CN111562390B - 一种神经精神性狼疮的诊断标志物及其检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及神经精神性狼疮的诊断标志物及其检测试剂盒，具体是涉及21种代谢物(L‑天冬酰胺、肾上腺素、胍基乙酸、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α‑D‑葡萄糖、肌氨酸、月桂酸乙酯、2‑乙酰基呋喃、1，3‑二异丙基苯、正辛醛、萘、反式‑2‑辛烯‑1‑醇、β‑氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮、二氢茉莉酮酸甲酯、1‑十五醇)单独或联合作为生物标志物的应用，更具体的，涉及用于神经精神性狼疮诊断的方法。本发明涉及利用质谱技术、酶联免疫吸附(ELISA)、蛋白芯片等生物标志物检测技术平台检测NPSLE患者体液(如脑脊液等)中的生物标志物。

Description

一种神经精神性狼疮的诊断标志物及其检测试剂盒
技术领域
本发明涉及标志物的鉴定和使用，具体是涉及21种代谢物(L-天冬酰胺、肾上腺素、胍基乙酸、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、月桂酸乙酯、2-乙酰基呋喃、1，3-二异丙基苯、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇)单独或联合作为生物标志物的应用。
背景技术
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种由自身免疫机制介导的弥漫性结缔组织病，以产生针对细胞成分的多种自身抗体并导致多系统、多器官受累为特征。神经精神性狼疮(Neuropsychiatric Systemic Lupus Erythematosus，NPSLE)主要包括19种SLE神经精神损害类型，是重型SLE的常见系统受累表现和严重预后不良因素。NPSLE患者可死于各种神经系统损害或精神行为异常，包括颅内血栓或出血、脑炎、癫痫持续状态等引起的脑组织坏死；颅内压严重升高引起的脑疝以及精神损害患者的自伤、自杀行为等等，造成了沉重的社会经济负担。NPSLE患者病情难以缓解、预后极差，与目前该病的临床诊断困难、缺乏特异性的辅助检查方法有关。
特异性生物标志物由于其低检测难度和高诊断价值，在SLE的诊断过程中占据不可或缺的地位。尤其该病难以行病理活检、影像学检查昂贵而缺乏特异性的情况下，血清或脑脊液标志物的发现，非常有助于临床诊断和病情评估。Muller等发表在Nature上的综述显示，此前二十年尚未发现与发病机制密切相关、在患者临床研究中被确证的NPSLE标志物；既往研究报道的潜在标志物，包括抗磷脂抗体、抗rRNP抗体、抗NMDA受体抗体、抗微管相关蛋白2抗体，在NPSLE中的阳性率为6-46％，且不同研究的结果缺乏一致性，不具备可靠的临床基础(Jeltsch-David H，Muller S.Neuropsychiatric systemic lupuserythematosus：pathogenesis and biomarkers.Nature Reviews Neurology 2014；10(10)：579-96)。更多的具备临床诊断意义的NPSLE标志物亟待被发现(Hanly，J.G.，Kozora，E.，Beyea，S.，&Birnbaum，J.(2018).Nervous system disease in Systemic LupusErythematosus：Current status and future directions.Arthritis&Rheumatology.doi：10.1002/art.40591)。
发明内容
本申请提供了一种用于诊断对象中NPSLE的发明方法，包括分析对象的生物样品以检测一个或更多生物标志物的存在；基于样品中一个或更多生物标志物的水平诊断神经系统疾病。本发明诊断方法在诊断NPSLE中是有用的。
我们通过超高效液相色谱-串联质谱或ELISA等检测技术比较了多种代谢物在NPSLE患者和出现神经精神症状的对照组(包括SLE对照、其它结缔组织病(connectivetissue disease，CTD)对照和其它神经系统疾病(nervous system disease，NSD)对照的体液中的水平，发现L-天冬酰胺等21种标志物在NPSLE患者脑脊液中显著升高或降低，各个标志物单独应用均对NPLSE有较高诊断效力。将这些标志物联合应用于诊断NPSLE，也具有很高的敏感性及特异性。本发明的目的之一是提供能够有效诊断NPSLE的标志物——L-天冬酰胺等21种代谢物。
本发明的目的之一是通过L-天冬酰胺等21种标志物在神经精神性狼疮中单独及联合诊断意义的发现，有望填补NPSLE在诊断标志物方面的空白，提高临床诊断的准确度，从而有助于实现早诊早治，降低该病的致残率与死亡率。
