具体实施方式
以下实施例仅用于说明本发明,但不能用来限制本发明的范围;实施例中采用的实施条件可以根据具体厂家的条件作进一步调整,未说明的实施条件通常为常规实验中的条件。
实施例1:3 L含铁(FeSO4·7H2O)2100 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养;
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养,筛选出耐铁菌种;
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基;所用原料包括:马铃薯汁20 g,棉籽壳20 g,KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g,H2O 100 ml,pH无需调节,为自然状态,放入高压灭菌锅中,在120~130℃条件下,灭菌15 min;
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种一级耐铁培养;
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种二级耐铁培养;
6)依此类推,直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养,驯化得到高耐铁黑木耳菌种;
7)将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代,分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种;
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2100 mg/L的液体发酵培养基中,进行液体发酵种子液制备;其中发酵培养基组成为:每100 ml培养基中,所用原料为:每100 ml定容培养基中,木屑100 g,葡萄糖1 g,麸皮汁20 g,石膏1 g,过磷酸钙1 g,FeSO4·7H2O 1043 mg,pH无需调节,为自然状态;
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的3 L发酵罐,发酵条件为:温度25℃,转速为120转/分;其中的发酵培养基也经灭菌处理,组成与步骤8)中液体发酵培养基相同;
10)在第4天,收获黑木耳菌丝体。
实施效果:
黑木耳在含铁量为2100 mg/L的液体发酵培养基中生长良好;菌丝体含铁量达到 29000 mg/kg,其中生物铁含量约占 86%。
实施例2: 10 L含铁(FeSO4·7H2O)2100 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养;
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养,筛选出耐铁菌种;
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括:马铃薯汁20 g,棉籽壳20 g,KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g,H2O 100 ml。pH无需调节,为自然状态,放入高压灭菌锅中,在120~130℃条件下,灭菌15 min;
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种一级耐铁培养;
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种二级耐铁培养;
6)依此类推,直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养,驯化得到高耐铁黑木耳菌种;
7)将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代,分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种;
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2100 mg/L的液体发酵培养基中,进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为:每100 ml培养基中,所用原料为:每100 ml定容培养基中,木屑100 g,葡萄糖1 g,麸皮汁20 g,石膏1 g,过磷酸钙1 g,FeSO4·7H2O 1043 mg,pH无需调节,为自然状态;
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐,发酵条件为温度25℃,转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理,组成与步骤8)中液体发酵培养基相同;
10)在第5天,收获黑木耳菌丝体。
实施效果:
黑木耳在含铁量为2100 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到 32000 mg/kg,其中生物铁含量约占 90%。
实施例3:30 L含铁(FeSO4·7H2O)2100 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养;
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养,筛选出耐铁菌种;
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括:马铃薯汁20 g,棉籽壳20 g,KH--2PO40.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g,H2O 100 ml。pH无需调节,为自然状态,放入高压灭菌锅中,在120~130℃条件下,灭菌15 min;
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种一级耐铁培养;
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种二级耐铁培养;
6)依此类推,直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养,驯化得到高耐铁黑木耳菌种;
7)将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代,分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种;
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2100 mg/L的液体发酵培养基中,进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为:每100 ml培养基中,所用原料为:每100 ml定容培养基中,木屑100 g,葡萄糖1 g,麸皮汁20 g,石膏1 g,过磷酸钙1 g,FeSO4·7H2O 1043 mg,pH无需调节,为自然状态;
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的30 L发酵罐,发酵条件为温度25℃,转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理,组成与步骤8)中液体发酵培养基相同;
10)在第5天,收获黑木耳菌丝体。
实施效果:
黑木耳在含铁量为2100 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到 27000 mg/kg,其中生物铁含量约占 85%。
实施例4:10 L含铁(FeSO4·7H2O)1800 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养;
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养,筛选出耐铁菌种;
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括:马铃薯汁20 g,棉籽壳20 g,KH--2PO40.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g,H2O 100 ml。pH无需调节,为自然状态,放入高压灭菌锅中,在120~130℃条件下,灭菌15 min;
