CN111551752B - 一种化学发光免疫检测芯片及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及免疫检测技术领域，具体公开一种化学发光免疫检测芯片及应用。所述化学发光免疫检测芯片包括芯片主体，设置于所述芯片主体内并连通的进样区和复合反应区；所述复合反应区按照进样方向包括依次连通的包被区和标记物储藏区；所述包被区根据检测物的种类包含若干依次连通的包被分区，每一个所述包被分区用于检测一种特定检测物。所述的化学发光免疫检测芯片可应用于制备检测人体血液中激素蛋白含量的设备。本发明的化学发光免疫检测芯片可以实现多项检测物的联检，且灵敏度高、检测结果的重复性和准确度高，检测时间短且节约大量检测成本。

Description

一种化学发光免疫检测芯片及应用
技术领域
本发明涉及免疫检测技术领域，尤其涉及一种化学发光免疫检测芯片及应用。
背景技术
化学发光免疫分析法是近三十年来迅速发展起来的非放射性免疫分析方法，属于一种超高灵敏度的微量测定技术。它通过化学发光系统与免疫反应相结合，化学发光相关的物质标记抗体或抗原与待测的抗原或抗体反应后，分离游离态的化学发光标记物并加入化学发光系统的其它相关物产生化学发来进行抗原或抗体的定量或定性检测。化学发光免疫分析具备独特的高灵敏性、高度特异性，以及快速、准确、特异、可自动化等特点，在临床检验、药物分析、环境监测等领域均发挥重要的作用。
化学发光免疫分析技术拥有众多的优点和特性，是其他方法不可代替的。在市场上的认可度高，已经逐步占据主导地位。市场上绝大多数化学发光试剂盒都采用了磁性微粒分离技术，磁性微粒分离技术是目前最理想的体外免疫检测分离技术，应用该技术的体外免疫检测试剂盒具有灵敏度高、线性范围宽、稳定性好、精密度高、操作简单和省时等许多优点。所谓的磁性微粒分离技术是采用超顺磁性微粒为固相分离载体，磁性微粒凭借表面积巨大，对目标蛋白的特异性结合能力远远超过其他分离方法，且在此类均相条件下反应既快速又完全。但磁性微粒分离技术所采用的磁性微粒在存储条件下会出现沉降，在微流控芯片上应用产生负面影响，磁性微粒在芯片的反应腔体中沉淀后，不容易重新悬浮，造成反应效果欠佳，以及反应过程中磁性微粒残留在液体流动通道中，导致检测结果重复性差等问题。且磁性微粒可随液体流动，无法实现多项目联检，在只检测一个项目的情况下芯片造价较高，经济效益相对较差。另外常用的酶联免疫分析法多采用物理吸附的方式对抗体进行包被，抗体包被的效率低，部分抗体的结合位点被屏蔽导致试剂盒灵敏度不高、检测反应时间长。且在检测的目标蛋白浓度很高时，游离目标蛋白会将酶标抗体包围进而结合成抗原酶标抗体，在清洗时被洗掉产生勾状效应，导致假阴性的结果出现。
发明内容
针对现有酶联免疫分析在检测目标蛋白(抗原)时误差大、成本高以、灵敏度低及目标蛋白浓度高时易出现假阴性结果的问题，本发明提供一种化学发光免疫检测芯片及应用。
为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：
一种化学发光免疫检测芯片，包括芯片主体，设置于所述芯片主体内并连通的进样区和复合反应区；所述复合反应区按照进样方向包括依次连通的包被区和标记物储藏区；
所述包被区和所述标记物储藏区之间连通有反应隔离区；所述包被区包括若干依次连通的包被分区，每一个所述包被分区用于检测一种特定检测物；所述包被分区之间连通有反应隔离区；
