉末衍射图谱与形态II的X射线粉末衍射图谱来鉴别。可以理解包括具 有通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态II的药物组合物显示出与图1相比 实质上相同的图谱的不同的X射线粉末衍射图谱。在XRPD图谱中观察到的细微的差别可能 是由于上述因素，包括样品中存在其他杂质。
在分析之前，所述药片用研钵和杵轻轻研磨。药片显示出与图13和/或图14非常相似的 XRPD图谱，表明漫散射的晶体材料可能来自一种或多种赋形剂。
在一个实施方式中，具有通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态II显示 出具有在2.81、5.63、19.00、19.57、22.76和24.70度2θ表达的特征峰的X射线粉末衍射图谱， 或具有与图13或17中展示的实质上相似的X射线衍射图谱，与图2中展示的实质上相似的指 示，以及与图15或16中展示的实质上相似的DSC热谱。
在一些实施方式中，两个形态II药片样品的DSC热谱显示出在约90℃和约95℃(最大 峰值)少量吸热以及在约165℃启动大量吸热。形态II晶型的药片样品在约196℃有大量吸 热。
在一个实施方式中，在约189℃流动之前，热台显微镜没有显示出任何显著的观察， 除了在约98℃观察到一些潜在升华。在一些实施方式中，本实施方式的形态II具有潜在 的热致中间相(thermotropic mesophase)。
表9：形态II药片1的特征
Figure BDA0002508295000000481
a样品作为白色药片提交，但在研钵和杵中被轻轻地手动研磨以进行分析
表10：形态II药片2的特征
Figure BDA0002508295000000482
a样品作为白色药片提交，但在研钵和杵中被轻轻地手动研磨以进行分析
在治疗应用中，在影响选择剂量的其他因素中，根据本发明使用的药物组合物的剂量 依赖于药剂，受试患者的年龄、体重和临床状况，和临床医生的经验和判断或从业者给药 治疗而改变。剂量可以单剂、分次或连续的剂量在约0.01mg/kg至约100mg/kg变化。在优 选的方面，剂量可在约0.1mg/kg至约10mg/kg变化。在一个方面，剂量为约1mg至约1g、约10mg至约500mg、约20mg至约400mg、约40mg至约400mg或约50mg至约400mg(可 根据患者的体重(kg)、身体表面积(m2)和年龄(年)来调节剂量)的范围。在某些实 施方式中，每一剂型的量可为约0.1mg至约1000mg，例如，约0.1mg、约0.5mg、约1.0mg、 约2.0mg、约3.0mg、约4.0mg、约5.0mg、约6.0mg、约7.0mg、约8.0mg、约9.0mg、约 10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、 约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg 或约100mg或更多。在一个实施方式中，量可以为约20mg。在一个实施方式中，量可以 为约50mg。
化合物1或其药学上可接受的盐的形态II或形态H被配制为药物组合物或被用在用于治 疗病毒感染和/或病毒感染相关疾病和/或失调的药物的制造中。化合物1或其药学上可接受 的盐的形态II或形态H的组合物和/或药物被配制为药片或悬浮剂。化合物1形态II的药片被 配制为包括药学上可接受的缓冲剂、赋形剂、载体，包括乳化剂、促进剂(例如，吸收促 进剂)、崩解剂(例如，聚乙烯聚吡咯烷酮(聚乙烯基吡咯烷酮、PVPP、交联聚维酮、交联聚乙烯基吡咯烷酮或E1202)，其为高度交联改性的聚乙烯吡咯烷酮(PVP))和/或本 发明公开的和本领域已知的聚合物。
在一个实施方式中，本发明提供了用于预防性治疗或阻止病毒感染和/或病毒相关疾病 或失调的化合物1的片剂1。本发明提供了用于治疗免疫缺陷的主体，或器官和/或组织移植 之前或之后的主体的化合物1的片剂1。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于预防性治疗或阻止病毒感染和/或病毒相关疾 病或失调的化合物1的片剂2。本发明提供了用于治疗免疫缺陷的主体，或器官和/或组织移 植之前或之后的主体的化合物1的片剂2。
在一些实施方式中，本发明提供了用于预防性治疗或阻止病毒感染和/或病毒相关疾病 或失调的化合物1形态II的片剂1。本发明提供了用于治疗免疫缺陷的主体，或器官和/或组 织移植之前或之后的主体的化合物1形态II的片剂1。
在一些实施方式中，本发明提供了用于预防性治疗或阻止病毒感染和/或病毒相关疾病 或失调的化合物1形态II的片剂2。本发明提供了用于治疗免疫缺陷的主体，或器官和/或组 织移植之前或之后的主体的化合物1形态II的片剂2。
在本发明中的药片形式中的两种化合物1制剂的组合物被列于表11。
在一个实施方式中，本发明提供了用于预防性治疗或阻止病毒感染和/或病毒相关疾病 或失调的化合物1的悬浮剂3。本发明提供了用于治疗免疫缺陷的主体，或器官和/或组织移 植之前或之后的主体的化合物1的悬浮剂3。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于预防性治疗或阻止病毒感染和/或病毒相关疾 病或失调的化合物1的悬浮剂4。本发明提供了用于治疗免疫缺陷的主体，或器官和/或组织 移植之前或之后的主体的化合物1的悬浮剂4。
表11：100mg化合物1的片剂
Figure BDA0002508295000000501
在一些实施方式中，本发明提供了用于预防性治疗或阻止病毒感染和/或病毒相关疾病 或失调的化合物1形态II的悬浮剂3或4。本发明提供了用于治疗免疫缺陷的主体，或器官和 /或组织移植之前或之后的主体的化合物1形态II的悬浮剂3或4。
在当前公开的悬浮剂形式中的两种化合物1通式的组合物被列于表12。
表12：化合物1的悬浮制剂
Figure BDA0002508295000000502
Figure BDA0002508295000000511
本发明的制剂被用于治疗与病毒感染相关的终末器官损伤，例如治疗、预防和/或改善 主体中的BK病毒感染相关的终末器官损伤。
本发明的制剂被用于制造用于预防性治疗和/或组织病毒感染和/或与病毒相关的疾病 和/或失调方面的药物。
在一个实施方式中，通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态II以约100mg (表11中描述的片剂1或2，或表12中描述的悬浮剂3或4)的剂量每周两次给药。在另一个 实施方式中，通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态II以约200mg(表11 中描述的片剂1或2，或表12中描述的悬浮剂3或4)的剂量每周一次给药。
在另一个实施方式中，本发明提供了具有理想药代动力学特征的组合物(例如，药物 组合物)。例如，本发明的组合物可提供通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态II的血中浓度，其在代谢为治疗活性形式(即，西多福韦)后，获得了没有诱导毒 性(例如中毒性肾损害)的代谢物的血中浓度。
药剂的有效量提供了由临床医生或其他合格者注意到的可客观辨别的改进。如在此使 用的，术语“剂量的有效方式”是指在主体或细胞中产生所需的生物效果的活性化合物的量。