本发明提供一种用于区分NPSLE和具有神经精神性症状但并非NPSLE的SLE以及其他神经损伤的组合物，包括：从怀疑具有损害的神经细胞的对象分离的生物样品，生物样品为从对象分离的体液。
另一方面，本发明提供了L-天冬酰胺等21种标志物在制备用于诊断神经精神性狼疮的试剂中的用途。
进一步地，根据本发明的上述用途，其包括步骤：
a)提供来自个体的脑脊液或血清等体液样品；
b)确定来自步骤a)的样品中L-天冬酰胺等21种标志物中的单个成分或多个成分的绝对或相对定量数值；
其中，L-天冬酰胺、肾上腺素、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、2-乙酰基呋喃、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮量的升高是辅助诊断神经精神性狼疮的指征；胍基乙酸、月桂酸乙酯、1，3-二异丙基苯、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇量的降低是辅助诊断神经精神性狼疮的指征。
特别地，在所述步骤b)中的优选方法包括质谱技术、Western印迹、North-Western印迹、免疫吸附测定法(ELISA)、放射免疫测定法(RIA)、抗体微阵列、组织微阵列(TMA)、电化学分析法、免疫沉淀、原位杂交和其他免疫组织化学或免疫荧光染色技术、免疫放射测定法(IRMA)和免疫酶测定法(IEMA)，包括使用单克隆和/或多克隆抗体的三明治测定法。
根据本发明，“诊断”指将NPSLE患者与具有神经精神性症状但被除外NPSLE的SLE患者、没有神经精神性症状的SLE患者、非SLE患者以及其他神经损伤、健康人等人群区分开。
另外的，本发明同时提供一种用于诊断NPSLE可能性的试剂盒，该试剂盒包括：用于富集从怀疑具有损害的神经细胞的对象分离的生物样品中的生物标志物的基体，生物样品在从对象分离之前是一种与生物神经系统连通的液体；用于检测上述生物标志物的抗体或检测试剂；和用于检测上述生物样品中标志物的存在或量的操作指南。
进一步的，本发明提供了一种神经精神性狼疮的检测试剂盒，包括：
a)样品接收区，添加来自受试者的样品；
b)轭合区包含至少一种被标记的结合试剂，每种结合试剂与选自L-天冬酰胺、肾上腺素、胍基乙酸、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、月桂酸乙酯、2-乙酰基呋喃、1，3-二异丙基苯、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇中的至少一种标志物特异性结合；
c)一种固体支持物，其限定样品的液体流动路径，并包含至少一种标志物中的相应检测线，每条检测线包含固定的另外的结合试剂，该试剂能特异性结合至少一种标志物，从而在检测线处固定标志物，通过也与标志物特异性结合的被标记的结合试剂产生信号。
进一步的，检测试剂盒进一步包括：
d)至少一种被标记的对照结合试剂，其能与固定在至少一种标志物的检测线下游的对照线上的结合配体结合，从而证实检测已成功完成；
进一步的，检测试剂盒进一步包括
e)一种在检测线下游的吸收剂用来吸收多余的样品。
优选的，检测试剂盒中，其中样品接收区被按比例分配用于接收10至100微升间的血清或脑脊液等体液，如约80微升的血清。
其中固体支持物包括但不限于一种毛细管装置或酶标板、微球等基质材料，可能作为色谱介质或能结合体液中待测标志物成分的材料。
检测试剂盒中进一步包括一个设备来量化各自检测线上标志物的水平。
进一步的，本发明提供了一种神经精神性狼疮的检测系统，包括：
a)一种或多种检测装置用于确定样品中至少一种标志物的水平，这些标志物选自L-天冬酰胺、肾上腺素、胍基乙酸、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、月桂酸乙酯、2-乙酰基呋喃、1，3-二异丙基苯、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇；
b)一个处理器，和
c)一个含有计算机应用程序的存储介质，当通过处理器执行时，该存储介质被配置为：
i.在一个或多个检测装置上访问和/或计算样本中每个标志物的确定水平；
ii.从预测或诊断NPSLE的样品中的标志物水平计算检测值；
iii.从处理器输出受试者的预测或诊断结果。
