CN111647525B - 复合益生菌、菌剂及其在制备防治白色念珠菌性阴道炎菌剂中的应用 - Google Patents
复合益生菌、菌剂及其在制备防治白色念珠菌性阴道炎菌剂中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提出一种复合益生菌、菌剂及其在制备防治白色念珠菌性阴道炎菌剂中的应用。复合益生菌包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SD‑H9、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)WX‑94和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)SD‑L8，均保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，保藏编号依次为CGMCC NO.16649，CGMCC NO.15062，CGMCC NO.16650。复合益生菌菌剂以质量份数计，包括以下组分：复合益生菌80‑90份，低聚异麦芽糖6‑8份和环糊精0.5‑1份。本发明提供的复合益生菌及其菌剂，可以有效降低炎症反应，缓解和改善白色念珠菌性阴道炎症状，在防治白色念珠菌性阴道炎该女性生殖道感染性疾病方面具有很大的应用开发前景。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种复合益生菌、菌剂及其在制备防治白色 念珠菌性阴道炎菌剂中的应用。
背景技术
念珠菌性阴道炎(VVC)是一种育龄妇女常见的阴道粘膜真菌感染性疾病，据统计，显示目前中国大约3/4的育龄妇女至少患过一次该病，白色念珠菌为此病的主要病原菌(占60％-80％)。多种因素均可影响妇女对白色念珠菌的易感性，最常见的为激素水平 波动和抗生素的使用。超过75％的妇女一生中至少患过一次该病，其中10％左右可转变 为复发性念珠菌性阴道炎(RVVC)，即一年中遭遇念珠菌性阴道炎发作≥4次，阴道炎 症、泌尿路感染及脸色暗沉等问题严重影响着女性的工作和生活。
在传统治疗方案中，抗生素是临床治疗念珠菌性阴道炎的主要手段，但使用抗生素 存在复发率高、药物依赖性等副作用。因此，研发替代疗法对于治疗念珠菌性阴道炎疾病具有十分重要的意义。
益生菌是指活的微生物通过摄入充足的数量，对宿主产生一种或多种特殊且经过论 证的功能性健康益处的一类微生物的总称。目前，益生菌已广泛应用于生物工程、农业、食品安全及生命健康领域。研发益生菌剂采用益生菌疗法能改善阴道洁度、缓解白色念 珠菌性阴道炎的炎症反应，在白色念珠菌性阴道炎治疗中显示了巨大的潜力。因此，研 发用于改善白色念珠菌性阴道炎疾病功能的益生菌剂具有重要意义，并具有巨大的市场 前景。
发明内容
本发明的目的在于克服上述技术不足，本发明提供一种复合益生菌、菌剂及其在制 备防治白色念珠菌性阴道炎菌剂中应用。本发明的提供的复合益生菌菌剂，可以有效改善机体阴道洁度，调节机体免疫细胞因子，在白色念珠菌性阴道炎的治疗中显示了巨大 的潜力。
为达到上述技术目的，本发明的技术方案包括：
一种复合益生菌，包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SD-H9、罗伊氏乳杆 菌(Lactobacillus reuteri)WX-94和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)SD-L8， 均保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，且保藏编号依次为CGMCC NO.16649、CGMCC NO.15062和CGMCC NO.16650。
一种复合益生菌在制备防治白色念珠菌性阴道炎菌剂中的应用。
一种复合益生菌菌剂，以质量份数计，包括以下组分：所述复合益生菌80-90份，低聚异麦芽糖6-8份和环糊精0.5-1份。
与现有技术相比，本发明的有益效果包括：
本发明提供的复合益生菌由于其含有植物乳杆菌SD-H9、罗伊氏乳杆菌WX-94和鼠李糖乳杆菌SD-L8，经过复配后，能够同时降低炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表 达，从而全面下调细胞免疫过激现象，缓解炎症反应；能够降低白色念珠菌性阴道炎个 体的阴道洁度、及血液中炎症因子IL-10的水平，可有效缓解和改善白色念珠菌性阴道 炎症状。本发明提供的复合益生菌在开发用于预防和治疗白色念珠菌性阴道炎制剂方法 面具有很大的应用前景。
附图说明
图1本发明实施例提供的大鼠试验各组给药后SD大鼠阴道洁度比较图；
图2本发明实施例提供的大鼠试验各组给药对给药后SD大鼠体重变化图；
图3本发明实施例提供的大鼠试验各组给药阴道组织病理学HE染色图(A:正常组，B:模型组，C:LP-LY-LR组)；
