CN111616362A - 一种核桃雄花抗氧化剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种核桃雄花抗氧化剂及其制备方法和应用，该方法包括：将制碎的核桃雄花序采用高压脉冲电场技术进行细胞破碎和灭酶处理；高压脉冲电场处理结束后，搅拌条件下维持5～10min，分离，得到上清液一和沉淀一；将沉淀一采用乙酸乙酯进行浸提，回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯浸提物和沉淀二；将沉淀二采用碱溶酸沉的方法提取蛋白质；采用复合酶进行酶解，酶解后分离，得到上清液二，膜过滤，收集透过液；合并上清液一、乙酸乙酯浸提物和透过液，混合均匀，浓缩后制备得到核桃雄花抗氧化剂。本发明制备的抗氧化剂抗氧化活性高、提取率高。
Description
技术领域
本发明涉及一种核桃雄花抗氧化剂及其制备方法和应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的一些理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
抗氧化剂根据其来源分为人工合成抗氧化剂和天然抗氧化剂。人工合成抗氧化剂由于其潜在的毒性和致癌性等逐渐受到人们的排斥，因此，从植物中寻找天然、高效、低毒的抗氧化剂成为目前抗氧化剂发展的一个必然趋势。从目前的研究报道来看，天然植物抗氧化剂绝大部分都是多酚类物质，其中应用比较多的有茶多酚、迷迭香提取物、葡萄籽提取物等。
核桃是我国栽培历史悠久而广泛的重要干果树种之一，目前针对核桃树主要采收核桃坚果，为了尽可能地提高核桃产量，在核桃栽培过程中需要疏掉大量雄花，以供给果实营养。近年来国内核桃栽培面积以每年10％的速度递增，一株18年生核桃树每株有雄花序2000多个，干重5kg多，可见，核桃雄花序年产稳定，具有极大的开发利用价值。
汪海波等采用DPPH·清除法研究新鲜核桃雄花序的抗氧化活性，主要方法包括：采用乙醇作为提取剂，提取5次，得到乙醇提取物，然后再采用石油醚、乙酸乙酯或正丁醇等体积萃取4次，得到的乙酸乙酯提取物虽然对DPPH·清除作用，但是存在提取效率低、有机溶剂使用量大等缺点。王长蕾等人在对核桃雄花中的总酚类物质进行浸提时，采用甲醇作为提取剂、常规水浴浸提或超声波辅助浸提，虽然超声波辅助浸提法具有用时短、总多酚提取量高的优点，但是，试验中采用高温浸提，加之超声波处理，加剧了多酚的氧化，使得其作为抗氧化剂时清除自由基的活性降低。
发明内容
针对以上背景技术，首先，本发明人采用了以甲醇作为提取剂、超声波辅助浸提法进行试验，然而得到的醇提物并没有获得理想的抗氧化活性效果。
其次，经过本发明人的研究，发现，在常温下，核桃雄花序中的过氧化物酶和多酚氧化酶活性较高，多酚类等物质比较容易被多酚氧化酶等酶氧化失活。
此外，核桃雄花中的蛋白质含量较高，针对现有技术中核桃花抗氧化成分提取效率低的问题，本发明人研究了核桃花多肽的抗氧化活性，发现，经过一定方法制备得到的核桃花多肽具有较强的抗氧化活性。
针对以上问题，本发明公开了一种核桃雄花抗氧化剂的制备方法，具体的，本发明采用以下技术方案：
在本发明的第一个方面，提供一种核桃雄花提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将核桃雄花序切碎或粉碎；
(2)将制碎的核桃雄花序采用高压脉冲电场技术进行细胞破碎和灭酶处理，处理介质为柠檬酸水溶液或抗坏血酸水溶液或柠檬酸和抗坏血酸的混合水溶液；
(3)高压脉冲电场处理结束后，搅拌条件下维持5～10min，分离，得到上清液一和沉淀一；
(4)将步骤(3)得到的沉淀一采用乙酸乙酯进行浸提，回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯浸提物和沉淀二；
(5)将沉淀二采用碱溶酸沉的方法提取蛋白质；
