CN111575408A - 一种石斑鱼虹彩病毒的双重pcr引物、检测方法及试剂盒 - Google Patents

一种石斑鱼虹彩病毒的双重pcr引物、检测方法及试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物，包括GIV‑M病毒引物和GIV‑R病毒引物；其中GIV‑R病毒引物包括SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的反向引物和SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列的正向引物组成；GIV‑R，由SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列的正向引物和SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列的反向引物组成，涉及石斑鱼虹彩病毒技术领域。该石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物、检测方法及试剂盒，通过将存放盒设置为抽拉式，当放置台拉出进行取试管后，且通过配合弹性拉伸组件，可以自动使存放台收回至放置槽内部，不会存在当拿取试管后，忘记关闭试剂盒的情况，且试管的放置和取出操作简单方便。

Description

一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物、检测方法及试剂盒
技术领域
本发明涉及石斑鱼虹彩病毒技术领域，具体为一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物、检测方法及试剂盒。
背景技术
石斑鱼是全球分布的名贵海洋鱼类，具有重要的经济价值。中国是世界上石斑鱼的主产国，自2014年以来的年总产量稳定在10万吨左右(2016年中国渔业统计年鉴)，占世界石斑鱼总产量约60％，产值超过100亿元人民币。但是，随着石斑鱼养殖业的快速发展，病害发生日益频繁，其中，病毒性病害尤为严重，成为限制石斑鱼产业健康发展的瓶颈之一。石斑鱼虹彩病毒(grouperiridovirus，GIV)是石斑鱼养殖中危害严重的一类病原，能够感染30多种石斑鱼，导致严重致死，在过去十年对东南亚各国造成了严重的经济损失。虹彩病毒科共包括五个病毒属，其中对石斑鱼危害较大的主要是肿大细胞病毒属(genusMegalocytivirus)和蛙病毒属(genusRanavirus)，分别简称GIV-M和GIV-R(Maetal.,2012)。GIV-M/R可危害各种规格的石斑鱼，致死率皆可达70％以上。
目前已有一些检测方法如核酸探针、常规PCR、RT-PCR、荧光定量PCR、环介导等温扩增(LAMP)等，这些方法虽然能检测鱼类病毒，但都存在着的缺陷：核酸探针方法检测灵敏度低，低于105拷贝的病毒无法检出，不能满足防控疾病的需求；常规PCR、RT-PCR、荧光定量PCR、环介导等温扩增(LAMP)等方法，因引物相互干扰，各病毒基因的扩增必须在不同的反应管中进行，故通常仅能对一种或几种病毒进行检测，无法对上述多种鱼类病毒同步、快速检测，检测效率低等；
现有试剂通过放置在试管中，并防止在试剂盒中进行存放，但现有的存放盒在使用过程中，拿取试管后，由于一个试剂盒中通常放置有多个试管，经常出现，在拿取试管后，忘记将试剂盒关闭，使试管暴露在外部。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物、检测方法及试剂盒，解决了现有试剂盒在拿取试管后容易忘记关闭试剂盒的问题。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物，包括GIV-M病毒引物和GIV-R病毒引物；
其中GIV-R病毒引物包括SEQID NO：2所示的核苷酸序列的反向引物和SEQID NO：3所示的核苷酸序列的正向引物组成；
GIV-R，由SEQID NO：5所示的核苷酸序列的正向引物和SEQIDNO：6所示的核苷酸序列的反向引物组成。
