CN105418785A

CN105418785A - 一种刺五加多糖的生产方法及其应用

Info

Publication number: CN105418785A
Application number: CN201510986146.2A
Authority: CN
Inventors: 潘景芝; 孟庆龙; 刘雅婧; 陈丽; 任跃英; 崔文玉; 罗威
Original assignee: CHANGCHUN INFECTIOUS DISEASES HOSPITAL
Current assignee: Jilin Teachers Institute of Engineering and Technology
Priority date: 2015-12-25
Filing date: 2015-12-25
Publication date: 2016-03-23
Anticipated expiration: 2035-12-25
Also published as: CN105418785B

Abstract

本发明涉及一种刺五加多糖的生产方法及其应用，具体方法为：原料经过预处理，用水提取，除杂后，通过聚酰胺树脂纯化吸附，合并下柱液以及水洗液浓缩后醇沉，冷冻干燥得到刺五加多糖。本发明还提供了刺五加多糖用于制备治疗结核性胸膜炎药物方面的应用。本发明得到多糖纯度高，操作简单，得率高，适用于工业化大生产，同时该多糖对结核性胸膜炎有较明显的治疗作用。

Description

一种刺五加多糖的生产方法及其应用

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，具体涉及一种刺五加多糖的生产方法及其应用。背景技术

结核性胸膜炎是肺部结核炎症累及胸膜时引起的胸膜炎症，若治疗不及时可导致病情迁延，形成大量纤维蛋白沉积，可使胸膜增厚、粘连、机化，收缩包裹肺脏，使胸廓变形、塌陷，严重影响肺通气功能，并可出现肺部反复感染、咯血等并发症，可致脊柱侧弯，有一定的致残率。

近年来对于尿激酶等纤维蛋白溶解剂治疗结核性胸膜炎的报道日益增多，该疗法对于吸收胸腔积液，减少胸膜厚度与粘连可起到一定的治疗作用，但临床治疗效果却不能令人满意。因此，如何获得一种药物，使其积极有效的治疗结核性胸膜炎已成为广泛关注的热点。

刺五加中主要含有甙类、三萜类、黄酮类、多糖类、氨基酸、有机酸、维生素和矿质元素等多种活性成分，这些活性成分也表现出不同的药理作用。目前，在我国除了中医处方中应用刺五加外，以刺五加为原料的药物种类也相对较多，如刺五加片、刺五加注射液、脑安片、安神补脑胶囊等。

刺五加多糖(Acathopanassenticosuspolysacharides,ASPS)是从刺五加的根及根茎中所提取到的生物活性多糖。迄今为止，国内、外学者已经从剌五加中分离提取出了多种由果糖、葡萄糖、阿拉伯糖组成的多糖组分。刺五加多糖是刺五加活性成分中含量最高且作用最为广泛的功能性因子之一，其具有增强免疫力、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗衰老、降血糖和降血脂等作用，但尚未见关于刺五加多糖对于结核性胸膜炎有治疗作用的报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种刺五加多糖的生产方法及其应用。该方法得到多糖纯度高，操作简单，得率高，适用于工业化大生产，同时该多糖对结核性胸膜炎有较明显的治疗作用。

本发明的目的之一是提供一种刺五加多糖的生产方法，采用下述工艺步骤：

（1）预处理：选取刺五加的根及根茎部分，粗粉碎后得到刺五加粉料，压片，得到刺五加片备用；

（2）提取：所述刺五加片用等质量的水浸泡，水中添加原料质量0.3～5%的蛋白酶，然后用水进行连续逆流萃取，得到萃取液；

萃取条件为：料液质量比1:8～15，萃取温度60～90℃，萃取时间1～5h；

（3）除杂：所述萃取液添加其质量0.3-5%的碱性沉淀剂，低温放置，过滤除杂后，得刺五加多糖净化液；

（4）吸附：所述刺五加多糖净化液通过聚酰胺树脂柱吸附，得到下柱液，然后用1～2BV的水洗脱，得到水洗液，合并下柱液以及水洗液两部分，浓缩得到浓缩液；

（5）精制：所述浓缩液二次醇沉，得到刺五加湿多糖；

（6）干燥：所述刺五加湿多糖冷冻干燥，得到刺五加多糖。

本发明所述步骤（2）中的提取条件为：料液质量比为1:10～14,萃取温度73～82℃，萃取时间2～4h；所述步骤（2）中的碱性沉淀剂为鞣酸或三氯乙酸与等质量氧化钙的混合物。