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种一级耐铁培养;
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种二级耐铁培养;
6)依此类推,直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养,驯化得到高耐铁黑木耳菌种;
7)将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代,分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种;
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁1800 mg/L的液体发酵培养基中,进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为:每100 ml培养基中,所用原料为:每100 ml定容培养基中,木屑100 g,葡萄糖1 g,麸皮汁20 g,石膏1 g,过磷酸钙1 g,FeSO4·7H2O 894 mg,pH无需调节,为自然状态;
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐,发酵条件为温度25℃,转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理,组成与步骤8)中液体发酵培养基相同;
10)在第5天,收获黑木耳菌丝体。
实施效果:
黑木耳在含铁量为1800 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到24500 mg/kg,其中生物铁含量约占90%。
实施例5:10 L含铁(FeSO4·7H2O)2400 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养;
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养,筛选出耐铁菌种;
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括:马铃薯汁20 g,棉籽壳20 g,KH2PO40.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g,H2O 100 ml。pH无需调节,为自然状态,放入高压灭菌锅中,在120~130℃条件下,灭菌15 min;
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种一级耐铁培养;
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种二级耐铁培养;
6)依此类推,直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养,驯化得到高耐铁黑木耳菌种;
7)将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代,分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种;
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2400 mg/L的液体发酵培养基中,进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为:每100 ml培养基中,所用原料为:每100 ml定容培养基中,木屑100 g,葡萄糖1 g,麸皮汁20 g,石膏1 g,过磷酸钙1 g,FeSO4·7H2O 1191 mg,pH无需调节,为自然状态;
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐,发酵条件为温度25℃,转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理,组成与步骤8)中液体发酵培养基相同;
10)在第5天,收获黑木耳菌丝体。
实施效果:
黑木耳在含铁量为2400 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到32000 mg/kg,其中生物铁含量约占83%。
实施例6:10 L含铁(FeSO4·7H2O)1500 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养;
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养,筛选出耐铁菌种;
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括:马铃薯汁20 g,棉籽壳20 g,KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g,H2O 100 ml。pH无需调节,为自然状态,放入高压灭菌锅中,在120~130℃条件下,灭菌15 min;
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种一级耐铁培养;
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种二级耐铁培养;
6)依此类推,直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养,驯化得到高耐铁黑木耳菌种;
7)将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代,分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种;
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁1500 mg/L的液体发酵培养基中,进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为:每100 ml培养基中,所用原料为:每100 ml定容培养基中,木屑100 g,葡萄糖1 g,麸皮汁20 g,石膏1 g,过磷酸钙1 g,FeSO4·7H2O 745 mg,pH无需调节,为自然状态;
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐,发酵条件为温度25℃,转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理,组成与步骤8)中液体发酵培养基相同;
10)在第5天,收获黑木耳菌丝体。
实施效果:
黑木耳在含铁量为1500 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到16000 mg/kg,其中生物铁含量约占90%。
实施例7:10 L含铁(FeSO4·7H2O)2700 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养;
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养,筛选出耐铁菌种;
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括:马铃薯汁20 g,棉籽壳20 g,KH--2PO4 0.3 g, MgSO40.15 g, 琼脂2 g,H2O 100 ml。pH无需调节,为自然状态,放入高压灭菌锅中,在120~130℃条件下,灭菌15 min;
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种一级耐铁培养;
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种二级耐铁培养;
6)依此类推,直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养,驯化得到高耐铁黑木耳菌种;
7)将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代,分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种;
