CN111518807A - 抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的寡核苷酸链、重组载体及构建方法 - Google Patents

抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的寡核苷酸链、重组载体及构建方法 Download PDF

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CN111518807A CN202010364991.7A CN202010364991A CN111518807A CN 111518807 A CN111518807 A CN 111518807A CN 202010364991 A CN202010364991 A CN 202010364991A CN 111518807 A CN111518807 A CN 111518807A
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陈信勇
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Abstract

本发明公开抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的寡核苷酸链、重组载体及构建方法，其中，包括pET‑28a(+)载体的基本序列、多克隆位点序列、启动子序列、寡核苷酸链和抗性基因序列；所述寡核苷酸链包括依次连接的Bpu1102I(BlpI)酶切位点、靶序列、发卡结构、靶序列的互补序列和XbaI酶切位点，所述寡核苷酸链正向插入所述多克隆位点序列中；所述靶序列为SEQ ID NO：1，或者SEQ ID NO：2，或者SEQ ID NO：3，或者SEQ ID NO：4，或者SEQ ID NO：5。本发明重组载体具有特异性好、安全性高、高效稳定表达、见效快等优点，有望在干预薇甘菊的繁殖蔓延和生态系统保护中发挥重要作用。

Description

抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的寡核苷酸链、重组载体及构建 方法
技术领域
本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种特异性靶向抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的寡核苷酸链、shRNA重组载体及其构建方法。
背景技术
薇甘菊原产于南美洲和中美洲，现已广泛分布于亚洲、南太平洋等地区的70多个国家和地区，是当今世界热带、亚热带地区危害最严重的外来入侵杂草之一。薇甘菊属蔓藤植物，其生长能力极其旺盛，一个小节每年可累计生长达1000米，且每个小节还会生出无数分节，被称为“一分钟一英里杂草”。薇甘菊繁殖能力也很强，既可有性繁殖，又能无性繁殖。薇甘菊被冠以“生物多样性终极杀手”之名，善于缠绕和攀附于其他植物上，将它们覆盖，阻止其他植物进行光合作用，从而使其死亡。薇甘菊还会释放化学物质影响土壤环境，抑制其他植物的种子萌发，导致入侵地区的生物多样性降低，破坏生态系统。因此，认清薇甘菊的生长机制，开发特异性抑制薇甘菊繁殖蔓延的技术，已成为当前受灾地区的重大需求和难题。
RNA干扰(RNAi)技术被广泛应用于在转录水平或转录后水平特异性抑制靶基因的表达及其功能研究。传统RNAi技术依赖长的双链RNA(dsRNA)生成siRNA，虽能高效、特异性抑制靶基因的表达，但极易降解，作用时间短，无法实现长效稳定的基因沉默作用；而单链形式的小发夹RNA(small hairpin RNA，shRNA)通过自身序列互补可形成双链结构和一个重要的茎环结构，与dsRNA相比，往往具有更高更长久的抑制效果。
光合作用是植物最重要的化学反应之一，主要发生在叶绿体的类囊体膜上。光能是整个光合作用反应的驱动力，因此光能的捕获和传递过程将会直接影响整个植物体的光合作用。在高等植物中，光系统II的大量光捕获复合体作为最主要的、含量最多的光能捕获和传递器官，在光合作用过程中发挥着极其重要的作用。因此，提供一种特异性靶向抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体，有望干预薇甘菊的繁殖和蔓延，对保护生态产生重要影响。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种特异性靶向抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的寡核苷酸链、shRNA重组载体及其构建方法。
本发明的技术方案如下：
抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的寡核苷酸链，其中，所述寡核苷酸链包括依次连接的Bpu1102I(BlpI)酶切位点、靶序列、发卡结构、靶序列的互补序列和XbaI酶切位点；
所述靶序列为：CTTAACAAGACAACCCCTTACAA，即SEQ ID NO：1，或者
所述靶序列为：CAAGACAACCCCTTACAAACCAA，即SEQ ID NO：2，或者
所述靶序列为：CTGGGATATAAACCCCGTTTTGA，即SEQ ID NO：3，或者
所述靶序列为：CACAGGCAGAGAATGCAAAAAAA，即SEQ ID NO：4，或者
所述靶序列为：CCAAATCAACCAATGCAAAAAAA，即SEQ ID NO：5。
抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体，其中，包括pET-28a(+)载体的基本序列、多克隆位点序列、启动子序列、寡核苷酸链和抗性基因序列；
所述寡核苷酸链包括依次连接的Bpu1102I(BlpI)酶切位点、靶序列、发卡结构、靶序列的互补序列和XbaI酶切位点，所述寡核苷酸链正向插入所述多克隆位点的Bpu1102I(BlpI)酶切位点和XbaI酶切位点之间；
所述靶序列为：CTTAACAAGACAACCCCTTACAA，即SEQ ID NO：1，或者
所述靶序列为：CAAGACAACCCCTTACAAACCAA，即SEQ ID NO：2，或者
所述靶序列为：CTGGGATATAAACCCCGTTTTGA，即SEQ ID NO：3，或者
