CN111700155A - 含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法 - Google Patents

含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法，制备方法包括以下步骤：S1、将凝结芽孢杆菌菌种在斜面培养基中活化；S2、将活化后的凝结芽孢杆菌菌种转接入种子培养基中，得到一级种子液；S3、将一级种子液转接入种子培养基中，得到二级种子液；S4、将二级种子液转接入液体发酵培养基中进行发酵；S5、发酵结束后，加入木聚糖酶，添加量为0.5％～1.0％；S6、将酶解液喷雾干燥，得到含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌制剂，制备中前期进行凝结芽孢杆菌的生长发酵工艺，在凝结芽孢杆菌发酵过程中产酸和产酶，发酵培养基中的麦麸中的淀粉和蛋白质等成分得到更有效的利用，为后期低聚木糖的酶解工艺创造条件，简化生产工艺。

Description

含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及动物饲料生产领域，具体是涉及一种含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法。
背景技术
低聚木糖(XOS)又称寡聚木糖，由2～8个D-木糖分子经β-1,4糖苷键连接而成的直链糖。低聚木糖作为重要的一种益生元，其特殊的理化性质和功能得到越来越多的研究。作为饲料添加剂方面，低聚木糖能选择性増殖肠道类有益菌群，因此可作为新型绿色饲料添加剂，可有效降低饲养用料量，提高动物免疫力和饲料转换率。不仅可以改善畜禽消化道菌群，促进消化道有益细菌的生长，也可以抑制有害微生物的繁殖，提高机体抵抗力。此外还能吸附肠道病原菌，对动物起保健作用。大量的研究均表明低聚木糖能够增强机体的免疫功能，降低动物血清胆固醇等功效。
但是目前，低聚木糖目前在生产和应用上存在以下问题：
1、低聚木糖可以由含半纤维素的农业加工副产品如麸皮、玉米芯、谷壳、甘蔗渣等为原料，经过高温蒸煮，酸碱等预处理，酶解后分离纯化制得，但是酸碱预处理容易造成废水废气的产生，污染环境。
2、低聚木糖的生产普遍使用的是酶解法制备，虽然在世界范围内对酶的水解进行了各种各样的研究，但在始终没有就酶的组合、生物质的类型、水解条件等却没有达成共识；这是因为低聚木糖的木质纤维的结构是复杂和独特的，比如基于麦麸组份时需要机型相关的多种水解酶(主要为淀粉酶、果胶酶、纤维素酶、蛋白酶)的协同，同时建立除木聚糖之外其他组份的去除条件，使得对以麦麸为原料进行酶解法制备低聚木糖的工艺进行优化，并建立最优酶解工艺，因此就低聚木糖各生产条件难以协同。
3、目前低聚木糖，作为人类食品添加剂，其成本和价格可以接受，但是作为饲料添加剂，由于其成本和价格偏高，很难在饲料工业中大规模广泛使用。
凝结芽孢杆菌是近年来国内外学者的研究热点，不仅具有益生菌的调节肠道内菌群平衡、促进营养物质代谢和利用、提高机体免疫水平等特性，更重要的是具有耐高温、耐酸和耐胆盐等高抗逆性特点。凝结芽孢杆菌作为新型微生态制剂，既能像乳酸菌和双歧杆菌具有益生作用，又具有芽孢菌的抗逆性强、耐高温高压和易贮藏等优点，在畜牧业、水产养殖业、医药、保健和食品行业已广泛应用；但是凝结芽孢杆菌，作为替代抗生素的新型饲料添加剂，由于活菌数和芽孢率较低的缘故，也很难在饲料工业中大规模广泛使用，并且目前的研究结果显示，凝结芽孢杆与其他添加剂的配伍使用，表现并不一致，并不是两者结合后，就能够产生协同作用，有时候反而会出现拮抗作用。
发明内容
本发明的第一目的是提供一种凝结芽孢杆菌与低聚木糖结合的饲料添加剂的制备方法。
本发明的第二目的是提供一种凝结芽孢杆菌与低聚木糖结合的饲料添加剂。
为了实现上述的第一目的，本发明提供的含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂的制备方法包括以下步骤：
S1、将凝结芽孢杆菌菌种在斜面培养基中进行活化；
S2、将活化后的凝结芽孢杆菌菌种以1％接种量转接入种子培养基中，得到一级种子液；
S3、将一级种子液以1％接种量转接入种子培养基中，得到二级种子液；
S4、将二级种子液以5％接种量转接入液体发酵培养基中进行发酵；
S5、发酵结束后，加入木聚糖酶，添加量为0.5％～1.0％；
S6、将酶解液喷雾干燥，得到粉末状含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌制剂。
由上述方案可见，在制备方法中前期进行凝结芽孢杆菌的生长发酵工艺，在凝结芽孢杆菌发酵过程中产酸和产酶，发酵培养基中的麦麸中的淀粉和蛋白质等成分得到更有效的利用，为后期低聚木糖的酶解工艺创造条件，因此在低聚木糖的酶解过程中，可直接省去酸碱前处理步骤、淀粉酶酶解步骤和蛋白酶酶解步骤等，直接进行木聚糖酶酶解步骤，该种在同一生产工艺条件下，进行凝结芽孢杆菌和低聚木糖的结合方法，简化生产工艺，有效提高凝结芽孢杆菌与低聚木糖结合的饲料添加剂的生产效率，降低生产成本，并且该种方法得到的具有凝结芽孢杆菌和低聚木糖的饲料添加剂中的凝结芽孢杆菌的活菌数和芽孢菌有效提高，动物应用效果明显。