一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR检测方法，包括以下方法：
S1：从待检样品制备基因组总DNA；
S2：以制备的基因组DNA为模板，利用如权利要求1所述的双重PCR引物，在同一反应体系中进行双重PCR扩增，且反应温度在50-70℃，反应时间15-20min，得到扩增产物；
S3：扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，获得检测结果。
一种石斑鱼虹彩病毒试剂盒，包括存放盒，所述存放盒两侧均开设有存放腔，所述存放腔内表面的两侧均开设有矩形腔，所述存放腔的内部设置有放置组件，所述放置组件包括放置台，所述放置台上对称开设有放置槽，所述存放腔的内部设置有弹性拉伸组件，所述弹性拉伸组件与所述放置台的一侧传动连接，所述放置台的另一侧固定连接有密封板，所述存放盒上且位于所述存放腔的两侧均设置有卡锁组件。
通过设置弹性拉伸组件，当放置台被拉出后，松开放置台后，可以自动收回至存放腔中。
进一步地，所述放置槽的内表面粘接有橡胶圈，所述放置台的顶部且位于所述放置槽的两侧均开设有拿取槽，所述拿取槽的内表面的一侧与所述放置槽的内部连通。
通过在放置槽内表面设置橡胶圈，可以试管放置后更加的稳定，起到缓冲保护的作用，通过设置拿取槽可以方便将试管取出。
进一步地，所述弹性拉伸组件包括连接杆，所述连接杆固定于所述矩形腔内壁的两侧之间，所述连接杆表面的两侧均套设有滑块，所述连接杆的表面且位于两个所述滑块之间套设有弹性件。
进一步地，两个所述滑块的一侧均固定连接有弹性绳，所述弹性绳的一端与所述放置台的一侧固定连接。
进一步地，所述卡锁组件包括支撑轴，所述支撑轴的一端固定连接有连接杆，所述连接杆的表面套设有转动轴，所述转动轴表面的一侧固定连接有限为块。
进一步地，所述密封板上且位于放置台的两侧均粘接有硅胶块，所述密封板的两侧均开设有固定孔；
通过在密封板的两侧粘接硅胶块，可以对当在弹性伸缩组件的作用下密封板与存放盒的撞击时的冲击进行减震，使其更加的稳定，且在固定时通过硅胶块的弹性势能，使密封板与卡锁组件固定更加的稳定。
进一步地，所述固定孔内表面的一侧连通有限位槽，所述密封板上开设有连接孔，所述连接孔与所述固定孔的内部连通。
进一步地，所述密封板的一侧固定连接有带动柄，所述存放盒的顶部固定连接有把手。
通过设置把手，方便携带存放盒。
(三)有益效果
本发明具有以下有益效果：
该石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物、检测方法及试剂盒，通过将存放盒设置为抽拉式，当放置台拉出进行取试管后，且通过配合弹性拉伸组件，可以自动使存放台收回至放置槽内部，不会存在当拿取试管后，忘记关闭试剂盒的情况，且试管的放置和取出操作简单方便。
当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
附图说明
图1为本发明试剂盒的剖视图；
图2为本发明试剂盒的正视图；
图3为本发明图1中A部的放大图；
图中，1-存放盒、2-存放腔、3-矩形腔、4-放置组件、41-放置台、42-放置槽、43-橡胶圈、44-拿取槽、5-弹性拉伸组件、51-连接杆、52-滑块、53-弹性件、54-弹性绳、6-密封板、7-带动柄、8-固定孔、9-卡锁组件、91-支撑轴、92-连接杆、93-转动轴、94-限位块、10-连接孔、11-限位槽、12-硅胶块、13-把手。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“开孔”、“上”、“下”、“厚度”、“顶”、“中”、“长度”、“内”、“四周”等指示方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的组件或元件必须具有特定的方位，以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
请参阅图1-3，本发明实施例提供一种技术方案：一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物，包括GIV-M病毒引物和GIV-R病毒引物；
