CN111770753A - 增强和/或稳定患有法布里病患者的心脏功能的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了用于在患者中治疗法布里病的方法。某些方法涉及治疗已经历ERT或ERT初治的法布里患者。某些方法包括向所述患者施用约100mg至约150mg游离碱当量的米加司他，用于增强和/或稳定心脏功能。

Description

增强和/或稳定患有法布里病患者的心脏功能的方法
相关申请的交叉引用
本申请要求于2017年8月28日提交的美国临时申请系列号62/550,984的优先权，将所述申请通过引用以其全文并入本文。
技术领域
本发明的原理和实施方案总体上涉及用于治疗溶酶体贮积症的药理学分子伴侣的用途，特别是用于治疗法布里病(Fabry disease)的米加司他(migalastat)的用途。
背景技术
法布里病是一种进行性的X-连锁的先天性鞘糖脂代谢缺陷，是由作为α-Gal A基因(GLA)突变的结果的在溶酶体酶α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)方面的缺陷造成的。尽管是X-连锁障碍，女性可能表现出不同程度的临床表现。法布里病是一种罕见的疾病，发病率估计为男性中的40,000分之一至一般人群中的117,000分之一。此外，存在着可能在诊断标准以下的法布里病的迟发表型的变体，因为它们没有呈现出典型的体征和症状。这种情况以及法布里病的新生儿筛查，表明法布里病的实际发病率可能高于目前的估计。
如果不治疗，法布里患者的预期寿命减少，通常在四十岁或五十岁左右由于影响肾脏、心脏和/或中枢神经系统的血管疾病而死亡。酶缺陷导致底物，神经酰胺三己糖苷(globotriaosylceramide，GL-3)，在全身血管内皮和内脏组织中的细胞内积累。由于鞘糖脂沉积，肾功能逐步衰退和氮质血症的发展通常在生命的三十岁至五十岁时发生，但是也可能早在二十岁就发生。肾损伤在半合子(男性)和杂合子(女性)患者中都有发现。
法布里病引起的心脏病发生在大多数男性和许多女性中。早期的心脏所见包括左心室增大、心瓣膜受累以及传导异常。二尖瓣关闭不全是典型存在于儿童或青少年中的最常见的瓣膜损伤。脑血管表现主要来自多病灶小血管受累并且可能包括血栓、短暂性脑缺血发作、基底动脉缺血和动脉瘤、癫痫、偏瘫、偏身麻木、失语症、迷路病症或脑出血。脑血管表现的平均发作年龄为33.8岁。可能随着年龄增长而表现出人格改变和精神病行为。
用于治疗法布里病的一种批准的疗法是酶替代疗法(ERT)，其典型地涉及静脉内输注纯化形式的对应野生型蛋白质。两种α-Gal A产品目前可用于治疗法布里病：阿加糖酶α(
Figure BDA0002395051720000021
Shire Human Genetic Therapies)和阿加糖酶β(
Figure BDA0002395051720000022
SanofiGenzyme Corporation)。虽然ERT在许多情况下是有效的，但是这种治疗还是有限制性。尚未证实ERT能减少中风的风险，心肌反应缓慢，并且GL-3从肾脏的一些细胞类型中的消除是受限的。一些患者还对ERT发展免疫反应。
因此，仍然需要用于治疗法布里病的疗法，尤其是用于增强心脏功能。
发明内容
本发明的不同方面涉及使用米加司他治疗ERT初治
Figure BDA0002395051720000023
的和已经历ERT的患者中的法布里病。此类治疗可以包括增强和/或稳定心脏功能，诸如增加和/或稳定室壁中层缩短率(MWFS)。
本发明的一个方面涉及增强患有法布里病的患者的心脏功能的方法，所述方法包括每隔一天向所述患者施用包含有效量的米加司他或其盐的制剂用于增强所述患者的心脏功能，其中所述有效量为约100mg至约150mg的游离碱当量(FBE)。
在一个或多个实施方案中，增强心脏功能包括增强左心室收缩功能。
在一个或多个实施方案中，在开始施用米加司他或其盐之前，所述患者具有受损的MWFS。
在一个或多个实施方案中，在开始施用米加司他或其盐之前，所述患者患有左心室肥大(LVH)。
在一个或多个实施方案中，米加司他或其盐增强α-Gal A活性。
在一个或多个实施方案中，每隔一天向所述患者施用约123mg FBE的米加司他或其盐。
在一个或多个实施方案中，每隔一天向所述患者施用约123mg的米加司他游离碱。
在一个或多个实施方案中，每隔一天向所述患者施用约150mg的米加司他盐酸盐。
在一个或多个实施方案中，所述制剂包括口服剂型。在一个或多个实施方案中，所述口服剂型包括片剂、胶囊或溶液。
在一个或多个实施方案中，将米加司他或其盐施用至少12个月。
在一个或多个实施方案中，将米加司他或其盐施用至少24个月。
在一个或多个实施方案中，所述患者是ERT初治患者。
在一个或多个实施方案中，在施用米加司他或其盐24个月后，米加司他或其盐的施用在具有受损的MWFS的ERT初治的患者组中提供了至少约1％的MWFS的平均增加。
在一个或多个实施方案中，所述患者是已经历ERT的患者。
本发明的另一方面涉及增加患有法布里病的患者中的MWFS的方法，所述方法包括每隔一天向所述患者施用包含有效量的米加司他或其盐的制剂用于增加所述患者的MWFS，其中所述有效量为约100mg至约150mg的FBE。
在一个或多个实施方案中，在开始施用米加司他或其盐之前，所述患者具有受损的MWFS。
在一个或多个实施方案中，在开始施用米加司他或其盐之前，所述患者患有LVH。
在一个或多个实施方案中，米加司他或其盐增强α-Gal A活性。
在一个或多个实施方案中，每隔一天向所述患者施用约123mg FBE的米加司他或其盐。
在一个或多个实施方案中，每隔一天向所述患者施用约123mg的米加司他游离碱。
在一个或多个实施方案中，每隔一天向所述患者施用约150mg的米加司他盐酸盐。
在一个或多个实施方案中，所述制剂包括口服剂型。在一个或多个实施方案中，所述口服剂型包括片剂、胶囊或溶液。
在一个或多个实施方案中，将米加司他或其盐施用至少12个月。
在一个或多个实施方案中，将米加司他或其盐施用至少24个月。
在一个或多个实施方案中，所述患者是ERT初治患者。
在一个或多个实施方案中，在施用米加司他或其盐24个月后，米加司他或其盐的施用在具有受损的MWFS的ERT初治的患者组中提供了至少约1％的MWFS的平均增加。
在一个或多个实施方案中，所述患者是已经历ERT的患者。
本发明的另一方面涉及正常化具有法布里病和受损的MWFS的患者中的MWFS的方法，所述方法包括每隔一天向所述患者施用包含有效量的米加司他或其盐的制剂用于正常化所述患者的MWFS，其中所述有效量为约100mg至约150mg的FBE。
在一个或多个实施方案中，米加司他或其盐增强α-Gal A活性。
在一个或多个实施方案中，每隔一天向所述患者施用约123mg FBE的米加司他或其盐。
在一个或多个实施方案中，每隔一天向所述患者施用约123mg的米加司他游离碱。
在一个或多个实施方案中，每隔一天向所述患者施用约150mg的米加司他盐酸盐。
在一个或多个实施方案中，所述制剂包括口服剂型。在一个或多个实施方案中，所述口服剂型包括片剂、胶囊或溶液。
在一个或多个实施方案中，将米加司他或其盐施用至少12个月。
在一个或多个实施方案中，将米加司他或其盐施用至少24个月。
在一个或多个实施方案中，所述患者是ERT初治患者。
在一个或多个实施方案中，在施用米加司他或其盐24个月后，米加司他或其盐的施用在具有受损的MWFS的ERT初治的患者组中提供了至少约1％的MWFS的平均增加。
本发明的另一方面涉及稳定患有法布里病的患者中的MWFS的方法，所述方法包括每隔一天向所述患者施用包含有效量的米加司他或其盐的制剂用于稳定所述患者的MWFS，其中所述有效量为约100mg至约150mg的FBE。
在一个或多个实施方案中，在开始施用米加司他或其盐之前，所述患者具有受损的MWFS。
在一个或多个实施方案中，在开始施用米加司他或其盐之前，所述患者患有LVH。
在一个或多个实施方案中，米加司他或其盐增强α-Gal A活性。
在一个或多个实施方案中，每隔一天向所述患者施用约123mg FBE的米加司他或其盐。
在一个或多个实施方案中，每隔一天向所述患者施用约123mg的米加司他游离碱。
在一个或多个实施方案中，每隔一天向所述患者施用约150mg的米加司他盐酸盐。
在一个或多个实施方案中，所述制剂包括口服剂型。在一个或多个实施方案中，所述口服剂型包括片剂、胶囊或溶液。
在一个或多个实施方案中，将米加司他或其盐施用至少12个月。
在一个或多个实施方案中，将米加司他或其盐施用至少30个月。
在一个或多个实施方案中，所述患者是已经历ERT的患者。
在一个或多个实施方案中，在施用米加司他或其盐30个月后，米加司他或其盐的施用在具有受损的MWFS的已经历ERT的患者组中提供了大于约-0.5％的MWFS的平均变化。
附图说明
从以下书面描述和附图中，本发明的其他特征将变得明显，其中：
图1A-1E示出人野生型GLA基因的完整DNA序列(SEQ ID NO:1)；
图2示出野生型α-Gal A蛋白(SEQ ID NO:2)；以及
图3示出编码野生型α-Gal A蛋白的核酸序列(SEQ ID NO:3)。
具体实施方式
在描述本发明若干示例性实施方案之前，应当理解的是，本发明不限于以下描述中列出的构建或方法步骤的细节。本发明能够有其他的实施方案，并且能够以不同的方式被实施或进行。
本发明的不同方面涉及用于施用用于治疗法布里病的药理学分子伴侣，例如米加司他的给药方案。在一个或多个实施方案中，米加司他的给药方案增强患者的一个或多个心脏参数。
定义
在本说明书中使用的术语在本发明的上下文中以及在使用每个术语的特定上下文中通常具有其在本领域中的普通含义。某些术语在下文或说明书中的其他地方讨论，以向从业者提供描述本发明的组合物和方法以及如何制作和使用它们的另外指导。
术语“法布里病”是指由于缺陷型溶酶体α-Gal A活性而导致的X连锁的先天性鞘糖脂分解代谢缺陷。这种缺陷导致底物神经酰胺三己糖苷(“GL-3”，也称为Gb3或神经酰胺三己糖苷(ceramide trihexoside))和相关的鞘糖脂在心脏、肾脏、皮肤和其他组织的血管内皮溶酶体中的积累。酶的另一种底物是血浆鞘氨醇三聚己糖苷(globotriaosylsphingosine)(“血浆溶血Gb3”)。
术语“非典型法布里病”是指具有主要为α-Gal A缺陷的心脏表现的患者，即心肌细胞中的进行性GL-3积累，导致心脏、特别是左心室的显著增大。
“携带者”是一名女性，其具有一个有缺陷型α-Gal A基因的X染色体和一个有正常基因的X染色体，并且其中一种或多种细胞类型中存在正常等位基因的X染色体失活。携带者通常被诊断具有法布里病。
“患者”是指被诊断患有或疑似患有特定疾病的受试者。患者可以是人或动物。
“法布里患者”是指已经被诊断患有或怀疑患有法布里病并且具有如以下进一步定义的突变的α-Gal A的个体。法布里病的特征标记物可以发生在具有相同患病率的男性半合子和女性携带者中，但女性受到的影响通常不太严重。
人α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)是指由人GLA基因编码的酶。包括内含子和外显子的α-Gal A的完整DNA序列可以在GenBank登录号X14448.1中获得，并示于图1A-1E中(SEQ IDNO:1)。人α-Gal A酶由429个氨基酸组成，并可以在GenBank登录号X14448.1和U78027.1中获得，并示于图2中(SEQ ID NO:2)。仅包括SEQ ID NO:1的编码区(即外显子)的核酸序列示于图3中(SEQ ID NO:3)。
术语“突变体蛋白”包括在编码所述蛋白质的基因中具有突变的蛋白质，所述突变导致所述蛋白质在通常存在于内质网(ER)中的条件下不能达到稳定构象。不能达到稳定构象导致大量的酶被降解，而不是被转运到溶酶体。这样一种突变有时称为“构象突变体”。这样的突变包括但不限于错义突变以及框内小缺失和插入。
如本文在一个实施方案中所使用的，术语“突变型α-Gal A”包括在编码α-Gal A的基因中具有突变的α-Gal A，所述突变导致所述酶在通常存在于ER中的条件下不能达到稳定构象。不能达到稳定构象导致大量的酶被降解，而不是被转运到溶酶体。
如本文所用，术语“药理学分子伴侣”(“PC”)是指特异性结合蛋白质并具有一种或多种以下效应的任何分子，包括小分子、蛋白质、肽、核酸、碳水化合物等：(i)增强所述蛋白质的稳定分子构象的形成；(ii)诱导所述蛋白质从ER运输到另一个细胞位置(优选的是天然细胞位置)，即，防止蛋白质的ER相关的降解；(iii)防止错误折叠的蛋白质的聚集；和/或(iv)恢复或增强所述蛋白质的至少部分野生型功能和/或活性。一种化合物特异性结合到例如α-Gal A，意味着它结合到所述酶并对所述酶而不是一组相关或不相关的酶施加分子伴侣效应。更具体地，此术语不是指内源分子伴侣诸如BiP，或指对不同蛋白质表现非特异性分子伴侣活性的非特异性试剂诸如甘油、DMSO或氘化水，即化学分子伴侣。在本发明的一个或多个实施方案中，PC可以是可逆的竞争性抑制剂。在一个实施方案中，PC是米加司他或其盐。在另一个实施方案中，PC是米加司他游离碱(例如123mg的米加司他游离碱)。在又另一个实施方案中，PC是米加司他的盐(例如150mg的米加司他盐酸盐)。
酶的“竞争性抑制剂”可以指在结构上类似于酶底物的化学结构和分子几何形状以在与底物大致相同的位置结合酶的化合物。因此，抑制剂与底物分子竞争相同的活性位点，从而增加Km。如果足够的底物分子可用于置换抑制剂，竞争性抑制通常是可逆的，即竞争性抑制剂可以可逆地结合。因此，酶抑制的量取决于抑制剂浓度、底物浓度、以及抑制剂和底物对活性位点的相对亲和力。
如本文所用，术语“特异性结合”是指药理学分子伴侣与蛋白质诸如α-Gal A的相互作用，特别是与所述蛋白质的氨基酸残基的相互作用，所述氨基酸残基直接参与接触药理学分子伴侣。药理学分子伴侣特异性结合靶蛋白例如α-Gal A，以对所述蛋白质而不是一组相关或不相关蛋白施加分子伴侣效应。与任何给定的药理学分子伴侣相互作用的蛋白质的氨基酸残基可以在或可以不在蛋白质的“活性位点”内。可以通过常规结合测定或通过结构研究(例如共结晶、NMR等)评价特异性结合。α-Gal A的活性位点是底物结合位点。
“缺陷型α-Gal A活性”是指来自患者的细胞中的α-Gal A活性，与(使用相同的方法)没有患有或没有疑似患有法布里或任何其他疾病(尤其是血液病)的正常个体中的活性相比，其低于正常范围。
如本文所用，术语“增强α-Gal A活性”或“增加α-Gal A活性”是指相对于在不与对α-Gal A具有特异性的药理学分子伴侣接触的细胞(优选的是相同细胞类型或相同细胞，例如，在更早的时间)中采用稳定构象的α-Gal A的量，在与对α-Gal A具有特异性的药理学分子伴侣接触的细胞中增加采用稳定构象的α-Gal A的量。此术语还指相对于不与对蛋白α-Gal A具有特异性的药理学分子伴侣接触的α-Gal A的运输，在与对α-Gal A具有特异性的药理学分子伴侣接触的细胞中增加α-Gal A向溶酶体的运输。这些术语是指野生型和突变型α-Gal A两者。在一个实施方案中，细胞中α-Gal A的量的增加是通过测量来自已经用PC处理的细胞的裂解液中人工底物的水解来测量。水解的增加表明α-Gal A活性增加。
