CN111707646A - Pcr仪的光路校准方法、装置及pcr仪 - Google Patents

Pcr仪的光路校准方法、装置及pcr仪 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种PCR仪的光路校准方法、装置及PCR仪，PCR仪包括具有M排N列孔位的样品板，孔位用于放置试管，每个孔位对应一个光路，其中，M≥2，N≥2，且M、N为整数；根据获取的本底信号值和测量的第一染料信号值计算M×N个孔位对应的第二染料信号值；根据第二染料信号值计算M×N个孔位对应的第一校准系数；获取第一多连管中每一个试管对应的第二校准系数；根据第一校准系数和第二校准系数计算得到M×N个孔位对应的目标校准系数。通过上述目标校准系数可以对PCR仪的多个孔位进行校准，以减小不同孔位对应的光路间的差异，使不同孔位对同一个信号检测时的信号强度保持一致，提高检测结果的精准性。

Description

PCR仪的光路校准方法、装置及PCR仪
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，尤其是涉及一种PCR仪的光路校准方法、装置及PCR仪。
背景技术
实时荧光定量聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)技术能实现对DNA模板的定量分析，对分子生物学研究和医学研究等具有重要意义。实时聚合酶链式反应技术依赖于精确检测初始基线以上的荧光发射信号，此时，PCR检测仪样品板的多个孔位在检测同一个荧光信号时的信号强度应该一致。然而由于不同孔位之间本身存在差异，或者不同孔位对应的光纤、透镜、光源间存在差异，或者对应的检测器中存在噪声，都会造成不同孔位对应的光路出现差异，导致不同孔位针对同一个信号测量的值不一样，出现信号的失真，导致检测结果的精准性降低。
发明内容
本发明的目的在于提供一种PCR仪的光路校准方法、装置及PCR仪，以缓解由于信号失真，导致检测结果的精准性降低的技术问题。
本发明实施例提供了一种PCR仪的光路校准方法，所述PCR仪包括具有M排N列孔位的样品板，所述孔位用于放置试管，每个所述孔位对应一个光路，其中，M、N为整数，且M≥2，N≥2，所述方法包括：
采用不掺杂染料的第一多连管测量M×N个所述孔位对应的本底信号值；其中，所述第一多连管为M连管或者N连管；
采用掺杂染料的所述第一多连管测量M×N个所述孔位对应的第一染料信号值；
根据所述本底信号值和所述第一染料信号值计算M×N个所述孔位对应的第二染料信号值；其中，每个所述孔位对应的第二染料信号值为其对应的第一染料信号值与其对应的本底信号值的差值；
根据所述第二染料信号值计算M×N个所述孔位对应的第一校准系数；
获取所述第一多连管中每一个试管对应的第二校准系数；
根据所述第一校准系数和所述第二校准系数计算得到M×N个所述孔位对应的目标校准系数。
进一步的，所述不掺杂染料的第一多连管包括空的第一多连管或者承装不掺杂染料的本底液的第一多连管。
进一步的，所述采用不掺杂染料的第一多连管测量M×N个所述孔位对应的本底信号值的步骤，包括：
采用多条所述第一多连管通过一次测量得到M×N个所述孔位对应的所述本底信号值；
或者，
采用一条所述第一多连管通过多次测量得到M×N个所述孔位对应的所述本底信号值。
进一步的，所述采用掺杂染料的第一多连管测量M×N个所述孔位对应的第一染料信号值的步骤，包括：
将掺杂染料的M连管分N次分别放置在所述样品板的N列上进行N次测量，得到M×N个所述孔位对应的所述第一染料信号值；
或者，
将掺杂染料的N连管分M次分别放置在所述样品板的M排上进行M次测量，得到M×N个所述孔位对应的所述第一染料信号值。
进一步的，所述根据所述第二染料信号值计算M×N个所述孔位对应的第一校准系数的步骤，包括：
将所述第二染料信号值中的任意一个值或者其平均值作为第一基准值；
根据所述第一基准值和所述第二染料信号值计算所述第一校准系数。
进一步的，所述根据所述第一基准值和所述第二染料信号值计算所述第一校准系数的步骤包括：
将所述第一基准值分别除以所述第二染料信号值中的每一个值，得到所述第一校准系数；
或者，
将所述第二染料信号值中的每一个值分别除以所述第一基准值，得到所述第一校准系数。
