CN111647513A - 一种猴头菇液体菌种培养基及培养方法 - Google Patents

一种猴头菇液体菌种培养基及培养方法 Download PDF

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CN111647513A CN202010541505.4A CN202010541505A CN111647513A CN 111647513 A CN111647513 A CN 111647513A CN 202010541505 A CN202010541505 A CN 202010541505A CN 111647513 A CN111647513 A CN 111647513A
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Abstract

本发明涉及食用菌培养技术领域，具体涉及一种猴头菇液体菌种培养基及培养方法。所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10‑20g/L、土豆100‑300g/L、MgSO4 2‑4g/L、KH2PO4 2‑4g/L、NaNO3 0.6‑1.25g/L、其余为蒸馏水。本发明提供的猴头菇液体菌种培养基，培养得到的猴头菇菌丝体干重得率为2.98g，培养得到的猴头菇菌丝体干重比基础液体培养基提高150.5％，且所用原材料都安全无污染，便宜易得。

Description

一种猴头菇液体菌种培养基及培养方法
技术领域
本发明涉及食用菌培养技术领域，具体涉及一种猴头菇液体菌种培养基及培养方法。
背景技术
猴头菇(Hericium erinaceus)属猴头菇科猴头菇属食、药兼用的珍贵食用菌，是传统的山中珍品，其外形美观，营养丰富，风味鲜美。猴头菇富含的多糖和多肽类活性物质对治疗胃溃疡、胃炎等胃病有显著疗效；对食道癌、胃癌等消化系统肿瘤有很好的预防和治疗作用。随着人们生活品质的提高和对菌类保健作用认识的不断提高，猴头菇将成为一种极具开发价值和广阔前景的菇类珍品。
猴头菇不仅具有较高的药用价值，食用价值也较高，近年来在食品深加工方面的应用研究较多，成果颇丰。邹东恢等以猴头菇为原料，加入枸杞浸提液，调至成了风味独特的枸杞猴头菇保健酒，它的酒精度为30％左右，这种保健酒具有提高免疫力、抗疲劳的保健功效。市场上，以猴头菇为原料，还配成了猴头菇保健饮料，如猴头菇葡萄汁保健饮料、猴头菇保健酸奶、猴头菇茶、猴头菇罐头、猴头菇保健醋、猴头菇肉调味品、猴头菇药品。
我国食用菌液体菌种研究应用起步较晚，但随着液体菌种优势的凸显及相关技术的突破，液体菌种在食用菌产业中逐渐占据重要的地位。相比繁琐固体母种、原种等制作工序，液体菌种生产程序简洁，制种时间短、菌种活力强，纯度高、污染率低、栽培周期短，生产成本低、有利于工厂化、规模化、周年化生产食用菌。目前通过优化液体菌种培养基来提高猴头菇菌种的技术还不理想。
目前，我国猴头菇基本采用农民传统栽培模式，少见工厂化周年栽培。现有技术中，猴头菇菌种接种绝大多数采用固体菌种接种，关于猴头菇液体菌种的培养基和培养方法的研究较少。
发明内容
本发明的目的是提供一种猴头菇液体菌种培养基及其培养方法，提供了一种廉价简易，提高猴头菇菌丝体干重用的液体菌种培养基及培养方法。
本发明提供的一种猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L，蛋白胨10-20g/L，土豆100-300g/L，MgSO4 2-4g/L，KH2PO4 2-4g/L，NaNO3 0.6-1.25g/L，其余为蒸馏水。
优选的，上述猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，土豆100g/L，MgSO4 4g/L，KH2PO4 3g/L，NaNO3 0.8g/L、其余为蒸馏水。
本发明还提供了一种猴头菇液体菌种的培养方法，包括以下步骤：
步骤1、猴头菇菌种的活化：将猴头菇菌种用打孔器取出，按照1-3％的重量比将猴头菇菌种在无菌条件下接种于含有培养基的培养皿中，接种后倒置在人工气候箱中，在27±2℃下培养至长满培养皿后，得活化的猴头菇菌种，放置在3-5℃冰箱中保存；
步骤2、接种培养：将权利要求1所述的液体菌种培养基加入到锥形瓶中，高压蒸汽灭菌后，按照3-6g/L的比例将活化的猴头菇菌种在无菌条件下接种于加入液体培养基的锥形瓶中，放入恒温振荡培养箱中，100-120r/min，25±2℃，避光振荡培养4-6d，待其菌丝体不再增重后，得到猴头菇菌丝体。
优选的，上述猴头菇液体菌种的培养方法，所述猴头菇菌种为保存于4℃冰箱的采摘于攀枝花的分离纯化后纯种猴头菇斜面菌种。
优选的，上述猴头菇液体菌种的培养方法，所述打孔器直径为10mm。
优选的，上述猴头菇液体菌种的培养方法，所述培养皿中的培养基为PDA培养基。
与现有技术相比，本发明提供的一种猴头菇液体菌种培养基及培养方法，具有以下有益效果：
本发明方案的猴头菇的液体菌种培养方法简洁，制种时间短、菌种活力强，纯度高、污染率低、栽培周期短，生产成本低、有利于工厂化、规模化、周年化生产食用菌。
当猴头菇液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g、蛋白胨10g、土豆1000g、MgSO4 4g、KH2PO4 3g、NaNO3 0.8g、蒸馏水1L时，培养得到的猴头菇菌丝体干重得率为2.98g，培养得到的猴头菇菌丝体干重比基础液体培养基提高150.5％，且所用原材料都安全无污染，便宜易得。
具体实施方式
下面对发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。
本发明所使用的PDA培养基的组成成分及其含量为MgSO4 1g/L、琼脂20g、(NH4)2SO41g/L、葡萄糖20g/L、土豆200g/L、蛋白胨10g/L、KH2PO4 2g/L、蒸馏水1000mL。
本发明提供了一种猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10-20g/L、土豆100-300g/L、MgSO4 2-4g/L、KH2PO4 2-4g/L、NaNO3 0.6-1.25g/L、其余为蒸馏水。
需要说明的是，上述猴头菇液体菌种培养基的的制备方法包括以下步骤：取100-300g土豆加入1000mL的水煮沸20分钟，然后过滤，得到滤液，往滤液加入葡萄糖20g、蛋白胨10-20g、MgSO4 2-4g、KH2PO4 2-4g、NaNO3 0.6-1.25g，加热至溶解，并补水至1000mL，将得到的培养液在120℃温度下灭菌25min，然后冷却至30℃后即得到猴头菇液体菌种培养基。
具体的，本发明一种猴头菇液体菌种培养基及培养方法，包括以下实施例。
实施例1
一种猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO4 3g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
上述猴头菇液体菌种的培养方法，包括以下步骤：
