CN111686020A - 鼠尾草酸在制备抗光老化产品中的应用 - Google Patents

鼠尾草酸在制备抗光老化产品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了鼠尾草酸在制备抗光老化产品中的应用，该产品含有低浓度的鼠尾草酸、其药学上可接受的盐或溶剂化物中的至少一种，所述鼠尾草酸的浓度范围为0.01～500nmol/L，所述产品包括药品和护肤品中，所述护肤品为保湿水或面霜；在特定的低浓度下，鼠尾草酸能够产生抗老化的作用效果，进而有效抑制UVA辐射对皮肤组织的伤害；鼠尾草酸具有取材天然，安全无刺激的特点，可广泛用于抗光老化药物和护肤品中，特别是作为新的皮肤护理品种开发具有广阔的市场前景。

Description

鼠尾草酸在制备抗光老化产品中的应用
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及鼠尾草酸在制备抗光老化产品中的应用。
背景技术
光老化是指由紫外线长期反复辐射皮肤所引起的皮肤老化，临床表现为细碎皱纹、皮肤干燥、粗糙、松弛及色素沉着等，并且容易引发各种皮肤癌的发生，危害严重。因此从植物中寻求可以预防和治疗皮肤光老化的天然活性化合物已成为皮肤领域的研究热点。
抗光老化天然产物大部分为酚类化合物，主要包括酚酸类、黄酮类以及高分子多酚类，早已被证实的抗光老化天然产物有咖啡酸、阿魏酸、白藜芦醇、芹菜素、染料木黄酮、水飞蓟素、茶多酚(如表没食子儿茶素没食子酸脂)、单宁酸等。尽管抗皮肤光老化天然活性成分以其得天独厚的优势而备受重视，部分已被开发为抗皮肤光老化药物或者化妆品，但是功效却不尽人意，亟待寻找新型疗效显著、毒副作用小的抗皮肤光老化天然活性成分来预防和治疗皮肤光老化。
鼠尾草酸(Carnosic acid，简称CA)是一种二萜酚类成分，广泛分布于唇形科鼠尾草属植物鼠尾草(Salvia officinalis L.)和迷迭香属植物迷迭香(Rosmarinusofficinalis L.)中，是迷迭香和鼠尾草的主要抗氧化成分。研究表明，鼠尾草酸有广泛的药理活性，包括抗氧化作用、抗癌作用、抗炎作用、抑制血管生成作用、抗代谢失调、护肝及神经保护作用等，其抗氧化作用和抗炎作用已被很多研究证实。鼠尾草酸的结构式如下所示：
Figure BDA0002552328790000011
现有文献中有记载皮肤光老化是细胞凋亡、炎症反应、氧化应激反应等生物过程共同作用的结果，其中炎症反应和氧化应激反应是皮肤光老化的主要发生机制，因而具有抗氧化作用和抗炎作用的天然产物很可能具有抗皮肤光老化作用。鼠尾草酸能通过抑制炎症相关通路如NF-κB信号通路、ROS-p38MAPK信号通路等抑制炎症因子的生成，缓解炎症反应，发挥抗炎作用。目前尚未有研究揭示鼠尾草酸的抗光老化的作用，开发新的抗光老化的天然产物具有重要意义。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出鼠尾草酸在制备抗光老化产品中的应用，该类产品具有良好的抗光老化效果。
根据本发明实施例的应用，所述鼠尾草酸包括如下式所示的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物中的至少一种；
Figure BDA0002552328790000021
所述鼠尾草酸的浓度不超过500nmol/L。
根据本发明实施例的应用，至少具有如下有益效果：本发明提供了含低浓度鼠尾草酸在预防和/或治疗皮肤光老化中的应用，在特定的低浓度下，鼠尾草酸能够产生抗老化的作用效果，进而有效抑制长波紫外线(ultravioalet，UVA)辐射对皮肤组织的伤害；鼠尾草酸具有取材天然，安全无刺激的特点，可广泛用于抗光老化药物和护肤品等产品中，尤其是作为新的皮肤护理品种开发具有广阔的市场前景。
作为优选的，所述鼠尾草酸的浓度范围为0.1～50nmol/L。
作为优选的，所述鼠尾草酸的浓度范围为0.1～10nmol/L。
作为优选的，所述鼠尾草酸的浓度范围为0.5～5nmol/L。
作为优选的，所述鼠尾草酸的浓度范围为0.5～2nmol/L。
根据本发明的一些实施例，所述产品包括药品或护肤品中的至少一种。
根据本发明的一些实施例，所述鼠尾草酸在护肤品中的加入量为每100g护肤品加入鼠尾草酸0.35～17.5ng。
作为优选的，所述鼠尾草酸在护肤品中的加入量为每100g护肤品加入鼠尾草酸3.5ng。
