CN111544369A - 一种面部美容组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种面部美容组合物及其制备方法，涉及美容组合物的技术领域。所述美容组合物主要由以下重量份的组分制成：间充质干细胞外泌体20‑30份；去离子水40‑50份；甘油10‑13份；矿油8‑12份；羧甲基纤维素0.8‑1.2份；聚氧乙烯羊毛脂1‑2份；鲸蜡醇0.6‑1.4份；乙二胺四乙酸二钠盐0.02‑0.04份；红没药醇0.08‑0.2份；其他添加剂，所述其他添加剂包括以下重量份的组分：百合提取物0.3‑0.6份；丹参提取物0.2‑0.4份；海藻提取物0.3‑0.5份；银杏提取物0.1‑0.3份。本发明能够激发皮肤自有潜能、修复表皮细胞以及促进表皮细胞再生，具有较优的美容效果。

Description

一种面部美容组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及美容组合物的技术领域，尤其涉及一种面部美容组合物及其制备方法。

背景技术

外泌体是一种由细胞分泌形成的直径为30～150nm的膜性脂质小囊泡。外泌体囊泡具有脂质双分子层机构，囊泡内富含有多种蛋白质、脂质和核酸（如mRNA、miRNA等），细胞外泌体通过这种内容物的转运来调控靶细胞的增殖、迁移和凋亡等。现有研究表明，从间充质干细胞中得到的外泌体对表皮细胞免受氧化损伤具有较好的效果，其能够促进表皮细胞及成纤维细胞的增殖、调节皮肤胶原蛋白含量、改善皮肤缺水状态、使皮肤恢复弹性等。

例如，申请公布号为CN107080753A的中国专利公开了一种人脐带间充质干细胞源外泌体的美容组合物，包括以下组分：人充质间干细胞源外泌体冻干粉、甘油、芦荟汁；三者的重量比为1：1：10-20。上述公开专利中美容组合物具有制作简便的优势，在解决人的皮肤老化问题方面有一定的效果。

然而，该现有技术方案存在以下缺陷：上述公开专利中的甘油和芦荟汁均属于保湿剂，主要对皮肤起到保湿滋润作用，但是解决皮肤老化问题主要依靠人充质间干细胞源外泌体的作用，因此效果较为单一。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的一是提供一种面部美容组合物，其能够激发皮肤自有潜能、修复表皮细胞以及促进表皮细胞再生，具有较优的美容效果。

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种面部美容组合物，主要由以下重量份的组分制成：

间充质干细胞外泌体20-30份；

去离子水40-50份；

甘油10-13份；

矿油8-12份；

羧甲基纤维素0.8-1.2份；

聚氧乙烯羊毛脂1-2份；

鲸蜡醇0.6-1.4份；

乙二胺四乙酸二钠盐0.02-0.04份；

红没药醇0.08-0.2份；

其他添加剂，所述其他添加剂包括以下重量份的组分：

百合提取物0.3-0.6份；

丹参提取物0.2-0.4份；

海藻提取物0.3-0.5份；

银杏提取物0.1-0.3份。

通过采用上述技术方案，利用间充质干细胞外泌体促进表皮细胞的再生，改善皮肤状态；去离子水作为溶剂可溶解其他相关组分；利用甘油对皮肤起到保湿作用，同时甘油可作为溶剂，利于相关组分分散；利用矿油的高保湿能力，可增强美容组合物对皮肤的补水保湿作用；羧甲基纤维素作为一种增稠剂，可提高美容组合物的粘度和稳定性，改变美容组合物的流变形态；聚氧乙烯羊毛脂作为一种乳化剂，可促进油相组分与水相组分溶解混合均匀；鲸蜡醇作为一种乳化稳定剂，可提高乳液的稳定性；乙二胺四乙酸二钠盐作为一种优良的螯合剂，可将硬水软化，有效螯合硬水中的多种金属离子；红没药醇具有较优的消炎抗菌性能，可稳定皮肤状态，有利于皮肤保持良好的状态。