进一步的，所述获取所述第一多连管中每一个试管对应的第二校准系数的步骤，包括：
当所述第一多连管为所述M连管时，将掺杂染料的第二多连管分M次放置在所述样品板的M排上进行M次测量，得到M个表征所述M连管中的每一个试管的测量值；
选取M个测量值中的任意一个值、平均值或者总和作为第二基准值，将所述第二基准值分别除以M个测量值或者M个测量值分别除以所述第二基准值，得到所述M连管中每一个试管对应的第二校准系数；
或者，
当所述第一多连管为所述N连管时，将所述掺杂染料的第二多连管分N次放置在所述样品板的N列上进行N次测量，得到N个表征所述N连管中的每一个试管的测量值；
选取N个测量值中的任意一个值、平均值或者总和作为第二基准值，将所述第二基准值分别除以N个测量值或者N个测量值分别除以所述第二基准值，得到所述N连管中每一个试管对应的第二校准系数。
进一步的，所述第二多连管与所述第一多连管是同一个，或者所述第二多连管与所述第一多连管不是同一个，且所述第二多连管中试管的数量为[1，M]或[1，N]。
进一步的，根据所述第一校准系数和所述第二校准系数计算得到M×N个所述孔位对应的目标校准系数的步骤，包括：
当所述第一多连管采用所述M连管时，将所述M连管中每个试管的第二校准系数分别除以对应排中每个所述孔位对应的所述第一校准系数，或者将所述M连管中每个试管的对应排中每个所述孔位对应的所述第一校准系数分别除以所述M连管中每个试管的第二校准系数，得到所述目标校准系数；
当所述第一多连管采用所述N连管时，将所述N连管中每个试管的第二校准系数分别除以每个试管对应排中的每个所述孔位对应的所述第一校准系数，或者将所述N连管中每个试管对应排中的每个所述孔位对应的所述第一校准系数分别除以所述N连管中每个试管的第二校准系数，得到所述目标校准系数。
第二方面，本发明实施例提供了一种PCR仪的光路校准装置，所述PCR仪包括具有M排N列孔位的样品板，所述孔位用于放置试管，每个所述孔位对应一个光路，其中，M、N为整数，且M≥2，N≥2，所述装置包括：
第一测量模块，用于采用不掺杂染料的第一多连管测量M×N个所述孔位对应的本底信号值；其中，所述第一多连管为M连管或者N连管；
第二测量模块，用于采用掺杂染料的所述第一多连管测量M×N个所述孔位对应的第一染料信号值；
第一计算模块，用于根据所述本底信号值和所述第一染料信号值计算M×N个所述孔位对应的第二染料信号值；其中，每个所述孔位对应的第二染料信号值为其对应的第一染料信号值与其对应的本底信号值的差值；
第二计算模块，用于根据所述第二染料信号值计算M×N个所述孔位对应的第一校准系数；
获取模块，用于获取所述第一多连管中每一个试管对应的第二校准系数；
第三计算模块，用于根据所述第一校准系数和所述第二校准系数计算得到M×N个所述孔位对应的目标校准系数。
第三方面，本发明实施例提供了一种PCR仪，包括具有M排N列孔位的样品板，所述孔位用于放置试管，每个所述孔位对应一个光路，其中，M、N为整数，且M≥2，N≥2，还包括如上所述的PCR仪的光路校准装置。
本发明实施例提供的上述PCR仪的光路校准方法、装置及PCR仪，通过最终得到的M×N个孔位对应的目标校准系数，可以对PCR仪的多个孔位进行校准，从而减小不同孔位对应光路间的差异，减小背景噪音，提高了检测结果的精准性。
另外，利用具有多个试管相连的多连管来对样品板的多个孔位对应的光路进行校准，多连管的使用能够一次校准多个孔位，提高校准的效率，实现对整个光路的快速校准；而且对多连管中不同试管之间的差异带来的影响进行第二次校准，减小多连管中不同试管之间差异带来的影响，进一步提高了校准的准确性，避免在采用整块样品板进行校准时，因为不同试管之间差异大导致校准不准确的问题。因此，本发明实施例的上述PCR仪的光路校准方法能够兼顾校准效率和准确性，在实现高效率校准的同时，有很高的校准准确性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例提供的PCR仪的样品板及多连管的示意图；
图2为本发明实施例提供的PCR仪的光路校准方法流程图；
图3为本发明实施例提供的步骤S204的方法流程图；
