CN111521776A - 多通道成像定量荧光免疫方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了多通道成像定量荧光免疫方法，包括有检测装置及其检测方法：检测装置包括：数字相机和试剂卡，数字相机下端转动安装有镜头，镜头底部安装有滤色片，镜头底部转动安装有镜片固定架，镜片固定架底部设置有若干组LED激光灯；检测方法的步骤如下：步骤一、荧光微球标记检测病毒抗体。步骤二、制备包被有抗检测病毒抗体的免疫层析试纸条。步骤三、制备洗脱液：将需要检测的人体鼻咽部拭子取样进行洗脱。步骤四、荧光免疫观察。本发明通过多组结果的共同展示，从而可以成倍的提升免疫检测的效率，可以为后续的疾病治疗留出更多的时间，该方法快速、简单、灵敏，成本低，易于推广。
Description
技术领域
本发明涉及医疗荧光检测领域，特别涉及多通道成像定量荧光免疫方法。
背景技术
荧光检测是一种自然发光反应，通过荧光素酶与ATP进行反应，可检测人体细胞、细菌、霉菌、食物残渣。荧光检测的主要缺点在于只有少数化合物产生荧光。大多数的分子不发荧光，但含有可衍生的官能团用于合成能发荧光的衍生物。
现有的病毒检测方法效率低下，需要较长的时间来进行检测，从而对感染程度进行明确的判断，容易导致急性病症的加重，为此，我们提出多通道成像定量荧光免疫方法来解决上述问题。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
多通道成像定量荧光免疫方法，包括有检测装置及其检测方法：
检测装置包括：数字相机和试剂卡，所述数字相机为仪器级数字相机，所述数字相机下端转动安装有镜头，所述镜头底部安装有滤色片，通过滤色片对数字相机内发出的光进行过滤，所述镜头底部转动安装有镜片固定架，所述镜片固定架底部设置有若干组LED激光灯。
进一步的，所述试剂卡包括有侧视面板，所述侧视面板为塑料材质，所述侧视面板左侧设置有加样区，所述侧视面板右侧设置有检测区，所述检测区等距离分布有若干组测试条，所述加样区中部设置有若干组加样口，所述加样口用于将检测样本注入，每一组所述加样口对应有一组测试条。
进一步的，所述测试条设置有检测线和质控线，所述质控线为设计检测的标准反应结果，所述检测线为实际的样品检测结果，通过将质控线和检测线进行对比，可以直观的对测试结果进行观察，所述试剂卡可以实现同时对多组样品的同时检测，通过多组结果的共同展示，从而可以成倍的提升免疫检测的效率，可以为后续的疾病治疗留出更多的时间。
上述检查装置的检测方法的步骤如下：
步骤一、荧光微球标记检测病毒抗体
用活化液替换原有保存液：离心－去上清－活化液超声重悬；加入EDC进行活化，EDC是个可溶于水的碳二亚胺，在酰胺合成中用作羧基的活化试剂，也用于活化磷酸酯基团、蛋白质与核酸的交联和免疫偶连物的制取；称取一定量的EDC，溶解后加入微球溶液中旋转反应15min；去除未反应或残余的反应物：离心－去上清－超纯水超声重悬，重复3次；用反应液超声重悬微球，然后加入一定量的待标记蛋白，避光反应1～4小时；去除未偶联的蛋白：离心－去上清－超声重悬，重复1～2次，2～8℃保存备用。
步骤二、制备包被有抗检测病毒抗体的免疫层析试纸条
将检测病毒抗体及羊抗鼠二抗喷涂在试剂卡，具体是涂抹在加样区，37℃干燥箱干燥过夜。
步骤三、制备洗脱液
将需要检测的人体鼻咽部拭子取样进行洗脱，洗脱液包括：表面活性剂1mM～3mM；缓冲液10mM～1M；数字相机蛋白酶抑制剂3mM～10mM。
步骤四、荧光免疫观察
取出所需免疫层析试纸条，室温放置15min；每孔加入50-70ull质控品，置于荧光检测仪孵育仓；15min后，打开数字相机自动检测，通过将质控线和检测线进行对比，可以直观的对测试结果进行观察。
进一步的，所述步骤二中将涂抹样品后试机卡荧光微球标记抗检测病毒抗体偶联物喷在结合垫上，30℃真空干燥2h；加干燥剂于4～30℃密封保存。
