CN111514309A - 一种聚乙二醇偶联药物、其制备方法及用途 - Google Patents

一种聚乙二醇偶联药物、其制备方法及用途 Download PDF

Info

Publication number
CN111514309A
CN111514309A CN201910108226.6A CN201910108226A CN111514309A CN 111514309 A CN111514309 A CN 111514309A CN 201910108226 A CN201910108226 A CN 201910108226A CN 111514309 A CN111514309 A CN 111514309A
Authority
CN
China
Prior art keywords
molecular weight
average molecular
number average
reaction
polyethylene glycol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910108226.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111514309B (zh
Inventor
李高全
张倩
李大军
汪斌
丁小玲
黄蕾
李蝶蝶
龚辉
万金平
刘月
卫玉松
阳享伟
陈渝
蒋云杰
刘忠权
彭永陈
刘姣
徐堃
刘曦
娄杰
陈惠渝
杨悦
王远强
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chongqing Upgra Biological Sci & Tech Ltd
Original Assignee
Chongqing Upgra Biological Sci & Tech Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chongqing Upgra Biological Sci & Tech Ltd filed Critical Chongqing Upgra Biological Sci & Tech Ltd
Priority to CN201910108226.6A priority Critical patent/CN111514309B/zh
Priority to PCT/CN2019/089835 priority patent/WO2020155497A1/zh
Priority to JP2021545303A priority patent/JP7362749B2/ja
Priority to US17/426,747 priority patent/US20220105189A1/en
Priority to EP19912455.3A priority patent/EP3919080A4/en
Publication of CN111514309A publication Critical patent/CN111514309A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111514309B publication Critical patent/CN111514309B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Polyamides (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体涉及如式I所示的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐。本发明还涉及所述聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的制备方法和中间体，包含所述聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的药物组合物和在制备药物中的用途。
Figure DDA0001967223850000011

Description

一种聚乙二醇偶联药物、其制备方法及用途
技术领域
本发明属医药技术领域，涉及一种聚乙二醇偶联药物、其制备方法及用途。
背景技术
高分子偶联药物是药物研究中的一个重要方向。高分子偶联药物可以增加药物分子的水溶性，这对紫杉醇、喜树碱或铂类等溶解度极低的分子十分重要。大多数的小分子药物在血液循环中只能保持数分钟，而高分子偶联药物可以保持几十、几百小时甚至更长，这有利于产生或增强因病变部位毛细血管的渗漏而产生的“增强渗透和保留”效应，即EPR效应。高分子偶联药物由于流体力学体积增加而减弱了药物的肾消除，保护药物不被酶降解，延长药物在血浆内的半衰期，可以增加药物的生物利用度，还可以通过EPR被动靶向或主动靶向使药物高度富集在病变的器官、组织或细胞，大幅度地降低因为小分子药物充满全身而导致的毒副作用。此外，高分子偶联药物可以将药物的细胞吸收局限于内吞路径，有利于向溶酶体方向的药物传输，从而避开p-糖蛋白泵出而导致的抗药性；可以刺激或恢复免疫功能，对于偶联抗癌药物来说，有利于杀灭癌细胞。
聚乙二醇偶联药物是高分子偶联药物最成功的一个方向，目前已经有12个药物被FDA批准进入市场销售，其中半数与癌症相关。美国ENZON制药公司研发出聚乙二醇偶联SN-38(ENZN-2208)，并推向了三期临床。此外，美国NEKTAR THERAPEUTICS公司研发出了聚乙二醇偶联伊立替康(NKTR-102)，在欧盟递交了NDA，同时在美国进行了三期临床试验，对转移到脑里的乳腺癌有特效。
发明内容
现有聚乙二醇偶联药物存在以下问题：随着载药量的提高，聚乙二醇偶联药物(尤其是四臂或八臂聚乙二醇偶联药物)在生理盐水中的溶解性通常会严重变差，甚至完全不溶，限制了其在液体制剂(例如以生理盐水为载体的注射剂)中的浓度，给药物的应用带来不便。
本发明通过在聚乙二醇偶联药物(例如四臂或八臂聚乙二醇偶联药物)的特定位置上偶联一条单臂聚乙二醇，可以大幅度提升聚乙二醇偶联药物在生理盐水中的溶解性，解决了上述技术问题。
聚乙二醇偶联药物
在一个方面，本申请涉及一种如式I所示的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐；
Figure BDA0001967223830000011
Figure BDA0001967223830000021
本发明的聚乙二醇偶联药物，以氨基酸或多肽为连接链，以带有氨基的二羧酸(例如带有两个羧基的天然氨基酸)为连接桥，将多个相同或不同的药物分子偶联在一起。药物的种类、比例和载药量可以调节。PEG2的引入可以大幅度提升聚乙二醇偶联药物在生理盐水中的溶解性。
式(I)中，PEG1选自单臂或多臂(例如四臂或八臂)的聚乙二醇链段，其数均分子量可以是5k-40k，例如5k-10k或10k-40k，例如约5k、约10k、约20k、约30k或约40k。j为PEG1的臂数，例如1、4或8。
X为连接基团，选自
Figure BDA0001967223830000022
n为2或3。当j大于1(例如为4或8)时，会有多个(例如4个或8个)X同时存在，此时，各个X之间可以相同或不同。
M为氨基酸残基或多肽，选自G、GG、GLG、GFA、GLA或GFLG。当j大于1(例如为4或8)时，会有多个(例如4个或8个)M同时存在，此时，各个M之间可以相同或不同。
PEG2为单臂聚乙二醇链段，其与Y通过酰胺键连接。在某些实施方案中PEG2通过末端的氨基与Y上的羧基发生反应，形成酰胺键。或者，PEG2通过末端的羧基与Y上的氨基发生反应，形成酰胺键。PEG2的分子量可以是2k-40k，例如2k-3k、3k-5k、5k-10k或10k-40k，例如约2k、约3k、约5k、约10k、约40k。
Y选自：
Figure BDA0001967223830000023
可选择地，j可以大于1(例如为4或8)，此时，会有多个(例如4个或8个)Y同时存在，各个Y之间可以相同或不同。
W可以是Q，其结构为
Figure BDA0001967223830000024
其中，Z0选自：
Figure BDA0001967223830000025
Figure BDA0001967223830000026
当同时存在多个Z0时，各个Z0之间可以相同或不同。
Q可以包含两个相同的药物分子，也可以包含两个不同药物分子，即，AC1、AC2可以相同或不同。两个药物分子以氨基酸或多肽作为连接链(N1、N2)、以带有氨基的二羧酸作为连接桥(Z0)相连接。
可以选择带有两个羧基的天然氨基酸，例如谷氨酸、天冬氨酸或其衍生物作为连接桥。所述谷氨酸衍生物或天冬氨酸衍生物可以是在谷氨酸或天冬氨酸的氨基上连接一条末端带氨基的长链所形成的衍生物，例如Boc-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2-CO-谷氨酸或Boc-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2--CO-天冬氨酸。所述谷氨酸衍生物或天冬氨酸衍生物也可以是包含谷氨酸或天冬氨酸的二肽，例如谷氨酸甘氨酸、甘氨酸谷氨酸。
本发明中，当以谷氨酸作为连接桥Z0时，将连接在谷氨酸主链的5位羧基上的连接链N作为N1，将连接在谷氨酸主链的1位羧基上的连接链N作为N2，相应地，将与连接链N1连接的药物分子AC作为AC1，将与连接链N2连接的药物分子AC作为AC2。类似地，当以天冬氨酸作为连接桥Z0时，将连接在天冬氨酸主链的4位羧基上的连接链N作为N1，将连接在天冬氨酸主链的1位羧基上的连接链N作为N2，相应地，将与连接链N1连接的药物分子AC作为AC1，将与连接链N2连接的药物分子AC作为AC2。对于以谷氨酸衍生物或天冬氨酸衍生物作为连接桥Z0的情况可以以此类推。由此，Q可以选自：
Figure BDA0001967223830000031
进一步地，可以将Q作为基本构建单元，以带有氨基的二羧酸作为连接桥(Z1、Z2、Z3或Z4)，构建更高层次的包含两个以上药物分子的中间体。因此，W还可以选自以下结构：
Figure BDA0001967223830000032
当j大于1(例如为4或8)时，会有多个(例如4个或8个)W同时存在，此时，各个W之间可以相同或不同。
与Z0类似，可以选择带有两个羧基的天然氨基酸，例如谷氨酸、天冬氨酸或其衍生物作为连接桥Z1、Z2、Z3或Z4。因此，Z1、Z2、Z3或Z4各自独立地选自：
Figure BDA0001967223830000041
Z1、Z2、Z3、Z4之间可以相同或不同，并且，当同时存在多个Z1、多个Z2、多个Z3、或多个Z4时，各个Z1之间、各个Z2之间、各个Z3之间或各个Z4之间可以相同或不同。
在某些实施方案中，Z1、Z2、Z3或Z4为谷氨酸，当通过Z1、Z2、Z3或Z4连接的两个中间体具有不同的结构时，考虑到位阻效应，可以选择体积较大的中间体与谷氨酸主链的5位羧基相连。在某些实施方案中，Z1、Z2、Z3或Z4为天冬氨酸，当通过Z1、Z2、Z3或Z4连接的两个中间体具有不同的结构时，考虑到位阻效应，可以选择体积较大的中间体与天冬氨酸主链的4位羧基相连。对于以谷氨酸衍生物或天冬氨酸衍生物作为连接桥Z1、Z2、Z3或Z4的情况可以以此类推。
N1、N2、N3、N4为药物分子与连接桥之间的连接链，可以是氨基酸残基或多肽。N1、N2、N3、N4可以各自独立地选自G、GG、GLG、GFA、GLA或GFLG。N1、N2、N3、N4之间可以相同或不同，并且，当同时存在多个N1、多个N2、多个N3或多个N4时，各个N1之间、各个N2之间、各个N3之间、或各个N4之间可以相同或不同。
AC1、AC2、AC3、AC4为药物分子(例如具有抗肿瘤活性的药物分子)。AC1、AC2、AC3、AC4之间可以相同或不同，并且，当同时存在多个AC1、多个AC2、多个AC3或多个AC4时，各个AC1之间、各个AC2之间、各个AC3之间、或各个AC4之间可以相同或不同。
本发明中，适于与聚乙二醇偶联的活性成分可以是带有至少一个氨基、羟基、羧基或者酰基的药物分子，例如带有至少一个氨基、羟基、羧基或者酰基的具有抗肿瘤活性的药物分子，例如MK2、LPT、PCB、SB7、PKI、NPB，其代表的含义如下：
Figure BDA0001967223830000042
在某些实施方案中，PEG1为数均分子量为5k-10k的单臂聚乙二醇链段，或数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure BDA0001967223830000043
M为G、GLG、或GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k或3k-5k；Y为
Figure BDA0001967223830000051
W为Q，选自
Figure BDA0001967223830000052
其中，N1、N2均为GFLG或者均为GLG，AC1和AC2选自以下组合：
(1)AC1为MK2，AC2为LPT，
(2)AC1为LPT，AC2为SB7，
(3)AC1为PCB，AC2为SB7，
(4)AC2为SB7，AC1为PCB；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物选自：
Figure BDA0001967223830000053
优选地，
Figure BDA0001967223830000054
的数均分子量为5k；优选地，
Figure BDA0001967223830000055
的数均分子量为2k；
Figure BDA0001967223830000056
优选地，
Figure BDA0001967223830000057