图4为本发明实施例提供的PCR仪的光路校准装置的示意图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本发明实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。
因此，以下对在附图中提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在本发明的描述中，需要说明的是，术语“第一”、“第二”等仅用于区分描述，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
目前，由于PCR仪的样品板的不同孔位之间本身存在差异，或者不同孔位对应的光纤、透镜、光源间存在差异，或者对应的检测器中存在噪声，都会造成不同孔位对应的光路出现差异，导致不同孔位针对同一个信号测量的值不一样，出现信号的失真，导致检测结果的精准性降低。
为便于对本实施例进行理解，首先对本发明实施例公开的一种PCR仪的光路校准方法进行详细介绍。
本发明实施例中，PCR仪包括具有M排N列孔位的样品板，孔位用于放置试管，每个孔位对应一个光路，光路通常包括光纤、透镜和光源等，其中，M、N为整数，且M≥2，N≥2。示例性的，如图1所示，样品板11具有96个孔位，排布方式为8排12列，另外，还可以为12排8列、6排16列、16排6列等规格。需要说明的是，上述孔位的数量不限定，例如12孔、24孔、48孔、96孔、192孔或384孔等等。
图2示出了本发明实施例提供的PCR仪的光路校准方法流程图。如图2所示，PCR仪的光路校准方法包括以下步骤：
步骤S201，采用不掺杂染料的第一多连管测量M×N个孔位对应的本底信号值，例如表示为：A1、A2...AM×N；其中，第一多连管为M连管或者N连管；
具体的，不掺杂染料的第一多连管可以采用空的第一多连管或者承装不掺杂染料的本底液的第一多连管，将其放置在样品板的M×N个孔位上进行测量，得到上述M×N个孔位对应的本底信号值A1、A2...AM×N。
步骤S202，采用掺杂染料的第一多连管测量M×N个孔位对应的第一染料信号值，例如表示为：B1、B2...BM×N；
本步骤中，当步骤S201采用空的试管时，将空的第一多连管中掺杂染料，当步骤S201采用承装不掺杂染料的本底液的试管时，将承装上述本底液的第一多连管中掺杂染料，所掺杂的染料可以是FAM、SYBR GREEN、VIC、JOE、TAMRA、NED CY-3、Texas RED、CY-5、HEX、ROX或任何其它荧光染料中的一种，将掺杂染料的第一多连管分多次放置在样品板的不同排或者不同列上进行测量，具体的，通过每个孔位对应的光路中的光来激发染料中的荧光信号，再通过检测器检测荧光信号，得到每个孔位的第一染料信号值B1、B2...BM×N。
步骤S203，根据本底信号值和第一染料信号值计算第二染料信号值，其中，每个孔位对应的第二染料信号值为其对应的第一染料信号值与其对应的本底信号值的差值。
具体的，每个孔位对应的第二染料信号值Ci为Bi-Ai；其中，i为1至M×N之间的整数，第二染料信号值例如表示为：C1、C2...CM×N。
步骤S204，根据第二染料信号值计算M×N个孔位对应的第一校准系数，例如表示为：K1、K2...KM×N。
步骤S205，获取第一多连管中每一个试管对应的第二校准系数，例如Kj'，其中，j为1至M之间的整数或1至N之间的整数。
步骤S206，根据第一校准系数和第二校准系数计算得到M×N个孔位对应的目标校准系数，例如表示为：L1、L2...LM×N。
本发明实施例提供的上述PCR仪的光路校准方法，通过最终得到的M×N个孔位对应的目标校准系数L1、L2...LM×N，可以对PCR仪的多个孔位进行校准，从而减小不同孔位对应光路间的差异，减小背景噪音，提高了检测结果的精准性。
另外，利用具有多个试管相连的多连管来对样品板的多个孔位对应的光路进行校准，多连管的使用能够一次校准多个孔位，提高校准的效率，实现对整个光路的快速校准；而且对多连管中不同试管之间的差异带来的影响进行第二次校准，减小多连管中不同试管之间差异带来的影响，进一步提高了校准的准确性，避免在采用整块样品板进行校准时，因为不同试管之间差异大导致校准不准确的问题。因此，本发明实施例的上述PCR仪的光路校准方法能够兼顾校准效率和准确性，在实现高效率校准的同时，有很高的校准准确性。