本发明所述步骤（1）中的粗粉碎指将原料粉碎成2～4cm的块状物，压片厚度为0.2～0.5cm；刺五加的根及根茎的含水量在13wt%以下。

本发明所述步骤（3）中低温放置温度为2～8℃，过滤方式为离心或板式过滤，刺五加多糖净化液应为澄清透明。

本发明所述步骤（6）中的冷冻干燥条件为：-40℃保持不低于3.5h，然后以4～6℃/h的速率逐渐升温-5℃，保温1h，以同样的速率-5～25℃逐渐升温，25℃保温2～6h。

本发明所述步骤（4）中聚酰胺树脂柱吸附量为聚酰胺树脂质量：刺五加原料质量=1：2～6。

本发明所述步骤（4）中浓缩温度在65℃以下，浓缩液相对密度为1.2～1.3。

本发明所述步骤（5）中浓缩液二次醇沉方法为：向浓缩液中添加45%NaOH调pH值为8.5-9.5，添加乙醇至乙醇终浓度为60～70%，放置过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.3～1.35，再次添加乙醇至乙醇终浓度为75～85%，放置过滤，合并两次沉淀物，得到刺五加湿多糖。

本发明所述刺五加多糖含糖大于98%。

本发明的另一目的是提供上述一种刺五加多糖的生产方法得到的刺五加多糖用于制备治疗结核性胸膜炎药物方面的应用，尤其是刺五加多糖用于制备治疗结核性胸膜炎口服药物方面的应用。

本发明所述刺五加多糖含量检测方法为苯酚-硫酸法。

采用上述技术方案所产生的有益效果在于：

1、本发明原料预处理采用压片的方法，避免了原料过分粉碎带来的提取系统过滤过程中的堵塞现象，为工业化大生产提供了可能；

2、本发明应用碱性物质对原料进行浸泡，在加速细胞破壁的同时，对可沉淀的杂质起到前期净化的作用，减轻了后续树脂除杂的负担；

3、本发明应用碱性条件稳定多糖的性质，同时二次浓缩醇沉的步骤，得率高，能耗低，成本小，适合工业化规模生产，多糖含量得率95%以上；

4、本发明冷冻过程中采用梯度升温的冷冻程序，确保冻干产品具有统一的良好的晶型，为刺五加多糖稳定发挥疗效提供了良好的物质基础。

5、本发明生产的刺五加多糖，经实验证明，在治疗结核性胸膜炎方面有显著的疗效，具有较好的药用前景。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。

实施例1

本刺五加多糖的生产方法采用下述具体工艺。

（1）预处理：选取刺五加的根及根茎部分，粗粉碎后得到2～4cm的块状物，压片，厚度为0.2～0.5cm；，得到刺五加片备用；

（2）提取：刺五加片用等质量的水浸泡，水中添加原料质量0.3%的蛋白酶，然后用水进行连续逆流萃取，得到萃取液；

萃取条件为：料液质量比1:8，萃取温度90℃，萃取时间2h；

（3）除杂：萃取液添加其质量0.3%的碱性沉淀剂，2℃低温放置1h，板式过滤除杂后，得澄清透明的刺五加多糖净化液；

碱性沉淀剂为鞣酸与等质量氧化钙的混合物；

（4）吸附：所述刺五加多糖净化液通过聚酰胺树脂柱吸附，吸附量为聚酰胺树脂质量：刺五加原料质量=1：2，得到下柱液，然后用1BV的水洗脱，得到水洗液，合并下柱液以及水洗液两部分，浓缩得到浓缩液，浓缩温度在65℃，浓缩液相对密度为1.2；

（5）精制：向浓缩液中添加45%NaOH调pH值为8.5，添加乙醇至乙醇终浓度为70%，放置过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.3，再次添加乙醇至乙醇终浓度为85%，放置过滤，合并两次沉淀物，得到刺五加湿多糖；

（6）干燥：刺五加湿多糖冷冻干燥，冷冻干燥条件为：-40℃保持3.5h，然后以4℃/h的速率逐渐升温-5℃，保温1h，以同样的速率-5～25℃逐渐升温，25℃保温2h。得到刺五加多糖，含糖98.79%。