其中GIV-R病毒引物包括SEQID NO：2所示的核苷酸序列的反向引物和SEQID NO：3所示的核苷酸序列的正向引物组成；
GIV-R，由SEQID NO：5所示的核苷酸序列的正向引物和SEQIDNO：6所示的核苷酸序列的反向引物组成。
一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR检测方法，包括以下方法：
S1：从待检样品制备基因组总DNA；
S2：以制备的基因组DNA为模板，利用如权利要求1所述的双重PCR引物，在同一反应体系中进行双重PCR扩增，且反应温度在50-70℃，反应时间15-20min，得到扩增产物；
S3：扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，获得检测结果。
一种石斑鱼虹彩病毒试剂盒，包括存放盒1，所述存放盒1两侧均开设有存放腔2，所述存放腔2内表面的两侧均开设有矩形腔3，所述存放腔2的内部设置有放置组件4，所述放置组件4包括放置台41，所述放置台41上对称开设有放置槽42，所述存放腔2的内部设置有弹性拉伸组件5，所述弹性拉伸组件5与所述放置台41的一侧传动连接，所述放置台41的另一侧固定连接有密封板6，所述存放盒1上且位于所述存放腔2的两侧均设置有卡锁组件9。
存放腔2的数量优选设置有八个，且对称设置在存放盒1的两侧，其中矩形腔3位于存放腔2一侧的中间，每个放置台41上设置有两个放置槽42。
所述放置槽42的内表面粘接有橡胶圈43，所述放置台41的顶部且位于所述放置槽42的两侧均开设有拿取槽44，所述拿取槽44的内表面的一侧与所述放置槽42的内部连通；
放置台41的底部与存放腔2内壁的底部滑动连接，放置台41底部的两侧均固定连接有矩形滑条，存放腔2内壁的底部对应开设有条形滑槽，拿取槽的深度在2-3厘米，试管放置在存放腔2内部后顶部位于存放腔2内部。
所述弹性拉伸组件5包括滑杆51，所述滑杆51固定于所述矩形腔3内壁的两侧之间，所述滑杆51表面的两侧均套设有滑块52，所述滑杆51的表面且位于两个所述滑块52之间套设有弹性件53。
滑块52与滑杆51的表面滑动连接。
两个所述滑块52的一侧均固定连接有弹性绳54，所述弹性绳54的一端与所述放置台41的一侧固定连接。
滑块52和放置台41的一侧均设置固定环，弹性绳54的两端分别与两个固定环固定连接。
所述卡锁组件9包括支撑轴91，所述支撑轴91的一端固定连接有连接杆92，所述连接杆92的表面套设有转动轴93，所述转动轴93表面的一侧固定连接有限为块94。
转动轴93相对连接杆92可以轴向转动，连接杆92的端部固定连接有挡块，挡块直径大于转动轴93孔径小于转动轴93的外直径。
所述密封板6上且位于放置台41的两侧均粘接有硅胶块12，所述密封板6的两侧均开设有固定孔8；
固定孔8的孔径与转动轴93的直径相适配。
所述固定孔8内表面的一侧连通有限位槽11，所述密封板6上开设有连接孔10，所述连接孔10与所述固定孔8的内部连通。
连接孔10位贯穿密封板6的孔，限位槽11不是贯穿的孔，连接孔10和限位槽11的大小与限位块94相适配。
所述密封板6的一侧固定连接有带动柄7，所述存放盒1的顶部固定连接有把手13。
使用原理：在拿取或者放置试管时，首先，按压密封板6，使其压缩硅胶块12，限位块94移出限位槽11，然后转动转动轴93，使其上的限位块94移动至与连接孔10位置对应；
通过带动柄7带动密封板6，带动放置台41向外侧移动，同时，放置台41的一侧通过弹性绳54拉动两个滑块52沿滑杆51移动并压缩弹性件53，当位于放置台41内侧的放置槽42拉出存放腔2时，弹性绳54自身被拉伸，此时可以拿出位于放置槽42内部的试管，拿取时可以将手指放置到两个拿取槽44内部，将试管拿出；
当松开带动柄7时，通过弹性绳54以及弹性件53的作用，弹性件53推动两个滑块52向两侧移动，从而带动放置台41向放置槽42内侧移动，且密封板6上的固定孔8以及连接孔10分别转动轴93与限位块94位置对应，错过，且通过密封板6两侧的硅胶块12，可以对密封板6与存放盒1的撞击时的冲击进行减震，使其更加的稳定；