进一步的方案是，木聚糖酶为β-1,4-木聚糖内切酶。
可见，β-1,4-木聚糖内切酶以内切方式作用于木聚糖主链内部的β-1,4木糖苷键，水解产品为木寡糖、木二糖和木三糖等。
进一步的方案是，在S6中，酶解在发酵罐内进行，酶解搅拌转速为75rpm/min～100rpm/min，木聚糖酶的酶活量为3000U/g，在35℃～45℃温度下，酶解液调节至pH5.0～6.0，搅拌酶解8h～12h。
可见，在上述的条件下进行酶解，能够得到一定量的低聚木糖的同时，能够保证不影响凝结芽孢杆菌的发酵情况。
进一步的方案是，在S1中，从-80℃冷冻保存的甘油管中取液体菌种，划线至斜面培养基中进行活化，在40℃下培养24h～48h；斜面培养基包括葡萄糖2g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化钠5g/L，琼脂15g/L，pH为7.0，斜面培养基在121℃下灭菌20min。
可见，在斜面培养基中进行活化，保证菌种的同步培养的同时，激活芽孢尽快萌发。
进一步的方案是，在S2中，将活化后的斜面种子转接入转有种子培养基的容器中，在转速为180rpm/min～220rpm/min下，培养18h～24h；种子培养基包括葡萄糖30g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏10g/L，氯化钠5g/L，硫酸镁0.5g/L，碳酸钙10g/L，pH为7.2-7.4，种子培养基在121℃下灭菌20min。
可见，在一定的搅拌转速和一定的搅拌时间可使菌种均匀混合在种子培养基中，充分利用种子培养基中营养成分，有利于菌种的扩大。
进一步的方案是，在S3中，采用发酵罐进行二级种子的培养，发酵罐内装有种子培养基，一级种子在发酵罐内在40℃下，溶氧20％～30％，转速200rpm/min～500rpm/min，通气量为1：1vvm，罐压控制0.04MPa～0.06MPa，培养时间为18h～24h；种子培养基包括葡萄糖30g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏10g/L，氯化钠5g/L，硫酸镁0.5g/L，碳酸钙10g/L，pH为7.2-7.4，种子培养基在121℃下灭菌20min。
可见，在发酵罐内进行二级种子培养，能够更好地控制菌种培养的条件，减少外部影响因素。
进一步的方案是，在S4中，发酵过程在发酵罐中进行，发酵罐的装填系数为70％，二级种子在发酵罐内在40℃，溶氧20％～30％，转速100rpm/min～400rpm/min，通气量1：(0.75～1)vvm，罐压控制0.04MPa～0.06MPa，培养时间为36h～48h；液体发酵培养基包括葡萄糖10g/L～30g/L，可溶性淀粉5g/L～15g/L豆粕，2.5g/L～7.5g/L，蛋白胨5g/L～10g/L，酵母膏5g/L～10g/L，氯化钠5g/L，硫酸镁1.0g/L，磷酸二氢钾2.0g/L，碳酸钙10g/L，麦麸10g/L～50g/L，消泡剂0.05％，其中麦麸的粒径为60目～80目，液体发酵培养基的pH为7.2～7.4，121℃灭菌30min。
可见，麦麸一定范围的粒径为凝结芽孢杆菌的发酵提供足够的营养成分。
进一步的方案是，在S6中，在S5的酶解液中添加0.25％～0.5％的碳酸钙，搅拌搅拌时喷雾干燥进风温度180℃，出风温度80℃～90℃；喷雾干燥得到的含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌制剂的含水量为7％～8％。
可见，上述喷雾干燥工艺参数保证活菌制剂成品的含水量达到所需范围内，将成品的含水量控制上述范围有效延长产品的保存有效期。
为实现上述的第二目的，本发明提供的含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂通过上述的含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂的制备方法制备得到。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供一种含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法，该制备方法包括以下步骤：
S1、从-80℃冷冻保存的甘油管中取液体菌种，划线至斜面培养基中进行活化，在40℃下培养24h～48h；斜面培养基包括葡萄糖2g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化钠5g/L，琼脂15g/L，pH为7.0，斜面培养基在121℃下灭菌20min；
S2、将活化后的斜面种子以1％接种量转接入装有种子培养基的灭菌后的三角瓶中，在转速180rpm/min～220rpm/min下，培养时间为18h～24h，使其达到对数生长期，得到一级种子液；种子培养基包括葡萄糖30g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏10g/L，氯化钠5g/L，硫酸镁0.5g/L，碳酸钙10g/L，pH为7.2-7.4，种子培养基在121℃下灭菌20min。
