CN111748592A - 高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其包括如下步骤:(1)酶催化反应制得酶解液;(2)酶解液过滤除不溶性杂质制得滤液;(3)滤液经纳滤、电渗析去除磷酸盐制得核苷酸二钠清液;(4)核苷酸二钠清液浓缩制得核苷酸二钠初次浓缩液;(5)核苷酸二钠初次浓缩液降温结晶制得呈味核苷酸二钠。本发明采用酶催化法生产核苷酸,用纳滤膜和电渗析膜相结合,去除酶解液中的蛋白、色素、磷酸盐和金属离子等杂质,达到产品提纯的目的,同时优化了具体的分离、结晶工艺,在保证产品收率不低于105%(g/g)的情况下,使得产品纯度能够达到99.5%;本发明工艺流程短,操作简便,原料成本低,且更加绿色环保。
Description
技术领域:
本发明涉及一种呈味核苷酸二钠的制备方法,特别是涉及一种高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法。
背景技术:
核苷酸是核酸的基本组成单位,是由磷酸、核糖和碱基所组成。核糖与碱基通过糖苷键形成核苷,核苷与磷酸通过酯键形成核苷酸。在生活中,许多核苷酸常作为食品添加剂出现。食品的滋味是由食品中的水溶性成分构成,其中包括核苷酸、氨基酸、有机酸、有机碱以及无机离子;上述各种成分至少带有咸、甜、酸、苦、鲜五种滋味中的一种味道;其中,呈味核苷酸包括肌苷酸、鸟苷酸、胞苷酸、尿苷酸和黄苷酸等。呈味核苷酸对甜味、肉味、醇厚感有增效作用,对酸味、苦味、腥味、焦味等不良风味有消除或抑制作用,从而能够减少添加量,降低成本,而且鲜味更圆润。所以,呈味核苷酸常被广泛地添加到各类调味品如鸡精、鸡粉、增鲜味精、酱油、调味包、汤料、番茄酱、蛋黄酱等中,强化滋味,改善口感。
呈味核苷酸二钠,又名5’-呈味核苷酸二钠,包含5’-肌苷酸二钠(IMP)和5’-鸟苷酸二钠(GMP),是新一代的核苷酸类食品增鲜剂,可直接加入到食品中,起增鲜作用,是方便面调味包、调味品如鸡精、鸡粉和增鲜酱油等的主要呈味成分之一。呈味核苷酸二钠还具有辅助抗肿瘤、提高机体免疫力以及调节机体营养代谢等作用,在食品、医药、农业行业领域中有广泛的用途。
目前,国外大多以酶催化法生产核苷酸,国内的生产企业则利用化学合成法进行生产。与酶催化法相比,化学合成法不仅工艺路线复杂,原料造价高,而且需要使用剧毒的反应物,并使用有机溶剂作为反应载体,不仅造成严重的环境污染,还影响着生产人员的身体健康。对于酶催化法,根据对酶反应产物分析,酶转化法酶解液主要产物为IMP和磷酸盐,还有部分蛋白、色素和金属离子等杂质。根据酶解液组成不同,采用的分离纯化制备核苷酸的方法也有差异,如中国专利文献CN 101265490B公开的一种分离纯化方法,在酶解转化液中加入氢氧化钠后,经过磷酸盐等电方式去除磷酸盐,通过调节肌苷酸等电点得到肌苷酸二钠;该方法存在磷酸盐去除不彻底,产品纯度低的缺点。
发明内容:
本发明的目的在于提供一种低成本、环保、操作简便的高纯度、高收率的呈味核苷酸二钠的制备方法。
本发明的目的由如下技术方案实施:高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其包括如下步骤:
(1)酶催化反应制得酶解液;
(2)酶解液过滤除不溶性杂质制得滤液;
(3)滤液依次经纳滤膜、电渗析膜去除磷酸盐制得核苷酸二钠清液;