术语“α-Gal A活性”是指细胞中野生型α-Gal A的正常生理功能。例如，α-Gal A活性包括GL-3的水解。
“应答者”是诊断患有或疑似患有溶酶体贮积症(LSD)例如法布里病的个体，应答于接触PC，其细胞分别展现出足够增加的α-Gal A活性、和/或症状的减轻或替代标记物的增强。法布里替代标记物的增强的非限制性实例是溶血GB3和美国专利申请公布号U.S.2010/0113517中公开的那些，将所述申请通过引用以其全文特此并入。
U.S.2010/0113517中公开的法布里病替代标记物改善的非限制性实例包括细胞(例如成纤维细胞)和组织中的α-Gal A水平或活性的增加；GL-3积累减少；高半胱氨酸和血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)的血浆浓度降低；心肌细胞和瓣膜纤维细胞内GL-3积累减少；血浆溶血Gb3的减少；心脏肥大(尤其是左心室)减少，瓣膜功能不全和心律失常减轻；蛋白尿减轻；脂质(诸如CTH、乳糖神经酰胺、神经酰胺)的尿浓度降低，以及葡糖神经酰胺和鞘磷脂的尿浓度增加；在肾小球上皮细胞中不存在片层状包涵体(斑马体)；肾功能改善；少汗症缓和；血管角化瘤不存；以及听力异常(诸如高频感觉神经性听力损失、进行性听力损失、突发性耳聋或耳鸣)改善。神经症状的改善包括短暂性缺血发作(TIA)或中风的预防；以及自身表现为肢端感觉异常(四肢灼烧或刺痛)的神经性疼痛的减轻。可以针对法布里病进行评估的另一个类型的临床标记物是有害的心血管表现形式的流行。
“室壁中层缩短率”或“MWFS”是收缩功能的量度，其识别具有靶器官损伤、收缩功能储备受损和死亡率增加的证据的高血压患者。
术语“心脏功能”是指患者心脏的表现。例如，一项心脏功能评估是左心室收缩功能，这是指左心脏的排空特征。左心室收缩功能可以通过几种方式评估，包括但不限于左心室射血分数(LVEF)、内膜缩短率(EFS)和MWFS。
如本文所用，短语“稳定心脏功能”和类似术语是指减少或遏制心脏功能的下降和/或恢复心脏功能。随着预期未经治疗的法布里患者心脏功能随时间有显著的下降，心脏功能退化速率的增强和/或心脏功能的增强证明了如本文所述的米加司他疗法的益处。在各种实施方案中，稳定心脏功能包括稳定MWFS。“稳定MWFS”同样是指减少或遏制MWFS的下降。
术语“增强心脏功能”是指用于评估心脏功能的至少一个参数的有益变化。如果患者的参数处于正常范围的下端或低于所述参数的正常范围，则所述参数的有益变化是所述参数的增加。例如，具有低MWFS的患者的MWFS增加是所述参数的增强。类似地，如果患者的参数处于正常范围的上端或高于所述参数的正常范围，则所述参数的有益变化是所述参数的减少。在一个方面，“增强心脏功能”包括以下各项中的一种或多种：(i)改善左心室功能，(ii)改善缩短率，(iii)改善射血分数，(iv)减少舒张末期容积，和(v)使心脏几何形状正常化。
如本文所用，术语“受损的MWFS”是指MWFS低于正常范围的患者。女性MWFS的正常范围为至少15％并且男性MWFS的正常范围为至少14％。因此，女性患者受损的MWFS为<15％，并且男性患者受损的MWFS为<14％。
如本文所用，术语“正常化MWFS”是指将患者的MWFS从受损的MWFS增加到正常范围内。因此，正常化女性患者的MWFS是将MWFS从<15％增加到至少15％，并且正常化男性患者的MWFS是将MWFS从<14％增加到至少14％。
如本文所用，术语“左心室肥大”或“LVH”是指患者的左心室质量指数(LVMi)高于女性的正常范围43-95g/m2和男性的正常范围49-115g/m2。因此，LVH是指女性的LVMi>95g/m2或男性>115g/m2。
实现一个或多个上述应答的剂量是“治疗有效剂量”。
短语“药学上可接受的”是指生理学可耐受的并且当施用人时不会典型地产生不良反应的分子实体和组合物。在一些实施方案中，如本文所用，术语“药学上可接受的”是指由联邦或州政府的管理机构批准的或者在美国药典或其他普遍认可的药典中列出的，用于在动物体内并且更具体地在人体内的使用。就药物载体而论的术语“载体”是指稀释剂、辅助剂、赋形剂、或与化合物一起施用的媒介物。此类药学载体可以是无菌液体，如水和油类。优选的是应用水或水溶液盐溶液和葡萄糖和甘油水溶液溶液作为载体，特别是用于可注射溶液。合适的药物载体描述于由E.W.Martin编辑的“Remington’s PharmaceuticalSciences”第18版，或其他版本。
如本文所用，术语“分离的”意指将所提及的材料从其通常发现的环境中去除。因此，分离的生物材料可以不含细胞组分，即发现或产生所述材料的细胞的组分。在核酸分子的情况下，分离的核酸包括PCR产物、凝胶上的mRNA条带、cDNA或限制性片段。在另一个实施方案中，分离的核酸优选的是从可以在其被发现的染色体上切除，并且更优选的是不再与非调控性非编码区连接，或与位于当在染色体中发现时由分离的核酸分子包含的基因上游或下游的其他基因连接。在又另一个实施方案中，分离的核酸缺少一个或多个内含子。分离的核酸包括插入质粒、粘粒、人工染色体等中的序列。因此，在一个具体实施方案中，重组核酸是分离的核酸。分离的蛋白质可以与其在细胞中结合的其他蛋白质或核酸或两者结合，或者如果其是膜结合蛋白质则与细胞膜结合。将分离的细胞器、细胞或组织从其在生物体中发现的解剖部位去除。分离的材料可以是但不必是纯化的。
术语“酶替代疗法”或“ERT”是指将非天然的、经纯化的酶引入具有这种酶缺陷的个体中。施用的蛋白质可以从自然来源或通过重组表现而获得(如下文更详细描述的)。所述术语也指将经纯化的酶引入个体，所述个体在其他情况下需要或受益于施用经纯化的酶，例如所述个体遭受酶不足。所述引入的酶可以是在体外产生的经纯化的重组酶，或从离体组织或体液(例如像胎盘或动物奶)或从植物纯化的蛋白质。
术语“ERT初治的患者”是指从未接受ERT或在开始米加司他疗法前至少6个月未接受ERT的法布里患者。
术语“已经历ERT的患者”是指就在开始米加司他疗法之前接受ERT的法布里患者。在一些实施方案中，已经历ERT的患者就在开始米加司他疗法之前已经接受了至少12个月的ERT。
如本文所用，术语“游离碱当量”或“FBE”是指米加司他或其盐中存在的米加司他的量。换句话说，术语“FBE”是指米加司他游离碱的量，抑或由米加司他的盐提供的米加司他游离碱的量。例如，由于盐酸盐的重量，150mg的米加司他盐酸盐仅提供了和123mg的游离碱形式的米加司他所提供的同样多的米加司他。预期其他盐具有不同的转换因子，这取决于所述盐的分子量。
术语“米加司他”涵盖米加司他游离碱或其药学上可接受的盐(例如米加司他盐酸盐)，除非有相反的确切说明。
术语“突变”和“变体”(例如，如在“顺从性突变或变体”中)是指基因或染色体的核苷酸序列的变化。在此提及的两个术语典型地一起使用-例如，如在“突变或变体”中-是指前一句中所述的核苷酸序列的变化。如果出于一些原因仅叙述了两个术语中的一个，则那个缺失的术语旨在包括在内，并且人们应该这样理解。此外，术语“顺从性突变”和“顺从性变体”是指顺从PC疗法的突变或变体，例如顺从米加司他疗法的突变。特定类型的顺从性突变或变体是“HEK测定顺从性突变或变体”，其是根据本文和美国专利号8,592,362(将其通过引用以其全文特此并入)所描述的体外HEK测定中的标准确定为顺从米加司他疗法的突变或变体。
术语“约”和“近似地”通常意指在给定测量的性质或精度的情况下测量的量的可接受的误差程度。典型地，示例性的误差程度在给定的数值或数值范围的20％以内，优选的是在10％以内，并且更优选的是在5％以内。可替代地，特别是在生物系统中，术语“约”和“近似地”可以表示在给定值的一个数量级内，优选的是在10倍或5倍内，更优选的是在2倍内的值。除非另有说明，本文给出的数字量是近似地，意味着当没有明确说明时，可以推断出术语“约”或“近似地”。
法布里病
法布里病是罕见的、进行性的和破坏性的X连锁的LSD。GLA基因的突变导致溶酶体酶α-Gal A(鞘糖脂代谢所必需的)的缺陷。从生命的早期开始，α-Gal A活性的降低导致鞘糖脂(包括GL-3和血浆溶血Gb3)的积累，并导致法布里病的症状和生命限制性后遗症，包括疼痛、胃肠道症状、肾衰竭、心肌病、脑血管事件和早期死亡。早期开始疗法和终身治疗提供了减慢疾病恶化和延长预期寿命的机会。
法布里病涵盖广泛的疾病严重程度和发病年龄，尽管它传统上被分为2种主要表型，即“经典型”和“迟发型”。经典型表型主要已经归于具有不可检测的至低的α-Gal A活性和肾、心脏和/或脑血管临床表现的更早发作的男性。迟发型表型主要已经归于具有更高残留α-Gal A活性和所述疾病表现的更晚发作的男性。杂合性女性携带者典型表现迟发型表型，但是取决于X染色体失活的模式，也可以显示经典型表型。
已经鉴定了超过1,000种导致法布里病的GLA突变。大约60％是错义突变，导致α-Gal A酶中的单个氨基酸取代。错义GLA突变通常导致异常折叠的和不稳定形式的α-Gal A的产生，并且大多数与经典型表型相关。ER中的正常细胞质量控制机制阻断了所述异常蛋白转运到溶酶体上，并且将所述异常蛋白作为过早降解和消除的目标。许多错义突变体形式是米加司他(α-Gal A特异性药理学分子伴侣)的靶标。
法布里病的临床表现具有广泛的严重程度，并且与患者的残留α-Gal A水平大致相关。大多数目前治疗的患者被称为经典法布里患者，其中大多数是男性。这些患者经历各种器官的疾病，包括肾脏、心脏和脑，其中疾病症状首先出现在青春期，并且典型地病情不断加重，直到四十岁或五十岁死亡为止。许多最近的研究表明，存在大量未确诊的男性和女性，他们具有一系列法布里病症状，例如心脏或肾脏功能受损和中风，通常首次出现在成年期。患有这种类型的法布里病的个体，称为迟发型法布里病，与经典型法布里患者相比，倾向于具有更高的残留α-Gal A水平。患有迟发型法布里病的个体通常典型地在成年期间首次经历疾病症状，并且疾病症状通常集中在单一器官，例如左心室的扩大或进行性肾衰竭。此外，迟发型法布里病也可能以未知原因的中风形式出现。
法布里患者具有进行性肾损伤，并且未经治疗的患者到五十岁之前显示出末期肾损伤。α-Gal A活性的缺陷导致GL-3和相关的鞘糖脂在许多细胞类型(包括肾细胞)中积累。GL-3积累在足细胞、上皮细胞以及远端小管和亨利氏环的管状细胞中。肾功能损伤可以表现为蛋白尿和肾小球滤过率降低。
由于法布里病罕见，涉及多器官，发病年龄范围广，并且是异质性的，正确诊断是一个挑战。卫生保健专业人员中的意识较低，并且误诊也频繁。一旦患者有症状，加上突变分析，法布里病的诊断最常基于血浆或外周白细胞(WBC)中降低的α-Gal A活性来证实。在女性中，诊断甚至更具挑战性，因为携带者女性的酶鉴定由于携带者的一些细胞中的随机X染色体失活而不太可靠。例如，一些肯定携带者(受正统影响的男性的女儿)具有从正常到非常低活性范围的α-Gal A酶活性。由于携带者在白细胞中可以具有正常的α-Gal A酶活性，所以仅通过基因检测鉴定α-Gal A突变提供了精确的携带者鉴定和/或诊断。
在一个或多个实施方案中，α-Gal A的突变体形式被认为顺从米加司他，当α-GalA的突变体形式在HEK-293细胞中表达时(称为“HEK测定”)，根据良好实验室规范(GoodLaboratory Practice(GLP))验证的体外测定(GLP HEK或米加司他顺从性测定(Migalastat Amenability Assay))，被定义为显示≥1.20倍的相对增加(±10μM米加司他)和≥3.0％野生型(WT)的绝对增加(±10μM米加司他)。此类突变在本文中也称为“HEK测定顺从性”突变。
已提供以前的筛选方法，其在开始治疗之前评估酶增强。例如，使用HEK-293细胞的测定已经在临床试验中用于预测给定的突变是否应答于药理学分子伴侣(例如米加司他)治疗。在此测定中，建立了cDNA构建体。对应的α-Gal A突变形式在HEK-293细胞中瞬时表达。然后将细胞±米加司他(17nM至1mM)孵育4至5天。之后，在细胞裂解液中使用合成的荧光底物(4-MU-α-Gal)或通过蛋白质印迹测量α-Gal A水平。这已经针对已知的导致疾病的错义或小的框内插入/缺失突变进行。以前使用这些方法鉴定为应答PC(例如，米加司他)的突变在美国专利号8,592,362中列出。
药理学分子伴侣
与LSD相关的酶的小分子抑制剂的结合可以增加突变酶和对应的野生型酶的稳定性(参见美国专利号6,274,597；6,583,158；6,589,964；6,599,919；6,916,829；和7,141,582，全部通过引用并入本文)。特别地，葡萄糖和半乳糖的小分子衍生物(其是用于几种靶标溶酶体酶的特异性、选择性竞争性抑制剂)的施用有效地增加了体外细胞中酶的稳定性，并因此增加了酶到溶酶体的运输。因此，通过增加溶酶体中酶的量，酶底物的水解预期增加。此策略背后的原有理论如下：由于突变酶蛋白在ER中不稳定(Ishii等人,Biochem.Biophys.Res.Comm.1996；220:812-815)，因此酶蛋白在正常转运途径(ER→高尔基体→内体→溶酶体)中延迟并过早降解。因此，结合并增加突变酶稳定性的化合物可以充当酶的“分子伴侣”，并增加可以离开ER并移动到溶酶体的量。另外，由于一些野生型蛋白质的折叠和运输是不完全的，在一些情况下一些野生型蛋白质的多达70％在达到其最终细胞位置之前被降解，所以所述分子伴侣可用于稳定野生型酶，并增加可以离开ER并被运输到溶酶体的酶的量。
在一个或多个实施方案中，所述药理学分子伴侣包括米加司他或其盐。化合物米加司他，也称为1-脱氧半乳糖野尻霉素(deoxygalactonojirimycin)(1-DGJ)或(2R,3S,4R,5S)-2-(羟甲基)哌啶-3,4,5-三醇，是具有以下化学式的化合物：
Figure BDA0002395051720000141
如本文讨论的，米加司他的药学上可接受的盐也可以用于本发明。当使用米加司他的盐时，调整所述盐的剂量，使得由患者接受的米加司他的所述剂量与使用米加司他游离碱时接受的量是相当的。米加司他的药学上可接受的盐的一个实例是米加司他盐酸盐：
Figure BDA0002395051720000142
米加司他是低分子量亚氨基糖，并且是GL-3末端半乳糖的类似物。体外和体内药理学研究已经证明，米加司他充当药理学分子伴侣，以高亲和力选择性地和可逆地结合到野生型α-Gal A和α-Gal A的特定突变体形式的活性位点上，所述特定突变体形式的基因型被称为HEK测定顺从性突变。米加司他结合稳定了内质网中这些突变体形式的α-Gal A，有助于其正确地转输到溶酶体上，在溶酶体上米加司他的解离允许α-Gal A降低GL-3和其他底物的水平。大约30％-50％的法布里病患者具有HEK测定顺从性突变；其中大多数与所述疾病的经典型表型相关。
HEK测定顺从性突变至少包括药理学参考表中列出的那些突变(例如，美国或国际产品标签中针对米加司他产品例如
Figure BDA0002395051720000143
所述的那些突变)。如本文所用，“药理学参考表”是指任何可公开访问的书面或电子记录，包括在米加司他产品(例如，