(6)采用复合酶进行酶解，酶解后分离，得到上清液二，膜过滤，收集透过液；
(7)合并上清液一、乙酸乙酯浸提物和透过液，混合均匀，浓缩后制备得到核桃雄花提取物。
在本发明的第二个方面，提供采用上述方法制备得到的核桃雄花提取物。
在本发明的第三个方面，提供所述核桃雄花提取物在制备抗氧化剂中的应用。
与本发明人知晓的相关技术相比，本发明其中的一个技术方案具有如下有益效果：
(1)发明人发现核桃雄花序中的苷类物质以及相应水解后的化合物的抗氧化活性较强，故本发明将核桃雄花序中的苷类物质在弱酸环境下单独提取，有助于提高提取率和产物的抗氧化活性。
(2)本发明采用高压脉冲电场技术对细胞进行破壁和灭酶处理，尽可能使有效活性成分从细胞内得以释放，处理时间短，效率高，对具有抗氧化活性的有效成分破坏性小，经过试验验证，相比于超高压灭酶等技术，取得了显著优异的抗氧化活性的技术效果。
(3)本发明采用多次提取有效活性成分的方法，采用酸和乙酸乙酯浸提，将核桃雄花序中的苷类物质和中等极性的抗氧化活性物质提取出来，提高了提取率，采用复合酶酶解乙酸乙酯浸提物，得到抗氧化活性多肽，经过试验验证，尤其是采用复合酸浸提之后，多次提取的抗氧化活性成分具有协同增效作用，能够有效清除DPPH、ABTS等自由基。
附图说明
构成本发明一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1是本发明的制备核桃雄花抗氧化剂的工艺流程图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。
正如背景技术所介绍的，目前针对核桃雄花的抗氧化剂的制备存在提取效率低、抗氧化活性低等技术问题，为了解决如上的技术问题，在本发明的第一个典型的实施方式中，提供一种核桃雄花提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将核桃雄花序切碎或粉碎；
(2)将制碎的核桃雄花序采用高压脉冲电场技术进行细胞破碎和灭酶处理，处理介质为柠檬酸水溶液或抗坏血酸水溶液或柠檬酸和抗坏血酸的混合水溶液；
(3)高压脉冲电场处理结束后，搅拌条件下维持5～10min，分离，得到上清液一和沉淀一；
(4)将步骤(3)得到的沉淀一采用乙酸乙酯进行浸提，回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯浸提物和沉淀二；
(5)将沉淀二采用碱溶酸沉的方法提取蛋白质；
(6)采用复合酶进行酶解，酶解后分离，得到上清液二，膜过滤，收集透过液；
(7)合并上清液一、乙酸乙酯浸提物和透过液，混合均匀，浓缩、干燥后制备得到核桃雄花提取物。
在本发明的一些实施方式中，步骤(1)中，制碎后的核桃雄花序小于1毫米。
为了使得核桃雄花序细胞破壁以及具有较优异的灭酶效果，在本发明的一些实施方式中，步骤(2)中，对高压脉冲电场技术的参数进行了选择：脉冲发生器波形为方波，电场强度为35～60kV/cm，脉冲宽度5～10μs，脉冲频率350～500Hz，作用时间为15～25s较低强度的电场强度和脉冲频率无法有效的进行细胞破壁，而更高的电场强度和脉冲频率会降低有效成分的抗氧化活性。
采用液体介质可提高高压脉冲电场的处理效果，在本发明的一些实施方式中，步骤(2)中，制碎的核桃雄花序与酸溶液的投料比例：以酸溶液能够浸泡核桃雄花序即可。
核桃雄花序中含有大量的苷类物质(例如，槲皮苷、异槲皮苷、木犀草苷等)，相比于其他有机溶剂，弱酸性的环境对它们的溶解性更好，容易提取且稳定，本发明采用柠檬酸和/或抗坏血酸水溶液作为高压脉冲电场的液体介质，同时进行溶解和提取，以及用于协同提取出来的苷类物质或酸水解之后相应的化合物，提高步骤(3)中上清液的抗氧化活性，经过试验验证，其他有机酸不具备协同提高抗氧化性的作用，还需要专门去除，而采用柠檬酸或抗坏血酸并不需要分离。在本发明的一些实施方式中，柠檬酸水溶液或抗坏血酸水溶液的质量浓度为0.2～0.4％，柠檬酸和抗坏血酸的混合水溶液中，柠檬酸的质量分数为0.05～0.25％，抗坏血酸的质量分数为0.05～0.25％。优选柠檬酸和抗坏血酸的混合水溶液，抗坏血酸在柠檬酸中的稳定性更强，柠檬酸的存在有利于增强有效成分的抗氧化活性。