的数均分子量为40k；优选地，
Figure BDA0001967223830000058
的数均分子量为2k；
Figure BDA0001967223830000059
优选地，
Figure BDA0001967223830000061
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA0001967223830000062
的数均分子量为2k；
Figure BDA0001967223830000063
优选地，
Figure BDA0001967223830000064
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA0001967223830000065
的数均分子量为2k；
Figure BDA0001967223830000066
优选地，
Figure BDA0001967223830000067
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA0001967223830000068
的数均分子量为2k。
在某些实施方案中，PEG1为数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure BDA0001967223830000069
M为GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k；Y为
Figure BDA00019672238300000610
W为
Figure BDA00019672238300000611
Z1选自
Figure BDA00019672238300000612
Q选自
Figure BDA00019672238300000613
N1、N2均为GFLG，AC1、AC2选自以下组合：
(1)AC1和AC2均为SB7，
(2)AC1和AC2均为LPT，
(3)AC1为PCB，AC2为SB7，
(4)AC1和AC2为PCB；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物选自：
Figure BDA0001967223830000071
优选地，
Figure BDA0001967223830000072
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA0001967223830000073
的数均分子量为2k；
Figure BDA0001967223830000074
优选地，
Figure BDA0001967223830000075
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA0001967223830000076
的数均分子量为2k；
Figure BDA0001967223830000077
优选地，
Figure BDA0001967223830000081
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA0001967223830000082
的数均分子量为2k；
Figure BDA0001967223830000083
优选地，
Figure BDA0001967223830000084
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA0001967223830000085
的数均分子量为2k。
在某些实施方案中，PEG1为数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure BDA0001967223830000086
M为GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k；Y为
Figure BDA0001967223830000087
W为
Figure BDA0001967223830000088
其中，Z1选自
Figure BDA0001967223830000089
Q为
Figure BDA00019672238300000810
N1、N2、N3均为GFLG，AC1、AC2和AC3选自以下组合：
(1)AC1为PCB、AC2为SB7、AC3为PKI，
(2)AC1、AC2为PCB，AC3为SB7，
(3)AC1、AC2为NPB，AC3为SB7，
(4)AC1、AC2为SB7，AC3为PCB；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物选自：
Figure BDA00019672238300000811
优选地，
Figure BDA0001967223830000091
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA0001967223830000092
的数均分子量为2k；
Figure BDA0001967223830000093
优选地，
Figure BDA0001967223830000094
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA0001967223830000095
的数均分子量为2k；
Figure BDA0001967223830000096
R为八臂聚乙二醇的核心结构；优选地，
Figure BDA0001967223830000097
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA0001967223830000098
的数均分子量为2k；
Figure BDA0001967223830000099
优选地，
Figure BDA00019672238300000910
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA00019672238300000911
的数均分子量为2k。
在某些实施方案中，PEG1为数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure BDA0001967223830000101
M为GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k或3k-5k；Y为
Figure BDA0001967223830000102
W为
Figure BDA0001967223830000103
其中，Z2为
Figure BDA0001967223830000104
Z1选自
Figure BDA0001967223830000105
和
Figure BDA0001967223830000106
Q选自
Figure BDA0001967223830000107
N1、N2均为GFLG，AC1、AC2选自以下组合：
(1)AC1为LPT，AC2为SB7，
(2)AC1为PCB，AC2为SB7；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物选自：
Figure BDA0001967223830000108
优选地，
Figure BDA0001967223830000109
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA00019672238300001010
的数均分子量为3k或5k；
Figure BDA0001967223830000111
优选地，
Figure BDA0001967223830000112
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA0001967223830000113
的数均分子量为2k。
在某些实施方案中，PEG1为数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure BDA0001967223830000114
M为GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k或3k-5k；Y为
Figure BDA0001967223830000115
W为
Figure BDA0001967223830000116
其中，Z2为
Figure BDA0001967223830000117
Z1选自
Figure BDA0001967223830000118
Figure BDA0001967223830000119
Q选自
Figure BDA00019672238300001110
N1、N2均为GFLG，AC1为PCB、AC2为SB7；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物为：
Figure BDA0001967223830000121
优选地，
Figure BDA0001967223830000122
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA0001967223830000123
的数均分子量为3k。
在某些实施方案中，PEG1为数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure BDA0001967223830000124
M为GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k或3k-5k；Y为
Figure BDA0001967223830000125
W为
Figure BDA0001967223830000126
其中，Z2为
Figure BDA0001967223830000127
Z1为
Figure BDA0001967223830000128
Q为
Figure BDA0001967223830000129
N1、N2、N3均为GFLG，AC1、AC2均为PCB，AC3为SB7；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物为：
Figure BDA0001967223830000131
优选地，
Figure BDA0001967223830000132
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA0001967223830000133
的数均分子量为3k。
在某些实施方案中，PEG1为数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure BDA0001967223830000134
M为GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k或3k-5k；Y为
Figure BDA0001967223830000135
W为
Figure BDA0001967223830000136
其中，Z2和Z1为
Figure BDA0001967223830000137
Q为
Figure BDA0001967223830000138
AC1、AC2为LPT，AC3为PKI；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物为：
Figure BDA0001967223830000139
优选地，
Figure BDA00019672238300001310
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA00019672238300001311
的数均分子量为3k。
在某些实施方案中，PEG1为数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure BDA0001967223830000141
M为GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k或3k-5k；Y为
Figure BDA0001967223830000142
W为
Figure BDA0001967223830000143
其中，Z3为
Figure BDA0001967223830000144
Z2和Z1为
Figure BDA0001967223830000145
Q为
Figure BDA0001967223830000146
N1、N2、N3为GFLG，AC1和AC2为LPT，AC3为PCB；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物为：
Figure BDA0001967223830000147
优选地，
Figure BDA0001967223830000148
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA0001967223830000149
的数均分子量为3k。
在某些实施方案中，PEG1为数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure BDA00019672238300001410
M为GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k或3k-5k；Y为
Figure BDA00019672238300001411
W为
Figure BDA00019672238300001412