优选的，在检测出单个标志物的水平后，根据其是否高于或低于用于区分NPSLE患者与其他对照组的cut-off值，来提供患者是否为NPSLE患者的诊断参考。每个标志物均对应各自的cut-off值，每个标志物的检测结果可独自应用于NPSLE诊断。具体而言，对以下标志物中的任意一个进行检测，该标志物水平高于其cut-off值，即可提示患者可能为NPSLE患者(这些标志物包括：L-天冬酰胺、肾上腺素、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、2-乙酰基呋喃、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮)；与之对应，对另一些标志物中的任何一个进行检测，该标志物水平低于其cut-off值，即可提示患者可能为NPSLE患者(这些标志物包括：胍基乙酸、月桂酸乙酯、1，3-二异丙基苯、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇)。
此外，也可利用上述标志物进行联合诊断，举例如下：在得到每个标志物的检测结果后，建立一个逻辑回归函数为：
y＝2.606071e+02+RI(肾上腺素)×1.393156e-04+RI(胍基乙酸)×4.820117e-04+RI(新喋呤)×-6.471577e-04+RI(L-天冬酰胺)×-1.622944e-05+RI(α-D-葡萄糖)×-9.121592e-07+RI(葡糖酸内酯)×-4.237327e-04+RI(肌氨酸)×8.366714e-06+RI(月桂酸乙酯)×-6.644397e-05+RI(2-乙酰基呋喃)×-5.519188e-06+RI(三乙胺)×1.899276e-04+RI(反式-2-辛烯-1-醇)×7.931297e-06+RI(1，3-二异丙基苯)×2.239096e-05+RI(正辛醛)×6.440567e-05+RI(萘)×-2.898858e-05+RI(β-氨基丙酸)×8.794881e-07+RI(亚精胺)×3.710813e-05+RI(肌醇)×5.854957e-06+RI(十八碳三烯酸甲酯)×-1.226235e-04+RI(蒲勒酮)×-1.303951e-05+RI(二氢茉莉酮酸甲酯)×7.064412e-05+RI(1-十五醇)×2.425161e-04。RI为相对强度(relative intensity)
进一步的判断标准为把y值带入逻辑回归公式计算预测值w：
上述各方程中e为自然常数，其值约为2.71828，
a)如果w＞0.5，样本预测为阳性；
b)如果w＜0.5，样本预测为阴性。
附图说明
图1：21个标志物在NPSLE及其他需与NPSLE鉴别诊断的疾病对照组中的水平，以及单个标志物用于诊断的敏感度和特异度，其中，图1a L-天冬酰胺单独诊断效率敏感度93.1％，特异度94.7％，cut-off值660500，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1b肾上腺素单独诊断效率为敏感度93.1％，特异度78.9％，cut-off值171500，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1c胍基乙酸单独诊断效率为敏感度100％，特异度51.7％，cut-off值12204.5，低于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1d新喋呤单独诊断效率为敏感度93.1％，特异度97.4％，cut-off值170500，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1e葡糖酸内酯单独诊断效率为敏感度100％，特异度84.2％，cut-off值4.73e+05，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1f三乙胺单独诊断效率为敏感度96.6％，特异度84.2％，cut-off值835500，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1g α-D-葡萄糖单独诊断效率为敏感度72.4％，特异度71.1％，cut-off值2.185e+08，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1h肌氨酸单独诊断效率为敏感度96.6％，特异度63.2％，cut-off值3.125e+06，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1i月桂酸乙酯单独诊断效率为敏感度93.1％，特异度84.2％，cut-off值1305000，低于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1j 2-乙酰基呋喃单独诊断效率为敏感度93.1％，特异度81.6％，cut-off值2.935e+07，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1k 