在一些实施例中，上述步骤S201可以采用以下方式实现：采用第一多连管测量M×N个孔位对应的本底信号值；其中，第一多连管为空的或者承装不掺杂染料的本底液。
在一种实施方式中，采用多条第一多连管通过一次测量得到M×N个孔位对应的本底信号值。
在另一种实施方式中，采用一条第一多连管通过多次测量得到M×N个孔位对应的本底信号值。
本实施例中，以图1中的样品板11为例，该样品板具备8排12列的96孔位，第一多连管12可以采用8个试管相连的8连管，当然也可以采用12连管，以8连管为例，采用8连管a1...a8来进行光路校准。
在测量96孔位的本底信号值A1...A96时，一种实施方式是利用一条空的8连管，分别放置在样品板的96个孔位的12列上，测量12次从而得出96个孔位对应的96个本底信号值A1...A96，其中，A1...A12为第一排孔位对应的本底信号值，依次类推，A85...A96为第8排孔位对应的本底信号值。或者利用一条8连管，配置出不掺杂染料的本底液(或者叫稀释液)，在每个试管中放置一定量相同体积的本底液，分别放置在样品板的96个孔位的12列上，测量12次从而得出96个孔位对应的96个本底信号值A1...A96。
由于本底信号的强度较弱，使得本底信号值较小，因此，采用不同的试管进行测量对测得结果的影响较小，因此为了提高检测效率，另一种实施方式是，利用12条空的8连管，放到样品板的96个孔位上进行一次测量，从而得出96个孔位对应的96个本底信号值A1...A96。或者，配置出不掺杂染料的本底液(或者叫稀释液)，在12条空的8连管的每个试管中放置一定量相同体积的本底液，放到样品板的96个孔位上进行一次测量，从而得出96个孔位对应的96个本底信号值A1...A96。
在一些实施例中，步骤S202可以采用以下方式实现：将掺杂染料的M连管分N次分别放置在样品板的N列上进行N次测量，得到M×N个孔位对应的第一染料信号值；或者，将掺杂染料的N连管分M次分别放置在样品板的M排上进行M次测量，得到M×N个孔位对应的第一染料信号值。
在实际应用中，还以8排12列的96孔位的样品板以及8连管为例，测量出的掺杂染料后的96孔位的第一染料信号值B1...B96，其中，B1...B12为第一排孔位对应的第一染料信号值；依次类推，B85...B96为第8排孔位对应的第一染料信号值。
具体实施方式可以为：配置一定量适当浓度的染料溶液，在8连管的每个试管中放置与第一步中本底液体积相同的染料溶液；染料溶液的浓度数值不具体限制，但以能够使得测量出的染料信号的强度大于等于本底信号强度的10倍以上为限。
将上述8连管放置在12列孔位中的某一列上，如第一列上，测量出该列8个孔位的染料信号值，测量完成后，将该8连管依次放置在其他列的8个孔位上进行依次测量，从而得到96个孔位的第一染料信号值B1...B96。
需要说明的是，当采用12连管时，测量过程与上述8连管类似，在此不再赘述。
在上述实施例的基础上，根据本底信号值A1...A96以及第一染料信号值B1...B96可以计算出每个孔位对应的第二染料信号值C1...C96，其中，C1...C12为第一排孔位对应的第二染料信号值；依次类推，C85...C96为第8排孔位对应的第二染料信号值。每个孔位的第二染料信号值计算规则为：Ci＝Bi-Ai(i为1至96间的整数)，从而计算出每个孔位对应的第二染料信号值C1...C96。
在一些实施例中，如图3所示，上述步骤S204可以包括以下步骤：
步骤S301，将第二染料信号值中的任意一个值或者其平均值作为第一基准值，例如表示为C^；
步骤S302，根据第一基准值和第二染料信号值计算第一校准系数。
具体的，步骤S302可以包括以下方式：将第一基准值分别除以第二染料信号值中的每一个值，得到第一校准系数；或者，将第二染料信号值中的每一个值分别除以第一基准值，得到第一校准系数。
