CN111567809A - 具有提高免疫力和调节肠道功能的动物双歧杆菌bz11复合菌剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及微生物制剂技术领域，具体公开了具有提高免疫力和调节肠道功能的动物双歧杆菌BZ11复合菌剂。本发明的复合菌剂包括动物双歧杆菌BZ11和益生元；所述动物双歧杆菌BZ11的保藏编号为CGMCC NO.10224。本发明提供了动物双歧杆菌BZ11的一种新用途，将其与益生元，或与益生元复配可显著提高机体免疫力，提高淋巴细胞的增殖能力及NK细胞活性，而对于免疫过激者可控制、减缓或消除过敏反应，该组方可还可以增加肠道中双歧杆菌的数量，起到调节肠道菌群平衡的作用，进一步改善肠道功能。

Description

具有提高免疫力和调节肠道功能的动物双歧杆菌BZ11复合 菌剂

技术领域

本发明涉及微生物制剂技术领域，具体公开了具有提高免疫力和调节肠道功能的动物双歧杆菌BZ11复合菌剂。

背景技术

人体免疫力是机体对抗外来物质的“武器”，如果武器没有充足的弹药，那么免疫平衡就会被打破，需要提升免疫力，避免造成机体伤害。相反，如果免疫力过度提高，消灭外来物质的同时，存在误伤机体细胞行为，同样也会造成机体损伤。因为人群体质因素千差万别，所以人体免疫力改善关键是机体免疫力的平衡，而不是一味的提升机体免疫力。益生菌被广泛应用于提高免疫产品，然而提高免疫力效果未得到消费者的认可，究其原因是没有考虑菌种间的协同与抑制，菌种间的这种关系影响因素包括菌种的类别、种别及菌种的配比。

动物双歧杆菌BZ11为保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.10224，其已公开于中国专利CN104531590B中。该菌株BZ11具有降低胆固醇能力高，耐酸受性、耐胆盐、耐氧性能好等益生特性，作为益生菌BZ11具有很好的应用前景。但关于动物双歧杆菌BZ11是否还有其他益生功能，以及该菌与其他益生菌、益生元复配是否能产生更广泛的益生功能，还未可知。探索和扩展已知益生菌的新功能，通过菌株复配的方式寻找在提高免疫力方面协同增效作用佳、生物学功能获得拓展的复合菌剂有利于造福动物和人类健康。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高受体免疫力、调节肠道功能且表现优异的协同增效作用的菌剂。

本发明的另一目的在于提供具有上述功效的菌剂的制备方法及其应用。

本发明提供的一种复合菌剂，包括动物双歧杆菌BZ11和益生元；所述动物双歧杆菌BZ11的保藏编号为CGMCC NO.10224。其已公开于中国专利CN104531590B中，该专利公开的BZ11菌株降低胆固醇能力高，具有耐酸受性、耐胆盐、耐氧性能好等特点。

益生元是指一些不被宿主消化吸收，却能够选择性地促进体内有益菌的代谢和增殖，刺激消化系统中益生菌的生长或活化，从而改善宿主健康的有机物质。益生元普遍属于糖类，例如寡糖。常见的益生质在营养学上被归类为水溶性纤维。理论上，任何可以减少有害菌种，而有益于促进健康的菌种或活动的抗生素都可以叫做益生元。由于益生元不能被人体分解、吸收和利用，通过消化道到达结肠后，有的能被结肠群分解和利用，而促进结肠菌群的生长，在改善肠道微生态、促进脂质、蛋白质与矿物类代谢方面具有重要意义，所以愈来愈广泛地被应用于食品、饲料等领域中。益生元应具备以下条件：在胃肠道的上部它既不能被水解，也不能被吸收；只能选择性地对大肠内有益菌(双歧杆菌等)进行刺激生长繁殖或激活代谢功能作用；能够提高肠内有益于健康的优势菌群的构成和数量；能起到增强宿主机体健康的作用。

常用的益生元有低聚糖类，包括低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、大豆低聚糖、菊粉等，有些微藻类也可作为益生元，如螺旋藻、节旋藻等，此外多糖(如云芝多糖,胡萝含氮多糖，水苏糖、聚葡萄糖)、蛋白质水解物(如酪蛋白的水解物,α-乳清蛋白,乳铁蛋白等)以及天然植物中的蔬菜、中草药、野生植物等也能作为益生元使用。