在另一个实施方式中，通式II、III的化合物或本发明的其他组合物可以单剂量来给药。 在另一个实施方式中，通式II、III或本发明的其他组合物可以多剂量向主体给药。多剂量 可定期给药，例如每12小时一次，每天、每2天、每3天、每4天、每5天、每6天、每7天、每8天、每9天、每10天、每11天、每12天、每13天、每14天或每15天一次。例如，剂量可 进行每周两次给药。而且，每个单剂量可以相同或不同剂量来给药。
例如，在同一周或下一周，可以以约1-4mg/kg(例如，1-1.1mg/kg、约1.1-1.2mg/kg、 约1.2-1.3mg/kg、约1.3-1.4mg/kg、约1.4-1.5mg/kg、约1.5-1.6mg/kg、约1.6-1.7mg/kg、 约1.7-1.8mg/kg、约1.8-1.9mg/kg、约1.9-2.0mg/kg、约2.0-2.1mg/kg、约2.1-2.2mg/kg、 约2.2-2.3mg/kg、约2.3-2.4mg/kg、约2.4-2.5mg/kg、约2.5-2.6mg/kg、约2.6-2.7mg/kg、 约2.7-2.8mg/kg、约2.8-2.9mg/kg、约2.9-3.0mg/kg、约3.0-3.1mg/kg、约3.1-3.2mg/kg、 约3.2-3.3mg/kg、约3.3-3.4mg/kg、约3.4-3.5mg/kg、约3.5-3.6mg/kg、约3.6-3.7mg/kg、 约3.7-3.8mg/kg、约3.8-3.9mg/kg或约3.9-4.0mg/kg)的具有通式II或III(或其药学上可接 受的盐)的形态II的第一剂量，接着以1-4mg/kg(例如，1-1.1mg/kg、约1.1-1.2mg/kg、约 1.2-1.3mg/kg、约1.3-1.4mg/kg、约1.4-1.5mg/kg、约1.5-1.6mg/kg、约1.6-1.7mg/kg、约 1.7-1.8mg/kg、约1.8-1.9mg/kg、约1.9-2.0mg/kg、约2.0-2.1mg/kg、约2.1-2.2mg/kg、约 2.2-2.3mg/kg、约2.3-2.4mg/kg、约2.4-2.5mg/kg、约2.5-2.6mg/kg、约2.6-2.7mg/kg、约 2.7-2.8mg/kg、约2.8-2.9mg/kg、约2.9-3.0mg/kg、约3.0-3.1mg/kg、约3.1-3.2mg/kg、约 3.2-3.3mg/kg、约3.3-3.4mg/kg、约3.4-3.5mg/kg、约3.5-3.6mg/kg、约3.6-3.7mg/kg、约 3.7-3.8mg/kg、约3.8-3.9mg/kg或约3.9-4.0mg/kg)的具有通式II或III(或其药学上可接受 的盐)的形态II的一种或多种额外剂量来向主体给药。例如，可以约3mg/kg的第一剂量， 接着以约1mg/kg的一种或多种额外的剂量来向主体给药。例如，可以以约2mg/kg的第一 剂量，接着以约3mg/kg的一种或多种额外的剂量来向主体给药。例如，可以以约4mg/kg 的第一剂量，接着以约4mg/kg的一种或多种额外的剂量来向主体给药。
多剂量也可以可变时间间隔来给药。例如，第一的2、3、4、5、6、7或8或更多的剂 量以每隔6天，接着以每隔7天施用的额外剂量来给药。例如，第一的2、3、4、5、6、7或 8或更多的剂量以每隔7天，接着以每隔3天施用的额外剂量来给药。
在另一个实施方式中，本发明提供了一种用于治疗和/或预防治疗主体的病毒感染的口 服制剂形式，其包括具有纯度大于91％的纯度或为形态II的通式II或III的化合物(或其药学 上可接受的盐)的形态II，其中以约1-4mg/kg(例如，1-1.1mg/kg、约1.1-1.2mg/kg、约1.2-1.3 mg/kg、约1.3-1.4mg/kg、约1.4-1.5mg/kg、约1.5-1.6mg/kg、约1.6-1.7mg/kg、约1.7-1.8mg/kg、 约1.8-1.9mg/kg、约1.9-2.0mg/kg、约2.0-2.1mg/kg、约2.1-2.2mg/kg、约2.2-2.3mg/kg、约 2.3-2.4mg/kg、约2.4-2.5mg/kg、约2.5-2.6mg/kg、约2.6-2.7mg/kg、约2.7-2.8mg/kg、约2.8-2.9 mg/kg、约2.9-3.0mg/kg、约3.0-3.1mg/kg、约3.1-3.2mg/kg、约3.2-3.3mg/kg、约3.3-3.4mg/kg、 约3.4-3.5mg/kg、约3.5-3.6mg/kg、约3.6-3.7mg/kg、约3.7-3.8mg/kg、约3.8-3.9mg/kg或约 3.9-4.0mg/kg)的所述化合物的剂量向人类给药后，所述口服制剂形式提供了约2000至约 4000h*ng/mL例如约2500至约3000h*ng/mL的化合物的AUC0-inf。在一些实施方式中，所述 化合物的AUC0-inf为约2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900、 3000、3100、3200、3300、3400、3500、3600、3700、3800、3900或4000h*ng/mL或其中 的任何范围。AUC0-inf可由本领域任何熟知的以及如本发明实施例中描述的方法来测定。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于治疗和/或预防治疗主体的病毒感染的口服制 剂形式，包括具有等于或大于91％的纯度或为形态II的通式II或III的化合物(或其药学上可 接受的盐)的形态II，其中以约1-4mg/kg(例如，1-1.1mg/kg、约1.1-1.2mg/kg、约1.2-1.3 mg/kg、约1.3-1.4mg/kg、约1.4-1.5mg/kg、约1.5-1.6mg/kg、约1.6-1.7mg/kg、约1.7-1.8mg/kg、 约1.8-1.9mg/kg、约1.9-2.0mg/kg、约2.0-2.1mg/kg、约2.1-2.2mg/kg、约2.2-2.3mg/kg、约 2.3-2.4mg/kg、约2.4-2.5mg/kg、约2.5-2.6mg/kg、约2.6-2.7mg/kg、约2.7-2.8mg/kg、约2.8-2.9 mg/kg、约2.9-3.0mg/kg、约3.0-3.1mg/kg、约3.1-3.2mg/kg、约3.2-3.3mg/kg、约3.3-3.4mg/kg、 约3.4-3.5mg/kg、约3.5-3.6mg/kg、约3.6-3.7mg/kg、约3.7-3.8mg/kg、约3.8-3.9mg/kg或约 3.9-4.0mg/kg)的所述化合物的剂量向人类给药后，所述口服制剂形式提供了约100至约500 ng/mL例如约200至约400ng/mL的化合物的Cmax。在一些实施方式中，化合物的Cmax为约 100、约110、约120、约130、约140、约150、约160、约170、约180、约190、约200、约 210、约220、约230、约240、约250、约260、约270、约280、约290、约300、约310、约 320、约330、约340、约350、约360、约370、约380、约390、约400、约410、约420、约 430、约440、约450、约460、约470、约480、约490或约500ng/mL或其中的任何范围。Cmax可由本领域任何熟知的以及如本发明实施例中描述的方法来被测定。