1，3-二异丙基苯单独诊断效率为敏感度100％，特异度81.6％，cut-off值6.155e+05，低于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1l正辛醛单独诊断效率为敏感度96.6％，特异度89.5％，cut-off值1875000，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1m萘单独诊断效率为敏感度89.7％，特异度94.7％，cut-off值4.205e+06，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1n反式-2-辛烯-1-醇单独诊断效率为敏感度75.9％，特异度81.6％，cut-off值2.43e+06，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1o β-氨基丙酸单独诊断效率为敏感度96.6％，特异度68.4％，cut-off值1865000，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1p亚精胺单独诊断效率为敏感度96.6％，特异度65.8％，cut-off值1.82e+05，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1q肌醇单独诊断效率为敏感度72.4％，特异度84.2％，cut-off值3.86e+07，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1r十八碳三烯酸甲酯单独诊断效率为敏感度93.1％，特异度97.4％，cut-off值870500，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1s蒲勒酮单独诊断效率为敏感度89.7％，特异度94.7％，cut-off值4.205e+06，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1t二氢茉莉酮酸甲酯单独诊断效率为敏感度89.7％，特异度84.2％，cut-off值1025000，低于cut-off值可作为诊断阳性的参考；图1u 1-十五醇单独诊断效率为敏感度89.7％，特异度92.1％，cut-off值4.815e+05，低于cut-off值可作为诊断阳性的参考。
其中，A：NPSLE组；B：非NPSLE的SLE对照组；C：其他结缔组织病对照组；D：其它神经系统疾病(NSD)对照组。
图2 21个差异代谢物联合诊断NPSLE的ROC曲线图。
图3以其中一种代谢物为例：L-天冬酰胺的含量与神经精神损伤指数(NPDI)的箱型图，图中可见L-天冬酰胺的含量与神经精神损伤指数(NPDI)成正相关。
具体实施方式
为了更清楚地理解本发明，现参照下例实施例及附图进一步描述本发明。实施例仅用于解释而不以任何方式限制本发明。实施例中未注明的具体条件的实验方法为所属领域熟知的常规方法和常规条件，或按照试剂盒及仪器制造商所建议的条件。
实施例：用质谱技术检测L-天冬酰胺等代谢物以用于诊断神经精神性狼疮
一、病例及对照样本入选标准
脑脊液标本选自38例NPSLE患者、14例SLE对照组、7例其它结缔组织病对照组和8例其它神经系统疾病对照患者。实验组患者均符合1997年美国风湿病学会(ACR)制定的NPSLE分类标准。所有对照组患者均出现神经精神表现，并由有经验的风湿免疫科医生除外NPSLE。
二、实验方案
(一)脑脊液样本处理
1、样本从-80℃冰箱中取出，冰上解冻，解冻后，涡旋10s混匀。
2、取样本50uL于EP管中，加入150uL预冷的冰甲醇(含1ug/mL的2-氯苯丙氨酸作为内标)。
3、涡旋3min，12000r/min，4℃条件下离心10min。
4、离心完后吸取上清液到另一个新的EP管中。
5、上清液12000r/min，4℃条件下再离心5min，取上清液到进样瓶内衬管中，用于LC-MS/MS分析。
(二)色谱质谱采集条件
数据采集仪器系统主要包括超高效液相色谱(Ultra Performance LiquidChromatography，UPLC)(Shim-pack UFLC SHIMADZU CBM30A，https：//www.shimadzu.com/)和串联质谱(Tandem mass spectrometry，MS/MS)(6500+，https：//sciex.com/)。液相条件主要包括：
1)色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18 1.8μm，2.1mm*100mm；
2)流动相：A相为超纯水(0.04％的乙酸)，B相为乙腈(0.04％的乙酸)；
3)洗脱梯度：0min水/乙腈(95∶5 V/V)，11.0min为5∶95 V/V，12.0min为5∶95 V/V，12.1min为95∶5 V/V，14.0min为95∶5 V/V；
4)流速0.4ml/min；柱温40℃；进样量2μl。
