CN102630480B - 一种富铁黑木耳及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种富铁黑木耳及其制备方法。包括如下步骤：1)母种制备；2)筛选耐受铁能力强的黑木耳菌种；3)驯化菌种；4)分离纯化菌种；5)黑木耳深层培养。本发明所述富铁黑木耳的制备方法，在温度25℃，转速为120转/分的条件下培养，进行黑木耳液体深层发酵5天，可得到含铁量为32000mg/kg的黑木耳菌丝体，其中生物铁含量可达到90%。
Description
技术领域
本发明涉及一种富铁黑木耳及其制备方法，属于生物技术领域。
背景技术
铁是人体必需的微量元素之一。它在人体中分布广泛，几乎所有组织都含有铁。铁是血红蛋白的重要组成组分，是血液中输送氧与交换氧的必需微量元素，也是许多酶的活性中心。铁缺乏将导致贫血等疾病，青少年缺铁会影响身体和智力发育，学习能力下降；成人缺铁会导致体力下降，免疫能力降低。对社会而言，缺铁导致人群智力和劳动能力降低，影响人口素质和竞争能力，不利于国家长远的发展。
但是，缺铁是当今世界最严重的营养问题之一，全球约有20亿人缺铁。据全国第四次营养与健康调查的数据显示，我国各类人群的平均贫血发病率为20.1%，其中妇女，儿童和老年人人群的贫血发病率高于全国平均水平。
目前，补铁主要采取在食品中添加铁盐的方式，缺铁严重者则服用含铁药物。但使用铁盐作为食品强化剂，仍然存在各种问题。如硫酸亚铁、葡萄糖亚铁等，吸收利用率较高，但化学性质活泼，易加速脂质氧化，与硫化物、多酚等结合引起食品变色、变质。焦磷酸铁等，性质稳定，不易与其他组分反应，但其吸收利用率低。且大部分铁盐有铁腥味，对胃的刺激作用很大。如：儿童补血露的制备方法(中国专利申请号89105151.1)中采用的葡萄糖酸亚铁；高效铁锌钙补血补钙保健品(中国专利申请号200410036123.7)中的补铁剂为富马酸亚铁；一种补血补铁药物制剂及其制备方法(中国专利申请200510101178.6)中的铁剂为皂矾和/或硫酸亚铁。
食用菌等真菌，可以无机铁盐转化为生物体，提高铁的吸收利用率，消除对胃和肠粘膜的刺激。而且其生产周期短，生物量大，是转化铁的优良载体。通过铁强化食用菌来补铁是健康有效的途径，发展前景广大。如：同时富集铁锌微量元素菌体的制造方法(中国专利申请号98100588.8)添加硫酸亚铁对米曲霉、香菇、金针菇等进行铁强化；一种声波促长富铁抗癌平菇的生产方法(中国专利申请号(200810240596.7)中使用氯化亚铁、硫酸亚铁、氧化铁及其它铁的化合物中的一种或其组合对平菇在声波作用下进行铁的富集。一种富铁酵母及其生产方法(中国专利申请号200810105973.6)驯化富铁酵母，富铁高达80000 mg/kg。
黑木耳，质地柔软，味道鲜美，营养丰富，有益气补血、润肺镇静、凉血止血的功效，被营养学家誉为“素中之荤”和“素中之王”。黑木耳本身含铁量较高，可达1850 mg/kg。可用作铁强化的载体。
然而，目前为止，没有对富铁木耳系统开发的前例。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的富铁黑木耳及其制备方法，为富铁木耳的生产打下基础。
为达到上述目的，本发明的技术方案如下：
本发明所述富铁黑木耳的制备方法，包括如下步骤：
1)母种制备：将新科5号、916黑木耳菌种接种到PDA综合培养基中进行试管菌种培养得到初始试管菌种；
2)筛选耐受铁能力强的黑木耳菌种：在温度22℃-28℃下，配制含铁量为80-120 mg/L的PDA综合培养基，将新科5号、916黑木耳菌种接种到其中培养，挑选出耐受铁能力强的菌种作为驯化菌种；
3)驯化菌种：将铁源与PDA综合培养基混合配置成不同浓度的含铁PDA综合培养基，采用菌悬液接种方式将耐受菌种接种到含铁PDA综合培养基上，按照铁浓度从低到高的顺序，逐一进行耐铁驯化培养；当菌种生长出现下列情形之一：
i)菌种生长周期延长至前一铁浓度的耐铁培养基培养时的一倍以上；
ii)菌种生物量下降至前一铁浓度的耐铁培养基培养时的30%以下，甚至不生长；
iii)菌株明显变色；
且相邻批次耐铁培养基的铁浓度差值在预定阈值20 mg/L内时，停止耐受培养，并确定黑木耳的最佳耐受铁浓度为前一批次耐受培养基的铁浓度和高耐铁黑木耳菌种；
如果相邻批次耐铁培养基的铁浓度差值大于预定阈值，调整耐铁培养基的铁浓度，使耐铁培养基的铁浓度大于前一批次耐铁培养基的铁浓度，且耐铁培养基的铁浓度小于当前批次耐铁培养基的铁浓度，然后以调整铁浓度后的耐铁培养基继续进行耐铁培养；
当黑木耳完成420-480 mg/L含铁培养基的培养，富铁黑木耳菌种完成；
4)分离纯化菌种：将步骤3)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的耐铁性黑木耳菌种；
5)将步骤4)中的高耐铁性铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的含铁1800-2400 mg/L的液体发酵培养基中，在温度为22-28℃，转速为100-150转/分的条件下，进行黑木耳深层培养，4-5天即可得到富铁黑木耳菌丝体。
作为优选方案，其中筛选、驯化和分离纯化菌种所用的PDA综合培养基配方为：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml, pH无需调节，为自然状态。该培养基的制作方法为：先将马铃薯洗净切成小块，称取200 g，放入1000 ml蒸馏水中，煮沸30分钟，用3层纱布过滤1次去除马铃薯残渣，并补水至1 L；称取棉籽壳20 g，KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g，放入100 ml 马铃薯汁中，然后在电热板上煮至沸腾，以使琼脂充分溶解，再将配好的培养基，倒入三角瓶，包扎，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min。
作为优选方案，其中所述铁源为硫酸亚铁、氯化亚铁、硝酸亚铁、柠檬酸亚铁、葡萄糖酸亚铁或氨基酸螯合铁。
作为优选方案，其中所述步骤3)中含铁PDA综合培养基是铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁培养基。
作为优选方案，其中所述含铁1800-2400 mg/L的液体发酵培养基的配方为：每100 ml培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，FeSO4·7H2O 894-1191 mg，pH无需调节，为自然状态。
本发明进一步提供上述方法制备的富铁黑木耳。
本发明所述富铁黑木耳的制备方法，在温度25℃，转速为120转/分的优化条件下培养，进行黑木耳液体深层发酵5天，可得到含铁量为32000 mg/kg的黑木耳菌丝体，其中生物铁含量，可达到90%。
相比现有技术，本发明具有以下有益效果：
1.大幅提高黑木耳的耐铁浓度：耐铁浓度可提高到1800-2400 mg/L；
2.大幅提高黑木耳菌丝体中的生物铁含量：黑木耳菌丝体含铁量可达32000 mg/kg（干重），其中生物铁含量可达到90%；
3.可生产高铁材料：所收获的黑木耳菌丝体可作为优质的食品、保健品的铁源添加剂，也可以进一步提取生物铁，作为补铁保健品。
具体实施方式
以下实施例仅用于说明本发明，但不能用来限制本发明的范围；实施例中采用的实施条件可以根据具体厂家的条件作进一步调整，未说明的实施条件通常为常规实验中的条件。
实施例1：3 L含铁(FeSO4·7H2O)2100 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养；
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养，筛选出耐铁菌种；
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基；所用原料包括：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml，pH无需调节，为自然状态，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min；
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种一级耐铁培养；
