CN111548396B - 一种新型冠状病毒T细胞抗原表位肽、pMHC及其制备和应用 - Google Patents

一种新型冠状病毒T细胞抗原表位肽、pMHC及其制备和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种新型冠状病毒T细胞抗原表位肽、pMHC及其制备和应用。所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽，其氨基酸序列如SEQ IDNO:1～9任一所示。本发明发现了9种新型冠状病毒T细胞抗原表位肽，并利用其制备得到了pMHC复合物单聚体，进一步制备得到pMHC复合物多聚体，其可以用于新型冠状病毒感染康复者外周血内抗原特异性T细胞的检测，并用于体外的T细胞活化实验，这些新型冠状病毒T细胞抗原表位肽可以应用到新型冠状病毒相关的免疫检测中。

Description

一种新型冠状病毒T细胞抗原表位肽、pMHC及其制备和应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，更具体地，涉及一种新型冠状病毒T细胞抗原表位肽、pMHC及其制备和应用。
背景技术
新型冠状病毒是2019年底发生的新型传染性肺炎的病原体，已造成全球超过160多个国家和地区的大流行，死亡人数超过1万5千人。目前对病毒的来源尚不清楚，基因测序显示和蝙蝠SARS样冠状病毒、严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)，中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)高度同源。目前尚没有特效药物报道。人体免疫系统对新型冠状病毒的免疫应答机制，包括抗原识别、免疫清楚机制、免疫记忆保护机制等均不清楚。
根据对新型冠状病毒同源性较高的SARS等冠状病毒的研究显示，T细胞免疫应答在病毒感染后机体抗病毒防御以及机体免疫病理损伤过程中发挥了重要的作用，尤其是CD8+T细胞，其抗原特异性免疫活性11年后依然存在，说明了CD8+T细胞免疫应答在抗冠状病毒免疫防御中的重要作用及其在疫苗研发中的重要地位。CD8+T细胞免疫应答的第一步就是T细胞通过其表面的抗原识别受体特异性识别被病毒感染的细胞所递呈的抗原表位。因此，抗原表位是T细胞特异性识别病毒、发挥免疫免疫保护作用的重要关键分子，是免疫检测、免疫治疗和疫苗研发的关键靶向分子。
病毒感染细胞中的病毒抗原需要被抗原递呈系统处理递呈。病毒抗原被蛋白酶体降解之后，与抗原加工相关转运体(transporter associated with antigen processing，TAP)结合并由TAP选择性地将8～12个氨基酸的抗原肽转运至内质网内，与内质网内组装的主要组织相容性复合物(MHC)-I类分子的抗原结合槽结合形成抗原肽-MHC-I类分子复合物(pMHC)，在经过高尔基体将复合物转运到细胞膜上。CD8+T细胞通过T细胞受体(TCR)识别pMHC活化，杀灭病毒感染细胞、清除病毒，从而发挥抗病毒的细胞免疫作用。因此，可以利用计算机模拟技术，从蛋白酶体、TAP和MHC结合3个关键节点的参数来进行MHC-I(HLA-A2)类抗原表位的预测，从庞大的病毒基因组编码蛋白质中寻找T细胞抗原表位。
目前尚无任何T细胞抗原表位及其在免疫检测方面应用的报道或建议。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新型冠状病毒T细胞抗原表位肽、pMHC及其制备和应用。
本发明的第一个目的在于提供一种新型冠状病毒T细胞抗原表位肽
本发明的第二个目的在于提供一种含有所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽的pMHC复合物单聚体。
本发明的第三个目的在于提供一种含有所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽的pMHC复合物多聚体。
本发明的第四个目的在于提供一种含有所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽的pMHC复合物单聚体的制备方法。