在实际应用中，还以8排12列的96孔位的样品板以及8连管为例，取上述96个第二染料信号值C1...C96中的某一个数值，或者其平均值作为第一基准数值C^，将该第一基准数值C^分别除以96个第二染料信号值C1...C96或者96个第二染料信号值C1...C96分别除以第一基准数值C^，从而得到96个孔位对应的第一校准系数Ki，即Ki＝C^/Ci(i为1至96间的整数)或者Ki＝Ci/C^(i为1至96间的整数)。其中第一基准数值C^可以是96个第二染料信号值中的最大值、最小值、平均值、或任意的一个值。计算出光路的第一校准系数K1...K96，其中，K1...K12为第一排孔位对应的光路第一校准系数，依次类推，K85...K96为第8排孔位对应的光路第一校准系数。
需要说明的是，当采用12连管时，计算过程与上述8连管类似，在此不再赘述。
以上利用8连管在12列孔位中测量实现了对应于样品板96个孔位光路的第一次光路校准；然而，上述校准过程中用到的8连管中8个试管的每一个之间可能还存在差异，从而还会导致不同试管用于光路校准时，针对同一个信号测量的信号强度有差异。因此，为了消除8连管中不同试管之间的差异可能带来的背景影响，接下来，在第一次光路校准的基础上，进行第二次光路校准，即上述步骤S205获取第一多连管中每一个试管的第二校准系数，具体包括以下两种实施方式。
在第一种实施方式中，上述步骤S205可以包括以下步骤：
步骤1)当第一多连管为M连管时，将掺杂染料的第二多连管分M次放置在样品板的M排上进行M次测量，得到M个表征M连管中的每一个试管的测量值，例如表示为：D1'、D2'...DM'；
步骤2)选取M个测量值中的任意一个值、平均值或者总和作为第二基准值，例如表示为D^，将第二基准值分别除以M个测量值或者M个测量值分别除以第二基准值，得到M连管中每一个试管对应的第二校准系数；
在第二种实施方式中，上述步骤S205可以包括以下步骤：
步骤3)当第一多连管为N连管时，将掺杂染料的第二多连管分N次放置在样品板的N列上进行N次测量，得到N个表征N连管中的每一个试管的测量值；
步骤4)选取N个测量值中的任意一个值、平均值或者总和作为第二基准值，将第二基准值分别除以N个测量值或者N个测量值分别除以第二基准值，得到N连管中每一个试管对应的第二校准系数。
需要说明的是，第二多连管与第一多连管可以是同一个，另外，第二多连管与第一多连管也可以不是同一个，且第二多连管中试管的数量为[1，M]或[1，N]。
在实际应用中，还以8排12列的96孔位的样品板为例，当第一多连管为8连管时，第二多连管也可以是8连管，将承载染料的8连管放置在8排孔位的某一排上，比如先放在第一排上，从而测量出8个试管的8个染料信号值D1...D8。每一排有12个孔位，8连管放置时可以放置在其中任意的8个上，优选的，放置在每一排的中间的8个孔位上。
由于在上述步骤S202中，将8连管放在12列孔位的每一列的孔位中进行每次的测量时，8连管的第一个试管a1都放置在每一列第一排那个孔位上，依次类推，8连管的第8个试管都放置在每一列的第八排的那个孔位上。因此，可以用第一排上的该8个染料信号值D1...D8中的某一个值，或者其平均值，或者8个值之和作为该第一排所对应的试管a1的测量值D1'。同样的步骤，将该8连管放置在其他排的孔位上，从而得到其他排所对应的试管a2...a8的测量值D2'...D8'。
取D1'...D8'这8个值中的某一个数值，或者其平均值作为第二基准数值D^，将该第二基准数值分别除以D1'...D8'这8个值，或者，用D1'...D8'这8个值分别除以第二基准数值D^，从而得到8个试管a1...a8分别对应的第二校准系数Kj'，即Kj'＝D^/Dj'(j为1至8间的整数)或者Kj'＝Dj'/D^(j为1至8间的整数)。其中第二基准数值D^可以是D1'...D8'这8个值中的最大值、最小值、平均值或任意的一个值。
需要说明的是，当第一多连管为12连管时，其测量和计算过程与8连管类似，在此不再赘述。
另外，上述实施方式中的第二多连管可以与第一多连管是同一个，例如，当第一多连管采用8连管时，第二多连管也采用同一个8连管，将同一个8连管分别放置在8排孔位的某一排上进行第二次校准。该第二多连管还可以与第一多连管不是同一个，当第一多连管采用8连管时，并第二多连管的试管数量可以是1～12中任意一个，当第一多连管采用12连管时，第二多连管的试管数量可以是1～8中任意一个。这是因为，在步骤S202中，当采用8连管对每一列进行测量时，每一列的第一排对应于试管a1，依次类推，每一列的第8排对应于试管a8。因此，在步骤S205中，可以将对应于试管a1...a8的表征值表征出来，该表征值不一定是真实的测量数值。例如当第二多连管中只有一个试管时，该表征值可以由一个试管的测量值进行表征，或者当第二多连管中有多个试管时，由多个试管的测量值中的任意一个值、其平均值或者总和进行表征。
