CN111650298A - 一种固相萃取-高效液相色谱法同时检测奶牛粪污中5种磺胺类药物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生化分析检测技术领域，具体公开了一种固相萃取‑高效液相色谱法同时检测奶牛粪污中5种磺胺类药物的方法。本发明建立的固相萃取‑高效液相色谱法具有灵敏度高、检测限低的特点，可同时定量检测奶牛粪污中磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺喹噁啉的残留。采用C18色谱柱，以0.3%的乙酸‑乙腈溶液为流动相，在流速1.0 mL/min、检测波长270 nm、柱温30℃条件下，5种药物均能达到基线分离；3倍信噪比下，5种药物的检出限均为20μg/kg。在加标浓度50μg/kg条件下，奶牛粪污样品经前处理、MCX固相萃取小柱富集净化后，五种药物回收率达到75%~80%，相对标准偏差为2.8%~3.9%。

Description

一种固相萃取-高效液相色谱法同时检测奶牛粪污中5种磺胺 类药物的方法
技术领域
本发明涉及生化分析检测技术领域，具体涉及一种固相萃取-高效液相色谱法同时检测奶牛粪污中5种磺胺类药物的方法。
背景技术
抗菌类药物的广泛应用推动了规模化、集约化畜禽养殖业的快速发展，但抗菌类药物在动物体内吸收性差，约30-90％以原形或初级代谢物形式随畜禽粪尿排出体外，从而产生大量药物残留的粪污。畜禽粪污还田利用是当前资源化利用的主要途径，还田利用过程中粪污残留的抗菌类药物可通过地表径流、渗滤等方式进入环境，对地表水、农田土壤和地下水造成污染，对生态环境和人类健康造成严重危害[1-4]。
目前用于分析抗菌类药物痕量的检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)和高效液相-串联质谱法(LC-MS)[5]。LC-MS法虽然可以提高定量分析的精密度和灵敏度，但对畜禽养殖粪污中的复杂成分存在较强的基质效应，且操作复杂，使用及维护成本较高。HPLC技术与之相比具有检测成本低、易于操作且检测速度快等特点，已成功用于不同环境基质中抗生素的定量分析[6]。目前建立的抗菌药物检测方法主要集中在食品、土壤、城市污水及养殖废水等，而对奶牛场粪污中抗菌药物残留的检测方法的报道较少[7-9]。奶牛场粪污主要指奶牛排泄的粪便、尿液、降温与挤奶厅冲洗等产生的污水及生活污水等组成的混合物，由于其成分复杂，样品前处理显得冗杂而费时费力，因此探索一种简单、快捷的样品前处理技术十分必要。固相萃取是近年发展起来的一项样品前处理技术，主要通过固相填料对样品组分的选择性吸附及解吸过程，降低样品基质干扰，提高检测灵敏度，实现样品的分离、纯化和富集[10]。本申请拟以畜禽粪污中检出率和检出浓度较高的5种磺胺类药物作为目标分析化合物，建立了一种固相萃取-高效液相色谱法，可同时定量测定奶牛粪污中的五种磺胺类药物的痕量残留，研究结果对加强奶牛粪污的安全处理与资源化利用的安全评价具有积极的意义。现有技术中尚未见有相关报道。
发明内容
针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供了一种固相萃取-高效液相色谱法同时检测奶牛粪污中5种磺胺类药物的方法，所述5种磺胺类药物为磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑和磺胺喹噁啉。
本发明的技术方案如下：
一种固相萃取-高效液相色谱法同时检测奶牛粪污中上述5种磺胺类药物的方法，依次包括如下步骤：
(1)样品前处理；(2)固相萃取；(3)进高效液相色谱仪分析。
其中，所述步骤(3)的色谱条件如下：
AgiLent SB-C18色谱柱(500mm×4.6nm,5μm)；检测波长为270nm；流动相为0.3v/v％乙酸(A)和乙腈(B)，流速为1.0mL/min；柱温30℃；梯度洗脱程序：0～15min，85％A；15～20min，60％A，20～20.1min，85％A；20.1～25min，85％A。