所述靶序列为：CACAGGCAGAGAATGCAAAAAAA，即SEQ ID NO：4，或者
所述靶序列为：CCAAATCAACCAATGCAAAAAAA，即SEQ ID NO：5。
本发明所述的一种抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体的构建方法，其中，包括：
所述寡核苷酸链的设计：取薇甘菊叶片进行转录组测序分析，根据靶基因mRNA序列，经同源性比对证实特异性后，应用shRNA设计软件选取靶序列，设计并合成寡核苷酸链；
shRNA重组载体的构建：将pET-28a(+)载体和合成的寡核苷酸链进行Bpu1102I(BlpI)和XbaI酶切，将酶切后的寡核苷酸链正向插入酶切后的pET-28a(+)载体多克隆位点中，将连接产物转化感受态细胞，挑取阳性克隆，在培养液中扩增、提取重组质粒，得到靶向抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体。
有益效果：本发明提供一种特异性靶向抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的寡核苷酸链及shRNA重组载体，使用SEQ ID NO：1，或者SEQ ID NO：2，或者SEQ ID NO：3，或者SEQ IDNO：4，或者SEQ ID NO：5作为抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的靶序列，具有特异性好、安全性高、高效稳定表达、见效快等优点，有望在干预薇甘菊的繁殖蔓延和生态系统保护中发挥重要作用。此外，本发明提供的构建方法简单、高效、重复性好。
附图说明
图1为本发明的一种实施方式中shRNA重组载体的结构示意图。
图2为实施例三中检测shRNA诱导表达情况的电泳图。
具体实施方式
本发明提供一种特异性靶向抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的寡核苷酸链、shRNA重组载体及其构建方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明实施例提供靶向抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的寡核苷酸链，其中，所述寡核苷酸链包括依次连接的Bpu1102I(BlpI)酶切位点、靶序列、发卡结构、靶序列的互补序列和XbaI酶切位点；
所述靶序列为：CTTAACAAGACAACCCCTTACAA，即SEQ ID NO：1，或者
所述靶序列为：CAAGACAACCCCTTACAAACCAA，即SEQ ID NO：2，或者
所述靶序列为：CTGGGATATAAACCCCGTTTTGA，即SEQ ID NO：3，或者
所述靶序列为：CACAGGCAGAGAATGCAAAAAAA，即SEQ ID NO：4，或者
所述靶序列为：CCAAATCAACCAATGCAAAAAAA，即SEQ ID NO：5。
本发明实施例提供一种特异性靶向抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的寡核苷酸链，使用SEQ ID NO：1，或者SEQ ID NO：2，或者SEQ ID NO：3，或者SEQ ID NO：4，或者SEQ ID NO：5作为抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的靶序列，具有特异性好、安全性高、高效稳定表达、见效快等优点，有望在干预薇甘菊的繁殖蔓延和生态系统保护中发挥重要作用。
在一种实施方式中，所述寡核苷酸链为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTTGTAAGGGGTTGTCTTGTTAAGACTTGCTTAACAAGACAACCCCTTACAATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，即SEQ ID NO：6，或者
所述寡核苷酸链为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTTGGTTTGTAAGGGGTTGTCTTGACTTGCAAGACAACCCCTTACAAACCAATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，即SEQ ID NO：7，或者
所述寡核苷酸链为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTCAAAACGGGGTTTATATCCCAGACTTGCTGGGATATAAACCCCGTTTTGATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，即SEQ ID NO：8，或者
所述寡核苷酸链为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTTTTTTTGCATTCTCTGCCTGTGACTTGCACAGGCAGAGAATGCAAAAAAATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，即SEQ ID NO：9，或者
所述寡核苷酸链为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTTTTTTTGCATTGGTTGATTTGGACTTGCCAAATCAACCAATGCAAAAAAATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，即SEQ ID NO：10。
本发明实施例提供抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体，如图1所示，包括pET-28a(+)载体的基本序列、多克隆位点序列、启动子序列、寡核苷酸链和抗性基因序列；
所述寡核苷酸链包括依次连接的Bpu1102I(BlpI)酶切位点、靶序列、发卡结构、靶序列的互补序列和XbaI酶切位点，所述寡核苷酸链正向插入所述多克隆位点的Bpu1102I(BlpI)酶切位点和XbaI酶切位点之间；
所述靶序列为：CTTAACAAGACAACCCCTTACAA，即SEQ ID NO：1，或者
所述靶序列为：CAAGACAACCCCTTACAAACCAA，即SEQ ID NO：2，或者