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于治疗和/或预防治疗主体的病毒感染的口服制 剂形式，包括具有大于约91％的纯度或为形态II的通式II或III化合物的(或其药学上可接受 的盐)的形态II，其中以约1-4mg/kg(例如，1-1.1mg/kg、约1.1-1.2mg/kg、约1.2-1.3mg/kg、 约1.3-1.4mg/kg、约1.4-1.5mg/kg、约1.5-1.6mg/kg、约1.6-1.7mg/kg、约1.7-1.8mg/kg、约 1.8-1.9mg/kg、约1.9-2.0mg/kg、约2.0-2.1mg/kg、约2.1-2.2mg/kg、约2.2-2.3mg/kg、约2.3-2.4 mg/kg、约2.4-2.5mg/kg、约2.5-2.6mg/kg、约2.6-2.7mg/kg、约2.7-2.8mg/kg、约2.8-2.9mg/kg、 约2.9-3.0mg/kg、约3.0-3.1mg/kg、约3.1-3.2mg/kg、约3.2-3.3mg/kg、约3.3-3.4mg/kg、约 3.4-3.5mg/kg、约3.5-3.6mg/kg、约3.6-3.7mg/kg、约3.7-3.8mg/kg、约3.8-3.9mg/kg或约3.9-4.0mg/kg)的具有通式II或III(或其药学上可接受的盐)的所述化合物的剂量向人类给 药和通式II或III的所述化合物(或其药学上可接受的盐)代谢为西多福韦后，所述口服制 剂形式提供了小于具有通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的Cmax约30％的所述 西多福韦的Cmax，例如，小于具有通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的Cmax约20％的Cmax。在一些实施方式中，代谢物(即西多福韦)的Cmax小于具有通式II或III的化 合物(或其药学上可接受的盐)的形态II的Cmax约50％、45％、40％、35％、30％、25％、 20％、15％或10％。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括具有大于91％的纯度或为形态II的具有通式II 或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态II的口服剂型，其中以约2mg/kg的具有通 式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态II的所述化合物的剂量向人类给药后， 提供了约1000至约5000h*ng/mL例如约1500至约4000h*ng/mL的西多福韦的AUC0-inf。在一 些实施方式中，西多福韦的AUC0-inf为约1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、 1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900、3000、3100、3200、3300、3400、3500、3600、3700、3800、3900、4000、4100、4200、4300、 4400、4500、4600、4700、4800、4900或5000h*ng/mL或其中的任何范围。
在另一个实施方式中，本发明提供了包括具有等于或大于91％的纯度或为形态II的具 有通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态II的口服剂型，其中以约2mg/kg 的具有通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的所述形态II的剂量向人类给药后， 提供了约10至约100ng/mL例如约20至约70ng/mL的西多福韦的Cmax，。在一些实施方式中， 具有通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态II的Cmax为约10、20、30、40、 50、60、70、80、90或100ng/mL或其中的任何范围。
在某些实施方式中，口服剂型提供了不止一个上面描述的药代动力学特征，例如，具 有通式II或III的化合物(或其药学上可接受的盐)的形态II或代谢物(即西多福韦)的AUC0-inf或Cmax或代谢物(即西多福韦)与通式(I)化合物的Cmax的比例，例如，任意组合的2个、3个、4个或更多个的药代动力学特征。
组合物的药代动力学行为在的群体中从主体到主体会稍有不同。本发明的组合物的上 面描述的数量基于群体中的平均行为。本发明旨在包括在公开范围内的平均降幅的组合 物，即使某些主体可能没有落在这些范围内也是可以理解的。
药物组合物可与给药说明书一起被封装在容器、包装或分配器中。
本发明的化合物能够进一步能够形成盐。所有这些形式也被考虑在本发明权利要求的 范围内。
定义
如在此使用的，“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的衍生物，其中母体化合 物通过制成其酸式或碱式盐来修饰。药学上可接受的盐的示例包括但不限于碱性残基(例 如胺)的矿物或有机酸盐、酸性残基(例如羧酸)的碱或有机盐等等。药学上可接受的盐包括形成的母体化合物的常规的非毒性盐或季铵盐，例如，来自非毒性的无机或有机酸。例如，这些常规的非毒性盐包括但不限于来自无机和有机酸的那些，所述无机和有机酸选自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羟乙基磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氢根、碳 酸、柠檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、1,2-乙烷磺酸、富马酸、葡庚糖、葡萄糖酸、谷氨酸、 乙醇酸、乙醇酰对氨基苯基砷酸、hexylresorcinic、hydrabamic、氢溴酸、盐酸、氢碘酸、 羟基马来酸、羟萘酸、羟乙基磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃 酸、甲磺酸、萘磺酸、硝酸、草酸、帕莫酸、泛酸、苯基乙酸、磷酸、聚半乳糖醛酸、丙 酸、水杨酸、硬脂酸、亚乙酸、琥珀酸、磺酸、磺胺酸、硫磺酸、丹宁酸、酒石酸、甲苯 磺酸，以及常用的胺酸，例如，甘氨酸、丙氨酸、苯基丙氨酸、精氨酸等。
药学上可接受的盐的其他示例包括已酸、环戊基丙酸、丙酮酸、丙二酸、3-(4-羟基苯 甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环-[2.2.2]- 辛-2-烯-1-羧酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸酸、叔丁基乙酸、粘康酸等等。本发明还包括当 存在于母体化合物的酸性质子被金属离子(例如，碱金属离子、碱土金属离子或铝离子) 或有机碱的配合物(例如，乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨基丁三醇、N-甲基葡糖胺、 二乙胺、二甲氨基乙醇、乙二胺、咪唑、赖氨酸、精氨酸、吗啉、2-羟基乙基吗啉、二苯 甲基乙二胺、三甲基胺、哌啶、吡咯烷、苯甲基胺、四甲基氢氧化铵等等)所代替时形成 的盐。