所述步骤(1)样品前处理的步骤如下：将奶牛粪污冷冻干燥后粉碎、过筛，然后称取过筛后的样品xg，加入ymL水和ymL乙腈，漩涡混匀，超声至少10min，加入zg氯化钠，漩涡混匀后，离心，将上层提取液转移至离心管中，向残渣中每次加入ymL乙腈，提取2次，合并提取液，旋转蒸发近干，用amL0.1mol/L盐酸溶解残渣，然后每次加入bmL正己烷去脂，处理2次，取水层备用。
其中，y：z：a：b＝10：3：20：6。
x：y：z：a：b＝(0.125-10)：10：3：20：6。
最佳的，x：y：z：a：b＝5：10：3：20：6。
所述步骤(2)固相萃取的步骤如下：
首先，依次用6mL超纯水和6mL甲醇对60mg/3mL的MCX固相萃取小柱进行活化，然后将步骤(1)所得水层以2mL/min流速过柱，依次用6mL 0.1mol/L盐酸、6mL超纯水和6mL甲醇冲洗MCX固相萃取小柱，吹干柱中残留液体，加入6mL氨水-甲醇(V:V，2:98)洗脱，收集洗脱液，氮吹近干后，用0.3v/v％乙酸-乙腈混合溶液(0.3v/v％乙酸和乙腈体积比为85:15)定容，待进高效液相色谱仪分析。
上述固相萃取-高效液相色谱法同时检测奶牛粪污中上述5种磺胺类药物的方法是采用外标法定量。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和有益效果：
建立了一种固相萃取-高效液相色谱法同时检测奶牛粪污样品中五种磺胺类药物的检测方法。本方法对5种磺胺类药物的检出限均为20μg/kg，回收率在75～80％。本方法灵敏度高、检出限低，能够准确对样品中磺胺类药物进行定量分析，对畜禽粪污残留抗生素污染评估和治理具有重要的指导意义。
附图说明
图1为5种磺胺类药物标准品混合溶液色谱图；
图2为磺胺嘧啶标准品标准曲线；
图3为磺胺二甲嘧啶标准品标准曲线；
图4为磺胺间甲氧嘧啶标准品标准曲线；
图5为磺胺甲噁唑标准品标准曲线；
图6为磺胺喹噁啉标准品标准曲线。
图7为奶牛粪污样品添加磺胺类药物混合标准工作液色谱图。
具体实施方式
下面申请人将结合具体的实施例对本发明的技术方案做进一步描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均应包括于本发明的保护范围之内。
实施例1
一种固相萃取-高效液相色谱法同时检测奶牛粪污中5种磺胺类药物的方法
1材料与方法
1.1材料
1.1.1仪器
Agilent-1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；超声波破碎仪(宁波新芝生物科技股份有限公司)；涡旋混合器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)；旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；固相萃取装置(天津市富城达科技有限公司)；氮吹仪(杭州聚同电子有限公司)；CNW Poly-Sery MCX固相萃取柱(ANPEL，60mg，3mL/50pcs)；pH计(上海佑科仪器仪表有限公司)；AgiLent ZORBAX SB-C18色谱柱(500mm×4.6nm,5μm)；离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)；0.22μm的微孔滤头(天津津腾实验设备有限公司)。
1.1.2试剂
磺胺嘧啶(SDZ)、磺胺二甲嘧啶(SDMD)、磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺甲恶唑(SMZ)、磺胺喹噁啉(SQ)标准品，均购自大连美仑生物技术有限公司，纯度≥98％；乙腈、甲醇为色谱纯，均购自美国Themo公司；氯化钠、氨水(实施例1中氨水浓度为25-28wt％)、盐酸、冰乙酸、正己烷等试剂均为分析纯，购自上海国药集团化学试剂有限公司；实验用水为超纯水。
1.2方法
1.2.1标准溶液的配置
