CN111758567B - 一种采用共生菌剂的蝴蝶兰单芽繁殖方法 - Google Patents

一种采用共生菌剂的蝴蝶兰单芽繁殖方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种蝴蝶兰单芽繁殖方法，包括以下步骤：S1，取春季生长健壮的、饱满带腋芽的花梗茎段为外植体并进行消毒处理；S2，将带腋芽外植体切成长1.5cm接到芽诱导培养基中进行腋芽诱导；S3，待步骤S2中腋芽长至2cm时，将芽苗切下转到增殖培养基中进行增殖培养；S4，当增殖培养芽苗＞2cm，长至3‑4片叶时，去除小于2cm的弱苗、无效苗，选择＞2cm的苗进行壮苗生根培养；S5，将培养瓶苗移到25‑30℃温度条件下炼苗10‑15天，之后便可将带根的苗从培养瓶中取出，用流动自来水把根部附着的残留培养基洗干净并晾干到不滴水为止，然后移栽入事先配制混合好的基质中并压实，栽后第一次要浇透水，之后隔4‑6天浇水。该方法的繁殖周期短，苗壮，适应性强，品质好。

Description

一种采用共生菌剂的蝴蝶兰单芽繁殖方法
技术领域
本发明涉及一种采用共生菌剂的蝴蝶兰单芽繁殖方法，属于蝴蝶兰繁殖技术领域。
背景技术
蝴蝶兰观赏价值极高，素有“兰花皇后”之美誉，倍受国内外消费者亲睐。然而，蝴蝶兰是单茎性气生兰，很难进行常规的分株繁殖，因此大多采用组织培养繁殖种苗。但是，目前的蝴蝶兰的组织培养的周期过长，繁殖太慢，成活率低，导致其产量满足不了市场的需求。
发明内容
本发明提供了一种采用共生菌剂的蝴蝶兰单芽繁殖方法，可以有效解决上述问题。
本发明是这样实现的：
一种采用共生菌剂的蝴蝶兰单芽繁殖方法，包括以下步骤：
S1，取春季生长健壮的、带饱满腋芽的花梗茎段为外植体，对外植体进行消毒处理；
S2，将外植体成长1.5cm接到腋芽诱导培养基中进行腋芽诱导，所述腋芽诱导培养基：MS+1.5mg/L 6-BA+0.3mg/LNAA+50mL/L椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂粉6.5g/L，pH值调至5.4-5.8；培养温度为2322℃，光照时间10h/d,光照强度1500-2000lx，培养8-20d；
S3，待步骤S2中腋芽长至2cm时，无菌条件下，在培养瓶内将外植体平移到没有褐色单宁的位置继续培养，经25-45d培养后，将腋芽切下转到增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养基：MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/LNAA+2.0g/L蛋白胨，添加蔗糖30g/L，琼脂粉6.5g/L，pH值调至5.4-5.8；培养30-40d,培养条件同步骤S2；
S4，当增殖培养的芽苗＞2cm，长至3-4片叶时，去除小于2cm的弱苗、无效苗，选择＞2cm的壮苗进行壮苗生根培养，生根培养基：1/2MS+NAA0.2mg/L+60g/L土豆，添加蔗糖30g/L，琼脂粉6.5g/L，pH值调至5.4-5.8；培养30-40d，培养条件同步骤S2；
S5，将培养室内培养瓶移在25-30℃温度条件下炼苗10-15天，接着旋开瓶盖在自然条件下再炼苗1-2天，之后便可将带根的苗从培养瓶中取出，用流动自来水把根部附着的残留培养基洗干净并晾干到不滴水为止，然后然后把苗根部包裹后栽入盛有混合好的基质的1.5寸杯中并一次性压实，栽后第一次要浇透水，之后隔4-6天浇水；
S6，所述移栽后进行栽培苗管理过程中，浇水管理系统均将共生菌剂、肥料和水进行混匀后一次性浇注,4-6天浇注一次，每次100-200kg/亩，保证不烂根，无病虫害。
作为进一步改进的，在步骤S2中，所述腋芽诱导培养基中还加入氨苄青霉素200mg/L和硫酸链霉素150mg/L。
作为进一步改进的，在步骤S1中，所述消毒处理为在超净工作台内，先不剥开腋芽处苞片苞片，用75％酒精擦洗消毒20-25s，再剥开腋芽处苞片，用75％酒精再次轻微擦洗腋芽部；用2％次氯酸钠消毒浸泡10min；用无菌水冲3-4遍；用消毒滤纸吸干腋芽花梗茎段表面水份。
作为进一步改进的，在步骤S5中，所述炼苗在3月下旬气温稳定在18-22℃时进行。
作为进一步改进的，所述移栽所用的基质包括水苔、椰糠、泥炭土。
作为进一步改进的，所述肥料为：在蝴蝶兰未开花前为稀释3000倍至4000倍的NPK202020或者NPK301010，蝴蝶兰开花后为稀释2000倍用NPK103020。