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种二级耐铁培养；
6)依此类推，直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养，驯化得到高耐铁黑木耳菌种；
7）将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2100 mg/L的液体发酵培养基中，进行液体发酵种子液制备；其中发酵培养基组成为：每100 ml培养基中，所用原料为：每100 ml定容培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，FeSO4·7H2O 1043 mg，pH无需调节，为自然状态；
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的3 L发酵罐，发酵条件为：温度25℃，转速为120转/分；其中的发酵培养基也经灭菌处理，组成与步骤8)中液体发酵培养基相同；
10)在第4天，收获黑木耳菌丝体。
实施效果：
黑木耳在含铁量为2100 mg/L的液体发酵培养基中生长良好；菌丝体含铁量达到 29000 mg/kg，其中生物铁含量约占 86%。
实施例2： 10 L含铁(FeSO4·7H2O)2100 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养；
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养，筛选出耐铁菌种；
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml。pH无需调节，为自然状态，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min；
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种一级耐铁培养；
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种二级耐铁培养；
6)依此类推，直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养，驯化得到高耐铁黑木耳菌种；
7）将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2100 mg/L的液体发酵培养基中，进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为：每100 ml培养基中，所用原料为：每100 ml定容培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，FeSO4·7H2O 1043 mg，pH无需调节，为自然状态；
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐，发酵条件为温度25℃，转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理，组成与步骤8)中液体发酵培养基相同；
10)在第5天，收获黑木耳菌丝体。
实施效果：
黑木耳在含铁量为2100 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到 32000 mg/kg，其中生物铁含量约占 90%。
实施例3：30 L含铁(FeSO4·7H2O)2100 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养；
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养，筛选出耐铁菌种；
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH--2PO40.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml。pH无需调节，为自然状态，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min；
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种一级耐铁培养；
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种二级耐铁培养；
6)依此类推，直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养，驯化得到高耐铁黑木耳菌种；
7）将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2100 mg/L的液体发酵培养基中，进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为：每100 ml培养基中，所用原料为：每100 ml定容培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，FeSO4·7H2O 1043 mg，pH无需调节，为自然状态；
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的30 L发酵罐，发酵条件为温度25℃，转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理，组成与步骤8)中液体发酵培养基相同；
10)在第5天，收获黑木耳菌丝体。
实施效果：
黑木耳在含铁量为2100 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到 27000 mg/kg，其中生物铁含量约占 85%。
实施例4：10 L含铁(FeSO4·7H2O)1800 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养；
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养，筛选出耐铁菌种；
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH--2PO40.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml。pH无需调节，为自然状态，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min；
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种一级耐铁培养；
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种二级耐铁培养；
6)依此类推，直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养，驯化得到高耐铁黑木耳菌种；
7）将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁1800 mg/L的液体发酵培养基中，进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为：每100 ml培养基中，所用原料为：每100 ml定容培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，FeSO4·7H2O 894 mg，pH无需调节，为自然状态；
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐，发酵条件为温度25℃，转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理，组成与步骤8)中液体发酵培养基相同；
10)在第5天，收获黑木耳菌丝体。
实施效果：