所述包被分区表面设有可拆卸的偶联基板，所述偶联基板上设有复合材料层，所述复合材料层由偶联材料与抗体或抗原偶联而成；所述标记物储藏区表面设有醋酸纤维膜，所述醋酸纤维膜上冻干固定有标记物；所述反应隔离区表面设有可拆卸的可拆卸的无结合力聚苯乙烯膜。
相对于现有技术，本发明提供的一种化学发光免疫检测芯片的复合反应区设置多个包被分区，每个反应分区可以检测一种特定的检测物。根据检测物的种类，在包被分区表面设置可拆卸的偶联基板，并在偶联基板上设置由偶联材料与抗体或抗原偶联而成复合材料层，可以根据检测物在血液中的浓度高低，设定复合材料层上偶联的抗体或抗原的密度。若检测物浓度很高时，可以设置两个以上串联的包被分区来检测同一检测物，避免因检测物浓度过高在检测过程中发生勾状效应并呈现假阴性的结果。两个以上串联的包被分区来检测同一检测物时，因包被分区之间不会因检测的检测物不同而产生干扰，可以不设反应隔离区。且本发明的多个包被分区，可以实现多项检测物的联检，提高检测的效率。
在包被分区表面通过化学偶联的方式固定抗体，相对于物理吸附的方式，显著增加抗体固定的效率和检测的灵敏度。同时，在标记物储藏区表面设置醋酸纤维膜，标记物以低吸附力的醋酸纤维膜作为载体，通过冷冻干燥的方式冻干保存在醋酸纤维膜中。当血液样本流入标记物储藏区时，标记物复溶，避免了标记物以液体形式加入时稀释样本而造成的检测误差。
在包被区和标记物储藏区之间以及包被分区之间分别设有反应隔离区，且在反应隔离区表面设有可拆卸的无结合力聚苯乙烯膜。经化学修饰的无结合力聚苯乙烯在溶液中会形成水合物层，可有效地阻止蛋白分子和反应隔离区表面结合，有效阻隔每个包被分区之间的相互干扰，增加检测结果的准确性。
包被分区表面设有可拆卸的偶联基板，通过检测物的种类和数量，可对包被分区表面的偶联基板进行拆卸和更换，实现化学发光免疫检测芯片的模块化生产，避免因检测物种类的组合更换而必须重新设计芯片造成的生产成本增加。
优选的，所述进样区与所述包被区之间连通过滤区。
优选的，所述过滤区内设有滤膜和除气膜。
滤膜主要用于过滤去除血液中的血细胞，除气膜用于去除进样过程中可能带入的小气泡，滤膜和除气膜的设置可以避免血液样品中的杂质和气体对化学发光免疫反应造成影响。
优选的，所述芯片主体内还设有循环挤压区和试剂储藏区；所述循环挤压区的首尾两端分别与所述复合反应区的首尾两端连通，用于驱动检测样品在所述复合反应区内循环流动；所述试剂储藏区与所述复合反应区的进样端连通，用于向所述复合反应区提供清洗液和检测底物。
在循环挤压区的驱动下，样本与其它试剂在复合反应区循环流动，大大缩短了免疫反应的孵育时间。
优选的，所述标记物为酶标记物，所述检测底物为发光底物。
优选的，所述酶标记物为碱性磷酸酶标记的抗体或抗原，所述发光底物为CSPD。
本发明还提供所述化学发光免疫检测芯片在制备检测人体血液中激素蛋白含量的设备中的应用。
优选的，所述激素蛋白为人绒毛膜促性腺激素、孕酮、促黄体生成素、促卵泡生成素和抗缪勒氏管激素中的一种或几种。
人绒毛膜促性腺激素(HCG)是一种主要由胎盘组织的滋养层细胞分泌的糖蛋白，HCG对早期妊娠诊断有重要意义，对与妊娠相关疾病的诊断、鉴别与治疗与监测有一定价值，可以为异常妊娠与胎盘功能的判断、流产诊断与治疗，保胎或吸宫治疗提供参考依据。
孕酮也称黄体酮，是一种重要的孕激素，不仅在月经周期的调节中起重要作用，也是维持妊娠所必需的一种激素。
促黄体生成素(LH)和促卵泡生成素(FSH)是脑垂体合成并分泌的糖蛋白激素，LH和FSH在生殖相关的生理过程中协同发挥着至关重要的作用。