本发明所述益生元为低聚果糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、大豆低聚糖、抗性糊精、菊粉、水苏糖、聚葡萄糖、云芝多糖、螺旋藻、节旋藻、α-乳清蛋白、乳铁蛋白中的一种或多种。

本发明提供的双歧杆菌BZ11复合菌剂中，所述动物双歧杆菌BZ11的质量份为10-90份，所述益生元的质量份为10-90份。

优选地，所述动物双歧杆菌BZ11的质量份为10-90份，所述益生元的质量份为10-60份。

更优选地，所述动物双歧杆菌BZ11的质量份为10-60份，所述益生元的质量份为10-50份。

本发明发现，将动物双歧杆菌BZ11与益生元组配，例如与低聚果糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖，能显著增加淋巴细胞增殖能力和NK细胞活性，还能显著地增加肠道中双歧杆菌、乳杆菌的数量，起到调节肠道菌群平衡的作用，进一步改善肠道功能。这是本发明做出的第一个贡献，即发现动物双歧杆菌BZ11与益生元组配能够增加受体淋巴细胞增殖能力和NK细胞活性，能增加动物肠道内益生菌的数量，具体而言是增加了双歧杆菌和乳杆菌的数量，菌群前后自身比较t值分别为2.65和2.33。本发明的第二个贡献在于，本发明的动物双歧杆菌BZ11与益生元组配对于免疫过激者可控制、减缓或消除过敏反应。

双歧杆菌是一种重要的肠道有益微生物。双歧杆菌作为一种生理性有益菌，对人体健康具有生物屏障、营养作用、抗肿瘤作用、免疫调节作用、改善胃肠道功能、抗衰老等多种重要的生理功能。其免疫调节的作用主要通过对肠道黏膜的刺激，激活肠道黏膜的免疫系统，使其产生抗体、细胞因子，进而更好地提高肠道黏膜的免疫、抗感染能力。

本发明意外地发现，将动物双歧杆菌BZ11、益生元按照特定的用量复配后制成复合菌剂，在增强受体免疫力和肠道功能方面表现出显著的协同增效作用，并且对于少数免疫过激者可控制、减缓或消除过敏反应。