S3、采用发酵罐进行二级种子的培养，发酵罐内装有种子培养基，一级种子在发酵罐内在40℃下，溶氧20％～30％，转速200rpm/min～500rpm/min，通气量为1：1vvm，罐压控制0.04MPa～0.06MPa，培养时间为18h～24h；种子培养基包括葡萄糖30g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏10g/L，氯化钠5g/L，硫酸镁0.5g/L，碳酸钙10g/L，pH为7.2～7.4，种子培养基在121℃下灭菌20min；
S4、将二级种子液以5％接种量转接入液体发酵培养基中进行发酵；发酵过程在10000L发酵罐内进行，装填系数为70％，即装填量为7000L，发酵条件为40℃，溶氧20％～30％，转速100rpm/min～400rpm/min，通气量1：(0.75～1)vvm，罐压控制0.04MPa～0.06MPa，培养时间为36h～48h；液体发酵培养基包括葡萄糖10g/L～30g/L，可溶性淀粉5g/L～15g/L豆粕，2.5g/L～7.5g/L，蛋白胨5g/L～10g/L，酵母膏5g/L～10g/L，氯化钠5g/L，硫酸镁1.0g/L，磷酸二氢钾2.0g/L，碳酸钙10g/L，麦麸10g/L～50g/L，消泡剂0.05％，其中麦麸的粒径为60目～80目，液体发酵培养基的pH为7.2～7.4，121℃灭菌30min；
S5、发酵结束后，在S5中的发酵罐加入木聚糖酶，木聚糖酶为β-1,4-木聚糖内切酶，酶活量3000U/g，添加量为0.5％(即每公斤发酵液中添加5g木聚糖酶)，在35℃～45℃温度下，调节至pH5.0～6.0，搅拌酶解8h～12h，搅拌转速为75rpm/min～100rpm/min；
S6、将酶解液喷雾干燥，在酶解液中添加0.25％～0.5％的碳酸钙，搅拌30min，再进行喷雾干燥，喷雾干燥设备可选用喷雾型高速离心雾化器，喷雾干燥的进风温度180℃，出风温度80℃～90℃，送料变频为11Hz～13Hz，喷雾干燥后，得到粉末状含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌制剂。
实施例2
本实施例提供一种含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法，该制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于：木聚糖酶的添加量为8％。
实施例3
本实施例提供一种含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法，该制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于：木聚糖酶的添加量为10％。
对凝结芽孢杆菌数、芽孢率进行测定，具体的测定方法如下：
测定原理为：凝结芽孢杆菌能在培养基平板上形成白色，圆形，表面湿润，有光泽，凸起，边缘整齐的菌落，生长过程产生乳酸，可使培养基中含有的CaCO3溶解，在菌落周围形成透明圈；显微镜下镜检菌体呈杆状，单个、成对或链状排列，两端钝圆，无鞭毛，有芽孢(但不常见)，芽孢端生，如蝌蚪状，革兰氏染色阳性。
测定的具体操作：
器皿：培养皿(90mm)，试管(18×180mm)，锥形瓶(250mL、500mL)，吸管(1mL、5mL、10mL)等玻璃器皿；酒精灯，载玻片，盖玻片，镊子。
设备：普通光学显微镜，电子天平(感量0.0001g，称量范围200g)，灭菌锅，恒温培养箱，干燥箱，超净工作台，恒温水浴锅。
试剂：1、培养基：MRS-CaCO3培养基(下称MRS培养基)配方：酪蛋白酶消化物10.0g/L、牛肉膏粉10.0g/L、酵母膏粉4.0g/L、柠檬酸三铵2.0g/L、乙酸钠5.0g/L、七水硫酸镁0.2g/L、四水硫酸锰0.05g/L、磷酸氢二钾2.0g/L、葡萄糖20.0g/L、吐温-80 1.08g/L、碳酸钙2.5g/L、琼脂20g/L。
2、革兰氏染色液：1)结晶紫染色液：A液：结晶紫2g，95％乙醇200mL。B液：草酸铵0.8g，水80mL。A液与B液混合，静置48h后使用。
3、革兰氏碘液：碘1.0g，碘化钾2.0g，蒸馏水300mL；先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘溶解在碘化钾溶液中，待完全溶解后，加水至300mL。
4、番红染色液：番红2.5g，95％乙醇100mL；取上述配好的番红酒精溶液10mL与80mL蒸馏水混匀即可。
凝结芽孢杆菌数、芽孢率测定操作步骤如下：
S1、制作MRS琼脂平板
按照配方配制MRS培养基，调节pH5.7±0.2，分装于三角瓶中，加棉塞封口，121℃灭菌20min。冷却至60℃左右时，将培养基倾注至若干无菌培养皿中，每个平皿约20ml培养基，冷却凝固后待用。