(4)核苷酸二钠清液浓缩制得核苷酸二钠初次浓缩液;
(5)核苷酸二钠初次浓缩液降温结晶制得呈味核苷酸二钠。
进一步,所述步骤(1)酶催化反应制得酶解液具体为:肌苷或鸟苷与磷酸供体加水混匀后,加入磷酸化酶进行酶催化反应,收集酶解液;其中,所述酶催化反应的pH值维持在4.1-4.9,反应温度控制在31℃-39℃之间,反应时间为8-24小时。
进一步,所述磷酸供体与所述肌苷或鸟苷的摩尔比为(0.5-2.5):1.0;所述磷酸化酶与肌苷的质量比为(0.5-2.0):1.0;所述磷酸化酶与鸟苷的质量比为(1.0-4.0):1.0。
进一步,所述磷酸供体为酸式焦磷酸、焦磷酸盐、三聚磷酸、三聚磷酸盐、四聚磷酸、四聚磷酸盐、六偏磷酸盐中的至少一种;其中,所述焦磷酸盐、三聚磷酸盐、四聚磷酸盐、六偏磷酸盐为钠盐或钾盐。
进一步,所述步骤(2)酶解液过滤除不溶性杂质制得滤液具体为:所述酶解液经过板框过滤机过滤,循环进料,当滤液透光率达到80%-90%时开始接料,制得滤液。通过控制滤液透光率,使板框过滤机充分拦截酶解液中的菌体、蛋白、色素等杂质,确保后续的成品透光、含量等理化指标合格。
进一步,所述步骤(3)中,纳滤膜、电渗析膜操作条件为:进料滤液的质量百分比浓度为5%-15%,其中,纳滤膜的进膜压力为0.2-0.3Mpa,纳滤膜的出膜压力0.2-0.28Mpa,纳滤膜与电渗析膜的操作温度均为40-60℃,进料滤液经纳滤膜进一步去小分子杂质后,进入电渗析膜加水透析,检测截留液中核苷酸二钠纯度高于90%时停止加水,制得纯度在90%以上的核苷酸二钠清液。纳滤膜与电渗析膜配合,并合理设置纳滤膜、电渗析膜操作条件,使纳滤稳定运行,达到最佳的脱色效果,滤清液透光提高到95%以上,同时电渗析达到最佳的效果,阴阳离子的去除率达到92%以上。
进一步,所述步骤(4)中,所述核苷酸二钠初次浓缩液的质量百分比浓度为20%-35%。
进一步,所述(5)核苷酸二钠初次浓缩液降温结晶制得呈味核苷酸二钠,具体为:将所述核苷酸二钠初次浓缩液的pH值调至7.3-7.5之间,然后继续浓缩得核苷酸二钠二次浓缩液,所述核苷酸二钠二次浓缩液的质量百分比浓度为30-40%,将所述核苷酸二钠二次浓缩液转移至结晶器中,加入晶种,采用梯度降温结晶,结晶温度降至5-10℃,每小时下降3-5℃。初次浓缩和二次浓缩用以提高呈味核苷酸二钠的浓度使达到过饱和,以晶体形式析出;两次浓缩中间加一步调pH起到调等电点结晶的效果,使晶体稳定育晶,提高后续产品纯度和收率。
进一步,每100质量份所述二次浓缩液中加入1-1.5质量份的晶种。
术语解释:
1.磷酸化酶:可添加磷酸基团到受体上,以无机酸磷酸作为磷酸基团供体。
2.板框过滤机:又可称为板框压滤机,常用于化工脱水的机械,主要的构件包括:滤框、滤板、和滤布。其特点为滤液清澈、固体回收率较高。
3.透光率:透光率是一个物理词汇,反映了光线透过介质的能力,是指透过透明或半透明体的光通量与其入射光通量的百分率。在本专利中用于反应滤液的清澈程度。
4.电渗析膜:利用半透膜的选择透过性来分离不同的溶质粒子的方法称为渗析。在电场作用下进行渗析时,在外加直流电场的驱动下,利用离子交换膜的选择透过性(即阳离子可透过阳离子交换膜,阴离子可透过阴离子交换膜),阴、阳离子分别向阳极和阴极移动,从而实现物质分离浓缩的目的。
5.结晶:热的饱和溶液冷却后溶质因溶解度降低导致溶液过饱和,从而溶质以晶体的形式析出,这一过程称为结晶。在肌苷酸制备过程中,成品肌苷酸二钠常以晶体形式出现。