根据本发明的一些实施例，所述护肤品为保湿水，所述保湿水的制备原料包括以下重量百分比的成分：磷酸二氢钾0.1～0.3％、磷酸氢二钾0.1～0.3％、黄原胶1.0～2.0％、甘油5.0～8.0％、丙二醇2.0～3.0％、羟苯甲酯0.01～0.2％、山嵛醇聚醚1.0～3.0％、玻尿酸0.2～1％、香精0.05～0.2％；去离子水补齐至100％，再按每100g护肤品加入鼠尾草酸1.0～10ng的加入量将鼠尾草酸加入保湿水，混合均匀。
作为优选的，所述护肤品为保湿水，所述保湿水的制备原料包括以下重量百分比的成分：磷酸二氢钾0.2％、磷酸氢二钾0.2％、黄原胶1.5％、甘油6.0％、丙二醇2.5％、羟苯甲酯0.1％、山嵛醇聚醚2.0％、玻尿酸0.5％、香精0.1％，去离子水补齐至100％；再按每100g护肤品加入鼠尾草酸3.5ng的加入量将鼠尾草酸加入保湿水，混合均匀，即得本发明保湿水。
根据本发明的一些实施例，所述护肤品为面霜，所述面霜的制备原料包括以下质量百分比的成分：黄原胶0.2～1％、甘油6.0～10％、丁二醇2.0～4.0％、丙二醇1.0～2.0％、羟苯甲酯0.05～0.2％、山嵛醇1.0～3.0％、氢化卵磷脂0.05～0.2％、天然角鲨烷6.0～8.0％、鲸蜡醇1.0～3.0％、霍霍巴油1.0～3.0％、玻尿酸0.5～2％；去离子水补齐至100％，再按每100g护肤品加入鼠尾草酸1.0～10ng的加入量将鼠尾草酸加入面霜中，混合均匀。
作为优选的，所述护肤品为面霜，所述面霜的制备原料包括以下重量百分比的成分：黄原胶0.5％、甘油8.0％、丁二醇3.0％、丙二醇1.5％、羟苯甲酯0.1％、山嵛醇2.0％、氢化卵磷脂0.1％、天然角鲨烷7.0％、鲸蜡醇2.0％、霍霍巴油2％、玻尿酸1％、去离子水补齐至100％；再按每100g护肤品加入鼠尾草酸5ng的加入量将鼠尾草酸加入面霜中，混合均匀，即得本发明面霜。本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
图1为本发明实验例1中鼠尾草酸对人皮肤成纤维细胞的细胞活性影响实验结果图；
图2为本发明实施例2中鼠尾草酸对UVA诱导的人皮肤成纤维细胞的细胞活性影响实验结果图(培养24h)；
图3为本发明实施例2中鼠尾草酸对UVA诱导的人皮肤成纤维细胞的细胞活性影响实验结果图(培养24h、28h、72h)；
图4为本发明实施例3中鼠尾草酸抑制UVA诱导的人皮肤成纤维细胞中β-半乳糖苷酶活性的细胞染色阳性率结果图；
图5为本发明实施例3中鼠尾草酸抑制UVA诱导的人皮肤成纤维细胞中衰老相关蛋白p16INK4a的表达结果图。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。
材料来源：鼠尾草酸(商业购买)；人皮肤成纤维细胞(来源于中南大学医学遗传学国家重点实验室培养)。
细胞处理：实验时使用的人皮肤成纤维细胞均由原代人皮肤成纤维细胞复苏后，扩增培养，生长4代，取细胞融合度达到80％以上的细胞接种，进行实验。
实验例1鼠尾草酸对人皮肤成纤维细胞的细胞活性的影响实验：
配制含有以下不同浓度的鼠尾草酸溶液(0.001、0.01、0.1、0.5、1、5、10μM)，使用MTT法检测鼠尾草酸(CA)对人皮肤成纤维细胞的细胞活性的影响，如图1所示。图1中各数据用平均值±标准误表示，n＝3。与空白对照组(control)相比，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001；与照光组(UVA)相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
图1结果表明，当鼠尾草酸浓度在0.5μmol/L以下时，不会抑制人皮肤成纤维细胞的活性；当CA浓度为1μmol/L和5μmol/L时，可对人皮肤成纤维细胞活性产生影响，与对照组比较，有统计学差异(P<0.001)；当鼠尾草酸浓度为10μM时，对人皮肤成纤维细胞产生细胞毒性，与对照组比较，有统计学差异(P<0.001)。
实施例2鼠尾草酸对UVA照射后人皮肤成纤维细胞的细胞活性的影响实验：
1、配制含有以下不同浓度的鼠尾草酸溶液(0.001、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5μM)，用UVA(10J/cm2*3d)照射人皮肤成纤维细胞，每次照光前后各加入上述不同浓度的鼠尾草酸溶液处理2h，处理结束后继续培养24h，使用MTT法检测鼠尾草酸(CA)对人皮肤成纤维细胞的细胞活性的影响，得到结果如图2所示。