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2700 mg/L的液体发酵培养基中,进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为:每100 ml培养基中,所用原料为:每100 ml定容培养基中,木屑100 g,葡萄糖1 g,麸皮汁20 g,石膏1 g,过磷酸钙1 g,FeSO4·7H2O 1340 mg,pH无需调节,为自然状态;
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐,发酵条件为温度25℃,转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理,组成与步骤8)中液体发酵培养基相同;
10)在第5天,收获黑木耳菌丝体。
实施效果:
黑木耳在含铁量为2700 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到31000 mg/kg,其中生物铁含量约占68%。
实施例8:10 L含铁(FeCl2·4H2O)2100 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养;
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养,筛选出耐铁菌种;
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括:马铃薯汁20 g,棉籽壳20 g,KH--2PO4 0.3 g, MgSO40.15 g, 琼脂2 g,H2O 100 ml。pH无需调节,为自然状态,放入高压灭菌锅中,在120~130℃条件下,灭菌15 min;
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种一级耐铁培养;
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种二级耐铁培养;
6)依此类推,直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养,驯化得到高耐铁黑木耳菌种;
7)将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代,分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种;
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2100 mg/L的液体发酵培养基中,进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为:每100 ml培养基中,所用原料为:每100 ml定容培养基中,木屑100 g,葡萄糖1 g,麸皮汁20 g,石膏1 g,过磷酸钙1 g,FeCl2·4H2O 1013 mg,pH无需调节,为自然状态;
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐,发酵条件为温度25℃,转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理,组成与步骤8)中液体发酵培养基相同;
10)在第5天,收获黑木耳菌丝体。
实施效果:
黑木耳在含铁量为2100 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到 31000 mg/kg,其中生物铁含量约占 88%。
实施例9:10 L含铁(葡萄糖酸亚铁C12H22FeO14·2H2O)2100 mg/L的新科5号液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的新科5号菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养;
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养,筛选出耐铁菌种;
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括:马铃薯汁20 g,棉籽壳20 g,KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g,H2O 100 ml。pH无需调节,为自然状态,放入高压灭菌锅中,在120~130℃条件下,灭菌15 min;
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种一级耐铁培养;
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种二级耐铁培养;
6)依此类推,直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养,驯化得到高耐铁黑木耳菌种;
7)将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代,分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种;
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2100 mg/L的液体发酵培养基中,进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为:每100 ml培养基中,所用原料为:每100 ml定容培养基中,木屑100 g,葡萄糖1 g,麸皮汁20 g,石膏1 g,过磷酸钙1 g,葡萄糖酸亚铁1808 mg,pH无需调节,为自然状态;
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐,发酵条件为温度25℃,转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理,组成与步骤8)中液体发酵培养基相同;
10)在第5天,收获黑木耳菌丝体。
实施效果:
黑木耳在含铁量为2100 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到 31000 mg/kg,其中生物铁含量约占90%。
实施例10: 10 L含铁(FeSO4·7H2O)2100 mg/L的916黑木耳液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的916黑木耳菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养;
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养,筛选出耐铁菌种;
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括:马铃薯汁20 g,棉籽壳20 g,KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g,H2O 100 ml。pH无需调节,为自然状态,放入高压灭菌锅中,在120~130℃条件下,灭菌15 min;
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种一级耐铁培养;
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种二级耐铁培养;
6)依此类推,直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养,驯化得到高耐铁黑木耳菌种;
7)将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代,分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种;
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2100 mg/L的液体发酵培养基中,进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为:每100 ml培养基中,所用原料为:每100 ml定容培养基中,木屑100 g,葡萄糖1 g,麸皮汁20 g,石膏1 g,过磷酸钙1 g,FeSO4·7H2O 1043 mg,pH无需调节,为自然状态;