实施例2

本刺五加多糖的生产方法采用下述具体工艺。

（2）提取：所述刺五加片用等质量的水浸泡，水中添加原料质量5%的蛋白酶，然后用水进行连续逆流萃取，得到萃取液；

萃取条件为：料液质量比1:15，萃取温度60℃，萃取时间5h；

（3）除杂：所述萃取液添加其质量3%的碱性沉淀剂，8℃低温放置2h，离心除杂后，得澄清透明的刺五加多糖净化液；

碱性沉淀剂为三氯乙酸与等质量氧化钙的混合物；

（4）吸附：所述刺五加多糖净化液通过聚酰胺树脂柱吸附，吸附量为聚酰胺树脂质量：刺五加原料质量=1：6，得到下柱液，然后用2BV的水洗脱，得到水洗液，合并下柱液以及水洗液两部分，浓缩得到浓缩液，浓缩温度在48℃，浓缩液相对密度为1.3；

（5）精制：向浓缩液中添加45%NaOH调pH值为9.5，添加乙醇至乙醇终浓度为60%，放置过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.35，再次添加乙醇至乙醇终浓度为75%，放置过滤，合并两次沉淀物，得到刺五加湿多糖；

（6）干燥：刺五加湿多糖冷冻干燥，冷冻干燥条件为：-40℃保持不低于5h，然后以6℃/h的速率逐渐升温-5℃，保温1h，以同样的速率-5～25℃逐渐升温，25℃保温6h。得到刺五加多糖，含糖99.79%。

实施例3

本刺五加多糖的生产方法采用下述具体工艺。

（2）提取：所述刺五加片用等质量的水浸泡，水中添加原料质量1%的蛋白酶，然后用水进行连续逆流萃取，得到萃取液；

萃取条件为：料液质量比1:10，萃取温度80℃，萃取时间4h；

（3）除杂：所述萃取液添加其质量5%的碱性沉淀剂，5℃低温放置1.5h，离心除杂后，得澄清透明的刺五加多糖净化液；

碱性沉淀剂为鞣酸与等质量氧化钙的混合物；

（4）吸附：所述刺五加多糖净化液通过聚酰胺树脂柱吸附，吸附量为聚酰胺树脂质量：刺五加原料质量=1：4，得到下柱液，然后用1.5BV的水洗脱，得到水洗液，合并下柱液以及水洗液两部分，浓缩得到浓缩液，浓缩温度在50℃，浓缩液相对密度为1.2；

（5）精制：向浓缩液中添加45%NaOH调pH值为9，添加乙醇至乙醇终浓度为65%，放置过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.3，再次添加乙醇至乙醇终浓度为80%，放置过滤，合并两次沉淀物，得到刺五加湿多糖；

（6）干燥：刺五加湿多糖冷冻干燥，冷冻干燥条件为：-40℃保持不低于4h，然后以5℃/h的速率逐渐升温-5℃，保温1h，以同样的速率-5～25℃逐渐升温，25℃保温3h。得到刺五加多糖，含糖99.08%。

实施例4

本刺五加多糖的生产方法采用下述具体工艺。

（2）提取：所述刺五加片用等质量的水浸泡，水中添加原料质量0.3-5%的蛋白酶，然后用水进行连续逆流萃取，得到萃取液；

萃取条件为：料液质量比1:14，萃取温度73℃，萃取时间5h；

（3）除杂：所述萃取液添加其质量1%的碱性沉淀剂，4℃低温放置1h，板式过滤除杂后，得澄清透明刺五加多糖净化液；

碱性沉淀剂为三氯乙酸与等质量氧化钙的混合物；

（4）吸附：所述刺五加多糖净化液通过聚酰胺树脂柱吸附，吸附量为聚酰胺树脂质量：刺五加原料质量=1：3，得到下柱液，然后用2BV的水洗脱，得到水洗液，合并下柱液以及水洗液两部分，浓缩得到浓缩液，浓缩温度在55℃，浓缩液相对密度为1.2；

（5）精制：向浓缩液中添加45%NaOH调pH值为8.8，添加乙醇至乙醇终浓度为68%，放置过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.35，再次添加乙醇至乙醇终浓度为82%，放置过滤，合并两次沉淀物，得到刺五加湿多糖。