在一些实施例中，上述步骤S206可以包括以下步骤：
步骤a)当第一多连管采用M连管时，将M连管中每个试管的第二校准系数分别除以对应排中每个孔位对应的第一校准系数，或者将M连管中每个试管的对应排中每个孔位对应的第一校准系数分别除以M连管中每个试管的第二校准系数，得到目标校准系数；
步骤b)当第一多连管采用N连管时，将N连管中每个试管的第二校准系数分别除以每个试管对应排中的每个孔位对应的第一校准系数，或者将N连管中每个试管对应排中的每个孔位对应的第一校准系数分别除以N连管中每个试管的第二校准系数，得到目标校准系数。
具体的，当第一多连管采用8连管时，将计算出的第一排孔位对应的第一校准系数K1...K12分别除以第一个试管a1对应的第二校准系数K1'，从而得到第一排孔位对应的最终校准系数为L1...L12。或者利用第一个试管a1对应的第二校准系数K1'分别除以第一排孔位对应的第一校准系数K1...K12，从而得到第一排孔位对应的最终校准系数为L1...L12。依照同样的步骤，以此类推，得到其他排孔位对应的最终校准系数L13...L96。从而得到目标校准系数L1...L96，完成对样品板上所有孔位的光路的最终校准。
当第一多连管采用12连管时，目标校准系数的计算过程与上述类似，在此不再赘述。
在使用PCR仪进行测量时，根据上述目标校准系数对每一个孔位对应的光路进行校准，能够减小不同孔位对应光路间的差异，减小背景噪音，提高了检测结果的精准性。
如图4所示，本发明实施例提供了一种PCR仪的光路校准装置，PCR仪包括具有M排N列孔位的样品板，孔位用于放置试管，每个孔位对应一个光路，其中，M≥2，N≥2，装置包括：
第一测量模块41，用于获取M×N个所述孔位对应的本底信号值；其中，所述本底信号值为对未掺杂染料的试管进行测量得到的信号值；
第二测量模块42，用于采用掺杂染料的第一多连管测量M×N个所述孔位对应的第一染料信号值；其中，所述第一多连管为M连管或者N连管；
第一计算模块43，用于根据所述本底信号值和所述第一染料信号值计算第二染料信号值，其中，每个孔位对应的第二染料信号值为其对应的第一染料信号值与其对应的本底信号值的差值；
第二计算模块44，用于根据所述第二染料信号值计算M×N个所述孔位对应的第一校准系数；
获取模块45，用于获取所述第一多连管中每一个试管对应的第二校准系数；
第三计算模块46，用于根据所述第一校准系数K1、K2...KM×N和所述第二校准系数计算得到M×N个所述孔位对应的目标校准系数。
在一些实施例中，第一测量模块41还用于：
采用第一多连管测量M×N个孔位对应的本底信号值；其中，第一多连管为空的或者承装不掺杂染料的本底液。具体可以包括：采用多条第一多连管通过一次测量得到M×N个孔位对应的本底信号值；或者，采用一条第一多连管通过多次测量得到M×N个孔位对应的本底信号值。
在一些实施例中，第二测量模块42还用于：
将掺杂染料的M连管分N次分别放置在样品板的N列上进行N次测量，得到M×N个孔位对应的第一染料信号值；
或者，
将掺杂染料的N连管分M次分别放置在样品板的M排上进行M次测量，得到M×N个孔位对应的第一染料信号值。
在一些实施例中，第二计算模块44还用于：
将第二染料信号值中的任意一个值或者其平均值作为第一基准值；
根据第一基准值和第二染料信号值计算第一校准系数，具体可以包括：将第一基准值分别除以第二染料信号值中的每一个值，得到第一校准系数；或者，将第二染料信号值中的每一个值分别除以第一基准值，得到第一校准系数。
在一些实施例中，获取模块45还用于：
当第一多连管为M连管时，将掺杂染料的第二多连管分M次放置在样品板的M排上进行M次测量，得到M个表征M连管中的每一个试管的测量值；
选取M个测量值DM'中的任意一个值、平均值或者总和作为第二基准值，将第二基准值分别除以M个测量值或者M个测量值分别除以第二基准值，得到M连管中每一个试管对应的第二校准系数；
或者，
当第一多连管为N连管时，将掺杂染料的第二多连管分N次放置在样品板的N排上进行N次测量，得到N个表征N连管中的每一个试管的测量值；