所述靶序列为：CTGGGATATAAACCCCGTTTTGA，即SEQ ID NO：3，或者
所述靶序列为：CACAGGCAGAGAATGCAAAAAAA，即SEQ ID NO：4，或者
所述靶序列为：CCAAATCAACCAATGCAAAAAAA，即SEQ ID NO：5。
本发明实施例提供一种特异性靶向抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体，使用pET-28a(+)载体作为基础载体，使用SEQ ID NO：1，或者SEQ ID NO：2，或者SEQ IDNO：3，或者SEQ ID NO：4，或者SEQ ID NO：5作为抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的靶序列，具有特异性好、安全性高、高效稳定表达、见效快等优点，有望在干预薇甘菊的繁殖蔓延和生态系统保护中发挥重要作用。
在一种实施方式中，所述寡核苷酸链为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTTGTAAGGGGTTGTCTTGTTAAGACTTGCTTAACAAGACAACCCCTTACAATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，即SEQ ID NO：6，或者
所述寡核苷酸链为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTTGGTTTGTAAGGGGTTGTCTTGACTTGCAAGACAACCCCTTACAAACCAATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，即SEQ ID NO：7，或者
所述寡核苷酸链为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTCAAAACGGGGTTTATATCCCAGACTTGCTGGGATATAAACCCCGTTTTGATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，即SEQ ID NO：8，或者
所述寡核苷酸链为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTTTTTTTGCATTCTCTGCCTGTGACTTGCACAGGCAGAGAATGCAAAAAAATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，即SEQ ID NO：9，或者
所述寡核苷酸链为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTTTTTTTGCATTGGTTGATTTGGACTTGCCAAATCAACCAATGCAAAAAAATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，即SEQ ID NO：10。
在一种实施方式中，所述启动子序列为T7启动子序列。
在一种实施方式中，所述抗性基因序列为卡那霉素抗性基因序列。
本发明实施例提供一种本发明实施例所述的抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体的构建方法，其中，包括：
所述寡核苷酸链的设计：取薇甘菊叶片进行转录组测序分析，根据靶基因mRNA序列，经同源性比对证实特异性后，应用shRNA设计软件选取靶序列，设计并合成寡核苷酸链；
shRNA重组载体的构建：将pET-28a(+)载体和合成的寡核苷酸链进行Bpu1102I(BlpI)和XbaI酶切，将酶切后的寡核苷酸链正向插入酶切后的pET-28a(+)载体多克隆位点中，将连接产物转化感受态细胞，过夜后挑取阳性克隆，在培养液中扩增、提取重组质粒，得到抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体。
在一种实施方式中，所述感受态细胞为DH-5α感受态细胞。
本发明实施例提供一种特异性靶向抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体，使用pET-28a(+)载体作为基础载体，使用SEQ ID NO：1，或者SEQ ID NO：2，或者SEQ IDNO：3，或者SEQ ID NO：4，或者SEQ ID NO：5作为抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的靶序列，具有特异性好、安全性高、高效稳定表达、见效快等优点，有望在干预薇甘菊的繁殖蔓延和生态系统保护中发挥重要作用。此外，本发明实施例提供的构建方法简单、高效、重复性好。
下面通过具体的实施例对本发明作进一步地说明。
实施例一、寡核苷酸链的设计与合成
取薇甘菊叶片进行转录组测序分析，根据靶基因mRNA序列，经同源性比对证实特异性后，排除shRNA非特异性抑制其他基因片段的可能，应用shRNA设计软件选取靶向薇甘菊光捕获蛋白基因表达的mRNA靶序列(SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：5)，由Bpu1102I(BlpI)酶切位点、靶序列的互补序列、小发卡结构、靶序列和XbaI酶切位点依次连接组成寡核苷酸链的正义链，寡核苷酸链的反义链与正义链完全反向互补。
同时建立空载体对照(质粒载体)。寡核苷酸链序列由南京金斯瑞生物公司合成。
实施例二、shRNA重组载体的构建
将pET-28a(+)载体进行Bpu1102I(BlpI)和XbaI酶切使其线性化，将实施例一中合成的靶向薇甘菊光捕获蛋白基因的寡核苷酸链进行Bpu1102I(BlpI)和XbaI酶切后，制备退火双链DNA并正向插入酶切后的pET-28a(+)载体的多克隆位点中。将连接产物转化DH-5α感受态细胞，之后菌液均匀涂布在含卡那霉素(50μg/ml)的琼脂平板上，倒置培养过夜后挑取阳性克隆，在含卡那霉素(50μg/ml)的LB培养液中扩增菌液。从扩增菌液中提取质粒，得到靶向抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体。
实施例三、shRNA的诱导表达