（6）干燥：刺五加湿多糖冷冻干燥，冷冻干燥条件为：-40℃保持不低于5h，然后以4℃/h的速率逐渐升温-5℃，保温1h，以同样的速率-5～25℃逐渐升温，25℃保温4h。得到刺五加多糖，含糖98.94%。

实施例5

本刺五加多糖的生产方法采用下述具体工艺。

萃取条件为：料液质量比1:12，萃取温度82℃，萃取时间3h；

（3）除杂：所述萃取液添加其质量0.3-5%的碱性沉淀剂，7℃低温放置1h，板式过滤除杂后，得澄清透明的刺五加多糖净化液；

碱性沉淀剂为三氯乙酸与等质量氧化钙的混合物；

（4）吸附：所述刺五加多糖净化液通过聚酰胺树脂柱吸附，吸附量为聚酰胺树脂质量：刺五加原料质量=1：5，得到下柱液，然后用2BV的水洗脱，得到水洗液，合并下柱液以及水洗液两部分，浓缩得到浓缩液，浓缩温度在52℃，浓缩液相对密度为1.25；

（5）精制：向浓缩液中添加45%NaOH调pH值为9.5，添加乙醇至乙醇终浓度为70%，放置过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.35，再次添加乙醇至乙醇终浓度为80%，放置过滤，合并两次沉淀物，得到刺五加湿多糖；

（6）干燥：所述刺五加湿多糖冷冻干燥，冷冻干燥条件为：-40℃保持不低于6h，然后以6℃/h的速率逐渐升温-5℃，保温1h，以同样的速率-5～25℃逐渐升温，25℃保温5h，得到刺五加多糖，含糖99.51%。

实施例6

取实施例1制得的刺五加多糖500g，加入制备片剂的常规辅料500g，混匀，制成1000片片剂。

实施例7

取实施例1制得的刺五加多糖500g，加入淀粉500g，混匀，用乙醇制粒，干燥，装胶囊，制成1000粒胶囊剂。

实施例8

本实施例选用上述实施例1-5中的刺五加多糖，进行如下实验，旨在证明刺五加多糖在治疗结核性胸膜炎方面的应用。

1.研究方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物：选择8-10周，体重(250±20)g雌性SD大鼠60只。

1.1.2菌株的制备：将标准人性结核菌株H₃₇RV培养于罗氏培养基上，3-4周后，刮取生长较好的菌落，采用电子天平进行称重，研磨，匀浆，再用生理盐水倍比稀释成含菌量为0.03mg/ml的混悬液备用。

1.2分组与处理

采用随机数字法将大鼠分为四组，包括空白组，模型组，尿激酶组，尿激酶+刺五加多糖组，每组15只。将大鼠适应性饲养1周后，模型组，尿激酶组，尿激酶+刺五加多糖组大鼠右侧腹股沟内侧备皮，皮内注射卡介苗悬液0.1ml。5周后行胸腔穿刺术注入结核分枝杆菌混悬液1ml。空白组腔内注入生理盐水1ml,并以第2d能够顺利抽出胸腔积液为建立模型成功。随后尿激酶+多糖组大鼠注入100mg/kg刺五加多糖+600U尿激酶，尿激酶组注入等量的尿激酶，模型组注入等量的生理盐水。分别于注射后第2d、5d和7d分批处死大鼠，每次5只。

1.3评价指标

1.3.1治疗效果：比较分析模型组组、尿激酶组、尿激酶+多糖组大鼠不同时间胸腔积液量和胸膜厚度。

1.3.2血常规和生化指标：比较分析空白组、模型组、尿激酶组、尿激酶+多糖组大鼠不同时间胸腔积液白细胞计数（WBC）、中性粒细胞百分比（NEUT）、淋巴细胞百分比（LYM）、总蛋白质（RT）、葡萄糖（GLU）和乳酸脱氢酶（LDH）水平的变化情况。

1.3.3细胞免疫因子：比较分析空白组、模型组、尿激酶组、尿激酶+多糖组大鼠不同时间胸腔积液可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)、转移生长因子β₁(TGF-β₁)和γ干扰素(IFN-γ)水平的变化情况。