分别称取0.0100g各磺胺类药物标准品，加入乙腈溶解并定容至100mL棕色容量瓶，配制成100mg/L的标准储备液(五种单标储备液)，放置于-20℃冰箱避光保存。准确量取各种单标储备液0.1mL，混合，用乙腈定容至1mL，得五种药物浓度均为10mg/L的混合标准工作液，备用。
1.2.2样品前处理
样品选取自武汉某小型奶牛养殖场，经前期调研确认，在养殖过程中未使用任何磺胺类药物，根据畜禽粪便监测技术规范(GB/T 25169-2010)的要求，采集奶牛场粪污收集池中的奶牛粪污样品(将本样品当作空白样品)，采用四分法混合均匀，取约1000g作为加标样品，样品采集后用黑色塑料袋密封，并立即存放于冰盒中运回实验室，然后进行冷冻干燥处理(冻干后的质量是后续加标的基准)。分析前用高速粉碎机将其粉碎，过筛，使其粒径小于2mm孔径试验筛孔，混合均匀后均分至100g，并加入500μL经1.2.1所得混合标准工作液，使5种磺胺类药物浓度达到50μg/kg。混合均匀后室温放置24h，使磺胺类药物与样品介质充分接触，做为加标样品供检测用。
称取5.0g加标样品，加入10mL水和10mL乙腈，漩涡混匀，超声15min，加入3.0g氯化钠，漩涡混匀后，4500rpm离心3min，上层提取液转移至50mL离心管中，残渣中每次加入10mL乙腈，提取2次，合并提取液，旋转蒸发近干，用20mL0.1mol/L盐酸溶解残渣，然后每次加入6mL正己烷去脂，处理2次，取水层备用。
1.2.3样品净化(即“固相萃取”)
MCX固相萃取小柱(60mg/3mL)在使用前，依次用6mL超纯水和6mL甲醇进行活化。将经1.2.2样品前处理所得水层以2mL/min流速过柱，依次用6mL0.1mol/L盐酸、6mL超纯水和6mL甲醇冲洗MCX固相萃取小柱，吹干柱中残留液体，加入6mL氨水-甲醇(V:V，2:98)洗脱目标药物，收集洗脱液，控制氮吹速度，使氨化甲醇流失速度不大于0.05mL/min，氮吹近干后，用0.3v/v％乙酸-乙腈混合溶液(0.3v/v％乙酸和乙腈体积比为85:15)定容至1mL，然后进高效液相色谱仪分析。
1.3色谱条件
AgiLent SB-C18色谱柱(500mm×4.6nm,5μm)；检测波长为270nm；流动相为0.3v/v％乙酸(A)和乙腈(B)，流速为1.0mL/min；柱温30℃；梯度洗脱程序：0～15min，85％A；15～20min，60％A，20～20.1min，85％A；20.1～25min，85％A。
2.结果与分析
2.1 SPE净化过程的优化
2.1.1固相萃取柱选择
奶牛粪污样品成分复杂，基质中含有蛋白质、脂类、纤维素、有机酸、氨基酸等有机物和各种无机组分[11]。这些复杂成分的存在对样品中抗菌药物的测定会产生严重干扰，样品的净化对目标抗生素的准确定量至关重要。目前，HLB固相萃取小柱和MCX萃取小柱均可用于环境、食品、畜禽粪污中磺胺类药物的净化。实验结果显示，采用HLB固相萃取柱净化，一方面残渣溶解液所用的缓冲液配制复杂，而且需要调节pH，检测过程相对复杂；另一方面HLB固相萃取柱没有选择机制，对性质相似的化合物均有保留，所以杂质相对较多，对检测结果的影响较大。采用MCX固相萃取小柱净化，提取残渣用酸性水溶液溶解，可以去除部分不溶于酸性溶液的杂质，不仅可以有效净化样品，而且净化步骤简单。综合考虑，本研究选用MCX固相萃取小柱。
2.1.2上样过柱体积优化
提取液旋蒸近干，用0.1moL/L盐酸溶解提取残渣时，本研究尝试了不用不同体积的盐酸溶解残渣，结果表明，从5mL至20mL，目标物质的回收率呈现增长趋势，但当溶解液体积超过25mL后，回收率没有明显增长，分析其主要原因是过柱体积越小，同一样品前处理所得的过柱溶液中目标物含量越高，在相同流速下，过柱时间越短，目标物与固相萃取小柱中填料结合时间越短，所以会有部分目标物未与填料结合即流出固相萃取柱，导致回收率偏低。因此，本研究选择20mL作为最终的过柱溶解体积。
2.2检测波长的确定
研究表明，磺胺类药物的结构中有一个苯环，在270nm附近有强的紫外吸收[12]。本实验中根据1.3色谱条件，选用270nm做为检测波长对5种磺胺类药物进行检测时发现，5种药物在270nm处具有较好的响应值，且分布相对均匀，具体峰值图参数见表1，色谱峰见图1，因此，本研究选择270nm做为分析方法的检测波长。