质谱条件主要包括：
电喷雾离子源(electrospray ionization，ESI)温度500℃，质谱电压5500 V(positive)，-4500 V(negative)，离子源气体I(GS I)55 psi，气体II(GS II)60 psi，气帘气(curtain gas，CUR)25 psi，碰撞诱导电离(collision-activated dissociation，CAD)参数设置为高。在三重四极杆(Qtrap)中，每个离子对是根据优化的去簇电压(declustering potential，DP)和碰撞能(collision energy，CE)进行扫描检测。
(三)代谢物定性与定量分析
基于靶向标准品数据库MWDB(metware database)，根据检测物质的保留时间RT(Retention time)、子母离子对信息及二级谱数据进行定性分析。代谢物定量是利用三重四极杆质谱的多反应监测模式分析完成。
(四)利用单个标志物辅助NPSLE诊断：
利用软件Analyst 1.6.3处理质谱数据。采用t检验比较每种代谢物定量在实验组和各对照组之间的差异。采用ROC分析，确定每种代谢物可用于区分NPSLE患者与各对照组患者的cut-off值。当单独应用任何一种代谢物检测用于诊断某一患者是否患NPSLE时，当该代谢物高于或低于针对其规定的cut-off值时，可提供诊断阳性的参考。具体而言，对以下标志物中的任意一个进行检测，该标志物水平高于其cut-off值，即可提示患者可能为NPSLE患者(这些标志物包括：L-天冬酰胺、肾上腺素、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、2-乙酰基呋喃、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮)；与之对应，对另一些标志物中的任何一个进行检测，该标志物水平低于其cut-off值，即可提示患者可能为NPSLE患者(这些标志物包括：胍基乙酸、月桂酸乙酯、1，3-二异丙基苯、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇)。
(五)也可利用多个上述标志物开展联合诊断，举例如下：
使用逻辑回归方法，运用这21个代谢物在2组67个样本中的数据拟合一个逻辑回归函数，用这个模型为67个样本计算逻辑回归预测值(w)，用这67个预测值绘制ROC曲线，并计算出最佳临界值。
三、实验结果举例：
实例一：
用单个代谢物作为诊断NPSLE的标志物：确定21个代谢物各自在NPSLE组中的水平，与各个对照组相比均有显著差异，同时确定了单独使用每个代谢物所需的cut-off值。对每个代谢物单独测定，均可以明显区分出NPSLE患者(A组)与其他对照组的患者。具体而言，对以下标志物中的任意一个进行检测，该标志物水平高于其cut-off值，即可提示患者可能为NPSLE患者(这些标志物包括：L-天冬酰胺、肾上腺素、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、2-乙酰基呋喃、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮)；与之对应，对另一些标志物中的任何一个进行检测，该标志物水平低于其cut-off值，即可提示患者可能为NPSLE患者(这些标志物包括：胍基乙酸、月桂酸乙酯、1，3-二异丙基苯、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇)。如图1所示。
其中，1a-1u分别为：L-天冬酰胺(敏感度93.1％，特异度94.7％，cut-off值660500，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
肾上腺素(敏感度93.1％，特异度78.9％，cut-off值171500，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
胍基乙酸(敏感度100％，特异度51.7％，cut-off值12204.5，低于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
新喋呤(敏感度93.1％，特异度97.4％，cut-off值170500，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
葡糖酸内酯(敏感度100％，特异度84.2％，cut-off值4.73e+05，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
三乙胺(敏感度96.6％，特异度84.2％，cut-off值835500，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