图4本发明实施例提供的大鼠试验各组给药对SD大鼠血清IL-10分泌水平的影响图；
图1-4中，将植物乳杆菌SD-H9标记为LP、罗伊氏乳杆菌WX-94标记为LY、鼠 李糖乳杆菌SD-L8标记为LR。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例及附图，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
植物乳杆菌SD-H9的分离及鉴定
取10g健康人肠道排泄物用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释，将样品稀释106倍后涂布于MRS琼脂培养基上，培养24h，观察菌落形态，从中挑取疑似乳酸菌的单菌落 划线分离至新的MRS琼脂培养基上，培养24h后再次进行划线分离纯化。采用无菌牙 签从第二次划线分离的培养基上挑取若干个单菌落，分别进行编号，选取其中20个单 菌落进行16S rDNA测序。
本实施例16S rDNA扩增测序结果显示，编号为SD-H9的菌株，其16S rDNA 测序结果为SEQ ID NO.1所示序列。用BLAST工具在NCBI数据库中进行比对， 结果显示本发明涉及的菌株SD-H9与植物乳杆菌亲缘关系最近，相似性达到99％ 以上。因此，鉴定为植物乳杆菌，命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) SD-H9，于2018年10月29日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心 (CGMCC)，保藏编号为CGMCC NO.16649，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路 1号院3号。
罗伊氏乳杆菌WX-94的分离及鉴定
罗伊氏乳杆菌WX-94购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.15062。根据CN201810332196.2专利中公开的数据表明，WX-94 具有广谱的抑菌作用，良好的黏附特性以及很强的耐酸和耐胆盐能力，但对于其应用于 防治白色念珠菌性阴道炎未见报道。
鼠李糖乳杆菌SD-L8的分离及鉴定
以内蒙古农家酸奶发酵食品为样品，取1g酸奶样品，用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释，将样品稀释1000倍后涂布于配制的MRS固体培养基表面，置于37℃培养箱 中培养24～48h，观察菌落形态特征。从中挑取疑似乳酸菌的单菌落划线分离至新的MRS 培养基上，37℃过夜培养后，再次进行划线分离纯化。采用无菌牙签从第二次划线分 离的培养基上挑取若干个单菌落，分别进行编号。选取其中20个单菌落进行16S rDNA 测序。其中，1L的MRS固体培养基包括：酪蛋白胨10.0g/L，牛肉浸膏10.0g/L，酵母 浸膏5.0g/L，葡萄糖20.0g/L，磷酸氢二钾2.0g/L，吐温801.0g/L，柠檬酸三铵2.0g/L， 醋酸钠5.0g/L，硫酸镁0.1g/L，硫酸锰0.05g/L，琼脂17.5g。
本实施例16S rDNA扩增测序结果显示，编号为SD-L8的菌株，其16S rDNA测序 结果为SEQ ID NO.2所示序列。用BLAST工具在NCBI数据库中进行比对，结果显示 本发明涉及的菌株SD-L8与鼠李糖乳杆菌亲缘关系最近，相似性达到99％以上。因此， 鉴定为鼠李糖乳杆菌，命名为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)SD-L8，于2018 年10月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为 CGMCC NO.16650。
复合益生菌菌剂
本发明提供一种复合益生菌菌剂，以质量份数计，包括以下组分：复合益生菌80-90 份，低聚异麦芽糖6-8份和环糊精0.5-1份。复合益生菌包括植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)SD-H9、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)WX-94和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)SD-L8。所述植物乳杆菌SD-H9、所述罗伊氏乳杆菌WX-94 和所述鼠李糖乳杆菌SD-L8均保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，且保藏编号依 次为CGMCC NO.16649、CGMCC NO.15062和CGMCC NO.16650。
所述复合益生菌菌剂中，所述植物乳杆菌SD-H9、所述罗伊氏乳杆菌WX-94和所 述鼠李糖乳杆菌SD-L8的活菌数量级依次为不低于1011cfu/g、不低于1010cfu/g和不低 于109cfu/g。