黑木耳在含铁量为1800 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到24500 mg/kg，其中生物铁含量约占90%。
实施例5：10 L含铁(FeSO4·7H2O)2400 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养；
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养，筛选出耐铁菌种；
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH2PO40.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml。pH无需调节，为自然状态，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min；
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种一级耐铁培养；
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种二级耐铁培养；
6)依此类推，直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养，驯化得到高耐铁黑木耳菌种；
7）将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2400 mg/L的液体发酵培养基中，进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为：每100 ml培养基中，所用原料为：每100 ml定容培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，FeSO4·7H2O 1191 mg，pH无需调节，为自然状态；
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐，发酵条件为温度25℃，转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理，组成与步骤8)中液体发酵培养基相同；
10)在第5天，收获黑木耳菌丝体。
实施效果：
黑木耳在含铁量为2400 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到32000 mg/kg，其中生物铁含量约占83%。
实施例6：10 L含铁(FeSO4·7H2O)1500 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养；
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养，筛选出耐铁菌种；
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml。pH无需调节，为自然状态，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min；
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种一级耐铁培养；
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种二级耐铁培养；
6)依此类推，直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养，驯化得到高耐铁黑木耳菌种；
7）将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁1500 mg/L的液体发酵培养基中，进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为：每100 ml培养基中，所用原料为：每100 ml定容培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，FeSO4·7H2O 745 mg，pH无需调节，为自然状态；
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐，发酵条件为温度25℃，转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理，组成与步骤8)中液体发酵培养基相同；
10)在第5天，收获黑木耳菌丝体。
实施效果：
黑木耳在含铁量为1500 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到16000 mg/kg，其中生物铁含量约占90%。
实施例7：10 L含铁(FeSO4·7H2O)2700 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养；
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养，筛选出耐铁菌种；
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH--2PO4 0.3 g, MgSO40.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml。pH无需调节，为自然状态，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min；
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种一级耐铁培养；
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种二级耐铁培养；
6)依此类推，直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养，驯化得到高耐铁黑木耳菌种；
7）将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2700 mg/L的液体发酵培养基中，进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为：每100 ml培养基中，所用原料为：每100 ml定容培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，FeSO4·7H2O 1340 mg，pH无需调节，为自然状态；
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐，发酵条件为温度25℃，转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理，组成与步骤8)中液体发酵培养基相同；
10)在第5天，收获黑木耳菌丝体。
实施效果：
黑木耳在含铁量为2700 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到31000 mg/kg，其中生物铁含量约占68%。
实施例8：10 L含铁(FeCl2·4H2O)2100 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养；
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养，筛选出耐铁菌种；
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH--2PO4 0.3 g, MgSO40.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml。pH无需调节，为自然状态，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min；
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种一级耐铁培养；
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种二级耐铁培养；