1.4统计学分析

采用SPSS16.0统计学软件，所得数据进行统计学分析，其中计量资料显著性比较采用t检验分析，以P<0.05作为差异有显著性。

2.研究结果

2.1结核性胸膜炎大鼠治疗效果的比较

2.1.1不同时间大鼠胸腔积液量的比较

与模型组相比，注药2d后，尿激酶组和尿激酶+多糖组胸腔积液量显著提高，差异均具有统计学意义（P<0.05-0.01）；而注药7d后，尿激酶组和尿激酶+多糖组胸腔积液量显著降低，差异均具有统计学意义（P<0.05-0.01），结果见表1。由此可见，尿激酶+多糖组降低结核性胸膜炎大鼠胸腔积液的效果最好，尿激酶组效果次之。

表1不同时间结核性胸膜炎大鼠胸腔积液量的比较（X±S，ml）

组别	例数（n）	2d	5d	7d
					模型组	5	4.57±0.71	5.23±0.74	5.86±0.53
尿激酶组	5	5.34±0.66^#	4.96±0.87	3.04±0.57^#
					尿激酶+多糖组	5	6.89±0.82^##	5.38±0.67	2.05±0.44^##

注：与模型组相比，^#表示P＜0.05，^##表示P＜0.01。

2.1.2不同时间大鼠胸膜厚度的比较

与模型组相比，注药2d，5d和7d后，尿激酶组和尿激酶+多糖组胸膜厚度显著降低，差异均具有统计学意义（P<0.05-0.01），结果见表2。由此可见，尿激酶+多糖组降低结核性胸膜炎大鼠胸膜厚度的效果最好，尿激酶组效果次之。

表2不同时间结核性胸膜炎大鼠胸膜厚度的比较（X±S，μm）

组别	例数（n）	2d	5d	7d
					模型组	5	56.76±2.16	264.28±12.42	337.62±19.57
尿激酶组	5	44.82±2.05^#	199.46±13.16^#	258.49±18.15^#
					尿激酶+多糖组	5	39.82±2.13^##	168.57±14.22^##	213.95±20.84^##

注：与模型组相比，^#表示P＜0.05，^##表示P＜0.01。

2.2结核性胸膜炎大鼠不同时间血常规和生化指标的比较

2.2.1注药2d后结核性胸膜炎大鼠血常规和生化指标的比较

与空白组相比，注药2d后，模型组WBC、NEUT和GLU水平明显降低，而LYM和LDH水平明显升高，差异均具有统计学意义（P<0.05）。与模型组相比，注药2d后，尿激酶+多糖组WBC、NEUT和GLU水平明显升高，而LYM和LDH水平明显降低，差异均具有统计学意义（P<0.05）。结果见表3。

表3注药2d后结核性胸膜炎大鼠血常规和生化指标的比较（X±S）

组别

例数（n）

WBC(×10⁹·L^-1)

NEUT

LYM

RT(g·L^-1)

GLU(mmol·L^-1)

LDH (μmol·s^-1·L^-1)

空白组

5

10.71±0.49

0.68±0.07

0.32±0.07

0.50±0.03

5.45±0.41

17.28±1.21

模型组

5

8.56±0.52^*

0.41±0.03^*

0.59±0.04^*

0.51±0.02

4.52±0.37^*

18.59±1.24^*

尿激酶组

5

9.67±0.53

0.54±0.05

0.46±0.06

0.51±0.03

4.94±0.56

18.37±1.34

尿激酶+多糖组

5

10.27±0.62^#

0.62±0.06^#

0.38±0.05^#

0.50±0.04

5.24±0.54^#

17.85±1.33^#

注：与空白组相比，^*表示P＜0.05，^**表示P＜0.01；与模型组相比，^#表示P＜0.05，^##表示P＜0.01。

2.2.2注药5d后结核性胸膜炎大鼠血常规和生化指标的比较

与空白组相比，注药5d后，模型组WBC、NEUT和GLU水平明显降低，而LYM和LDH水平明显升高；尿激酶组WBC和GLU水平明显降低，而LYM水平明显升高，差异均具有统计学意义（P<0.05-0.01）。与模型组相比，注药5d后，尿激酶+多糖组WBC、NEUT和GLU水平明显升高，而LYM和LDH水平明显降低，差异均具有统计学意义（P<0.05-0.01）。结果见表4。

表4注药5d后结核性胸膜炎大鼠血常规和生化指标的比较（X±S）

组别

例数（n）

WBC(×10⁹·L^-1)

NEUT

LYM

RT(g·L^-1)

GLU(mmol·L^-1)

LDH (μmol·s^-1·L^-1)