步骤1、猴头菇菌种的活化：将保存于4℃冰箱的采摘于攀枝花的分离纯化后纯种猴头菇斜面菌种用直径为10mm打孔器取出，按照2％的重量比将猴头菇菌种在无菌条件下接种于含有PDA培养基的培养皿中，接种后倒置在人工气候箱中，在27±2℃下培养至长满培养皿后，得活化的猴头菇菌种，放置在4℃冰箱中保存；
步骤2、接种培养：将权利要求1所述的液体菌种培养基加入到锥形瓶中，高压蒸汽灭菌后，按照5g/L的比例将活化的猴头菇菌种在无菌条件下接种于加入液体培养基的锥形瓶中，放入恒温振荡培养箱中，110r/min，25±2℃，避光振荡培养5d，待其菌丝体不再增重后，得到猴头菇菌丝体。
实施例2
本实施例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本实施例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆200g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO4 3g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
实施例3
本实施例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本实施例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆300g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO4 3g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例1
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、玉米粉10g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例2
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、玉米粉20g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例3
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、玉米粉30g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例4
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、淀粉10g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO4 3g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例5
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、淀粉20g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO4 3g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例6
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、淀粉30g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO4 3g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
实施例4
本实施例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本实施例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨20g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO4 3g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例7
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、黄豆饼粉10g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例8
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、黄豆饼粉20g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例9
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、酵母浸粉10g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例10
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、酵母浸粉20/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例11
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、牛肉浸膏10g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例12
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、牛肉浸膏20g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
实施例5
本实施例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本实施例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO4 3g/L、NaNO3 0.6g/L、蒸馏水1000mL。
实施例6
本实施例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本实施例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO4 3g/L、NaNO3 1.0g/L、蒸馏水1000mL。
实施例7
本实施例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本实施例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO4 3g/L、NaNO3 1.25g/L、蒸馏水1000mL。
对比例13
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、牛肉浸膏20g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NH4NO3 0.6g/L、蒸馏水1000mL。