S2、样品的稀释
1)固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL无菌生理盐水以及若干玻璃珠的500mL三角瓶内，放入摇床，200r/min振荡30min，制成1∶10的样品匀液。
2)液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL无菌生理盐水以及若干玻璃珠的500mL三角瓶内，放入摇床，200r/min振荡30min，制成1∶10的样品匀液。
3)用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1∶100的样品匀液。
4)按3)操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。
5)根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液)，吸取0.1mL样品匀液于MRS琼脂平板内，每个稀释度做2个～3个平皿。同时，分别吸取0.1mL空白稀释液加入两个MRS琼脂平板内作空白对照。
6)使用无菌涂布器将MRS琼脂平板上的菌悬液均匀涂在琼脂平板表面。
7)培养：涂布后的平板翻转，装入厌氧罐，加入除氧剂以及氧气指示剂，36℃±1℃厌氧培养48h±1h。
8)菌落计数：选取菌落数量在30～00之间的平板进行计数。
菌落特征
凝结芽孢杆菌在上述培养基上菌落生长形态特征见表1。
表1凝结芽孢杆菌在培养基上的菌落特征
Figure BDA0002587753940000081
凝结芽孢杆菌的鉴定
1、菌种制备
自平板上挑取单菌落，接种于MRS培养基斜面，于36℃±1℃，厌氧培养48h，刮取菌苔，分别进行下列试验。
2、进行革兰氏染色，凝结芽孢杆菌应为革兰氏阳性，菌体呈杆状，单个、成对或链状排列，两端钝圆，无鞭毛，有芽孢(但不常见)，芽孢端生，如蝌蚪状。
3、凝结芽孢杆菌生化特性见表2
表2凝结芽孢杆菌生化特性
Figure BDA0002587753940000082
Figure BDA0002587753940000091
注：+表示90％以上菌株为阳性；-表示90％以上菌株阴性。
菌落计算
1、可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits，CFU)表示。
2、选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
3、其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。
4、当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
5、活菌数的计算方法
1)当只有一个稀释度，其平均菌落数在30～300之间时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数。
2)若有两个稀释度，其平均菌落数均在30～300之间，应按两者菌落总数之比值来决定。若其比例小于2应计数两者的平均数，若大于2则计数其中稀释度低的菌落总数。
3)若三个稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数。
4)若三个稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数。
5)若三个稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以释倍数。
6)活菌数报告
根据菌落特征判定，分别数出平板中的凝结芽孢杆菌菌落数及杂菌菌落数，统计算出同一稀释度平皿上凝结芽孢杆菌菌落平均数B和杂菌数E，凝结芽孢杆菌数A(CFU/g)按式(1)计算：
A＝B×C························(1)
式中：
B——菌落平均数；
C——稀释倍数。
杂菌率D(％)按式(2)计算：
Figure BDA0002587753940000101
式中：
A——凝结芽孢杆菌数，CFU/g；
E——杂菌数，CFU/g。
凝结芽孢杆菌总菌数和芽孢率的测定结果见表3
表3
Figure BDA0002587753940000102
由表3数据可知，三个实施例最终喷雾干燥后总菌数和芽孢率较高，并且最终喷雾干燥后总菌数和芽孢率损失较少，证明在该制备条件下能够有效提高凝结芽孢杆菌的总菌数和芽孢率。
低聚木糖的含量测定
测定方法按照国家标准GB/T 35545-2017中低聚木糖的测定方法进行测定，测定结果见表4。
表4
Figure BDA0002587753940000111
由表4数据可知，最终喷雾干燥得到的粉状饲料添加剂中，低聚木糖的含量为约3.27％，证明在凝结芽孢杆菌发酵后直接加入木聚糖酶，能够很好地得到一定量的低聚木糖，得到含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂，从而简化生产工艺，降低生产成本。
含低聚木糖的凝结芽孢杆菌的饲料添加剂对断奶仔猪生长性能与腹泻率的影响的测试