进一步的，所述步骤三中的表面活性剂为Tween镜头20，聚乙二醇辛基苯基醚缓冲液和十二烷基磺酸钠按照5:3:1的比例均匀混合后得到，所述Tween镜头20，用来稳定胶体金或蛋白质；所述聚乙二醇辛基苯基醚缓冲液作为润湿剂，协助染色；所述十二烷基磺酸钠属阴离子表面活性剂，具有优异的渗透、洗涤、润湿、去污和乳化作用；所述的缓冲液为磷酸盐溶液，三羟甲基氨基甲烷溶液或碳酸盐溶液。
进一步的，所述步骤四中检测结果以校准品浓度为横坐标，发光值为纵坐标，采用四参数逻辑拟合法得到标准曲线方程，根据标准曲线方程计算待检样本中甲乙流感病毒检测含量。
综上所述，本发明具有以下有益效果：
所述质控线为设计检测的标准反应结果，所述检测线为实际的样品检测结果，通过将质控线和检测线进行对比，可以直观的对测试结果进行观察，所述试剂卡可以实现同时对多组样品的同时检测，通过多组结果的共同展示，从而可以成倍的提升免疫检测的效率，可以为后续的疾病治疗留出更多的时间，该方法快速、简单、灵敏，成本低，易于推广。
附图说明
图1是本实施例1中爆炸结构示意图；
图2是本实施例1中试剂卡的结构示意图；
图3是本实施例2中试剂卡的结构示意图。
图中，1、数字相机；2、镜头；3、滤色片；4、镜片固定架；5、LED激光灯；6、试剂卡；61、侧视面板；62、加样区；63、检测区；64、测试条；65、检测线；66、质控线；67、加样口。
具体实施方式
以下结合附图对本发明作进一步详细说明。
其中相同的零部件用相同的附图标记表示。需要说明的是，下面描述中使用的词语“前”、“后”、“左”、“右”、“上”和“下”指的是附图中的方向，词语“底面”和“顶面”、“内”和“外”分别指的是朝向或远离特定部件几何中心的方向。
实施例1
参照图1所示，为本发明较优实施例中多通道成像定量荧光免疫方法，包括有检测装置及其检测方法：
检测装置包括：数字相机1和试剂卡6，所述数字相机1为仪器级数字相机，所述数字相机1下端转动安装有镜头2，所述镜头2底部安装有滤色片3，通过滤色片3对数字相机1内发出的光进行过滤，所述镜头2底部转动安装有镜片固定架4，所述镜片固定架4底部设置有若干组LED激光灯5；
如图2所示，所述试剂卡6包括有侧视面板61，所述侧视面板61为塑料材质，所述侧视面板61左侧设置有加样区62，所述加样区62用于将检测样本注入，所述侧视面板61右侧设置有检测区63，所述检测区63等距离分布有若干组测试条64，所述测试条64设置有检测线65和质控线66，所述质控线66为设计检测的标准反应结果，所述检测线65为实际的样品检测结果，通过将质控线66和检测线65进行对比，可以直观的对测试结果进行观察，所述试剂卡6可以实现对于同一组样品的多组测试，通过多组结果的共同展示，避免试剂卡6本身存在的设计误差对检测结果的影响。
上述检查装置的检测方法的步骤如下：
步骤一、荧光微球标记检测病毒抗体
用活化液替换原有保存液：离心－去上清－活化液超声重悬；加入EDC进行活化，EDC是个可溶于水的碳二亚胺，在酰胺合成中用作羧基的活化试剂，也用于活化磷酸酯基团、蛋白质与核酸的交联和免疫偶连物的制取；称取一定量的EDC，溶解后加入微球溶液中旋转反应15min；去除未反应或残余的反应物：离心－去上清－超纯水超声重悬，重复3次；用反应液超声重悬微球，然后加入一定量的待标记蛋白，避光反应1～4小时；去除未偶联的蛋白：离心－去上清－超声重悬，重复1～2次，2～8℃保存备用。
步骤二、制备包被有抗检测病毒抗体的免疫层析试纸条
将检测病毒抗体及羊抗鼠二抗喷涂在试剂卡6，具体是涂抹在加样区62，37℃干燥箱干燥过夜；同时将荧光微球标记抗检测病毒抗体偶联物喷在结合垫上，30℃真空干燥2h；加干燥剂于4～30℃密封保存。
步骤三、制备洗脱液
将需要检测的人体鼻咽部拭子取样进行洗脱，洗脱液包括：表面活性剂1mM～3mM；缓冲液10mM～1M；数字相机蛋白酶抑制剂3mM～10mM，