在本发明的一些实施方式中，步骤(3)中，为了进一步的溶解出苷类化合物，高压脉冲电场处理结束后需要在搅拌条件下继续溶解一段时间，搅拌条件优选为磁力搅拌，转速为500～2000rpm。
在本发明的一些实施方式中，步骤(3)中，所述分离采用转速为4000～8000rpm离心分离，离心时间5～8min；分离后得到上清液一和沉淀一，上清液一种含有酸溶液溶解出的苷类化合物以及苷类酸水解后的相应化合物，沉淀一中包括一些未被酸性溶液溶解的具有抗氧化活性的物质以及大量蛋白质。
在本发明的一些实施方式中，步骤(4)中，沉淀一和乙酸乙酯的质量比例为1:1～5，浸提温度为常温，浸提时间为0.5～1h，若是在搅拌条件下浸提，浸提时间为10～30min，优选磁力搅拌，搅拌转速为500～800rpm。本发明采用乙酸乙酯提取沉淀一中具有抗氧化活性的化合物，经过试验验证，得到的乙酸乙酯提物抗氧化活性较高。对于上述采用高压脉冲电场技术的好处之一就是对于该步骤的乙酸乙酯提取以及后续的步骤可采用较为温和的试验条件，所以对于此步骤的浸提条件，本发明采用常温条件提取，以尽可能地降低抗氧化活性的损失。
在本发明的一些实施方式中，步骤(5)中，沉淀二与氢氧化钠溶液的质量比例为1:5～10，氢氧化钠溶液的质量浓度为0.05～0.1moL/L，碱溶温度为常温，碱溶时间为0.5～1h，若是在搅拌条件下碱溶，碱溶时间为10～30min，优选磁力搅拌，搅拌转速为500～800rpm。
碱溶后，进行离心分离，得到上清液和沉淀，将沉淀再采用上述方法进行碱溶，合并上清液，用酸调节上清液的pH至4.5左右，蛋白沉淀析出。
本发明采用复合酶酶解和膜过滤的方法制备核桃雄花活性多肽，在本发明的一些实施方式中，步骤(6)中，所述复合酶优选为木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的混合物，木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的酶活力单位比值为1:1～2，所述酶解pH为7～8，酶解温度为常温(优选30～40℃)，加酶量为蛋白质沉淀质量0.1～0.5％，每克复合酶的酶活力为30万U～50万U，在搅拌条件下的酶解时间为0.5～1h，优选磁力搅拌，搅拌转速为200～800rpm。通过此木瓜蛋白酶和胰蛋白酶组成的复合酶酶解，得到的核桃雄花多肽具有较高的抗氧化活性，同时提取率较高。
在本发明的一些实施方式中，步骤(6)中，膜的孔径为1000～5000道尔顿，有效截留蛋白质和分子质量较大的多肽，去除无效成分。
在本发明的第二个典型的实施方式中，采用上述方法制备得到的核桃雄花提取物。
在本发明的第三个典型的实施方式中，所述核桃雄花提取物在制备抗氧化剂中的应用。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。
实施例1
一种核桃雄花抗氧化剂的制备方法，包括以下步骤，工艺流程如图1所示：
(1)核桃品种为鸡爪绵，收集新鲜的长度较为均一的核桃雄花序，进行清洗去除杂物，用切菜机切碎至小于1mm，备用。
(2)将1000g切碎后的核桃雄花序加入2000mL酸溶液中，所述酸溶液为抗坏血酸和柠檬酸的水溶液，柠檬酸的质量分数为0.1％，抗坏血酸的质量分数为0.15％，然后采用高压脉冲电场技术对其进行植物细胞破碎和灭酶，技术参数为：脉冲发生器波形为方波，电场强度为40kV/cm，脉冲宽度8μs，脉冲频率400Hz，作用时间为20s。
(3)高压脉冲电场处理结束后，取出物料，磁力搅拌条件下搅拌10min，转速为800rpm，搅拌后8000rpm离心5min，得到上清液一和沉淀一。