从图2结果可知，当鼠尾草酸浓度为0.1～0.5μM时，对人皮肤成纤维细胞的增殖有一定的抑制作用，与对照组比较，有统计学差异(P<0.05)；当鼠尾草酸浓度为0.01μM以下时，可以促进人皮肤成纤维细胞增殖，与对照组比较，有统计学差异(P<0.05)。
2、配制含有以下不同浓度的鼠尾草酸溶液(0.5、1、2nM)，用UVA(10J/cm2*3d)照射人皮肤成纤维细胞，每次照光前后各加入上述不同浓度的鼠尾草酸溶液处理2h，处理结束后继续培养24h、48h和72h，得到结果如图3所示。
从图3结果可知，UVA辐射使细胞增殖显著降低，与对照组比较，有统计学差异(P<0.001)，用浓度为0.5、1、2nM的鼠尾草酸处理细胞后，皮肤成纤维细胞活性呈剂量依赖性提高。本实施例中，尤其是在2nM的鼠尾草酸浓度下具有最好的提高细胞活性的效果，同时，当培养时间越长，可见鼠尾草酸的作用效果越明显。
实施例3鼠尾草酸的抗光老化药理学研究实验：
1、鼠尾草酸抑制UVA诱导的人皮肤成纤维细胞中β-半乳糖苷酶活性实验：在UVA(10J/cm2*3d)辐射人皮肤成纤维细胞前后，分别用不同浓度CA(0.5、1、2nM)处理细胞，利用β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测β-半乳糖苷酶活性。
图4为鼠尾草酸抑制UVA诱导的人皮肤成纤维细胞中β-半乳糖苷酶活性的细胞染色阳性率结果图，其中横坐标为使用CA处理细胞的CA浓度，UVA(-)为未经过UVA辐射，UVA(+)为经过UVA辐射，纵坐标表示β-半乳糖苷酶染色。从图4结果可知，UVA照射后与对照组相比，细胞染色阳性率明显增高，有统计学差异(P<0.001)，提示UVA照射成纤维细胞衰老模型建模成功；经不同浓度CA处理后的成纤维细胞β-半乳糖苷酶染色阳性率降低，且在0.5～2nM浓度范围内呈剂量依赖性，2nM浓度CA处理后的细胞β-半乳糖苷酶染色阳性率相对较低，说明CA对β-半乳糖苷酶活性具有抑制作用，CA可通过该抑制途径抑制细胞衰老进程。
2、鼠尾草酸抑制UVA诱导的人皮肤成纤维细胞中衰老相关蛋白的表达实验：在UVA(10J/cm2*3d)辐射人皮肤成纤维细胞前后，分别用不同浓度CA(0.5、1、2nM)处理细胞，24h后使用Western blot检测衰老相关蛋白p16INK4a的表达情况。图5为鼠尾草酸抑制UVA诱导的人皮肤成纤维细胞中衰老相关蛋白p16INK4a的表达结果图，其中横坐标为使用CA处理细胞的CA浓度，UVA(-)为未经过UVA辐射，UVA(+)为经过UVA辐射，纵坐标表示相对于对照组的p16INK4a表达量的p16INK4a蛋白表达的相对密度。
从图5结果可知，经UVA辐射后的细胞中p16INK4a表达量显著增高，当使用CA处理细胞后，相对于未使用CA的UVA辐射组的p16INK4a表达量明显降低，且在且在0.5～2nM浓度范围内呈剂量依赖性，2nM浓度CA处理后的细胞p16INK4a表达量相对于未使用CA组使降低了一半，说明CA具有显著的抑制衰老相关蛋白表达的效果。
本实施例中使用的鼠尾草酸，其抗光老化的作用在0.5～2nmol/L的浓度范围内呈剂量依赖性提高；其能够降低β-半乳糖苷酶染色阳性率且鼠尾草酸呈剂量依赖性抑制UVA照射后皮肤成纤维细胞p16INK4a的表达。本发明药物是通过抑制p16INK4a信号通路来抑制细胞衰老，降低MMP-1的表达，从而减少其对ECM的降解降低UVA辐射对皮肤组织的伤害程度，从而达到预防及治疗皮肤光老化的作用。本实施例中的药理学实验进一步说明了鼠尾草酸在抗光老化中的作用，并且在一定浓度范围内具有良好的作用效果。
实施例4含不同浓度鼠尾草酸的药物的配制：
配方1：称取鼠尾草酸3.5g，在使用时将其稀释至浓度为0.01nmol/L，即得。
配方2：称取鼠尾草酸7g，在使用时将其稀释至浓度为500nmol/L，即得。
配方3：称取鼠尾草酸7g，在使用时将其稀释至浓度为50nmol/L，即得。
配方4：称取鼠尾草酸7g，在使用时将其稀释至浓度为25nmol/L，即得。
配方5：称取鼠尾草酸10g，在使用时将其稀释至浓度为15nmol/L，即得。
配方6：称取鼠尾草酸7g，在使用时将其稀释至浓度为2nmol/L，即得。
配方7：称取鼠尾草酸10g，在使用时将其稀释至浓度为1nmol/L，即得。
配方8：称取鼠尾草酸5g，在使用时将其稀释至浓度为0.1nmol/L，即得。
配方9：称取鼠尾草酸5g，在使用时将其稀释至浓度为10nmol/L，即得。
实施例5含鼠尾草酸保湿水：