本发明提供的复合菌剂，包括以下重量份的原料：

动物双歧杆菌BZ11 10-90份

益生元 10-60份。

本发明提供的复合菌剂，包括以下重量份的原料：

动物双歧杆菌BZ11 10-60份

益生元 10-50份。

本发明提供的复合菌剂，包括以下重量份的原料：

动物双歧杆菌BZ11 10-40份

益生元 10-40份。

优选地，本发明提供的复合菌剂，包括以下重量份的原料：

动物双歧杆菌BZ11 12-30份

益生元 10-40份。

更优选地，本发明提供的复合菌剂，包括以下重量份的原料：

动物双歧杆菌BZ11 15-30份

益生元 10-40份。

最优选地，本发明提供的复合菌剂，包括以下重量份的原料：

动物双歧杆菌BZ11 15-30份

益生元 10-40份。

本发明所述的动物双歧杆菌BZ11原料为菌粉或菌剂，菌粉或菌剂中含有的有效活菌数为7.56×10¹⁴cfu/g

本发明提供了上述复合菌剂的制备方法，将菌粉或菌剂与益生元梯度复配，后加入二氧化硅混合均匀。

上述复合菌剂可作为医药、食品及饮料的原料，或可制备成散剂、片剂、冻干粉剂、胶囊或冲剂等。具体制备方法可采用常规方法进行。

本发明提供一种产品，述产品含有本发明上述任一种复配方式的所述复合菌剂；所述产品为药物、食品或保健品。

所述产品能够调节肠道菌群和/或增强机体免疫力。

本发明进一步提供了上述复合菌剂或所述的制备方法制得的复合菌剂的以下任一种或多种用途：

(1)在制备提高免疫力的药物、食品或保健品中的应用；

(2)在制备调节肠道功能的药物、食品或保健品中的应用；

(3)制备在控制、减缓或者消除机体免疫过激的药物、食品或保健品中的应用

(4)在制备提高受体淋巴细胞增殖能力的药物、食品或保健品中的应用；

(5)在制备提高受体NK细胞活性的药物、食品或保健品中的应用；

(6)在制备增加肠道中双歧杆菌和/或乳杆菌数量的药物、食品或保健品中的应用；

(7)在提高受体淋巴细胞的增殖能力中的应用；

(8)在增强受体NK细胞活性中的应用；

(9)在增加肠道中双歧杆菌和/或乳杆菌数量中的应用。

本发明的有益效果至少在于：菌种间的协同与抑制在提高免疫力功能上发挥重要作用，菌种间的这种关系影响因素包括菌种的类别与菌种的配比。本发明提供了动物双歧杆菌BZ11的一种新用途，将其与益生元复配可显著提高机体免疫力，提高淋巴细胞的增殖能力及NK细胞活性，增加肠道中双歧杆菌和乳杆菌的数量，起到调节肠道菌群平衡的作用，进一步改善肠道功能，另外本发明还发现动物双歧杆菌BZ11与益生元的复合菌剂可控制、减缓或消除免疫过激者的过敏反应。本发明的复合菌剂安全性良好，无毒副作用，淋巴细胞的增殖能力、NK细胞活性表现出协同增效的优异效果，可用于医药、食品、保健品及饮料的原料，应用价值巨大。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。保藏编号为CGMCCNO.10224的动物双歧杆菌BZ11公开于专利文献CN104531590B中，由专利权人贵州大学将该动物双歧杆菌BZ11转让于本申请的申请人。

实施例1

动物双歧杆菌BZ11 30份

菊粉 15份

低聚果糖 20份

制备方法：取上述菌粉与菊粉梯度混合，再加入适量二氧化硅混合均匀制得复合菌剂。

实施例2

动物双歧杆菌BZ11 30份

菊粉 10份

低聚果糖 20份

制备方法同实施例1。

实施例3

动物双歧杆菌BZ11 30份

低聚果糖 35份

制备方法同实施例1。

实施例4

动物双歧杆菌BZ11 10份

菊粉 80份

制备方法同实施例1.

对比例1

动物双歧杆菌BZ11 30份

菊粉 15份

低聚木糖 20份

制备方法同实施例1。

对比例2单独使用BZ11的菌剂

动物双歧杆菌BZ11 30份

制备方法同实施例1。

对比例3乳杆菌替换BZ11

乳杆菌 30份

菊粉 15份

低聚果糖 20份

制备方法同实施例1。

对比例4在实施例1的基础上增加乳杆菌

制备方法同实施例1。

对比例5单独用益生元

菊粉 15份

低聚果糖 35份

制备方法同实施例1。

对比例6其他双歧杆菌A+益生元的配比

动物双歧杆菌BZ25 30份

菊粉 15份

低聚果糖 20份

该动物双歧杆菌BZ25为专利菌株，保藏编号：CGMCC No.10225，该菌株已公开于中国专利CN104560829B中。

对比例7其他双歧杆菌A+益生元的配比

动物双歧杆菌 30份

菊粉 15份

低聚果糖 20份

该动物双歧杆菌购于市场普通菌株。

实验例1增强免疫力功效实验

1、实验样品

实施例1-4及对比例1-7制备的组合物。空白对照组为不投喂任何菌剂，仅正常喂食饲料的处置组。实施例1-4，对比例1-7除了按相同记录投喂菌剂外，还与空白对照组一样饲喂正常饲料。

动物：20±2g昆明种，健康雌性小鼠120只。随机分为12组，每组10只，饲喂30天。

2、实验方法

依据卫生部颁布《保健食品检验与评价技术规范(2003年版)》中增强免疫力实验。喂食剂量按照2.8mg/kg·bw，cfu/g＞10⁶。饲喂30天。

3、实验结果

3.1对小鼠淋巴细胞转化的影响结果见表1。检测方法依据《保健食品检验与评价技术规范》，其中测光密度值使用的是分光光度计。每组内每个实验小鼠的数据差异不显著，表1数据为组内10只小鼠实验数据取平均值后的数值。

表1

组别	光密度差值
		空白对照组	1.34±0.07
实施例1	2.18±0.02*
		实施例2	2.15±0.03*
实施例3	2.10±0.08*
		实施例4	2.05±0.05*
对比例1	2.07±0.06*
		对比例2	1.98±0.07*
对比例3	1.77±0.03*
		对比例4	2.01±0.09*
对比例5	1.74±0.05*
		对比例6	1.89±0.07*
对比例7	1.85±0.05*

