CN109633031A - 一种莱克多巴胺的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种莱克多巴胺的检测方法，先用甲醇以一定速率和体积活化酰胺基团修饰的琼脂糖‑硅胶杂化整体柱，然后用莱克多巴胺标准溶液按照一定的速率和体积进行上样，完成莱克多巴胺的富集；富集后用甲醇和乙酸的混合液为洗脱剂按照一定速率通入富集莱克多巴胺的整体柱，将富集在整体柱上的莱克多巴胺洗脱掉；洗脱后取前25μL洗脱液进行氮吹，吹干后用去离子水溶解，然后进行高效液相色谱检测。本发明方法的检出限和定量限分别为0.0002μg/mL和0.0007μg/m，本发明具有萃取效率高，富集效果好，灵敏度高及操作简便等优点，可广泛应用于实际肉样中莱克多巴胺的准确测定。

Description

一种莱克多巴胺的检测方法
技术领域
本发明涉及固相微萃取技术领域，具体是利用固相微萃取结合高效液相色谱建立一种莱克多巴胺的检测方法。
背景技术
固相微萃取(SPME)技术是一种新型且目前使用较为广泛的样品预处理方法，集吸附浓缩、洗脱于一步完成，且富集效率高，萃取速率快，操作简单，适于多种介质如水、生物样品中痕量有机化合物的富集。
常用的SPME的主要萃取模式为纤维萃取和管内萃取。其中管内固相微萃取是一种高效的样品萃取技术。整体柱是一种常见的管内固相微萃取介质，有机-硅胶杂化整体柱是一种在无机硅胶整体柱和有机聚合物整体柱基础上发展起来的应用较广的新型整体柱，具有无机硅胶整体柱双孔骨架结构，高的机械强度、良好的通透性和有机聚合物整体柱性能稳定、耐酸碱腐蚀、种类丰富以及pH适用范围宽等优点。
Hayes等首次采用溶胶-凝胶法以N-十八烷基二甲基[3(三甲氧基硅基)丙基]氯化铵为有机单体，以四甲氧基硅烷(TMOS)为交联剂，在酸催化条件下制备了有机-硅胶杂化整体柱。目前，该类整体柱主要用在复杂环境样品、食品或生物样品的分析检测中，解决了目标分析物在检测中存在浓度低、基质复杂等问题。
在固相微萃取过程中影响萃取效率的因素较多，如样品溶剂和样品溶剂体积，洗脱溶剂和洗脱体积，上样速率和洗脱速率等。本发明通过固相微萃取技术结合高效液相色谱建立一种莱克多巴胺的检测方法，该方法最终确立了最优的萃取检测条件，可用于对实际肉样中莱克多巴胺的检测。
发明内容
本发明的目的在于提供一种莱克多巴胺的检测方法，以酰胺基团修饰的琼脂糖-硅胶杂化整体柱为固相微萃取介质，对萃取和洗脱过程进行优化，本发明检测方法的线性范围为0.001～0.2μg/mL，检出限为0.0002μg/mL，定量限为0.0007μg/mL，具有萃取效率高，富集效果好，灵敏度高及操作简便等优点，可广泛应用于实际肉样中莱克多巴胺的准确测定。
本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的，依据本发明提出的一种莱克多巴胺的检测方法，包括以下步骤：
(1)、先用甲醇活化整体柱，活化体积为1ml，活化速率为0.05mL/min，然后用莱克多巴胺标准溶液进行上样，将莱克多巴胺标准溶液按照固定的流速通入制备好的整体柱，此过程实现了莱克多巴胺在整体柱中的富集；
其中，莱克多巴胺标准溶液的上样速率为0.05mL/min，固定样品溶剂和样品浓度，莱克多巴胺标准溶液的上样体积为1.5mL；
(2)推入一段时间空气，之后用1mL甲醇和乙酸的混合液按照0.03mL/min的洗脱速率通入富集莱克多巴胺的整体柱；其中，混合液中甲醇和乙酸的体积比为9:1；
(3)洗脱后取前25μL洗脱液进行氮吹，吹干后用去离子水溶解，然后进行高效液相色谱检测。
本发明解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现：
前述的莱克多巴胺的检测方法，其中，步骤(1)中所述的莱克多巴胺标准溶液以乙腈为溶剂配制，所述的整体柱为酰胺基团修饰的琼脂糖-硅胶杂化整体柱。
前述的莱克多巴胺的检测方法，其中，所述方法的检出限和定量限分别为0.0002μg/mL和0.0007μg/mL，线性范围为0.001～0.2μg/mL。