其中，Z2为
Figure BDA00019672238300001413
Z1为
Figure BDA00019672238300001414
Q为
Figure BDA00019672238300001415
N1、N2、N3、N4为GFLG，AC1、AC2、AC3为PCB，AC4为SB7；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物为：
Figure BDA0001967223830000151
优选地，
Figure BDA0001967223830000152
的数均分子量为40k，优选地，
Figure BDA0001967223830000153
的数均分子量为2k。
本发明的聚乙二醇偶联药物可以选自以下化合物：
Figure BDA0001967223830000154
Figure BDA0001967223830000161
Figure BDA0001967223830000171
Figure BDA0001967223830000181
Figure BDA0001967223830000191
Figure BDA0001967223830000201
Figure BDA0001967223830000211
制备方法及中间体
本申请还涉及制备本发明的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的一种方法，包括以下步骤：
S1：制备带有氨基的中间体
Figure BDA0001967223830000212
其中，至少一个氨基位于M上，
S2：使带有羧基或活化的羧基的PEG1与中间体
Figure BDA0001967223830000213
发生酰胺化反应，得到权利要求1-12任一项的聚乙二醇偶联药物；
优选地，S1包括以下步骤：
步骤(1)：制备W；
步骤(2)：以W和带有氨基的二羧酸为原料，通过酰胺化反应得到中间体W-Y-COOH；
步骤(3)：通过酰胺化反应，将中间体W-Y-COOH与带有氨基的PEG2相连，得到中间体W-Y-PEG2；
步骤(4)：以中间体W-Y-PEG2，氨基酸或多肽，以及带有氨基的二羧酸为原料，通过酰胺化反应制备中间体
Figure BDA0001967223830000221
其中，PEG1、PEG2、Y、W、M如上所定义。
本申请还涉及制备本发明的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的另一种方法，包括以下步骤：
S1：制备中间体
Figure BDA0001967223830000222
S2：通过酰胺化反应使带有氨基的PEG2与Y相连，得到权利要求1-12任一项的聚乙二醇偶联药物；
优选地，S1包括以下步骤：
步骤(1)：制备W；
步骤(2)：使W与带有氨基的二羧酸中的一个羧基反应，得到中间体W-Y-COOH；
步骤(3)：以中间体W-Y-COOH，以及氨基酸或多肽为原料，通过酰胺化反应制备带有氨基的中间体
Figure BDA0001967223830000223
其中，至少一个氨基位于M上；
步骤(4)：以中间体
Figure BDA0001967223830000224
和带有羧基或活化的羧基的PEG1为原料，通过酰胺化反应制备中间体
Figure BDA0001967223830000225
其中，PEG1、PEG2、X、Y、W、M、j如上所定义。
对于以上两种方法，步骤(1)中的W可以通过以下方法制备：
(1)当W为Q时，所述方法包括：以药物，氨基酸或多肽，以及带有氨基的二羧酸为原料，通过酰胺化反应制备Q；
(2)当W为
Figure BDA0001967223830000226
时，所述方法包括：以药物，氨基酸或多肽，以及带有氨基的二羧酸为原料，通过酰胺化反应制备Q；以Q，以及带有氨基的二羧酸为原料，通过酰胺化反应制备W；
(3)当W为
Figure BDA0001967223830000227
Figure BDA0001967223830000228
Figure BDA0001967223830000231
时，所述方法包括：以药物，氨基酸或多肽，以及带有氨基的二羧酸为原料，通过酰胺化反应制备Q；以药物，以及氨基酸或多肽为原料制备N3-AC3和任选的N4-AC4；以Q，N3-AC3和任选的N4-AC4，以及带有氨基的二羧酸为原料，通过酰胺化反应制备W。
本发明中，可以通过酰胺化反应制备各中间体。酰胺化反应的选择性高、反应速率块、异构体副产物少，因此使用该合成方法所得产品的收率高、反应速度快。
为了增强反应的特异性，氨基酸或多肽上的氨基在酰胺化反应前可以使用氨基保护基团进行保护，氨基保护基团可以是烷氧羰基类氨基保护基，例如叔丁氧羰基(Boc)、笏甲氧羰基(Fmoc)、苄氧羰基(Cbz)、三甲基硅乙氧羰基(Teoc)等。在反应之后，可以对氨基进行去保护。
可以在多肽缩合试剂的存在下，进行氨基酸或多肽与药物的酰胺化反应。多肽缩合试剂可以选自HBTU、HOBT、HBTU。反应中还可加入生物碱DIEA(N,N-二异丙基乙胺)。反应温度优选为-10～10℃，更优选为-4～4℃。
带有氨基的二羧酸在酰胺化反应之前，可以使用氨基保护基团和羧基保护基团对氨基和羧基进行保护。氨基保护基可以选自上述烷氧羰基类氨基保护基。羧基的保护可以通过羧基的酯化实现。所述酰胺化反应可以在PyAOP的存在下进行。反应中还可加入2，4，6-三甲基吡啶。反应温度优选为-10～10℃。
本申请还涉及具有以下任一结构的化合物
Figure BDA0001967223830000232
Figure BDA0001967223830000241
这些化合物可作为中间体用于制备本发明的聚乙二醇偶联药物。因此本申请还涉及这些化合物在制备本发明的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐中的用途。
药物组合物和制药用途
在一个方面，本申请提供了一种药物组合物，其含有治疗和/或预防疾病有效量的本发明的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐；优选地，所述组合物还含有一种或多种药学上可接受的辅料，例如载体和/或赋形剂。所述载体和/或赋形剂包括但不限于:离子交换剂,氧化铝,硬脂酸铝,卵磷脂,血清蛋白如人血清蛋白,缓冲物质如磷酸盐,甘油,山梨酸,山梨酸钾,饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶态氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜂蜡，聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物和羊毛脂。
所述药物组合物可以制成药学上可接受的任一剂型。所述药物组合物还可以以任何合适的给药方式，例如口服、肠胃外、直肠或经肺给药等方式施用于需要这种治疗的个体。用于口服给药时，所述药物组合物可制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。用于肠胃外给药时，所述药物组合物可制成注射剂，包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，配制注射剂时，可以不加入附加剂，也可根据药物的性质加入适宜的附加剂。用于直肠给药时，所述药物组合物可制成栓剂等。用于经肺给药时，所述药物组合物可制成吸入剂或喷雾剂等。优选地，本发明的药物组合物可以被制成注射剂，例如注射液。可选地，以生理盐水作为所述注射液的载体。
本申请还提供了一种注射液，其包含本发明的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐、或本发明的药物组合物。优选地，所述注射液以生理盐水作为载体。
在一个方面，本申请提供了本发明的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐在制备治疗在制备治疗和/或预防疾病(例如癌症)的药物中的用途，所述疾病为所述聚乙二醇偶联药物中的活性成分所治疗的疾病。
本发明中，癌症是指细胞增殖性疾病状态，包括但不限于：结肠癌、白血病、淋巴瘤、膀胱癌、骨癌、脑瘤、髓母细胞瘤、胶质瘤、乳腺癌、腺瘤/类癌、肾上腺皮质癌、胰岛细胞癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、结肠直肠癌、皮肤癌、食管癌、眼癌、胆囊癌、胃癌、头颈癌、肝癌、黑色素瘤、卡波氏肉瘤、肾癌、口腔癌、肺癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、甲状腺癌、甲状旁腺阴茎癌、前列腺癌、尿道癌、阴道癌、外阴癌、肛门癌、肉瘤等，包括前述癌症的转移。
在一个方面，本申请提供了一种治疗和/或预防疾病(例如癌症)的方法，包括对有此需要的个体给予有效量的本发明的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐。可调整给药方案以提供最佳所需响应。例如，可给药单次推注，可随时间给药数个分剂量，或可如治疗情况的急需所表明而按比例减少或增加剂量。要注意，剂量值可随要减轻的病况的类型及严重性而变化，且可包括单次或多次剂量。要进一步理解，对于任何特定个体，具体的给药方案应根据个体需要及给药组合物或监督组合物的给药的人员的专业判断来随时间调整。
本发明中，“个体”包括人或非人动物。示例性人个体包括患有疾病(例如本文所述的疾病)的人个体(称为患者)或正常个体。本发明中，“非人动物”包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物(例如鸟类、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，例如非人灵长类、家畜和/或驯化动物(例如绵羊、犬、猫、奶牛、猪等)。
术语定义
除非在下文中另有定义，本文中所用的所有技术术语和科学术语的含义意图与本领域技术人员通常所理解的相同。提及本文中使用的技术意图指在本领域中通常所理解的技术，包括那些对本领域技术人员显而易见的技术的变化或等效技术的替换。虽然相信以下术语对于本领域技术人员很好理解，但仍然阐述以下定义以更好地解释本发明。
如本文中所使用，“PEG”为聚乙二醇的缩写，是指重复单元为-CH2CH2O-的均聚物，包括单臂聚乙二醇、多臂聚乙二醇及其衍生物，例如端基带有氨基或羧基等反应官能团的衍生物。本发明中，多臂聚乙二醇的各个臂优选地具有相同的聚合度。当提及多臂聚乙二醇的分子量时，所述分子量意指各个臂的总的分子量。本发明的结构式中，聚乙二醇重复单元下角标的字母m或n代表聚乙二醇的聚合度，当所述聚乙二醇为多臂聚乙二醇时，字母m或n代表每个臂的聚合度。
如本文中所使用，本发明的化合物的“药学上可接受的盐”包括化合物的酸加成盐及碱加成盐。例如盐酸盐、六氟磷酸盐、葡甲胺盐等。
如本文中所使用，结构式中的波浪线
Figure BDA0001967223830000251
意指其他基团与结构式所代表的结构发生键连的位置。
如本文中所使用的，术语“有效量”指被给药后会在一定程度上缓解所治疗病症的一或多种症状的化合物的量。
如本文中所使用，术语“治疗”意指逆转、减轻、抑制这样的术语所应用的病症或病况或者这样的病症或病况的一或多种症状的进展，或预防这样的病症或病况或者这样的病症或病况的一或多种症状。
有益效果
本发明的聚乙二醇偶联药物可以在具有较高载药量的同时，具有良好的溶解性。通过本发明的制备方法，可以高效、方便地制备本发明的，聚乙二醇偶联药物。
下面将结合附图和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是，本领域技术人员将理解，下列附图和实施例仅用于说明本发明，而不是对本发明的范围的限定。根据附图和优选实施方案的下列详细描述，本发明的各种目的和有利方面对于本领域技术人员来说将变得显然。
附图说明
图1为化合物1-202的1H-NMR谱图。
图2为化合物17-145的1H-NMR谱图。
图3为化合物14-108的1H-NMR谱图。
图4为化合物14-111的1H-NMR谱图。
图5为化合物14-129的1H-NMR谱图。
图6为化合物16-137的1H-NMR谱图。
图7为化合物16-145的1H-NMR谱图。
图8为化合物19-36的1H-NMR谱图。
图9为化合物19-42的1H-NMR谱图。
图10为化合物19-58的1H-NMR谱图。
图11为化合物19-64的1H-NMR谱图。
图12为化合物19-72的1H-NMR谱图。
图13为化合物19-70的1H-NMR谱图。
图14为化合物19-74的1H-NMR谱图。
图15为化合物19-77的1H-NMR谱图。
图16为化合物19-78的1H-NMR谱图。
图17为化合物19-80的1H-NMR谱图。
图18为化合物20-98的1H-NMR谱图。
图19为化合物20-101的1H-NMR谱图。
图20为化合物23-139的1H-NMR谱图。
图21为化合物23-143的1H-NMR谱图。
图22为化合物23-152的1H-NMR谱图。
图23为化合物23-161的1H-NMR谱图。
图24为化合物24-4的1H-NMR谱图。
图25为化合物24-12的1H-NMR谱图。
图26为化合物13-141的1H-NMR谱图。
图27显示了实施例25的实验结果，如图所示，A瓶中化合物24-6仍为黄色块状，B瓶中化合物24-12完全溶解，为黄色透明溶液。
图28显示了实施例26的实验结果，如图所示，A瓶中化合物18-158仍为黄色小块状，B瓶中化合物17-141完全溶解，为黄色微粘稠透明状溶液。