Figure BDA0002395051720000151
)包装内的产品标签中或在医疗保健提供者可访问的网站中，其传达特定突变或变体是否对米加司他(例如，
Figure BDA0002395051720000152
)PC疗法有应答，并且不一定限于以表格形式呈现的书面记录。在本发明的一个实施方案中，“药理学参考表”因此是指包括一种或多种顺从性突变或变体的任何信息库。用于HEK测定顺从性突变的示例性药理学参考表可以在
Figure BDA0002395051720000153
批准使用的各个国家的
Figure BDA0002395051720000154
的产品特征和/或处方信息的总结中找到，或者在例如www.galafoldamenabilitytable.com或者www.fabrygenevariantsearch.com等网站上找到，其各自通过引用以其全文特此并入。
用于HEK测定顺从性突变的示例性药理学参考表提供于下表1中。在一个或多个实施方案中，如果双重突变存在于同一染色体(男性和女性)上，则如果所述双重突变存在于表1中的一个条目中(例如，D55V/Q57L)，所述患者被认为是HEK测定顺从性的。在一些实施方案中，如果双重突变存在于不同染色体(仅在女性中)上，则如果个体突变中的任一个存在于表1中，所述患者被认为是HEK测定顺从性的。
表1
核苷酸变化 核苷酸变化 蛋白质序列变化
c.7C>G c.C7G L3V
c.8T>C c.T8C L3P
c.[11G>T；620A>C] c.G11T/A620C R4M/Y207S
c.37G>A c.G37A A13T
c.37G>C c.G37C A13P
c.43G>A c.G43A A15T
c.44C>G c.C44G A15G
c.53T>G c.T53G F18C
c.58G>C c.G58C A20P
c.59C>A c.C59A A20D
c.70T>C或c.70T>A c.T70C或c.T70A W24R
c.70T>G c.T70G W24G
表1
Figure BDA0002395051720000161
表1
Figure BDA0002395051720000171
表1
Figure BDA0002395051720000181
表1
核苷酸变化 核苷酸变化 蛋白质序列变化
c.352C>T c.C352T R118C
c.361G>A c.G361A A121T
c.368A>G c.A368G Y123C
c.373C>T c.C373T H125Y
c.374A>T c.A374T H125L
c.376A>G c.A376G S126G
c.383G>A c.G383A G128E
c.399T>G c.T399G I133M
c.404C>T c.C404T A135V
c.408T>A或c.408T>G c.T408A或c.T408G D136E
c.416A>G c.A416G N139S
c.419A>C c.A419C K140T
c.427G>A c.G427A A143T
c.431G>A c.G431A G144D
c.431G>T c.G431T G144V
c.434T>C c.T434C F145S
c.436C>T c.C436T P146S
c.437C>G c.C437G P146R
c.454T>C c.T454C Y152H
c.455A>G c.A455G Y152C
c.466G>A c.G466A A156T
c.467C>T c.C467T A156V
c.471G>C或c.471G>T c.G471C或c.G471T Q157H
c.484T>G c.T484G W162G
c.493G>C c.G493C D165H
c.494A>G c.A494G D165G
表1
Figure BDA0002395051720000201
表1
核苷酸变化 核苷酸变化 蛋白质序列变化
c.593T>C c.T593C I198T
c.595G>A c.G595A V199M
c.596T>C c.T596C V199A
c.596T>G c.T596G V199G
c.599A>G c.A599G Y200C
c.602C>T c.C602T S201F
c.602C>A c.C602A S201Y
c.608A>T c.A608T E203V
c.609G>C或c.609G>T c.G609C或c.G609T E203D
c.610T>G c.T610G W204G
c.613C>A c.C613A P205T
c.613C>T c.C613T P205S
c.614C>T c.C614T P205L
c.619T>C c.T619C Y207H
c.620A>C c.A620C Y207S
c.623T>G c.T623G M208R
c.628C>T c.C628T P210S
c.629C>T c.C629T P210L
c.638A>G c.A638G K213R
c.638A>T c.A638T K213M
c.640C>T c.C640T P214S
c.641C>T c.C641T P214L
c.643A>G c.A643G N215D
c.644A>G c.A644G N215S
c.644A>T c.A644T N215I
c.[644A>G；937G>T] c.A644G/G937T N215S/D313Y
表1
核苷酸变化 核苷酸变化 蛋白质序列变化
c.646T>G c.T646G Y216D
c.647A>C c.A647C Y216S
c.647A>G c.A647G Y216C
c.655A>C c.A655C I219L
c.656T>A c.T656A I219N
c.656T>C c.T656C I219T
c.659G>A c.G659A R220Q
c.659G>C c.G659C R220P
c.662A>C c.A662C Q221P
c.671A>C c.A671C N224T
c.671A>G c.A671G N224S
c.673C>G c.C673G H225D
c.683A>G c.A683G N228S
c.687T>A或c.687T>G c.T687A或c.T687G F229L
c.695T>C c.T695C I232T
c.713G>A c.G713A S238N
c.716T>C c.T716C I239T
c.720G>C或c.720G>T c.G720C或c.G720T K240N
c.724A>G c.A724G I242V
c.724A>T c.A724T I242F
c.725T>A c.T725A I242N
c.725T>C c.T725C I242T
c.728T>G c.T728G L243W
c.729G>C或c.729G>T c.G729C或c.G729T L243F
c.730G>A c.G730A D244N
c.730G>C c.G730C D244H
表1
核苷酸变化 核苷酸变化 蛋白质序列变化
c.733T>G c.T733G W245G
c.740C>G c.C740G S247C
c.747C>G或c.747C>A c.C747G或c.C747A N249K
c.748C>A c.C748A Q250K
c.749A>C c.A749C Q250P
c.749A>G c.A749G Q250R
c.750G>C c.G750C Q250H
c.758T>C c.T758C I253T
c.758T>G c.T758G I253S
c.760-762delGTT c.760_762delGTT p.V254del
c.769G>C c.G769C A257P
c.770C>G c.C770G A257G
c.772G>C或c.772G>A c.G772C或c.G772A G258R
c.773G>T c.G773T G258V
c.776C>G c.C776G P259R
c.776C>T c.C776T P259L
c.779G>A c.G779A G260E
c.779G>C c.G779C G260A
c.781G>A c.G781A G261S
c.781G>C c.G781C G261R
c.781G>T c.G781T G261C
c.788A>G c.A788G N263S
c.790G>T c.G790T D264Y
c.794C>T c.C794T P265L
c.800T>C c.T800C M267T
c.805G>A c.G805A V269M
表1
Figure BDA0002395051720000241
表1
Figure BDA0002395051720000251
表1
核苷酸变化 核苷酸变化 蛋白质序列变化
c.931C>G c.C931G L311V
c.935A>G c.A935G Q312R
c.936G>T或c.936G>C c.G936T或c.G936C Q312H
c.937G>T c.G937T D313Y
c.[937G>T；1232G>A] c.G937T/G1232A D313Y/G411D
c.938A>G c.A938G D313G
c.946G>A c.G946A V316I
c.947T>G c.T947G V316G
c.950T>C c.T950C I317T
c.955A>T c.A955T I319F
c.956T>C c.T956C I319T
c.959A>T c.A959T N320I
c.962A>G c.A962G Q321R
c.962A>T c.A962T Q321L
c.963G>C或c.963G>T c.G963C或c.G963T Q321H
c.964G>A c.G964A D322N
c.964G>C c.G964C D322H
c.966C>A或c.966C>G c.C966A或c.C966G D322E
c.968C>G c.C968G P323R
c.973G>A c.G973A G325S
c.973G>C c.G973C G325R
c.978G>C或c.978G>T c.G978C或c.G978T K326N
c.979C>G c.C979G Q327E
c.980A>T c.A980T Q327L
c.983G>C c.G983C G328A
c.989A>G c.A989G Q330R
表1
核苷酸变化 核苷酸变化 蛋白质序列变化
c.1001G>A c.G1001A G334E
c.1010T>C c.T1010C F337S
c.1012G>A c.G1012A E338K
c.1016T>A c.T1016A V339E
c.1027C>A c.C1027A P343T
c.1028C>T c.C1028T P343L
c.1033T>C c.T1033C S345P
c.1046G>C c.G1046C W349S
c.1055C>G c.C1055G A352G
c.1055C>T c.C1055T A352V
c.1061T>A c.T1061A I354K
c.1066C>G c.C1066G R356G
c.1066C>T c.C1066T R356W
c.1067G>A c.G1067A R356Q
c.1067G>C c.G1067C R356P
c.1072G>C c.G1072C E358Q
c.1073A>C c.A1073C E358A
c.1073A>G c.A1073G E358G
c.1074G>T或c.1074G>C c.G1074T或c.G1074C E358D
c.1076T>C c.T1076C I359T
c.1078G>A c.G1078A G360S
c.1078G>T c.G1078T G360C
c.1079G>A c.G1079A G360D
c.1082G>A c.G1082A G361E
c.1082G>C c.G1082C G361A
c.1084C>A c.C1084A P362T
表1
核苷酸变化 核苷酸变化 蛋白质序列变化
c.1085C>T c.C1085T P362L
c.1087C>T c.C1087T R363C
c.1088G>A c.G1088A R363H
c.1102G>A c.G1102A A368T
c.1117G>A c.G1117A G373S
c.1124G>A c.G1124A G375E
c.1153A>G c.A1153G T385A
c.1168G>A c.G1168A V390M
c.1172A>C c.A1172C K391T
c.1175G>C c.G1175C R392T
c.1184G>A c.G1184A G395E
c.1184G>C c.G1184C G395A
c.1192G>A c.G1192A E398K
c.1202_1203insGACTTC c.1202_1203insGACTTC p.T400_S401dup
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给药、配制和施用
在一个或多个实施方案中，以每隔一天一次(也称为“QOD”)的频率向法布里患者施用米加司他或其盐。在不同实施方案中，本文所述的剂量涉及米加司他盐酸盐或等效剂量的米加司他或其不是盐酸盐的盐。在一些实施方案中，所述剂量涉及米加司他的游离碱。在替代性实施方案中，所述剂量涉及米加司他的盐。在另外的实施方案中，米加司他的盐是米加司他盐酸盐。米加司他或米加司他的盐的施用在本文中称为“米加司他疗法”。
米加司他或其盐的有效量可以在约100mg FBE至约150mg FBE的范围内。示例性剂量包括约100mg FBE、约105mg FBE、约110mg FBE、约115mg FBE、约120mg FBE、约123mgFBE、约125mg FBE、约130mg FBE、约135mg FBE、约140mg FBE、约145mg FBE或约150mg FBE。
再次，应注意，150mg的米加司他盐酸盐相当于123mg的游离碱形式的米加司他。因此，在一个或多个实施方案中，所述剂量是以每隔一天一次的频率施用的150mg的米加司他盐酸盐或等效剂量的米加司他或其不是盐酸盐的盐。如上所述，此剂量被称为123mg FBE的米加司他。在另外的实施方案中，所述剂量为以每隔一天一次的频率施用的150mg的米加司他盐酸盐。在其他实施方案中，所述剂量为以每隔一天一次的频率施用的123mg的米加司他游离碱。
在不同实施方案中，有效量为约122mg、约128mg、约134mg、约140mg、约146mg、约150mg、约152mg、约159mg、约165mg、约171mg、约177mg或约183mg的米加司他盐酸盐。
因此，在不同实施方案中，米加司他疗法包括以每隔一天一次的频率施用123mg的FBE，例如每隔一天150mg的米加司他盐酸盐。
米加司他或其盐的施用可以持续某一时段。在一个或多个实施方案中，将米加司他或其盐施用至少28天的持续时间，例如至少30、60或90天，或至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、16、20、24、30或36个月，或者至少1、2、3、4或5年。在不同实施方案中，米加司他疗法是长期米加司他疗法，持续至少6个月，例如至少6、7、8、9、10、11、12、16、20、24、30或36个月，或者至少1、2、3、4或5年。