所述的表面活性剂为Tween镜头20，聚乙二醇辛基苯基醚缓冲液和十二烷基磺酸钠按照5:3:1的比例均匀混合后得到，所述Tween镜头20，用来稳定胶体金或蛋白质；所述聚乙二醇辛基苯基醚缓冲液作为润湿剂，协助染色；所述十二烷基磺酸钠属阴离子表面活性剂，具有优异的渗透、洗涤、润湿、去污和乳化作用；所述的缓冲液为磷酸盐溶液，三羟甲基氨基甲烷溶液或碳酸盐溶液。
步骤四、荧光免疫观察
取出所需免疫层析试纸条，室温放置15min；每孔加入50-70ull质控品，置于荧光检测仪孵育仓；15min后，打开数字相机1自动检测，通过将质控线66和检测线65进行对比，可以直观的对测试结果进行观察，以校准品浓度为横坐标，发光值为纵坐标，采用四参数逻辑拟合法得到标准曲线方程，根据标准曲线方程计算待检样本中甲乙流感病毒检测含量。
实施例2
参照图1所示，为本发明较优实施例中多通道成像定量荧光免疫方法，包括有检测装置及其检测方法：
一、检测装置包括：数字相机1和试剂卡6，所述数字相机1为仪器级数字相机，所述数字相机1下端转动安装有镜头2，所述镜头2底部安装有滤色片3，通过滤色片3对数字相机1内发出的光进行过滤，所述镜头2底部转动安装有镜片固定架4，所述镜片固定架4底部设置有若干组LED激光灯5；
如图3所示，所述试剂卡6包括有侧视面板61，所述侧视面板61为塑料材质，所述侧视面板61左侧设置有加样区62，所述侧视面板61右侧设置有检测区63，所述检测区63等距离分布有若干组测试条64，所述加样区62中部设置有若干组加样口67，所述加样口67用于将检测样本注入，每一组所述加样口67对应有一组测试条64，所述测试条64设置有检测线65和质控线66，所述质控线66为设计检测的标准反应结果，所述检测线65为实际的样品检测结果，通过将质控线66和检测线65进行对比，可以直观的对测试结果进行观察，所述试剂卡6可以实现同时对多组样品的同时检测，通过多组结果的共同展示，从而可以成倍的提升免疫检测的效率，可以为后续的疾病治疗留出更多的时间。
上述检查装置的检测方法的步骤如下：
步骤一、荧光微球标记检测病毒抗体
用活化液替换原有保存液：离心－去上清－活化液超声重悬；加入EDC进行活化，EDC是个可溶于水的碳二亚胺，在酰胺合成中用作羧基的活化试剂，也用于活化磷酸酯基团、蛋白质与核酸的交联和免疫偶连物的制取；称取一定量的EDC，溶解后加入微球溶液中旋转反应15min；去除未反应或残余的反应物：离心－去上清－超纯水超声重悬，重复3次；用反应液超声重悬微球，然后加入一定量的待标记蛋白，避光反应1～4小时；去除未偶联的蛋白：离心－去上清－超声重悬，重复1～2次，2～8℃保存备用。
步骤二、制备包被有抗检测病毒抗体的免疫层析试纸条
将检测病毒抗体及羊抗鼠二抗喷涂在试剂卡6，具体是涂抹在加样区62，37℃干燥箱干燥过夜；同时将荧光微球标记抗检测病毒抗体偶联物喷在结合垫上，30℃真空干燥2h；加干燥剂于4～30℃密封保存。
步骤三、制备洗脱液
将需要检测的人体鼻咽部拭子取样进行洗脱，洗脱液包括：表面活性剂1mM～3mM；缓冲液10mM～1M；数字相机蛋白酶抑制剂3mM～10mM，
所述的表面活性剂为Tween镜头20，聚乙二醇辛基苯基醚缓冲液和十二烷基磺酸钠按照5:3:1的比例均匀混合后得到，所述Tween镜头20，用来稳定胶体金或蛋白质；所述聚乙二醇辛基苯基醚缓冲液作为润湿剂，协助染色；所述十二烷基磺酸钠属阴离子表面活性剂，具有优异的渗透、洗涤、润湿、去污和乳化作用；所述的缓冲液为磷酸盐溶液，三羟甲基氨基甲烷溶液或碳酸盐溶液。
步骤四、荧光免疫观察
取出所需免疫层析试纸条，室温放置15min；每孔加入50-70ull质控品，置于荧光检测仪孵育仓；15min后，打开数字相机1自动检测，通过将质控线66和检测线65进行对比，可以直观的对测试结果进行观察，以校准品浓度为横坐标，发光值为纵坐标，采用四参数逻辑拟合法得到标准曲线方程，根据标准曲线方程计算待检样本中甲乙流感病毒检测含量。