图29显示了实施例27的实验结果，如图所示，A瓶中13-141仍为黄色小块状，B瓶中26-18完全溶解，为黄色透明状溶液。
图30显示了实验例1中实验动物体重生长曲线。
图31显示了实验例1中肿瘤生长曲线(体积)。
图32A-32C显示了实验例1中各组肿瘤组织照片，从上到下依次为19-80组、SB7+PCB组、生理盐水组。图33为肿瘤重量柱状图。
图34显示了实验例1中的药物抑瘤率。
图35显示了实验例2中实验动物体重生长曲线。
图36显示了实验例2中肿瘤生长曲线(体积)。
图37A-37C显示了实验例2中各组肿瘤组织照片，从上到下依次为23-161组、PCB组、生理盐水组。
图38为实验例2中肿瘤重量柱状图。
图39显示了实验例2中的药物抑瘤率。
图40显示了实验例3中实验动物体重生长曲线。
图41显示了实验例3中的肿瘤生长曲线(体积)。
图42A-42C显示了实验例3中各组肿瘤组织照片，从上到下依次为生理盐水组、14-111组、SB7+PCB组。
图43为实验例3中的肿瘤重量柱状图。
图44显示了实验例3中的药物抑瘤率。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例中各缩写的含义如下：
Figure BDA0001967223830000271
Figure BDA0001967223830000281
部分原料的来源和结构如下：
M-NH2-2K.HCl
键凯，mPEG-CH2CH2-NH2HCl
M-NH2-3K.HCl
键凯，mPEG-CH2CH2-NH2HCl
M-NH2-5K.HCl
键凯，mPEG-CH2CH2-NH2HCl
M-SCM-10K
键凯，
Figure BDA0001967223830000282
8ARM-SS-40K
键凯，
Figure BDA0001967223830000283
4ARM-SCM-40K
键凯，
Figure BDA0001967223830000284
实施例1化合物1-202的合成
1-91
Figure BDA0001967223830000285
将原料Boc-GFLG-OBn(8.0g，13.73mmol，购于南京药石)、10％的Pd/C钯碳催化剂(150mg)加入到氢化反应装置中，然后加入DMF(30mL)使其溶解，并使溶剂没过搅拌子，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟-充氢气-抽氢气-充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为18Psi，然后在常温下过夜反应。于第二日通过TLC点板发现反应完成后进行后处理，取出反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的抽滤漏斗，用DMF(20mL×3)清洗反应装置并滴加到硅藻土中，直至硅藻土被清洗干净不含产物为止，得到反应产物。
1-93
Figure BDA0001967223830000291
将1-91产物Boc-GFLG-OH(13.73mmol)、Lapatinib(6.65g,11.441mmol,简称LPT)、HBTU(6.51g,17.16mmol)和HOBT(2.32g,17.16mmol)置于250mL圆底烧瓶中然后加入DMF(100mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(8.51mL,51.48mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，将反应液转移到1000mL的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)，用乙酸乙酯萃取三次(200mL×3)，合并有机相，然后用饱和氯化钠(100mL×3)清洗三次后将有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩蒸干后放入真空箱中干燥，进行下一步反应。
1-99
Figure BDA0001967223830000292
将1-93(12.07g,11.441mmol)于250mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(42mL)溶解，然后加入TFA(8.49mL,114.41mmol)室温下搅拌反应过夜。反应停止，将反应液减压浓缩蒸干，然后加入适量乙酸乙酯溶解，转移到1000mL的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(250mL)中和剩余的TFA，中和结束后分离有机相，用乙酸乙酯萃取水相中的产物，萃取3次(150mL×3)，合并有机相再用无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩至100mL，加入硅胶粉(12g)，干法上样，柱层析，用4％甲醇/1％氨水/二氯甲烷洗脱，收集产品，浓缩，蒸干后再放入真空箱中干燥，得到产物11.25g。
1-95
Figure BDA0001967223830000293
将原料Boc-GFLG-OBn(4.50g,7.72mmol)、10％的Pd/C催化剂(80mg)加入到氢化反应装置中，然后加入DMF(30mL)使其溶解，并使溶剂没过搅拌子，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟—充氢气—抽氢气—充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为18Psi，然后在常温下过夜反应。于第二日通过TLC点板发现反应完成后进行后处理，取出反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的抽滤漏斗，用DMF(20mL×3)清洗反应装置，直至反应器被清洗干净不含产物为止，得到反应产物。
1-97
Figure BDA0001967223830000301
将1-95产物Boc-GFLG-OH(7.72mmol)、MK-2206·2HCl(2.97g,6.18mmol,简称MK2)、HBTU(3.52g,9.27mmol)和HOBT(1.25g,9.27mmol)置于250mL圆底烧瓶中然后加入DMF(90mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(6.6mL,27.81mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，将反应液转移到1000mL的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)，用乙酸乙酯萃取三次(200mL×3)，合并有机相，然后用饱和氯化钠(100mL×3)清洗三次，除水后将有机相减压蒸干，再放入真空箱中干燥，得到产品8.1g，产率148.6％，进行下一步反应。
1-101
Figure BDA0001967223830000302
将1-97(5.45g,6.18mmol)于250mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(45mL)溶解，然后加入TFA(4.59mL,61.80mmol)室温下搅拌反应过夜。反应停止，将反应液减压浓缩蒸干，然后加入乙酸乙酯(300mL)溶解，转移到1000mL的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(200mL)中和剩余的TFA，中和结束后分离有机相，用乙酸乙酯萃取水相中的产物，萃取3次(150mL×3)，收集有机相，用二氯甲烷(20mL)和甲醇(5mL)清洗附在瓶壁上的产物，合并有机相，减压蒸干，干法上样，柱层析，用5％甲醇/2％氨水/二氯甲烷洗脱，收集产品，浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产物4.297g，产率89.0％。
MALDI-TOF MS:[M+H+]782.30,[M+Na+]804.25.
1-104
Figure BDA0001967223830000303
将Fmoc-Asp-OtBu(3.92g,9.524mmol)置于250mL圆底烧瓶中，然后加入DMF(103mL)使其溶解，随后加入1-99产物GFLG-LPT(6.5g,6.803mmol)、PyAOP(4.97g,9.524mmol)后置于0℃条件下搅拌30分钟，然后缓慢滴加2,4,6-三甲基吡啶(0.90mL,6.803mmol)，滴加完毕后在此低温下反应2天。反应结束后，将反应液转移到1000mL的分液漏斗中，加入去离子水(200mL)清洗，用乙酸乙酯清洗反应瓶，用力摇匀分液漏斗中的混合相，分离有机相，用乙酸乙酯萃取水相三次(200mL×3)，合并有机相，再用饱和氯化钠(100mL×3)清洗三次后将有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，干法上样，柱层析，用4％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品8.2g，产率89.4％。
1-108
Figure BDA0001967223830000311
将1-104(8.2g,6.079mmol)于250mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(30mL)溶解，然后加入TFA(4.52mL,60.79mmol)室温下搅拌反应过夜。反应停止，将反应液减压浓缩蒸干，然后加入二氯甲烷(5mL)溶解，再加正己烷(100mL)沉降，倒掉上清液，重复此操作两次，将沉降物蒸干，称重量，由于超重，于是进行走柱纯化处理，干法上样，柱层析，用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集产品，浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产物5.21g，产率66.37％。
MALDI-TOF MS:[M+H+]1292.30,[M+Na+]1314.35.
1-111
Figure BDA0001967223830000312
将1-108(4.6g,3.56mmol)置于250mL圆底烧瓶中，然后加入DMF(90mL)使其溶解，随后加入1-101产物(2.53g,3.23mmol)、PyAOP(2.36g,4.53mmol)后置于0℃条件下搅拌30分钟，然后缓慢滴加2,4,6-三甲基吡啶(0.43mL,3.23mmol)，滴加完毕后在此低温下反应2天。反应结束后，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入去离子水(200mL)清洗，用乙酸乙酯清洗反应瓶，用力摇匀分液漏斗中的混合相，分离有机相，用乙酸乙酯萃取水相三次(200mL×3)，再用二氯甲烷(30mL)和甲醇(6mL)混合溶剂洗去壁上的产物，合并有机相，滤液浓缩，干法上样，柱层析，用6％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品4.6g，产率70.0％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.68(s,1H),10.00(s,1H),8.78-8.53(m,2H),8.32-7.70(m,15H),7.54-7.48(m,6H),7.34-7.20(m,27H),7.00(d,J＝8.0Hz,1H),6.69-6.54(m,1H),5.26(s,2H),4.73(d,J＝20.0Hz,1H),4.54(d,J＝6.0Hz,1H),4.35-4.16(m,7H),3.70-3.64(m,7H),3.25-2.77(m,13H),2.40-1.79(m,4H),1.48-1.23(m,7H),0.86-0.76(m,14H).
1-115
Figure BDA0001967223830000321
将1-111(4.6g,2.24mmol)于250mL的圆底烧瓶中，用DMF(53mL)溶解，然后加入吗啉(5.85mL,67.1mmol)室温下搅拌反应2小时，反应停止。将反应液转移到2L的分液漏斗中，加入饱和氯化钠(100mL)，用乙酸乙酯清洗反应瓶，用力摇匀分液漏斗中的混合相，分离有机相，用乙酸乙酯萃取水相三次(200mL×3)，合并有机相，再用饱和氯化钠(100mL)清洗三次。加入甲醇(5mL)和二氯甲烷(20mL)溶解附在瓶壁上的反应产物，合并有机相产物，抽滤，滤液浓缩，干法上样，柱层析，用7％甲醇/1％氨水/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品3.1g，产率75％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.86(d,J＝8.0Hz,1H),8.75(d,J＝4.0Hz,1H),8.55(s,1H),8.33-8.08(m,11H),7.99-7.70(m,4H),7.33-7.21(m,17H),7.15-6.92(m,12H),6.69-6.54(m,1H),5.26(s,2H),4.75-4.09(m,10H),3.68-3.53(m,10H),3.06-2.67(m,9H),2.41-2.25(m,2H),2.00-1.81(m,2H),1.54-1.47(m,6H),0.86-0.78(m,14H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]1833.90,[M+Na+]1856.90.