THP-1炎症细胞模型评估复合益生菌菌剂的免疫调节功能
于6孔细胞培养板中添加含100ng/mL PMA(Phorbol 12-myristate 13-acetate)的 RPMI1640培养基(10mL)，诱导1.0×106cell/mL THP-1细胞系培养72h，此时成熟的 巨噬细胞均呈现贴壁生长状态。更换培养基后加入终浓度为1.0×109cfu/mL的1mL菌液 共培养6h。轻轻吸走含益生菌的培养基并用PBS液洗涤贴壁生长的THP-1细胞层。向 贴壁生长的THP-1培养孔中添加含1ug/mL LPS(LipopolysacchariDes)的培养基孵育细胞 6h。之后采用酶联免疫试剂盒(ThermoFisher公司，TNF-αHuman ELISA KIT；MSK公 司，Human IL-1βELISA KIT；MSK公司，IL-6ELISA KIT)检测细胞培养上清液中三 种促炎症因子TNF-α，IL-1β，IL-6的含量变化。实验结果见表1。
其中，菌液为本发明提供的复合益生菌菌剂的菌液、SD-H9菌液、WX-94菌液和 SD-L8菌液，依次分别作为复合菌组、SD-H9组、WX-94组和SD-L8组。另外，将诱 导为巨噬细胞的THP-1与未经益生菌及LPS共培养处理的试验组作为空白组，诱导为 巨噬细胞的THP-1与未经益生菌共培养及经LPS处理的试验组作为炎症组。复合益生 菌菌剂的菌液中由上述实施例中的复合益生菌菌剂混悬于氯化钠注射液配制而成，其中 活菌数为109cfu/mL。SD-H9组、WX-94组和SD-L8组的菌液活菌数量级均达到109 cfu/mL。上述每组三个重复，所有过程的细胞孵育均在二氧化碳培养箱中进行(37℃， 5％CO2)。
实验结果表明，相较于炎症组，SD-H9组的IL-6水平显著减低；相较于炎症组， WX-94组的IL-1β水平显著降低；相较于炎症组，SD-L8组的TNF-α水平和IL-6水平 显著降低。而复合菌组处理后，能够同时降低炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达， 从而全面下调细胞免疫过激现象，说明复合菌组具有缓解巨噬细胞炎症反应的作用，效 果最优。
表1(单位:pg/mL)
| 组别 | TNF-α | IL-1β | IL-6 |
| 空白组 | 7.2 | 115.3 | 35.6 |
| 炎症组 | 68.9 | 231.5 | 82.4 |
| SD-H9组 | 67.2 | 224.1 | 58.3 |
| WX-94组 | 63.7 | 198.3 | 76.3 |
| SD-L8组 | 44.5 | 225.3 | 67.5 |
| 复合组 | 46.8 | 175.6 | 56.4 |
复合益生菌菌剂对防治白色念珠菌性阴道炎的动物实验验证
1、材料
1)试剂
白色念珠菌，购自CGMCC，用氯化钠注射液配制成溶液(1×109cfu/mL)。
苯甲酸雌二醇注射液，批号：181010，有效期至：202009，上海全宇生物科技(驻 马店)动物药业有限公司。乌来糖，批号：20170908，有效期至：20220907，国药集团 化学试剂有限公司。氯化钠注射液，批号：H18063302-2，有效期至：202005，广东科 伦药业有限公司。氟康唑胶囊；规格：50mg；生产单位：海南林恒制药股份有限公司。 Rat Interleukin 10，IL-10ELISA KIT，MSK公司。
20％的乌来糖溶液配制方法：称取20g乌来糖，加入氯化钠注射液至100mL，摇匀。
2)受试品
实施例1：本实施例的造模后治疗配方。取植物乳杆菌SD-H9(LP菌粉，活菌数不 低于1011cfu/g)、罗伊氏乳杆菌WX-94(LY菌粉，活菌数不低于1010cfu/g)、鼠李糖乳 杆菌SD-L9(LR菌粉，活菌数不低于109cfu/g)至已标定容器中，加少量氯化钠注射液搅 拌溶解，再补足氯化钠注射液至13mL，混匀。
下面分别将含有上述益生菌其中两种的混悬溶液作为对比例，如下：
对比例1：本对比例的造模后治疗配方。取LY菌粉(活菌数不低于1010cfu/g)、LR 菌粉(活菌数不低于109cfu/g)至已标定容器中，加少量氯化钠注射液搅拌溶解，再补足 氯化钠注射液至13mL，混匀。
对比例2：本对比例的造模后治疗配方。取LP菌粉(活菌数不低于1011cfu/g)、LY 菌粉(活菌数不低于1010cfu/g)至已标定容器中，加少量氯化钠注射液搅拌溶解，再补足 氯化钠注射液至13mL，混匀。
对比例3：本对比例的造模后治疗配方。取LP菌粉(活菌数不低于1011cfu/g)、LR 菌粉(活菌数不低于109cfu/g)至已标定容器中，加少量氯化钠注射液搅拌溶解，再补足 氯化钠注射液至13mL，混匀。
上述实施例1及对比例1-3的菌悬液总活菌数量级均达到109cfu/mL。
另外为了便于将本发明提供的复合益生菌菌剂与现有的药物做对照，本发明还给出 了对比例4，并将模型组作为对比例5，正常组作为对比例6。。