根据本发明的米加司他或其盐的施用可以是以适合任何施用途径的制剂形式，但优选的是以口服剂型(诸如片剂、胶囊或溶液)进行施用。作为一个实例，所述患者口服施用胶囊，每个胶囊包含150mg的米加司他盐酸盐或等效剂量的米加司他或其不是盐酸盐的盐。
在一些实施方案中，口服施用PC(例如，米加司他或其盐)。在一个或多个实施方案中，通过注射施用PC(例如，米加司他或其盐)。PC可以伴有药学上可接受的载体，这可以取决于施用的方法。
在一个或多个实施方案中，PC(例如，米加司他或其盐)作为单一疗法被施用，并且可以是以适合任何施用途径的形式，包括例如以片剂或胶囊或液体的形式口服，或以用于注射的无菌水溶液形式。在其他实施方案中，PC以干燥的冻干粉末的形式被提供，以在重建期间或之后立即添加到替代酶的制剂中，以防止在施用前在体外的酶聚集。
当所述PC(例如，米加司他或其盐)被配制用于口服施用时，可以通过常规手段与以下项一起来制备片剂或胶囊：药学上可接受的赋形剂，诸如粘合剂(例如预胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或羧甲基淀粉钠)；或湿润剂(例如十二烷基硫酸钠)。可以通过本领域所熟知的方法将片剂进行包被。用于口服施用的液体制剂可以采取例如溶液、糖浆或混悬液的形式，或它们可以作为一种干产品(在使用前用水或其他合适的媒介物进行组合)而存在。此类液体制剂可以通过常规方法用药学上可接受的添加剂来制备，所述添加剂为诸如助悬剂(例如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化的可食用脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯胶)；非水性媒介物(例如杏仁油、油状酯、乙醇或分馏的植物油)；以及防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)。适当时制剂还可以包含缓冲盐、调味剂、着色剂和甜味剂。可以适当地配制口服制剂以使活性分子伴侣化合物能够可控制地释放。
适合肠胃外/注射使用的PC(例如，米加司他或其盐)的药物制剂通常包括无菌水溶液(在水溶性的情况下)、或者分散体以及用于临时制备无菌注射溶液或分散体的无菌粉末。在所有情况下，所述形式必须是无菌的且必须具有达到容易注射的程度的流动性。它在生产和存储条件下必须是稳定的并且必须抗微生物(如细菌和真菌)的污染作用而保存。所述载体可以是包含以下各项的溶剂或分散介质：例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和聚乙二醇等)、其合适的混合物、以及植物油。可以例如通过使用包衣(例如卵磷脂)、通过在分散情况下维持所需颗粒大小以及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。防止微生物的作用可以通过不同的抗细菌以及抗真菌剂，例如对羟苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、苄醇、山梨酸等来实现。在许多情况下，包括等渗剂例如糖类或氯化钠将是合理的。可通过使用延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)的组合物来实现可注射组合物的延长的吸收。
按照需要，可以通过将纯化的酶(若有的话)和所述PC(例如米加司他或其盐)以需要的量掺入具有以上列举的不同其他成分的适当溶剂中，随后进行过滤或最终灭菌来制备无菌可注射溶液。总体上，通过将不同灭菌的活性成分掺入无菌媒介物中来制备分散体，所述无菌媒介物包含基础分散介质以及来自以上列举的那些的所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备的优选的方法是真空干燥和冷冻干燥技术，这从其之前的无菌过滤溶液产生活性成分加上任何另外的所希望成分的粉末。
所述制剂可以包含赋形剂。可以被包含在所述制剂中的药学上可接受的赋形剂是：缓冲剂，诸如柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂、碳酸氢盐缓冲剂、氨基酸、尿素、醇、抗坏血酸和磷脂；蛋白质，诸如血清白蛋白、胶原、以及明胶；盐，诸如EDTA或EGTA、以及氯化钠；脂质体；聚乙烯吡咯烷酮；糖，诸如右旋糖酐、甘露醇、山梨糖醇、以及甘油；丙二醇以及聚乙二醇(例如，PEG-4000、PEG-6000)；甘油；甘氨酸或其他氨基酸；以及脂质类。与制剂一起使用的缓冲剂系统包括柠檬酸盐；乙酸盐；碳酸氢盐；以及磷酸盐缓冲剂。磷酸盐缓冲剂是一个优选的实施方案。
所述分子伴侣化合物的施用途径可以是口服的或肠胃外的，包括静脉内、皮下、动脉内、腹膜内、眼内、肌内、口颊、直肠、阴道、眼眶内、脑内、真皮内、颅内、脊柱内、心室内、鞘内、脑池内、囊内、肺内、鼻内、经粘膜、经皮肤、或经由吸入。
所述分子伴侣化合物的上述肠胃外制剂的施用可以是通过周期性注射制剂的推注，或可以从储库通过静脉内或腹膜内施用来施用，所述储库可以是外部的(例如静脉注射袋)或内部的(例如生物可蚀性植入物)。
涉及药物制剂和施用的实施方案可以与本发明的任何其他实施方案组合，例如涉及治疗法布里病患者的方法、治疗ERT初治的法布里病患者的方法、治疗已经历ERT的法布里病患者的方法、增强心脏功能(例如，左心室收缩功能)的方法、稳定心脏功能(例如，左心室收缩功能)的方法、增加MWFS的方法、稳定MWFS的方法、正常化MWFS的方法、在诊断患有或疑似患有法布里病的患者中增强α-Gal A的方法、α-Gal A的药理学分子伴侣用于制造用于治疗被诊断患有法布里病的患者的药剂的用途或涉及用于治疗被诊断患有法布里病的患者的α-Gal A的药理学分子伴侣的实施方案，连同涉及顺从性突变、PC及其合适的剂量的实施方案。
在一个或多个实施方案中，PC(例如，米加司他或其盐)与ERT组合施用。通过输注的方式，通过外源性引入野生型或具有生物学功能的酶，ERT增加了蛋白质的量。已经针对许多遗传疾病开发了这种疗法，包括如上引用的LSD(诸如法布里病)。输注后，预期外源酶通过非特异性或受体特异性机制被组织吸收。一般来说，吸收效率不高，并且外源蛋白的循环时间短。此外，外源蛋白是不稳定的，并且经受快速的细胞内降解，而且在随后治疗的情况下具有不利免疫反应的潜力。在一个或多个实施方案中，将所述分子伴侣与替代酶(例如，替代α-Gal A)同时施用。在一些实施方案中，将分子伴侣与替代酶(例如，替代α-Gal A)共配制。
在一个或多个实施方案中，将患者从ERT转换至米加司他疗法。在一些实施方案中，鉴定了接受ERT的患者，中断了患者的ERT，并且所述患者开始接受米加司他疗法。可以根据本文所述的任何方法进行米加司他疗法。
心脏功能
本文所述的给药方案可以稳定和/或增强法布里病患者的心脏功能(例如，左心室收缩功能)。由于未经治疗的法布里患者典型地随着时间的推移表现出心脏功能的退化，所以心脏功能的增强和维持不变都指示米加司他疗法的益处。如以下实施例中进一步详细描述的，第3期研究已经发现，米加司他疗法在已经历ERT和ERT初治患者中都增加和/或稳定了MWFS。这些第3期研究还发现，在一些具有受损的MWFS的患者中，米加司他疗法正常化MWFS。因此，米加司他疗法可以用于通过稳定MWFS、增加MWFS和/或正常化ERT初始和/或已经历ERT的法布里患者(包括具有受损的MWFS的患者)中的MWFS来治疗法布里患者。
与没有用米加司他疗法进行治疗的同一患者相比，米加司他疗法可以遏制或减少法布里患者MWFS的降低和/或增加MWFS。在一个或多个实施方案中，米加司他疗法为患者的MWFS提供改变，所述改变大于(即，更正于)-2％，例如大于或等于约-1.5％、-1.4％、-1.3％、-1.2％、-1.1％、-1％、-0.9％、-0.8％、-0.7％、-0.6％、-0.5％、-0.4％、-0.3％、-0.2％、-0.1％、0％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％或2.5％。在一个或多个实施方案中，所述法布里患者是已经历ERT的患者。在一个或多个实施方案中，所述法布里患者是ERT初治患者。在一个或多个实施方案中，所述法布里患者在开始米加司他治疗之前具有受损的MWFS。
在一个或多个实施方案中，在施用米加司他或其盐12个月后，米加司他疗法在ERT初治的患者组中提供了至少约0％的MWFS的平均变化。在不同实施方案中，在施用米加司他或其盐12个月后，ERT初治的患者组中的平均增加为至少约0.05％、约0.1％、约0.15％或约0.2％。在一个或多个实施方案中，在开始米加司他治疗之前，ERT初治的患者患有具有受损的MWFS。
在一个或多个实施方案中，在施用米加司他或其盐24个月后，米加司他疗法在ERT初治的患者组中提供了至少约0％的MWFS的平均变化。在不同实施方案中，在施用米加司他或其盐12个月后，ERT初治的患者组中的平均增加为至少约0.05％、约0.1％、约0.15％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1％、约1.1％、约1.2％、约1.3％、约1.4％或约1.5％。在一个或多个实施方案中，在开始米加司他治疗之前，ERT初治的患者患有具有受损的MWFS。
在一个或多个实施方案中，在施用米加司他或其盐36个月后，米加司他疗法在ERT初治的患者组中提供了至少约0％的MWFS的平均变化。在不同实施方案中，在施用米加司他或其盐12个月后，ERT初治的患者组中的平均增加为至少约0.05％、约0.1％、约0.15％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1％、约1.1％、约1.2％、约1.3％、约1.4％或约1.5％。在一个或多个实施方案中，在开始米加司他治疗之前，ERT初治的患者患有具有受损的MWFS。
在一个或多个实施方案中，在施用米加司他或其盐48个月后，米加司他疗法在ERT初治的患者组中提供了至少约0％的MWFS的平均变化。在不同实施方案中，在施用米加司他或其盐12个月后，ERT初治的患者组中的平均增加为至少约0.05％、约0.1％、约0.15％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1％、约1.1％、约1.2％、约1.3％、约1.4％、约1.5％、约1.6％、约1.7％、约1.8％、约1.9％、约2％、约2.1％、约2.2％、约2.3％、约2.4％或约2.5％。在一个或多个实施方案中，在开始米加司他治疗之前，ERT初治的患者患有具有受损的MWFS。
在一个或多个实施方案中，在施用米加司他或其盐30个月后，米加司他疗法在ERT初治的患者组中提供了大于约-1.5％的MWFS的平均变化。在不同实施方案中，在施用米加司他或其盐12个月后，ERT初治的患者组中的平均增加为大于-1.5％、-1.4％、-1.3％、-1.2％、-1.1％、-1％、-0.9％、-0.8％、-0.7％、-0.6％、-0.5％、-0.4％、-0.3％、-0.2％、-0.1％或0％。在一个或多个实施方案中，在开始米加司他疗法之前，已经历ERT的患者具有受损的MWFS。
实施例
实施例1：用于使用米加司他盐酸盐治疗ERT初治的法布里患者的给药方案
本实施例描述了在ERT初治的法布里患者中的米加司他疗法的第3期研究。
患者入选.符合条件的患者为16-74岁，并且具有经基因证实的法布里病；从未接受ERT或未接受ERT≥6个月；基于在入选时使用的人胚肾-293(HEK)测定，具有产生将应答米加司他的突变体蛋白的GLA突变；具有eGFR>30ml/min/1.73m2，并且具有尿GL-3≥4倍正常上限。
研究设计.在合格性-基线评估(2个月)后，随机分配患者至第1期--每隔一天双盲施用150mg的米加司他盐酸盐或安慰剂，持续6个月。完成第1期的所有患者都有资格在第2期(第6-12月)以及之后的另外一年(第13-24月)接受开放标记式(open-label)米加司他。主要目的是，比较在6个月的治疗后，相对于安慰剂，米加司他对肾脏GL-3的影响，如通过间质毛细血管中内含物数量的组织学评分所评估的。第1期的次要目的是，比较相对于安慰剂，米加司他对尿GL-3水平、肾功能、24小时尿蛋白以及安全性和耐受性的影响。第三个目的是心脏功能、患者报告的结果、探索性肾脏分析和白细胞α-Gal A活性。研究完成者有资格参加开放标记式延续研究，持续长达5年。
肾脏组织学评估.每个患者进行基线肾活检，连同在6个月和12个月时重复肾活检。每个患者在基线时以及在6个月和12个月时，每个肾间质毛细血管的GL-3内含物的数量由3个独立病理学家(对治疗和访视双盲)在300个毛细血管中进行定量评估。在统计分析之前，在给定时间内对每个个体活检的所有值取平均值。
足细胞、内皮细胞和系膜细胞中的GL-3变化以及肾小球硬化由同样的3个病理学家(对治疗/访视双盲)进行定量评估。
神经酰胺三己糖苷和鞘胺醇三聚己糖苷.使用新颖稳定的同位素标记的内标物13C6-溶血Gb3(下限定量：0.200ng/mL，0.254nmol/L)，通过液相色谱-质谱法分析血浆溶血Gb3和24小时尿GL-3。
肾功能评估.年变化率(mL/min/1.73m2/年)是使用慢性肾脏病流行病学合作(Chronic Kidney Disease Epidemiology Collaboration)-eGFRCKD-EPI和测量的碘海醇清除率-mGFR碘海醇进行计算的。
超声心动图.LVMi、左后壁厚、舒张压、室间隔厚、舒张压和其他参数通过盲式、集中评价进行评估。
患者报告的结果.使用胃肠道症状分级评分量表(Gastrointestinal SymptomsRating Scale)(GSRS)、简表(Short Form)-36v2TM和简明疼痛量表疼痛程度组分(BriefPain Inventory Pain Severity Component)评估患者报告的结果。
安全分析与不良事件.将接受≥1次剂量的随机患者纳入安全性分析，所述分析包括生命体征、体检、心电图、临床实验室和不良事件。
肾间质毛细血管GL-3底物的统计学分析.主要的第1期(6个月)终点(具有基线活检的ITT人群，n＝64)是米加司他和安慰剂组中每个间质毛细血管的GL-3内含物减少≥50％的患者的比例。评估另外两个第1期终点(修改后的ITT人群：具有配对基线和第6个月活检的随机患者；n＝60)：每个间质毛细血管的GL-3内含物的百分比变化，以及不含GL-3内含物的间质毛细血管的百分比。
针对第2期(第6-12月)和开放标记式延续(第12-24个月)中的每个间质毛细血管的GL-3内含物和其他预先指定的终点的功效分析是基于以下修改的治疗意图(mITT)：治疗由具有通过验证测定显示适合于米加司他治疗的突变体α-Gal A酶的随机患者组成的人群；n＝50)。
结果