对比例14
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、牛肉浸膏20g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NH4NO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例15
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、牛肉浸膏20g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NH4NO3 1.0g/L、蒸馏水1000mL。
对比例16
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、牛肉浸膏20g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NH4NO3 1.25g/L、蒸馏水1000mL。
对比例17
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、牛肉浸膏20g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、(NH4)2SO4 0.6g/L、蒸馏水1000mL。
对比例18
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、牛肉浸膏20g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、(NH4)2SO4 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例19
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、牛肉浸膏20g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、(NH4)2SO4 1.0g/L、蒸馏水1000mL。
对比例20
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、牛肉浸膏20g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、(NH4)2SO4 1.25g/L、蒸馏水1000mL。
对比例21
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、牛肉浸膏20g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NH4Cl 0.6g/L、蒸馏水1000mL。
对比例22
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、牛肉浸膏20g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NH4Cl 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例23
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、牛肉浸膏20g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NH4Cl 1.0g/L、蒸馏水1000mL。
对比例24
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、牛肉浸膏20g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO43g/L、NH4Cl 1.25g/L、蒸馏水1000mL。
实施例8
本实施例例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本实施例例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、MgSO4 2g/L、KH2PO43g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
实施例9
本实施例例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本实施例例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、MgSO4 3g/L、KH2PO43g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例25
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、MgSO4 2g/L、NaNO30.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例26
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、MgSO4 3g/L、NaNO30.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例27
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、NaNO30.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例28
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、KH2PO4 2g/L、NaNO30.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例29
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、KH2PO4 3g/L、NaNO30.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例30
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、KH2PO4 4g/L、NaNO30.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例31
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、CaSO4 2g/L、NaNO30.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例32