应当理解药学上可接受的盐的所有引用都包括本发明定义的相同盐的溶剂的其他形 式(溶剂合物)或晶体形式(多晶型)。
本发明的化合物也可被制备为酯，例如，药学上可接受的酯。例如，化合物中的羧酸 功能基团可被转换为其相应的酯，例如，甲基、乙基或其他酯。同样，化合物中的醇基可被转化为其相应的酯，例如，醋酸酯、丙酸酯或其他酯。
所述化合物或药学上可接受的盐、酯或其衍生物可口服、鼻、经皮、肺、吸入、口含、舌下、腹腔内(intraperintoneally)、皮下、肌肉、静脉注射、直肠、胸腔内注射、鞘内注 射和肠胃外给药。在一个实施方式中，所述化合物口服给药。本领域的技术人员将认识到 某些给药途径的益处。
根据包括患者的类型、种类、年龄、重量、性别和医疗条件，被治疗的严重程度，给药途径，患者的肾功能和肝功能以及使用的特定化合物或其盐的各种因素选择利用化合物的给药方案。普通熟练的医生或兽医可很容易的确定以及指定阻止、反击或控制疾病发展的所需药物的有效的量。
本发明化合物的制剂和给药技术可在Remington:the Science and Practice ofPharmacy, 19th edition,Mack Publishing Co.,Easton,PA(1995)中找到。在一个实施方式中，本发明描述 的化合物以及其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体或稀释剂结合在制药制剂中使 用。合适的药学上可接受的盐包括惰性固体填料或稀释剂以及无菌水或有机溶液。化合物 将以足够提供本发明描述范围的所需的剂量的量在这样的药物组合物中存在。
可以理解本发明公开的方法适于大规模和小规模制备所述化合物。在本发明公开的方 法的优选的实施方式中，膦酸酯可以大规模(例如，以工业生产规模)而不是试验/实验室 规模来被制备。例如，根据公开的方法的间歇式工艺允许至少1g、或至少5g、或至少10g、 或至少100g、或至少1kg、或至少100kg的膦酸酯产品的批量制备。而且，所述方法允许具有由HPLC测定的至少98％或至少98.5％的纯度的膦酸酯产品制备。在根据本发明的优选的实施方式中，这些产品在不涉及任何形式的色谱的纯化(例如，气相色谱、HPLC、制 备LC、尺寸排阻色谱等等)的反应顺序中获得。
在本发明中提及的所有的专利、专利申请以及出版物通过引用的方式全部被并入在 此。但是，含有表示定义的母案、母案申请或公开出版物通过引用被并入，那些表示的定义应该被理解为应用到并入的专利、专利申请或出版物中，在所述专利、专利申请或出版物中，找到这些定义，而不是该申请上下文的其他地方，特别是该申请的权利要求书。
如在此使用的，“主体”与“有其需要的主体”是可互换的，一般说来，均是指患有病毒感染在其中扮演角色的失调的主体，或相对于群体具有增加发展病毒感染相关疾病或失调风险的主体。“主体”包括哺乳动物。哺乳动物可以为例如，人类或合适的非人类哺 乳动物，例如灵长目动物，小鼠、大鼠、狗、猫、牛、马、山羊、骆驼、绵羊或猪。主体 也可为鸟或家禽。在一个实施方式中，哺乳动物为人类。
如在此使用的，现代分词形式的“治疗”、名词形式的“治疗”或动词形式的“治 疗”描述了抗争疾病、身体状况或失调目的的患者的管理和照顾，以及包括本发明的多晶 型(例如，多晶型II)的给药，来缓解疾病、身体状况或失调的病症或并发症，或来消除 疾病、身体状况或失调。术语“治疗”也可包括体外的细胞或动物模型的治疗。
本发明的多晶型也可被用于阻止相关疾病、身体状况或失调，或被用于确定为此目的 的合适的候选者。如在此使用的，现代分词形式的“阻止”(preventing)、动词形式的“阻 止”(prevent)或“保护免于”描述了减少、改善或消除这种疾病、身体状况或失调的症状或并发症的启动。
可以理解在结合本发明优选的特定实施方式中描述了本发明，前面的描述以及下面的 实施方式目的是为了说明而不是限制本发明范围。本领域的技术人员将理解可能进行的各 种改变和没有脱离本发明范围的等同替代，以及进一步的其他方面、益处和修改对本发明 有关的领域的技术人员来讲是显而易见的。
如在此使用的“晶体”意思是所述化合物被晶化为三维空间的特定的晶质堆积排列 或具有外表面平面的化合物。晶体状态的化合物在它们的X射线衍射图谱中显示出不同的 尖峰，并通常显示明确的熔点。不同的晶体形式通常显示不同的X射线衍射图谱、红外光谱、熔点、密度硬度、晶形、光电性能、稳定性和溶解性。重结晶溶剂、晶化速率、储存 温度和其他因素可造成一种晶体形式占主导。
如在此使用的“无定型”或“非晶体”的意思是所述化合物没有展示出在其X射线衍射图谱中的任何实质的峰。通常，非晶体材料不显示明确的熔点。
“溶剂合物”的意思是溶剂的其他形式，含有化学计算或非化学计算量的溶剂。一些 晶体固体状态下的化合物具有限制固定摩尔比溶剂分子的倾向，因此形成溶剂合物。如果 溶剂为水，那么形成的溶剂合物为水合物，当溶剂为醇类时，形成的溶剂合物为醇化物。水合物通过一个或多个分子的水与一种物质结合被形成，在其中，水保持它的H2O分子状态，这种结合能够形成一种或多种水合物。
如在此使用的，短语“药学上可接受的”是指在健全的医疗判断范围内适合用于与人 类和动物的组织接触而没有过多的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与与合理 的利益/风险比率相称的那些化合物、材料、组合物、载体和/或剂型。
为了促进对本发明描述的实施方式理解的目的，优选实施方式和具体实施方式使用的 对照描述的相同。在本发明中使用的专门名词是仅为了描述特定实施方式的目的，并不旨 在限于本发明的范围。如在整个该公开中使用的，单数形式的“一种”和“这种”包括复数的对照，除非上下文清楚的说明。因此，例如，“组合物”的参考包括多个这样的组合 物，以及单个组合物，“治疗剂”的对照是一个或多个治疗和/或制药剂以及与本领域的技 术人员已知的对照等同，等等。在此使用的所有的百分比和比例，除非另有说明，以重量 计。
在此使用的术语“约”的意思是大概、大约、大致或左右。当术语“约”与数值范围结合使用时，其通过延伸边界高于以及低于所设置的数值修改了那个范围。总之，术语“约”在此使用以20％的变化来修改数值范围高于以及低于所述的值。
如在本发明使用的，无论是在过渡短语或权利要求的主体中，术语动词形式的“包括”和现在分词形式的“包括”被理解为具有开放的意义。也就是，术语被理解与短语 “具有至少”或“包括至少”同义。当在工艺的上下文中使用的，术语现在分词形式的“包 括”的意思是所述工艺包括至少所述的步骤，但可包括额外的步骤。当在分子、化合物或组 合物的上下文中使用的，术语现在分词形式的“包括”的意思是所述化合物或组合物包括至 少所述的特征或组分，但还可以包括额外的特征或组分。
在此使用的所有的百分比和比例，除非另有说明，以重量计。本发明的其他特征和益 处根据不同的实施例是显而易见的。提供的实施例说明了在本发明的实践中有用的不同的 组分和方法。所述实施例不限制权利要求的发明。基于本发明，本领域的技术人员可确定 和使用在本发明的实践中有用的其他组分和方法。
实施例
实施例1–膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六烷 氧基)丙基]酯(化合物1)的一般制备
步骤1：(S)-N1-[(2-羟基-3-三苯基甲氧基)丙基]胞核嘧啶(化合物2)的制备