本发明的第五个目的在于提供所述方法制备得到的pMHC复合物单聚体。
本发明的第六个目的在于提供一种含有所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽的pMHC复合物多聚体的制备方法。
本发明的第七个目的在于提供所述方法制备得到的pMHC复合物多聚体。
本发明的第八个目的在于提供所述的所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽、所述的pMHC复合物单聚体、所述的pMHC复合物多聚体、所述的pMHC复合物单聚体、所述的pMHC复合物多聚体中的任意一种或多种在制备检测新冠病毒检测试剂中的应用。
本发明的上述目的是通过以下方案予以实现的：
T2-A2是一种通过重组基因工程技术表达人MHC-I类分子HLA-A2的抗原递呈细胞系。只有有效的抗原表位才能被其递呈，从而在其细胞表面形成稳定的pMHC复合物，因此是鉴定筛选T细胞抗原表位的标准之一。
T细胞抗原表位单独无法应用，必须以pMHC单聚体或多聚体的方式进行应用开发。本发明利用基因工程重组的HLA-A2重链和轻链蛋白，和鉴定出的新型冠状病毒T细胞表位进行联合复性，制备了pMHC单聚体，并在此基础上，制备了荧光标记的四聚体(tetramer)，发现其可以有效识别新型冠状病毒感染康复者体内抗原特异性T细胞，并有效激活T细胞。证明新发现的新型冠状病毒T细胞抗原表位具有完全的生物学活性，以应用到免疫检测中。
一种新型冠状病毒T细胞抗原表位肽，其氨基酸序列如SEQ IDNO:1～9任一所示。
SEQ ID NO:1：FVFLVLLPLV；
SEQ ID NO:2：FQFCNDPFL；
SEQ ID NO:3：YQDVNCTEV；
SEQ ID NO:4：FTISVTTEI；
SEQ ID NO:5：VVFLHVTYV；
SEQ ID NO:6：YIWLGFIAGL；
SEQ ID NO:7：RLNEVAKNL；
SEQ ID NO:8：VMYSEFPAI；
SEQ ID NO:9：GMALSHYYV。
所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽的pMHC复合物单聚体。
所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽的pMHC复合物多聚体。
优选地，所述的pMHC复合物多聚体，其为四聚体(tetramer)。
更优选地，所述四聚体为被荧光标记的四聚体。
所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽的pMHC复合物单聚体的制备方法，将HLA-A2重链蛋白、HLA-A2轻链β2m蛋白和所述的所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽混合复性，纯化。
所述复性为将独立的单链蛋白质在特定的条件下重新组装成有活性的蛋白质复合物。这里是指将MHC的重链、MHC的轻链和抗原肽3种独立的组分复性组装成pMHC复合物。这里p代表peptide，MHC指组织相容性复合体。
优选地，HLA-A2重链蛋白、HLA-A2轻链β2m蛋白和所述的所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽的摩尔比为1：(1～5)：(1～20)。
更优选地，HLA-A2重链蛋白、HLA-A2轻链β2m蛋白和所述的所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽的摩尔比为1：2：10。
优选地，所述纯化为离子交换柱和分子筛纯化。
所述方法制备得到的pMHC复合物单聚体。
一种含有所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽的pMHC复合物多聚体的制备方法，将亲和素、生物素和所述的pMHC复合物单聚体混合，纯化。
优选地，亲和素、生物素和所述的pMHC复合物单聚体的摩尔比为1：(1～8)：(1～8)。