然后按压密封板6，使其压缩硅胶垫12，使限位块94完全移出连接孔10，然后转动转动轴93，使限位块94与限位槽11位置对应，松开密封块6，通过硅胶块12的作用使限位块94位于限位槽11内部，使其限位更加的稳定；
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。

Claims (10)

1.一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR引物，其特征在于：包括GIV-M病毒引物和GIV-R病毒引物；
其中GIV-R病毒引物包括SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的反向引物和SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列的正向引物组成；
GIV-R，由SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列的正向引物和SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列的反向引物组成。
2.一种石斑鱼虹彩病毒的双重PCR检测方法，其特征在于：包括以下方法：
S1：从待检样品制备基因组总DNA；
S2：以制备的基因组DNA为模板，利用如权利要求1所述的双重PCR引物，在同一反应体系中进行双重PCR扩增，且反应温度在50-70℃，反应时间15-20min，得到扩增产物；
S3：扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，获得检测结果。
3.一种石斑鱼虹彩病毒试剂盒，其特征在于：包括存放盒(1)，所述存放盒(1)两侧均开设有存放腔(2)，所述存放腔(2)内表面的两侧均开设有矩形腔(3)，所述存放腔(2)的内部设置有放置组件(4)，所述放置组件(4)包括放置台(41)，所述放置台(41)上对称开设有放置槽(42)，所述存放腔(2)的内部设置有弹性拉伸组件(5)，所述弹性拉伸组件(5)与所述放置台(41)的一侧传动连接，所述放置台(41)的另一侧固定连接有密封板(6)，所述存放盒(1)上且位于所述存放腔(2)的两侧均设置有卡锁组件(9)。
4.根据权利要求3所述的一种石斑鱼虹彩病毒试剂盒，其特征在于：所述放置槽(42)的内表面粘接有橡胶圈(43)，所述放置台(1)的顶部且位于所述放置槽(42)的两侧均开设有拿取槽(44)，所述拿取槽(44)的内表面的一侧与所述放置槽(42)的内部连通。
5.根据权利要求3所述的一种石斑鱼虹彩病毒试剂盒，其特征在于：所述弹性拉伸组件(5)包括连接杆(51)，所述连接杆(51)固定于所述矩形腔(3)内壁的两侧之间，所述连接杆(51)表面的两侧均套设有滑块(52)，所述连接杆(51)的表面且位于两个所述滑块(52)之间套设有弹性件(53)。
6.根据权利要求5所述的一种石斑鱼虹彩病毒试剂盒，其特征在于：两个所述滑块(52)的一侧均固定连接有弹性绳(54)，所述弹性绳(54)的一端与所述放置台(41)的一侧固定连接。
7.根据权利要求3所述的一种石斑鱼虹彩病毒试剂盒，其特征在于：所述卡锁组件(9)包括支撑轴(91)，所述支撑轴(91)的一端固定连接有连接杆(92)，所述连接杆(92)的表面套设有转动轴(93)，所述转动轴(93)表面的一侧固定连接有限为块(94)。
8.根据权利要求3所述的一种石斑鱼虹彩病毒试剂盒，其特征在于：所述密封板(6)上且位于放置台(41)的两侧均粘接有硅胶块(12)，所述密封板(6)的两侧均开设有固定孔(8)。
9.根据权利要求8所述的一种石斑鱼虹彩病毒试剂盒，其特征在于：所述固定孔(8)内表面的一侧连通有限位槽(11)，所述密封板(6)上开设有连接孔(10)，所述连接孔(10)与所述固定孔(8)的内部连通。
10.根据权利要求3所述的一种石斑鱼虹彩病毒试剂盒，其特征在于：所述密封板(6)的一侧固定连接有带动柄(7)，所述存放盒(1)的顶部固定连接有把手(13)。
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