将在二甲基甲酰胺(73.2kg)中的(S)-三苯甲基缩水甘油醚(56.4kg，178.22mol)、胞核嘧啶(18.0kg，162.02mol)和碳酸钾(2.20kg，16.20mol)的悬浮液加热到85-95℃。 9个小时后，将反应混合物冷却到66-70℃并用甲苯(216.0kg)淬灭。将由此得到的浆料 进一步冷却到-10至5℃，并过滤收集固体。该材料用甲苯(38.9kg)洗涤，在15-25℃ 在甲苯(168.8Kg)中重悬，并再次过滤。
为了进一步除去残留的胞核嘧啶以及过程中相关的杂质，进行纯化循环，其中化合物 用丙酮(36.0Kg)洗涤，接着在17-22℃下于水/丙酮(90.0kg/54.0Kg)中研磨固体，并以再次的丙酮洗涤(36.0Kg)结束。该循环重复多次以提高产品的纯度，但应该进行至少 一次。
在丙酮(178.9Kg)中在35-45℃下制备滤饼的悬浮液。3小时后，将反应混合物过滤，用丙酮(36.0Kg)洗涤由此得到的固体以提供化合物2(45.0kg，65％的产量)，并在 ≤40℃下真空干燥12小时。通过HPLC分析测定化合物的纯度(>99.0％)。用NMR分 析化合物。NMR特征与化合物2的结构一致。
步骤2：膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)-2-(三苯基甲氧基)乙基]甲基] 单[3-(十六烷氧基)丙基]酯(化合物3)的制备
将化合物2(45.0kg，105.26mol)、P-[[[(4-甲基苯基)磺酰基]氧]甲基]-单[3-(十六烷氧 基)丙基]酯钠盐(化合物4)(66.1kg，115.79mol)、叔丁醇镁(18.9kg，110.53mol)和二 甲基甲酰胺(135.0kg)的溶液在75-85℃下加热3小时。将反应混合物冷却到25-35℃，加入醋酸异丙酯(387kg)。完成加入后，将反应混合物进一步冷却到15-25℃，用HCl(水 剂，22.8kg浓HCl用290.8kg水稀释)和NaCl(水剂，161.10kg氯化钠溶解在606.3kg 水中)萃取。将由此得到的有机层进行真空蒸馏，浓缩物用甲醇进行两次浓缩以除去残留 的醋酸异丙酯，以获得化合物3，其被用于下一步而不用进一步纯化。
步骤3：膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基) 丙基]酯(化合物1)的合成
将氯化氢气体(11.7kg，320.9mol)填充到反应器中，所述反应器中含有在甲醇(276.3 kg)中浓缩的粗化合物3的冷却(-5-5℃)溶液。将氯化氢气体以使整个反应温度保持在 -5-15℃之间的速率引入到反应容器中的溶剂中。完成加入后，将反应混合物在≤15+/-5℃ 维持两个小时，然后再次过滤。滤出液用水(408.4kg)稀释，用NaOH(水剂，29.4kg的50％NaOH(水剂)溶液用337.6kg的水稀释)调节反应混合物的pH至pH＝2.3-2.7。 通过过滤收集由此获得的固体，用水(137.6kg)洗涤，在丙酮中在35-45℃下重悬1小 时。在最后过滤和丙酮(2x 91.7kg)洗涤之后，将固体在40℃干燥12小时。
最后步骤涉及将粗产品在甲醇(320.8kg)中加热到60-70℃，然后经历下面描述的多 个缓慢冷却和过滤的循环：
将溶液抛光过滤，然后冷却到60+/-2℃。反应在60+/-2℃保持约2小时。然后，将溶液冷却到50+/-2℃约6小时，再冷却到20+/-3℃约2小时。
将冷却的溶液过滤以从溶液中收集固体，然后用甲醇(91.7kg)洗涤。
在60-70℃将固体材料溶解到甲醇(320.8kg)中。溶解后，将反应混合物在60+/-1℃搅拌额外的20分钟，然后加入化合物1的留种(390.0g)。加入留种后，将反应混合 物在60℃搅拌额外的2小时。在接下来的8小时，在搅拌的同时，将反应慢速冷却到50+/-3 ℃。达到50℃后，使反应温度保持额外的2小时。最后的6小时的冷却循环在20+/-3℃ 提供反应混合物，搅拌额外的2小时。将反应混合物过滤以收集固体，收集的固体用甲醇 洗涤，在<40℃下干燥24小时，以获得化合物1(41.1g，72.4％的产率)。产品的纯度由 HPLC测定>99.0％。进行DSC和XRPD。DSC和XRPD的数据与含有形态学形态II的 组合物一致。
实施例2-晶化试验
将约5g的化合物1甲醇中晶化。包括接种量(最高3％)、接种温度(56℃到61℃)、工艺体积(8.5到10)、起始材料(形态IIvs形态H)、多余的水含量(最高93:7甲醇:水) 和搅拌速度的不同工艺参数的效果来评价晶化工艺。从包括所述方法没有接种形态II的每 种晶化尝试中回收形态II。每种晶化都使用慢速冷却的方法并延长悬浮液的周期。
对几个晶化样品收集SEM图像。大多数样品含有团聚体和非常薄的片状颗粒的结合。 被观察到的团聚体可能是由于二次成核和细颗粒的粘结，而不是在现有颗粒上的生长。
在从0.5％接种和3％接种的晶化中产生的颗粒和团聚体中能观察到小的差异(图22 和23)。这些颗粒尺寸的分析显示，如所预期的，由于有能够用于晶体生长的大量的颗粒/表面积，3％接种的样品比0.5％具有较小的d10、d50和d90值。用水合物(形态H)作为 起始材料晶化的样品或含有过量的水的样品在晶化期间看起来产生低程度的聚集。较高的 水含量可能已经改变了溶解性或诱导时间，避免在其他样品中可观察到的二次成核以及团聚。
慢速搅拌制备的样品仍然显示出显著的团聚。实施使用形态II的接种步骤来控制形态。 伴随着冷却曲线的最优的接种步骤(尺寸、量、浆料时间等等)避免了二次成核(产生较 小的颗粒、团聚体)和非期望的形态I的形成。包含延长浆料时间有助于转换产生更多稳定的形态II的任何的形态I。水的含量降低到最少水平避免了有利于水合物形成的条件。
实施例3：化合物1形态II的合成方法例如商业性合成
方案1
Figure BDA0002508295000000601
步骤2A
Figure BDA0002508295000000602
步骤2B
Figure BDA0002508295000000603
步骤1：(S)-4-氨基-1-(2-羟基-3-(三苯甲基氧基)丙基)嘧啶-2(1H)-酮(化合物2)的合成
Figure BDA0002508295000000611
代表性的材料比
Figure BDA0002508295000000612
在氮气氛和环境温度下，向反应器中加入胞核嘧啶、碳酸钾、(S)-三苯甲基缩水甘油 醚和无水的N,N-二甲基甲酰胺。将反应混合物加热并维持在85到95℃，直到反应完全，然 后冷却到60至70℃。将反应混合物用甲苯淬灭，然后冷却到0℃并过滤。湿的固体用甲苯、 丙酮、丙酮/水、丙酮洗涤。固体在接近40℃在丙酮中悬浮，然后过滤，用丙酮洗涤，在接40℃真空干燥，直到产品含有少于0.5％溶剂。基于胞核嘧啶，通常产量约为理论上的65到75％。
用于制备化合物2的方法包括五个步骤的检测以确保与中间物的质量一致：1.通过测 定胞核嘧啶的水平(≤5％，AUC、HPLC)确定反应完全；2.测定分离和纯化的化合物2中的胞核嘧啶(胞核嘧啶的水平≤1％，HPLC、AUC)；3.测定化合物2中残留的溶剂以 确保其≤0.5％，干燥失重；4.确定化合物2中含有≤0.10％二-三苯甲基缩水甘油醚烷基化杂 质(AUC、HPLC)。
步骤2A和2B：膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十 六烷氧基)丙基]酯(化合物1)的制备。