试验动物、分组及饲养管理
试验选用72头35±2日龄、初重为10.14±0.15kg的杜x长x大三元杂交断奶仔猪，按照单因素4处理3重复随机设计分组，每个重复6头仔猪，公母各半。试验期35d，其中预试期5d，正试期30d。
设置4组日粮实验组，分别为：对照组1：基础日粮组；对照组2：基础日粮和200mg/kg低聚木糖市售产品(低聚木糖的含量为35％)；对照组3:基础日粮和200mg/kg凝结芽孢杆菌市售产品(芽孢数100亿/克)；对照组4：基础日粮和200mg/kg实施例1得到的含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂。基础日粮参照NRC猪饲养标准。试验期间，仔猪高床饲养，自由采食和饮水，并按常规进行防疫和消毒。
测定指标
(1)生长性能：仔猪于正试验开始和结束当天早晨空腹称重、平时记录每天采食量，用于计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。
(2)腹泻率：试验期间每天观察仔猪腹泻个数和持续天数。
腹泻率(％)＝[(腹泻仔猪头数×腹泻天数)/(仔猪总数×饲养天数)]×100％
(3)数据处理与分析：采用SPSS 20.0软件对数据进行单因素方差分析，并用Duncan多重比较进行组件差异显著性检验，所有试验数据均以平均值士标准差表示，p<0.05为差异显著。
测定结果件表5
表5
Figure BDA0002587753940000121
由表5可见，在断奶仔猪饲粮中分别添加单一低聚木糖、单一凝结芽孢杆菌以及低聚木糖与凝结芽孢杆菌结合产品，对仔猪的平均日采食量和平均日增重没有产生显著影响，但是对照组3和对照组4的ADG有增加的趋势，ADFI存在减少的趋势；另外对照组3和对照组4的F/G分别下降了7.86％(P<0.05)和6.18％(P<0.05)，同时，添加低聚木糖可以显著降低仔猪的腹泻率，而且以对照组3效果最佳，仔猪腹泻率与对照组1相比下降75.23％(P<0.05)。从表5的动物实验结果可见，本发明的含低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂中低聚木糖的含量比单一的低聚木糖含量低，但是凝结芽孢杆菌与低聚木糖的结合后的应用效果明显优于单一的低聚木糖的应用效果或单一的凝结芽孢杆菌的应用效果。
最后需要强调的是，以上所述仅为本发明的优选实施例，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种变化和更改，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1、将凝结芽孢杆菌菌种在斜面培养基中进行活化；
S2、将活化后的凝结芽孢杆菌菌种以1％接种量转接入种子培养基中，得到一级种子液；
S3、将一级种子液以1％接种量转接入种子培养基中，得到二级种子液；
S4、将二级种子液以5％接种量转接入液体发酵培养基中进行发酵；
S5、发酵结束后，加入木聚糖酶，添加量为0.5％～1.0％；
S6、将酶解液喷雾干燥，得到粉末状含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌制剂。
2.根据权利要求1所述的含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于：
所述木聚糖酶为β-1,4-木聚糖内切酶。
3.根据权利要求1或2所述的含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于：
在S6中，酶解在发酵罐内进行，酶解搅拌转速为75rpm/min～100rpm/min，木聚糖酶的酶活量为3000U/g，在35℃～45℃温度下，所述酶解液调节至pH5.0～6.0，搅拌酶解8h～12h。
4.根据权利要求1或2所述的含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂的制备方法中，其特征在于：
在S1中，从-80℃冷冻保存的甘油管中取液体菌种，划线至斜面培养基中进行活化，在40℃下培养24h～48h；
所述斜面培养基包括葡萄糖2g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化钠5g/L，琼脂15g/L，pH为7.0，所述斜面培养基在121℃下灭菌20min。
5.根据权利要求1或2所述的含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于：
在S2中，将活化后的斜面种子转接入转有种子培养基的容器中，在转速为180rpm/min～220rpm/min下，培养18h～24h；
所述种子培养基包括葡萄糖30g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏10g/L，氯化钠5g/L，硫酸镁0.5g/L，碳酸钙10g/L，pH为7.2～7.4，种子培养基在121℃下灭菌20min。