本实施例提供一种预防皮肤光老化的保湿水，以保湿水的总质量计，其配方为：磷酸二氢钾0.2％、磷酸氢二钾0.2％、黄原胶1.5％、甘油6.0％、丙二醇2.5％、羟苯甲酯0.1％、山嵛醇聚醚-20 2.0％、玻尿酸0.5％、香精0.1％，去离子水补齐至100％；将上述各组分按配方量混合均匀，再按每100g护肤品加入鼠尾草酸3.5ng的加入量将鼠尾草酸加入其中，混合均匀，加水时边加边搅拌至完全溶解后直至透明即得。
实施例6含鼠尾草酸面霜：
本实施例提供一种预防皮肤光老化的面霜，以保湿水的总质量计，其配方为：黄原胶0.5％、甘油8.0％、丁二醇3.0％、丙二醇1.5％、羟苯甲酯0.1％、山嵛醇2.0％、氢化卵磷脂0.1％、天然角鲨烷7.0％、鲸蜡醇2.0％、霍霍巴油2％和玻尿酸1％，其制备方法为将上述各组分按配方量混合均匀，去离子水补齐至100％，再按每100g护肤品加入鼠尾草酸5ng的加入量将鼠尾草酸加入面霜中，混合均匀，加水时边加边搅拌至完全溶解后直至混合乳化均匀即得。
本发明提供的低浓度鼠尾草酸在制备预防皮肤光老化的化妆品或护肤品的应用中，可以直接添加鼠尾草酸也可将其配成相应溶液，最终均使其在化妆品或护肤品中达到本发明所述的浓度范围。
综上所述，本发明提供的预防和/或治疗皮肤光老化含低浓度鼠尾草酸的产品，在特定的低浓度下，鼠尾草酸能够产生抗老化的作用效果，进而有效抑制UVA辐射对皮肤组织的伤害；鼠尾草酸具有取材天然，安全无刺激的特点，可广泛用于抗光老化药物和护肤品中，特别是作为新的皮肤护理品种开发具有广阔的市场前景。
上述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (10)

1.鼠尾草酸在制备抗光老化产品中的应用，其特征在于，所述鼠尾草酸包括如下式所示的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物中的至少一种；
Figure FDA0002552328780000011
所述鼠尾草酸的浓度不超过500nmol/L。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述鼠尾草酸的浓度范围为0.1～50nmol/L。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述鼠尾草酸的浓度范围为0.1～10nmol/L。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述鼠尾草酸的浓度范围为0.5～5nmol/L。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述鼠尾草酸的浓度范围为0.5～2nmol/L。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗光老化产品包括药品或护肤品中的至少一种。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述鼠尾草酸在护肤品中的加入量为每100g护肤品加入鼠尾草酸0.35～17.5ng。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述鼠尾草酸在护肤品中的加入量为每100g护肤品加入鼠尾草酸3.5ng。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述护肤品为保湿水，所述保湿水的制备原料包括以下质量百分比的成分：磷酸二氢钾0.1～0.3％、磷酸氢二钾0.1～0.3％、黄原胶1.0～2.0％、甘油5.0～8.0％、丙二醇2.0～3.0％、羟苯甲酯0.01～0.2％、山嵛醇聚醚1.0～3.0％、玻尿酸0.2～1％、香精0.05～0.2％；去离子水补齐至100％，再按每100g护肤品加入鼠尾草酸1.0～10ng的加入量将鼠尾草酸加入保湿水，混合均匀。
10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述护肤品为面霜，所述面霜的制备原料包括以下质量百分比的成分：黄原胶0.2～1％、甘油6.0～10％、丁二醇2.0～4.0％、丙二醇1.0～2.0％、羟苯甲酯0.05～0.2％、山嵛醇1.0～3.0％、氢化卵磷脂0.05～0.2％、天然角鲨烷6.0～8.0％、鲸蜡醇1.0～3.0％、霍霍巴油1.0～3.0％、玻尿酸0.5～2％；去离子水补齐至100％，再按每100g护肤品加入鼠尾草酸1.0～10ng的加入量将鼠尾草酸加入面霜中，混合均匀。
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