CN111603497A - 一种艾叶提取物及在制备降糖降脂药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种艾叶提取物及在制备降糖降脂药物中的应用，该艾叶提取物通过如下方法制备：称取艾叶粉末，先采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，直至水蒸气蒸馏的流出液无明显油珠为止，再将残渣烘干，用醇溶液提取，收集提取液，减压浓缩干燥得到艾叶提取物。本发明以艾叶提取挥发油后的残渣为原料制成的提取物具有较为优异的α‑葡萄糖苷酶抑制活性和胰脂肪酶抑制活性，因而该提取物具有开发成降糖降脂药物的前景。本发明技术方案以废弃残渣为原料，实现了废物再利用，经济环保。

Description

一种艾叶提取物及在制备降糖降脂药物中的应用

技术领域

本发明属于化学领域，涉及天然提取物及其应用，具体涉及一种艾叶提取物在制备降糖降脂药物中的应用。

背景技术

艾叶为菊科植物艾Artemisia argyi Lévl.Et Vant.的干燥叶入药始载于梁代的《名医别录》，现收载于2015年版《中国药典》，其性辛、温，味苦，归肝、脾、肾经，内服温经止血、散寒止痛，外用祛湿止痒，主要治疗吐血、衄血、崩漏、月经过多、胎漏下血、少腹冷痛、经寒不调、宫冷不孕等。作为一种应用历史悠久、用途广泛的中药材，千百年来艾叶一直备受青睐，许多医学著作都有关于使用艾叶的记载，如马王堆出土的《五十二病方》中就记有艾熏、艾灸的疗法。除药用外，唐代的《食疗本草》中还记录了艾叶的食用，如“春月采嫩艾作菜食，或和面作如弹子”“若患冷气，取熟艾面作混沌，可大如丸子许”。时至今日，在我国南方仍保留有清明节吃艾草青团等习俗。这些古代药用、食用方法的记述为艾叶的现代研究和产品开发奠定了基础。

艾叶富含多种生物活性成分，其中挥发油是艾叶的主要有效成分群，艾叶挥发油含量为1.23％，并且艾叶挥发油已成为当阶段的研究热点。艾叶挥发油具有抗菌、抗炎、消毒驱虫、美白、止血、平嗜、抗过敏、镇嚏、止痒等功效，是食品、香料及化学工业的重要原料。有效的提取方法和工艺是挥发油质量和临床疗效的保证，艾叶挥发油的研究主要从提取工艺的比较及其成分鉴别方面展开，对于艾叶资源的开发利用也具有重要意义。艾叶挥发油的提取方法可分为水蒸汽蒸馏法、微波辅助法、超临界流体萃取法、超声波辅助法、溶剂法、压榨法、半仿生法、活性离子水法、酶法、荷电法等。可以说，艾叶开发中，目前最被重视的就是其中的挥发油，技术手段非常成熟。

在上述现有技术背景下，大量艾叶加工厂只提取艾叶中的挥发油，提取挥发油后的残渣作为废弃物处理，这就造成了极大的资源浪费，也增加了废物处理压力。

如果能够开发出去除挥发油后艾叶残渣的价值，就可以解决上述问题。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种艾叶提取物在制备降糖降脂药物中的应用。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

一种艾叶提取物，通过如下方法制备：称取艾叶粉末，先采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，直至水蒸气蒸馏的流出液无明显油珠为止，再将残渣烘干，用醇溶液提取，收集提取液，减压浓缩干燥得到艾叶提取物。

优选地，所述醇溶液为乙醇水溶液。

优选地，醇溶液中乙醇体积百分浓度为75％。

优选地，醇溶液提取方式为超声提取。

上述任一艾叶提取物在制备降糖药物中的应用。

上述任一艾叶提取物在制备降脂药物中的应用。

有益效果：

本发明以艾叶提取挥发油后的残渣为原料制成的提取物具有较为优异的α-葡萄糖苷酶抑制活性和胰脂肪酶抑制活性，因而该提取物具有开发成降糖降脂药物的前景。本发明技术方案以废弃残渣为原料，实现了废物再利用，经济环保。

附图说明

图1为艾叶提取物对胰脂肪酶的抑制作用的IC₅₀值，湖北蕲春、河北安国、河南南阳的艾叶提取物对胰脂肪酶的半数抑制浓度(IC₅₀)分别为2.81±0.04mg·mL^-1、1.92±0.05mg·mL^-1和2.92±0.03mg·mL^-1，阳性药奥利司他的IC50为0.57±0.01mg·mL^-1，结果提示不同产地的艾叶提取物均表现出较好的胰脂肪酶抑制活性；