1-126
Figure BDA0001967223830000322
将Fmoc-Glu-OtBu(0.96g,2.25mmol)置于500mL圆底烧瓶中，然后加入DMF(70mL)使其溶解，随后加入1-115产物(2.95g,1.61mmol)、PyAOP(1.17g,2.25mmol)后置于0℃条件下搅拌30分钟，然后缓慢滴加2,4,6-三甲基吡啶(0.22mL,1.61mmol)，滴加完毕后在此低温下反应3天。反应结束后，将反应液转移到2000mL的分液漏斗中，加入去离子水(200mL)清洗，再用乙酸乙酯清洗反应瓶，用力摇匀分液漏斗中的混合相，分离有机相，用乙酸乙酯萃取三次(200mL×3)，合并有机相，再用饱和氯化钠(100mL)清洗三次后将有机相浓缩，干法上样，柱层析，用8％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品3.8g，(理论重量：3.61g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.62(s,1H),9.80(s,2H),8.70-8.45(m,5H),8.26-8.15(m,8H),7.86-7.63(m,15H),7.45-7.26(m,8H),7.13-6.85(m,17H),5.19(s,2H),4.68-4.45(m,6H),4.21-4.08(m,8H),3.69-3.52(m,8H),2.82-2.72(m,11H),2.43-2.13(m,3H),1.68-1.46(m,4H),1.31-1.16(m,14H),0.78-0.69(m,15H).
1-130
Figure BDA0001967223830000331
将1-126(3.6g,1.61mmol)于500mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(30mL)溶解，然后加入TFA(1.20mL,16.1mmol)室温下搅拌反应2小时后补加TFA(12.3mL)，再反应4小时后反应停止，将反应液减压浓缩蒸干，称重量，由于超重，于是进行走柱纯化处理，干法上样，柱层析，用8％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集产品，浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产物2.4g，产率68.20％。
1-135
Figure BDA0001967223830000332
将1-130(2.25g,1.03mmol)置于500mL圆底烧瓶中，然后加入DMF(42mL)使其溶解，随后加入M-NH2-2K.HCl(1.96g,0.98mmol,购于键凯)、PyAOP(0.72g,1.37mmol)后置于0℃条件下搅拌30分钟，然后缓慢滴加2,4,6-三甲基吡啶(0.26mL,1.96mmol)，滴加完毕后在此低温下反应3天。反应结束后，乙醚沉降，倾倒上清液，再用正己烷沉降三次(180mL×3)，抽干，放入真空箱中干燥，得到产品4.2g，产物超重。
1-149
Figure BDA0001967223830000333
将1-135(4.08g,0.98mmol)于500mL的圆底烧瓶中，用DMF(40mL)溶解，然后加入吗啉(2.56mL,29.4mmol)室温下搅拌反应2.5小时，反应停止。取出反应液加入甲基叔丁基醚(170mL)沉降，再用正己烷沉降三次(150mL×3)，抽干，干燥，加入硅胶粉(8g)干法上样，柱层析，用9％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品2.3g，产率60％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.88(s,2H),8.76(d,J＝8.0Hz,1H),8.55(s,2H),8.34-8.02(m,15H),7.96-7.78(m,3H),7.46(dd,J＝4.0,8.0Hz,3H),7.13-7.07(m,24H),6.92(d,J＝4.0Hz,1H),6.69-6.54(m,1H),5.26(s,2H),4.73(d,J＝20.0Hz,2H),4.52-4.48(m,4H),4.35-4.11(m,7H),3.68-3.50(m,166H),3.24-2.73(m,36H),2.33-1.81(m,6H),1.49-1.23(m,10H),1.04(t,J＝8.0Hz,2H),0.86-0.78(m,8H).
1-154
Figure BDA0001967223830000341
将原料Boc-GFLG-OBn(0.46g,0.781mmol)、10％的Pd/C催化剂(50mg)加入到氢化反应装置中，然后加入DMF(30mL)使其溶解，并使溶剂没过搅拌子，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟—充氢气—抽氢气—充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为18Psi，然后在常温下过夜反应。于第二日通过TLC点板发现反应完成后进行后处理，取出反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的抽滤漏斗，用DMF(15mL×3)清洗反应装置，直至反应器被清洗干净不含产物为止，得到反应产物。
1-155
Figure BDA0001967223830000342
将1-154产物Boc-GFLG-OH(0.781mmol)、1-149(2.2g,0.558mmol)、HBTU(0.32g,0.837mmol)和HOBT(0.11g,0.837mmol)置于250mL圆底烧瓶中然后加入DMF(80mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.42mL,2.511mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，取出反应液加入甲基叔丁基醚(350mL)沉降，再用正己烷沉降三次(150mL×3)，抽干，真空干燥，加入硅胶粉(5g)干法上样，柱层析，用8％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品2.4g，产率97.2％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.72(s,1H),8.75(d,J＝8.0Hz,1H),8.55(s,2H),8.34-8.05(m,10H),7.99-7.71(m,12H),7.48-7.19(m,30H),6.93(d,J＝4.0Hz,3H),6.68-6.54(m,1H),5.26(s,2H),4.73(d,J＝20.0Hz,2H),4.52(s,5H),4.35-4.11(m,7H),3.68-3.49(m,172H),3.02-2.89(m,21H),2.75-2.67(m,16H),2.33-1.81(m,5H),1.53-1.47(m,13H),1.19-1.12(m,8H),0.81-076(m,18H).
1-158
Figure BDA0001967223830000351
将1-155(2.35g,0.532mmol)于250mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(35mL)溶解，然后加入TFA(0.4mL,5.32mmol)室温下搅拌反应3小时后补加TFA(1.8mL)，再反应4小时后反应停止，将反应液减压浓缩蒸干，称重量，由于超重，于是进行走柱纯化处理，干法上样，柱层析，用10％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集产品，浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产物1.1g，产率47.9％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.85(s,1H),8.76-8.74(m,1H),8.42-8.22(m,3H),8.13-7.88(m,10H),7.78-7.64(m,2H),7.57-7.40(m,1H),7.40-7.16(m,30H),7.10-7.03(m,10H),4.75-4.52(m,4H),4.32-4.11(m,5H),3.74-3.57(m,14H),3.55-3.42(m,173H),3.24-3.17(m,15H),3.06-2.99(m,9H),2.75-2.67(m,3H),2.46-2.33(m,5H),2.12-2.02(m,3H),1.82-1.72(m,3H),1.58-1.48(m,5H),1.27-1.18(m,1H),0.87-076(m,18H).
MALDI-TOF MS:从4315.73到4338.68
1-202
Figure BDA0001967223830000352
将1-158(0.55g,0.127mmol)于100mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(15mL)和DMF(2mL)溶解，然后加入高分子M-SCM-5K(Lot Number:YF278P110)、(0.557g,0.107mmol,购于键凯)室温下避光、以最低搅拌速度搅拌反应5天。持续监测反应，发现反应不再变化时停止反应，将反应液减压浓缩至10mL，然后加入甲基叔丁基醚(150mL)沉降2小时后抽干，干法上样，柱层析，用6％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品0.3419g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.68(s,1H),9.86-9.85(m,1H),8.75-8.70(m,1H),8.56(s,1H),8.34(s,2H),8.27-7.88(m,17H),7.82-7.74(m,2H),7.49-7.47(m,2H),7.34-7.11(m,30H),5.27(s,2H),4.75-4.70(m,2H),4.56-4.54(m,5H),4.37-4.22(m,3H),4.11-4.01(m,10H),3.89-3.81(m,12H),3.79-3.68(m,33H),3.57-3.51(m,594H),3.24-3.17(m,20H),3.06-3.01(m,5H),2.76-2.68(m,3H),2.66-2.60(m,3H),2.43-2.34(m,3H),2.13-2.00(m,2H),1.82-1.74(m,2H),1.57-1.48(m,3H),1.30-1.24(m,4H),0.86-0.77(m,18H).化合物1-202的1H-NMR谱图如图1所示。
MALDI-TOF MS:从9424.33到9499.87
实施例2化合物17-159的合成
17-144
Figure BDA0001967223830000361
将BOC-GFLG-E(OtBu){LC(EE)(OBn)4}(0.2540g,0.1617mmol，本实施例中编号为16-180，合成过程参见实施例9的9-103)加入到反应釜中，加入10％的Pd/C(0.1000g)，加入DMF(30mL)使其溶解，用水泵抽掉反应釜里面的空气呈真空，通入氢气，氢气压力为0.14MPa,然后放掉氢气，水泵抽至真空，再通入氢气，如此重复3次，最后再通入氢气，反应在室温下搅拌过夜。反应结束，反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(20mLⅹ3)清洗,滤液装入250mL的圆底烧瓶中,作为下一步的原料。
17-145
Figure BDA0001967223830000371
将17-102(1.4000g,0.7440mmol，结构和合成过程参见PCT国际专利申请PCT/CN2018/073662实施例M-10中化合物L-10的合成，将Boc-GLG-OBn换成Boc-GFLG-OB即可),、HBTU(0.3679g,0.9702mmol)、HOBT(0.1311g,0.9702mmol)加入到含有17-144(0.1957g,0.1617mmol)的DMF(90mL)溶液中，反应置于-5℃，搅拌约10分钟,然后缓慢滴加DIEA(0.4811mL,2.9106mmol),1分钟滴加完毕，继续于-5℃反应1小时，然后将反应移到室温下搅拌过夜。反应结束，加入正己烷(150mL),分层，倾倒上层清液，下层液体加入正己烷(150mL x 4)，最终呈油状，加入甲基叔丁基醚(100mL)，析出固体，抽滤，滤饼加入甲醇(5mL)二氯甲烷(20mL)溶液溶解，再加入乙酸乙酯(100mL),析出固体，抽滤，滤饼用真空烘箱干燥，得产品17-145:21.4g，产率100％.