α-D-葡萄糖(敏感度72.4％，特异度71.1％，cut-off值2.185e+08，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
肌氨酸(敏感度96.6％，特异度63.2％，cut-off值3.125e+06，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
月桂酸乙酯(敏感度93.1％，特异度84.2％，cut-off值1305000，低于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
2-乙酰基呋喃(敏感度93.1％，特异度81.6％，cut-off值2.935e+07，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
1，3-二异丙基苯(敏感度100％，特异度81.6％，cut-off值6.155e+05，低于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
正辛醛(敏感度96.6％，特异度89.5％，cut-off值1875000，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
萘(敏感度89.7％，特异度94.7％，cut-off值4.205e+06，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
反式-2-辛烯-1-醇(敏感度75.9％，特异度81.6％，cut-off值2.43e+06，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
β-氨基丙酸(敏感度96.6％，特异度68.4％，cut-off值1865000，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
亚精胺(敏感度96.6％，特异度65.8％，cut-off值1.82e+05，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
肌醇(敏感度72.4％，特异度84.2％，cut-off值3.86e+07，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
十八碳三烯酸甲酯(敏感度93.1％，特异度97.4％，cut-off值870500，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
蒲勒酮(敏感度89.7％，特异度94.7％，cut-off值4.205e+06，高于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
二氢茉莉酮酸甲酯(敏感度89.7％，特异度84.2％，cut-off值1025000，低于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
十五醇(敏感度89.7％，特异度92.1％，cut-off值4.815e+05，低于cut-off值可作为诊断阳性的参考)；
实例二：
1.在测定上述多个代谢物的水平后，也可将多个代谢物组成标志物组合，联合分析，可高效率区分NPSLE患者与各对照组患者，获得理想的敏感性和特异性。使用逻辑回归方法，运用这21个代谢物在2组67个样本中的数据拟合一个逻辑回归函数，函数的系数如下表所示：
注：e+02表示102，e-04表示10-4。
用这个模型为67个样本计算逻辑回归预测值(w)，用这67个预测值绘制ROC曲线(图2)，并计算出最佳临界值(0.5)。最佳临界值是指敏感性和特异性之和最大时的阈值。
2.在上述代谢物中，L-天冬酰胺的含量与神经精神损伤指数(NPDI)成正相关(图3)，可提示疾病活动度。
3、样品检测
对新样本做预测时，计算方法如下：
按照上述方法或者其他本领域内常规操作检测新样本中以上21个代谢物的定量信息。
将代谢物的定量值代入公式计算y的值，y＝2.606071e+02+RI(肾上腺素)×1.393156e-04+RI(胍基乙酸)×4.820117e-04+RI(新喋呤)×-6.471577e-04+RI(L-天冬酰胺)×-1.622944e-05+RI(α-D-葡萄糖)×-9.121592e-07+RI(葡糖酸内酯)×-4.237327e-04+RI(肌氨酸)×8.366714e-06+RI(月桂酸乙酯)×-6.644397e-05+RI(2-乙酰基呋喃)×-5.519188e-06+RI(三乙胺)×1.899276e-04+RI(反式-2-辛烯-1-醇)×7.931297e-06+RI(1，3-二异丙基苯)×2.239096e-05+RI(正辛醛)×6.440567e-05+RI(萘)×-2.898858e-05+RI(β-氨基丙酸)×8.794881e-07+RI(亚精胺)×3.710813e-05+RI(肌醇)×5.854957e-06+RI(十八碳三烯酸甲酯)×-1.226235e-04+RI(蒲勒酮)×-1.303951e-05+RI(二氢茉莉酮酸甲酯)×7.064412e-05+RI(1-十五醇)×2.425161e-04。RI为相对强度(relativeintensity)