图2为艾叶提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用的IC₅₀值，湖北蕲春、河北安国、河南南阳的艾叶提取物对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度(IC₅₀)分别为2.52±0.04mg·mL^-1、12.27±0.04mg·mL^-1和2.84±0.03mg·mL^-1，阳性药阿卡波糖的IC₅₀为1.08±0.02mg·mL^-1，结果提示不同批次不同产地的艾叶提取物均表现出较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性。

具体实施方式

下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

一、实验材料

1、试剂

奥利司他(CAS：96829-58-2)、4-甲基伞形酮油酸酯(CAS：18323-58-5)、胰脂肪酶(CAS：9001-62-1)、阿卡波糖(CAS：56180-94-0)、α-葡萄糖苷酶(CAS：9001-42-7)、对硝苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(CAS：3767-28-0)均购自Sigma-Aldrich公司；超纯水由Milli-Q系统制备；其他化学品均为分析纯。

2、仪器

VICTOR Nivo酶标仪(珀金埃尔默仪器有限公司)；XS205 DU型电子分析天平(梅特勒—托利多仪器有限公司)；高速离心机(德国艾本德股份公司)；干式氮吹仪(上海达洛科学仪器有限公司)；KS-5200B超声波清洗仪(昆山洁立美超声仪器有限公司)。

3、药材

收集了来自湖北蕲春、河北安国、河南南阳的3批艾叶药材。经河北中医学院郑玉光教授鉴定为双子叶植物菊科蒿属植物艾Artemisia argyi Levl.et Vant.的干燥叶。药材标本保存于河北中医学院中药鉴定与炮制教研室。

二、实验方法

1、艾叶提取物的制备

分别精密称取产地为湖北蕲春、河北安国、河南南阳的艾叶药材粉末(过25目筛)100g于5000mL圆底烧瓶，加入2500mL水浸泡2h，采用水蒸气蒸馏法，提取挥发油4h，直至流出液无明显油珠为止。弃去挥发油，药渣烘干后，转移至锥形瓶中，加入加75％乙醇500mL，超声处理30min，滤过，减压回收溶剂，即分别得艾叶提取物(湖北蕲春)、艾叶提取物(河北安国)、艾叶提取物(河南安阳)。

2、胰脂肪酶抑制活性

2.1溶液的配制

胰脂肪酶溶液：将胰脂肪酶溶解于Tris-HCl缓冲液(13mM Tris-HCl，150mM NaCl，1.3mM CaCl₂；pH 8.0)中，得到浓度为1.0mg·mL-1的胰脂肪酶溶液(酶溶液现用现配)。

底物溶液：精密称取适量4-甲基伞形酮油酸酯(4-MUO)，溶于少量二甲基亚砜(DMSO)中，再用Tris-HCl缓冲液稀释配制成0.1mmol·L^-1的4-甲基伞形酮油酸酯底物溶液(反应体系中DMSO的量不超过1％)。

供试品溶液：分别精密称取艾叶提取物(湖北蕲春)、艾叶提取物(河北安国)、艾叶提取物(河南安阳)适量，用Tris-HCl缓冲液稀释成系列浓度的供试品溶液。

2.2胰脂肪酶抑制活性的测定

分别精密吸取25μL的不同浓度的供试品溶液和25μL的胰脂肪酶溶液，在96孔板中混合均匀。37℃孵育10min，再加入50μL的4-甲基伞形酮油酸酯启动反应，20min后，加入100μL柠檬酸钠(0.1moL·L^-1)终止反应。在激发波长为355nm，发射波长为460nm的条件下，用荧光法测定4-甲基伞形酮的量。分别设置样品测定组、样品对照组、酶溶液对照组、空白对照组、阳性对照组(奥利司他)，每组实验重复3次。

按下面方法计算不同样品对胰脂肪酶的抑制率，不同批次艾叶提取物样品分别设置5个不同浓度，分别计算艾叶提取物(湖北蕲春)、艾叶提取物(河北安国)、艾叶提取物(河南安阳)对胰脂肪酶抑制作用的半数抑制浓度(IC₅₀)：

式中：A_xi为样品测定组(25μL酶溶液+25μL样品)；

A_x为样品对照组(25μL缓冲液+25μL样品)；

A_i为酶溶液对照组(25μL缓冲液+25μL酶溶液)；

A₀为空白对照组(50μL缓冲液)。

3、α-葡萄糖苷酶抑制活性

3.1溶液的配制

α-葡萄糖苷酶溶液：取适量将α-葡萄糖苷酶，溶解于磷酸盐缓冲液(pH 6.8)，配得浓度为4U·mL^-1的α-葡萄糖苷酶溶液。

底物溶液：精密称取适量对硝基苯酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)，用混合磷酸盐溶液配制成浓度为2.0mmoL·L-1的对硝基苯酚-α-D-吡喃葡萄糖苷底物溶液。