注：实施例1-4、对比例1-5与空白对照组相比，*P＜0.05。

3.2对小鼠NK细胞活性的影响结果见表2。

表2 NK细胞活性的测定

注：实施例1-4、对比例1-7与空白对照组相比，*P＜0.05。

表1、表2结果表明，各实施例组及对比例组均可显著提高正常小鼠淋巴细胞增殖能力及NK细胞活性，且实施例1-4、对比例1、2、4的效果显著高于对比例3，表明本发明含有BZ11菌粉的菌剂组合物相比于含其他双歧杆菌菌粉的菌剂组合物，在提高淋巴细胞的增殖能力、增强NK细胞活性方面表现出优异的作用，实施例1-4、对比例1、2、4的效果显著优于对比例6、7，表明BZ11和益生菌复配的菌粉对提高免疫力方面的效果显著优于其他种类的双歧杆菌菌剂组合物。同时，实施例1-4、对比例1、4的效果显著高于对比例2，表明本发明含有益生元的菌粉制剂相比于不含益生元的菌粉制剂，在提高淋巴细胞的增殖能力、增强NK细胞活性方面具有较好的作用，因此益生元在本发明所述的菌剂中起到了较好的促进作用。

实施例1-4、对比例1-7的实验结果充分说明动物双歧杆菌BZ11与益生元在调节免疫力方面具有意料不到的协同增效作用。

实验例2BZ11复合菌粉对调节免疫过激反应的效果实验

1.实验样品

诊断为过敏性皮炎的女性患者。本申请制得的BZ11菌粉。普通双歧杆菌和益生元复配的菌剂。

2.试验方法

过敏性皮炎患者24人，分为4组，每组6人，分为空白对照组、阳性对照组、实验组1、实验组2。空白对照组为不服用任何药物，阳性对照组为遵照医嘱服用抗过敏药物，实验组1服用本申请所述的BZ11菌粉固体饮料，实验组2服用其他市售双歧杆菌与益生菌复配的菌粉制剂。连续服用8周，服用剂量为菌粉制剂固体饮料50g每天。

3.实验结果

表3

组别	没有效果	有一些效果	效果显著
				空白对照组	6	0	0
阳性对照组	0	1	5
				实验组1	0	2	4
实验组2	1	4	1

由表3可知，本申请制备的菌剂对过敏性皮炎的临床患者评价效果几乎与阳性对照组持平，而采用其他市售普通双歧杆菌制得的菌剂对这种过敏性皮炎几乎没什么效果，因此可以得出动物双歧杆菌BZ11菌粉对于治疗调节过敏性皮炎有较好效果。

过敏性皮炎为集体变态的免疫过激反应，因此可以得出BZ11菌粉对这种免疫过激反应存在一定的抑制机制，能起到控制、缓解或者消除免疫过激反应。

实验例3复合菌剂对肠道菌群的调节效果实验

1、实验样品

同实验例1。

2、实验方法

动物：20±2g昆明种，健康雌性小鼠100只。随机分为10组，每组10只。

实施例组及对照组分别给予以上实验样品，每日给予受试物灌胃28mg/(kg·bw)，cfu/g＞10⁶，给样量根据每周体重增减调整，连续灌胃14d。

空白对照组灌服无菌纯净水。所有组均正常饲喂饲料。根据空白对照组、实施例1-4，对比例1-5设置分组，并给予相应的复合菌剂。在给予受试物之前和末次给予受试物后24h，每组均无菌采取所有小鼠粪便，置已称重的装有玻璃珠的干燥灭菌小试管中，称重，计算出小鼠粪便量，用已灭菌稀释液稀释，制成均匀悬液，再稀释至适当的稀释度，分别接种在培养基上，按照要求进行培养。培养后，计算每克湿便中的菌数，取对数后进行统计处理。比较试验前后自身双歧杆菌、乳杆菌、肠杆菌、肠球菌、拟杆菌、产气荚膜梭菌的变化情况。