空白组

5

10.73±0.52

0.67±0.06

0.31±0.05

0.52±0.04

5.51±0.62

17.19±1.18

模型组

5

7.29±0.61^{* *}

0.35±0.04^*

0.74±0.06^*

0.56±0.03

3.86±0.29^{* *}

19.08±1.47^*

尿激酶组

5

8.38±0.64^*

0.48±0.07

0.57±0.04^*

0.54±0.05

4.52±0.49^*

18.75±1.51

尿激酶+多糖组

5

9.46±0.59^##

0.59±0.05^#

0.42±0.06^#

0.53±0.05

5.13±0.42^#

18.07±1.29^#

2.2.3注药7d后结核性胸膜炎大鼠血常规和生化指标的比较

与空白组相比，注药7d后，模型组WBC、NEUT和GLU水平明显降低，而LYM和LDH水平明显升高；尿激酶组WBC水平明显降低，而LYM和LDH水平明显升高，差异均具有统计学意义（P<0.05-0.01）。与模型组相比，注药7d后，尿激酶组WBC和NEUT水平明显升高，而LDH水平明显降低；尿激酶+多糖组WBC、NEUT和GLU水平明显升高，而LYM和LDH水平明显降低，差异均具有统计学意义（P<0.05-0.01）。结果见表5。

表5注药7d后结核性胸膜炎大鼠血常规和生化指标的比较（X±S）

组别

例数（n）

WBC(×10⁹·L^-1)

NEUT

LYM

RT(g·L^-1)

GLU(mmol·L^-1)

LDH (μmol·s^-1·L^-1)

空白组

5

10.75±0.61

0.69±0.08

0.32±0.06

0.53±0.05

5.53±0.38

17.26±1.14

模型组

5

5.38±0.46^{* *}

0.29±0.05^**

0.85±0.05^**

0.57±0.07

3.17±0.24^{* *}

22.56±1.35^**

尿激酶组

5

8.03±0.72^*#

0.46±0.04^#

0.63±0.07^*

0.55±0.06

4.27±0.41^*

20.89±1.48^*#

尿激酶+多糖组

5

9.43±0.49^##

0.56±0.05^#

0.46±0.06^##

0.54±0.03

5.08±0.36^#

19.07±1.58^##

2.3结核性胸膜炎大鼠细胞免疫因子水平的比较

2.3.1注药2d后结核性胸膜炎大鼠细胞免疫因子水平的比较

与对照组相比，注药2d后，模型组和尿激酶组sICAM-1、TGF-β₁和INF-γ水平显著提高，尿激酶+多糖组INF-γ水平显著提高，差异均具有统计学意义（P<0.05-0.01）。与模型组相比，尿激酶组INF-γ水平显著降低，尿激酶+多糖组sICAM-1、TGF-β₁和INF-γ水平显著降低，差异均具有统计学意义（P<0.05-0.01）。结果见表6。

表6注药2d后结核性胸膜炎大鼠细胞免疫因子水平的比较（X±S）

组别	例数（n）	sICAM-1(ng·L^-1)	TGF-β₁(ng·L^-1)	INF-γ(pg·L^-1)
					空白组	5	24.65±3.67	29.68±3.17	37.49±4.02
模型组	5	36.58±3.71^{* *}	40.31±2.89^{* *}	76.39±5.35^{* *}
					尿激酶组	5	32.61±3.18^{* *}	36.26±3.64^{* *}	62.86±5.81^{* *#}
尿激酶+多糖组	5	28.31±3.66^#	34.39±3.72*^#	50.39±5.57^*##

2.3.2注药5d后结核性胸膜炎大鼠细胞免疫因子水平的比较

与对照组相比，注药5d后，模型组和尿激酶组sICAM-1、TGF-β₁和INF-γ水平显著提高，尿激酶+多糖组TGF-β₁和INF-γ水平显著提高，差异均具有统计学意义（P<0.05-0.01）。与模型组相比，尿激酶组TGF-β₁和INF-γ水平显著降低，尿激酶+多糖组sICAM-1、TGF-β₁和INF-γ水平显著降低，差异均具有统计学意义（P<0.05-0.01）。结果见表7。