抗缪勒氏管激素(AMH)是一种140kDa的二聚体糖蛋白，属于转化生长因子-β生长和分化因子家族。在男性中，AMH是由睾丸的支持细胞分泌，并作为性别分化过程的一部分参与了男性胎儿缪勒氏管的消退。AMH还参与睾丸的发育和功能。在女性中，AMH由卵巢颗粒细胞表达，在卵泡发育过程中具有重要的自分泌和旁分泌调节功能。
优选的，所述包被分区内表面的偶联基板上的复合材料层由表面氨基化的聚苯乙烯材料和相应的激素蛋白抗体偶联而成。
偶联材料为表面氨基化的聚苯乙烯材料时，在完成抗体偶联及封闭处理后，反应区剩余未被用于偶联带有正电荷的氨基可通过静电力有助于抗体捕获激素蛋白分子，进而加快检测反应速度及灵敏度。
当所述激素蛋白为人绒毛膜促性腺激素时，所述表面氨基化的聚苯乙烯材料上偶联HCG抗体；当所述激素蛋白为孕酮时，所述表面氨基化的聚苯乙烯材料上偶联孕酮抗体；当所述激素蛋白为促黄体生成素时，所述表面氨基化的聚苯乙烯材料上偶联LH抗体；当所述激素蛋白为促卵泡生成素时，所述表面氨基化的聚苯乙烯材料上偶联FSH抗体；当所述激素蛋白为抗缪勒氏管激素时，所述表面氨基化的聚苯乙烯材料上偶联AMH抗体。
进一步的，所述HCG抗体是经过二硫苏糖醇处理的HCG抗体。
附图说明
图1是本发明实施例1中的化学发光免疫检测芯片的结构示意图；
图2是本发明实施例1中人绒毛膜促性腺激素HCG浓度的化学发光免疫检测芯片和罗氏检测结果对比图；
图3是本发明实施例1中孕酮浓度的化学发光免疫检测芯片和罗氏检测结果对比图；
图4是本发明实施例2中的化学发光免疫检测芯片的结构示意图；
图5是本发明实施例2中促黄体生成素LH浓度的化学发光免疫检测芯片和罗氏检测结果对比图；
图6是本发明实施例2中促卵泡生成素FSH浓度的化学发光免疫检测芯片和罗氏检测结果对比图；
图7是本发明实施例2中抗缪勒氏管激素浓度的化学发光免疫检测芯片和罗氏检测结果对比图；
其中，1、进样区，2、过滤区，3、复合反应区，31、检测人绒毛膜促性腺激素的包被分区一，32、检测人绒毛膜促性腺激素的包被分区二，33、反应隔离区一，34、检测孕酮的包被分区，35、反应隔离区二，36、标记物储藏区，301、检测促黄体生成素的包被分区，302、反应隔离区三，303、检测促卵泡生成素的包被分区，304、反应隔离区四，305、检测抗缪勒氏管激素的包被分区，306、反应隔离区五，4、循环挤压区，5、试剂储藏区，51、清洗液储藏区，52、反应底物储藏区，6、排液阀。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明实施例提供一种化学发光免疫检测芯片，如图1所示，包括芯片主体以及设置于芯片主体内并连通的进样区1和复合反应区3；复合反应区3按照进样方向包括依次连通的包被区和标记物储藏区36；
包被区和标记物储藏区36之间连通有反应隔离区；包被区根据检测物的种类包含若干依次连通的包被分区，每一个包被分区用于检测一种特定检测物；包被分区之间连通有反应隔离区；
包被分区表面设有可拆卸的偶联基板，偶联基板上设有复合材料层，复合材料层由偶联材料与抗体或抗原偶联而成；标记物储藏区36表面设有醋酸纤维膜，醋酸纤维膜上冻干固定有标记物；反应隔离区表面设有可拆卸的无结合力聚苯乙烯膜。