步骤2A
Figure BDA0002508295000000621
步骤2B
Figure BDA0002508295000000622
代表性的材料比：
Figure BDA0002508295000000623
Figure BDA0002508295000000631
在氮气氛和环境温度下，向无水的N,N-二甲基甲酰胺冲洗后(2x)的反应器中加入无 水的N,N-二甲基甲酰胺、化合物2、叔丁醇镁和化合物4。将反应混合物加热并维持在75到 85℃直到完全。然后将反应混合物冷却到25至35℃，用醋酸异丙酯稀释并用盐酸水溶液洗涤。除去水层，用氯化钠溶液洗涤有机层两次。浓缩有机相，通过真空蒸馏使有机溶剂 从醋酸异丙酯转换为甲醇。将由此得到的中间体(化合物3)的甲醇溶液冷却到-5至5℃。 将氯化氢气体充入到反应器中，并且在约15℃搅拌反应直到反应完全。然后将反应混合物 过滤以除去任何可溶解的材料。用水终止反应，用氢氧化钠溶液将调节pH到约2.5。将由此 得到的固体过滤并用水洗涤。在近40℃下在丙酮中研磨所述固体，过滤，用甲醇洗涤，干 燥。将所述固体从甲醇中重结晶，过滤，用甲醇洗涤。将所述固体第二次从甲醇中重结晶， 过滤，用甲醇洗涤。所述固体在甲醇中溶解，用形态学形态II留种接种。由此得到的固体 通过过滤收集，用甲醇洗涤，在约40℃真空干燥，直到剩余的残留溶剂小于或等于0.5％。 化合物1形态学形态II通常的产量：基于化合物2，理论上的65至75％。
步骤3：样品重结晶的步骤
代表性的材料比
Figure BDA0002508295000000632
第1部分 在甲醇中再处理：
将从步骤2B中获得的固体(化合物1)溶解于在1L的圆底烧瓶中的回流MeOH(450mL， 约65℃)中，获得的澄清溶液在约65℃维持1h，然后冷却到约61℃。
在60℃搅拌内容物1h，然后在大于8小时的时间里逐渐冷却到50℃。在50℃保持2小 时后，内容物在至少6小时的时间里(过夜)从50℃进一步冷却到20℃，在20℃搅拌至少2小时并过滤。
将获得的固体用MeOH(2x 25mL)洗涤并在45℃真空干燥。再重复该步骤两次。
第2A部分 从MeOH-庚烷中再处理：
向在1L圆底三口烧瓶里的溶解在回流MeOH中的化合物1(60g)溶液(360mL，约64℃)中慢慢加入正庚烷(360mL)，保持内部温度高于50℃(大于40min)。将内容物在 约55℃保持30min，然后在大于6h的时间里逐渐冷却到40℃。
在40℃搅拌2h后，将内容物在至少6h的时间里从40℃逐渐冷却到20℃，然后在20℃ 搅拌至少2h。
将获得的固体过滤，随后用正庚烷(2x 20mL)和MeOH(2x 20mL)洗涤，在≤45℃ 真空干燥12h，以提供白色固体。将滤出液浓缩干燥，得到类白色固体(2.6g)。
第2B部分 在MeOH(进行三次处理，并仅在最后的重结晶中用形态II接种)中转变 形态：
在1L的圆底烧瓶中，将从第2A部分获得的固体溶解在回流的甲醇(450mL，约65℃)中，将获得的澄清的溶液在约65℃保持1h，然后冷却到接近61℃，用化合物1(1g)接 种。
内容物在60℃下搅拌1h，然后在大于8小时的时间里逐渐冷却到50℃。在50℃保持2 小时后，在大于至少6小时的时间里(过夜)将内容物进一步从50℃冷却到20℃，在20℃搅拌至少2小时，然后过滤。
获得的固体用MeOH(2x 25mL)洗涤并在45℃真空干燥，由此提供亮白色结晶固体(57g)。
近似产量：基于化合物1，85到95％。
用于制备化合物1的方法包括四个步骤的检查，以确保中间体的质量一致：1.通过测 定残留的化合物2的水平(应该为≤10.0％(AUC，HPLC))确定反应完全；2.确定醋酸 异丙酯的含量(残留的异丙基醋酸酯的量应该为≤5.0％(AUC，GC)；3.通过测定残留 的化合物3的量(应该为≤5.0％(AUC，HPLC))确定反应完全；4.确定残留丙酮的量(残 留丙酮的量为LOD≤0.4％(气相色谱)；5.通过残留溶剂的检查(LOD≤0.4％)确定终 产品是干燥的。
实施例4：化合物1二次纯化步骤
使用的材料
Figure BDA0002508295000000651
步骤：
在氮气氛围下，向反应器中加入CMX001和甲醇。将混合物加热回流(～65℃)并搅拌，直到形成澄清的溶液。将正庚烷在约40min的时间里缓慢加入到反应器中，同时保持 温度高于50℃。将温度保持在约55℃ 30min，然后在6小时的一段时间里冷却至至约 40℃。将混合物在约40℃搅拌2小时，然后在6小时的时间里冷却到20℃。将混合物在20℃ 搅拌2小时。然后，将混合物过滤，用正庚烷和甲醇洗涤，并在≤45℃真空干燥。
将由此得到的固体和甲醇在氮气氛围下装到反应器中。将混合物加热回流并搅拌至少 一个小时。将温度调节到60±2℃，将CMX001留种(形态学形态II)加入到反应器中。将混合物在60±2℃搅拌至少一个小时，然后在至少8个小时的时间里冷却到50±2℃。将混合物在50±2℃搅拌至少两个小时，然后在至少6个小时的时间里冷却到20±3℃。然后将混合物在20±3℃搅拌两个小时，过滤、用甲醇洗涤，在≤45℃干燥直到干燥(当残留的 正庚烷水平为≤5000ppm时)。
将上述重结晶步骤反复地重复(例如，一次，两次，三次或多次)，直到材料达到期望的纯度。然后研磨并包装上述材料。
由此产生的5g样品被标记为样品3，并进行DSC和XRPD分析。结果显示在图20-26中。
产量约为36.0kg至39.2kg(64.1至69.8摩尔)的化合物1(90到98％的理论值)。
用于制备纯的化合物的方法包括两个步骤的检查，以确保中间体的质量：1.确定残留 的正庚烷≤5000ppm；2.确定终产品是干燥的(LOD≤0.4％)。残留的甲醇(≤300ppm)、丙酮(≤200ppm)、醋酸异丙酯(≤200ppm)、DMF(≤200ppm)、甲苯(≤200ppm)、 庚烷(≤5000ppm)和除水以外的总的挥发物(≤6200)通过GC-HS进行分析。
实施例5-化合物1形态II的特征
常规
通过实施例2描述的方法来分离的化合物1形态II的特征以XRPD表征。XRPD图谱与晶体材料一致。如果晶体主要由单相构成，那么晶体材料被指示确定。晶型的1H NMR 谱图与化合物1的化学结构一致。进行DSC热谱，其显示在～43℃(最大峰值)有少量吸 热，接着在～90和～95℃(最大峰值)有重叠的大量吸热。在～196℃观察到最后的吸热 的启动。在～189℃流动之前，热台显微镜显示没有显著的观察，除了在～98℃观察到一 些潜在的升华。在较慢的冷却曲线下、但没有任何的搅拌的情况下，甲醇晶化也可以形成 形态II。在没有搅拌的情况下形成的形态II的DSC热谱在～41℃有少量的吸热，在～90 和～95℃(最大峰值)重叠吸热，在～200℃启动最后的吸热。
晶化
用带有Julabo F26冷却器/循环器的梅特勒托多利EasyMaxTM102进行晶化试验。在带 有浊度探头、温度探头晶化和置顶搅拌的100mL的玻璃反应器中进行晶化。在EasyMaxTM上进行的试验在非GMP条件下进行。
使用EasyMax的晶化试验以～5克的规模进行。在每个试验中，起始材料被加热到～65℃ 以确保完全溶解。在每个试验中会改变许多工艺参数，但是缓慢的冷却(>9小时)曲线 被用于每个晶化中。在使用接种的试验中，使用手动研磨的形态II种子。通过真空过滤来 分离固体，并在～40℃和～48℃的真空电炉中干燥。.
