CN107024460A - 一种荧光检测装置以及荧光检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种荧光检测装置以及荧光检测方法，属于荧光检测领域。现有技术方案工作效率低，检测结果不够准确。一种荧光检测装置，包括激发光源模块、控制分析模块，所述激发光源模块连接一用于传导光源的光纤组件，所述光纤组件包括一端相邻激发光源模块另一端相邻待测物的激发光纤以及一端相邻待测物另一端相邻控制分析模块的接收光纤；所述控制分析模块包括用于拍摄接收光纤传输待测物荧光反射量的摄像机器、用于处理图片数据以及判定待测物性质的处理器。光纤组件一次能够传递多组荧光反射量，可同时对多组待测物进行检测，并且能够避免不同试管反射光的干扰，进而提升检测准确度以及检测效率。

Description

一种荧光检测装置以及荧光检测方法

技术领域

本发明涉及一种荧光检测装置以及荧光检测方法，属于荧光检测领域。

背景技术

中国专利（申请号201220408285.9）涉及一种新型荧光检测仪器，包含结果分析处理装置、图像接收装置、分光棱镜、聚焦透镜、汞灯源、稳压电源、物镜、待测物台，所述结果分析处理装置与图像接收装置连接，图像接收装置与分光棱镜连接，分光棱镜下方还设置有物镜，物镜设置于待测物台的上方，分光棱镜一端还设置有聚焦透镜，聚焦透镜的一端设置有汞灯源，汞灯源与稳压电源连接，通过整个装置的改进设计，荧光仪可以方便携带外出使用，荧光仪的使用率提高，有非常好的效果，通过增加了图像接收装置及结果分析，避免了人工观察出现过多的误差。但是此技术方案只能对一个内部放有待测物的试管进行检测，工作效率低，如果同时放置多个试管进行检测，则不同试管反射的光会相互干扰，影响检测结果。并且此技术方案只能使用单一的光源进行检测，无法对各种待测物进行激发检测，适用范围窄，也无法对同一待测物进行检测对比，影响检测结果的精度。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种能同时对多组待测物进行检测的并能使用多种光源进行检测对比的能够适用多种待测物的检测效率、精度高的荧光检测装置以及荧光检测方法。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种荧光检测装置，包括激发光源模块、控制分析模块，所述激发光源模块连接一用于传输发光体发出的光的光纤组件，所述光纤组件包括一端相邻激发光源模块另一端相邻待测物的激发光纤以及一端相邻待测物另一端相邻控制分析模块的接收光纤；所述控制分析模块包括用于拍摄接收光纤传输待测物荧光反射量的摄像机器、用于处理图片数据以及判定待测物性质的处理器。光纤组件一次能够传递多组荧光反射量，可同时对多组待测物进行检测，并且能够避免不同试管反射光的干扰，进而提升检测准确度以及检测效率。

作为优选技术措施，所述激发光纤与接收光纤分别包括若干光纤束，所述光纤束的数量与待测物的数量相同，多组待测物能够一次完成检测，有效提升检测效率。

作为优选技术措施，所述激发光源模块包括若干不同波长的发光体，所述发光体与激发光纤之间设有相匹配的激发滤光片，所述摄像机器与接收光纤之间设有接收滤光片；所述发光体安装于一光源罩合件上，所述激发滤光片嵌设于一滤光安装件内部空腔内，所述光源罩合件与滤光安装件扣合在一起并使得发光体与激发滤光片保持一定距离。由于发光体长时间发光会产生大量的热，为避免激发滤光片被烤坏，激发滤光片需要与发光体保持一定距离，设置光源罩合件与滤光安装件能够很好的解决这个问题，所述一定距离为7-13毫米。

作为优选技术措施，所述激发光源模块连接一用于驱动激发光源模块往复移动的传送机构；所述传送机构包括与激发光源模块固定连接的丝杠螺母、与丝杠螺母螺纹连接的丝杠、驱动丝杠旋转的驱动源。传送机构驱动激发光源模块在不同的光源中转换，一方面能够对同一待测物进行不同的荧光反射进行检测对比，另一方面能够适用不同的待测物，增加本发明的实用性，适用范围广。