另外，利用百合提取物、丹参提取物、海藻提取物和银杏提取物的协同作用，使得制得的美容组合物具有较优的还原能力，以清除皮肤老化过程中产生的自由基（自由基具有极强的氧化能力，能够氧化细胞膜中的不饱和脂质，进而会使细胞裂解凋亡，过量的自由基会严重损伤皮肤细胞，进而会引起和加速皮肤衰老），同时还使得美容组合物能够促进成纤维细胞的增殖（成纤维细胞是皮肤真皮层中的主体细胞，成纤维细胞与其分泌的胶原纤维、弹性纤维以及基质成分一同构成了真皮的主体，其中胶原纤维和弹性纤维对维持皮肤的弹性和韧性具有重要的作用）。另外，成纤维细胞分泌的胞外基质如羟脯氨酸和透明质酸对维持皮肤正常的新陈代谢和延缓皮肤衰老具有重要的作用。与现有技术相比，本方案中的美容组合物具有较优的修复表皮细胞以及促进表皮细胞再生的功效，能够有效改善皮肤状态和延缓皮肤衰老。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述其他添加剂包括以下重量份的组分：

百合提取物0.4-0.5份；

丹参提取物0.3-0.4份；

海藻提取物0.4-0.5份；

银杏提取物0.2-0.3份。

通过采用上述技术方案，上述掺量能够使得百合提取物、丹参提取物、海藻提取物和银杏提取物达到较优的协同作用。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述其他添加剂包括以下重量份的组分：

百合提取物0.4份；

丹参提取物0.3份；

海藻提取物0.5份；

银杏提取物0.2份。

通过采用上述技术方案，上述掺量能够使得百合提取物、丹参提取物、海藻提取物和银杏提取物的配合使用能够达到最优的协同效果。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述间充质干细胞外泌体为脂肪间充质干细胞外泌体。

通过采用上述技术方案，脂肪间充质干细胞作为间充质干细胞的一种，其来源丰富、容易获得并且可大量获得，有利于企业大批量生产间充质干细胞外泌体。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述脂肪间充质干细胞外泌体的制备方法包括以下步骤：

S1：脂肪间充质干细胞的复苏：从液氮罐中取出脂肪间充质干细胞放入35℃-40℃水浴锅中融化，离心，倒弃上清液，重悬细胞沉淀，将细胞悬液接种到培养瓶中并将培养瓶放入C0₂培养箱中培养72h；

S2：脂肪间充质干细胞的传代培养：从步骤S1中的培养箱中取出培养瓶，转移培养瓶中的上清液，用胰酶消化培养瓶中的脂肪间充质干细胞，并利用由基础培养基和血清替代物制成的溶液浸润脂肪间充质干细胞，终止消化；

离心，吸弃上清液，重悬细胞沉淀，将细胞悬液接种至培养瓶中并将培养瓶放入C0₂培养箱中培养72h；

S3：脂肪间充质干细胞外泌体的收获：将步骤S2中的培养瓶转移至生物安全柜，收集上清液；超滤浓缩，得初级浓缩液；利用30%的蔗糖密度梯度对初级浓缩液进行离心，收集浓缩液，即得脂肪间充质干细胞外泌体。

通过采用上述技术方案，对收集到的含有间充质干细胞外泌体的上清液进行超滤浓缩和蔗糖密度梯度离心，可制得较高纯度的外泌体，降低混有其他杂质的可能性，从而降低有其他杂质影响外泌体功效的可能性。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述步骤S1中细胞的接种量为1.0*10⁶-1.5*10⁶个/瓶。

通过采用上述技术方案，在培养瓶中接种特定数量的细胞，有利于在特定时间内培养瓶中的细胞能够传代一定的次数，从而确保细胞的活力以及各种状态。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述步骤S2中细胞的接种量为1.3*10⁶-1.7*10⁶个/瓶。