更优选地，亲和素、生物素和所述的pMHC复合物单聚体的摩尔比为1：4：4。
优选地，所述纯化为分子筛纯化。
所述方法制备得到的pMHC复合物多聚体。
所述的所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽、所述的pMHC复合物单聚体、所述的pMHC复合物多聚体、所述的pMHC复合物单聚体、所述的pMHC复合物多聚体中的任意一种或多种在制备检测新冠病毒检测试剂中的应用。
抗原表位可以和HLA-A2重链和HLA-A2轻链β2m蛋白组装成pMHC单聚体，并进一步组装成四聚体(tetramer)，并标记相应的荧光。可用于检测待检者外周静脉血中可以识别新冠病毒抗原的T淋巴细胞，可应用于：
1)检测是否感染了新冠病毒。只有在感染后，机体产生免疫应答之后才会生成抗原特异性T细胞。故该T细胞的检测代表曾经感染过新冠病毒。
2)检测是否具有抵抗新冠病毒感染的细胞免疫功能。同上，待检者体内检测到新冠病毒抗原特异性T细胞，代表机体已经产生了T细胞免疫功能，根据其比例，可以评价机体对新型冠状病毒感染的T细胞免疫功能强弱。
3)监测病情。可用于对密切接触者、医学观察者、疑似和确诊患者的病情变化监测。
4)预后判断。如果机体不能产生T细胞免疫应答，或抗原特异性T细胞比例持续减少，则预示预后不佳。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明发现了9种新型冠状病毒T细胞抗原表位肽，并利用其制备得到了pMHC复合物单聚体，进一步制备得到pMHC复合物多聚体，其可以用于新型冠状病毒感染康复者外周血内抗原特异性T细胞的检测，并用于体外的T细胞活化实验，这些新型冠状病毒T细胞抗原表位肽可以应用到新型冠状病毒相关的免疫检测中。
附图说明
图1为新型冠状病毒T细胞9种抗原表位的T2-A2鉴定。A：阳性和阴性对照梯度实验。negative(黑色)为阴性无关对照，HLA-A2不结合；positive为其他已知阳性多肽。B：新冠病毒抗原多肽的T2-A2鉴定实验。样品1：n-Sp1,2：n-Sp2,6：n-Sp6,7：n-Sp7,9：n-Sp9,11：n-Sp11,13：n-Sp13,16：o-Sp2,18：o-Sp4。C：三次实验重复的小结。
图2为新型冠状病毒T细胞抗原表位pMHC复合物的制备。A：HLA-A2轻链重组蛋白的表达和亲和纯化。M：分子marker；1：轻链诱导表达产物；2：几丁质亲和层析冲洗轻链产物；3：几丁质重悬轻链；4：DTT洗涤轻链；5：轻链最终产物洗脱。B：HLA-A2重链链重组蛋白的表达和亲和纯化。6：重链诱导表达产物；7：几丁质亲和层析冲洗重链产物；8：几丁质重悬重链；9：DTT洗涤重链；10：重链最终产物洗脱。C：pMHC复合物组装后的DEAE cellulose离子交换柱纯化(0.5M NaCl)。D：pMHC复合物组装后的分子筛(GE Superdex75pg)纯化。E：tetramer组装后的分子筛(GE Superdex75pg)纯化。
图3为新型冠状病毒T细胞抗原表位n-Sp1的pMHC复合物的免疫检测作用。上述制备的pMHC复合物四聚体分别用于HLA-A2阳性的新型冠状病毒康复者外周血PBMC的流式检测。A：流式细胞仪检测pMHC复合物四聚体(tetramer-PE)对新型冠状病毒感染康复者外周血中记忆性T细胞的检测。B：结果汇总显示所制备的n-Sp1 tetramer可以检测新型冠状病毒感染康复者体内的记忆性T细胞。
图4为新型冠状病毒T细胞抗原表位n-Sp2的pMHC复合物的免疫检测作用。上述制备的pMHC复合物四聚体分别用于HLA-A2阳性的新型冠状病毒康复者外周血PBMC的流式检测。A：流式细胞仪检测pMHC复合物四聚体(tetramer-PE)对新型冠状病毒感染康复者外周血中记忆性T细胞的检测。B：结果汇总显示所制备的n-Sp2 tetramer可以检测新型冠状病毒感染康复者体内的记忆性T细胞。
图5为新型冠状病毒T细胞抗原表位n-Sp6的pMHC复合物的免疫检测作用。上述制备的pMHC复合物四聚体分别用于HLA-A2阳性的新型冠状病毒康复者外周血PBMC的流式检测。A：流式细胞仪检测pMHC复合物四聚体(tetramer-PE)对新型冠状病毒感染康复者外周血中记忆性T细胞的检测。B：结果汇总显示所制备的n-Sp6 tetramer可以检测新型冠状病毒感染康复者体内的记忆性T细胞。