作为进一步改进的，所述共生菌剂含有0.3wt％大芽孢杆菌和0.4wt％枯草芽孢杆菌。
本发明的有益效果是：
本发明的采用共生菌剂的蝴蝶兰单芽繁殖方法，由于腋芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基的中含有椰子汁、琼脂粉、土豆、蛋白胨等，及其其他的培养条件的协同作用，使得腋芽诱导、增殖培养和生根培养的时间大大缩短，整个繁殖周期也缩短，苗壮，适应性强，移栽20d后成活率达71％，且苗生长良好，能够满足市场的对产量的需求。
本发明的栽培苗管理过程中，浇水管理系统均将共生菌剂、肥料和水进行混匀后一次性浇注，此共生菌剂和肥料，不产生环境污染且满足了蝴蝶兰生长所需的营养物质，并增强了蝴蝶兰的抗病害能力以及提高产量，蝴蝶兰生长健壮，同时还有利于改良土壤，提高土壤肥肥力水平，保护生态环境。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施方式的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1是本发明实施例1的蝴蝶兰移栽后的苗的图。
图2是本发明实施例1的蝴蝶兰开花后的生长状态图。
具体实施方式
为使本发明实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施方式中的附图，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。因此，以下对在附图中提供的本发明的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
在本发明的描述中，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
一种采用共生菌剂的蝴蝶兰单芽繁殖方法，包括以下步骤：
S1，取春季生长健壮的、带饱满腋芽的花梗茎段为外植体，对外植体进行消毒处理。
S2，将外植体成长1.5cm接到腋芽诱导培养基中进行腋芽诱导，所述腋芽诱导培养基：MS+1.5mg/L 6-BA+0.3mg/LNAA+50mL/L椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂粉6.5g/L，pH值调至5.4-5.8；培养温度为2322℃，光照时间10h/d,光照强度1500-2000lx，培养8-20d。此培养基中椰子汁和琼脂粉非常关键，能为蝴蝶兰的生长提供充分的营养，促进腋芽诱导，缩短繁殖周期。
S3，待步骤S2中腋芽长至2cm时，无菌条件下，在培养瓶内将外植体平移到没有褐色单宁的位置继续培养，在培养瓶这一同一空间内平移，不需另外再更换培养基，不仅降低了褐化率，而且节约了培养基，简化了操作，降低了成本。经25-45d培养后，将腋芽切下转到增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养基：MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/LNAA+2.0g/L蛋白胨，添加蔗糖30g/L，琼脂粉6.5g/L，pH值调至5.4-5.8；培养30-40d，培养条件同步骤S2。此培养基中蛋白胨和琼脂粉非常关键，能为蝴蝶兰的生长提供充分的营养，适宜于增殖培养，缩短繁殖周期。
S4，当增殖培养的芽苗＞2cm，长至3-4片叶时，去除小于2cm的弱苗、无效苗，选择＞2cm的壮苗进行壮苗生根培养，生根培养基：1/2MS+NAA0.2mg/L+60g/L土豆，添加蔗糖30g/L，琼脂粉6.5g/L，pH值调至5.4-5.8；培养30-40d，培养条件同步骤S2。此培养基中土豆和琼脂粉非常关键，能为蝴蝶兰的生长提供充分的营养，适宜于生根培养，促进生根，缩短繁殖周期。
S5，将培养室内培养瓶移在25-30℃温度条件下炼苗10-15天，接着旋开瓶盖在自然条件下再炼苗1-2天，之后便可将带根的苗从培养瓶中取出，用流动自来水把根部附着的残留培养基洗干净并晾干到不滴水为止，既可以为根部提供一定的水分，也不会导致水分过多而烂根，利于幼苗的生长。然后然后把苗根部包裹后栽入盛有混合好的基质的1.5寸杯中并一次性压实，栽后第一次要浇透水，之后隔4-6天浇水。
S6，所述移栽后进行栽培苗管理过程中，浇水管理系统均将共生菌剂、肥料和水进行混匀后一次性浇注，4-6天浇注一次，每次100-200kg/亩，保证不烂根，无病虫害。以薄肥勤施为准则并且需要浇水人员是长期专人只做浇蝴蝶兰苗水的管理人员，这样可适时根据植物需求对蝴蝶兰苗生长过程进行合理浇灌，以确保不烂根、无病虫害，从而保障苗生长和品质。此一次性浇注能够一次性的满足蝴蝶兰对水分、肥料及病虫害防治的需要，不需多次操作，节约人工，降低成本。