通过采用上述技术方案，在培养瓶中接种特定数量的细胞，有利于在特定时间内培养瓶中的细胞能够传代一定的次数，从而确保细胞的活力以及各种状态。

本发明的目的二是提供一种面部美容组合物的制备方法，包括以下步骤：

包括以下步骤：

提供以下四组组分：

A组：水、甘油、乙二胺四乙酸二钠盐和羧甲基纤维素；

B组：聚氧乙烯羊毛脂、鲸蜡醇、红没药醇和矿油；

C组：间充质干细胞外泌体；

D组：百合提取物、丹参提取物、海藻提取物和银杏提取物；

S1、将A组组分置于水相锅中，加热到79-85℃，转速50-100r/min，搅拌20-30min得一级混合物；

S2、将B组组分置于油相锅中，加热到75-80℃，转速50-100r/min，搅拌20-30min得二级混合物；

S3、将步骤S1中的一级混合物加入到二级混合物混合中，搅拌10min后，降温到35-40℃，加入C组组分，转速25-50r/min，搅拌15-20min，得三级混合物；

S4、将D组组分经过预处理后加入到S3中的三级混合物中，转速25-50r/min，搅拌30-45min，即得所述的面部美容组合物。

通过采用上述技术方案，将油相组分和水相组分分别溶解后再进行混合，有利于各组分混合均匀，最后添加外泌体和其他添加剂，使得制得的美容组合物具有较优的功效。

本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述步骤S4中D组组分的预处理包括：将D组组分与0.8-1.2份甘油一起研磨5-8min。

通过采用上述技术方案，可降低D组组分与其他组分不相混溶的可能性，D组组分先与甘油混合，使得D组组分能够与其他组分均匀混合，从而使得制得的美容组合物能够发挥较优的功效。

综上所述，本发明包括以下至少一种有益技术效果：

1.在本发明中，利用间充质干细胞外泌体和其他添加剂，使得美容组合物能够激发皮肤自有潜能、修复表皮细胞以及促进表皮细胞再生；

2.通过添加百合提取物、丹参提取物、海藻提取物和银杏提取物，使得制得的美容组合物对皮肤具有多重功效，可有效改善皮肤状态、促进表皮细胞再生。

具体实施方式

实施例一

本发明公开了一种面部美容组合物，由以下组分制成：间充质干细胞外泌体20.68g；去离子水50g；甘油13g；矿油12g；羧甲基纤维素1.2g；聚氧乙烯羊毛脂1g；鲸蜡醇0.9g；乙二胺四乙酸二钠盐0.02g；红没药醇0.1g；百合提取物0.3g；丹参提取物0.4g；海藻提取物0.3g；银杏提取物0.1g。

实施例二

本发明公开了一种面部美容组合物，由以下组分制成：间充质干细胞外泌体30g；去离子水42.87g；甘油12g；矿油10g；羧甲基纤维素1g；聚氧乙烯羊毛脂1.5g；鲸蜡醇1g；乙二胺四乙酸二钠盐0.03g；红没药醇0.2g；百合提取物0.4g；丹参提取物0.3g；海藻提取物0.5g；银杏提取物0.2g。

实施例三

本发明公开了一种面部美容组合物，由以下组分制成：间充质干细胞外泌体25g；去离子水47.21g；甘油10g；矿油12g；羧甲基纤维素0.8g；聚氧乙烯羊毛脂2g；鲸蜡醇1.4g；乙二胺四乙酸二钠盐0.04g；红没药醇0.15g；百合提取物0.5g；丹参提取物0.2g；海藻提取物0.4g；银杏提取物0.3g。