6)依此类推，直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养，驯化得到高耐铁黑木耳菌种；
7）将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2100 mg/L的液体发酵培养基中，进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为：每100 ml培养基中，所用原料为：每100 ml定容培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，FeCl2·4H2O 1013 mg，pH无需调节，为自然状态；
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐，发酵条件为温度25℃，转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理，组成与步骤8)中液体发酵培养基相同；
10)在第5天，收获黑木耳菌丝体。
实施效果：
黑木耳在含铁量为2100 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到 31000 mg/kg，其中生物铁含量约占 88%。
实施例9：10 L含铁(葡萄糖酸亚铁C12H22FeO14·2H2O)2100 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养；
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养，筛选出耐铁菌种；
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml。pH无需调节，为自然状态，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min；
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种一级耐铁培养；
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种二级耐铁培养；
6)依此类推，直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养，驯化得到高耐铁黑木耳菌种；
7）将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2100 mg/L的液体发酵培养基中，进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为：每100 ml培养基中，所用原料为：每100 ml定容培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，葡萄糖酸亚铁1808 mg，pH无需调节，为自然状态；
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐，发酵条件为温度25℃，转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理，组成与步骤8)中液体发酵培养基相同；
10)在第5天，收获黑木耳菌丝体。
实施效果：
黑木耳在含铁量为2100 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到 31000 mg/kg，其中生物铁含量约占90%。
实施例10： 10 L含铁(FeSO4·7H2O)2100 mg/L的916黑木耳液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的916黑木耳菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养；
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养，筛选出耐铁菌种；
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml。pH无需调节，为自然状态，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min；
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种一级耐铁培养；
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种二级耐铁培养；
6)依此类推，直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养，驯化得到高耐铁黑木耳菌种；
7）将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2100 mg/L的液体发酵培养基中，进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为：每100 ml培养基中，所用原料为：每100 ml定容培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，FeSO4·7H2O 1043 mg，pH无需调节，为自然状态；
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐，发酵条件为温度25℃，转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理，组成与步骤8)中液体发酵培养基相同；
10)在第5天，收获黑木耳菌丝体。
实施效果：
黑木耳在含铁量为2100 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到 31000 mg/kg，其中生物铁含量约占 89%。
实施例11：10 L含铁(FeSO4·7H2O)1800 mg/L的916黑木耳液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的916黑木耳菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养；
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养，筛选出耐铁菌种；
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH--2PO40.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml。pH无需调节，为自然状态，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min；
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种一级耐铁培养；
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种二级耐铁培养；
6)依此类推，直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养，驯化得到高耐铁黑木耳菌种；
7）将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁1800 mg/L的液体发酵培养基中，进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为：每100 ml培养基中，所用原料为：每100 ml定容培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，FeSO4·7H2O 894 mg，pH无需调节，为自然状态；
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐，发酵条件为温度25℃，转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理，组成与步骤8)中液体发酵培养基相同；