本发明的优点:
本发明采用酶催化法生产核苷酸,用纳滤膜和电渗析膜相结合,去除酶解液中的蛋白、色素、磷酸盐和金属离子等杂质,达到产品提纯的目的,同时优化了具体的分离、结晶工艺,在保证产品收率不低于105%的情况下,使得产品纯度能够达到99.5%;本发明工艺流程短,操作简便,原料成本低,且更加绿色环保。
具体实施方式:
一种高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其包括如下步骤:
(1)酶催化反应制得酶解液:肌苷或鸟苷与磷酸供体加水混匀后,加入磷酸化酶进行酶催化反应,收集酶解液;其中,所述酶催化反应的pH值维持在4.1-4.9,反应温度控制在31℃-39℃之间,反应时间为8-24小时;所述磷酸供体与所述肌苷或鸟苷的摩尔比为(0.5-2.5):1.0;所述磷酸化酶与肌苷的质量比为(0.5-2.0):1.0;所述磷酸化酶与鸟苷的质量比为(1.0-4.0):1.0。其中,磷酸供体为酸式焦磷酸、焦磷酸盐、三聚磷酸、三聚磷酸盐、四聚磷酸、四聚磷酸盐、六偏磷酸盐中的至少一种;其中,焦磷酸盐、三聚磷酸盐、四聚磷酸盐、六偏磷酸盐为钠盐或钾盐。
(2)酶解液过滤除不溶性杂质制得滤液,具体为所述酶解液经过板框过滤机过滤,循环进料,当滤液透光率达到80%-90%时开始接料,制得滤液;在一些实施例中,所述透光率达到80%开始接料;在一些实施例中,所述透光率达到90%开始接料。
(3)滤液依次经纳滤膜、电渗析膜去除磷酸盐制得核苷酸二钠清液,具体为:进料滤液的质量百分比浓度为5%-15%,其中,纳滤膜的进膜压力为0.2-0.3Mpa,纳滤膜的出膜压力0.2-0.28Mpa,纳滤膜与电渗析膜的操作温度均为40-60℃,进料滤液经纳滤膜进一步去小分子杂质后,进入电渗析膜加水透析,检测截留液中核苷酸二钠纯度高于90%时停止加水,制得纯度在90%以上的核苷酸二钠清液。
在一些实施例中,可选用厦门三达净水科技有限公司生产的纳滤膜,膜截留分子量大小500-1000Da,以及杭州蓝然环境技术有限公司生产的电渗析膜,该电渗析膜不仅能截留肌苷酸,通过膜两端通电还可以除去二价以上的金属离子,膜截留分子量大小300-350Da。
在一些实施例中,进料滤液的质量百分比浓度为5%,纳滤膜的进膜压力为0.3Mpa,纳滤膜的出膜压力0.28Mpa,纳滤膜与电渗析膜的操作温度均为60℃,检测截留液中核苷酸二钠纯度为95%时停止加水,制得纯度为95%的核苷酸二钠清液。在一些实施例中,进料滤液的质量百分比浓度为5%,纳滤膜的进膜压力为0.25Mpa,纳滤膜的出膜压力0.23Mpa,纳滤膜与电渗析膜的操作温度均为40℃,检测截留液中核苷酸二钠纯度为90%时停止加水,制得纯度为90%的核苷酸二钠清液。在一些实施例中,进料滤液的质量百分比浓度为10%,纳滤膜的进膜压力为0.22Mpa,纳滤膜的出膜压力为0.20Mpa,纳滤膜与电渗析膜的操作温度均为50℃,检测截留液中核苷酸二钠纯度为93%时停止加水,制得纯度为93%的核苷酸二钠清液。在一些实施例中,进料滤液的质量百分比浓度为10%,纳滤膜的进膜压力为0.22Mpa,纳滤膜的出膜压力0.20Mpa,纳滤膜与电渗析膜的操作温度均为50℃,检测截留液中核苷酸二钠纯度为90%时停止加水,制得纯度为90%的核苷酸二钠清液。在一些实施例中,进料滤液的质量百分比浓度为15%,纳滤膜的进膜压力为0.22Mpa,纳滤膜的出膜压力0.20Mpa,纳滤膜与电渗析膜的操作温度均为55℃,检测截留液中核苷酸二钠纯度为93%时停止加水,制得纯度为93%的核苷酸二钠清液。