3)把y值带入逻辑回归公式计算预测值w。
如果w＞0.5，样本预测为阳性；
如果w＜0.5，样本预测为阴性；
上述各方程中e为自然常数，其值约为2.71828。
提供以上实施例仅仅是为了描述本发明的目的，而并非要限制本发明的范围。本发明的范围由所附权利要求限定。不脱离本发明的精神和原理而做出的各种等同替换和修改，均应涵盖在本发明的范围之内。

Claims (8)

1.21种代谢物的组合作为分子标志物在制备用于诊断神经精神性狼疮的试剂或者检测试剂盒中的用途，所述21种代谢物具体为：L-天冬酰胺、肾上腺素、胍基乙酸、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、月桂酸乙酯、2-乙酰基呋喃、1，3-二异丙基苯、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇。
2.如权利要求1所述的用途，其包括步骤：
a)提供来自个体的体液样品；
b)确定来自步骤a)的体液样品中所述21种代谢物中的每个成分的绝对或相对定量数值。
3.如权利要求2所述的用途，其中，L-天冬酰胺、肾上腺素、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、2-乙酰基呋喃、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮量的升高是辅助诊断神经精神性狼疮的指征；胍基乙酸、月桂酸乙酯、1，3-二异丙基苯、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇量的降低是用于辅助诊断神经精神性狼疮的指征。
4.如权利要求2所述的用途，其中，在所述步骤b)中的方法包括质谱技术、Western印迹、免疫吸附测定法(ELISA)、放射免疫测定法(RIA)、抗体微阵列、组织微阵列(TMA)、电化学分析法、免疫沉淀、原位杂交、免疫放射测定法(IRMA)和免疫酶测定法(IEMA)。
5.一种用于诊断和治疗NPSLE可能性的试剂盒，该试剂盒包括：用于富集从怀疑具有损害的神经细胞的对象分离的生物样品中的生物标志物的基体，生物样品在从对象分离之前是一种与生物神经系统连通的液体；用于检测权利要求1中21种生物标志物的抗体；和用于检测生物样品中标志物的存在或量的操作指南。
6.如权利要求5所述的试剂盒，包括：
a)样品接收区，添加来自受试者的样品；
b)轭合区包含被标记的结合试剂，每种结合试剂与选自L-天冬酰胺、肾上腺素、胍基乙酸、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、月桂酸乙酯、2-乙酰基呋喃、1，3-二异丙基苯、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇中的每种标志物特异性结合；
c)一种固体支持物，其限定样品的液体流动路径，并包含每种标志物中的相应检测线，每条检测线包含固定的另外的结合试剂，该试剂能特异性结合每种标志物，从而在检测线处固定标志物，通过也与标志物特异性结合的被标记的结合试剂产生信号。
7.如权利要求5所述的试剂盒，所述试剂盒进一步包括：
d.每种被标记的对照结合试剂，其能与固定在每种标志物的检测线下游的对照线上的结合配体结合，从而证实检测已成功完成。
8.一种神经精神性狼疮的检测系统，包括：
a)一种或多种检测装置用于确定样品中每种标志物的水平，这些标志物选自L-天冬酰胺、肾上腺素、胍基乙酸、新喋呤、葡糖酸内酯、三乙胺、α-D-葡萄糖、肌氨酸、月桂酸乙酯、2-乙酰基呋喃、1，3-二异丙基苯、正辛醛、萘、反式-2-辛烯-1-醇、β-氨基丙酸、亚精胺、肌醇、十八碳三烯酸甲酯、蒲勒酮、二氢茉莉酮酸甲酯、1-十五醇的组合；
b)一个处理器，和
c)一个含有计算机应用程序的存储介质，当通过处理器执行时，该存储介质被配置为：
i.在一个或多个检测装置上访问和/或计算样本中每个标志物的确定水平；
ii.从预测或诊断NPSLE的样品中的21种标志物水平计算检测参考值，或调用试剂盒指定的检测参考值；
iii.根据由神经精神性狼疮和各对照组样本的21种标志物水平，通过与检测参考值比较，以判断预测或诊断结果；或者，经过对21种标志物水平的合并计算分析，得到受试者的预测或诊断结果。
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