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐,发酵条件为温度25℃,转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理,组成与步骤8)中液体发酵培养基相同;
10)在第5天,收获黑木耳菌丝体。
实施效果:
黑木耳在含铁量为2100 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到 31000 mg/kg,其中生物铁含量约占 89%。
实施例11:10 L含铁(FeSO4·7H2O)1800 mg/L的916黑木耳液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的916黑木耳菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养;
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养,筛选出耐铁菌种;
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括:马铃薯汁20 g,棉籽壳20 g,KH--2PO40.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g,H2O 100 ml。pH无需调节,为自然状态,放入高压灭菌锅中,在120~130℃条件下,灭菌15 min;
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种一级耐铁培养;
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种二级耐铁培养;
6)依此类推,直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养,驯化得到高耐铁黑木耳菌种;
7)将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代,分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种;
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁1800 mg/L的液体发酵培养基中,进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为:每100 ml培养基中,所用原料为:每100 ml定容培养基中,木屑100 g,葡萄糖1 g,麸皮汁20 g,石膏1 g,过磷酸钙1 g,FeSO4·7H2O 894 mg,pH无需调节,为自然状态;
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐,发酵条件为温度25℃,转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理,组成与步骤8)中液体发酵培养基相同;
10)在第5天,收获黑木耳菌丝体。
实施效果:
黑木耳在含铁量为1800 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到24000 mg/kg,其中生物铁含量约占89%。
实施例12:10 L含铁(FeSO4·7H2O)2400 mg/L的916黑木耳液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的916黑木耳菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养;
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养,筛选出耐铁菌种;
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括:马铃薯汁20 g,棉籽壳20 g,KH2PO40.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g,H2O 100 ml。pH无需调节,为自然状态,放入高压灭菌锅中,在120~130℃条件下,灭菌15 min;
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种一级耐铁培养;
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种二级耐铁培养;
6)依此类推,直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养,驯化得到高耐铁黑木耳菌种;
7)将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代,分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种;
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2400 mg/L的液体发酵培养基中,进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为:每100 ml培养基中,所用原料为:每100 ml定容培养基中,木屑100 g,葡萄糖1 g,麸皮汁20 g,石膏1 g,过磷酸钙1 g,FeSO4·7H2O 1191 mg,pH无需调节,为自然状态;
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐,发酵条件为温度25℃,转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理,组成与步骤8)中液体发酵培养基相同;
10)在第5天,收获黑木耳菌丝体。
实施效果:
黑木耳在含铁量为2400 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到31500 mg/kg,其中生物铁含量约占81%。
实施例13:10 L含铁(FeSO4·7H2O)1500 mg/L的916黑木耳液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的916黑木耳菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养;
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养,筛选出耐铁菌种;
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括:马铃薯汁20 g,棉籽壳20 g,KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g,H2O 100 ml。pH无需调节,为自然状态,放入高压灭菌锅中,在120~130℃条件下,灭菌15 min;
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种一级耐铁培养;
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种二级耐铁培养;
6)依此类推,直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养,驯化得到高耐铁黑木耳菌种;
7)将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代,分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种;
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁1500 mg/L的液体发酵培养基中,进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为:每100 ml培养基中,所用原料为:每100 ml定容培养基中,木屑100 g,葡萄糖1 g,麸皮汁20 g,石膏1 g,过磷酸钙1 g,FeSO4·7H2O 745 mg,pH无需调节,为自然状态;