本实施例中的化学发光免疫检测芯片的复合反应区3设置多个包被分区，每个反应分区可以检测一种特定的检测物。根据检测物的种类，在包被分区表设置可拆卸的偶联基板，并在偶联基板上设置由偶联材料与抗体或抗原偶联而成复合材料层，可以根据检测物在血液中的浓度高低，设定复合材料层上偶联的抗体或抗原的密度。若检测物浓度很高时，可以设置两个以上串联的包被分区来检测同一检测物，避免因检测物浓度过高在检测过程中发生勾状效应并呈现假阴性的结果，两个以上串联的包被分区来检测同一检测物时，因包被分区之间不会因检测的检测物不同而产生干扰可以不设反应隔离区。且本发明的多个包被分区，可以实现多项目联检的，提高检测的效率。
在包被分区表面通过化学偶联的方式固定抗体，相对于物理吸附的方式，显著增加抗体固定的效率和检测的灵敏度。同时，在标记物储藏区36表面设置醋酸纤维膜，标记物以低吸附力的醋酸纤维膜作为载体，通过冷冻干燥的方式冻干保存在醋酸纤维膜中。当血液样本流入标记物储藏区36时，标记物复溶，避免了标记物以液体形式加入时稀释样本而造成的检测误差。
在包被区和标记物储藏区36之间以及包被分区之间分别设有反应隔离区，且在反应隔离区表面设有可拆卸的无结合力聚苯乙烯膜。经化学修饰的无结合力聚苯乙烯在溶液中会形成水合物层，可有效地阻止蛋白分子和反应隔离区表面结合，有效阻隔每个包被分区之间的相互干扰，增加检测结果的准确性。
包被分区表面设有可拆卸的偶联基板，通过检测物的种类和数量，可对包被分区表面的偶联基板进行拆卸和更换，实现化学发光免疫检测芯片的模块化生产，避免因检测物种类的组合更换而必须重新设计芯片造成的生产成本增加。
作为本发明的一种具体实施方式，所述进样区1与所述包被区之间连通过滤区2。
具体的，所述过滤区2内设有滤膜和除气膜。
滤膜主要用于过滤去除血液中的血细胞，除气膜用于去除进样过程中可能带入的小气泡，滤膜和除气膜的设置可以避免血液样品中的杂质和气体对化学发光免疫反应造成影响。
优选的，所述芯片主体内还设有循环挤压区4和试剂储藏区5；循环挤压区4的首尾两端分别与复合反应区3的首尾两端连通，用于驱动检测样品在复合反应区3内循环流动；试剂储藏区5与复合反应区3的进样端连通，用于向复合反应区3提供清洗液和检测底物。
在循环挤压区4的驱动下，样本与其它试剂在复合反应区3循环流动，大大缩短了免疫反应的孵育时间。
作为本发明的一种具体实施方式，所述清洗液为包含0.2％BSA、0.05％吐温20和0.01％Proclin300的pH为7.4的磷酸缓冲液。
上述清洗液既可以彻底清除复合反应区3内未结合的检测物，同时又可以避免结合在检测物上的标记物被清除，进一步提高检测结果的准确性。
作为本发明的一种具体实施方式，所述标记物为酶标记物，所述检测底物为发光底物。
具体的，所述酶标记物为碱性磷酸酶标记的抗体或抗原，所述发光底物为CSPD。
作为本发明的一种具体实施方式，试剂储藏区5内分别设有清洗液储藏区51和反应底物储藏区52，清洗液储藏区51中的清洗液和反应底物储藏区52中的反应底物可根据添加需要，分别通过挤压的方式进入复合反应分区。
作为本发明的一种具体实施方式，所述复合反应分区内设有排液阀6，用于将控制反应结束后的废液的排出。
本发明实施例还提供了上述化学发光免疫检测芯片在制备检测人体血液中激素蛋白含量的设备中的应用。
作为本发明的一种具体实施方式，所述激素蛋白为人绒毛膜促性腺激素、孕酮、促黄体生成素、促卵泡生成素和抗缪勒氏管激素中的一种或几种。
人绒毛膜促性腺激素(HCG)是一种主要由胎盘组织的滋养层细胞分泌的糖蛋白，HCG对早期妊娠诊断有重要意义，对与妊娠相关疾病的诊断、鉴别与治疗与监测有一定价值，可以为异常妊娠与胎盘功能的判断、流产诊断与治疗，保胎或吸宫治疗提供参考依据。