作为优选技术措施，所述丝杠螺母连接一用于安装激发光源模块的安装组件，所述安装组件包括用于固定激发光源模块的安装板、被丝杠螺母驱动往复运动的驱动板、用于一端连接安装板另一端连接驱动板并配合摄像机器拍照的连接板；所述驱动板设有供一光纤板穿过的通槽，所述光纤板上端穿设光纤组件，下端固定于一底座上。由于光纤组件在靠近待测物的一端分成若干组光纤束，为确保光纤束能够和试管件准确配合，因此设置光纤组件通过光纤板固定于底座上，通过驱动激发光源模块移动来实现光纤组件传递不同的光源，结构合理可靠。

作为优选技术措施，所述荧光检测装置设有用于放置装有待测物试管件的装载机构，所述装载机构包括用于插装试管件的插装组件、用于对插装组件以及试管件保持恒温的温控机构；所述温控机构包括用于产生冷气的制冷组件、用于加速冷气流动的吹风器、用于排出气体的排气组件，所述制冷组件架设于一基座架上方，所述基座架中间安装吹风器，两侧安装所述排气组件；所述制冷组件包括若干制冷片，所述制冷片均匀排铺于插装组件下方；所述吹风器上方架设一用于引导风向的通风腔，所述套筒内壁为光滑圆壁面，其高度小于或与排气组件下端持平；所述排气组件包括排气腔体以及嵌设排气腔体端部的排气栅板，所述排气腔体为喇叭状，排气栅板倾斜排列于排气腔体端口。本发明设置温控机构能够保证装有待测物的试管件的温度恒定，避免因为温度的变化，影响待测物的活性，进而导致检测不准确。本发明能够根据不同区域的温度情况，分别控制不同区域的制冷片制冷，使得不同区域试管件的温度能够保持一致，使得本发明的温度控制更为精确。

一种荧光检测方法，包括以下步骤：

第一步，进行定位：通过机械结构的固定，保证摄像机器的位置与光纤组件导光的位置不会偏移，在此条件下，定位光纤组件的位置；

第二步，进行量化：定位完成后，对摄像机器和光纤组件的位置进行一一对应；

第三步，进行校正：校正因为安装等不确定因素，造成的光纤导光率的不一致；

第四步，进行检测：激发光源模块进行发光，光线透过激发滤光片并通过激发光纤照射到待测物上，待测物产生荧光，所述荧光通过接收光纤并透过接收滤光片射出，摄像机器捕获光后，传输给控制分析模块的处理器进行数据分析。

本发明的检测方法工序简单，方案切实可行，通过进行量化以及校正方法，能够有效提升检测的准确性。

作为优选技术措施，第一步，进行定位的方法：采用特殊稳定的管腔件待测物，对放入管腔件的待测物，将光导入摄像机器后，由软件计算去除过明及过暗的像素点，保留正常的像素点，并且一一记录这些像素点的位置；对第一个孔位进行照射，摄像机器拍照后，得到一张图片，软件将该图片的每一个像素的值均数字化，参照设定的标准(50-200)，将所有不满足的像素全部剔除，并计算剩余像素点的位置的直径，直径单位为像素，并参照设定的标准，如果剔除后剩下的像素点位置，直径为小于等于设定像素值，软件记录所有像素点的位置，并保留做为第1孔位的光纤位置。

作为优选技术措施，第二步，进行量化的方法：当管腔件中的待测物，产生荧光时，会通过光纤束将光传输给摄像机器，摄像机器捕获光后，对捕获的光所在的像素位置进行比较，如果是在之前定位的位置之外，则认为是干扰光，予以剔除；若在之前孔定位的位置范围内，则保留光的数据，并且根据定位的位置，一一计算孔位；以孔位1为例，当接收光完成后，对比光的像素位置，保留定位的孔位1的位置，将所有的在孔位1的位置的光的值全部读出来，并且去除本底噪音，将所有的在孔位1的位置的像素的值全部相加，并除以孔位1所在的像素的个数，即得到孔位1的荧光的数值；将该数值发送给数据显示端，数据显示端显示后，实验人员能够清晰的感觉到每次实验的荧光的变化。