差示扫描量热法(DSC)
用TA仪器Q2000差示扫描量热计进行DSC。用美国国家标准与技术研究院(NIST)可溯源铟金属进行温度校准。样品被置于铝的DSC盘中，用盖子盖住，然后 精确记录重量。将被配置为样品盘的称重后的铝盘置于腔室的对照 侧。热谱的方法代码为起始和结束温度以及加热速率的缩写，例如，-30-250-10的意思是“从 -30℃至250℃，以10℃/min的加热速率”。例如，图4。
热台显微镜(HSM)
用安装在Leica DM LP显微镜上的Linkam热台(FTIR 600)进行热台显微术，所述Leica DM LP显微镜配有SPOT InsightTM彩色数字相机。用USP熔点标准进行温度校准。将样品置 于玻璃盖板(cover glass)上，并将第二块玻璃盖板置于样品的上面。当加热热台时，样 品可以用带有交叉偏振光镜和一阶红光补偿器的10或20倍目镜观察到。用SPOT 软件(v.4.5.9)捕获图像。
扫描电镜(SEM)
用配有Everhart Thornley(ET)探测器的FEI Quanta 200扫描电子显微镜进行SEM。 分别用xTm(v.2.01)和XT Docu(v.3.2)软件收集和分析图像。用NIST可溯源标准改变放大率。通过放置少量于支持在铝架上的碳胶粘剂标签上来制备每个样品用于分析。然后用Cressington 108自动喷涂刻蚀仪在近20mA和0.13mbar(Ar)下将每个样品用Au/Pd喷涂75秒。在高度真空下用5.0kV的电子束电压观察每个样品。每个图像上报告的放大率根据初始数据采集来计算。在每个图像较低的部分报告的比例尺基于调整是准确的，并当进行尺寸测定时可以使用。
X射线粉末衍射(XRPD)
显示于图1、2、10、12-14和16-17的XRPD图谱用Pattern Match 2.3.6.XRPD图谱产生，所述Pattern Match 2.3.6.XRPD图谱用反射或透射几何的PANalytical X'Pert PROMPD 衍射计来收集。对于反射几何，衍射计利用对称Bragg-Brentano几何配置，Cu Kα射线的入射光束用长的、精细的聚焦光源和镍过滤器产生。将样品的样本制备为居中于硅零背景的基板上的薄的圆涂层。防散射狭缝(SS)用来减少由空气产生的背景。在透射几何中，衍射计使用Cu射线入射光，所述Cu射线入射光用Optix长的精细聚光源产生。椭圆梯度多图层反射镜通过探测器上的样本用来聚焦Cu KαX射线。将样品样本夹在3-μm厚的膜中并在透射几何中分析。光束终止器、短的防散射扩展器和放散射刀刃用来最小化空气产生的背景。在这项研究中，最经常使用透射配制。无论是配置，还是分析之前，分 析硅样本(NISTSRM 640d)来核实Si 111的峰位置。入射和衍射光束的索勒狭缝被用 来最小化来自轴向发散的加宽。衍射图谱用置于距样品240mm处的扫描位置灵敏 探测器(X'Celerator)和DataCollector software v.2.2b来收集。
用Anton Paar TTK 450热台原位收集XRPD图谱作为温度函数。用直接置于样品架下的 电阻加热器加热样品，用置于样本架中的铂-100电阻传感器监测温度。加热器由与数据收 集器连接的Anton Paar TCU 100供电和控制。
显示于图20、21和25的XRPD图谱由PANalytical X'Pert PRO MPD衍射计用入射光束收 集，所述Cu射线用Optix长的、精细的聚焦光源产生。椭圆梯度多图层反射镜通过探测器 上的样本用来聚焦Cu KαX射线分析之前，分析硅样本以核实观察到的Si 111峰的位置与 NIST证明的位置一致。样品的样本被夹在3-μm厚的膜间，并在透射几何中分析。光束终止 器、短的防散射扩展器和放散射刀刃用来最小化空气产生的背景。入射和衍射光束的索勒狭缝被用来最小化来自轴向发散的加宽。衍射图谱用置于距样品240mm处的扫 描位置灵敏探测器(X'Celerator)和数据收集软件v.2.2b来收集。用PatternMatch v2.3.6 创建图25。
计算技术
XRPD指示
XRPD图谱用-Pert High Score Plus(v.2.2.1)来指示。指示和结构的改进为计算研究， 所述研究在“SSCI非cGMP活动程序”下进行。允许的峰位置和观测到的峰的一致性表明一 致的晶胞测定。成功的图谱指示表明样品主要包括单结晶相。与指定的消光符号一致的空 间群、晶胞参数和导出量在提供每个形态的指示方案的图中列表。为了确定不确定的指示 方案，测定了晶体晶胞内的分子堆积基序。
XRPD峰鉴定
在大多数情况下，选择在最高约30°2θ范围内的峰。依赖于用于收集数据和/或固有的 峰分辨率的仪器，舍入算法被用于使每个峰四舍五入到最近的0.1°或0.01°2θ。在图和表 中，沿x轴(°2θ)的峰的位置用专有软件测定，并四舍五入到小数点后一或二个显著的数 字。对于晶格间距的列表，用来计算晶格间距的波长为
Figure BDA0002508295000000681
(Cu-Kα1和Cu-Kα2波长的加权平均值)。
在每个晶格间距下，与晶格间距评价相关的多变性从USP推荐标准计算，并在单独的 数据表中提供。每个USP的指导方针、可变的水合物和溶剂合物可显示出大于0.2°2θ的峰 的差异，因此，0.2°2θ的峰的差异不能用于这些材料。对于仅有一个XRPD图谱而没有手段评价样品是否提供了良好的粉体的平均近似值的样品，峰的表中含有仅被鉴定为“主峰”数据。这些峰是整个观测到的峰列表的子集。主峰选自由识别为优选非重叠、低角峰的具有高强度的观察到的峰。
粒度尺寸分析(PSA)
用配有Hydro2000μP分散装置的Malvern Instruments Mastersizer 2000获得颗粒尺寸数 据。用Mastersizer 2000软件(v.5.60)用基于测量的体积收集和分析数据。用NIST可溯源 的玻璃珠使仪器合格。
在分离的晶体形态II的颗粒上进行尺寸分析和扫描电镜(SEM)。SEM图像显示了化合物1形态II的大量团聚体并伴随有较小的片状颗粒(图22-25)。大多数样品在～6-10 μm处具有小颗粒模式，在～60-160μm处具有大模式的双峰分布。颗粒的大小不同取决于 样品的类型。三个样品通过SEM和颗粒尺寸分析表征。这些包括：起始材料、甲醇重结 晶材料和来自～45kg重结晶批处理的共研磨材料。
起始材料包括由较小的片状体组成的团聚体(～100μm)。起始材料的颗粒尺寸分布 为双峰。甲醇重结晶样品含有较大的初级颗粒、一些没有胶结的团聚体和单个颗粒尺寸模 式。共研磨的样品与甲醇重结晶的样品相似，但显示出稍微较小的颗粒分布，表明在研磨 步骤仅发生了较小的颗粒摩擦。SEM图像也显示出基于颗粒形态的小的摩擦。
实施例6-药物产品样品的特征
完成对化合物1片剂的两个样品的XRPD和DSC分析。在分析之前，将片剂用研钵 和杵轻轻地研磨。两个片剂样品显示出非常相似的XRPD图谱(见图16和17)，表明具 有漫散射的晶体材料可能来自一种或多种赋形剂。形态I、形态II和形态H的比较显示出 与两个片剂样品中的形态II一致的几个峰(图14)。两个片剂样品的DSC热谱(图18 和19)显示出在～90℃和～95℃(最大峰值)处重叠少量吸热，在～165℃处启动大量吸 热。两个少量吸热与观察到形态II的吸热一致，但形态II也显示出在约196℃处大量吸 热，该大量吸热在两个样品中都没有观察到。将图18&19与图4比较。