实施例一至实施例三中的间充质干细胞外泌体均为脂肪间充质干细胞外泌体，脂肪间充质干细胞外泌体均采用以下制备方法制得：

溶液配置：

溶液C：基础培养基+血清替代物，血清替代物含量为4%；

溶液D：20ml0.25%胰酶中加入30ml生理盐水混匀，即得溶液D。

S1、脂肪间充质干细胞的复苏

（1）向5根15ml离心管A中分别倒入基础培养基10ml，预热到37℃，静置待用；

（2）从液氮罐中取出装有脂肪间充质干细胞的冻存管快速放入37℃水浴锅中，摇动冻存管使得冻存液快速融化；用5ml移液管将脂肪间充质干细胞全部转移到离心管A中，并用1ml基础培养基冲洗冻存管，冲洗液倒入离心管A中；

（3）放入离心机，300g离心5min，吸弃上清液，震散细胞沉淀，向离心管A中加入基础培养基，定容至10ml，颠倒混匀；放入离心机，300g离心5min，吸弃上清液，震散细胞沉淀；

（4）向离心管A中加入5ml溶液C，颠倒混匀，用5ml移液管吸取0.5ml细胞悬液进行细胞计数；

（5）准备5个T-175培养瓶A，分别加入28ml溶液C；从（4）中的离心管A中取细胞悬液接种到T-175培养瓶A中，细胞接种量为1.2*10⁶个/瓶；

（6）从5个T-175培养瓶中分别吸取2ml细胞悬液，加入到5ml离心管B中，制成2ml检样，送至质检部以检查是否有微生物污染；

（7）将T-175培养瓶A放入CO₂培养箱中培养72h。

S2、脂肪间充质干细胞的传代培养

（1）S1中T-175培养瓶A中的细胞汇合度达到80%以上时，从培养箱中取出S1中的T-175培养瓶A，转移至生物安全柜，平稳叠放；将T-175培养瓶A中的上清液移到无菌血清瓶A中，从无菌血清瓶A中吸取上清液4ml，加入到5ml离心管C中，制成4ml检样，送至质检部以检查是否有微生物污染；

（2）分别向5个T-175培养瓶A中加入10ml生理盐水，晃动瓶身，润洗瓶底，吸弃洗液；

（3）用25ml移液管吸取溶液D，按照5ml/瓶量沿T-175培养瓶A非细胞面内壁加入，迅速晃动瓶身，充分浸润细胞面后，平放瓶身；

（4）显微镜下观察T-175培养瓶A中的细胞变圆后，竖立瓶身，用25ml移液管吸取溶液C，按照5ml/瓶量沿T-175培养瓶A非细胞面内壁加入，晃动瓶身，均匀浸润细胞面，终止消化；

（5）用25ml移液管将5个T-175培养瓶A中的细胞悬液吸出分别平均汇集至5根50ml离心管D中；

（6）将（5）中的离心管D放入离心机，300g离心5min，吸弃上清液，震散细胞沉淀；向离心管D中倒入基础培养基，定容至50ml，颠倒混匀；放入离心机，300g离心5min，吸弃上清液，震散细胞沉淀；

（7）并管：取（6）中的其中一根离心管D，用25ml移液管加入20ml基础培养基，晃动管身，重悬细胞沉淀，转移至一根250ml的离心管E中，重复转移，直至将所有细胞并入离心管E中；

（8）洗管：重复（7）操作，将清洗液汇集至离心管E中；

（9）向离心管E中倒入溶液C，定容到200ml，颠倒混匀；吸取0.5ml细胞悬液进行细胞计数；可根据细胞计数结果，继续向离心管E中倒入溶液C，调整细胞密度为1*10⁶个/ml；

（10）用25ml移液管吸取溶液C，按照28ml/瓶量加入5个T-175培养瓶B中，平稳叠放，待用；

（11）用5ml移液管吸取（9）中的细胞悬液，按照1.5ml/瓶量接种至（10）中的T-175培养瓶B中，细胞接种量为1.5*10⁶个/瓶；

（12）随机选取（11）中的3个T-175培养瓶B，用5ml移液管从每个T-175培养瓶B中分别吸取0.5ml细胞悬液，分别加入离心管F中，制成1.5ml检样，送至质检部以检查是否有微生物污染；