综上所述，该方法快速、简单、灵敏，成本低，易于推广。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (7)
1.多通道成像定量荧光免疫方法的检测装置，其特征在于：所述检测装置包括：数字相机(1)和试剂卡(6)，所述数字相机(1)为仪器级数字相机，所述数字相机(1)下端转动安装有镜头(2)，所述镜头(2)底部安装有滤色片(3)，所述镜头(2)底部转动安装有镜片固定架(4)，所述镜片固定架(4)底部设置有若干组LED激光灯(5)。
2.根据权利要求1所述的多通道成像定量荧光免疫检测装置，其特征在于：所述试剂卡(6)包括有侧视面板(61)，所述侧视面板(61)为塑料材质，所述侧视面板(61)左侧设置有加样区(62)，所述侧视面板(61)右侧设置有检测区(63)，所述检测区(63)等距离分布有若干组测试条(64)，所述加样区(62)中部设置有若干组加样口(67)。
3.根据权利要求1所述的多通道成像定量荧光免疫检测装置，其特征在于：所述测试条(64)设置有检测线(65)和质控线(66)。
4.多通道成像定量荧光免疫方法，其特征在于：所述检查装置的检测方法的步骤如下：
步骤一、荧光微球标记检测病毒抗体
用活化液替换原有保存液：离心－去上清－活化液超声重悬；加入EDC进行活化，EDC是个可溶于水的碳二亚胺，在酰胺合成中用作羧基的活化试剂，也用于活化磷酸酯基团、蛋白质与核酸的交联和免疫偶连物的制取；称取一定量的EDC，溶解后加入微球溶液中旋转反应15min；去除未反应或残余的反应物：离心－去上清－超纯水超声重悬，重复3次；用反应液超声重悬微球，然后加入一定量的待标记蛋白，避光反应1～4小时；去除未偶联的蛋白：离心－去上清－超声重悬，重复1～2次，2～8℃保存备用；
步骤二、制备包被有抗检测病毒抗体的免疫层析试纸条
将检测病毒抗体及羊抗鼠二抗喷涂在试剂卡(6)，具体是涂抹在加样区(62)，37℃干燥箱干燥过夜；
步骤三、制备洗脱液
将需要检测的人体鼻咽部拭子取样进行洗脱，洗脱液包括：表面活性剂1mM～3mM；缓冲液10mM～1M；数字相机蛋白酶抑制剂3mM～10mM；
步骤四、荧光免疫观察
取出所需免疫层析试纸条，室温放置15min；每孔加入50-70ull质控品，置于荧光检测仪孵育仓；15min后，打开数字相机(1)自动检测。
5.根据权利要求4所述的多通道成像定量荧光免疫方法，其特征在于：所述步骤二中将涂抹样品后试机卡(6)荧光微球标记抗检测病毒抗体偶联物喷在结合垫上，30℃真空干燥2h；加干燥剂于4～30℃密封保存。
6.根据权利要求4所述的多通道成像定量荧光免疫方法，其特征在于：所述步骤三中的表面活性剂为Tween镜头20，聚乙二醇辛基苯基醚缓冲液和十二烷基磺酸钠按照5:3:1的比例均匀混合后得到；所述缓冲液为磷酸盐溶液，三羟甲基氨基甲烷溶液或碳酸盐溶液。
7.根据权利要求4所述的多通道成像定量荧光免疫方法，其特征在于：所述步骤四中检测结果以校准品浓度为横坐标，发光值为纵坐标，采用四参数逻辑拟合法得到标准曲线方程，根据标准曲线方程计算待检样本中甲乙流感病毒检测含量。
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
| CN113985020A (zh) * | 2021-11-08 | 2022-01-28 | 山东理工大学 | 一种用于食品安全快速检测的多通道读条设备 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101726596A (zh) * | 2009-11-04 | 2010-06-09 | 无锡中德伯尔生物技术有限公司 | 检测乙肝五项的荧光微球免疫层析检测卡及其制备方法 |