(4)核苷酸二钠清液浓缩制得核苷酸二钠初次浓缩液,所述核苷酸二钠初次浓缩液的质量百分比浓度为20%-35%;
(5)核苷酸二钠初次浓缩液降温结晶制得呈味核苷酸二钠,具体为:将所述核苷酸二钠初次浓缩液的pH值调至7.3-7.5之间,然后继续浓缩得核苷酸二钠二次浓缩液,所述核苷酸二钠二次浓缩液的质量百分比浓度为30-40%,将所述核苷酸二钠二次浓缩液转移至结晶器中,加入晶种,每100质量份所述核苷酸二钠二次浓缩液中加入1-1.5质量份的晶种;采用梯度降温结晶,结晶温度降至5-10℃,每小时下降3-5℃。
在一些实施例中,调节pH至7.3±0.02,浓缩质量百分比浓度为30%,每100质量份所述核苷酸二钠二次浓缩液中加入1质量份的晶种。在一些实施例中,调节pH至7.5±0.02,浓缩质量百分比浓度为30%,每100质量份所述核苷酸二钠二次浓缩液中加入1.5质量份的晶种。在一些实施例中,调节pH至7.5±0.02,浓缩质量百分比浓度为40%,每100质量份所述核苷酸二钠二次浓缩液中加入1质量份的晶种。在一些实施例中,调节pH至7.7±0.02,浓缩质量百分比浓度为40%,每100质量份所述核苷酸二钠二次浓缩液中加入1质量份的晶种。在一些实施例中,调节pH至7.7±0.02,浓缩质量百分比浓度为40%,每100质量份所述核苷酸二钠二次浓缩液中加入1.5质量份的晶种。
为了进一步理解本发明,以下结合具体实施例,对本发明作进一步说明。应理解,以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数也视为在本专利的范围内。如无特殊说明,本发明实施例中所涉及的试剂均为市售产品,均可以通过商业渠道购买获得。
实施例1:一种高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其包括如下步骤:
(1)将三聚磷酸钠与肌苷按摩尔比1:1溶于水中,其中肌苷的质量为250g,搅拌均匀后定容至2L,调节pH至4.2±0.02,保持反应温度为32±0.5℃,加入420g磷酸化酶,反应10h,获得酶解液。酶解结束后升温至60℃,维持30min灭酶。
(2)将步骤(1)的酶解液经过板框过滤机过滤,循环进料,当透光率达到90%开始接料,最终获得透光率93%滤液。
(3)将步骤(2)制得的滤液采用纳滤电渗析膜设备进行分离,纳滤电渗析膜操作条件如下:进料滤液的质量百分比浓度为5%,纳滤膜的进膜压力0.3Mpa,纳滤膜的出膜压力0.28Mpa,纳滤膜与电渗析膜的操作温度均为60℃,进料滤液经纳滤膜进一步去小分子杂质后,进入电渗析膜加水透析,检测截留液中肌苷酸钠纯度95%,停止加水,制得纯度为95%的肌苷酸钠清液。
(4)将制得的肌苷酸钠清液浓缩至肌苷酸钠质量百分比浓度达到20%后调节pH至7.3,然后再进一步浓缩至肌苷酸钠质量百分比浓度达到30%,转移至结晶器中,每100质量份所述肌苷酸钠二次浓缩液中加入1质量份的晶种,降温结晶。
(5)结晶液经过离心分离,获得肌苷酸钠湿晶体,湿晶体经过干燥,获得结晶肌苷酸钠成品,经检测肌苷酸钠纯度达到99.5%,收率为105.5%。
实施例2:一种高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其包括如下步骤:
(1)将三聚磷酸钠与肌苷按摩尔比2:1溶于水中,其中肌苷的质量为250g,搅拌均匀后定容至2L,调节pH至4.5±0.02,保持反应温度为38±0.5℃,加入420g磷酸化酶,反应时间为12小时,获得酶解液。酶解结束后升温至60℃,维持30min灭酶。
(2)将步骤(1)的酶解液经过板框过滤机过滤,循环进料,当透光率达到90%开始接料,最终获得透光率为92%滤液。
(3)将步骤(2)制得的滤液采用纳滤电渗析膜设备进行分离,纳滤电渗析膜操作条件如下:进料滤液的质量百分比浓度为5%,纳滤膜的进膜压力0.25Mpa,纳滤膜的出膜压力0.23Mpa,纳滤膜与电渗析膜的操作温度均为40℃,进料滤液经纳滤膜进一步去小分子杂质后,进入电渗析膜加水透析,检测截留液中核苷酸二钠纯度高于90%时停止加水,制得纯度在90%以上的核苷酸二钠清液。
(4)将制得的肌苷酸钠清液浓缩至肌苷酸钠质量百分比浓度达到25%后调节pH至7.5,然后再进一步浓缩至肌苷酸钠质量百分比浓度达到30%,转移至结晶器中,每100质量份所述肌苷酸钠二次浓缩液中加入1.5质量份的晶种,降温结晶。
(5)结晶液经过离心分离,获得肌苷酸钠湿晶体,湿晶体经过干燥,获得结晶肌苷酸钠成品,经检测肌苷酸钠纯度达到99.2%,收率为107.6%。
实施例3:一种高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其包括如下步骤:
(1)将三聚磷酸钠与肌苷按摩尔比2.5:1溶于水中,其中肌苷的质量为250g,搅拌均匀后定容至2L,调节pH至4.8±0.02,保持反应温度为35±0.5℃,加入420g磷酸化酶,反应时间为15小时,获得酶解液。酶解结束后升温至70℃,维持15min灭酶。
(2)将步骤(1)的酶解液经过板框过滤机过滤,循环进料,当透光率达到80%开始接料,最终获得透光率为90%滤液。
(3)将步骤(2)制得的滤液采用纳滤电渗析膜设备进行分离,纳滤电渗析膜操作条件如下:进料滤液的质量百分比浓度为10%,纳滤膜的进膜压力0.22Mpa,纳滤膜的出膜压力0.20Mpa,纳滤膜与电渗析膜的操作温度均为50℃,进料滤液经纳滤膜进一步去小分子杂质后,进入电渗析膜加水透析,检测截留液中核苷酸二钠纯度高于93%时停止加水,制得纯度在93%以上的核苷酸二钠清液。
(4)将制得的肌苷酸钠清液浓缩至肌苷酸钠质量百分比浓度达到35%后调节pH至7.5,然后再进一步浓缩至肌苷酸钠质量百分比浓度达到40%,转移至结晶器中,每100质量份所述肌苷酸钠二次浓缩液中加入1质量份的晶种,降温结晶。
(5)结晶液经过离心分离,获得肌苷酸钠湿晶体,湿晶体经过干燥,获得结晶肌苷酸钠成品,经检测肌苷酸钠纯度达到99.0%,收率为108.2%。
实施例4:一种高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其包括如下步骤:
(1)将三聚磷酸钠与肌苷按摩尔比3:1溶于水中,其中肌苷的质量为250g,搅拌均匀后定容至2L,调节pH至4.2±0.02,保持反应温度为38±0.5℃,加入420g磷酸化酶,反应时间为10小时,获得酶解液。酶解结束后升温至75℃,维持15min灭酶。
(2)将步骤(1)的酶解液经过板框过滤机过滤,循环进料,当透光率达到80%开始接料,最终获得透光率为86%滤液。