孕酮也称黄体酮，是一种重要的孕激素，不仅在月经周期的调节中起重要作用，也是维持妊娠所必需的一种激素。
促黄体生成素(LH)和促卵泡生成素(FSH)是脑垂体合成并分泌的糖蛋白激素，LH和FSH在生殖相关的生理过程中协同发挥着至关重要的作用。
抗缪勒氏管激素(AMH)是一种140kDa的二聚体糖蛋白，属于转化生长因子-β生长和分化因子家族。在男性中，AMH是由睾丸的支持细胞分泌，并作为性别分化过程的一部分参与了男性胎儿缪勒氏管的消退。AMH还参与睾丸的发育和功能。在女性中，AMH由卵巢颗粒细胞表达，在卵泡发育过程中具有重要的自分泌和旁分泌调节功能。
作为本发明的一种具体实施方式，检测所述激素蛋白时所述包被分区内表面的偶联基板上的复合材料层由表面氨基化的聚苯乙烯材料和相应的激素蛋白抗体偶联而成。
偶联材料为表面氨基化的聚苯乙烯材料时，在完成抗体偶联及封闭处理后，反应区剩余未被用于偶联带有正电荷的氨基可通过静电力有助于抗体捕获激素蛋白分子，进而加快检测反应速度及灵敏度。
当所述激素蛋白为人绒毛膜促性腺激素时，所述表面氨基化的聚苯乙烯材料上偶联HCG抗体；当所述激素蛋白为孕酮时，所述表面氨基化的聚苯乙烯材料上偶联孕酮抗体；当所述激素蛋白为促黄体生成素时，所述表面氨基化的聚苯乙烯材料上偶联LH抗体；当所述激素蛋白为促卵泡生成素时，所述表面氨基化的聚苯乙烯材料上偶联FSH抗体；当所述激素蛋白为抗缪勒氏管激素时，所述表面氨基化的聚苯乙烯材料上偶联AMH抗体。所述HCG抗体是经过二硫苏糖醇处理的HCG抗体。
实施例1
利用本发明提供的化学发光免疫检测芯片同时检测血液样品中人绒毛膜促性腺激素和孕酮含量：
因检测的目标蛋白为人绒毛膜促性腺激素和孕酮两种，且人绒毛膜促性腺激素在妊娠期间含量很高，因此，化学发光免疫检测芯片上可设置三个包被分区。其中紧邻的两个包被分区表面的偶联基板上的复合材料层由表面氨基化的聚苯乙烯材料和HCG抗体偶联而成，且HCG抗体为经过二硫苏糖醇处理的HCG抗体，用BSA封闭后作为检测人绒毛膜促性腺激素的包被分区(即检测人绒毛膜促性腺激素的包被分区一31和检测人绒毛膜促性腺激素的包被分区二32)。剩余的一个包被分区表面的偶联基板上的复合材料层由表面氨基化的聚苯乙烯材料和孕酮抗体偶联而成，用BSA封闭后作为检测孕酮的包被分区34，因此，如图1所示，该化学发光免疫检测芯片的复合反应区3依次包括检测人绒毛膜促性腺激素的包被分区一31、检测人绒毛膜促性腺激素的包被分区二32、反应隔离区一33、检测孕酮的包被分区34、反应隔离区二35和标记物储藏区36。其中，孕酮采用竞争法进行检测，即，在检测孕酮的包被分区34内偶联的抗体为孕酮抗体，在标记物储藏区36中固定的相应的标记物为碱性磷酸酶标记的孕酮衍生物(抗原)，而不是碱性磷酸酶标记的孕酮抗体，碱性磷酸酶标记的孕酮衍生物与结合在检测孕酮的包被分区34内的孕酮进行竞争吸附，实现孕酮含量的检测。
将抽取的血液样品注入进样区1，血液样品通过过滤区2中的滤膜和除气膜后，进入复合反应区3，复合反应区3内血液样品依次经过检测人绒毛膜促性腺激素的包被分区一31、检测人绒毛膜促性腺激素的包被分区二32、反应隔离区一33、检测孕酮的包被分区34、反应隔离区二35和标记物储藏区36，其中标记物储藏区36表面的醋酸纤维膜上冻干固定有碱性磷酸酶标记的HCG抗体和碱性磷酸酶标记的孕酮衍生物以及孕酮分子解离剂。