表1 5种磺胺类药物标准品色谱峰值图参数
Figure BDA0002530758930000061
2.3流动相的确定
流动相一般采用有机溶剂和缓冲液按照一定比例组成。有机溶剂一般采用乙腈和甲醇。相比较甲醇，乙腈具有紫外吸收低、洗脱能力强、峰型好、柱效高等优点[13]。所以本方法采用乙腈做为有机溶剂。抗生素是一类可离子化的极性有机化合物，因此流动相的pH值对抗生素物质的分离和检测非常重要。调节流动相pH值常用甲酸、乙酸、磷酸和草酸[14]。本研究用0.3％(v/v)的乙酸水溶液与乙腈做为流动相，同时测定5种磺胺类药物，结果发现，可以获得良好的分离效果和适宜的保留时间，峰形尖锐，对称性良好，无拖尾现象，5种药物在20min内可以获得较好的分离。
2.4方法线性范围、检出限及回收率
将1.2.1配置的混合标准液分别稀释成0.2mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L和10.0mg/L，按照1.3色谱条件上机测定，以质量浓度(c)为横坐标，相应峰面积(S)为纵坐标，分别得到了5种药物的线性曲线，具体参数如表2-6所示，5种磺胺类药物的标准曲线如图2-6所示。5种药物在0.2～10mg/L范围内标准曲线均具有良好的线性关系，回归方程和线性系数r如表7所示。在奶牛粪浆样品中加入(在冻干、粉碎、过筛完成后加入)不同浓度的5种磺胺类药物混合标准溶液，按照1.2.2和1.2.3方法进行前处理和净化，以3倍信噪比(S/N＝3)所对应的样品中药物含量为检出限，以10倍信噪比(S/N＝10)所对应的样品中药物含量为定量限，取样量为5.0g时，测得奶牛粪污样品中5种磺胺类药物的检出限均为20μg/kg，定量限均为50μg/kg。1.2.2试验中选取50μg/kg的混合标准溶液进行添加，进行10次平行测定，5种磺胺类药物的平均回收率在75％～80％之间，标准相对偏差在2.5％和3.9％之间，重复性良好，具体参数如表7所示，色谱峰见图7。
表2磺胺嘧啶标准品标准曲线参数
磺胺嘧啶(mg/L) 响应(mAU.s) 响应因子
0.2000 17.122 0.0117
0.5000 41.386 0.0121
1.0000 83.850 0.0119
2.0000 170.028 0.0118
5.0000 422.532 0.0118
10.0000 872.265 0.0115
表3磺胺二甲嘧啶标准品标准曲线参数
磺胺二甲嘧啶(mg/L) 响应(mAU.s) 响应因子
0.2000 13.434 0.0149
0.5000 32.834 0.0152
1.0000 66.403 0.0151
2.0000 137.932 0.0145
5.0000 343.997 0.0145
10.0000 699.186 0.0143
表4磺胺间甲氧嘧啶标准品标准曲线参数
磺胺间甲氧嘧啶(mg/L) 响应(mAU.s) 响应因子
0.2000 12.830 0.0156
0.5000 32.414 0.0154
1.0000 64.224 0.0156
2.0000 129.709 0.0154
5.0000 324.915 0.0154
10.0000 664.578 0.0150
表5磺胺甲噁唑标准品标准曲线参数
磺胺甲噁唑(mg/L) 响应(mAU.s) 响应因子
0.2000 15.636 0.0128
0.5000 39.216 0.0127
1.0000 79.588 0.0126
2.0000 168.029 0.0119
5.0000 423.361 0.0118
10.0000 827.272 0.0121
表6磺胺喹噁啉标准品标准曲线参数
磺胺喹噁啉(mg/L) 响应(mAU.s) 响应因子
0.2000 11.077 0.0181
0.5000 27.121 0.0184
1.0000 58.311 0.0171
2.0000 122.112 0.0164