选取N个测量值中的任意一个值、平均值或者总和作为第二基准值，将第二基准值分别除以N个测量值或者N个测量值分别除以第二基准值，得到N连管中每一个试管对应的第二校准系数；
在一些实施例中，第二多连管与第一多连管是同一个，或者第二多连与第一多连管不是同一个，且第二多连管中试管的数量为[1，M]或[1，N]。
在一些实施例中，第三计算模块46还用于：
当第一多连管采用M连管时，将M连管中每个试管的第二校准系数分别除以对应排中每个孔位对应的第一校准系数，或者将M连管中每个试管的对应排中每个孔位对应的第一校准系数分别除以M连管中每个试管的第二校准系数，得到目标校准系数；
当第一多连管采用N连管时，将N连管中每个试管的第二校准系数分别除以每个试管对应排中的每个孔位对应的第一校准系数，或者将N连管中每个试管对应排中的每个孔位对应的第一校准系数分别除以N连管中每个试管的第二校准系数，得到目标校准系数。
本发明实施例提供了一种PCR仪，包括具有M排N列孔位的样品板，孔位用于放置试管，每个孔位对应一个光路，其中，M、N为整数，且M≥2，N≥2，还包括如上的PCR仪的光路校准装置。
本发明实施例提供的上述PCR仪的光路校准方法，通过最终得到的M×N个孔位对应的目标校准系数，可以对PCR仪的多个孔位进行校准，从而减小不同孔位对应光路间的差异，减小背景噪音，提高了检测结果的精准性。
另外，利用具有多个试管相连的多连管来对样品板的多个孔位对应的光路进行校准，多连管的使用能够一次校准多个孔位，提高校准的效率，实现对整个光路的快速校准；而且对多连管中不同试管之间的差异带来的影响进行第二次校准，减小多连管中不同试管之间差异带来的影响，进一步提高了校准的准确性，避免在采用整块样品板进行校准时，因为不同试管之间差异大导致校准不准确的问题。因此，本发明实施例的上述PCR仪的光路校准方法能够兼顾校准效率和准确性，在实现高效率校准的同时，有很高的校准准确性。
所属领域的技术人员可以清楚地了解到，为描述的方便和简洁，上述装置实施例的具体工作过程，可以参考前述方法实施例中的具体实施过程，在此不再赘述。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (11)

1.一种PCR仪的光路校准方法，其特征在于，所述PCR仪包括具有M排N列孔位的样品板，所述孔位用于放置试管，每个所述孔位对应一个光路，其中，M、N为整数，且M≥2，N≥2，所述方法包括：
采用不掺杂染料的第一多连管测量M×N个所述孔位对应的本底信号值；其中，所述第一多连管为M连管或者N连管；
采用掺杂染料的所述第一多连管测量M×N个所述孔位对应的第一染料信号值；
根据所述本底信号值和所述第一染料信号值计算M×N个所述孔位对应的第二染料信号值；其中，每个所述孔位对应的第二染料信号值为其对应的第一染料信号值与其对应的本底信号值的差值；
根据所述第二染料信号值计算M×N个所述孔位对应的第一校准系数；
获取所述第一多连管中每一个试管对应的第二校准系数；
根据所述第一校准系数和所述第二校准系数计算得到M×N个所述孔位对应的目标校准系数。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述不掺杂染料的第一多连管包括空的第一多连管或者承装不掺杂染料的本底液的第一多连管。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述采用不掺杂染料的第一多连管测量M×N个所述孔位对应的本底信号值的步骤，包括：
采用多条所述第一多连管通过一次测量得到M×N个所述孔位对应的所述本底信号值；
或者，
采用一条所述第一多连管通过多次测量得到M×N个所述孔位对应的所述本底信号值。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述采用掺杂染料的第一多连管测量M×N个所述孔位对应的第一染料信号值的步骤，包括：
将掺杂染料的M连管分N次分别放置在所述样品板的N列上进行N次测量，得到M×N个所述孔位对应的所述第一染料信号值；
或者，