实施例7-化合物1形态II的稳定形态筛选
为了有利于固体形态筛选实验的设计，使用形态II在室温和高温下以各种溶剂系统完 成溶解度评价。通常，在每个测试的溶剂中会观察到差的溶解度。在三氟代乙醇中观察到 大于5mg/mL的溶解度。在各种溶剂系统中形成浆料来确定稳定的形式以及化合物1形成 稳定的溶剂合物的潜力。用形态II来制备浆料，并且每种都用形态I接种。每种浆料都被搅拌两周，虽然少数在低于室温和高温(～45℃)下进行，但大部分浆料在室温下进行。 在每个无水溶剂系统中回收形态II。一些样品在形态II中显示出少量的形态I，可能是由 于因为有限的溶解度而具有差的转换动力学。发现在水溶剂体系中的每种浆料已转换成水合物形态(形态H)。没有观察到新的形式的证据，包括潜在的甲醇溶剂合物。在室温和 ～45℃下的甲醇中也进行了起始于形态I和形态II的混合物的转换研究。研究发现从这些 实验中回收的固体与形态II一致，表明形态II在室温至～45℃之间是最稳定的无水形态。
实施例8-甲醇溶解度和介稳区
溶解度的测定：将测试的溶剂或溶剂混合物等份加入到称重后的化合物1的样品中。 当需要时，对样品进行超声处理以促进溶解。通过视觉检查来确定在每个溶剂中的测试材 料的完全溶解。基于需要提供完全溶解的溶剂的总体积评价溶解性。由于溶剂的增量加入 和材料的溶解动力学，真实的溶解度可能大于计算的值。在实验期间，在加入第一等份之 后，如果溶解没有发生，那么溶解度被表达为“小于”，或如果溶解发生了，其被表达为“大 于”。见表2以及在本发明的“具体实施方式”中的“溶解度”小节的讨论。
等价物
在没有脱离本发明精神或基本特征的情况下，本发明可以其他具体的形式体现。因此 前述实施方式被认为是在各个方面的说明，而不是对在此描述的发明的限制。因此本发明 的范围由附加的权利要求表示，而不是由前面的描述表示，并且来自权利要求等价的意思 和范围内的改变也被意指被纳入其中。

Claims (22)

1.膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯(化合物1)的形态学形态II。
2.根据权利要求1所述的形态学形态II，其特征在于，具有包括在约2.81和约5.63度2θ的主峰的X射线衍射图谱。
3.根据权利要求1所述的形态学形态II，其特征在于，具有在选自2.81、5.63、11.30、12.05、13.22、13.45、13.81、14.32、14.92、15.64、16.25、16.41、17.00、17.67、17.87、18.15、18.35、18.50、19.00、19.57、19.85、20.22、20.96、21.06、21.89、22.76、23.70、23.95、24.32、24.70、25.54、26.12、26.52、26.81、27.07、27.48、27.71、29.11、29.36和29.61度2θ(±0.2)处表达的两个或多个峰的X射线衍射图谱。
4.根据权利要求1所述的形态学形态II，其特征在于，具有与图1、图7、图13、图14、图20或图21中展示的实质上相似的X射线衍射图谱。
5.根据权利要求1所述的形态学形态II，其特征在于，具有与图4、图15或图16中展示的实质上相似的DSC热谱。
6.根据权利要求1所述的形态学形态II，其特征在于，具有与图4中展示的实质上相似的DSC热谱。
7.根据权利要求1所述的形态学形态II，其通过包括从甲醇中重结晶制备膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯(化合物1)的纯化方法制备而成。
8.一种制备权利要求1所述的膦酸[[(S)-2-(4-氨基-2-氧代-1(2H)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧基)丙基]酯的形态II的方法，包括将(S)-N1-[(2-羟基-3-三苯基甲氧基)丙基]胞核嘧啶(化合物2)、P-[[[4-甲基苯基)磺酰基]氧]甲基]-单[3-(十六烷氧基)丙基]酯钠盐(化合物4)与叔丁醇镁以及合适的有机溶剂混合以及从甲醇中结晶的步骤。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述形态II具有大于或等于约91％wt/wt的纯度。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述形态学形态II具有包括在约2.81和约5.63度2θ的峰的X射线衍射图谱。
11.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述形态学形态II具有在选自2.81、5.63、11.30、12.05、13.22、13.45、13.81、14.32、14.92、15.64、16.25、16.41、17.00、17.67、17.87、18.15、18.35、18.50、19.00、19.57、19.85、20.22、20.96、21.06、21.89、22.76、23.70、23.95、24.32、24.70、25.54、26.12、26.52、26.81、27.07、27.48、27.71、29.11、29.36和29.61度2θ(±0.2)处表达的两个或多个峰的X射线衍射图谱。
12.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述形态学形态II具有与图1、图7、图13、图14、图20、图21或图25中展示的实质上相似的X射线衍射图谱。
13.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述形态学形态II具有与图4、图15或图16中展示的实质上相似的DSC热谱。
14.根据权利要求8所述的方法，进一步包括接种约0.5％wt/wt、约3％wt/wt或约7％wt/wt的所述膦酸的种子。
15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述种子包括所述膦酸的形态II或形态I。
16.根据权利要求1所述的形态学形态II，其特征在于，具有在约41-43℃显示出吸热、在约90和约95℃显示出重叠吸热以及在约196℃显示出吸热的DSC热谱。
17.一种包括根据权利要求1所述的形态学形态II的组合物，其特征在于，其含有小于约1.5％wt/wt的形态H、形态I和/或无定型形式。
18.一种包括化合物1的形态学形态II的组合物，其特征在于，其含有小于约2％wt/wt的任何下面的化合物：
Figure FDA0002508294990000021
Figure FDA0002508294990000022
及其组合。
19.一种包括根据权利要求1所述的形态学形态II的组合物，其特征在于，其含有小于约2％wt/wt的总杂质。
20.一种化合物1的组合物，包括形态II、形态I和形态H。
21.根据权利要求23所述的组合物，包括大于90％wt/wt的形态II。
22.根据权利要求23所述的组合物，包括小于10％wt/wt的形态I和形态H。
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