CN111671758A - 牛磺罗定在制备抗hiv病毒药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种牛磺罗定在制备抗HIV病毒药物中的应用，涉及医药技术领域。本发明首次发现牛磺罗定的新用途，即牛磺罗定在抑制HIV病毒、或者制备HIV病毒药物中的应用。牛磺罗定对人体的安全性已经得到临床实践的检测，本发明发现了牛磺罗定对HIV病毒的明显药效，为抗HIV病毒提供了强有力的理论基础和实践基础，具有开发价值和推广意义。本发明在细胞水平上检测了牛磺罗定对人类免疫缺陷病毒HIV的灭活效果，灭活效率约为73％。本发明为艾滋病的治疗提供了新的途径。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种牛磺罗定在制备抗HIV病毒药物中的应用。
背景技术
艾滋病是一种危害性极大的传染病，由感染艾滋病病毒(HIV病毒)引起。 HIV是一种能攻击人体免疫系统的病毒。它把人体免疫系统中最重要的CD4T淋巴细胞作为主要攻击目标，大量破坏该细胞，使人体丧失免疫功能。因此，人体易于感染各种疾病，并可发生恶性肿瘤，病死率较高。但目前在全世界范围内仍缺乏根治HIV感染的有效药物。
CN101274921A、CN101285813A的中国专利中公开了牛磺罗定(Taurolidine)的化学名为：4,4′-亚甲基双-(四氢-2H-1,2,4-噻二嗪)-1,1,1′,1′四氧化物，分子式为C7H16N4O4S2，分子量为：284.348，形状为白色或类白色结晶性粉末，其化学结构式如下：
可通过下述合成路线合成：
牛磺罗定是一种广谱的抗菌、抗真菌和抗内毒素的药物。主要用来预防那些患有多种与导尿管相关的血流感染病人的俊学症。也可用于治疗耳炎、胸膜积脓症、骨炎、骨髓炎、皮炎、牙周炎、牙龈炎、痤疮和各种溃疡。但目前没有被发现可以用于抗艾滋病毒的用途。
发明内容
本发明的目的是提供一种牛磺罗定的新用途，即牛磺罗定在抑制HIV病毒、或者在制备抗HIV病毒药物中的应用。
在上述技术方案中，所述的牛磺罗定可以制成注射剂、输液剂、片剂、胶囊剂等剂型，优选为输液剂。
本发明的有益效果是：
本发明首次发现牛磺罗定的新用途，即牛磺罗定在抑制HIV病毒、或者在制备HIV病毒药物中的应用。牛磺罗定对人体的安全性已经得到临床实践的检测，本发明发现了牛磺罗定对HIV病毒的明显药效，为抗HIV病毒提供了强有力的理论基础和实践基础，具有开发价值和推广意义。本发明在细胞水平上检测了牛磺罗定对人类免疫缺陷病毒HIV的灭活效果，灭活效率约为73％。本发明为HIV 病毒引发的疾病的治疗提供了新的途径。
具体实施方式
为了更好的理解本发明的实质，下面通过在细胞水平上检测牛磺罗定对人类免疫缺陷病毒HIV的灭活效果。以下提供的是由武汉微立得生物医药有限公司作出的牛磺罗定样品的灭活病毒检测报告。
1.实验材料
1.1受检测样品：
参照CN101274921A的合成方法合成牛磺罗定，配置成2％的牛磺罗定溶液，作为受检样品。
1.2细胞：MT-4，人T细胞白血病细胞，MT-4细胞的培养条件为：37℃，5％CO2加湿培养箱中培养。培养基使用含有10％FBS、100U/mL青霉素和链霉素(碧云天#ST488)的RPMI1640培养基。当细胞密度达到1×107个/mL时，将细胞培养瓶静置后，去掉培养基上清，1:5传代，并加入新鲜培养基。
1.3病毒：HIV-1，IIIB株。
1.4实验试剂：RPMI1640培养基、胎牛血清及其他实验试剂由本实验室提供。
2.实验原理及方法
HIV-1病毒感染MT-4细胞，能在MT-4细胞中大量快速复制，然后释放到细胞培养上清中，用ELISA(酶联免疫吸附测定法)检测细胞培养上清中P24蛋白(HIV衣壳蛋白)，即可判断细胞培养孔中是否有HIV的复制，从而计算出样品中病毒的TCID50值。
3.实验步骤
3.1样品准备：取4个EP管，分别标记A、B、C、D。A管中为样品灭活病毒样品，即在管中加入50μL样品和450μL的HIV-1病毒原液；B管为病毒对照样品，即在管中加入50μL PBS和450μL的HIV-1病毒原液；C管为细胞毒性测试样品，即在管中加入50μL样品和450μL的RPMI1640培养基；D管为细胞对照样品，即在管中加入50μL PBS和450μL的RPMI1640培养基。
3.2样品孵育：将上述的A、B、C、D，混匀后在36.5℃水浴锅中孵育10min。
3.3样品稀释：在96孔板中，每孔加入100μL的RPMI1640培养基。将孵育后的样品每孔加25μL到96孔板的第一排孔中混匀，A、B管为6个复孔，C、D管为2个复孔。每孔取25μL混匀后，加入到下一排孔，5倍梯度稀释，7个稀释度。
3.4加细胞培养：将MT-4细胞密度调整至1.5×105，每孔加入100μL细胞悬液。将96孔板放入CO2培养箱中静置培养过夜。
3.5未进入病毒颗粒的洗涤：上述细胞板在CO2培养箱中静置培养过夜后，每孔取出150μL上清，加入150μL PBS，400rpm离心5min。去掉上清，一共清洗4次。最后加入培养基，静置培养5天。
3.6HIV P24的ELISA检测：培养5天后，每孔取出100μL上清，加入100μL 1％的Triton-X 100，37℃孵育2h。P24 ELISA检测试剂盒检测上清中P24的表达情况。阳性细胞孔标记为“+”，否则标记为“-”，用Karber法计算样品中的病毒TCID50值。
3.7样品的细胞毒性检测：在细胞毒性检测板中，每孔去掉100μL上清，加入50μLCelltire-Glo试剂，检测细胞活力，并计算细胞存活率。
4.样品灭活人类免疫缺陷病毒HIV活性检测结果
样品对人类免疫缺陷病毒HIV灭活的P24检测结果如表2所示。
表1样品对HIV的灭活作用的细胞铺板
表2样品对HIV的灭活的P24检测结果
注：“-”代表P24阴性，“+”代表P24阳性。灰色区域表示细胞存活率为10％以下。
5.总结
本次实验在细胞水平上检测了样品对人类免疫缺陷病毒HIV的灭活效果。检测结果显示HIV在受检测样品存在下，36.5℃10min作用条件下，病毒的滴度为 3.09×103TCID50/mL，而HIV病毒对照的滴度为1.17×104TCID50/mL，灭活效率约为73％。
由此可知牛磺罗定对HIV病毒的明显药效，为抗HIV病毒提供了强有力的理论基础和实践基础，具有开发价值和推广意义。牛磺罗定可用于制备抗HIV-1病毒药物。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (4)
1.一种牛磺罗定在抑制HIV病毒上的应用。
2.一种牛磺罗定在制备抗HIV病毒药物中的应用。
3.权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的牛磺罗定的药物剂型为注射剂、输液剂、片剂、或者胶囊剂剂型。
4.权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的牛磺罗定的药物剂型为输液剂。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20200918 |