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、CaSO4 3g/L、NaNO30.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例33
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、CaSO4 4g/L、NaNO30.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例34
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、CaSO4 4g/L、NaNO30.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例34
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、KH2PO4 3g/L、CaSO4 4g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例35
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、CaSO4 4g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
对比例36
本对比例猴头菇液体菌种的培养方法同实施例1，不同的是猴头菇液体菌种培养基的组成成分及含量与实施例1不同，本对比例猴头菇液体菌种培养基，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、KH2PO4 3g/L、MgSO4 4g/L、CaSO4 4g/L、NaNO3 0.8g/L、蒸馏水1000mL。
一、菌丝体干重的测定
将实施例1-9以及对比例1-36的猴头菇液体菌种的培养方法得到的猴头菇菌丝体进行干重测定，具体的方法为：先称量滤纸重量后，将培养好的猴头菇液体菌种用滤纸过滤后将其放置在60℃的干燥箱箱中进行烘干，烘干至其重量不再降低，测试称量并计算猴头菇的菌丝体重量，每组实施例及对比例做三次，测试结果取平均值。
二、结果与分析
分别添加了玉米、淀粉和土豆在猴头菇液体培养基作为缓效碳源。其中，添加300g/L土豆时猴头菇菌丝体干重平均得率最高达到2.29g，但添加土豆100g/L时菌丝体干重平均得率2.24g，增长不明显；猴头菇菌丝体干重得率较小的是添加玉米的培养基，菌丝体干重得率最小的是添加各浓度淀粉的培养基。因此，选择作为液体培养基的缓效碳源的是100g/L土豆。
表1不同缓效碳源的液体培养基中的猴头菇菌丝体干重
Figure BDA0002539074430000131
Figure BDA0002539074430000141
分别添加酵母浸粉、蛋白胨和牛肉浸膏在猴头菇液体培养基中作为有机氮源。其中10g/L蛋白胨作为有机氮源的猴头菇菌丝体干重平均得率最高，为2.54g；但猴头菇菌丝体干重平均得率相对较小的是添加牛肉浸膏的培养基，猴头菇菌丝体干重平均得率最小的是添加各浓度酵母饼粉。因此，选择作为液体培养基的有机氮源的是10g/L蛋白胨。
表2不同缓效碳源的液体培养基中的猴头菇菌丝体干重
Figure BDA0002539074430000142
添加硝酸铵、硫酸铵、氯化铵和硝酸钠在液体培养基中作为无机氮源。其中，猴头菇菌丝体干重得率最高的是添加硝酸钠0.8g/L，干重为2.29g；猴头菇菌丝体干重平均得率相对较小的是添加各浓度硝酸铵或硫酸铵的培养基，猴头菇菌丝体干重平均得率最小的是添加各浓度氯化铵。因此，选择作为液体培养基的无机氮源的是0.8g/L硝酸钠。
表3不同缓效碳源的液体培养基中的猴头菇菌丝体干重
Figure BDA0002539074430000143
Figure BDA0002539074430000151
分别添加磷酸二氢钾、硫酸镁和硫酸钙作为无机盐，磷酸二氢钾+硫酸镁、磷酸二氢钾+硫酸钙、磷酸二氢钾+硫酸镁+硫酸钙作为液体培养基中的无机盐组合。其中，添加磷酸二氢钾3g/L时猴头菇菌丝体干重平均得率最高达到1.24g,添加硫酸镁4g/L时猴头菇菌丝体干重平均得率最高达1.71g,故添加磷酸二氢钾3g/L；和硫酸镁4g/L的无机盐组合，得率最高达1.80g/L；添加各浓度硫酸钙以及其他无机盐组合的培养中猴头菇菌丝体干重平均得率相对较小。因此，选择作为液体培养基的无机盐的是磷酸二氢钾3g/L和硫酸镁4g/L。
表4发酵培养基中不同无机盐及无机盐组合对猴头菇菌丝体干重的影响
Figure BDA0002539074430000152
Figure BDA0002539074430000161
从实施例1-9以及对比例1-36的猴头菇液体菌种的培养方法得到的猴头菇菌丝体进行干重测定，猴头菇液体菌种的培养基配方为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO4 3g/L、NaNO3 0.8g/L、水1000mL此时培养得到的猴头菇菌丝体干重得率为2.98g。
需要说明的是，本发明中涉及到数值范围时，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (6)

1.一种猴头菇液体菌种培养基，其特征在于，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10-20g/L、土豆100-300g/L、MgSO4 2-4g/L、KH2PO4 2-4g/L、NaNO30.6-1.25g/L、其余为蒸馏水。
2.根据权利要求1所述的猴头菇液体菌种培养基，其特征在于，所述液体菌种培养基的组成成份及其含量为葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、土豆100g/L、MgSO4 4g/L、KH2PO4 3g/L、NaNO3 0.8g/L、其余为蒸馏水。
3.一种猴头菇液体菌种的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、猴头菇菌种的活化：将猴头菇菌种用打孔器取出，按照1-3％的重量比将猴头菇菌种在无菌条件下接种于含有培养基的培养皿中，接种后倒置在人工气候箱中，在27±2℃下培养至长满培养皿后，得活化的猴头菇菌种，放置在3-5℃冰箱中保存；
步骤2、接种培养：将权利要求1所述的液体菌种培养基加入到锥形瓶中，高压蒸汽灭菌后，按照3-6g/L的比例将活化的猴头菇菌种在无菌条件下接种于加入液体培养基的锥形瓶中，放入恒温振荡培养箱中，100-120r/min，25±2℃，避光振荡培养4-6d，待其菌丝体不再增重后，得到猴头菇菌丝体。
4.根据权利要求3所述的猴头菇液体菌种的培养方法，其特征在于，所述猴头菇菌种为保存于4℃冰箱的采摘于攀枝花的分离纯化后纯种猴头菇斜面菌种。
5.根据权利要求3所述的猴头菇液体菌种的培养方法，其特征在于，所述打孔器直径为10mm。
6.根据权利要求3所述的猴头菇液体菌种的培养方法，其特征在于，所述培养皿中的培养基为PDA培养基。
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