（13）将（11）中的T-175培养瓶B放入CO₂培养箱中培养72h。

S3、脂肪间充质干细胞外泌体的收获

（1）S2中T-175培养瓶B中的细胞汇合度达到80%以上时，从CO₂培养箱中取出S2中的T-175培养瓶B，转移至生物安全柜，平稳叠放，用25ml移液管将T-175培养瓶B中的上清液移到无菌血清瓶B，从无菌血清瓶B中吸取上清液4ml；加入到5ml离心管G中，制成4ml检样，送至质检部以检查是否有微生物污染；

（2）对步骤（1）中的上清液利用超滤膜进行超滤浓缩，1000g离心16min，得到初级浓缩液；

（3）利用30%的蔗糖密度垫对（2）中的初级浓缩液进行进一步离心，在4℃温下90000g密度梯度离心130min，收集底部缓冲垫；

（4）对（3）中的缓冲垫利用200μL PBS溶液洗涤，收集浓缩液，即得到脂肪间充质干细胞外泌体。

注：除了离心操作，步骤S1、步骤S2和步骤S3均在生物安全柜内进行。

实施例一至实施例三中面部美容组合物的制备方法均采用以下步骤：

提供以下四组组分：

A组：水、甘油、乙二胺四乙酸二钠盐和羧甲基纤维素；

B组：聚氧乙烯羊毛脂、鲸蜡醇、红没药醇和矿油；

C组：间充质干细胞外泌体；

D组：百合提取物、丹参提取物、海藻提取物和银杏提取物；

S1、将A组组分置于水相锅中，加热到80℃，转速60r/min，搅拌25min得一级混合物；

S2、将B组组分置于油相锅中，加热到80℃，转速60r/min，搅拌25min得二级混合物；

S3、将步骤S1中的一级混合物加入到二级混合物中，搅拌10min后，降温到37℃，加入C组组分，转速40r/min，搅拌16min，得三级混合物；

S4、将百合提取物、丹参提取物、海藻提取物和银杏提取物加入到1.2g甘油中，研磨6min后，再加入到S3中的三级混合物中，转速30r/min，搅拌30min，即得面部美容组合物。

实施例一至实施例三中：脂肪间充质干细胞购买自武汉普诺赛生命科技有限公司；去离子水购买自上海毕得医药科技有限公司；甘油购买自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；矿油购买自上海麦克林生化科技有限公司；羧甲基纤维素购买自上海源叶生物科技有限公司；聚氧乙烯羊毛脂购买自成都圣美凯生物科技有限公司；鲸蜡醇购买自上海皓鸿生物医药科技有限公司；乙二胺四乙酸二钠盐购买自上海皓鸿生物医药科技有限公司；红没药醇购买自天津希恩思生化科技有限公司；百合提取物购买自上海昕凯医药科技有限公司；丹参提取物购买自上海昕凯医药科技有限公司；海藻提取物购买自上海昕凯医药科技有限公司；银杏提取物购买自武汉福鑫化工有限公司。

基础培养基选择血琼脂基础培养基，购买自麦卡希试剂；血清替代物购买自上海连桥生物科技有限公司；胰酶购买自上海麦克林生化科技有限公司；生理盐水购买自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；离心管购买自济南鸿飞生物技术有限公司；水浴锅购买自上海实验试剂有限公司；移液管购买自上海实验试剂有限公司；离心机购买自济南来宝实验室设备有限公司；T-175培养瓶购买自上海君瑞生物科技有限公司；CO2培养箱苏州牧笛自动化科技有限公司；无菌血清瓶购买自西宝生物科技（上海）股份有限公司；生物安全柜购买自北京元唐盛兴科技有限公司；显微镜购买自安阳农投行生物科技有限公司；超滤膜购买自杭州凯洁膜分离技术有限公司；30%的蔗糖购买自上海如吉生物科技发展有限公司。

对照例一

本对照例与实施例二的区别在于，本对照例中百合提取物的添加量为0.1g；丹参提取物的添加量为0.1g；海藻提取物的添加量为0.6g；银杏提取物的添加量为0.4g；水的添加量为43.07g。