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐,发酵条件为温度25℃,转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理,组成与步骤8)中液体发酵培养基相同;
10)在第5天,收获黑木耳菌丝体。
实施效果:
黑木耳在含铁量为1500 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到16500 mg/kg,其中生物铁含量约占90%。
实施例14:10 L含铁(FeSO4·7H2O)2700 mg/L的916黑木耳液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的916黑木耳菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养;
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养,筛选出耐铁菌种;
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括:马铃薯汁20 g,棉籽壳20 g,KH--2PO4 0.3 g, MgSO40.15 g, 琼脂2 g,H2O 100 ml。pH无需调节,为自然状态,放入高压灭菌锅中,在120~130℃条件下,灭菌15 min;
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种一级耐铁培养;
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种二级耐铁培养;
6)依此类推,直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养,驯化得到高耐铁黑木耳菌种;
7)将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代,分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种;
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2700 mg/L的液体发酵培养基中,进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为:每100 ml培养基中,所用原料为:每100 ml定容培养基中,木屑100 g,葡萄糖1 g,麸皮汁20 g,石膏1 g,过磷酸钙1 g,FeSO4·7H2O 1340 mg,pH无需调节,为自然状态;
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐,发酵条件为温度25℃,转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理,组成与步骤8)中液体发酵培养基相同;
10)在第5天,收获黑木耳菌丝体。
实施效果:
黑木耳在含铁量为2700 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到32000 mg/kg,其中生物铁含量约占65%。
实施例15:10 L含铁(FeCl2·4H2O)2100 mg/L的916黑木耳液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的916黑木耳菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养;
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养,筛选出耐铁菌种;
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括:马铃薯汁20 g,棉籽壳20 g,KH--2PO4 0.3 g, MgSO40.15 g, 琼脂2 g,H2O 100 ml。pH无需调节,为自然状态,放入高压灭菌锅中,在120~130℃条件下,灭菌15 min;
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种一级耐铁培养;
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种二级耐铁培养;
6)依此类推,直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养,驯化得到高耐铁黑木耳菌种;
7)将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代,分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种;
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2100 mg/L的液体发酵培养基中,进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为:每100 ml培养基中,所用原料为:每100 ml定容培养基中,木屑100 g,葡萄糖1 g,麸皮汁20 g,石膏1 g,过磷酸钙1 g,FeCl2·4H2O 1013 mg,pH无需调节,为自然状态;
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐,发酵条件为温度25℃,转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理,组成与步骤8)中液体发酵培养基相同;
10)在第5天,收获黑木耳菌丝体。
实施效果:
黑木耳在含铁量为2100 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到 30500 mg/kg,其中生物铁含量约占 87%。
实施例16:10 L含铁(葡萄糖酸亚铁C12H22FeO14·2H2O)2100 mg/L的916黑木耳液体深层发酵
1)将购于浙江启明食用菌有限公司的916黑木耳菌种接入经灭菌处理后的PDA综合培养基中进行试管菌种培养;
2)将试管菌种接入含铁量100 mg/L的PDA综合培养基中培养,筛选出耐铁菌种;
3)用FeSO4·7H2O配制含铁浓度分别为150、200、250、300、320、350、400、450 mg/L的含铁PDA综合培养基。所用原料包括:马铃薯汁20 g,棉籽壳20 g,KH--2PO4 0.3 g, MgSO4 0.15 g, 琼脂2 g,H2O 100 ml。pH无需调节,为自然状态,放入高压灭菌锅中,在120~130℃条件下,灭菌15 min;
4)将步骤2)中筛选出的菌种接入步骤3)制备的含铁浓度为150 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种一级耐铁培养;
5)将步骤4)培养的一级耐铁黑木耳菌种接入步骤3)制备的200 mg/L的PDA综合培养基中,进行黑木耳菌种二级耐铁培养;
6)依此类推,直至黑木耳菌种完成450 mg/L含铁PDA综合培养基的培养,驯化得到高耐铁黑木耳菌种;
7)将步骤6)中所得驯化菌种连续培养3-5代,分离纯化出生长速率快、含铁量高、对铁的利用率高和耐性高的高耐铁性黑木耳菌种;
8)将步骤7)中获得的高耐铁黑木耳菌种接入经灭菌处理的500 ml含铁2100 mg/L的液体发酵培养基中,进行液体发酵种子液制备。其中发酵培养基组成为:每100 ml培养基中,所用原料为:每100 ml定容培养基中,木屑100 g,葡萄糖1 g,麸皮汁20 g,石膏1 g,过磷酸钙1 g,葡萄糖酸亚铁1808 mg,pH无需调节,为自然状态;
9)将步骤8)中制备的种子液接入经灭菌处理的10 L发酵罐,发酵条件为温度25℃,转速为120转/分。其中的发酵培养基也经灭菌处理,组成与步骤8)中液体发酵培养基相同;
10)在第5天,收获黑木耳菌丝体。
实施效果:
黑木耳在含铁量为2100 mg/L的液体发酵培养基中生长良好。菌丝体含铁量达到 31500 mg/kg,其中生物铁含量约占88%。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而列举的较佳实施例,本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换,均在本发明的保护范围之内。