10)在第5天，收获黑木耳菌丝体。
实施效果：
黑木耳在含铁量为1800 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到24000 mg/kg，其中生物铁含量约占89%。
实施例12：10 L含铁(FeSO4·7H2O)2400 mg/L的916黑木耳液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的916黑木耳菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养；
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养，筛选出耐铁菌种；
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH2PO40.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml。pH无需调节，为自然状态，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min；
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种一级耐铁培养；
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种二级耐铁培养；
6)依此类推，直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养，驯化得到高耐铁黑木耳菌种；
7）将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2400 mg/L的液体发酵培养基中，进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为：每100 ml培养基中，所用原料为：每100 ml定容培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，FeSO4·7H2O 1191 mg，pH无需调节，为自然状态；
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐，发酵条件为温度25℃，转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理，组成与步骤8)中液体发酵培养基相同；
10)在第5天，收获黑木耳菌丝体。
实施效果：
黑木耳在含铁量为2400 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到31500 mg/kg，其中生物铁含量约占81%。
实施例13：10 L含铁(FeSO4·7H2O)1500 mg/L的916黑木耳液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的916黑木耳菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养；
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养，筛选出耐铁菌种；
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml。pH无需调节，为自然状态，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min；
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种一级耐铁培养；
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种二级耐铁培养；
6)依此类推，直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养，驯化得到高耐铁黑木耳菌种；
7）将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁1500 mg/L的液体发酵培养基中，进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为：每100 ml培养基中，所用原料为：每100 ml定容培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，FeSO4·7H2O 745 mg，pH无需调节，为自然状态；
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐，发酵条件为温度25℃，转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理，组成与步骤8)中液体发酵培养基相同；
10)在第5天，收获黑木耳菌丝体。
实施效果：
黑木耳在含铁量为1500 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到16500 mg/kg，其中生物铁含量约占90%。
实施例14：10 L含铁(FeSO4·7H2O)2700 mg/L的916黑木耳液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的916黑木耳菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养；
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养，筛选出耐铁菌种；
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH--2PO4 0.3 g, MgSO40.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml。pH无需调节，为自然状态，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min；
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种一级耐铁培养；
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种二级耐铁培养；
6)依此类推，直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养，驯化得到高耐铁黑木耳菌种；
7）将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2700 mg/L的液体发酵培养基中，进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为：每100 ml培养基中，所用原料为：每100 ml定容培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，FeSO4·7H2O 1340 mg，pH无需调节，为自然状态；
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐，发酵条件为温度25℃，转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理，组成与步骤8)中液体发酵培养基相同；
10)在第5天，收获黑木耳菌丝体。
实施效果：
黑木耳在含铁量为2700 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到32000 mg/kg，其中生物铁含量约占65%。
实施例15：10 L含铁(FeCl2·4H2O)2100 mg/L的916黑木耳液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的916黑木耳菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养；