作为进一步改进的，在步骤S2中，所述腋芽诱导培养基中还加入氨苄青霉素200mg/L和硫酸链霉素150mg/L，此浓度的抗生素能够显著降低蝴蝶兰的污染率，同时也不影响蝴蝶兰的生长。
作为进一步改进的，在步骤S1中，所述消毒处理为在超净工作台内，先不剥开腋芽处苞片苞片，用75％酒精擦洗消毒20-25s，再剥开腋芽处苞片，用75％酒精再次轻微擦洗腋芽部；用2％次氯酸钠消毒浸泡10min；用无菌水冲3-4遍；用消毒滤纸吸干腋芽花梗茎段表面水份。
作为进一步改进的，在步骤S5中，所述炼苗在3月下旬气温稳定在18-22℃时进行。
作为进一步改进的，所述移栽所用的基质包括水苔、椰糠、泥炭土。此基质能为蝴蝶兰提供充足的营养，促进蝴蝶兰的生长，提高蝴蝶兰的成活率。
作为进一步改进的，所述肥料为：在蝴蝶兰未开花前为稀释3000倍至4000倍的NPK202020或者NPK301010，蝴蝶兰开花后为稀释2000倍用NPK103020。为蝴蝶兰提供充足的氮、磷、钾等营养元素，促进生长。
作为进一步改进的，所述共生菌剂含有0.3wt％大芽孢杆菌和0.4wt％枯草芽孢杆菌。此共生菌剂并增强了蝴蝶兰的抗病害能力以及提高产量，蝴蝶兰生长健壮，同时还有利于改良土壤，提高土壤肥肥力水平，保护生态环境。
实施例1
一种采用共生菌剂的蝴蝶兰单芽繁殖方法，包括以下步骤：
S1，取春季生长健壮的、带饱满腋芽的大辣椒蝴蝶兰花梗茎段为外植体，对外植体进行消毒处理；所述消毒处理为在超净工作台内，先不剥开腋芽处苞片，用75％酒精擦洗消毒20-25s，再剥开腋芽处苞片，用75％酒精再次轻微擦洗腋芽部；用2％次氯酸钠消毒浸泡10min；用无菌水冲3-4遍；用消毒滤纸吸干腋芽花梗茎段表面水份。此消毒方法使得蝴蝶兰的褐化率低。
S2，将外植体成长1.5cm接到腋芽诱导培养基中进行腋芽诱导，所述腋芽诱导培养基：MS+1.5mg/L 6-BA+0.3mg/LNAA+50mL/L椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂粉6.5g/L，pH值调至5.4-5.8；培养温度为2322℃，光照时间10h/d,光照强度1500-2000lx，培养10d；所述腋芽诱导培养基中还加入氨苄青霉素200mg/L和硫酸链霉素150mg/L，能将外植体的污染率从对照的83.33％降至36.67％。
S3，待步骤S2中腋芽长至2cm时，在这个期间腋芽的花梗茎段切口周围会产生大量的褐色单宁，可采取在无菌条件下把培养瓶内的外植体平移到没有褐色单宁的位置继续培养。这样降低了褐化率，同时也不需配置新的培养基从而节约了培养基。经30d培养后将腋芽切下转到增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养基：MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/LNAA+2.0g/L蛋白胨，添加蔗糖30g/L，琼脂粉6.5g/L，pH值调至5.4-5.8；培养30d,培养条件同步骤S2；增殖系数达4.0。
S4，当增殖培养的芽苗＞2cm，长至3-4片叶时，去除小于2cm的弱苗、无效苗，选择＞2cm的壮苗进行壮苗生根培养，生根培养基：1/2MS+NAA0.2mg/L+60g/L土豆，添加蔗糖30g/L，琼脂粉6.5g/L，pH值调至5.4-5.8；培养30d，培养条件同步骤S2；生根率达70％，平均主根数4条，平均根长5.4cm。
S5，在3月下旬气温稳定在18-22℃时进行炼苗。将培养室内培养瓶移在25-30℃温度条件下炼苗10天，接着旋开瓶盖在自然条件下再炼苗2天，之后便可将带根的苗从培养瓶中取出，用流动自来水把根部附着的残留培养基洗干净并晾干到不滴水为止，然后然后把苗根部包裹后栽入盛有混合好的基质的1.5寸杯中并一次性压实，栽后第一次要浇透水，之后隔4-6天浇水。移栽20d后成活率达71％，且苗生长良好。见附图1。所述移栽所用的基质包括水苔、椰糠、泥炭土。
所述移栽后进行移栽苗(1.5寸杯)、中苗(2.5寸杯)、大苗(3.5寸杯)的栽培苗管理过程中，浇水管理系统均将共生菌剂、肥料和水进行混匀后一次性浇注。4-6天浇注一次，每次100-200kg/亩。以薄肥勤施为准则并且需要浇水人员是长期专人只做浇蝴蝶兰苗水的管理人员，这样可适时根据植物需求对蝴蝶兰苗生长过程进行合理浇灌，以确保不烂根、无病虫害，从而保障苗生长和品质。