将掺杂染料的N连管分M次分别放置在所述样品板的M排上进行M次测量，得到M×N个所述孔位对应的所述第一染料信号值。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述根据所述第二染料信号值计算M×N个所述孔位对应的第一校准系数的步骤，包括：
将所述第二染料信号值中的任意一个值或者其平均值作为第一基准值；
根据所述第一基准值和所述第二染料信号值计算所述第一校准系数。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述根据所述第一基准值和所述第二染料信号值计算所述第一校准系数的步骤包括：
将所述第一基准值分别除以所述第二染料信号值中的每一个值，得到所述第一校准系数；
或者，
将所述第二染料信号值中的每一个值分别除以所述第一基准值，得到所述第一校准系数。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述获取所述第一多连管中每一个试管对应的第二校准系数的步骤，包括：
当所述第一多连管为所述M连管时，将掺杂染料的第二多连管分M次放置在所述样品板的M排上进行M次测量，得到M个表征所述M连管中的每一个试管的测量值；
选取M个测量值中的任意一个值、平均值或者总和作为第二基准值，将所述第二基准值分别除以M个测量值或者M个测量值分别除以所述第二基准值，得到所述M连管中每一个试管对应的第二校准系数；
或者，
当所述第一多连管为所述N连管时，将所述掺杂染料的第二多连管分N次放置在所述样品板的N列上进行N次测量，得到N个表征所述N连管中的每一个试管的测量值；
选取N个测量值中的任意一个值、平均值或者总和作为第二基准值，将所述第二基准值分别除以N个测量值或者N个测量值分别除以所述第二基准值，得到所述N连管中每一个试管对应的第二校准系数。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述第二多连管与所述第一多连管是同一个，或者所述第二多连管与所述第一多连管不是同一个，且所述第二多连管中试管的数量为[1，M]或[1，N]。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，根据所述第一校准系数和所述第二校准系数计算得到M×N个所述孔位对应的目标校准系数的步骤，包括：
当所述第一多连管采用所述M连管时，将所述M连管中每个试管的第二校准系数分别除以对应排中每个所述孔位对应的所述第一校准系数，或者将所述M连管中每个试管的对应排中每个所述孔位对应的所述第一校准系数分别除以所述M连管中每个试管的第二校准系数，得到所述目标校准系数；
当所述第一多连管采用所述N连管时，将所述N连管中每个试管的第二校准系数分别除以每个试管对应排中的每个所述孔位对应的所述第一校准系数，或者将所述N连管中每个试管对应排中的每个所述孔位对应的所述第一校准系数分别除以所述N连管中每个试管的第二校准系数，得到所述目标校准系数。
10.一种PCR仪的光路校准装置，其特征在于，所述PCR仪包括具有M排N列孔位的样品板，所述孔位用于放置试管，每个所述孔位对应一个光路，其中，M、N为整数，且M≥2，N≥2，所述装置包括：
第一测量模块，用于采用不掺杂染料的第一多连管测量M×N个所述孔位对应的本底信号值；其中，所述第一多连管为M连管或者N连管；
第二测量模块，用于采用掺杂染料的所述第一多连管测量M×N个所述孔位对应的第一染料信号值；
第一计算模块，用于根据所述本底信号值和所述第一染料信号值计算M×N个所述孔位对应的第二染料信号值；其中，每个所述孔位对应的第二染料信号值为其对应的第一染料信号值与其对应的本底信号值的差值；
第二计算模块，用于根据所述第二染料信号值计算M×N个所述孔位对应的第一校准系数；
获取模块，用于获取所述第一多连管中每一个试管对应的第二校准系数；
第三计算模块，用于根据所述第一校准系数和所述第二校准系数计算得到M×N个所述孔位对应的目标校准系数。
11.一种PCR仪，其特征在于，包括具有M排N列孔位的样品板，所述孔位用于放置试管，每个所述孔位对应一个光路，其中，M、N为整数，且M≥2，N≥2，还包括权利要求10所述的PCR仪的光路校准装置。
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