对比例4：本对比例的造模后治疗配方。按GDmLAC/SOP-TCA08所述方法对选取 的盛药容器进行体积标定。取适量氟康唑胶囊至已标定容器中，加少量氯化钠注射搅拌 溶解，再补足氯化钠注射至容器的标定刻度线，混匀，配制成浓度为20mg/mL氟康唑 胶囊溶液。
对比例5：本对比例为模型组，即进行白色念珠菌感染造模，造模后无给药治疗仅给予氯化钠注射液。
对比例6：本对比例为正常组，即不进行白色念珠菌感染造模，造模后无给药治疗仅给予氯化钠注射液。
2、动物饲养
SPF级SD大鼠来源和动物合格证号：108只，雌性，6～8周龄，180～220g；广东省 医学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK(粤)2013-0002，动物合格证 号：44007200054944。
检疫观察：对所有SD大鼠连续检疫3天。期间每日检查动物一次，如发现不健康 的动物立即剔除，选用健康SD大鼠进行实验。
动物饲养条件：单养，4～6只/笼，饲养温度与湿度：20～26℃，40～70％，采用12h：12h昼夜间断照明；饲养室条件始终保持稳定，以保证试验结果的可靠性。自由 进食饮水，饲料和饮用水均由广东省医学实验动物中心提供。
3、实验分组
动物检疫合格后，将健康大鼠随机分为6组，正常组(对比例6)、模型组(对比例5)、氟康唑组(对比例4)、LP-LY-LR组(实施例1)、LY-LR组(对比例1)、LP-LY组 (对比例2)和LP-LR组(对比例3)，12只/组。
4、造模方法
从感染白色念珠菌前3天到感染当天(即D-3-D0天)，正常组每天皮下注射氯化钠注射液，其余组大鼠每天皮下注射0.5mg苯甲酸雌二醇以维持假发情。
在白色念珠菌感染当天(D0天)，正常组大鼠吸入20％的乌来糖溶液麻醉后阴道腔接种0.1mL氯化钠注射液，其余组大鼠吸入20％的乌来糖溶液麻醉后阴道腔接种0.1mL 白色念珠菌菌液(1×109cfu/mL)。
从感染后第1天起连续5天(D1～D5)观察并记录大鼠生活习性(饮食是否改变、 行为情绪是否有变化)、阴道外观(是否出现红肿)及分泌物(是否增加)情况。
在感染后第5天用无菌阴道拭子采集阴道分泌物做镜检，确保造模成功。造模成功判定标准为外阴出现红肿、伴有白色分泌物、分泌物镜检出现芽孢或真菌菌丝。
5、给药方法
在感染白色念珠菌前5天至感染结束(D-5～D5天，共11天)，LP-LY-LR组、LY-LR 组、LP-LY组和LP-LR组每只大鼠开始灌胃给予相应益生菌1mL。
感染期结束后，即D6天开始给药。
在给药前期(D6-D12)，氟康唑组灌胃给予氟康唑胶囊药液，LP-LY-LR组、LY-LR 组、LP-LY组和LP-LR组灌胃给予相应的益生菌液，正常组和模型组灌胃给予氯化钠注 射液。LP-LY-LR组、LY-LR组、LP-LY组和LP-LR组灌胃体积为1mL/只，其余组灌胃 体积为10mL/kg大鼠体重；所有组灌胃每日1次，连续7天。
在给药后期(D13-D19)，LP-LY-LR组、LY-LR组、LP-LY组和LP-LR组灌胃给予 相应的益生菌液，正常组、模型组和氟康唑组灌胃给予氯化钠注射液。LP-LY-LR组、 LY-LR组、LP-LY组和LP-LR组灌胃体积为1mL/只，其余组灌胃体积为10mL/kg体 重；所有组灌胃每日1次，连续7天。
6、主要检测指标及方法：
阴道洁度分级：取阴道分泌物涂于1-2滴生理盐水的载玻片上，在显微镜下镜检并按表2进行分级。
表2阴道洁度分级表
体重：在D-5天、D0天、D7天、D14天、D19天分别称量各组大鼠体重。
阴道组织病理学检查：正常组、模型组和改善效果良好的实施例组(LP-LY-LR组)，给药结束后，采血后放血处死大鼠，解剖并用无菌PBS冲洗阴道后切除阴道，取适量阴 道组织固定于4％的中性甲醛，HE染色，进行组织病理学检查。
血液细胞因子检测：正常组、模型组和改善效果良好的实施例组(LP-LY-LR组)，给药结束后，大鼠按1.2g/kg体重腹腔注射20％的乌来糖溶液麻醉后采血，血样室温放 置约40min后3000rpm离心15min，取上层血清，用于检测血清细胞因子IL-10。
数据统计方法：有数据采用
表示，应用SPSS 21.0软件进行统计分析；计 量资料数据方差齐，或数据经转换后方差齐，则采用组间两两比较的单因素方差分析方 法；若数据经转换后方差仍不齐，采用秩和检验进行统计分析。空白对照组与模型组比 较，采用独立样本T检验。检验水平α＝0.05。
7、结果
如图1，阴道洁度检测结果表明，模型组SD大鼠的阴道洁度主要集中在3级和4 级，和正常组相比，白色念珠菌诱导的阴道洁度等级显著升高，阴道洁度分布比较差异 有统计学意义(P<0.05)，这表明白色念珠菌性阴道炎动物模型建立成功。LP-LY-LR组 与模型组相比，4级例数明显减少，2级例数明显增加，SD大鼠的阴道洁度明显改善， 阴道洁度分布比较差异有统计学意义(P<0.05)；LY-LR组、LP-LY组和LP-LR组，大 鼠的阴道洁度均有所改善，3级、4级例数减少，2级例数增加，但与模型组相比，阴道 洁度分布比较差异无统计学意义(P＞0.05)。因此，实施例LP-LY-LR组治疗效果最佳。