(3)将步骤(2)制得的滤液采用纳滤电渗析膜设备进行分离,纳滤电渗析膜操作条件如下:进料滤液的质量百分比浓度为10%,纳滤膜的进膜压力0.22Mpa,纳滤膜的出膜压力0.20Mpa,纳滤膜与电渗析膜的操作温度均为50℃,进料滤液经纳滤膜进一步去小分子杂质后,进入电渗析膜加水透析,检测截留液中核苷酸二钠纯度高于90%时停止加水,制得纯度在90%以上的核苷酸二钠清液。
(4)将制得的肌苷酸钠清液浓缩至肌苷酸钠质量百分比浓度达到30%后调节pH至7.7,然后再进一步浓缩至肌苷酸钠质量百分比浓度达到40%,转移至结晶器中,每100质量份所述肌苷酸钠二次浓缩液中加入1质量份的晶种,降温结晶。
(5)结晶液经过离心分离,获得肌苷酸钠湿晶体,湿晶体经过干燥,获得结晶肌苷酸钠成品,经检测肌苷酸钠纯度达到98.1%,收率为109.8%。
实施例5:一种高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其包括如下步骤:
(1)将三聚磷酸钠与肌苷按摩尔比3.5:1溶于水中,其中肌苷的质量为250g,搅拌均匀后定容至2L,调节pH至4.1±0.02,保持反应温度为38±0.5℃,加入420g磷酸化酶,反应时间为10小时,获得酶解液。酶解结束后升温至75℃,维持15min灭酶。
(2)将步骤(1)的酶解液经过板框过滤机过滤,循环进料,当透光率达到80%开始接料,最终获得透光率为85%滤液。
(3)将步骤(2)制得的滤液采用纳滤电渗析膜设备进行分离,纳滤电渗析膜操作条件如下:进料滤液的质量百分比浓度为15%,纳滤膜的进膜压力0.22Mpa,纳滤膜的出膜压力0.20Mpa,纳滤膜与电渗析膜的操作温度均为55℃,进料滤液经纳滤膜进一步去小分子杂质后,进入电渗析膜加水透析,检测截留液中核苷酸二钠纯度高于93%时停止加水,制得纯度在93%以上的核苷酸二钠清液。
(4)将制得的肌苷酸钠清液浓缩至肌苷酸钠质量百分比浓度达到30%后调节pH至7.7,然后再进一步浓缩至肌苷酸钠质量百分比浓度达到40%,转移至结晶器中,每100质量份所述肌苷酸钠二次浓缩液中加入1.5质量份的晶种,降温结晶。
(5)结晶液经过离心分离,获得肌苷酸钠湿晶体,湿晶体经过干燥,获得结晶肌苷酸钠成品,经检测肌苷酸钠纯度达到95%,收率为112.3%。
由实施例1-5中,肌苷酸钠纯度变化,可以看出,三聚磷酸钠与肌苷按摩尔比(1-2.5):1配比最优,肌苷酸钠纯度达到99%以上;更优的,三聚磷酸钠与肌苷按摩尔比1:1配比,肌苷酸钠纯度达到99.5%以上;但三聚磷酸钠与肌苷按摩尔比增大至(3.0-3.5):1,肌苷酸钠纯度低于99%,质量下滑。
实施例6:一种高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其与实施例1不同之处在于:将制得的肌苷酸钠清液浓缩至肌苷酸钠质量百分比浓度达到30%,然后调节pH至7.3,转移至结晶器中,每100质量份所述肌苷酸钠二次浓缩液中加入1质量份的晶种,降温结晶。其余步骤与实施例1相同。经检测肌苷酸钠纯度达到97.6%,收率为103.9%。与实施例1相比,本实施例仅采用一次浓缩+调pH,得到的肌苷酸钠纯度和收率显著下降。反向说明了本发明提出的两次浓缩+中间一次调pH的效果显著。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其特征在于,其包括如下步骤:
(1)酶催化反应制得酶解液;
(2)酶解液过滤除不溶性杂质制得滤液;
(3)滤液依次经纳滤膜、电渗析膜去除磷酸盐制得核苷酸二钠清液;
(4)核苷酸二钠清液浓缩制得核苷酸二钠初次浓缩液;
(5)核苷酸二钠初次浓缩液降温结晶制得呈味核苷酸二钠。
2.根据权利要求1所述的高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)酶催化反应制得酶解液具体为:肌苷或鸟苷与磷酸供体加水混匀后,加入磷酸化酶进行酶催化反应,收集酶解液;其中,所述酶催化反应的pH值维持在4.1-4.9,反应温度控制在31℃-39℃之间,反应时间为8-24小时。
3.根据权利要求2所述的高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其特征在于,所述磷酸供体与所述肌苷或鸟苷的摩尔比为(0.5-2.5):1.0;所述磷酸化酶与肌苷的质量比为(0.5-2.0):1.0;所述磷酸化酶与鸟苷的质量比为(1.0-4.0):1.0。
4.根据权利要求3所述的高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其特征在于,所述磷酸供体为酸式焦磷酸、焦磷酸盐、三聚磷酸、三聚磷酸盐、四聚磷酸、四聚磷酸盐、六偏磷酸盐中的至少一种;其中,所述焦磷酸盐、三聚磷酸盐、四聚磷酸盐、六偏磷酸盐为钠盐或钾盐。
5.根据权利要求1所述的高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)酶解液过滤除不溶性杂质制得滤液具体为:所述酶解液经过板框过滤机过滤,循环进料,当滤液透光率达到80%-90%时开始接料,制得滤液。
6.根据权利要求1所述的高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中,纳滤膜、电渗析膜操作条件为:进料滤液的质量百分比浓度为5%-15%,其中,纳滤膜的进膜压力为0.2-0.3Mpa,纳滤膜的出膜压力0.2-0.28Mpa,纳滤膜与电渗析膜的操作温度均为40-60℃,进料滤液经纳滤膜进一步去小分子杂质后,进入电渗析膜加水透析,检测截留液中核苷酸二钠纯度高于90%时停止加水,制得纯度在90%以上的核苷酸二钠清液。
7.根据权利要求1所述的高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)中,所述核苷酸二钠初次浓缩液的质量百分比浓度为20%-35%。
8.根据权利要求1所述的高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其特征在于,所述(5)核苷酸二钠初次浓缩液降温结晶制得呈味核苷酸二钠,具体为:将所述核苷酸二钠初次浓缩液的pH值调至7.3-7.5之间,然后继续浓缩得核苷酸二钠二次浓缩液,所述核苷酸二钠二次浓缩液的质量百分比浓度为30-40%,将所述核苷酸二钠二次浓缩液转移至结晶器中,加入晶种,采用梯度降温结晶,结晶温度降至5-10℃,每小时下降3-5℃。
9.根据权利要求8所述的高纯度呈味核苷酸二钠的制备方法,其特征在于,每100质量份所述核苷酸二钠二次浓缩液中加入1-1.5质量份的晶种。
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