基线特征.对六十七个具有潜在应答性的突变体α-Gal A的患者(16-74岁，64％为女性)(ITT人群)进行随机分组。表2提供了具有合适的突变体α-Gal A的ITT群体中的50个患者的基线特征。基线参数没有统计学显著性差异。
表2：基线特征
Figure BDA0002395051720000361
Figure BDA0002395051720000371
与具有合适的突变的患者(n＝50)的基因型相关的一种或多种临床表型的已发表报告表明，30例(60％)具有与法布里病经典表型相关的突变，一例(2％)具有与非经典表型相关的突变，三例(6％)具有与两种表型都相关的突变，以及16例(32％)尚未分类。16例男性中有14例(87％)中发现残留WBCα-Gal A活性<3％；31例男性和女性中有29例(94％)具有升高的血浆溶血Gb3，并且50例男性和女性中有47例(94％)具有多器官系统疾病。
基线MWFS.在基线处，9名患者报告MWFS受损(女性<15％，男性<14％)。
米加司他和心脏功能.这项对ERT初治患者的研究发现，米加司他疗法增加了在基线处具有受损的MWFS的患者的MWFS。下表3显示了米加司他疗法后MWFS从基线的变化。
表3：在米加司他疗法下，在基线处具有受损的MWFS的患者(具有顺应性突变的患 者)的MWFS随时间从基线的百分比变化
Figure BDA0002395051720000372
末次观测值转结法(LOCF)分析基于最后的研究评估，包括任何计划外或提前终止访视；女性的异常MWFS为<15％，男性<14％。
如可从表3中看出，对基线处具有受损的MWFS的ERT初治患者进行的LOCF分析显示，米加司他治疗48个月后，MWFS的平均变化为1.9％(95％CI-0.8％，4.5％；n＝8)。米加司他疗法后6/8(75％)的患者的MWFS增加，其中3/8(38％)显示MWFS正常化。
还分析了在基线处LVH患者的MWFS。LVH患者在基线处的MWFS从基线的变化提供于下表4中：
表4：在米加司他疗法下，在基线处的LVH患者(具有顺应性突变的患者)的MWFS从 基线的变化
Figure BDA0002395051720000381
LOCF分析基于最后的研究评估，包括任何计划外或提前终止访视；LVH亚组：LVMi>95g/m2(女性)或>115g/m2(男性)。
如可从表4中看出，对基线处患有LVH的ERT初治患者进行的LOCF分析显示，米加司他治疗48个月后，MWFS的平均变化为1.0％(95％CI-1.5％，3.5％；n＝10)。米加司他疗法后7/10(70％)的患者的MWFS增加，其中2/10(20％)显示MWFS正常化。
安全性与不良事件.在第1期，治疗突发性不良事件在组间是相似的。与安慰剂相比，接受米加司他的患者中出现的高频不良事件为头痛(12/34个患者-35％对比7/33个患者-21％)和鼻咽炎(6/34个患者-18％对比2/34-6％)。第2期最常报告的不良事件是头痛(9/63个患者-14％)和操作性疼痛(7/63个患者-11％，与肾活检相关)，以及开放标记式延续阶段最常报告的不良事件是蛋白尿(9/57个患者-16％)、头痛(6/57个患者-11％)和支气管炎(6/57个患者-11％)。大多数不良事件严重程度为轻度或中度。没有不良事件导致米加司他中断。
六个患者在第1期出现严重不良事件(2：米加司他；4：安慰剂)，5个患者在第2期出现严重不良事件，以及11个患者在开放标记式延续期出现严重不良事件。两个严重不良事件(疲劳和感觉异常)被调查者评估为可能与米加司他相关。两者在第12-24个月之间发生在同一患者身上，并已解决。由>1个患者报告了无个体严重不良事件。两个患者由于严重不良事件而中断米加司他；这两者都被认为与米加司他无关。未报告出现死亡病例。
在第12-24个月之间有9个患者(16％)发生了治疗突发性蛋白尿，并且其中一例被判断与米加司他相关。在5个患者中，24个月的值均与基线相同。三个具有合适的突变的患者基线蛋白尿明显(>1g/24hr)，所述水平在24个月内有所上升。在28个基线蛋白尿<300mg/24h的患者中，有23个的24小时尿蛋白在米加司他治疗期间保持稳定。
没有Banikazemi等人所定义的进展到终末期肾病、心脏死亡或中风。有一例短暂性脑缺血发作-判断为与米加司他无关。
生命体征、体检发现、实验室和ECG参数的分析未揭示米加司他的任何临床相关性影响。
实施例2：使用米加司他盐酸盐治疗已经历ERT的法布里患者的给药方案
本实施例描述了在已经历ERT的法布里患者中的米加司他疗法的第3期研究。
患者入选.符合条件的患者为16-74岁，并且具有经基因证实的法布里病；接受ERT≥12个月；基于在入选时使用的人胚肾-293(HEK)测定，具有产生将应答米加司他的突变体蛋白的GLA突变；具有eGFR≥30ml/分钟/1.73m2；并且具有已经至少3个月保持稳定的ERT剂量水平和方案。
研究设计.在合格性-基线评估之后，57个患者被随机分到18个月的米加司他疗法或ERT，接着是12个月的米加司他疗法。米加司他给药方案是每隔一天150mg的米加司他盐酸盐。主要目的是比较，相对ERT，米加司他对肾功能的影响，经过18个月的治疗后通过mGFR碘海醇进行评估。次要目标是比较，相对ERT，米加司他对以下各项的影响：肾功能(通过eGFR和24小时尿蛋白进行评估)；综合临床结果(按发生肾脏、心脏、脑血管事件或死亡的时间进行评估)；心脏功能(通过超声心动图进行评估)和患者报告的结果(疼痛和生活质量)。
基线MWFS.在基线处，19名患者(14名米加司他，5名ERT)报告MWFS受损(女性<15％，男性<14％)。
结果
米加司他和心脏功能.这项对已经历ERT的患者的研究发现，米加司他疗法稳定了在基线处具有受损的MWFS的患者的MWFS。对基线处具有受损的MWFS的患者进行的LOCF分析显示，米加司他治疗30个月后，基线的平均变化为-0.2％(95％CI-1.3％，1.0％；n＝14)。对基线处具有受损的MWFS的患者进行的LOCF分析显示，ERT治疗18个月后，MWFS的平均变化为-0.6％(95％CI-2.6％，1.4％；n＝5)。
本文所描述的实施方案旨在说明本发明的组合物和方法，而并不旨在限制本发明的范围。旨在包括与作为整体的描述一致的并且对于所属领域技术人员来说容易理解的各种修改和改变。所附权利要求不应受实施例中所示出的具体实施方案的限制，而是应当被给予与作为整体的描述一致的最宽泛的解释。
贯穿本申请，引用了专利、专利申请、出版物、产品描述、基因库登录号和实验方案，出于所有目的，将其公开内容以其整体通过引用并入本文。
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<400> 1
cccttctgta ggggcagaga ggttctactt cattactgcg tctcctggga aggccatcag 60
gactgctggc taaagtggga accaggactc tttgtgagtt aagaatttgt gtatttatat 120
gtgtgttata cacatttttt aaaaaactgt aacgacatca ggttgagcag tcgtctccgg 180
gtggtgaatt atgtgtattt ttaaatttta tactatattg ttatttttca aatgttcgaa 240
attgaatatg tagattgttg ttatcagcag aaaaataaac attattcaaa tactctattc 300
agtaaagtaa tttattgggc gcctttgtca agcacgcatt tgcctagatg tgactctaca 360
gataaaattc acttggggcc tccccttaca gacaatcagg cagtggagac tgagtgcctg 420
aatggataga ccagcactca gaccactatt ttcagtatct gtttttctta actcagggcc 480
gtggttttca aacgtttttc gccttacggt cacccttagg gtcccccgag accggcccag 540
acagacagat atacaaaaac acatacacag tcatgagcgt ccaccatttc cccaccaggc 600
gcagcacagg cggcttcccg gcactgagat gggggggagg agggagagag cgcgaggggg 660
gaggggaaag cagagaacga aagaggcgga ggcggccccc gaaccccgct ctggtcttca 720
tcatcaccac ccctgggtcc ccagttccca cccacacacc aacctctaac gataccgggt 780
aattttcctc cttcttccct caaacggcta tagcgagacg gtagacgacg accagaacta 840
cttctgctca cgtaagcgag taatcacgtg agcgcctacg tcatgtgaga tctcggtcac 900
gtgagcaact ctcggcttaa actcgggatc actaaggtgc cgcacttcct tctggtatgg 960
aaatagggcg ggtcaatatc aagaaaggaa gagggtgatt ggttagcgga acgtcttacg 1020
tgactgatta ttggtctacc tctggggata accgtcccag ttgccagaga aacaataacg 1080
tcattattta ataagtcatc ggtgattggt ccgcccctga ggttaatctt aaaagcccag 1140
gttacccgcg gaaatttatg ctgtccggtc accgtgacaa tgcagctgag gaacccagaa 1200
ctacatctgg gctgcgcgct tgcgcttcgc ttcctggccc tcgtttcctg ggacatccct 1260
ggggctagag cactggacaa tggattggca aggacgccta ccatgggctg gctgcactgg 1320
gagcgcttca tgtgcaacct tgactgccag gaagagccag attcctgcat caggtatcag 1380
atattgggta ctcccttccc tttgcttttc catgtgtttg ggtgtgtttg gggaactgga 1440
gagtctcaac gggaacagtt gagcccgagg gagagctccc ccacccgact ctgctgctgc 1500
ttttttatcc ccagcaaact gtcccgaatc aggactagcc ctaaactttc tctgtgtgac 1560
ctttcctggg atgggagtcc ggccagcggc ccctgtttct ttctctctct ctctctctct 1620
cgttctcctt ctctttctct ttctcttctt tcctctctct ttctctctct ccctgcccgg 1680
ttctcttttt tcactgctcc ttgcagagca gggccacccc ataggcagtg tgcccaaagt 1740
agccctgccc ggttctattc agacccttct tgtgaacttc tgctcttcct ctgccgggtg 1800
ctaaccgtta gaacatctag ggtgggtagg aggaatgggg aactaagatt cgtgccattt 1860
tttctccttt tggggtcgtg gatttctcgg cagtatctcg agggagttag agagaccata 1920
aggtcgctga gatctctccc acctcgccca tgagcgtggc atcaggctgg aaggttgaca 1980
tggaggaact ttatacattt acacctttgc gtgagggttg aggctggatt agataggtat 2040
tgaacatatc tgaccctcac aatccttatc tgtaaattgg gattacaacc ttttaatttc 2100
agggagctga caaaaaaaat ctgaaaaata gttcttatct cacacaggtg agttttcaag 2160
gagataacct atttaaagta catagcacag cgcttgacca ttcaactgcg cttacagagc 2220
aaatgttcaa tgggaaaatg aatgtaaatc tacaaatctg aatgaatatg tgtatttttc 2280
tggagagagg atatttacct ttcttcaaat tctcaaaggg ctctgtgatt taaaaaaggt 2340
taggaatcac tgatagatgt tggtaaaagg tggcagtcac agtacatttc tgtgtccata 2400
agttattcct atgaatatct ttatagataa agtcaggatg ttggtcagac atcacagaag 2460
aaattggcct tgtaagtttc atgtgaccct gtggtacagt atgtgtggca attttgccca 2520
tcacggattt ttttttattg gtatttgcat ctgattataa aactaatgca tgatcattgc 2580
aaaaaatgta gataaagaag agcaaaatga aaataaagat ttccccccac cgttccacca 2640
cccagaaata atcatggttt aaatgttaat atacaacctt acaattgttt tctatataaa 2700
tgaaaacata gatttcttta tttcattatt ttccataaaa aatggatcat gtttatgtca 2760
tgtttggcta atggcaagac cctggcaccc agtctgggct caaattctgc ctcattgtta 2820
cttagccctg tgacattggg taaattacac tttttttttt tttttttttt tgagacgggg 2880
tctcgctctg tcgcccaggc tggagtgcag tggcacgatc tcggctcact gcaagtccgc 2940
ctcctgggtt cacgccattc ttctgcctca gcctcccgag tagctgggac tacaggcgcc 3000
tgccaccacg cctggctctt tttttttttt tttttttttt tagtacagac ggggtttcac 3060
catgttagcc agggtggtct caatctcctg acctcgtgat tcgcccgcct cagcctccca 3120