如图2所示，治疗结束时，各组体重均有不同程度增长，与正常组比较，模型组大鼠体重在D-5天无统计学差异(P>0.05)，在D0天、D7天、D14天、D19天均偏低，具有 统计学差异(P<0.05)。实施例LP-LY-LR组在给药结束时(D19天)与正常组比较，体 重无统计学差异(P>0.05)，这说明本发明提供的益生菌组在治疗后对大鼠的体重影响 小。
如图3，阴道组织病理学检测结果表明，模型组阴道黏膜组织学出现一定的变化，主要表现为局部黏膜固有层组织水肿、出血，黏膜上皮及固有层可见中度多形核白细胞 浸润；正常组阴道组织结构正常，未见异常组织病理学变化；LP-LY-LR组组织充血和 水肿明显好转，未见有明显组织病理学改变，LP-LY-LR组治疗后SD大鼠子宫的炎症反 应得到了改善。
如图4，血清IL-10分泌水平检测结果表明，模型组与正常组相比血清IL-10含量升高(P＞0.05)；实施例LP-LY-LR组IL-10含量降低，并且与正常组相比，IL-10含量 没有统计学差异(P＞0.05)。结果表明，模型组SD大鼠接种白色念珠菌后，血清IL-10 水平维持较高水平，实施例LP-LY-LR组能显著降低白色念珠菌性阴道炎SD大鼠血液 中炎症因子IL-10的水平，有效降低机体炎症反应，通过调节宿主免疫因子而发挥对白 色念珠菌性阴道炎的治疗作用。
综上所述，本发明提供的复合益生菌由于其含有植物乳杆菌SD-H9、罗伊氏乳杆菌WX-94和鼠李糖乳杆菌SD-L8，经过复配后，可有效缓解和改善白色念珠菌性阴道炎症 状，降低炎症反应，在开发用于预防和治疗白色念珠菌性阴道炎制剂方面具有很大的应 用前景。
以上所述本发明的具体实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何根据本 发明的技术构思所做出的各种其他相应的改变与变形，均应包含在本发明权利要求的保 护范围内。
序列表
<110> 深圳市华大农业应用研究院
<120> 复合益生菌、菌剂及其在制备防治白色念珠菌性阴道炎菌剂中的应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 503
<212> DNA
<213> SD-H9(Artificial Sequence)
<400> 1
agagtttgaa cctggctcag gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgaac 60
gaactctggt attgattggt gcttgcatca tgatttacat ttgagtgagt ggcgaactgg 120
tgagtaacac gtgggaaacc tgcccagaag cggggataac acctggaaac agatgctaat 180
accgcataac aacttggacc gcatggtccg agtttgaaag atggcttcgg ctatcacttt 240
tggatggtcc cgcggcgtat tagctagatg gtggggtaac ggctcaccat ggcaatgata 300
cgtagccgac ctgagagggt aatcggccac attgggactg agacacggcc caaactccta 360
cgggaggcag cagtagggaa tcttccacaa tggacgaaag tctgatggag caacgccgcg 420
tgagtgaaga agggtttcgg ctcgtaaaac tctgttgtta aagaagaaca tatctgagag 480
taactgttca ggtatggcag tat 503
<210> 2
<211> 1519
<212> DNA
<213> SD-L8(Artificial Sequence)
<400> 2
gggtacgtct gggctcgtgc ctaatacatg caagtcgaac gagttctgat tattgaaagg 60
tgcttgcatc ttgatttgat tttgaacgag tggcggacgg gtgagtaaca cgtgggtaac 120
ctgcccttaa gtgggggata acatttggaa acagatgcta ataccgcata aatccaagaa 180
ccgcatggtt cttggctgaa agatggcgta agctatcgct tttggatgga cccgcggcgt 240
attagctagt tggtgaggta acggctcacc aaggcaatga tacgtagccg aactgagagg 300
ttgatcggcc acattgggac tgagacacgg cccaaactcc tacgggaggc agcagtaggg 360