前述的莱克多巴胺的检测方法，其中，步骤(3)洗脱液吹干后用50μL去离子水溶解，然后进行高效液相色谱检测。
前述的莱克多巴胺的检测方法，其中，步骤(3)采用高效液相色谱进行检测，色谱条件为：色谱柱采用Zorbax SB-C18，色谱柱规格4.6×150mm，填料粒径：5μm，紫外检测器检测波长为276nm，流速为1.0mL/min，进样量为20μL，流动相为0.005moL/L磷酸二氢钾溶液-乙腈的混合液，其中0.005moL/L磷酸二氢钾溶液和乙腈的体积比为77:33，柱温为室温，采集时间为10min。
前述的莱克多巴胺的检测方法，用于对实际肉样中莱克多巴胺的检测。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明以酰胺基团修饰的琼脂糖-硅胶杂化整体柱为固相微萃取介质，对萃取条件进行优化，优化后的萃取条件是：以乙腈为样品溶剂，上样体积为1.5mL，上样速率为0.05mL/min，洗脱溶液为甲醇：乙酸(9:1,v/v)的混合液，洗脱体积为25μL，洗脱速率为0.03mL/min。在优化后的萃取条件下建立了固相微萃取结合高效液相色谱对莱克多巴胺的检测方法，该方法的线性范围为0.001-0.2μg/mL，检出限为0.0002μg/mL，定量限为0.0007μg/mL。本发明的检测方法具有萃取效率高，富集效果好，灵敏度高及操作简便等优点，可广泛应用于实际肉样中莱克多巴胺的准确测定。
附图说明
图1为整体柱对不同样品溶剂配制的莱克多巴胺标准溶液中莱克多巴胺的萃取量。
图2为莱克多巴胺标准溶液的上样体积对莱克多巴胺的萃取效率的影响。
图3为莱克多巴胺标准溶液的上样速率对莱克多巴胺萃取效率的影响。
图4为洗脱剂中甲醇和乙酸的体积比对莱克多巴胺萃取效率的影响。
图5为洗脱剂的洗脱体积对莱克多巴胺萃取效率的影响。
图6为洗脱剂的洗脱速率对莱克多巴胺萃取效率的影响。
具体实施方式
为进一步阐述本发明采取的技术手段和技术效果，以下结合实施例，对本发明进行详细说明。
实施例1：
(1)、先用甲醇活化整体柱，所述的整体柱为酰胺基团修饰的琼脂糖-硅胶杂化整体柱，活化体积为1ml，活化速率为0.05mL/min，然后用莱克多巴胺标准溶液进行上样，上样速率为0.05mL/min，将莱克多巴胺标准溶液按照固定的流速通入制备好的整体柱，此过程实现了莱克多巴胺在整体柱中的富集；
其中，以乙腈为样品溶剂配制莱克多巴胺标准溶液，固定样品溶剂和样品浓度，莱克多巴胺标准溶液的上样体积为1.5mL；
(2)推入一段时间空气，将整体柱中的液体排出，之后用1ml甲醇和乙酸的混合液(混合液中甲醇和乙酸的体积比为9:1)为洗脱剂按照0.03mL/min的洗脱速率通入富集莱克多巴胺的整体柱，将富集在整体柱上的莱克多巴胺洗脱掉；
(3)洗脱后取前25μL洗脱液进行氮吹，吹干后用50μL去离子水溶解，然后进行高效液相色谱检测；色谱条件为：色谱柱Zorbax SB-C18(4.6mm×150mm,Diameter:5μm)，紫外检测器检测波长276nm，流速1.0mL/min，进样量20μL，流动相为0.005moL/L磷酸二氢钾溶液-乙腈的混合液，其中0.005moL/L磷酸二氢钾溶液和乙腈的体积比为77:33，柱温为室温，采集时间10min。
该方法的检出限和定量限分别为0.0002μg/mL和0.0007μg/mL，线性范围为0.001～0.2μg/mL。
实施例2：
(1)、先用甲醇活化整体柱，所述的整体柱为酰胺基团修饰的琼脂糖-硅胶杂化整体柱，活化体积为1ml，活化速率为0.05mL/min，然后用莱克多巴胺标准溶液进行上样，上样速率为0.05mL/min，将莱克多巴胺标准溶液按照固定的流速通入制备好的整体柱，此过程实现了莱克多巴胺在整体柱中的富集；
其中，以乙腈为样品溶剂配制莱克多巴胺标准溶液，固定样品溶剂和样品浓度，莱克多巴胺标准溶液的上样体积为1.5mL；
(2)推入一段时间空气，将整体柱中的液体排出，富集后用1ml甲醇和乙酸的混合液(混合液中甲醇和乙酸的体积比为8:2)为洗脱剂按照0.03mL/min的洗脱速率通入富集莱克多巴胺的整体柱，将富集在整体柱上的莱克多巴胺洗脱掉；