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养，筛选出耐铁菌种；
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH--2PO4 0.3 g, MgSO40.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml。pH无需调节，为自然状态，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min；
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种一级耐铁培养；
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种二级耐铁培养；
6)依此类推，直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养，驯化得到高耐铁黑木耳菌种；
7）将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2100 mg/L的液体发酵培养基中，进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为：每100 ml培养基中，所用原料为：每100 ml定容培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，FeCl2·4H2O 1013 mg，pH无需调节，为自然状态；
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐，发酵条件为温度25℃，转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理，组成与步骤8)中液体发酵培养基相同；
10)在第5天，收获黑木耳菌丝体。
实施效果：
黑木耳在含铁量为2100 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到 30500 mg/kg，其中生物铁含量约占 87%。
实施例16：10 L含铁(葡萄糖酸亚铁C12H22FeO14·2H2O)2100 mg/L的916黑木耳液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的916黑木耳菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养；
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养，筛选出耐铁菌种；
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml。pH无需调节，为自然状态，放入高压灭菌锅中，在120~130℃条件下，灭菌15 min；
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种一级耐铁培养；
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中，进行黑木耳菌种二级耐铁培养；
6)依此类推，直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养，驯化得到高耐铁黑木耳菌种；
7）将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2100 mg/L的液体发酵培养基中，进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为：每100 ml培养基中，所用原料为：每100 ml定容培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，葡萄糖酸亚铁1808 mg，pH无需调节，为自然状态；
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐，发酵条件为温度25℃，转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理，组成与步骤8)中液体发酵培养基相同；
10)在第5天，收获黑木耳菌丝体。
实施效果：
黑木耳在含铁量为2100 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到 31500 mg/kg，其中生物铁含量约占88%。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而列举的较佳实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种富铁黑木耳的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
1)母种制备：将黑木耳菌种接种到PDA综合培养基中进行试管菌种培养得到初始试管菌种；
2)筛选耐受铁能力强的黑木耳菌种：配制含铁量为80-120 mg/L的PDA综合培养基，将黑木耳菌种接种到其中培养，挑选出耐受铁能力强的菌种作为驯化菌种；
3)驯化菌种：将铁源与PDA综合培养基混合配置成不同浓度的含铁PDA综合培养基，采用菌悬液接种方式将耐受菌种接种到含铁PDA综合培养基上，按照铁浓度从低到高的顺序，逐一进行耐铁驯化培养；当菌种生长出现下列情形之一：
i)菌种生长周期延长至前一铁浓度的耐铁培养基培养时的一倍以上；
ii)菌种生物量下降至前一铁浓度的耐铁培养基培养时的30%以下，甚至不生长；
iii)菌株明显变色；
且相邻批次耐铁培养基的铁浓度差值在预定阈值20 mg/L内时，停止耐受培养，并确定黑木耳的最佳耐受铁浓度为前一批次耐受培养基的铁浓度和高耐铁黑木耳菌种；
如果相邻批次耐铁培养基的铁浓度差值大于预定阈值20 mg/L，调整耐铁培养基的铁浓度，使耐铁培养基的铁浓度大于前一批次耐铁培养基的铁浓度，且耐铁培养基的铁浓度小于当前批次耐铁培养基的铁浓度，然后以调整铁浓度后的耐铁培养基继续进行耐铁培养；
4)分离纯化菌种：将步骤3)中所得驯化菌种连续培养，分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种；
5)将步骤4)中的高耐铁性黑木耳菌种接入经灭菌处理的含铁的液体发酵培养基中，进行黑木耳深层培养，得到富铁黑木耳菌丝体；
其中，筛选、驯化和分离纯化菌种所用的培养基配方为：马铃薯汁20 g，棉籽壳20 g，KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g，H2O 100 ml, pH无需调节，为自然状态；
所述黑木耳深层培养所用的液体发酵培养基的含铁量为1800-2400 mg/L；所述液体发酵培养基的配方为：每100 ml培养基中，木屑100 g，葡萄糖1 g，麸皮汁20 g，石膏1 g，过磷酸钙1 g，FeSO4·7H2O 894-1191 mg，pH无需调节，为自然状态。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤 1)中的黑木耳菌种为：新科5号和916。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤 5)中黑木耳深层培养的条件为：温度为22-28℃，转速为100-150转/分。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述铁源为硫酸亚铁、氯化亚铁、硝酸亚铁、柠檬酸亚铁、葡萄糖酸亚铁或氨基酸螯合铁。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含铁PDA综合培养基是铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁培养基。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述黑木耳完成驯化的含铁培养基铁浓度为420-480 mg/L。
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