作为优选技术措施，第三步，进行校正的方法：用一高亮度的且稳定的荧光试剂对每个孔位进行一一照射，设定孔位数为96，得到荧光值A1--A96，同理，用中亮度照射，得到B1--B96，再用低亮度照射，得到C1--C96，最后用水最为本底，得到D1--D96；将A、B、C的值分别对应减去D的值，得到E1--E96、F1--F96、G1--G96；将E、F、G的值分别平均，得到E平、F平、F平；用E1--E96的值分别除以E平，得到X1--X96，F的值除以F平，得到Y1--Y96，G的值除以G平，得到Z1--Z96，之后将每个孔位的X、Y、Z三个数字加权平均，得到最终的伸张系数：系数1--系数96；最后的荧光值H=(拍照得到的荧光值I-(本底值-1))*系数+(1-1/系数)。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明的光纤组件一次能够传递多组荧光反射量，可同时对多组待测物进行检测，并且能够避免不同试管反射光的干扰，进而提升检测准确度以及检测效率。传送机构驱动激发光源模块在不同的光源中转换，一方面能够对同一待测物进行不同的荧光反射进行检测对比，另一方面能够适用不同的待测物，增加本发明的实用性。

本发明设置温控机构能够保证装有待测物的试管件的温度恒定，避免因为温度的变化，影响待测物的活性，进而导致检测不准确。本发明能够根据不同区域的温度情况，分别控制不同区域的制冷片制冷，使得不同区域试管件的温度能够保持一致，使得本发明的温度控制更为精确。

本发明的检测方法工序简单，方案切实可行，通过进行量化以及校正方法，能够有效提升检测的准确性以及检测精度。

附图说明

图1为本发明结构示意图（包括部分罩设组件）；

图2为本发明部分结构爆炸视图；

图3为本发明结构示意图（不包括罩设组件）；

图4为本发明激发光源模块与传送机构装配示意图；

图5为本发明滤光安装件的结构示意图；

图6为本发明光源罩合件的结构示意图；

图7为本发明温控机构部分结构示意图；

图8为本发明温控机构部分结构爆炸示意图；

图9为本发明温控机构局部结构爆炸示意图；

图10为本发明第二管板结构示意图。

附图标记说明：

1-激发光源模块，2-光纤组件，3-传送机构，4-摄像机器，5-插装组件，6-制冷组件，7-吹风器，8-排气组件，9-罩设组件，10-基座架，11-安装板，12-发光体，13-光源罩合件，14-滤光安装件，21-激发光纤管，22-接收光纤管，23-光纤板，31-丝杠；32-丝杠螺母；33-驱动板；34-安装座；35-连接板；351-通孔；51-第一管板；52-第二管板；53-第三管板；54-第四管板；531-铺线槽；532-铺线接槽；533-穿设孔；541-管腔件；542-缺口；71-通风腔；81-排气腔体；82-排气栅板；91-底座，92-护板组件，93-第一遮光罩，94-第二遮光罩，95-中隔板。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

相反，本发明涵盖任何由权利要求定义的在本发明的精髓和范围上做的替代、修改、等效方法以及方案。进一步，为了使公众对本发明有更好的了解，在下文对本发明的细节描述中，详尽描述了一些特定的细节部分。对本领域技术人员来说没有这些细节部分的描述也可以完全理解本发明。

如图1-10所示实施例，一种荧光检测装置，包括激发光源模块1、控制分析模块以及用于放置装有待测物试管件的装载机构。所述激发光源模块1连接一用于传输发光体12发出的光的光纤组件2，所述光纤组件2包括一端相邻激发光源模块1另一端相邻待测物的激发光纤以及一端相邻待测物另一端相邻控制分析模块的接收光纤；所述控制分析模块包括用于拍摄接收光纤传输待测物荧光反射量的摄像机器4、用于处理图片数据以及判定待测物性质的处理器。所述装载机构包括用于插装试管件的插装组件5、用于对插装组件5以及试管件保持恒温的温控机构。

本发明设有用于保护内部零部件的罩设组件9。所述罩设组件包括罩设在荧光检测装置外端的护板组件92、罩设在所述激发光源模块1外端的用于遮挡外部光线的遮光组件，遮光组件包括第一遮光罩93、第二遮光罩94以及中隔板95，所述第一遮光罩93、第二遮光罩94与中隔板95扣合在一起。遮光组件由三部分组成，方便拆卸，节省工时，同时遮光组件能够避免外部光线干扰，提示荧光检测的准确性。