(3)洗脱后取前25μL洗脱液进行氮吹，吹干后用50μL去离子水溶解，然后进行高效液相色谱检测；色谱条件为：色谱柱Zorbax SB-C18(4.6mm×150mm,Diameter:5μm)，紫外检测器检测波长276nm，流速1.0mL/min，进样量20μL，流动相为0.005moL/L磷酸二氢钾溶液-乙腈的混合液，其中0.005moL/L磷酸二氢钾溶液和乙腈的体积比为77:33，柱温为室温，采集时间10min。
实施例3：
(1)、先用甲醇活化整体柱，所述的整体柱为酰胺基团修饰的琼脂糖-硅胶杂化整体柱，活化体积为1ml，活化速率为0.05mL/min，然后用莱克多巴胺标准溶液进行上样，上样速率为0.05mL/min，将莱克多巴胺标准溶液按照固定的流速通入制备好的整体柱，此过程实现了莱克多巴胺在整体柱中的富集；
其中，以乙腈为样品溶剂配制莱克多巴胺标准溶液，固定样品溶剂和样品浓度，莱克多巴胺标准溶液的上样体积为1.5mL；
(2)推入一段时间空气，将整体柱中的液体排出，富集后用1ml甲醇和乙酸的混合液(混合液中甲醇和乙酸的体积比为9:1)为洗脱剂按照0.05mL/min的洗脱速率通入富集莱克多巴胺的整体柱，将富集在整体柱上的莱克多巴胺洗脱掉；
(3)洗脱后取前25μL洗脱液进行氮吹，吹干后用50μL去离子水溶解，然后进行高效液相色谱检测；色谱条件为：色谱柱Zorbax SB-C18(4.6mm×150mm,Diameter:5μm)，紫外检测器检测波长276nm，流速1.0mL/min，进样量20μL，流动相为0.005moL/L磷酸二氢钾溶液-乙腈的混合液，其中0.005moL/L磷酸二氢钾溶液和乙腈的体积比为77:33，柱温为室温，采集时间10min。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (6)

1.一种莱克多巴胺的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)、先用甲醇活化整体柱，活化体积为1ml，活化速率为0.05mL/min，然后用莱克多巴胺标准溶液进行上样，将莱克多巴胺标准溶液按照固定的流速通入制备好的整体柱，此过程实现了莱克多巴胺在整体柱中的富集；
其中，莱克多巴胺标准溶液的上样速率为0.05mL/min，固定样品溶剂和样品浓度，莱克多巴胺标准溶液的上样体积为1.5mL；
(2)推入一段时间空气，之后用1mL甲醇和乙酸的混合液按照0.03mL/min的洗脱速率通入富集莱克多巴胺的整体柱；其中，混合液中甲醇和乙酸的体积比为9:1；
(3)洗脱后取前25μL洗脱液进行氮吹，吹干后用去离子水溶解，然后进行高效液相色谱检测。
2.如权利要求1所述的莱克多巴胺的检测方法，其特征在于步骤(1)中所述的莱克多巴胺标准溶液以乙腈为溶剂配制，所述的整体柱为酰胺基团修饰的琼脂糖-硅胶杂化整体柱。
3.如权利要求1所述的莱克多巴胺的检测方法，其特征在于所述方法的检出限和定量限分别为0.0002μg/mL和0.0007μg/mL，线性范围为0.001～0.2μg/mL。
4.如权利要求1所述的莱克多巴胺的检测方法，其特征在于步骤(3)洗脱液吹干后用50μL去离子水溶解，然后进行高效液相色谱检测。
5.如权利要求1所述的莱克多巴胺的检测方法，其特征在于步骤(3)采用高效液相色谱进行检测，色谱条件为：色谱柱采用Zorbax SB-C18，色谱柱规格4.6×150mm，填料粒径：5μm，紫外检测器检测波长为276nm，流速为1.0mL/min，进样量为20μL，流动相为0.005moL/L磷酸二氢钾溶液-乙腈的混合液，其中0.005moL/L磷酸二氢钾溶液和乙腈的体积比为77:33，柱温为室温，采集时间为10min。
6.如权利要求1所述的莱克多巴胺的检测方法，其特征在于用于对实际肉样中莱克多巴胺的检测。
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