对照例二

本对照例与实施例二的区别在于，本对照例不添加百合提取物、丹参提取物、海藻提取物和银杏提取物。

对照例三

本对照例与实施例二的区别在于，本对照例不添加百合提取物，同时另外添加与百合提取物等量的丹参提取物。

对照例四

本对照例与实施例二的区别在于，本对照例不添加丹参提取物，同时另外添加与丹参提取物等量的百合提取物。

对照例五

本对照例与实施例二的区别在于，本对照例不添加海藻提取物，同时另外添加与海藻提取物等量的银杏提取物。

对照例六

本对照例与实施例二的区别在于，本对照例不添加银杏提取物，同时另外添加与银杏提取物等量的海藻提取物。

对照例七

一种人脐带间充质干细胞源外泌体的美容组合物，包括以下组分：参照实施例一中间充质干细胞外泌体的制备方法制得的的人脐带间充质干细胞外泌体10g、甘油10g和芦荟汁150g。

本对照例中人脐带间充质干细胞外泌体的美容组合物的制备方法：准确称取人脐带间充质干细胞源外泌体、甘油和芦荟汁，混合搅拌至透明，然后依次经0.45um、0.22um的微孔滤膜过滤，即得人脐带间充质干细胞源外泌体的美容组合物。

本对照例中人脐带间充质干细胞购买自上海联迈生物工程有限公司；甘油购买自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；芦荟汁购买自上海利盛化学品有限公司；微孔滤膜购买自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

将实施例一至实施例三、对照例一至对照例七中制得的美容组合物进行功效测试，试验过程如下：

试验一：DPPH自由基清除试验

量取1ml各实施例和各对照例中的美容组合物，分别置于试管中并对试管进行标号，向试管内加入1ml浓度为0.2mmol/L的DPPH-无水乙醇溶液，混匀后于室温下静置25min，以蒸馏水为参比，在分光光度计517nm处测其吸光值，记为A₁；用1ml的无水乙醇代替DPPH-无水乙醇溶液，同等条件下测定吸光值，记为A₂；用1ml的无水乙醇代替美容组合物，同等条件下测定吸光值，记为A₀。各实施例和各对照例中美容组合物的自由基清除能力用百分数表示，其计算方法为：清除能力=［1-(A₁- A₂)/ A₀］*100%。

试验二：促进成纤维细胞增殖的能力测试

参照上述脂肪间充质干细胞的传代培养的操作方法对成纤维细胞进行传代培养操作，传代培养之前，先量取1ml各实施例和各对照例中的美容组合物加入到培养瓶中。然后进行如下操作：

（1）选择各实施例和各对照例中的培养瓶各五瓶，利用贝克曼库尔特细胞存活率分析仪Vi-CELLXR对各培养瓶中的成纤维细胞进行计数；

（2）在细胞培养48h后将各培养瓶中的细胞收获，并利用贝克曼库尔特细胞存活率分析仪Vi-CELLXR对各培养瓶中的成纤维细胞进行计数，各实施例和各对照例中成纤维细胞的存活率取五瓶培养瓶的平均值；

（3）针对培养48h后收获的细胞进行上清液中羟脯氨酸浓度的测定，具体操作如下：

a）称取羟脯氨酸标准品并稀释成5个浓度梯度标准液：0.5、1、5、10、20μg/ml备用；分别吸取标准液1ml，加入1mL柠檬酸缓冲液和1mL0.05mol/L氯胺T溶液，室温(25℃) 氧化10min后，加入高氯酸1mL(3.5mol/L)，放置10min，加入对二甲基氨基苯甲醛试剂1mL，在65℃水浴显色10min，冷却后在560nm处测吸光度。以羟脯氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，求出回归方程。