所述激发光纤与接收光纤分别包括若干光纤束，所述光纤束的数量与待测物的数量相同。所述激发光源模块1与激发光纤之间设有激发滤光片，所述摄像机器4与接收光纤之间设有接收滤光片；所述发光体12安装于一光源罩合件13上，所述激发滤光片嵌设于一滤光安装件14内部空腔内，所述光源罩合件13与滤光安装件14扣合在一起并使得发光体12与激发滤光片保持一定距离。所述激发光源模块1包括若干不同波长的发光体12、若干与发光体12相匹配的激发滤光片以及接收滤光片，所述发光体为LED光源。

所述激发光源模块1连接一用于驱动激发光源模块1往复移动的传送机构3；所述传送机构3包括与激发光源模块1固定连接的丝杠螺母32、与丝杠螺母32螺纹连接的丝杠31、驱动丝杠旋转的驱动源。所述丝杠螺母连接一用于安装激发光源模块1的安装组件，所述安装组件包括用于固定激发光源模块1的安装板11、被丝杠螺母驱动往复运动的驱动板33、用于一端连接安装板11另一端连接驱动板33并配合摄像机器4拍照的连接板35；所述驱动板33设有供一光纤板23穿过的通槽，所述光纤板23上端穿设光纤组件2，下端固定于一底座91上。

光纤板23上端开设用于穿设一激发光纤管21的第一通孔351，下端开设用于穿设接收光纤管22的第二通孔351，所述第一通孔351的高度与发光体12的高度相同，所述第二通孔351的高度与摄像机器4的高度相同。所述激发光纤穿过激发光纤管21，用于传输发光体12的光；接收光纤穿过接收光纤管22，用于传输待测物反射的荧光供摄像机器4拍照。

所述连接板35开设用于透光的透光孔，所述透光孔的位置与摄像机器的位置一一对应。

丝杠两端架设安装座34，所述安装座34开设用于穿设丝杠的连接孔，所述安装座34上端部固定连接一用于供驱动板33往复滑动的滑轨，驱动板33下端固连滑块，丝杠螺母设有一用于推动滑块往复移动的伸出板，结构简单实用。

所述温控机构包括用于产生冷气的制冷组件6、用于加速冷气流动的吹风器7、用于排出气体的排气组件8，所述制冷组件6架设于一基座架10上方，所述基座架10中间安装吹风器7，两侧安装所述排气组件8。所述制冷组件6包括若干制冷片，所述制冷片均匀排铺于插装组件5下方，制冷片分区域独立控制制冷量，方便控制各区域的待测物温度。

所述制冷组件6包括若干制冷片，所述制冷片均匀排铺于插装组件5下方。所述吹风器7上方架设一用于引导风向的通风腔71，所述套筒内壁为光滑圆壁面，其高度小于或与排气组件8下端持平。所述排气组件8包括排气腔体81以及嵌设排气腔体81端部的排气栅板82，所述排气腔体81为喇叭状，排气栅板82倾斜排列于排气腔体81端口。

所述插装组件5包括用于插接试管件的第一管板51、用于安装一光纤组件2的第二管板52、用于压紧光纤组件2的第三管板53、用于罩设试管件的第四管板54，所述第一管板51、第二管板52、第三管板53、第四管板54依次层叠布置。所述第一管板51排设管腔件541，所述管腔件541为圆柱形腔体，其侧壁开设用于容纳光纤组件2探头的缺口542。所述第二管板52开设若干穿设孔533，相邻穿设孔533开设用于容纳光纤束的铺线槽531，若干铺线槽531设有用于固定光纤束的铺线接槽532，所述铺线槽531与缺口542贯通。

一种荧光检测方法，包括以下步骤：

第一步，进行定位：通过机械结构的固定，保证摄像机器的位置与光纤组件导光的位置不会偏移，在此条件下，定位光纤组件的位置。

进行定位的方法：采用特殊稳定的管腔件待测物，对放入管腔件的待测物，将光导入摄像机器后，由软件计算去除过明及过暗的像素点，保留正常的像素点，并且一一记录这些像素点的位置。对第一个孔位进行照射，摄像机器拍照后，得到一张图片，软件将该图片的每一个像素的值均数字化，参照设定的标准(50-200)，将所有不满足的像素全部剔除，并计算剩余像素点的位置的直径，直径单位为像素，并参照设定的标准，如果剔除后剩下的像素点位置，直径为小于等于设定像素值，软件记录所有像素点的位置，并保留做为第1孔位的光纤位置。