5.0000 306.954 0.0163
10.0000 635.114 0.0157
表7 5种磺胺类药物的检出限、定量限、回归方程、线性系数、回收率和相对标准偏差
Figure BDA0002530758930000081
2.5.实际样品的测定
按照上述建立的检测方法对某奶牛场粪污样品中5种磺胺类药物进行检测。通过多点取样，采集新鲜粪污样品经冷冻干燥、研磨、过筛后称重，按照1.2.2和1.2.3方法进行前处理和净化后进高效液相色谱检测。三次结果表明，粪污样品中磺胺嘧啶的平均含量为97μg/kg，磺胺二甲嘧啶的平均含量为85μg/kg，磺胺间甲氧嘧啶的平均含量为67μg/kg，磺胺甲噁唑的平均含量为73μg/kg，磺胺喹噁啉的平均含量为55μg/kg。
3.讨论与结论
目前关于利用固相萃取-高效液相色谱法检测奶牛粪污中磺胺类药物的研究鲜有报道。奶牛粪污样品基质成分复杂，因此样品的前处理对目标抗菌药物的准确定量至关重要。固相萃取技术是近年来发展起来的一项样品前处理技术，由液固萃取和液相色谱技术相结合发展而来，主要通过固相填料对样品组分的选择性吸附及解吸过程，实现对样品的分离、纯化和富集。主要目的在于降低样品基质干扰，提高检测灵敏度。商品化的固相萃取小柱根据填料可以分为不同的类型，需要注意的是，在选择固相萃取柱时，要考虑固相吸附层的吸附能力，避免实际操作时出现过载现象。已有的研究较多使用HLB固相萃取小柱对土壤、畜禽粪便、养殖水体及沉积物和沼液中的抗菌药物进行富集[7,13,14,15,16]。本实验采用MCX固相萃取小柱能够对奶牛粪污中的抗菌药物和其他杂质进行有效分离，并且净化步骤简单，重复性较高。
本发明对色谱条件的检测波长和流动相进行了严格的优化。研究表明，磺胺类药物的结构中有一个苯环，在270nm附近有较强的紫外吸收[12]。本实验利用二级管阵列检测器，选用270nm作为检测波长对5种磺胺类药物进行检测时发现，色谱峰分离效果好，峰形较好。因此本专利申请选择270nm做为紫外检测波长。目前从高效液相色谱法检测磺胺类药物含量的文献报道来看，流动相的组成主要有乙腈：甲醇：2％乙酸[16]，0.1％甲酸：乙腈[13]，草酸：乙腈[7]，0.1％甲酸：甲醇[9]，本实验对以上流相进行了优化，最终确定以0.3％(v/v)的乙酸水溶液与乙腈做为流动相，出峰时间较理想，峰形较好，且与杂质分离良好。
参考文献：
[1]陈红英,王月颖,傅思武.抗生素在养殖业中在应用现状[J].现代畜牧科技,2019,5(53):1-3.
[2]Ayukekbong JA,Ntemgwa M,Atabe AN,et al.The threat of antimicrobialresistance in developing contries:causes and control strategies[J].Antimicrobial Resistance&Infection Control,2017,6(1):47-55.
[3]葛林科,任红蕾,鲁建江,等.我国环境中新兴污染物抗生素及其抗性基因的分布特征[J].环境化学,2015,34(5):875-883.
[4]郭欣妍,王娜,许静,等.兽药抗生素的环境暴露水平及其环境归趋研究进展[J].环境科学与技术,2014,37(09):76-86.
[5]张静霞,徐明琴,张春然,等.抗生素杂志的检测方法研究进展[J].中国新药杂志,2012,21(13):1498-1502.
[6]孙刚,袁守军,计峰,等.畜禽粪便中抗生素残留危害及其研究进展[J].环境与健康杂志,2009,26(03):277-279.
[7]杨晓蕾,李杰,李学文,等.土壤中10种兽用抗生素的固相萃取-高效液相色谱-紫外测定法[J].环境与健康杂志,2012,29(04):357-360.
[8]金钥,孙延斌,梅连瑞,等.水产品中14种抗生素药物残留检测方法的建立[J].食品研究与开发,2018,39(17):129-134.
[9]周爱霞,苏小四,高松,等.高效液相色谱测定地下水、土壤及粪便中4种磺胺类抗生素[J].分析化学,2014,42(3):397-402.