b）吸取各实施例和对照例中的上清液1ml，参照a)操作步骤进行测定各上清液的吸光度，并依据回归方程求出各上清液中羟脯氨酸的浓度。

（4）针对培养48h后收获的细胞进行上清液中透明质酸浓度的测定，具体操作如下：

a）在20ml比色管中加入一定量透明质酸标准工作液（100μg/ml），加12ml阿利蓝染料溶液，稀释至刻度，作为标准样液管；另加与透明质酸标准液同体积的水，加2ml阿利蓝染料溶液，稀释至刻度，作为显色试剂管；再另加与透明质酸标准液同体积的水，加12ml0.5mol/L透明质酸溶液，稀释至刻度，作为参比溶液管。此三种溶液均在25℃下恒温10min后，在最佳吸收波长480nm处，用2cm比色皿测其吸光度。

b）称取透明质酸标准品并稀释成5个浓度梯度标准液：0.5、1、5、10、20μg/ml备用，参照a)的操作步骤进行吸光度的测定，并绘制标准曲线。

c）量取各上清液1ml，参照a)的操作步骤进行吸光度的测定，并依据标准曲线计算出各上清液中透明质酸的浓度。

试验一至试验二的试验结果如表一：

由表一可知，与对照例七相比，实施例一至实施例三中美容组合物具有较优的清除DPPH自由基的效果，可有效促进成纤维细胞的扩增，同时能够促进成纤维细胞合成分泌羟脯氨酸和透明质酸。因此，美容组合物在用于皮肤抗衰老的过程中，能够降低自由基对皮肤细胞的氧化，减缓皮肤的衰老，同时还能够促进真皮中成纤维细胞的增殖，使得成纤维细胞与其分泌的胶原纤维和弹性纤维能够维持皮肤的弹性和韧性。另外，还能促进成纤维细胞合成分泌羟脯氨酸和透明质酸，从而进一步改善皮肤状态和延缓皮肤衰老。

与对照例一相比，实施例一至实施例三中美容组合物在对DPPH自由基的清除、促进成纤维细胞增殖以及促进成纤维细胞合成分泌羟脯氨酸和透明质酸方面均具有较优的效果，表明参照本发明公开的掺量进行添加百合提取物、丹参提取物、海藻提取物和银杏提取物能够有效增强美容组合物在改善皮肤状态和延缓皮肤衰老方面的效果。

与对照例二至对照例六相比，实施例一至实施例三中美容组合物具有较优的效果，表明本发明中添加的百合提取物、丹参提取物、海藻提取物和银杏提取物能够协同作用，有效增强美容组合物在对DPPH自由基的清除、促进成纤维细胞增殖以及促进成纤维细胞合成分泌羟脯氨酸和透明质酸方面的功效。

试验三：

（1）选择35名40岁女性志愿者，平均分为7组，取适量实施例一至实施例七制得的美容组合物分别涂抹在7组女性志愿者的手臂上，观察24h，无异样后开始面部使用；

（2）选择CBS皮肤检测仪分别对7组志愿者进行皮肤检测，检测时间点为使用美容组合物之前、使用美容组合物2周、使用美容组合物4周以及使用美容组合物8周，根据检测结果计算出35名女性志愿者面部的弹性、水分、皱纹和毛孔的改善情况，改善情况=（初始值-最终值）/初始值*100%，每组均取平均值，结果如表二：

由表二可知，与对照例七相比，实施例一至实施三中志愿者面部的弹性、水分、毛孔大小和皱纹的改善情况均优于对照例七，表明本发明公开的面部美容组合物可有效改善皮肤情况，能够激发皮肤自有潜能以及修复表皮细胞。

与对照例二至对照例六相比，实施例一至实施例三中志愿者面部的改善情况优于对照例二至对照例六，表明百合提取物、丹参提取物、海藻提取物以及银杏提取物的配合使用能够增强美容组合物对皮肤的改善效果，对皮肤具有修复作用。

本具体实施方式的实施例均为本发明的较佳实施例，并非依此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种面部美容组合物，其特征在于：主要由以下重量份的组分制成：