aagtgctggt gtgagccacc gtgcccagcc ttactttttt ttttgagagg gggtctcact 3180
ctgtcaccca ggttggagtg cagtggcgcg atctctgctc agtgcaaact ccacctcccg 3240
ggtttaagca gttctcctgt cgtagtctcc tgagtagctg ggattacagg cacaccacca 3300
cggccagcta atttttgtat tttcagtaga gacgggtttc accatgttgc ccaagctggt 3360
ctcgaactcc tggcctcaag tgatctgccc gccttggcct cccagagtgc tgggattaca 3420
ggtgtgagcc accgcacccg gcctcttttt tcttttttag tctatcatac cttgcaaata 3480
cagtggttct tcctatgtgt tggttttgat atttatgtaa tcaaacacat cagtttttcc 3540
tttctgattt ctgactttgg ggtcatgctg agaaagtcct ttcctacctg aagataatac 3600
agtatatacg tttcttacta gtatttttgt ggatttttaa aatatttaaa tctttagtcc 3660
atctgaactt gttcttctat cagaaatgcc acatttaata aataataagt cccatggtat 3720
cagatggctg gaaggacctc tttcgaaact ttgtttaatt ccattaatct gtgtattctt 3780
attctaatgc taatagttcc acactagctt cctttatctt ttttttcttt tttttttttt 3840
ttttgagctg gagtttcgct cttgttgccc aggctggagt acaatgtcac gatctcggtt 3900
caccgcaacc tccgcctccc aggttcaagc aattctcctg cctcatcctc gcgagtagct 3960
ggaattacag gcatgcgcca ccacgcctag ctattttgta tttttagtag agatggggtt 4020
tctccatgtt ggtcaggctg gtctcaaact cccagcctca ggtgatctgc ctgcctcggc 4080
ctcccaaaat gctgttatta caggcgtgag ccaccacgcc cagccttcat cttttaatga 4140
atgtacatgt atgtaatctt ttaggtgaac tttttgtaat gttgtgccaa gttccttaaa 4200
aagccctttt ggaagctggg caggtggcca cgcctgtaat cccagcattt tgggagtctg 4260
aggcaggtgg atcacttgag gccaggagtt caagactagc ctagccaaaa tgcaaaaccc 4320
tgtctctact aaagatacaa aaattagccg gatgcgatgg cacatgcctg taatctcagc 4380
tactcgggag gctgaggtag aagaatcgct tgaaccgggg aggcagaggt tgcagtgagc 4440
aagatggcgc cactgcactc cagcctgggt gacagaggga gactccatct caaaaaaaaa 4500
aaaaaaaaaa aagataaaaa ggaaacctaa gtactcttgg gctttgttaa ggattttgtt 4560
aaatatacaa aggattgcag ggaaaattaa cttattttta atattgagta tgcttatcca 4620
agagcaaaat aatatttctc catttattca aatcatttag gagcatcata gttttaacat 4680
atgggccttg cacgtatctt aaatttatct ctaggcattt taggttgttc agttgttctt 4740
gtgaatggga tctttttctc caaataggat tattgttgat atctgttgat tatgttaact 4800
ttgtagtttc tgactttact gaactgtctt cttagatcta atactctttt caatttcatc 4860
atatatttct cattcctatt ttgtttgggg tttttagggc gggaatatta acgggataag 4920
agagacaaaa gaaaatctgg aaaaacaatt cattttacct tacattgctt gtgattacta 4980
ccacactatt actgggttgg aaaaaattgt gaaatcccaa ggtgcctaat aaatgggagg 5040
tacctaagtg ttcatttaat gaattgtaat gattattgga atttctcttt cagtgagaag 5100
ctcttcatgg agatggcaga gctcatggtc tcagaaggct ggaaggatgc aggttatgag 5160
tacctctgca ttgatgactg ttggatggct ccccaaagag attcagaagg cagacttcag 5220
gcagaccctc agcgctttcc tcatgggatt cgccagctag ctaattatgt gagtttatag 5280
ataatgttct tgttcattca gaggactgta agcacttctg tacagaagct tgtttagaaa 5340
cagccctcat ggccgggcgt ggtggctcac gctgtaatcc caacactttg ggaggccgag 5400
gcgggtggat cacctgaggt caagagttca agaccagcct ggccaacatg gtgaaacccc 5460
aactctatta aaagtacaaa aaattagctg ggcatggtgg tgaacgcctg taaccccagc 5520
tacttgggag gctgaggcag gagaatcgct tgaacccagg aggtggaagt ttcagtgagc 5580
tgagatcacg ccattgcact ctagcctggg caacaaaaga gaaactccat ctcaaaaaaa 5640
aaaacaagga aaaaaagaaa cagccctcat gacacttaga aagtagaata gctggctgtt 5700
atctgaacat tgaattgtaa ggcttatcag gtggactttg cattccatca gcagacaatt 5760
tttttttttt tttttttttg agatggagtc tcattctgtc tcccaggctg gagggcagtg 5820
gtgcgatctc ggctcactgc aagctccacc tcctgggttc atgccattct cctgcctcag 5880
cctcccaagt agctgggacc acaggcaccc gccaccatgc ccagttaatt ttttgtattt 5940
ttagtagaga cggggtttca ccatgttagc caagatggtc tcgatctcct gacctcgtga 6000
tccgcccacc tcggcctccc aaagtgctgg gattacaggc atgagccacc gcgcctagcc 6060
tacaaatgtt ttgtaatagc tcttgaggcc catcttggag ttctcctttt gctaaaacca 6120
ctgaactctc taggaggaaa aaggaacttg gttcttgaca tatgtgtgca tgtatttcca 6180
tataaccttt aggaagctat tgcaatggta ctataaacta gaattttaga agatagaagg 6240
aaaatattct ggagatcatt gaagagaaat ggagtccaac actagttaaa gatgatgaag 6300
acagattttt ttttttgacg gagtctcgct ctgtcgccca ggctggagtg cagtggcaca 6360
atctcagctc actgcaaccc tccacctctt gggttcaagt gattctcctg cctcagcctc 6420
ccaagtagct gggactacag gcgcacacca ccacgcccgg ctaatttttg tatttttagt 6480
agagacaagg tttcaccata ttcgccaggc tggtctcgaa ctcctgacct tgtaatccgc 6540
ccaccttggc ctcccaaagt gctgggatta caggcatgag ccaccacgcc cggccgatga 6600
agacagattt tattcagtac taccacagta gaggaaagag ccaagttcaa ttccaaatac 6660
aacaaagaca ggtggagatt tatagccaat gagcagattg agggggtcag tggatggaat 6720
atttaagaag acatcaaggg tagggagctt cttgctaaag cttcatgtac ttaaacaaga 6780
agggtggggg atgagggaaa ttgatcagat atcaatggtg gcagtattga cttagcagga 6840
ttcttgctaa gaggtcttgc taggacagac ataggaagcc aaggtggagg tctagtcgaa 6900
aagaaggctc atcagagaag tctaactaaa gtttggtcaa gaagagtctt tgtcaaggta 6960
aatctatcat ttccctcaaa aggtaatttt caggatccca tcaggaagat tagcatggct 7020
gctagctttc tcctcagttc tgggctatag ctcacatgcc tagtttgaac tagctcagca 7080
gaactggggg atttattctt tgtcttccaa caaactcatc tggatgattt tgggggtttg 7140
tggggaaaag cccccaatac ctggtgaagt aaccttgtct cttcccccag cctggaatgg 7200
ttctctcttt ctgctacctc acgattgtgc ttctacaatg gtgactcttt tcctccctct 7260
catttcaggt tcacagcaaa ggactgaagc tagggattta tgcagatgtt ggaaataaaa 7320
cctgcgcagg cttccctggg agttttggat actacgacat tgatgcccag acctttgctg 7380
actggggagt agatctgcta aaatttgatg gttgttactg tgacagtttg gaaaatttgg 7440
cagatggtaa tgtttcattc cagagattta gccacaaagg aaagaacttt gaggccatgg 7500
tagctgagcc aaagaaccaa tcttcagaat tttaaatacc ctgtcacaat actggaaata 7560
attattctcc atgtgccaga gctcccatct cttctctttc agttcattaa ttaattaatt 7620
aattcatgta aaatccatgc atacctaacc atagctaata ttgtgcactt ataattcaag 7680
agggctctaa gagttaatta gtaattgtaa ctctctataa catcatttag gggagtccag 7740
gttgtcaatc ggtcacagag aaagaagcat cttcattcct gcctttcctc aatatacaca 7800
ccatctctgc actacttcct cagaacaatc ccagcagtct gggaggtact ttacacaatt 7860
taagcacaga gcaactgcct gtccctgctg ctagtttaaa catgaacctt ccaggtagcc 7920
tcttcttaaa atatacagcc ccagctgggc atgatggctc atgcctgtaa tcctagcact 7980
ttgggaggct gaggcgggtg gattacttga ggtcaggagt tcgagaccac cctggccaac 8040
atggtgaaac cccatctcta gtaaaaatac aaaaattagc tgactttggt ggcacatgcc 8100
tgtaatccca gctacttggg aagctgagac agaagagtca cttgaacctg ggaaacagag 8160
gttgcagtga gccaagatcg caccactgca ctccaccctg gatgacagac tgaaccccat 8220
ctcaaaaaat taaaataaaa taaaataaaa taactatata tatagcccca gctggaaatt 8280
catttctttc ccttatttta cccattgttt tctcatacag gttataagca catgtccttg 8340
gccctgaata ggactggcag aagcattgtg tactcctgtg agtggcctct ttatatgtgg 8400
ccctttcaaa aggtgagata gtgagcccag aatccaatag aactgtactg atagatagaa 8460
cttgacaaca aaggaaacca aggtctcctt caaagtccaa cgttacttac tatcatccta 8520
ccatctctcc caggttccaa ccacttctca ccatccccac tgctgtaatt atagcctaag 8580
ctaccatcac ctggaaagtc atccttgtgt cttccccttt atttcaccat tcatgtcctg 8640