| CN102253038A (zh) * | 2011-04-21 | 2011-11-23 | 福州大学 | 基于嵌入式ccd图像采集的金免疫定量检测方法及装置 |
| CN102566024A (zh) * | 2010-12-09 | 2012-07-11 | 苏州生物医学工程技术研究所 | 一种使用触摸屏系统控制光源的荧光显微镜 |
| CN103006180A (zh) * | 2012-12-01 | 2013-04-03 | 清华大学深圳研究生院 | 一体化的静脉血管寻找投影装置及系统 |
| CN103124324A (zh) * | 2012-12-21 | 2013-05-29 | 深圳市威展力众科技有限公司 | 一种隐形监测装置 |
| CN103405216A (zh) * | 2013-04-09 | 2013-11-27 | 衢州亿龙信息技术有限公司 | 浅静脉摄像装置 |
| CN106085842A (zh) * | 2016-06-16 | 2016-11-09 | 清华大学 | 一种高通量微流控芯片核酸扩增分析检测系统 |
| CN107064497A (zh) * | 2017-06-13 | 2017-08-18 | 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 | 一种便携式电泳和拍照设备及其使用方法 |
-
2020
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Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101726596A (zh) * | 2009-11-04 | 2010-06-09 | 无锡中德伯尔生物技术有限公司 | 检测乙肝五项的荧光微球免疫层析检测卡及其制备方法 |
| CN102566024A (zh) * | 2010-12-09 | 2012-07-11 | 苏州生物医学工程技术研究所 | 一种使用触摸屏系统控制光源的荧光显微镜 |
| CN102253038A (zh) * | 2011-04-21 | 2011-11-23 | 福州大学 | 基于嵌入式ccd图像采集的金免疫定量检测方法及装置 |
| CN103006180A (zh) * | 2012-12-01 | 2013-04-03 | 清华大学深圳研究生院 | 一体化的静脉血管寻找投影装置及系统 |
| CN103124324A (zh) * | 2012-12-21 | 2013-05-29 | 深圳市威展力众科技有限公司 | 一种隐形监测装置 |
| CN103405216A (zh) * | 2013-04-09 | 2013-11-27 | 衢州亿龙信息技术有限公司 | 浅静脉摄像装置 |
| CN106085842A (zh) * | 2016-06-16 | 2016-11-09 | 清华大学 | 一种高通量微流控芯片核酸扩增分析检测系统 |
| CN107064497A (zh) * | 2017-06-13 | 2017-08-18 | 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 | 一种便携式电泳和拍照设备及其使用方法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113985020A (zh) * | 2021-11-08 | 2022-01-28 | 山东理工大学 | 一种用于食品安全快速检测的多通道读条设备 |
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