3、实验结果

对小鼠体重的影响及小鼠肠道菌群的影响分别见表3及表4。

表4：对小鼠体重的影响

组别	初始体重(g)	最终体重(g)	P值
				空白对照组	20.35±0.13	40.32±0.73	＞0.05
实施例1	20.43±0.04	40.11±0.32	＞0.05
				实施例2	20.34±0.21	40.43±0.45	＞0.05
实施例3	20.44±0.12	40.85±0.24	＞0.05
				实施例4	20.23±0.14	40.34±0.12	＞0.05
对比例1	20.32±0.17	40.53±0.54	＞0.05
				对比例2	20.45±0.11	40.41±0.17	＞0.05
对比例3	20.33±0.21	40.35±0.46	＞0.05
				对比例4	20.19±0.13	40.36±0.82	＞0.05
对比例5	20.21±0.11	40.45±0.17	＞0.05
				对比例6	20.44±0.21	40.57±0.54	>0.05
对比例7	20.21±0.14	40.16±0.24	>0.05

由表3可见，各实验组试验前后体重与空白对照组体重比较，差异均不显著，表明受试物对小鼠的体重无明显影响。

表5：对小鼠肠道菌群的影响(菌群前后自身比较t值)

注：与空白对照组相比，◇代表P＞0.05，*代表P＜0.05

由表4可知，经口给予受试物前后，实施例1-4组双歧杆菌和乳杆菌的数量增加较为明显，差异有显著性(*P＜0.05)；肠杆菌、肠球菌、拟杆菌和产气荚膜梭菌的数量变化值差异均无显著性(P＞0.05)。结果表明，本发明保健食品具有调节肠道菌群平衡的作用。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种动物双歧杆菌BZ11复合菌剂，其特征在于，包括动物双歧杆菌BZ11和益生元；所述动物双歧杆菌BZ11的保藏编号为CGMCC NO.10224。

2.根据权利要求1所述的双歧杆菌BZ11复合菌剂，其特征在于，所述动物双歧杆菌BZ11的质量份为10-90份，所述益生元的质量份为10-90份。

3.根据权利要求1-2任一所述的双歧杆菌BZ11复合菌剂，其特征在于，包括以下重量份的原料：

动物双歧杆菌BZ11 10-90份

益生元 10-60份。

4.根据权利要求3所述的双歧杆菌BZ11复合菌剂，其特征在于，包括以下重量份的原料：

动物双歧杆菌BZ11 10-60份

益生元 10-50份。

5.根据权利要求3所述的双歧杆菌BZ11复合菌剂，其特征在于，包括以下重量份的原料：

动物双歧杆菌BZ11 10-40份

益生元 10-40份。

6.根据权利要求3所述的双歧杆菌BZ11复合菌剂，其特征在于，包括以下重量份的原料：

动物双歧杆菌BZ11 12-30份

益生元 10-40份。

7.根据权利要求1-6任一所述的双歧杆菌BZ11复合菌剂，其特征在于，所述益生元为低聚果糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、大豆低聚糖、抗性糊精、菊粉、水苏糖、聚葡萄糖、云芝多糖、螺旋藻、节旋藻、α-乳清蛋白、乳铁蛋白中的一种或多种。

8.根据权利要求1-7任一所述的双歧杆菌BZ11复合菌剂的制备方法，其特征在于，将菌粉或菌剂与益生元复配，后加入二氧化硅混合均匀。

9.一种产品，其特征在于，所述产品含有权利要求1-7任一项所述的双歧杆菌BZ11复合菌剂；所述产品为药物、食品或保健品。

10.根据权利要求1-7任一所述的复合菌剂或权利要求8所述的制备方法制得的双歧杆菌BZ11复合菌剂的以下任一种用途：

(1)在制备提高免疫力的药物、食品或保健品中的应用；

(2)在制备调节肠道功能的药物、食品或保健品中的应用；

(3)制备在控制、减缓或者消除机体免疫过激的药物、食品或保健品中的应用；

(4)在制备提高受体淋巴细胞增殖能力的药物、食品或保健品中的应用；

(5)在制备提高受体NK细胞活性的药物、食品或保健品中的应用；

(6)在制备增加肠道中双歧杆菌和/或乳杆菌数量的药物、食品或保健品中的应用；

(7)在提高受体淋巴细胞的增殖能力中的应用；

(8)在增强受体NK细胞活性中的应用；

(9)在增加肠道中双歧杆菌和/或乳杆菌数量中的应用。