tctatcaaca gtccttccac cagtatctct aaaatatctc ctgaatcagc ccacttcctt 8700
ccatcttcac tacatgcacc ctggccttcc aagctactat cggctctcaa ccagactgct 8760
gggaccacct gatctctctg cttccactct gtctcaaccc ccatctattt tccaagcagc 8820
actagagtta tcatattaaa atgtaaatat cagttttttt tttaaagaaa aaaaccctga 8880
gacttaacag agttataaaa aatataaatg tcatcatcag ttccctgctt aaaaccctta 8940
actcgcttcc aattgcactt ggaatgaaac caaactgcac tgatccagcc cttgcctgcc 9000
tccccaaagt ccaaggggtc atggctcttt ccctggctac actggttttc tttctgtccc 9060
tcaacactgc aagcctattg ctgccccagg gcctttacac ttgctttttt tctgcctaga 9120
acagttcttc cccaaagatt tttaaagggc cgggctcctt aacattgaag tcgcagacca 9180
aacgccacat atgcagacag ttcttctcta actactttaa aatagccctc tgtccattca 9240
ttcttcatca cattaacctg tttaattttc ttctcagagc tccacactat ttggaagtat 9300
ttgttgactt gttaccatgt ctccccacta gagtgtaagt ttcatgaggg cagggacctt 9360
gtctgacttt gactgtatct ctcgcatatg gttaagtgtt aaatagttat ttatggaatg 9420
aatccctatt attccctcat tatctctgca aaatagtctt ttttctcaac atcttaaacc 9480
tgatatccca cctgcctatc tacaaacttt ttttttgcga cagagtctca ctgtcaccca 9540
ggctagagtg cagtggcgcc atctcggctc actgcaacct ccgcctcccg ggtttaagcg 9600
attctcttgc ctcagcctcc cagtagctgg gattataggc gtgcgctacc acatctggct 9660
aatttttgta tttttagtag agatggtttc accatgttgg ccaggcttgt ctcgaactcc 9720
tgacctcaga tgatccacct gcctcggcct cccaaagtgc tgggattaca ggcatgagcc 9780
accgtgccca gcctctacaa actttttatt ccattaacaa actatatgct gggatttaag 9840
ttttcttaat acttgatgga gtcctatgta attttcgagc ttttaatttt actaagacca 9900
ttttagttct gattatagaa gtaaattaac tttaagggat ttcaagttat atggcctact 9960
tctgaagcaa acttcttaca gtgaaaattc attataaggg tttagacctc cttatggaga 10020
cgttcaatct gtaaactcaa gagaaggcta caagtgcctc ctttaaactg ttttcatctc 10080
acaaggatgt tagtagaaag taaacagaag agtcatatct gttttcacag cccaattata 10140
cagaaatccg acagtactgc aatcactggc gaaattttgc tgacattgat gattcctgga 10200
aaagtataaa gagtatcttg gactggacat cttttaacca ggagagaatt gttgatgttg 10260
ctggaccagg gggttggaat gacccagata tggtaaaaac ttgagccctc cttgttcaag 10320
accctgcggt aggcttgttt cctattttga cattcaaggt aaatacaggt aaagttcctg 10380
ggaggaggct ttatgtgaga gtacttagag caggatgctg tggaaagtgg tttctccata 10440
tgggtcatct aggtaacttt aagaatgttt cctcctctct tgtttgaatt atttcattct 10500
ttttctcagt tagtgattgg caactttggc ctcagctgga atcagcaagt aactcagatg 10560
gccctctggg ctatcatggc tgctccttta ttcatgtcta atgacctccg acacatcagc 10620
cctcaagcca aagctctcct tcaggataag gacgtaattg ccatcaatca ggaccccttg 10680
ggcaagcaag ggtaccagct tagacaggta aataagagta tatattttaa gatggcttta 10740
tatacccaat accaactttg tcttgggcct aaatctattt ttttcccttg ctcttgatgt 10800
tactatcagt aataaagctt cttgctagaa acattacttt atttccaaaa taatgctaca 10860
ggatcatttt aatttttcct acaagtgctt gatagttctg acattaagaa tgaatgccaa 10920
actaacaggg ccacttatca ctagttgcta agcaaccaca ctttcttggt ttttcaggga 10980
gacaactttg aagtgtggga acgacctctc tcaggcttag cctgggctgt agctatgata 11040
aaccggcagg agattggtgg acctcgctct tataccatcg cagttgcttc cctgggtaaa 11100
ggagtggcct gtaatcctgc ctgcttcatc acacagctcc tccctgtgaa aaggaagcta 11160
gggttctatg aatggacttc aaggttaaga agtcacataa atcccacagg cactgttttg 11220
cttcagctag aaaatacaat gcagatgtca ttaaaagact tactttaaaa tgtttatttt 11280
attgccaact actacttcct gtccaccttt ttctccattc actttaaaag ctcaaggcta 11340
ggtggctcat gcctgtaatc ccagcacttt gggaggctga ggcgggcaga tcacctgagg 11400
tcgggacttt gagacccgcc tggacaacat ggtgaaaccc catttctaat aaaaatataa 11460
aaattagcca ggtgtggtgg cgcacctgtg gtcccagcta ctctgggggc tgaggcatga 11520
gaatcgcttg aacccgggag tggaggttgc attgagctga gatcatgcca cctcactcca 11580
gcctgggcaa caaagattcc atctcaaaaa aaaaaaaaaa gccaggcaca gtggctcatg 11640
cctggaatcc cagcactttt ggaagctgag gcaggcagat cacttgaggt taggatttca 11700
agaccagcct ggctaacata gtaaagccct gtctctacta aaaatacaaa aattagccag 11760
gtatggtggc gagcttctgt agccccagct actcaggaga ctgaggcagg agaatcactt 11820
gaacccggga agtggggggg tgcagtgacc caagatcacg ccactgcatt ccagcctggg 11880
caacagagca agactccatc tcaaaaaaaa aagttctatt tccttgaata aaattttccg 11940
aagtttaaac tttaggaata aaactattaa acccgtattt actcatccag atacccaccc 12000
cccttgttga gattctctcc caattatcaa aatgtgtagc atatttaact accaagagct 12060
aaacatcatt aagactgaaa tgtattaaga aggatgtata ggccaggcac ggtgtctcac 12120
gcctgtaatc ccaacacttt gggaggccaa gtcgggcgga tcacgaggtc aggagatgga 12180
gaccatcctg gccaacatgg tgaaaccccc tctctactaa aaatacaaaa attagccagg 12240
caggtggcag gcacctgtaa tcccagctac tccagaggct gaggcaggac aatcacttga 12300
acctgggagg cagaggctgc agtgagctga ggttgtacca attgcactcc agcctaggta 12360
acgagcaaca ctccatctca aaaaaagaaa aaaaaaaaga tgtataattt ggaactgtta 12420
agaggcattt taaaga 12436
<210> 2
<211> 429
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 2
Met Gln Leu Arg Asn Pro Glu Leu His Leu Gly Cys Ala Leu Ala Leu
1 5 10 15
Arg Phe Leu Ala Leu Val Ser Trp Asp Ile Pro Gly Ala Arg Ala Leu
20 25 30
Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Thr Met Gly Trp Leu His Trp Glu
35 40 45
Arg Phe Met Cys Asn Leu Asp Cys Gln Glu Glu Pro Asp Ser Cys Ile
50 55 60
Ser Glu Lys Leu Phe Met Glu Met Ala Glu Leu Met Val Ser Glu Gly
65 70 75 80
Trp Lys Asp Ala Gly Tyr Glu Tyr Leu Cys Ile Asp Asp Cys Trp Met
85 90 95
Ala Pro Gln Arg Asp Ser Glu Gly Arg Leu Gln Ala Asp Pro Gln Arg
100 105 110
Phe Pro His Gly Ile Arg Gln Leu Ala Asn Tyr Val His Ser Lys Gly
115 120 125
Leu Lys Leu Gly Ile Tyr Ala Asp Val Gly Asn Lys Thr Cys Ala Gly
130 135 140
Phe Pro Gly Ser Phe Gly Tyr Tyr Asp Ile Asp Ala Gln Thr Phe Ala
145 150 155 160
Asp Trp Gly Val Asp Leu Leu Lys Phe Asp Gly Cys Tyr Cys Asp Ser
165 170 175
Leu Glu Asn Leu Ala Asp Gly Tyr Lys His Met Ser Leu Ala Leu Asn
180 185 190
Arg Thr Gly Arg Ser Ile Val Tyr Ser Cys Glu Trp Pro Leu Tyr Met
195 200 205
Trp Pro Phe Gln Lys Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Arg Gln Tyr Cys Asn
210 215 220
His Trp Arg Asn Phe Ala Asp Ile Asp Asp Ser Trp Lys Ser Ile Lys
225 230 235 240
Ser Ile Leu Asp Trp Thr Ser Phe Asn Gln Glu Arg Ile Val Asp Val
245 250 255
Ala Gly Pro Gly Gly Trp Asn Asp Pro Asp Met Leu Val Ile Gly Asn
260 265 270
Phe Gly Leu Ser Trp Asn Gln Gln Val Thr Gln Met Ala Leu Trp Ala
275 280 285
Ile Met Ala Ala Pro Leu Phe Met Ser Asn Asp Leu Arg His Ile Ser
290 295 300
Pro Gln Ala Lys Ala Leu Leu Gln Asp Lys Asp Val Ile Ala Ile Asn
305 310 315 320
Gln Asp Pro Leu Gly Lys Gln Gly Tyr Gln Leu Arg Gln Gly Asp Asn
325 330 335
Phe Glu Val Trp Glu Arg Pro Leu Ser Gly Leu Ala Trp Ala Val Ala
340 345 350
Met Ile Asn Arg Gln Glu Ile Gly Gly Pro Arg Ser Tyr Thr Ile Ala
355 360 365
Val Ala Ser Leu Gly Lys Gly Val Ala Cys Asn Pro Ala Cys Phe Ile
370 375 380
Thr Gln Leu Leu Pro Val Lys Arg Lys Leu Gly Phe Tyr Glu Trp Thr