所述肥料为：在蝴蝶兰未开花前为稀释3000倍至4000倍的NPK202020或者NPK301010，蝴蝶兰开花后为稀释2000倍用NPK103020。
所述共生菌剂含有0.3wt％大芽孢杆菌和0.4wt％枯草芽孢杆菌。
这样整个蝴蝶兰苗园植珠壮硕，生根力强，生长一致性强，品相好，病虫害率在2％以下。见附图2。
对比例1
所述腋芽诱导培养基中不加椰子汁和琼脂粉，其他同实施例1，所述腋芽诱导至腋芽长至2cm时需要30天。
对比例2
所述增殖培养基中不加入蛋白胨和琼脂粉，其他同实施例1，所述增殖培养的增殖系数达4.0时需要的时间为50天。
对比例3
所述生根培养基中不加入土豆和琼脂粉，其他同实施例1，所述生根培养的生根率达70％时需要50天。
对比例4
栽培管理中不使用共生菌剂，其他同实施例1。蝴蝶兰栽种20天后成活率只有60.5％，植珠矮小，品相不好，病虫害率高达30％以上。
以上所述仅为本发明的优选实施方式而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种采用共生菌剂的蝴蝶兰单芽繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，取春季生长健壮的、带饱满腋芽的花梗茎段为外植体，对外植体进行消毒处理；
S2，将外植体切成长1.5cm接到腋芽诱导培养基中进行腋芽诱导，所述腋芽诱导培养基：MS+1.5mg/L 6-BA+0.3mg/LNAA+50mL/L椰子汁+蔗糖30g/L+琼脂粉6.5g/L，pH值调至5.4-5.8；培养温度为2322℃，光照时间10h/d,光照强度1500-2000lx，培养8-20d；
S3，待步骤S2中腋芽长至2cm时，无菌条件下，在培养瓶内将外植体平移到没有褐色单宁的位置继续培养，经25-45d培养后将腋芽切下转到增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养基：MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/LNAA+2.0g/L蛋白胨，添加蔗糖30g/L，琼脂粉6.5g/L，pH值调至5.4-5.8；培养20-30d,培养条件同步骤S2；
S4，当增殖培养的芽苗＞2cm，长至3-4片叶时，去除小于2cm的弱苗、无效苗，选择＞2cm的壮苗进行壮苗生根培养，生根培养基：1/2MS+NAA0.2mg/L+60g/L土豆，添加蔗糖30g/L，琼脂粉6.5g/L，pH值调至5.4-5.8；培养20-30d，培养条件同步骤S2；
S5，将培养室内培养瓶移在25-30℃温度条件下炼苗10-15天，接着旋开瓶盖在自然条件下再炼苗1-2天，之后便可将带根的苗从培养瓶中取出，用流动自来水把根部附着的残留培养基洗干净并晾干到不滴水为止，然后把苗根部包裹后栽入盛有混合好的基质的1.5寸杯中并一次性压实，栽后第一次要浇透水，之后隔4-6天浇水；
S6，移栽后进行栽培苗管理过程中，浇水管理系统均将共生菌剂、肥料和水进行混匀后一次性浇注，每4-6天浇注一次，每次100-200kg/亩，保证不烂根，无病虫害；所述共生菌剂含有0.3wt％大芽孢杆菌和0.4wt％枯草芽孢杆菌。
2.根据权利要求1所述的采用共生菌剂的蝴蝶兰单芽繁殖方法，其特征在于，在步骤S2中，所述腋芽诱导培养基中还加入氨苄青霉素200mg/L和硫酸链霉素150mg/L。
3.根据权利要求1所述的采用共生菌剂的蝴蝶兰单芽繁殖方法，其特征在于，在步骤S1中，所述消毒处理为在超净工作台内，先不剥开腋芽处苞片，用75％酒精擦洗消毒20-25s，再剥开腋芽处苞片，用75％酒精再次轻微擦洗腋芽部；用2％次氯酸钠消毒浸泡10min；用无菌水冲3-4遍；用消毒滤纸吸干腋芽花梗茎段表面水份。
4.根据权利要求1所述的采用共生菌剂的蝴蝶兰单芽繁殖方法，其特征在于，在步骤S5中，所述炼苗在3月下旬气温稳定在18-22℃时进行。
5.根据权利要求4所述的采用共生菌剂的蝴蝶兰单芽繁殖方法，其特征在于，移栽所用的基质包括水苔、椰糠、泥炭土。
6.根据权利要求1所述的采用共生菌剂的蝴蝶兰单芽繁殖方法，其特征在于，所述肥料为：在蝴蝶兰未开花前为稀释3000倍至4000倍的NPK202020或者NPK301010，蝴蝶兰开花后为稀释2000倍用NPK103020。
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