图6为新型冠状病毒T细胞抗原表位n-Sp7的pMHC复合物的免疫检测作用。上述制备的pMHC复合物四聚体分别用于HLA-A2阳性的新型冠状病毒康复者外周血PBMC的流式检测。A：流式细胞仪检测pMHC复合物四聚体(tetramer-PE)对新型冠状病毒感染康复者外周血中记忆性T细胞的检测。B：结果汇总显示所制备的n-Sp7 tetramer可以检测新型冠状病毒感染康复者体内的记忆性T细胞。
图7为新型冠状病毒T细胞抗原表位n-Sp9的pMHC复合物的免疫检测作用。上述制备的pMHC复合物四聚体分别用于HLA-A2阳性的新型冠状病毒康复者外周血PBMC的流式检测。A：流式细胞仪检测pMHC复合物四聚体(tetramer-PE)对新型冠状病毒感染康复者外周血中记忆性T细胞的检测。B：结果汇总显示所制备的n-Sp9 tetramer可以检测新型冠状病毒感染康复者体内的记忆性T细胞。
图8为新型冠状病毒T细胞抗原表位n-Sp11的pMHC复合物的免疫检测作用。上述制备的pMHC复合物四聚体分别用于HLA-A2阳性的新型冠状病毒康复者外周血PBMC的流式检测。A：流式细胞仪检测pMHC复合物四聚体(tetramer-PE)对新型冠状病毒感染康复者外周血中记忆性T细胞的检测。B：结果汇总显示所制备的n-Sp11 tetramer可以检测新型冠状病毒感染康复者体内的记忆性T细胞。
图9为新型冠状病毒T细胞抗原表位n-Sp13的pMHC复合物的免疫检测作用。上述制备的pMHC复合物四聚体分别用于HLA-A2阳性的新型冠状病毒康复者外周血PBMC的流式检测。A：流式细胞仪检测pMHC复合物四聚体(tetramer-PE)对新型冠状病毒感染康复者外周血中记忆性T细胞的检测。B：结果汇总显示所制备的n-Sp13 tetramer可以检测新型冠状病毒感染康复者体内的记忆性T细胞。
图10为新型冠状病毒T细胞抗原表位o-Sp2的pMHC复合物的免疫检测作用。上述制备的pMHC复合物四聚体分别用于HLA-A2阳性的新型冠状病毒康复者外周血PBMC的流式检测。A：流式细胞仪检测pMHC复合物四聚体(tetramer-PE)对新型冠状病毒感染康复者外周血中记忆性T细胞的检测。B：结果汇总显示所制备的o-Sp2 tetramer可以检测新型冠状病毒感染康复者体内的记忆性T细胞。
图11种新型冠状病毒T细胞抗原表位o-Sp4的pMHC复合物的免疫检测作用。上述制备的pMHC复合物四聚体分别用于HLA-A2阳性的新型冠状病毒康复者外周血PBMC的流式检测。A：流式细胞仪检测pMHC复合物四聚体(tetramer-PE)对新型冠状病毒感染康复者外周血中记忆性T细胞的检测。B：结果汇总显示所制备的o-Sp4 tetramer可以检测新型冠状病毒感染康复者体内的记忆性T细胞。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1新冠病毒HLA-A2限制性抗原表位的预测
一、实验方法
取2019-nCoV(MN908947.3)、SARS中国分离株(DQ182595.1)、MERS利雅得分离株(KF600612.1)和1997年美国普通冠状病毒分离株(KF530099.1)的spike(S)、membrane(M)和nucleocapsid(N)蛋白序列，以Clustal Omega进行序列对比。选取和SARS、MERS和普通冠状病毒序列不一致的表位进行后续研究。同时选取已知的HLA-A2限制性CD8+T细胞表位作为阳性对照。
二、实验结果
筛选大量出高效特异的T细胞抗原表位候选物。
实施例2新冠病毒HLA-A2限制性抗原表位的鉴定
一、实验方法
人工合成实施例1预测得到的多肽，配置成不同浓度，分别为0.625μM、1.25μM，2.5μM，5μM、10μM、20μM。取对数生长状态T2-A2细胞，种植到96孔板，每孔105，分布配置空白孔、阴性对照肽(GLQRLGYVL，来源于寨卡病毒基因编码)、阳性对照肽(甲型流感M1多肽，GILGFVFTL)和各合成抗原多肽，每组3个复孔，终体积200μL。37℃孵育4小时后离心洗涤两次，以FITC anti-human HLA-A2(β2m)抗体标记，4度避光孵育30分钟后，以流式细胞仪检测。实验共进行3次。