385 390 395 400
Ser Arg Leu Arg Ser His Ile Asn Pro Thr Gly Thr Val Leu Leu Gln
405 410 415
Leu Glu Asn Thr Met Gln Met Ser Leu Lys Asp Leu Leu
420 425
<210> 3
<211> 1290
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 3
atgcagctga ggaatcccga gctccacctg ggctgtgctc tggctctgcg gttcctggcc 60
ctcgtgtcct gggacatccc tggcgctagg gccctcgata acggactggc ccggaccccc 120
acaatgggat ggctccactg ggaaaggttc atgtgcaatc tggactgtca ggaggaaccc 180
gactcctgca tcagcgaaaa gctcttcatg gagatggccg agctgatggt gagcgagggc 240
tggaaggacg ccggctacga gtatctgtgc atcgatgact gctggatggc ccctcaaagg 300
gactccgaag gcaggctgca ggctgatccc caaaggtttc cccacggaat ccggcagctc 360
gccaactacg tgcattccaa gggcctcaag ctcggcatct acgccgacgt gggcaacaaa 420
acatgcgccg gattccccgg cagcttcggc tactacgaca tcgacgccca gacattcgct 480
gattggggag tggacctgct gaagttcgac ggctgttact gcgattccct ggaaaacctg 540
gccgacggct acaaacacat gtccctcgcc ctgaaccgga caggcaggtc catcgtgtac 600
agctgcgagt ggcccctgta catgtggcct ttccagaagc ccaactacac agagatcagg 660
cagtactgca accactggag gaacttcgct gacatcgacg actcctggaa gagcatcaag 720
agcatcctgg actggaccag cttcaaccag gagaggatcg tggacgtggc tggacccgga 780
ggctggaacg accccgatat gctggtgatt ggcaacttcg gactgagctg gaaccagcag 840
gtgacccaga tggccctgtg ggccattatg gccgctcccc tgttcatgtc caacgacctg 900
aggcacatca gcccccaggc caaggctctg ctgcaggaca aggatgtgat cgccatcaac 960
caggaccccc tgggcaagca gggctaccag ctgaggcaag gagataactt cgaggtgtgg 1020
gagaggcccc tgtccggact ggcttgggcc gtggccatga tcaatcggca ggagatcggc 1080
ggaccccggt cctacaccat tgctgtggcc agcctgggaa aaggagtcgc ctgcaacccc 1140
gcctgcttca ttacccagct gctccccgtg aagcggaagc tgggcttcta tgagtggacc 1200
agcaggctga ggtcccatat caatcctacc ggcaccgtcc tcctccagct cgagaatacc 1260
atgcagatga gcctcaagga tctgctgtga 1290

Claims (74)

1.一种增强患有法布里病的患者的心脏功能的方法，所述方法包括每隔一天向所述患者施用包含有效量的米加司他或其盐的制剂用于增强所述患者的心脏功能，其中所述有效量为约100mg至约150mg的游离碱当量(FBE)。
2.如权利要求1所述的方法，其中增强心脏功能包括增强左心室收缩功能。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中在开始施用所述米加司他或其盐之前，所述患者具有受损的室壁中层缩短率(MWFS)。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述米加司他或其盐增强α-半乳糖苷酶A活性。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中每隔一天向所述患者施用约123mg FBE的所述米加司他或其盐。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中每隔一天向所述患者施用约123mg的米加司他游离碱。
7.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中每隔一天向所述患者施用约150mg的米加司他盐酸盐。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述制剂包括口服剂型。
9.如权利要求8所述的方法，其中所述口服剂型包括片剂、胶囊或溶液。
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中将所述米加司他或其盐施用至少12个月。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中将所述米加司他或其盐施用至少24个月。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述患者是酶替代疗法(ERT)初治的患者。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中在施用米加司他或其盐24个月后，米加司他或其盐的施用在具有受损的MWFS的ERT初治的患者组中提供了至少约1％的MWFS的平均增加。
14.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述患者是已经历ERT的患者。
15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述患者在α-半乳糖苷酶A中具有HEK测定顺从性突变。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述突变被公开于药理学参考表中。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述药理学参考表被提供在批准用于治疗法布里病的米加司他产品的产品标签中。
18.如权利要求16所述的方法，其中所述药理学参考表被提供在
Figure FDA0002395051710000021
的产品标签中。
19.如权利要求16所述的方法，其中所述药理学参考表在网站上提供。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述网站是www.galafoldamenabilitytable.com或www.fabrygenevariantsearch.com中的一个或多个。
21.一种增加患有法布里病患者的室壁中层缩短率(MWFS)的方法，所述方法包括每隔一天向所述患者施用包含有效量的米加司他或其盐的制剂用于增加所述患者的MWFS，其中所述有效量为约100mg至约150mg的游离碱当量(FBE)。
22.如权利要求21所述的方法，其中在开始施用所述米加司他或其盐之前，所述患者具有受损的MWFS。
23.如权利要求21或22所述的方法，其中所述米加司他或其盐增强α-半乳糖苷酶A活性。
24.如权利要求21-23中任一项所述的方法，其中每隔一天向所述患者施用约123mgFBE的所述米加司他或其盐。
25.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中每隔一天向所述患者施用约123mg的米加司他游离碱。
26.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中每隔一天向所述患者施用约150mg的米加司他盐酸盐。
27.如权利要求21-26中任一项所述的方法，其中所述制剂包括口服剂型。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述口服剂型包括片剂、胶囊或溶液。
29.如权利要求21-28中任一项所述的方法，其中将所述米加司他或其盐施用至少12个月。
30.如权利要求21-29中任一项所述的方法，其中将所述米加司他或其盐施用至少24个月。
31.如权利要求21-30中任一项所述的方法，其中所述患者是酶替代疗法(ERT)初治的患者。
32.如权利要求21-31中任一项所述的方法，其中在施用米加司他或其盐24个月后，米加司他或其盐的施用在具有受损的MWFS的ERT初治的患者组中提供了至少约1％的MWFS的平均增加。
33.如权利要求21-30中任一项所述的方法，其中所述患者是已经历ERT的患者。
34.如权利要求21-33中任一项所述的方法，其中所述患者在α-半乳糖苷酶A中具有HEK测定顺从性突变。
35.如权利要求34所述的方法，其中所述突变被公开于药理学参考表中。
36.如权利要求35所述的方法，其中所述药理学参考表被提供在批准用于治疗法布里病的米加司他产品的产品标签中。
37.如权利要求35所述的方法，其中所述药理学参考表被提供在
Figure FDA0002395051710000031
的产品标签中。
38.如权利要求35所述的方法，其中所述药理学参考表在网站上提供。
39.如权利要求38所述的方法，其中所述网站是www.galafoldamenabilitytable.com或www.fabrygenevariantsearch.com中的一个或多个。
40.一种正常化具有法布里病和受损的MWFS的患者的室壁中层缩短率(MWFS)的方法，所述方法包括每隔一天向所述患者施用包含有效量的米加司他或其盐的制剂用于正常化所述患者的MWFS，其中所述有效量为约100mg至约150mg的游离碱当量(FBE)。
41.如权利要求40所述的方法，其中所述米加司他或其盐增强α-半乳糖苷酶A活性。
42.如权利要求40或41所述的方法，其中每隔一天向所述患者施用约123mg FBE的所述米加司他或其盐。
43.如权利要求40-42中任一项所述的方法，其中每隔一天向所述患者施用约123mg的米加司他游离碱。
44.如权利要求40-42中任一项所述的方法，其中每隔一天向所述患者施用约150mg的米加司他盐酸盐。
45.如权利要求40-44中任一项所述的方法，其中所述制剂包括口服剂型。
46.如权利要求45所述的方法，其中所述口服剂型包括片剂、胶囊或溶液。
47.如权利要求40-46中任一项所述的方法，其中将所述米加司他或其盐施用至少12个月。
48.如权利要求40-47中任一项所述的方法，其中将所述米加司他或其盐施用至少24个月。
49.如权利要求40-48中任一项所述的方法，其中所述患者是酶替代疗法(ERT)初治的患者。
50.如权利要求40-49中任一项所述的方法，其中在施用米加司他或其盐24个月后，米加司他或其盐的施用在具有受损的MWFS的ERT初治的患者组中提供了至少约1％的MWFS的平均增加。
51.如权利要求40-50中任一项所述的方法，其中所述患者在α-半乳糖苷酶A中具有HEK测定顺从性突变。
52.如权利要求51所述的方法，其中所述突变被公开于药理学参考表中。
53.如权利要求52所述的方法，其中所述药理学参考表被提供在批准用于治疗法布里病的米加司他产品的产品标签中。
54.如权利要求52所述的方法，其中所述药理学参考表被提供在
Figure FDA0002395051710000041
的产品标签中。
55.如权利要求52所述的方法，其中所述药理学参考表在网站上提供。
56.如权利要求55所述的方法，其中所述网站是www.galafoldamenabilitytable.com或www.fabrygenevariantsearch.com中的一个或多个。
57.一种稳定已经历酶替代疗法(ERT)的患有法布里病患者的室壁中层缩短率(MWFS)的方法，所述方法包括每隔一天向所述患者施用包含有效量的米加司他或其盐的制剂用于稳定所述患者的MWFS，其中所述有效量为约100mg至约150mg的游离碱当量(FBE)。
58.如权利要求57所述的方法，其中在开始施用所述米加司他或其盐之前，所述患者具有受损的MWFS。
59.如权利要求57或58所述的方法，其中所述米加司他或其盐增强α-半乳糖苷酶A活性。
60.如权利要求57-59中任一项所述的方法，其中每隔一天向所述患者施用约123mgFBE的所述米加司他或其盐。
61.如权利要求57-60中任一项所述的方法，其中每隔一天向所述患者施用约123mg的米加司他游离碱。
62.如权利要求57-60中任一项所述的方法，其中每隔一天向所述患者施用约150mg的米加司他盐酸盐。
63.如权利要求57-62中任一项所述的方法，其中所述制剂包括口服剂型。
64.如权利要求63所述的方法，其中所述口服剂型包括片剂、胶囊或溶液。
65.如权利要求57-64中任一项所述的方法，其中将所述米加司他或其盐施用至少12个月。
66.如权利要求57-65中任一项所述的方法，其中将所述米加司他或其盐施用至少30个月。
67.如权利要求57-66中任一项所述的方法，其中所述患者是已经历酶替代疗法(ERT)的患者。
68.如权利要求57-67中任一项所述的方法，其中在施用米加司他或其盐30个月后，米加司他或其盐的施用在具有受损的MWFS的已经历ERT的患者组中提供了大于约-0.5％的MWFS的平均变化。
69.如权利要求57-68中任一项所述的方法，其中所述患者在α-半乳糖苷酶A中具有HEK测定顺从性突变。
70.如权利要求69所述的方法，其中所述突变被公开于药理学参考表中。
71.如权利要求70所述的方法，其中所述药理学参考表被提供在批准用于治疗法布里病的米加司他产品的产品标签中。
72.如权利要求70所述的方法，其中所述药理学参考表被提供在
Figure FDA0002395051710000061
的产品标签中。
73.如权利要求70所述的方法，其中所述药理学参考表在网站上提供。
74.如权利要求73所述的方法，其中所述网站是www.galafoldamenabilitytable.com或www.fabrygenevariantsearch.com中的一个或多个。
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