间充质干细胞外泌体20-30份；

去离子水40-50份；

甘油10-13份；

矿油8-12份；

羧甲基纤维素0.8-1.2份；

聚氧乙烯羊毛脂1-2份；

鲸蜡醇0.6-1.4份；

乙二胺四乙酸二钠盐0.02-0.04份；

红没药醇0.08-0.2份；

其他添加剂，所述其他添加剂包括以下重量份的组分：

百合提取物0.3-0.6份；

丹参提取物0.2-0.4份；

海藻提取物0.3-0.5份；

银杏提取物0.1-0.3份。

2.根据权利要求1所述的一种面部美容组合物，其特征在于：所述其他添加剂包括以下重量份的组分：

百合提取物0.4-0.5份；

丹参提取物0.3-0.4份；

海藻提取物0.4-0.5份；

银杏提取物0.2-0.3份。

3.根据权利要求2所述的一种面部美容组合物，其特征在于：所述其他添加剂包括以下重量份的组分：

百合提取物0.4份；

丹参提取物0.3份；

海藻提取物0.5份；

银杏提取物0.2份。

4.根据权利要求1所述的一种面部美容组合物，其特征在于：所述间充质干细胞外泌体为脂肪间充质干细胞外泌体。

5.根据权利要求4所述的一种面部美容组合物，其特征在于：所述脂肪间充质干细胞外泌体的制备方法包括以下步骤：

S1：脂肪间充质干细胞的复苏：从液氮罐中取出脂肪间充质干细胞放入35℃-40℃水浴锅中融化，离心，倒弃上清液，重悬细胞沉淀，将细胞悬液接种到培养瓶中并将培养瓶放入C0₂培养箱中培养72h；

S2：脂肪间充质干细胞的传代培养：从步骤S1中的培养箱中取出培养瓶，转移培养瓶中的上清液，用胰酶消化培养瓶中的脂肪间充质干细胞，并利用由基础培养基和血清替代物制成的溶液浸润脂肪间充质干细胞，终止消化；

离心，吸弃上清液，重悬细胞沉淀，将细胞悬液接种至培养瓶中并将培养瓶放入C0₂培养箱中培养72h；

S3：脂肪间充质干细胞外泌体的收获：将步骤S2中的培养瓶转移至生物安全柜，收集上清液；超滤浓缩，得初级浓缩液；利用30%的蔗糖密度梯度对初级浓缩液进行离心，收集浓缩液，即得脂肪间充质干细胞外泌体。

6.根据权利要求5所述的一种面部美容组合物，其特征在于：所述步骤S1中细胞的接种量为1.0*10⁶-1.5*10⁶个/瓶。

7.根据权利要求5所述的一种面部美容组合物，其特征在于：所述步骤S2中细胞的接种量为1.3*10⁶-1.7*10⁶个/瓶。

8.一种制备根据权利要求1-7任一项所述的一种面部美容组合物的方法，其特征在于包括以下步骤：

提供以下四组组分：

A组：水、甘油、乙二胺四乙酸二钠盐和羧甲基纤维素；

B组：聚氧乙烯羊毛脂、鲸蜡醇、红没药醇和矿油；

C组：间充质干细胞外泌体；

D组：百合提取物、丹参提取物、海藻提取物和银杏提取物；

S1、将A组组分置于水相锅中，加热到79-85℃，转速50-100r/min，搅拌20-30min得一级混合物；

S2、将B组组分置于油相锅中，加热到75-80℃，转速50-100r/min，搅拌20-30min得二级混合物；

S3、将步骤S1中的一级混合物加入到二级混合物混合中，搅拌10min后，降温到35-40℃，加入C组组分，转速25-50r/min，搅拌15-20min，得三级混合物；

S4、将D组组分经过预处理后加入到S3中的三级混合物中，转速25-50r/min，搅拌30-45min，即得所述的面部美容组合物。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述步骤S4中D组组分的预处理包括：将D组组分与0.8-1.2份甘油一起研磨5-8min。