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,4H),9.12–8.93(m,5H),8.51–7.76(m,66H),7.53(d,J＝8.9Hz,14H),7.36–7.12(m,74H),5.89–5.67(m,7H),4.55(s,15H),4.41–4.23(m,23H),4.13–3.99(m,29H),3.93–3.62(m,59H),3.24–2.89(m,25H),2.80(s,20H),2.42(s,11H),2.35–2.12(m,40H),1.99(s,18H),1.92–1.68(m,27H),1.61–1.43(m,33H),1.36(d,J＝7.2Hz,15H),1.20(s,6H),1.18(s,9H),1.16(s,5H),0.99–0.75(m,61H),0.51(s,8H)。化合物17-145的1H-NMR谱图如图2所示。
MALDI-TOF MS:[M+H+]8658.13
17-150
Figure BDA0001967223830000381
将17-145(1.4010g,0.1617mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(7mL)，再加入TFA(2.0000mL,26.9315mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩，加入甲基叔丁基醚(100mL)，析出固体,抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mLⅹ3)清洗，滤饼用甲醇(10mL)和二氯甲烷(40mL)溶液溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干,呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和6％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品17-150：0.5088g,产率37％。
17-151
Figure BDA0001967223830000382
将17-150(0.5088g,0.0598mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入DMF(20mL)使其溶解，反应置于-5℃下低速搅拌约10分钟，缓慢滴加DIEA(0.1000mL,0.6050mmol),滴加完毕，再加入4ARM-SCM-40K(0.5702g,0.0136mmol，购于键凯),反应移到室温下低速避光搅拌一个星期。反应结束，向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(50mL)，出现分层，倾倒上层液体，下层油状继续加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(50mL)，如此重复3次，析出固体，过滤，滤饼用甲醇(10mL)二氯甲烷(40mL)溶液溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干,呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和5％-7％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品17-151：0.8420g,产率82％。
17-159
Figure BDA0001967223830000391
将17-151(0.4100g,0.0054mmol)投入250mL中，加入DMF(20mL)使其溶解，加入M-NH2-3K.HCl(0.1012g,0.0326mmol)、HBTU(0.1235g,0.3257mmol)、HOBT(0.0408g,0.3257mmol)，将反应置于-5℃条件下低速搅拌约20分钟,然后缓慢滴加DIEA(0.1970mL,1.1940mmol)，继续于-5℃反应1小时后，然后将反应移到室温下避光低速搅拌8天。反应结束，加入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(50mL),倾倒上层清液，如此重复2次，析出固体，抽滤，滤饼用甲醇(10mL)和二氯甲烷(40mL)溶液溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干,呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和6％-7％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥1小时，加入无水乙醇(10mL)和二氯甲烷(3mL)溶解，再加入甲基叔丁基醚(100mL),析出固体，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mLⅹ3)清洗,滤饼用真空烘箱干燥，得产品17-159：0.4132g,产率86％。
实施例3化合物17-161的合成
17-161
Figure BDA0001967223830000401
将17-151(0.4100g,0.0054mmol)投入250mL中，加入DMF(25mL)使其溶解，加入M-NH2-5K.HCl(0.1929g,0.0367mmol)、HBTU(0.0930g,0.2460mmol)、HOBT(0.0330g,0.2460mmol)，将反应置于-5℃条件下搅拌约10分钟,然后缓慢滴加DIEA(0.1490mL,0.9030mmol)，继续在-5℃反应30分钟，然后将反应移到室温下避光低速搅拌5天。反应结束，加入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(50mL),析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mLⅹ2)清洗，再用甲醇(10mL)和二氯甲烷(40mL)溶液溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干,呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和4％-7％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥2小时，加入无水乙醇(10mL)和二氯甲烷(5mL)溶解，再加入甲基叔丁基醚(100mL),析出固体，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mLⅹ3)清洗,干燥，得产品17-161：0.5198g,产率84％。
实施例4化合物20-107的合成
20-56
Figure BDA0001967223830000402
称取Boc-Glu-OH(0.739g，2.9902mmol)、GFLG-LPT(6.0g，6.2794mmol)、HOBT(1.212g，8.9706mmol)、HBTU(3.402g，8.9706mmol)，DMF溶液溶解，置于低温恒温浴中(-5℃),搅拌30分钟后，滴加DIEA(4.44ml，26.9118mmol)，低温反应两小时后，常温搅拌反应。反应结束，反应液用饱和碳酸氢钠和乙酸乙酯萃取3次(150ml×3)，合并有机相，用饱和NaCl溶液清洗3次(150ml×3)。浓缩，干法上样，柱层析。用4％甲醇/二氯甲烷-10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱。蒸干，得产品5.3g，产率84％。
20-58
Figure BDA0001967223830000411
取20-56(5.3g,2.4974mmol)，放入250mL烧瓶中，加二氯甲烷(20ml)溶解，加TFA(5.56ml，74.92mmol)，常温搅拌反应。反应结束，甲基叔丁基醚(100mL)和正己烷沉降(200mL)，蒸干。干法上样，柱层析。柱高10cm，用1％氨水:4％甲醇/二氯甲烷-1％氨水:6％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，蒸干，得产品4.5g，产率90％。
20-61
Figure BDA0001967223830000412
称取反应物Boc-LC-E[E(OBn)2]2(0.469g，0.464mmol，合成过程参见16-148的合成)投入氢化反应釜中，沿内壁一滴滴滴加DMF溶解反应物，加入10％Pd/c(0.1g)，装好装置，抽气为真空，通入氢气(16psi)，反复操作三次。搅拌过夜。反应结束，在砂芯漏斗中加入硅藻土抽滤反应液，再用DMF(25mL×3)清洗三遍硅藻土，得到产品溶液，投下一步反应。
20-62
Figure BDA0001967223830000413
称取20-61(0.464mmol)、20-58(4.5g，2.228mmol)、HOBT(0.376g，2.785mmol)、HBTU(1.05g，2.785mmol)，置于20-61的DMF溶液(100mL)中，置于低温恒温浴中(-5℃),搅拌30分钟后，滴加DIEA(1.38ml，8.355mmol)，低温反应两小时后，常温搅拌反应。反应结束，甲基叔丁基醚(100mL)和正己烷(200mL)沉降，蒸干。干法上样，柱层析。柱高15cm，用6％甲醇/二氯甲烷-10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，蒸干，再次纯化。
20-66
Figure BDA0001967223830000421
反应物20-62(3.8g)加入二氯甲烷(20mL)，加TFA(0.96mL，12.9mmol)，常温搅拌反应。反应结束，反应液浓缩，加入甲基叔丁基醚(50mL)，加入正己烷(50mL)沉降得粉末。柱层析，柱高10cm，用1％氨水:4％甲醇/二氯甲烷-1％氨水:6％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱。蒸干，真空干燥得产品1.4g。产率37.8％。
20-80
Figure BDA0001967223830000422
称取Fmoc-Glu-OtBu(0.08g，0.193mmol)、20-66(1.4g，0.1614mmol)、HOBT(0.0326g，0.242mmol)、HBTU(0.091g，0.242mmol)，溶液(40mL DMF)溶解，置于低温恒温浴中(-5℃),搅拌30分钟后，滴加DIEA(0.119mL，0.726mmol)，低温反应两小时后，常温搅拌反应。反应结束，反应液浓缩，加入甲基叔丁基醚(100m)，加入正己烷(200mL)沉降得粉末。
20-81
Figure BDA0001967223830000431
250mL烧瓶中，20-80加入二氯甲烷(10mL)，加TFA(0.35mL，4.842mmol)，溶解，常温搅拌反应。反应结束，反应液浓缩，加入甲基叔丁基醚(100m)，加入正己烷(200mL)沉降得粉末。真空干燥，投下一步。
20-82
Figure BDA0001967223830000432
称取20-81(0.1614mmol)、GFLG-PCB(0.17g，0.2098mmol)、HOBT(0.0326g，0.242mmol)、HBTU(0.091g，0.242mmol)，DMF溶液(40mL)溶解，置于低温恒温浴中(-5℃),搅拌30分钟后，滴加DIEA(0.119mL，0.726mmol)，低温反应两小时后，常温搅拌反应。反应结束，反应液浓缩，加入甲基叔丁基醚(100m)，加入正己烷(200mL)沉降得粉末。投下一步。
20-87
Figure BDA0001967223830000433
称20-82(0.1614mmoL)置于500mL烧瓶中，加DMF溶液(100mL)，加入吗啉(0.42mL)，常温搅拌反应，每隔0.5小时点TLC。3小时后，反应结束。加入甲基叔丁基醚(100mL)，加入正己烷(200mL)沉降得粉末。柱层析，干法上样，用1％氨水:6％甲醇/二氯甲烷洗脱。产品重1.1g，产率71％。
20-89
Figure BDA0001967223830000441
称取Fmoc-Glu-OtBu(0.059g，0.1388mmoL)、20-87(1.1g，0.1157mmoL)、HOBT(0.023g，0.1735mmoL)、HBTU(0.065g，0.1735mmoL)，置于低温恒温浴中(-5℃),搅拌30分钟后，滴加DIEA(0.086mL，0.5206mmol)，低温反应两小时后，常温搅拌反应。反应结束，反应液加入甲基叔丁基醚(100m×2)，加入正己烷(200mL×2)沉降得粉末。真空干燥，投下一步。
20-92
Figure BDA0001967223830000442