表7注药5d后结核性胸膜炎大鼠细胞免疫因子水平的比较（X±S）

组别	例数（n）	sICAM-1(ng·L^-1)	TGF-β₁(ng·L^-1)	INF-γ(pg·L^-1)
					空白组	5	25.07±3.85	28.57±3.86	37.69±5.07
模型组	5	40.22±5.38^{* *}	45.28±3.47^{* *}	89.73±7.08^{* *}
					尿激酶组	5	34.27±4.13^{* *}	39.18±4.06^{* *#}	72.64±6.07^{* *#}
尿激酶+多糖组	5	30.49±4.81^##	37.22±4.80^*##	52.87±6.83^**##

2.3.3注药7d后结核性胸膜炎大鼠细胞免疫因子水平的比较

与对照组相比，注药7d后，模型组、尿激酶组和尿激酶+多糖组sICAM-1、TGF-β₁和INF-γ水平显著提高，差异均具有统计学意义（P<0.05-0.01）。与模型组相比，尿激酶组TGF-β₁和INF-γ水平显著降低，尿激酶+多糖组sICAM-1、TGF-β₁和INF-γ水平显著降低，差异均具有统计学意义（P<0.05-0.01）。结果见表8。

表8注药7d后结核性胸膜炎大鼠细胞免疫因子水平的比较（X±S）

组别	例数（n）	sICAM-1(ng·L^-1)	TGF-β₁(ng·L^-1)	INF-γ(pg·L^-1)
					空白组	5	24.89±3.46	29.45±4.29	38.07±3.86
模型组	5	45.36±5.68^{* *}	48.27±5.29^{* *}	104.85±8.43^{* *}
					尿激酶组	5	36.49±5.46^{* *}	40.29±4.31^{* *#}	80.69±6.23^{* *##}
尿激酶+多糖组	5	32.68±4.85^*##	39.96±4.90^**#	59.18±6.37^**##

以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

Claims

1.一种刺五加多糖的生产方法，其特征在于，采用下述工艺步骤：

（5）精制：所述浓缩液二次醇沉，得到刺五加湿多糖；

（6）干燥：所述刺五加湿多糖冷冻干燥，得到刺五加多糖。

2.根据权利要求1所述的一种刺五加多糖的生产方法，其特征在于：所述步骤（2）中的提取条件为：料液质量比为1:10～14，萃取温度73～82℃，萃取时间2～4h；所述步骤（2）中的碱性沉淀剂为鞣酸或三氯乙酸与等质量氧化钙的混合物。

3.根据权利要求1所述的一种刺五加多糖的生产方法，其特征在于：所述步骤（1）中的粗粉碎指将原料粉碎成2～4cm的块状物，压片厚度为0.2～0.5cm；刺五加的根及根茎的含水量在13wt%以下。

4.根据权利要求1所述的一种刺五加多糖的生产方法，其特征在于：所述步骤（3）中低温放置温度为2～8℃，过滤方式为离心或板式过滤，刺五加多糖净化液应为澄清透明。

5.根据权利要求1-4任意一项所述的一种刺五加多糖的生产方法，其特征在于：所述步骤（6）中的冷冻干燥条件为：-40℃保持不低于3.5h，然后以4～6℃/h的速率逐渐升温-5℃，保温1h，以同样的速率-5～25℃逐渐升温，25℃保温2～6h。

6.根据权利要求1-4任意一项所述的一种刺五加多糖的生产方法，其特征在于：所述步骤（4）中聚酰胺树脂柱吸附量为聚酰胺树脂质量：刺五加原料质量=1：2～6。

7.根据权利要求1-4任意一项所述的一种刺五加多糖的生产方法，其特征在于：所述步骤（4）中浓缩温度在65℃以下，浓缩液相对密度为1.2～1.3。

8.根据权利要求1-4任意一项所述的一种刺五加多糖的生产方法，其特征在于：所述步骤（5）中浓缩液二次醇沉方法为：向浓缩液中添加45%NaOH调pH值为8.5-9.5，添加乙醇至乙醇终浓度为60～70%，放置过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.3～1.35，再次添加乙醇至乙醇终浓度为75～85%，放置过滤，合并两次沉淀物，得到刺五加湿多糖。

9.根据权利要求1-4任意一项所述的一种刺五加多糖的生产方法，其特征在于：所述刺五加多糖含糖大于98%。

10.权利要求1-9所述一种刺五加多糖的生产方法得到的刺五加多糖用于制备治疗结核性胸膜炎药物方面的应用。