(4)将步骤(3)得到的沉淀一采用乙酸乙酯进行浸提，沉淀一和乙酸乙酯的质量比例为1:2，浸提温度为37℃，在磁力搅拌条件下浸提20min，搅拌转速为800rpm；然后8000rpm离心分离5min，减压回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯浸提物和沉淀二。
(5)将沉淀二加入氢氧化钠溶液中，所述沉淀二和氢氧化钠溶液的质量比例为1:5，氢氧化钠溶液的质量浓度为0.05moL/L，温度为37℃，在磁力搅拌条件下溶解20min，搅拌转速为500～800rpm；
碱溶后，8000rpm离心分离5min，得到上清液和沉淀，将沉淀再次采用上述方法进行碱溶，合并上清液，用稀盐酸调节上清液的pH至4.5左右，蛋白沉淀析出。
(6)将步骤(5)中的蛋白质沉淀采用3倍质量的1mol/L磷酸钠缓冲液进行溶解稀释，然后调节pH至中性，采用复合酶进行酶解，所述复合酶是由木瓜蛋白酶和胰蛋白酶组成，酶活力比值为1：2，加酶量为蛋白质质量的0.35％，每克复合酶的酶活力为40万U，在磁力搅拌条件下搅拌40min，搅拌转速为200rpm，酶解结束后，8000rpm离心分离5min，得到上清液二，采用中空纤维超滤膜过滤，膜孔径为3000道尔顿，收集透过液。
(7)合并上清液一、乙酸乙酯浸提物和透过液，混合均匀，然后进行低温减压浓缩，再进行低温干燥后制备得到40.56g固体核桃雄花抗氧化剂，含水量小于5％。
实施例2
一种核桃雄花抗氧化剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)核桃品种为鸡爪绵，收集新鲜的长度较为均一的核桃雄花序，进行清洗去除杂物，用切菜机切碎至小于1mm，备用。
(2)将1000g切碎后的核桃雄花序加入2000mL酸溶液中，所述酸溶液为抗坏血酸水溶液，抗坏血酸的质量分数为0.15％，然后采用高压脉冲电场技术对其进行植物细胞破碎和灭酶，技术参数为：脉冲发生器波形为方波，电场强度为45kV/cm，脉冲宽度10μs，脉冲频率450Hz，作用时间为15s。
(3)高压脉冲电场处理结束后，取出物料，磁力搅拌条件下搅拌10min，转速为800rpm，搅拌后8000rpm离心5min，得到上清液一和沉淀一。
(4)将步骤(3)得到的沉淀一采用乙酸乙酯进行浸提，沉淀一和乙酸乙酯的质量比例为1:2.5，浸提温度为37℃，在磁力搅拌条件下浸提15min，搅拌转速为800rpm；然后8000rpm离心分离5min，减压回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯浸提物和沉淀二。
(5)将沉淀二加入氢氧化钠溶液中，所述沉淀二和氢氧化钠溶液的质量比例为1:6，氢氧化钠溶液的质量浓度为0.08moL/L，温度为37℃，在磁力搅拌条件下溶解20min，搅拌转速为500～800rpm；
碱溶后，8000rpm离心分离5min，得到上清液和沉淀，将沉淀再次采用上述方法进行碱溶，合并上清液，用稀盐酸调节上清液的pH至4.5左右，蛋白沉淀析出。
(6)将步骤(5)中的蛋白质沉淀采用4倍质量的1mol/L磷酸钠缓冲液进行溶解稀释，然后调节pH至中性，采用复合酶进行酶解，所述复合酶是由木瓜蛋白酶和胰蛋白酶组成，酶活力比值为1：2.5，加酶量为蛋白质质量的0.4％，每克复合酶的酶活力为45万U，在磁力搅拌条件下搅拌50min，搅拌转速为200rpm，酶解结束后，8000rpm离心分离5min，得到上清液二，采用中空纤维超滤膜过滤，膜孔径为2000道尔顿，收集透过液。
(7)合并上清液一、乙酸乙酯浸提物和透过液，然后进行低温减压浓缩，再进行低温干燥后制备得到39.28g固体核桃雄花抗氧化剂，含水量小于5％。
实施例3
一种核桃雄花抗氧化剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)核桃品种为鸡爪绵，收集新鲜的长度较为均一的核桃雄花序，进行清洗去除杂物，用切菜机切碎至小于1mm，备用。