称20-89(0.1157mmoL)置于250mL烧瓶中，加DMF溶液(30mL)，加入吗啉(0.3mL,3.3471mmoL)，常温搅拌反应，每隔0.5小时点TLC。3小时后，反应结束。加入甲基叔丁基醚(100mL)，加入正己烷(200mL)沉降得粉末。真空干燥得产品重1.3g。
20-93
Figure BDA0001967223830000451
称取Boc-GFLG-OH(0.1389mmoL)、20-92(0.1157mmoL)、HOBT(0.023g，0.1735mmoL)、HBTU(0.065g，0.1735mmoL)，置于低温恒温浴中(-5℃),搅拌30分钟后，滴加DIEA(0.086mL，0.5206mmol)，低温反应两小时后，常温搅拌反应。反应结束，反应液加入甲基叔丁基醚(100m×2)，加入正己烷(200mL×2)沉降得粉末。
20-95
Figure BDA0001967223830000452
称20-93(0.1157mmoL)放入250mL烧瓶中，加入二氯甲烷(5mL)，加TFA(10mL,)，超声溶解，常温搅拌反应。反应结束，反应液蒸干浓缩，浓缩至少量时，加入甲基叔丁基醚(100mL)，超声，再加入正己烷(200mL)沉出粉末，用1％氨水:8％甲醇/二氯甲烷洗脱。得0.6g。
20-100
Figure BDA0001967223830000461
称20-95(0.6g)，置于250mL烧瓶中，DMF(90mL)溶解，滴加DIEA(0.3mL)加入4ARM-SCM-40K(0.5g)，再加入二氯甲烷(5mL)，。置于常温下避光反应，低速搅拌。反应结束后，在锥形瓶中加入甲基叔丁基醚(150mL)，反应液倒入其中，再加入正己烷(200mL)。柱层析。柱高7cm，洗脱剂1％氨水:8％甲醇/二氯甲烷洗脱得产品0.9g。
20-107
Figure BDA0001967223830000462
称取M-NH2-3K·HCl(0.22g，0.1246mmoL)、20-98(0.9g,)、HOBT(0.009g，0.073mmoL)、HBTU(0.027g，0.073mmoL)，置于500mL烧瓶中，加入DMF溶液(50mL)，置于低温恒温浴中，30分钟后滴加DIEA(2mL)，1小时后取出常温低速搅拌反应。避光。反应结束后，点TLC无明显产物点。在锥形瓶中加入甲基叔丁基醚(150mL)，反应液倒入其中，再加入正己烷(200mL)，析出，抽滤。固体干法上样，柱层析。柱高5cm，用1％氨水:5％洗脱，蒸干后，加入无水乙醇(5mL)再加二氯甲烷(2mL)溶解，超声成均相，加入正己烷(100mL)，抽滤。反复溶解、沉降三次。真空干燥得产品0.3g。
实施例5化合物24-14的合成
3-30
Figure BDA0001967223830000463
称取Boc-GFLG-OBn(自制4.0047g,6.8646mmoL)、10％的Pd/C(0.1006g)放入微型反应釜中，加入DMF(25mL)，装好装置，抽气为真空，通入H2(16psi)，待反应2分钟后，抽气后，再通H2，反复三次后关闭进气抽气阀门(注意整个操作过程不关闭真空泵)，将H2封于反应釜中，常温过夜。反应结束，硅藻土作为滤饼，抽滤，再用DMF清洗反应釜与漏斗三次(25mL×3)，将液体移入250mL的烧瓶中，作为3-31的原料。
3-31
Figure BDA0001967223830000471
称取LPT(简称：Lapatinib,3.7999g,6.5377mmoL)、HBTU(3.7195g,9.8066mmoL)、HOBT(1.3253g,9.8066mmoL)放入3-30的DMF溶液(100mL)中，将反应放入低温恒温反应浴中(-5摄氏度)，反应20分钟后，滴加入DIEA(5mL,12.8714mmoL)，低温搅拌2小时后取出反应置磁力搅拌器上，常温过夜。反应结束，将反应液移入2L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)与乙酸乙酯(400mL)，充分震荡，分离有机相，将水相用乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)，合并有机相，用饱和碳酸氢钠溶液清洗一次(150mL)，饱和氯化钠溶液清洗2次(150mL×2)，把有机相倒入2L的锥形瓶中，加入无水硫酸镁干燥，抽滤，浓缩到100mL后，加入硅胶粉(15g)旋蒸成固体溶液，干法上样，柱层析。用0.5％氨水：2％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集产品，旋干后为油状，再用乙酸乙酯(50m L)溶解，加正己烷(100mL)，超声成均相后抽滤，真空干燥得产品5.9098g，产率85.65％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.87(s,1H),8.75(s,1H),8.56(s,1H),8.12(s,4H),7.91–7.64(m,3H),7.56–7.41(m,1H),7.40–6.84(m,10H),6.62(m,2H),5.27(s,2H),4.73(s,2H),4.55(s,1H),4.48–4.11(m,3H),4.03(s,1H),3.89–3.39(m,6H),3.03(s,4H),2.69(s,3H),1.99(s,1H),1.70–1.41(m,4H),1.40–1.09(m,9H),0.84(s,6H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]1055.30,[M+Na+]1077.25
3-34
Figure BDA0001967223830000472
取3-31(5.9g,5.5891mmoL)放入250mL烧瓶中，加二氯甲烷(15mL)溶解，加TFA(4.2mL,55.8910mmoL)常温搅拌过夜。反应结束，将反应液蒸干除去溶剂，乙酸乙酯溶解后移入2L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL水相成碱性)与乙酸乙酯(400mL)，充分震荡，分离有机相，将水相用乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)，合并有机相，用饱和碳酸氢钠溶液清洗一次(150mL)，饱和氯化钠溶液清洗2次(150mL×2)，把有机相倒入2L的锥形瓶中，加入无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩成100mL，加正己烷(100mL)，超声成均相后抽滤得产品，滤液加入硅胶粉(15g)旋蒸成固体溶液，干法上样，柱层析，用1％氨水：5％甲醇/氯甲烷洗脱，旋蒸得产品4.0926g，产率76.64％。
3-13
Figure BDA0001967223830000481
称取Boc-GFLG-OBn(2.0036g,3.4323mmoL)、10％Pd/C(0.05502g)放入微型反应釜中，加入DMF(30mL)，装好装置，抽气为真空，通入H2(16psi)，待反应2分钟后，抽气后，再通H2，反复三次后关闭进气抽气阀门(注意整个操作过程不关闭真空泵)，将H2封于反应釜中，常温过夜。反应结束，硅藻土作为滤饼，抽滤，再用DMF清洗反应釜与漏斗三次(25mL×3)，移入250mL的烧瓶中，作为3-14的原料药。
3-14
Figure BDA0001967223830000482
称取SB7(1.4790g,2.8603mmoL,简称:SB-743921)、HBTU(1.6270g,4.2905mmoL)、HOBT(0.5797g,4.2905mmoL)放入3-13的烧瓶中，将反应液放入低温恒温反应浴中(-5摄氏度)，反应20分钟后，一滴一滴加入DIEA(2.2mL,12.8714mmoL)，再反应2小时后取出置磁力搅拌器上，常温过夜。反应结束，将反应液移入2L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(300mL)与乙酸乙酯(400mL)，充分震荡，分离有机相，将水相用乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠清洗三次(300mL),把有机相倒入2L的锥形瓶中，加入无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩后，加入硅胶粉(12g)蒸干成固体粉末，干法上样，柱层析，用含2％甲醇和1％氨水的二氯甲烷溶液进行梯度洗脱，得产品3.7g，产率100％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.17–8.06(m,3H),7.92-7.89(m,2H),7.58–7.52(m,2H),7.12-7.10(m,13H),6.93-6.92(m,1H),6.53-6.53(m,1H),4.51-4.50(m,1H),4.25-4.24(m,1H),4.14-4.13(m,1H),3.89-3.88(m,1H),3.60–3.41(m,4H),3.10–2.94(m,2H),2.81-2.80(m,2H),2.60-2.59(m,2H),2.32-2.32(m,4H),1.51-1.49(m,3H),1.35-1.33(m,9H),1.12-1.10(m,1H),0.95–0.87(m,1H),0.87-0.78(m,9H),0.51-0.50(m,3H).MALDI-TOFMS:[M+H+]991.45,[M+Na+]1013.40
3-16
Figure BDA0001967223830000491
取3-14(3.6g,3.6304mmoL)放入250mL烧瓶中，加二氯甲烷(15mL)溶解，加TFA(2.7mL,36.304mmoL)常温搅拌过夜。反应结束，将反应液蒸干除去溶剂，乙酸乙酯溶解后移入2L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(300mL使水相呈碱性)与乙酸乙酯(400mL)，充分震荡，分离有机相，将水相用乙酸乙酯萃取3次(100mL×3)，合并有机相，用饱和碳酸氢钠清洗一次(100mL),饱和氯化钠清洗2次(100mL×2)，把有机相倒入2L的锥形瓶中，加入无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后，加入硅胶粉(10g)蒸干成固体粉末，干法上样，柱层析，用5％甲醇：1％氨水/二氯甲烷洗脱，收集蒸干得产品1.7587g，产率54.33％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.17(s,1H),8.03-8.02(m,3H),7.87-7.86(m,1H),7.53–7.42(m,2H),7.14-7.12(m,16H),4.49-4.48(m,1H),4.20-4.19(m,1H),4.08-4.07(m,1H),3.83-3.82(m,1H),3.47-3.46(m,4H),2.92-2.90(m,4H),2.76-2.75(m,1H),2.65-2.64(m,1H),2.25-2.22(m,4H),1.79-1.77(m,2H),1.51–1.36(m,3H),1.25-1.24(m,1H),1.12–0.99(m,1H),0.88–0.72(m,12H),0.45-0.44(m,3H).
3-42
Figure BDA0001967223830000492
称取Fmoc-GLu-OtBu(1.8740g,4.3956mmoL)、加入DMF(70mL)溶解，放入低温恒温反应浴中(0℃)，然后加入3-34(3.0007g,3.1397mmoL)、PyAop(2.3008g,4.3956mmoL)，搅拌30分钟后，滴加TMP(0.42mL,3.1397mmoL)，低温搅拌过夜。反应结束，将反应液倒入2升分液漏斗中，加去离子水(300mL)，乙酸乙酯(400mL)，震荡，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取三次(150mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水清洗三次(150mL×3)。干法上样，柱层析。用5％甲醇/二氯甲烷洗脱得产品3.5g，产率82.06％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),8.77(s,1H),8.65–8.42(m,1H),8.31–7.99(m,5H),7.94–7.78(m,2H),7.71(s,5H),7.53–7.02(m,15H),6.62(s,1H),5.27(s,2H),4.73(s,2H),4.54(s,1H),4.38–4.12(m,4H),3.93–3.53(m,3H),3.08–2.90(m,5H),2.75-2.74(m,1H),2.20(s,2H),1.92(s,2H),1.80–1.63(m,6H),1.55-1.53(m,3H),1.38-1.36(m,9H),0.93–0.77(m,6H).MALDI-TOF MS:[M+Na+]1385.35.