第二步，进行量化：定位完成后，对摄像机器和光纤组件的位置进行一一对应。

进行量化的方法：当管腔件中的待测物，产生荧光时，会通过光纤束将光传输给摄像机器，摄像机器捕获光后，对捕获的光所在的像素位置进行比较，如果是在之前定位的位置之外，则认为是干扰光，予以剔除。若在之前孔定位的位置范围内，则保留光的数据，并且根据定位的位置，一一计算孔位。以孔位1为例，当接收光完成后，对比光的像素位置，保留定位的孔位1的位置，将所有的在孔位1的位置的光的值全部读出来，并且去除本底噪音，将所有的在孔位1的位置的像素的值全部相加，并除以孔位1所在的像素的个数，即得到孔位1的荧光的数值。将该数值发送给数据显示端，数据显示端显示后，实验人员能够清晰的感觉到每次实验的荧光的变化。

第三步，进行校正：校正因为安装等不确定因素，造成的光纤导光率的不一致。

进行校正的方法：用一高亮度的且稳定的荧光试剂对每个孔位进行一一照射，设定孔位数为96，得到荧光值A1--A96，同理，用中亮度照射，得到B1--B96，再用低亮度照射，得到C1--C96，最后用水最为本底，得到D1--D96。将A、B、C的值分别对应减去D的值，得到E1--E96、F1--F96、G1--G96。将E、F、G的值分别平均，得到E平、F平、F平。用E1--E96的值分别除以E平，得到X1--X96，F的值除以F平，得到Y1--Y96，G的值除以G平，得到Z1--Z96，之后将每个孔位的X、Y、Z三个数字加权平均，得到最终的伸张系数：系数1--系数96。最后的荧光值H=(拍照得到的荧光值I-(本底值-1))*系数+(1-1/系数)。所述高亮度约150byte，中亮度约100byte，低亮度约50byte。

第四步，进行检测：激发光源模块进行发光，光线透过激发滤光片并通过激发光纤照射到待测物上，待测物产生荧光，所述荧光通过接收光纤并透过接收滤光片射出，摄像机器捕获光后，传输给控制分析模块的处理器进行数据分析。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种荧光检测装置，包括激发光源模块（1）、控制分析模块，其特征在于，所述激发光源模块（1）连接一用于传输发光体（12）发出的光的光纤组件（2），所述光纤组件（2）包括一端相邻激发光源模块（1）另一端相邻待测物的激发光纤以及一端相邻待测物另一端相邻控制分析模块的接收光纤；所述控制分析模块包括用于拍摄接收光纤传输待测物荧光反射量的摄像机器（4）、用于处理图片数据以及判定待测物性质的处理器。

2.如权利要求1所述的一种荧光检测装置，其特征在于，所述激发光纤与接收光纤分别包括若干光纤束，所述光纤束的数量与待测物的数量相同。

3.如权利要求2所述的一种荧光检测装置，其特征在于，所述激发光源模块（1）包括若干不同波长的发光体（12），所述发光体（12）与激发光纤之间设有相匹配的激发滤光片，所述摄像机器（4）与接收光纤之间设有接收滤光片；所述发光体（12）安装于一光源罩合件（13）上，所述激发滤光片嵌设于一滤光安装件（14）内部空腔内，所述光源罩合件（13）与滤光安装件（14）扣合在一起并使得发光体（12）与激发滤光片保持一定距离。

4.如权利要求1所述的一种荧光检测装置，其特征在于，所述激发光源模块（1）连接一用于驱动激发光源模块（1）往复移动的传送机构（3）；所述传送机构（3）包括与激发光源模块（1）固定连接的丝杠螺母（32）、与丝杠螺母（32）螺纹连接的丝杠（31）、驱动丝杠旋转的驱动源。

5.如权利要求4所述的一种荧光检测装置，其特征在于，所述丝杠螺母连接一用于安装激发光源模块（1）的安装组件，所述安装组件包括用于固定激发光源模块（1）的安装板（11）、被丝杠螺母驱动往复运动的驱动板（33）、用于一端连接安装板（11）另一端连接驱动板（33）并配合摄像机器（4）拍照的连接板（35）；所述驱动板（33）设有供一光纤板（23）穿过的通槽，所述光纤板（23）上端穿设光纤组件（2），下端固定于一底座（91）上。