二、实验结果
结果如图1所示，结果显示9种抗原多肽均可以被抗原递呈细胞有效递呈。其信息如表1所示。
表1：新型冠状病毒T细胞抗原表位
编号 代码 长度 序列
1 n-Sp1 10 FVFLVLLPLV(SEQ ID NO:1)
2 n-Sp2 9 FQFCNDPFL(SEQ ID NO:2)
6 n-Sp6 9 YQDVNCTEV(SEQ ID NO:3)
7 n-Sp7 9 FTISVTTEI(SEQ ID NO:4)
9 n-Sp9 9 VVFLHVTYV(SEQ ID NO:5)
11 n-Sp11 10 YIWLGFIAGL(SEQ ID NO:6)
13 n-Sp13 9 RLNEVAKNL(SEQ ID NO:7)
16 o-Sp2 9 VMYSEFPAI(SEQ ID NO:8)
18 o-Sp4 9 GMALSHYYV(SEQ ID NO:9)
实施例3新冠病毒抗原表位pMHC复合物的制备
一、HLA-A2重链和轻链的制备
1、实验方法
基因工程技术重组构建通过SpeI及NdeI将重链HLA-A2(NCBI No.U02935.2)和轻链β2m(NCBI No.AY187687.1)两个目的基因分别连接至的原核表达载体pTXB1中，得到pTXB1-HLA-A2h和pTXB1-β2m原核表达质粒。将质粒通过热激法(42℃刺激90秒)转入BL21大肠杆菌中，并对其进行测序分析。经测序鉴定成功的菌液以30％甘油-20℃储存。将10μL甘油菌接种于4mL含有氨苄青霉素LB培养基中，37℃280rpm培养16～18小时，随后扩大培养至400ml 37℃280rpm培养4小时，经0.1mM IPTG 24℃280rpm诱导4小时表达后，冰上超声破碎50分钟(300W工作3秒停5秒)，4℃3000*g离心15分钟并收集上清。
经过0.45μm孔径滤膜过滤后的离心产物以低速通过几丁质亲和层析柱，并用15倍柱体积的上样缓冲液(20mM Tris-Hcl,0.5M NaCl,pH8.5)清洗层析柱，随后将2倍柱体积的洗脱缓冲液(加入50mM DTT上样缓冲液)快速冲洗层析柱，并将层析柱放入4℃冰箱中，36小时后洗脱缓冲液洗脱并根据OD280nm紫外吸收峰收集蛋白。
2、实验结果
经过纯化后，得到HLA-A2重链和轻链蛋白(图2A，B)。
二、抗原表位肽的pMHC复合物单体的制备
1、实验方法
将HLA-A2重链、HLA-A2轻链β2m和实施例2中的每个抗原表位多肽分别按照1：2：10的摩尔比逐步滴加至复性溶液(5M尿素，0.4M精氨酸，100mM Tris,3.7mM胱胺,6.3mM半胱胺，2mM EDTA)中进行复性，得到抗原表位肽的pMHC复合物单体。pMHC复合物单体经过DEAE离子交换柱进一步纯化，以0.5M NaCl洗脱，并根据OD280nm紫外吸收峰收集蛋白。随后经DEAE离子交换柱纯化后的蛋白根据分子量大小，通过Superdex 75pg分子筛纯化，以PBS洗脱，并根据OD280nm紫外吸收峰收集不同分子量蛋白。
2、实验结果
经过纯化后，得到抗原表位肽的pMHC复合物单体(图2C，D)。
三、荧光标记的新冠病毒T细胞抗原表位四聚体(tetramer)的制备
1、实验方法
由于表达的HLA-A2带有生物素结合位点，通过生物素和亲和素系统，将荧光标记的亲和素(PE-streptavidin)、生物素和pMHC复合物单体按照1：4：4的摩尔比例混合4℃避光孵育16～18小时，制备荧光标记的新冠病毒T细胞抗原表位tetramer。通过Superdex75pg分子筛纯化，以PBS洗脱，并根据OD280nm紫外吸收峰收集不同分子量蛋白。
二、实验结果
经过纯化后，得到荧光标记的新冠病毒T细胞抗原表位tetramer(图2E)。
实施例4抗原表位在新型冠状病毒感染康复者体内的应用
一、实验方法