在循环挤压区4的驱动下，血液样品通过循环挤压区4不断在复合反应区3内循环流动，使血液样品中的目标检测物与包被分区接触并被包被分区偶联的抗体捕获。且在血液样品不断流经标记物储藏区36时，使标记物储藏区36中的酶标记物复溶，然后与包被分区内捕获的人绒毛膜促性腺激素和孕酮结合。酶标记物与人绒毛膜促性腺激素和孕酮充分结合后，多余的血液样品和酶标记物通过排液阀6排出。用清洗液洗去未结合的酶标记物并通过排液阀6排出，然后加入发光底物CSPD与包被分区内结合的酶标记物反应，通过循环挤压区4使发光底物CSPD与酶标记物充分接触和反应，反应完成后对包被分区内的发光值进行检测，再通过主曲线二维码录入的定标曲线信息，换算出血液样品中人绒毛膜促性腺激素和孕酮的浓度。
收集50例来自不同患者的新鲜病人血清作为检测样本，用人绒毛膜促性腺激素、孕酮二项联化学发光免疫检测芯片和罗氏绒毛膜促性腺激素及β亚单位检测试剂盒(电化学发光法)、孕酮检测试剂盒(电化学发光法)进行测试，为避免测量结果漂移，样本应随机排序进行测试，每个样本重复测试2次。
以罗氏系统测试浓度值为横坐标，以化学发光免疫检测芯片的测试浓度值为纵坐标，进行线性回归分析，得到方法学比对相关系数R2，检测结果如图2和图3所示。人绒毛膜促性腺激素方法学比对相关系数R2＝0.9935，孕酮方法学比对相关系数R2＝0.9941。
因此，化学发光免疫检测芯片检测的人绒毛膜促性腺激素和孕酮的浓度与单独检测人绒毛膜促性腺激素和孕酮的检测结果一致，表明本发明的化学发光免疫检测芯片可以同时进行激素蛋白的多项联检。
实施例2
利用本发明提供的化学发光免疫检测芯片同时检测血液样品中促黄体生成素、促卵泡生成素和抗缪勒氏管激素含量：
因检测的检测物为促黄体生成素、促卵泡生成素和抗缪勒氏管激素三种，因此，化学发光免疫检测芯片上可设置三个包被分区。三个包被分区表面的偶联基板上的复合材料层分别由表面氨基化的聚苯乙烯材料和相应的抗体偶联而成。其中一个包被分区表面的偶联基板上的复合材料层由表面氨基化的聚苯乙烯材料和LH抗体偶联而成，作为检测促黄体生成素的包被分区301；在另一个包被分区表面的偶联基板上的复合材料层由表面氨基化的聚苯乙烯材料和FSH抗体偶联而成，作为检测促卵泡生成素的包被分区303；在剩余的一个包被分区表面的偶联基板上的复合材料层由表面氨基化的聚苯乙烯材料和AMH抗体偶联而成，作为检测抗缪勒氏管激素的包被分区305。因此，如图4所示，该化学发光免疫检测芯片的复合反应区3依次包括检测促黄体生成素的包被分区301、反应隔离区三302、检测促卵泡生成素的包被分区303、反应隔离区四304、检测抗缪勒氏管激素的包被分区305、反应隔离区五306和标记物储藏区36。
将抽取的血液样品注入进样区1，血液样品通过过滤区2中的滤膜和除气膜后，进入复合反应区3，复合反应区3内血液样品依次经过检测促黄体生成素的包被分区301、反应隔离区三302、检测促卵泡生成素的包被分区303、反应隔离区四304、检测抗缪勒氏管激素的包被分区305、反应隔离区五306和标记物储藏区36，其中标记物储藏区36表面的醋酸纤维膜上冻干固定有碱性磷酸酶标记的LH抗体、碱性磷酸酶标记的FSH抗体和碱性磷酸酶标记的AMH抗体。