6.如权利要求1-5任一所述的一种荧光检测装置，其特征在于，所述荧光检测装置设有用于放置装有待测物试管件的装载机构，所述装载机构包括用于插装试管件的插装组件（5）、用于对插装组件（5）以及试管件保持恒温的温控机构；所述温控机构包括用于产生冷气的制冷组件（6）、用于加速冷气流动的吹风器（7）、用于排出气体的排气组件（8），所述制冷组件（6）架设于一基座架（10）上方，所述基座架（10）中间安装吹风器（7），两侧安装所述排气组件（8）；所述制冷组件（6）包括若干制冷片，所述制冷片均匀排铺于插装组件（5）下方；所述吹风器（7）上方架设一用于引导风向的通风腔（71），所述套筒内壁为光滑圆壁面，其高度小于或与排气组件（8）下端持平；所述排气组件（8）包括排气腔体（81）以及嵌设排气腔体（81）端部的排气栅板（82），所述排气腔体（81）为喇叭状，排气栅板（82）倾斜排列于排气腔体（81）端口。

7.一种荧光检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

第一步，进行定位：通过机械结构的固定，保证摄像机器的位置与光纤组件导光的位置不会偏移，在此条件下，定位光纤组件的位置；

第二步，进行量化：定位完成后，对摄像机器和光纤组件的位置进行一一对应；

第三步，进行校正：校正因为安装等不确定因素，造成的光纤导光率的不一致；

第四步，进行检测：激发光源模块进行发光，光线透过激发滤光片并通过激发光纤照射到待测物上，待测物产生荧光，所述荧光通过接收光纤并透过接收滤光片射出，摄像机器捕获光后，传输给控制分析模块的处理器进行数据分析。

8.如权利要求7所述的一种荧光检测方法，其特征在于，第一步，进行定位的方法：采用特殊稳定的管腔件待测物，对放入管腔件的待测物，将光导入摄像机器后，由软件计算去除过明及过暗的像素点，保留正常的像素点，并且一一记录这些像素点的位置；对第一个孔位进行照射，摄像机器拍照后，得到一张图片，软件将该图片的每一个像素的值均数字化，参照设定的标准(50-200)，将所有不满足的像素全部剔除，并计算剩余像素点的位置的直径，直径单位为像素，并参照设定的标准，如果剔除后剩下的像素点位置，直径为小于等于设定像素值，软件记录所有像素点的位置，并保留做为第1孔位的光纤位置。

9.如权利要求7所述的一种荧光检测方法，其特征在于，第二步，进行量化的方法：当管腔件中的待测物，产生荧光时，会通过光纤束将光传输给摄像机器，摄像机器捕获光后，对捕获的光所在的像素位置进行比较，如果是在之前定位的位置之外，则认为是干扰光，予以剔除；若在之前孔定位的位置范围内，则保留光的数据，并且根据定位的位置，一一计算孔位；以孔位1为例，当接收光完成后，对比光的像素位置，保留定位的孔位1的位置，将所有的在孔位1的位置的光的值全部读出来，并且去除本底噪音，将所有的在孔位1的位置的像素的值全部相加，并除以孔位1所在的像素的个数，即得到孔位1的荧光的数值；将该数值发送给数据显示端，数据显示端显示后，实验人员能够清晰的感觉到每次实验的荧光的变化。

10.如权利要求7所述的荧光检测方法，其特征在于，第三步，进行校正的方法：用一高亮度的且稳定的荧光试剂对每个孔位进行一一照射，设定孔位数为96，得到荧光值A1--A96，同理，用中亮度照射，得到B1--B96，再用低亮度照射，得到C1--C96，最后用水最为本底，得到D1--D96；将A、B、C的值分别对应减去D的值，得到E1--E96、F1--F96、G1--G96；将E、F、G的值分别平均，得到E平、F平、F平；用E1--E96的值分别除以E平，得到X1--X96，F的值除以F平，得到Y1--Y96，G的值除以G平，得到Z1--Z96，之后将每个孔位的X、Y、Z三个数字加权平均，得到最终的伸张系数：系数1--系数96；最后的荧光值H=(拍照得到的荧光值I-(本底值-1))*系数+(1-1/系数)。