抽取新型冠状病毒感染康复者复检时外周静脉血，分离外周血单个核细胞(PBMC)，鉴定其HLA亚型，共获得5株HLA-A2阳性康复者PBMC样品。分别选取上述的新冠病毒T细胞抗原表位多肽，和阴性对照多肽(GLQRLGYVL，来自寨卡病毒基因编码)分别通过构建其相应的tetramer来检测。
二、实验结果
结果显示，所选9株抗原表位tetramer均可以识别新型冠状病毒感染康复者体内产生的抗原特异性T细胞(图3-图11)，可进一步开发为免疫检测试剂。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。
序列表
<110> 暨南大学
<120> 一种新型冠状病毒T细胞抗原表位肽、pMHC及其制备和应用
<160> 9
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val
1 5 10
<210> 2
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
1 5
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val
1 5
<210> 4
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Phe Thr Ile Ser Val Thr Thr Glu Ile
1 5
<210> 5
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1 5
<210> 6
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu
1 5 10
<210> 7
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu
1 5
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Val Met Tyr Ser Glu Phe Pro Ala Ile
1 5
<210> 9
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Gly Met Ala Leu Ser His Tyr Tyr Val
1 5

Claims (9)

1.一种新型冠状病毒T细胞抗原表位肽，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1、2、4、6、8、和9任一所示。
2.一种含有权利要求1所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽的pMHC复合物单聚体。
3.一种含有权利要求1所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽的pMHC复合物多聚体。
4.根据权利要求3所述的pMHC复合物多聚体，其特征在于，其为四聚体。
5.一种含有权利要求1所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽的pMHC复合物单聚体的制备方法，其特征在于，将HLA-A2重链蛋白、HLA-A2轻链β2m蛋白和权利要求1所述的所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽混合复性，纯化。
6.权利要求5所述方法制备得到的pMHC复合物单聚体。
7.一种含有权利要求1所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽的pMHC复合物多聚体的制备方法，其特征在于，将亲和素、生物素和权利要求2所述的pMHC复合物单聚体混合，纯化。
8.权利要求7所述方法制备得到的pMHC复合物多聚体。
9.权利要求1所述的新型冠状病毒T细胞抗原表位肽、权利要求2所述的pMHC复合物单聚体、权利要求3所述的pMHC复合物多聚体、权利要求6所述的pMHC复合物单聚体、权利要求8所述的pMHC复合物多聚体中的任意一种或多种在制备检测新冠病毒检测试剂中的应用。
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