在循环挤压区4的驱动下，血样样品通过循环挤压区4不断在复合反应区3内循环流动，使血液样品中的促黄体生成素、促卵泡生成素和抗缪勒氏管激素充分与包被分区接触并被包被分区偶联的抗体捕获。且在血液样品不断流经标记物储藏区36时，使标记物储藏区36中的酶标记物复溶，然后与包被分区内捕获的促黄体生成素、促卵泡生成素和抗缪勒氏管激素结合。酶标记物与促黄体生成素、促卵泡生成素和抗缪勒氏管激素充分结合后，多余的血液样品和酶标记物通过排液阀6排出。用清洗液洗去未结合的酶标记物并通过排液阀6排出，然后加入发光底物CSPD与包被分区内的酶标记物反应，通过循环挤压区4使发光底物CSPD与酶标记物充分接触和反应，反应完成后对检测促黄体生成素的包被分区301、检测促卵泡生成素的包被分区303和检测抗缪勒氏管激素的包被分区305内的发光值分别进行检测，再通过主曲线二维码录入的定标曲线信息，换算出血液样品中促黄体生成素、促卵泡生成素和抗缪勒氏管激素的浓度。
收集50例来自不同患者的新鲜病人血清作为检测样本，用促黄体生成素、促卵泡生成素、抗缪勒氏管激素三项联检化学发光免疫检测芯片和罗氏黄体生成激素检测试剂盒(电化学发光法)、促卵泡成熟激素检测试剂盒(电化学发光法)、抗缪勒管激素检测试剂盒(电化学发光法)进行测试，为避免测量结果漂移，样本应随机排序进行测试，每个样本重复测试2次。
以罗氏系统测试浓度值为横坐标，以化学发光免疫检测芯片测试的浓度值为纵坐标，进行线性回归分析，得到方法学比对相关系数R2，检测结果如图5-7所示。促黄体生成素方法学比对相关系数R2＝0.9919，促卵泡生成素方法学比对相关系数R2＝0.9956，抗缪勒氏管激素方法学比对相关系数R2＝0.9924。
因此，化学发光免疫检测芯片检测的促黄体生成素、促卵泡生成素和抗缪勒氏管激素浓度与单独检测检测的促黄体生成素、促卵泡生成素和抗缪勒氏管激素的检测结果一致，表明本发明的化学发光免疫检测芯片可以同时进行激素蛋白的多项联检。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种化学发光免疫检测芯片在制备检测人体血液中激素蛋白含量的设备中的应用，其特征在于：所述化学发光免疫检测芯片包括芯片主体，设置于所述芯片主体内并连通的进样区和复合反应区；所述复合反应区按照进样方向包括依次连通的包被区和标记物储藏区；所述激素蛋白为人绒毛膜促性腺激素、孕酮、促黄体生成素、促卵泡生成素和抗缪勒氏管激素中的一种或几种；
所述包被区和所述标记物储藏区之间连通有反应隔离区；所述包被区包括若干依次连通的包被分区，每一个所述包被分区用于检测一种特定检测物；所述包被分区之间连通有反应隔离区；
所述包被分区表面设有可拆卸的偶联基板，所述偶联基板上设有复合材料层，所述复合材料层由表面氨基化的聚苯乙烯材料和相应的激素蛋白抗体偶联而成；所述标记物储藏区表面设有醋酸纤维膜，所述醋酸纤维膜上冻干固定有标记物；所述反应隔离区表面设有可拆卸的无结合力聚苯乙烯膜；
所述芯片主体内还设有循环挤压区和试剂储藏区；所述循环挤压区的首尾两端分别与所述复合反应区的首尾两端连通，用于驱动检测样品在所述复合反应区内循环流动；所述试剂储藏区与所述复合反应区的进样端连通，用于向所述复合反应区提供清洗液和检测底物；
所述标记物为酶标记物，所述检测底物为发光底物；
所述进样区与所述包被区之间连通过滤区；所述过滤区内设有滤膜和除气膜。
2.如权利要求1所述的化学发光免疫检测芯片在制备检测人体血液中激素蛋白含量的设备中的应用，其特征在于：所述酶标记物为碱性磷酸标记的抗体或抗原，所述发光底物为CSPD。
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