HT115(DE3)是一类特殊的RNase III缺陷型大肠杆菌菌株，广泛用于RNAi干扰试验。将靶向抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体转化大肠杆菌HT115(DE3)细胞，之后菌液均匀涂布在含卡那霉素(50μg/ml)的琼脂平板上，倒置培养过夜后挑取阳性克隆，在含卡那霉素(50μg/ml)的LB培养液中扩增菌液。取部分扩增菌液进一步放大扩增，37度培养至OD值为0.7后，加入0.8mM IPTG(异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷)，置于16度培养诱导shRNA表达。同时准备不加IPTG的对照，各取部分菌液提取RNA，琼脂糖凝胶电泳检查shRNA表达水平，如图2所示。
实施例四、shRNA重组载体靶向抑制的效果检测
收集诱导shRNA表达的细胞进行RNA抽提，将获得的shRNA分别溶于水或表面活性剂中，均匀喷洒在薇甘菊叶片上，连续喷洒10天。对照组为只喷洒水或表面活性剂。经检测发现，施药10天后，与对照组相比，施药处理的薇甘菊叶片出现显著的黄化和枯萎，而对照组不受影响，说明本发明提供的shRNA重组载体能显著抑制薇甘菊光捕获蛋白的表达，从而有效抑制薇甘菊的蔓延。
实施例五、shRNA重组载体的特异性检测
为检测本发明提供的shRNA重组载体靶向薇甘菊光捕获蛋白基因的特异性，对模式植物拟南芥和烟草叶片连续施药10天。经检测发现，拟南芥和烟草叶片在连续施药10天后并未出现黄化和枯萎现象，说明本发明提供的shRNA重组载体具有极高的靶向薇甘菊的特异性，而不会对其他植物造成不良影响。
综上所述，本发明提供的特异性靶向抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的寡核苷酸链、shRNA重组载体及其构建方法，本发明提供的shRNA重组载体能稳定、高效、显著和特异性抑制薇甘菊中编码光捕获蛋白基因的mRNA表达。
应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
序列表
<110> 深圳大学
<120> 抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的寡核苷酸链、重组载体及构建方法
<160> 10
<210> 1
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(rengongxulie)
<400> 1
cttaacaaga caacccctta caa 23
<210> 2
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(rengongxulie)
<400> 2
caagacaac cccttacaaa ccaa 24
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(rengongxulie)
<400> 3
ctgggatata aaccccgttt tga 23
<210> 4
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(rengongxulie)
<400> 4
cacaggcaga gaatgcaaaa aaa 23
<210> 5
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(rengongxulie)
<400> 5
ccaaatcaac caatgcaaaa aaa
<210> 6
<211> 105
<212> DNA
<213> 人工序列(rengongxulie)
<400> 6
gctcagcata gtgagtcgta ttaacgtacc aacttgtaag gggttgtctt gttaagactt 60
gcttaacaag acaacccctt acaatagagg catatccctt ctaga 105
<210> 7
<211> 105
<212> DNA
<213> 人工序列(rengongxulie)
<400> 7
gctcagcata gtgagtcgta ttaacgtacc aacttggttt gtaaggggtt gtcttgactt 60
gcaagacaac cccttacaaa ccaatagagg catatccctt ctaga 105
<210> 8
<211> 105
<212> DNA
<213> 人工序列(rengongxulie)
<400> 8
gctcagcata gtgagtcgta ttaacgtacc aactcaaaac ggggtttata tcccagactt 60
gctgggatat aaaccccgtt ttgatagagg catatccctt ctaga 105
<210> 9
<211> 105
<212> DNA
<213> 人工序列(rengongxulie)
<400> 9
gctcagcata gtgagtcgta ttaacgtacc aacttttttt gcattctctg cctgtgactt 60
gcacaggcag agaatgcaaa aaaatagagg catatccctt ctaga 105
<210> 10
<211> 105
<212> DNA
<213> 人工序列(rengongxulie)
<400> 10
gctcagcata gtgagtcgta ttaacgtacc aacttttttt gcattggttg atttggactt 60
gccaaatcaa ccaatgcaaa aaaatagagg catatccctt ctaga 105

Claims (8)

1.抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的寡核苷酸链，其特征在于，所述寡核苷酸链包括依次连接的Bpu1102I(BlpI)酶切位点、靶序列、发卡结构、靶序列的互补序列和XbaI酶切位点；
所述靶序列为：CTTAACAAGACAACCCCTTACAA，或者
所述靶序列为：CAAGACAACCCCTTACAAACCAA，或者
所述靶序列为：CTGGGATATAAACCCCGTTTTGA，或者
所述靶序列为：CACAGGCAGAGAATGCAAAAAAA，或者
所述靶序列为：CCAAATCAACCAATGCAAAAAAA。