(2)将1000g切碎后的核桃雄花序加入2000mL酸溶液中，所述酸溶液为柠檬酸的水溶液，柠檬酸的质量分数为0.3％，然后采用高压脉冲电场技术对其进行植物细胞破碎和灭酶，技术参数为：脉冲发生器波形为方波，电场强度为50kV/cm，脉冲宽度10μs，脉冲频率450Hz，作用时间为25s。
(3)高压脉冲电场处理结束后，取出物料，磁力搅拌10min，转速为800rpm，搅拌后8000rpm离心5min，得到上清液一和沉淀一。
(4)将步骤(3)得到的沉淀一采用乙酸乙酯进行浸提，沉淀一和乙酸乙酯的质量比例为1:3，浸提温度为37℃，在磁力搅拌条件下浸提10min，搅拌转速为800rpm；然后8000rpm离心分离5min，减压回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯浸提物和沉淀二。
(5)将沉淀二加入氢氧化钠溶液中，所述沉淀二和氢氧化钠溶液的质量比例为1:8，氢氧化钠溶液的质量浓度为0.08moL/L，温度为37℃，在磁力搅拌条件下溶解20min，搅拌转速为500～800rpm；
碱溶后，8000rpm离心分离5min，得到上清液和沉淀，将沉淀再次采用上述方法进行碱溶，合并上清液，用稀盐酸调节上清液的pH至4.5左右，蛋白沉淀析出。
(6)将步骤(5)中的蛋白质沉淀采用4倍质量的1mol/L磷酸钠缓冲液进行溶解稀释，然后调节pH至中性，采用复合酶进行酶解，所述复合酶是由木瓜蛋白酶和胰蛋白酶组成，酶活力比值为1：2，加酶量为蛋白质质量的0.5％，每克复合酶的酶活力为45万U，在磁力搅拌条件下搅拌40min，搅拌转速为200rpm，酶解结束后，8000rpm离心分离5min，得到上清液二，采用中空纤维超滤膜过滤，膜孔径为3000道尔顿，收集透过液。
(7)合并上清液一、乙酸乙酯浸提物和透过液，然后进行低温减压浓缩，再进行低温干燥后制备得到38.15g固体核桃雄花抗氧化剂，含水量小于5％。
实验例抗氧化活性的研究
样品1-1、2-1、3-1：分别为实施例1、2和3中的上清液一经过浓缩、干燥制备得到的样品，含水量小于5％。
样品1-2、2-2、3-2：分别为实施例1、2和3中的乙酸乙酯浸提物经过浓缩、干燥制备得到的样品，含水量小于5％。
样品1-3、2-3、3-3：分别为实施例1、2和3中的透过液经过浓缩、干燥制备得到的样品，含水量小于5％。
样品1-4、2-4、3-4：分别为实施例1、2和3中的固体核桃雄花抗氧化剂。
阳性对照品：BHT。
DPPH方法
按照文献【刘帅涛等.4种黄酮小分子对DPPH自由基的清除作用及构效关系研究[J].】的方法，测定样品1、样品2、样品3、样品4及阳性对照品在517nm处的吸光度，并计算出对DPPH的清除能力。
ABTS方法
按照文献【Chun S S，Vattem D A，Lin Y T，et al.Phenolic antioxidants fromclonal oregano(Origanum vulgare)with antimicrobial activity againstHelicobacter pylori[J].】的方法，测定样品1、样品2、样品3、样品4及阳性对照品在734nm处的吸光度，并计算出对DPPH的清除能力。
结果如表1所示。
表1不同样品的抗氧化活性
IC50为半数抑制率浓度，即自由基清除率为50％时抗氧化剂样品的浓度，是评价自由基清除剂效果的常用指标，其值越小，抗氧化剂样品的浓度剂量越小，其自由基清除效果越好。由表1可得，样品1-1～3-4均对DPPH和ABTS自由基均具有良好的清除作用，尤其是相比于阳性对照品BHT清除DPPH自由基的能力要显著优异。由表1还可以得出，样品1-1、样品1-2和样品1-3单独使用的效果不如混合后样品1-4清除自由基的效果，说明样品1-1、样品1-2和样品1-3中的活性成分具有协同增效的作用，使得自由基清除效果更加优异。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种核桃雄花提取物的制备方法，其特征是，包括以下步骤：