[10]洪蕾洁,石璐,张亚雷,等.固相萃取-高效液相色谱法同时测定水体中的10种磺胺类抗生素[J].环境科学,2012,33(2):652-657.
[11]Loftin KA,Henny C,Adams CD,et al.Inhibition of microbialmetabolism in anaerobic lagoons by selected sulfonamides,tetracyclines,lincomycin,and tylosin tartrate[J].Environ Toxicol Chem,2005,24(4):782-788.
[12]赵娜.珠三角地区典型菜地土壤抗生素污染特征研究[D].广州:暨南大学.2007.
[13]贺南南,管永祥,梁永红,等.固相萃取-高效液相色谱同时测定沼液中3种四环素类和6种磺胺类抗生素[J].分析科学学报,2017,33(3):373-377.
[14]李艳霞,李帷,张雪莲,等.固相萃取-高效液相色谱法同时检测畜禽粪便中14种兽药抗生素[J].分析化学,2012,40(02):213-217.
[15]万位宁,陈熹,居学海,等.固相萃取-超高液相色谱串联质谱法同时检测禽畜粪便中多种抗生素残留[J].分析化学研究报告,2013,41(7):993-999.
[16]刘菁华,孙振中,黄雪玲,等.高效液相色谱-柱后衍生法检测养殖水体及沉积物中11种磺胺药物残留[J].色谱,2015,33(4):434-440.

Claims (5)

1.一种固相萃取-高效液相色谱法同时检测奶牛粪污中5种磺胺类药物的方法，所述5种磺胺类药物为磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑和磺胺喹噁啉；
所述方法依次包括如下步骤：
（1）样品前处理；（2）固相萃取；（3）进高效液相色谱仪分析；
所述步骤（3）的色谱条件如下：
AgiLent SB-C18色谱柱(500 mm×4.6 nm, 5 μm)；检测波长为270 nm；流动相为0.3v/v %乙酸(A)和乙腈(B)，流速为1.0 mL/min；柱温 30 ℃；梯度洗脱程序：0~15 min，85%A；15~20 min，60% A，20~20.1 min，85% A；20.1~25 min，85% A。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）样品前处理的步骤如下：将奶牛粪污冷冻干燥后粉碎、过筛，然后称取经过筛后的样品x g，加入y mL水和y mL乙腈，漩涡混匀，超声至少10min，加入z g氯化钠，漩涡混匀后，离心，将上层提取液转移至离心管中，向残渣中每次加入y mL乙腈，提取2次，合并提取液，旋转蒸发近干，用a mL 0.1 mol/L盐酸溶解残渣，然后每次加入b mL正己烷去脂，处理2次，取水层备用；
其中， x：y：z：a：b = （0.125-10）：10：3：20：6。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）固相萃取的步骤如下：
首先，依次用6 mL超纯水和6 mL甲醇对60 mg/3mL的 MCX固相萃取小柱进行活化，然后将步骤（1）所得水层以2 mL/min流速过柱，依次用6 mL 0.1 mol/L盐酸、6 mL超纯水和6 mL甲醇冲洗MCX固相萃取小柱，吹干柱中残留液体，加入6 mL 氨水-甲醇（V:V，2:98）洗脱，收集洗脱液，氮吹近干后，用0.3 v/v %乙酸-乙腈混合溶液(0.3 v/v %乙酸和乙腈体积比为85:15)定容。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，x：y：z：a：b = 5：10：3：20：6。
5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于，采用外标法定量。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113945658A (zh) * 2021-10-13 2022-01-18 深圳技师学院（深圳高级技工学校） 一种同时测定水样中7种抗生素含量的方法
CN114324654A (zh) * 2021-12-29 2022-04-12 武汉市农业科学院 一种奶牛循环养殖中氨基糖苷类抗生素的测定方法

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101571526A (zh) * 2009-06-11 2009-11-04 浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心 同时测定蜂王浆中多种硝基咪唑类药物残留量的检测方法
CN101629941A (zh) * 2009-08-03 2010-01-20 新疆出入境检验检疫局检验检疫技术中心 一种快速检测乳粉中三聚氰酸的方法
CN102955008A (zh) * 2011-08-23 2013-03-06 浙江海洋学院 一种加压毛细管电色谱检测鳗鱼中磺胺类药物残留的方法
CN104931610A (zh) * 2015-05-28 2015-09-23 衢州出入境检验检疫局综合技术服务中心 高效液相色谱串联质谱法同时测定蜂蜡中16种磺胺类药物的方法