2.根据权利要求1所述的抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的寡核苷酸链，其特征在于，所述寡核苷酸链为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTTGTAAGGGGTTGTCTTGTTAAGACTTGCTTAACAAGACAACCCCTTACAATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，或者
所述寡核苷酸链为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTTGGTTTGTAAGGGGTTGTCTTGACTTGCAAGACAACCCCTTACAAACCAATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，或者
所述寡核苷酸链为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTCAAAACGGGGTTTATATCCCAGACTTGCTGGGATATAAACCCCGTTTTGATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，或者
所述寡核苷酸链为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTTTTTTTGCATTCTCTGCCTGTGACTTGCACAGGCAGAGAATGCAAAAAAATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，或者
所述寡核苷酸链为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTTTTTTTGCATTGGTTGATTTGGACTTGCCAAATCAACCAATGCAAAAAAATAGAGGCATATCCCTTCTAGA。
3.抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体，其特征在于，包括pET-28a(+)载体的基本序列、多克隆位点序列、启动子序列、寡核苷酸链和抗性基因序列；
所述寡核苷酸链包括依次连接的Bpu1102I(BlpI)酶切位点、靶序列、发卡结构、靶序列的互补序列和XbaI酶切位点，所述寡核苷酸链正向插入所述多克隆位点的Bpu1102I(BlpI)酶切位点和XbaI酶切位点之间；
所述靶序列为：CTTAACAAGACAACCCCTTACAA，或者
所述靶序列为：CAAGACAACCCCTTACAAACCAA，或者
所述靶序列为：CTGGGATATAAACCCCGTTTTGA，或者
所述靶序列为：CACAGGCAGAGAATGCAAAAAAA，或者
所述靶序列为：CCAAATCAACCAATGCAAAAAAA。
4.根据权利要求3所述的抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体，其特征在于，所述寡核苷酸链序列为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTTGTAAGGGGTTGTCTTGTTAAGACTTGCTTAACAAGACAACCCCTTACAATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，或者
所述寡核苷酸链序列为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTTGGTTTGTAAGGGGTTGTCTTGACTTGCAAGACAACCCCTTACAAACCAATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，或者
所述寡核苷酸链序列为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTCAAAACGGGGTTTATATCCCAGACTTGCTGGGATATAAACCCCGTTTTGATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，或者
所述寡核苷酸链序列为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTTTTTTTGCATTCTCTGCCTGTGACTTGCACAGGCAGAGAATGCAAAAAAATAGAGGCATATCCCTTCTAGA，或者
所述寡核苷酸链序列为：
GCTCAGCATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACTTTTTTTGCATTGGTTGATTTGGACTTGCCAAATCAACCAATGCAAAAAAATAGAGGCATATCCCTTCTAGA。
5.根据权利要求3所述的抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体，其特征在于，所述启动子序列为T7启动子序列。
6.根据权利要求3所述的抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体，其特征在于，所述抗性基因序列为卡那霉素抗性基因序列。
7.一种权利要求3-6任一项所述的抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体的构建方法，其特征在于，包括：
所述寡核苷酸链的设计：取薇甘菊叶片进行转录组测序分析，根据靶基因mRNA序列，经同源性比对证实特异性后，应用shRNA设计软件选取靶序列，设计并合成寡核苷酸链；
shRNA重组载体的构建：将pET-28a(+)载体和合成的寡核苷酸链进行Bpu1102I(BlpI)和XbaI酶切，将酶切后的寡核苷酸链正向插入酶切后的pET-28a(+)载体多克隆位点中，将连接产物转化感受态细胞，挑取阳性克隆，在培养液中扩增、提取重组质粒，得到靶向抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体。
8.根据权利要求7所述的抑制薇甘菊光捕获蛋白表达的shRNA重组载体的构建方法，其特征在于，所述感受态细胞为DH-5α感受态细胞。
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