aatcttccac aatggacgca agtctgatgg agcaacgccg cgtgagtgaa gaaggctttc 420
gggtcgtaaa actctgttgt tggagaagaa tggtcggcag agtaactgtt gtcggcgtga 480
cggtatccaa ccagaaagcc acggctaact acgtgccagc agccgcggta ataggcgact 540
agtggcagcg tttccggatt attgggcgta aagcgagcgc aggcggtttt ttaagtctga 600
tgtgaaagcc ctcggcttaa ccgaggaagt gcatcggaaa ctgggaaact tgagtgcaga 660
agaggacagt ggaactccat gtgtagcggt gaaatgcgta gatatatgga agaacaccag 720
tggcgaaggc ggctgtctgg tctgtaactg acgctgaggc tcgaaagcat gggtagcgaa 780
caggattaga taccctggta gtccatgccg taaacgatga atgctaggtg ttggagggtt 840
tccgcccttc agtgccgcag ctaacgcatt aagcattccg cctggggagt acgaccgcaa 900
ggttgaaact caaaggaatt gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt 960
cgaagcaacg cgaagaacct taccaggtct tgacatcttt tgatcacctg agagatcagg 1020
tttccccttc gggggcaaaa tgacaggtgg tgcatggttg tcgtcagctc gtgtcgtgag 1080
atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttatgac tagttgccag catttagttg 1140
ggcactctag taagactgcc ggtgacaaac cggaggaagg tggggatgac gtcaaatcat 1200
catgcccctt atgacctggg ctacacacgt gctacaatgg atggtacaac gagttgcgag 1260
accgcgaggt caagctaatc tcttaaagcc attctcagtt cggactgtag gctgcaactc 1320
gcctacacga agtcggaatc gctagtaatc gcggatcagc acgccgcggt gaatacgttc 1380
ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacacc atgagagttt gtaacatttc aagcgcggtg 1440
gcgtaaccct tttagggagc gagccgtcta agagtgggac aaagtgtaac agttagattc 1500
gaagtcgtaa caaggaaac 1519
Claims (3)
1.一种复合益生菌在制备防治白色念珠菌性阴道炎菌剂中的应用，其特征在于，所述复合益生菌包括植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）SD-H9、罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）WX-94和鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）SD-L8，所述植物乳杆菌SD-H9、罗伊氏乳杆菌WX-94和鼠李糖乳杆菌SD-L8均保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，且保藏编号依次为CGMCC NO.16649、CGMCC NO.15062和CGMCC NO.16650。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述防治白色念珠菌性阴道炎是指降低个体血清中炎症因子TNF-α、IL-1ß、IL-6和IL-10。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述复合益生菌中，所述植物乳杆菌SD-H9、所述罗伊氏乳杆菌WX-94和所述鼠李糖乳杆菌SD-L8的活菌数数量级依次为不低于1011cfu/g、不低于1010 cfu/g和不低于109 cfu/g。
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