CN105588898A (zh) * 2014-10-22 2016-05-18 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 一种液相色谱法检测牛奶中磺胺类药物残留的样品前处理方法及检测方法
CN106018585A (zh) * 2016-05-14 2016-10-12 中华人民共和国济宁出入境检验检疫局 一种基于氧化石墨烯固相萃取技术检测磺胺类药物残留的方法
CN106018602A (zh) * 2016-05-23 2016-10-12 青岛蓥康食品检测技术服务有限公司 用于检测磺胺类化合物的组合检测试剂及其检测方法
CN106198821A (zh) * 2016-08-29 2016-12-07 郑州点石生物技术有限公司 一种检测牛奶中磺胺类抗生素残留的方法
CN107219310A (zh) * 2017-05-16 2017-09-29 河南省兽药饲料监察所 一种饲料中110种药物的筛查方法
CN109001348A (zh) * 2017-06-07 2018-12-14 盐城市农产品质量监督检验测试中心 一种同时检测猪肉中磺胺类和氟喹诺酮类药物残留的方法
CN109342632A (zh) * 2018-12-07 2019-02-15 上海市环境科学研究院 微波萃取-固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测水产养殖底泥中15种抗生素的方法
CN109633031A (zh) * 2019-01-23 2019-04-16 洛阳理工学院 一种莱克多巴胺的检测方法

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101571526A (zh) * 2009-06-11 2009-11-04 浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心 同时测定蜂王浆中多种硝基咪唑类药物残留量的检测方法
CN101629941A (zh) * 2009-08-03 2010-01-20 新疆出入境检验检疫局检验检疫技术中心 一种快速检测乳粉中三聚氰酸的方法
CN102955008A (zh) * 2011-08-23 2013-03-06 浙江海洋学院 一种加压毛细管电色谱检测鳗鱼中磺胺类药物残留的方法
CN105588898A (zh) * 2014-10-22 2016-05-18 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 一种液相色谱法检测牛奶中磺胺类药物残留的样品前处理方法及检测方法
CN104931610A (zh) * 2015-05-28 2015-09-23 衢州出入境检验检疫局综合技术服务中心 高效液相色谱串联质谱法同时测定蜂蜡中16种磺胺类药物的方法
CN106018585A (zh) * 2016-05-14 2016-10-12 中华人民共和国济宁出入境检验检疫局 一种基于氧化石墨烯固相萃取技术检测磺胺类药物残留的方法
CN106018602A (zh) * 2016-05-23 2016-10-12 青岛蓥康食品检测技术服务有限公司 用于检测磺胺类化合物的组合检测试剂及其检测方法
CN106198821A (zh) * 2016-08-29 2016-12-07 郑州点石生物技术有限公司 一种检测牛奶中磺胺类抗生素残留的方法
CN107219310A (zh) * 2017-05-16 2017-09-29 河南省兽药饲料监察所 一种饲料中110种药物的筛查方法
CN109001348A (zh) * 2017-06-07 2018-12-14 盐城市农产品质量监督检验测试中心 一种同时检测猪肉中磺胺类和氟喹诺酮类药物残留的方法
CN109342632A (zh) * 2018-12-07 2019-02-15 上海市环境科学研究院 微波萃取-固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测水产养殖底泥中15种抗生素的方法
CN109633031A (zh) * 2019-01-23 2019-04-16 洛阳理工学院 一种莱克多巴胺的检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
孟丽华 等: "高效液相色谱法测定淡水渔业用水中诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星残留", 《水产养殖》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113945658A (zh) * 2021-10-13 2022-01-18 深圳技师学院（深圳高级技工学校） 一种同时测定水样中7种抗生素含量的方法
CN113945658B (zh) * 2021-10-13 2023-10-31 深圳技师学院（深圳高级技工学校） 一种同时测定水样中7种抗生素含量的方法
CN114324654A (zh) * 2021-12-29 2022-04-12 武汉市农业科学院 一种奶牛循环养殖中氨基糖苷类抗生素的测定方法

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