6.根据权利要求1或2所述的含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于：
在S3中，采用发酵罐进行二级种子的培养，发酵罐内装有种子培养基，一级种子在发酵罐内在40℃下，溶氧20％～30％，转速200rpm/min～500rpm/min，通气量为1：1vvm，罐压控制0.04MPa～0.06MPa，培养时间为18h～24h；
所述种子培养基包括葡萄糖30g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏10g/L，氯化钠5g/L，硫酸镁0.5g/L，碳酸钙10g/L，pH为7.2～7.4，种子培养基在121℃下灭菌20min。
7.根据权利要求1或2所述的含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于：
在S4中，发酵过程在发酵罐中进行，发酵罐的装填系数为70％，二级种子在所述发酵罐内在40℃，溶氧20％～30％，转速100rpm/min～400rpm/min，通气量1：(0.75～1)vvm，罐压控制0.04MPa～0.06MPa，培养时间为36h～48h；
液体发酵培养基包括葡萄糖10g/L～30g/L，可溶性淀粉5g/L～15g/L豆粕，2.5g/L～7.5g/L，蛋白胨5g/L～10g/L，酵母膏5g/L～10g/L，氯化钠5g/L，硫酸镁1.0g/L，磷酸二氢钾2.0g/L，碳酸钙10g/L，麦麸10g/L～50g/L，消泡剂0.05％，其中麦麸的粒径为60目～80目，液体发酵培养基的pH为7.2～7.4，121℃灭菌30min。
8.根据权利要求1或2所述的含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于：
在S6中，在S5的酶解液中添加0.25％～0.5％的碳酸钙，搅拌时喷雾干燥进风温度180℃，出风温度80℃～90℃。
9.根据权利要求8所述的含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于：
喷雾干燥得到的含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌制剂的含水量为7％～8％。
10.含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂，其特征在于：通过权利要求1至9任一项所述的含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂的制备方法制备得到。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112244150A (zh) * 2020-10-22 2021-01-22 云南微态源生物科技有限公司 一种功能性丁酸梭菌饲料添加剂及其制备方法
CN114591852A (zh) * 2022-01-12 2022-06-07 湖北华扬科技发展有限公司 一种凝结芽孢杆菌x26及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1840674A (zh) * 2006-01-19 2006-10-04 江南大学 一种酶解小麦麸皮制备低聚木糖的方法
CN107647086A (zh) * 2017-11-05 2018-02-02 长沙秋点兵信息科技有限公司 一种采用多菌种混合培养生产微生物饲料添加剂的方法
CN110946211A (zh) * 2019-11-12 2020-04-03 福建御研农业科技有限公司 一种发酵小麦麸皮及其制备方法和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1840674A (zh) * 2006-01-19 2006-10-04 江南大学 一种酶解小麦麸皮制备低聚木糖的方法
CN107647086A (zh) * 2017-11-05 2018-02-02 长沙秋点兵信息科技有限公司 一种采用多菌种混合培养生产微生物饲料添加剂的方法
CN110946211A (zh) * 2019-11-12 2020-04-03 福建御研农业科技有限公司 一种发酵小麦麸皮及其制备方法和应用

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112244150A (zh) * 2020-10-22 2021-01-22 云南微态源生物科技有限公司 一种功能性丁酸梭菌饲料添加剂及其制备方法
CN114591852A (zh) * 2022-01-12 2022-06-07 湖北华扬科技发展有限公司 一种凝结芽孢杆菌x26及其应用
CN114591852B (zh) * 2022-01-12 2023-09-12 湖北华扬科技发展有限公司 一种凝结芽孢杆菌x26及其应用

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