(1)将核桃雄花序切碎或粉碎；
(2)将制碎的核桃雄花序采用高压脉冲电场技术进行细胞破碎和灭酶处理，处理介质为柠檬酸水溶液或抗坏血酸水溶液或柠檬酸和抗坏血酸的混合水溶液；
(3)高压脉冲电场处理结束后，搅拌条件下维持5～10min，分离，得到上清液一和沉淀一；
(4)将步骤(3)得到的沉淀一采用乙酸乙酯进行浸提，回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯浸提物和沉淀二；
(5)将沉淀二采用碱溶酸沉的方法提取蛋白质；
(6)采用复合酶进行酶解，酶解后分离，得到上清液二，膜过滤，收集透过液；
(7)合并上清液一、乙酸乙酯浸提物和透过液，混合均匀，浓缩、干燥后制备得到核桃雄花提取物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征是，步骤(1)中，制碎后的核桃雄花序小于1毫米。
3.如权利要求1所述的方法，其特征是，步骤(2)中，高压脉冲电场技术参数为：脉冲发生器波形为方波，电场强度为35～60kV/cm，脉冲宽度5～10μs，脉冲频率350～500Hz，作用时间为15～25s；
进一步的，柠檬酸水溶液或抗坏血酸水溶液的质量浓度为0.2～0.4％；柠檬酸和抗坏血酸的混合水溶液中，柠檬酸的质量分数为0.05～0.25％，抗坏血酸的质量分数为0.05～0.25％。
4.如权利要求1所述的方法，其特征是，步骤(3)中，搅拌条件优选为磁力搅拌，转速为500～2000rpm。
5.如权利要求1所述的方法，其特征是，步骤(4)中，沉淀一和乙酸乙酯的质量比例为1:1～5，浸提温度为常温，浸提时间为0.5～1h，若是在搅拌条件下浸提，浸提时间为10～30min，优选磁力搅拌，搅拌转速为500～800rpm。
6.如权利要求1所述的方法，其特征是，步骤(5)中，沉淀二与氢氧化钠溶液的质量比例为1:5～10，氢氧化钠溶液的质量浓度为0.05～0.1moL/L，碱溶温度为常温，碱溶时间为0.5～1h，若是在搅拌条件下碱溶，碱溶时间为10～30min，优选磁力搅拌，搅拌转速为500～800rpm；碱溶后，进行离心分离，得到上清液和沉淀，将沉淀再采用上述方法进行碱溶，合并上清液，用酸调节上清液的pH至4.5，蛋白沉淀析出。
7.如权利要求1所述的方法，其特征是，步骤(6)中，所述复合酶为木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的混合物，木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的酶活力单位比值为1:1～2，酶解pH为7～8，酶解温度为常温，加酶量为蛋白质沉淀质量0.1～0.5％，每克复合酶的酶活力为30万U～50万U，在搅拌条件下的酶解时间为0.5～1h，优选磁力搅拌，搅拌转速为200～800rpm。
8.如权利要求1所述的方法，其特征是，步骤(6)中，膜的孔径为1000～5000道尔顿。
9.权利要求1～8中任一项所述的方法制备得到的核桃雄花提取物。
10.权利要求9所述的核桃雄花提取物在制备抗氧化剂中的应用。
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| CN (1) | CN111616362B (zh) |
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2020
- 2020-06-29 CN CN202010604508.8A patent/CN111616362B/zh active Active
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Also Published As
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