CN111549097A - 一种增强生物样品微量液体混合效果的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种增强生物样品微量液体混合效果的方法，其特征在于，在生物样品量为100μl以下的微量液体中添加5%的磁珠，该磁珠为磁性胶体材料，表面包覆二氧化硅，在水溶液中易于分散，表面带有负电荷，相互排斥，不团聚。使用本方法混合生物样品微量液体过程中增加磁珠，可以在不破坏生物样品的情况下，加速混合微量液体，提高液体中抗原抗体的反应速率，其中磁珠可反复使用，节约成本，而且该方法适用范围广，应用前景大。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种增强生物样品微量液体混合效果的方法。
背景技术
目前，生物样品微量液体混合一直是生物技术领域难以攻克的难题。国内外有很多学者也针对此方面展开了大量的研究工作。比如说，通过外部加入电、光或者声等刺激，促进液体的混合，然而，随着溶液的体积减少，混合所带来的难度陡然增加。现有的混合方法主要有以下缺点：（1）很难实现生物样品微量体积的混合，尤其是当液体的体积小于100μl时，很难达到有效的混合。（2）很难达到既实现混合又不破坏生物样品的目的。对于生物样品来说，外界刺激容易带来环境的剧烈变化，从而导致生物样品的失活，这些阻碍都限制了生物技术的发展。因此，发展一种增强生物样品微量液体混合效果的方法依然是生物技术领域面临的挑战。
发明内容
有鉴于此，本发明针对生物样品微量液体混合过程中存在的问题，提供一种增强生物样品微量液体混合效果的方法，使用本方法混合生物样品微量液体过程中增加磁珠，可以在不破坏生物样品的情况下，加速混合微量液体，提高液体中抗原抗体的反应速率，其中磁珠可反复使用，节约成本，而且该方法适用范围广，应用前景大。
具体技术方案如下：
一种增强生物样品微量液体混合效果的方法，其特征在于，在生物样品量为100μl以下的微量液体中添加5%的磁珠，该磁珠为磁性胶体材料，表面包覆二氧化硅，在水溶液中易于分散，表面带有负电荷，相互排斥，不团聚。
进一步，生物样品微量液体在混合搅拌过程中，将抗体耦合在磁性胶体材料表面，通过操控磁性胶体材料的运动，加速抗原抗体反应速率。
本发明附加的方面和优点将在下面的描述中进一步给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
图1中a为磁性纳米颗粒的形貌电镜扫描图；
图1中b为磁性纳米颗粒的中心点连线示意图；
图2为加磁珠混合搅拌前后的对比效果图。
具体实施方式
以下描述用于揭露本发明以使本领域技术人员能够实现本发明。以下描述中的优选实施例只作为举例，本领域技术人员可以想到其他显而易见的变型。在以下描述中界定的本发明的基本原理可以应用于其他实施方案、变形方案、改进方案、等同方案以及没有背离本发明的精神和范围的其他技术方案。
实施例1
取生物样品量50μl加入混匀仪器中,加入5%的纳米磁珠后搅拌，对比未加入磁珠的生物样品，搅拌前后的变化如图2所示，在相同搅拌条件下，加入纳米磁珠的生物样品在搅拌过程中表现出非常剧烈的变化。
实施例2
将本发明增强生物样品微量液体混合效果的方法用在DNA杂交反应中，可明显缩短杂交反应时间，提高效率，具体步骤做如下展示：
步骤一、DIG-cDNA探针的制备：
（1）将DIG-DNA探针用0.1 M PBS （pH 7.2） 浸 1 min。
（2) 0.1 M甘氨酸/0.1 M PBS 浸1 min。
（3) 0.3%TritonX-100/0.1 M PBS 浸2 min。
（4) 0.1 M PBS 洗2 min，加蛋白酶K（1 μg/ml），37℃孵育3min。
（5) 4%多聚甲醛浸1 min。
（6) 0.1 M PBS 洗 1min，浸入新鲜配制的含0.25%乙酸酐/0.1 M 三乙醇胺中2min。
步骤二、 预杂交：滴加适量预杂交液，同时加入5%磁珠，于42℃下反应 3 min。
（1）杂交：倾去预杂交液，在每张切片上滴加10-20 μl 杂交液（将探针变性后稀释在预杂交液中，0.5 ng/μl ），同时加5%磁珠，覆以盖玻片或蜡膜，42℃下反应10min。
（2）洗片：0.05 M PBS 洗 30s。
步骤三、 3% BSA/0.05 M PBS 包被，37℃ 下反应2 min。
步骤四、孵育：滴加抗地高辛-抗血清碱性磷酸酶复合物（以抗体稀释液1:5000稀释）4℃孵育1min。
步骤五、依次由0.05M PBS洗1min，TSM1洗1 min，新鲜配制TSM2洗1 min。
步骤六、 显色：在玻片上滴加适量显色液，4℃避光1min。
步骤七、封片、镜显：将玻片置于TE中1min以终止反应，再由酒精梯度脱水，二甲苯脱脂，中性树胶封片，之后显微镜下观察结果。
在DNA杂交试验中，加入纳米磁珠和未加入纳米磁珠的抗原抗体反应时间对比如下表，
| DNA杂交步骤 | 未加入纳米磁珠 | 加入纳米磁珠 |
| 冰冻切片与杂交前预处理 | - | - |
| 杂交 | 120min | 30min |
| 杂交后处理 | - | - |
| 杂交信号检测 | - | - |
显然使用本发明方法可极大的缩短反应时间，达到增强生物样品微量液体混合的效果。
本领域的技术人员应理解，上述描述及附图中所示的本发明的实施例只作为举例而并不限制本发明。本发明的目的已经完整并有效地实现。本发明的功能及结构原理已在实施例中展示和说明，在没有背离所述原理下，本发明的实施方式可以有任何变形或修改。
Claims (2)
1.一种增强生物样品微量液体混合效果的方法，其特征在于，在生物样品量为100μl以下的微量液体中添加5%的磁珠，该磁珠为磁性胶体材料，表面包覆二氧化硅，在水溶液中易于分散，表面带有负电荷，相互排斥，不团聚。
2.根据权利要求1所述的增强生物样品微量液体混合效果的方法，其特征在于，生物样品微量液体在混合搅拌过程中，将抗体耦合在磁性胶体材料表面，通过操控磁性胶体材料的运动，加速抗原抗体反应速率。
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