供试品溶液：分别精密称取艾叶提取物(湖北蕲春)、艾叶提取物(河北安国)、艾叶提取物(河南安阳)适量，用磷酸盐缓冲液稀释成系列浓度的供试品溶液(反应体系DMSO的量不超过1％)。

3.2α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定

精密吸取16μL的不同浓度供试品溶液、60μL的磷酸盐缓冲液和24μL的对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷底物溶液，在96孔板中混合均匀。37℃孵育10min，再加入52μL α-葡萄糖苷酶酶溶液(1U·mL^-1)启动反应。20min后，加入40μL Na₂CO₃(0.2mol·L^-1)以停止反应。于405nm波长下测量对硝基苯酚的量。分别设置样品测定组、样品对照组、酶溶液对照组、空白对照组、阳性对照组(阿卡波糖)，每组实验重复3次。

按下面方法计算不同样品对α-葡萄糖苷酶的抑制率。不同批次艾叶提取物样品分别设置5个不同浓度，分别计算艾叶提取物(湖北蕲春)、艾叶提取物(河北安国)、艾叶提取物(河南安阳)对α-葡萄糖苷酶抑制作用的半数抑制浓度(IC₅₀)：

式中：A_xi为样品测定组(60μL磷酸盐缓冲液+16μL样品+52μL酶溶液)；

A_x为样品对照组(112μL磷酸盐缓冲液+16μL样品)；

A_i为酶溶液对照组(76μL缓冲液+52μL酶溶液)；

A₀为空白对照组(128μL缓冲液)。

4、统计学处理

不同浓度艾叶提取物样品平行测定3次。将不同浓度艾叶提取物的抑制率导入IBMSPSS 25软件，计算半数抑制浓度(IC₅₀)。

三、实验结果

1、胰脂肪酶抑制活性

通过所建立方法测定艾叶提取物(湖北蕲春)、艾叶提取物(河北安国)、艾叶提取物(河南安阳)对胰脂肪酶的抑制作用，由表1和图1可知，湖北蕲春、河北安国、河南南阳的艾叶提取物对胰脂肪酶的半数抑制浓度(IC₅₀)分别为2.81±0.04mg·mL^-1、1.92±0.05mg·mL^-1和2.92±0.03mg·mL^-1，阳性药奥利司他的IC₅₀为0.57±0.01mg·mL^-1，结果提示不同产地的艾叶提取物均表现出较好的胰脂肪酶抑制活性。

表1艾叶提取物对胰脂肪酶的抑制作用

2、α-葡萄糖苷酶抑制活性

通过所建立方法测定不同批次艾叶提取物(湖北蕲春、河北安国、河南南阳)对α-葡萄糖苷酶的抑制作用，由表2和图2可知，湖北蕲春、河北安国、河南南阳的艾叶提取物对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度(IC₅₀)分别为2.52±0.04mg·mL^-1、12.27±0.04mg·mL^-1和2.84±0.03mg·mL^-1，阳性药阿卡波糖的IC₅₀为1.08±0.02mg·mL^-1，结果提示不同批次不同产地的艾叶提取物均表现出较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性。

表2艾叶提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

上述实验结果说明，本发明以艾叶提取挥发油后的残渣为原料制成的提取物具有较为优异的α-葡萄糖苷酶抑制活性和胰脂肪酶抑制活性，因而该提取物具有开发成降糖降脂药物的前景。本发明技术方案以废弃残渣为原料，实现了废物再利用，经济环保。

上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。

Claims (6)

1.一种艾叶提取物，其特征在于，通过如下方法制备：称取艾叶粉末，先采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，直至水蒸气蒸馏的流出液无明显油珠为止，再将残渣烘干，用醇溶液提取，收集提取液，减压浓缩干燥得到艾叶提取物。

2.根据权利要求1所述的艾叶提取物，其特征在于：所述醇溶液为乙醇水溶液。

3.根据权利要求2所述的艾叶提取物，其特征在于：醇溶液中乙醇体积百分浓度为75％。

4.根据权利要求1所述的艾叶提取物，其特征在于：醇溶液提取方式为超声提取。

5.权利要求1～4任一所述艾叶提取物在制备降糖药物中的应用。

6.权利要求1～4任一所述艾叶提取物在制备降脂药物中的应用。

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