3-47
Figure BDA0001967223830000501
称取原料药3-42(3.5g,2.5680mmoL)放入250mL烧瓶中，加30mL二氯甲烷溶解，加TFA(2mL)，置于磁力搅拌器上，常温过夜。反应结束，将反应液蒸干，除去二氯甲烷，用二氯甲烷(10mL)溶解，加正己烷(100mL)沉淀，超声，放入冰箱冷却，倾倒，继续加二氯甲烷(10mL)，正己烷(100mL)沉淀，冷却倾倒，反复沉淀三次，蒸干得产品3.32g，产率100％。
3-53
Figure BDA0001967223830000502
称取3-47(1.9g,1.284mmoL)倒入反应瓶中，加DMF(50mL)溶解，放入0℃低温恒温反应浴中，再加入3-16(1.1440g,1.284mmoL)、pyAop(0.6705g,1.284mmoL)，三十分钟后加入TMP(0.46mL，1.284mmoL)，低温搅拌过夜。反应结束，将反应液倒入1升分液漏斗中，加乙酸乙酯(200mL)，震荡，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取4次(100mL×4)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液清洗2次(150mL×2)。浓缩，干法上样，柱层析。用5％-10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品1.9265g,产率68.82％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.87(s,1H),8.74(s,1H),8.56(s,1H),8.27–7.96(m,9H),7.93–7.46(m,10H),7.42–7.03(m,30H),6.62(s,1H),5.26(s,2H),4.73(s,2H),4.54(s,2H),4.38–4.06(m,6H),3.94–3.55(m,4H),3.39(s,2H),3.17(s,2H),3.02(s,9H),2.85–2.62(m,3H),2.41–2.05(m,9H),1.88(s,2H),1.75(s,2H),1.48(s,8H),1.24-1.23(m,1H),1.10-1.09(m,1H),0.97–0.74(m,15H),0.49-0.48(m,3H)
3-63
Figure BDA0001967223830000503
取3-53(1.9g,0.8771mmoL)放入250mL烧瓶中，加DMF(20mL)溶解，置磁力搅拌器上，加吗啉(1.9mL,21.9275mmoL)，常温反应，每隔1小时点样。1.5小时后，反应结束，在反应液中加入乙醚(200mL)，变加边搅拌，放在冰箱冷却，待有沉淀析出，倾倒，加二氯甲烷(10mL)溶解，加正己烷沉淀，冷却，倾倒，反复沉淀三次，旋蒸，除去溶剂，得产品1.5g，产率88.24％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.87(s,1H),8.75(s,1H),8.56(s,1H),8.28–7.97(m,11H),7.81–7.71(m,2H),7.51-7.49(m,3H),7.39–7.05(m,25H),6.76–6.51(m,1H),5.27(s,2H),4.73(s,2H),4.54(s,2H),4.38–4.09(m,5H),3.70-3.65(m,8H),3.11-3.06(m,8H),2.89(s,1H),2.82–2.66(m,5H),2.31(s,4H),2.12(s,2H),1.84(s,2H),1.54(s,8H),1.18(s,3H),0.85-0.84(m,15H),0.50(s,3H).
3-100
Figure BDA0001967223830000511
称取Fmoc-GLu-otBu(0.7301g,1.7160mmoL)、加入DMF(40mL)溶解，放入低温恒温反应浴中(0℃)，然后加入3-63(2.4g,1.2257mmoL)、PyAop(0.8947g,1.7160mmoL)，搅拌30分钟后，滴加TMP(0.16mL,1.2257mmoL)，低温搅拌过夜。反应结束，在反应液中加甲基叔丁基醚(200mL)，冷却，倾倒，在加乙酸乙酯(10mL)，超声成均相，加正己烷(150mL)沉降，反复用乙酸乙酯溶解正己烷沉降两次，倾倒上清液，下层用(20％甲醇：80％二氯甲烷40mL)溶解，加硅胶粉(9g)，蒸干，干法上样，柱层析。用4％-5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品2.8g，产率96.6％。MALDI-TOF MS:[M+H+]2366.43.
3-109
Figure BDA0001967223830000512
取反应物3-100(2.8g,1.1846mmol)放入反应瓶中，加DMF(20ml)溶解，加入吗啉(2.58ml,29.615mmol),每隔0.5小时点样。3小时后，反应结束，在反应液中加入甲基叔丁基醚(200ml)，变加边搅拌，放在冰箱冷却，待有沉淀析出，倾倒，加二氯甲烷(10ml)溶解，加正己烷(150mL)沉降，冷却，倾倒，加乙酸乙酯(10mL)，超声成均相，加正己烷(150mL)沉降，反复用乙酸乙酯溶解正己烷沉降两次，倾倒上清液，下层(20％甲醇：80％二氯甲烷40mL)溶解，加硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析。用3％-10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品2.2g，产率86.96％。
MALDI-TOF MS:[M+H+]2143.92,[M+Na+]2166.11
3-111
Figure BDA0001967223830000521
称取3-109(2.2g,1.0265mmoL)、Boc-Gly-OH(0.2158g,1.2318mmoL)、HBTU(0.5840g,1.5340mmoL)、HOBT(0.2081g,1.5398mmoL)放入烧瓶中，将反应液放入低温恒温反应浴中(-5摄氏度)，反应20分钟后，滴加入DIEA(0.7635mL,4.6193mmoL)，再反应2小时后取出置磁力搅拌器上，常温过夜。反应结束，将反应液移入1L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)与乙酸乙酯(300mL)，充分震荡，分离有机相，将水相用乙酸乙酯萃取2次(150mL×2)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液清洗三次(200mL×3)，浓缩后，加入硅胶粉成固体溶液，干法上样，柱层析，用0.5％-4％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品1.9g，产率80.50％。
13-113
Figure BDA0001967223830000522
称取原料3-111(1.9g,0.8259mmoL)放入250mL烧瓶中，加二氯甲烷(20mL)溶解，加TFA(1.84mL,24.777mmoL)，置于磁力搅拌器上，常温搅拌过夜。反应结束，将反应液蒸干，除去二氯甲烷，加乙酸乙酯(10mL)，超声成均相，加正己烷(150mL)沉降，反复用乙酸乙酯(10mL)溶解正己烷(150mL)沉降两次，倾倒上清液，下层用(20％甲醇：80％二氯甲烷50mL)溶解，加硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析。用2％甲醇-20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品1.7g，产率100％。
3-134
Figure BDA0001967223830000523
称取3-113(1.6g,0.7462mmoL)放入250mL反应瓶中，加DMF(30mL)溶解加入吡啶(0.1282mL，1.5857mmoL)，再称4ARM-SCM-40K(5.7715g,0.1321mmoL)加二氯甲烷(45mL)溶解，将3-113的DMF吡啶溶液加入高分子的二氯甲烷溶液中，低速避光反应。反应结束，在反应液中加甲基叔丁基醚(500mL)抽滤，固体用(20％甲醇：80％二氯甲烷30mL)溶解，加硅胶粉(10g)，蒸干，干法上样，柱层析。用6％-20％甲醇：1％氨水/二氯甲烷梯度洗脱得产品5.2g,产率78.95％。
24-14
Figure BDA0001967223830000531
称取反应物3-134(2.6g，0.0503mmoL)、M-NH2HCL-2000(0.8199g，0.4024mmoL)、HBTU(0.1145g，0.3018mmoL)、HOBT(0.0408g，0.3018mmoL)投入250mL反应瓶中，加DMF(150mL)溶解，-5℃搅拌30分钟后，缓慢滴加DIEA(0.2mL，1.3078mmoL)，搅拌1小时后至常温低速避光反应。反应结束，在反应液中加入甲基叔丁基醚沉降，抽滤的粉末产品，用甲醇与二氯甲烷的混合溶剂溶解，加入硅胶，蒸干，干法上样，柱层析。用1％氨水：3％-10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，收集纯品蒸干，加无水乙醇(5mL)与二氯甲烷(5mL)，超声溶解，加甲基叔丁基醚(100mL)至有固体析出，抽滤，继续加无水乙醇(5mL)与二氯甲烷(5mL)溶解，甲基叔丁基醚(100mL)沉降，反复溶解沉降三次，真空干燥得产品1.5g，产率50％。
实施例6化合物9的合成
1
Figure BDA0001967223830000532
将Fmoc-Glu-(OtBu)(OH)(1.6339g，3.8402mmol)、19-68(5g，2.7430mmol，结构和合成过程参见实施例14)、HBTU(1.5604g，4.1145mmol)、HOBT(0.5560g，4.1145mmol)加入到500mL烧瓶中，加入DMF(30mL)使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌30分钟，再缓慢滴加DIEA(1.2240mL，7.4062mmol)，经10分钟滴加完毕。反应继续在-5摄氏度下搅拌1小时，然后将其置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，加入正己烷(100mLⅹ3)振荡，倒掉上清液，下层油状固体用二氯甲烷(20mL)溶解，加入甲基叔丁基醚(30mL)，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mLⅹ3)清洗，滤饼用甲醇/二氯甲烷(1：5)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，洗脱剂用1％氨水和4％-6％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行梯度洗脱，收集滤液，浓缩蒸干，真空烘箱干燥，得产品1:6.3821g,产率79％。
2
Figure BDA0001967223830000541
将1(6.3726g，2.1670mmol)加入500mL烧瓶中，加入二氯甲烷(10mL)使之溶解，再加TFA(2.4750mL,29.287mmol)，反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液中的二氯甲烷抽干，再加甲基叔丁基醚(20mL)沉降，有析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mLⅹ3)清洗，收集滤饼，滤饼在真空烘箱干燥，得到产品2:4.7149g,产率100％。
3
Figure BDA0001967223830000551
将2(4.7g，2.1670mmol)、11-83(2.4654g，2.6004mmol)、HBTU(1.2327g，3.2504mmol)、HOBT(0.4392g，3.2504mmol)加入到500mL烧瓶中，加入DMF(50mL)使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30分钟，再缓慢滴加DIEA(2.4175mL，14.6268mmol)，经10分钟滴加完毕。反应继续在-5摄氏度下搅拌反应1小时后，将其置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，加入正己烷(100mLx3)沉降，下层油状体积减少，再加入甲基叔丁基醚(30mL)，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mLⅹ3)清洗，滤饼再用甲醇/二氯甲烷(1：5)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，洗脱剂用1％氨水和4％-8％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行梯度洗脱，收集滤液，浓缩蒸干，真空烘箱干燥，得产品3:5.1826g,产率77％。
4
Figure BDA0001967223830000561
将3(5.1360g，1.6686mmol)倒入250mL烧瓶中，加入DMF(30mL)使之溶解，再加吗啉(1.4537g，16.6859mmol)，反应在常温下搅拌反应1小时。反应结束后，加入正己烷(60mLx3)沉降，下层油状体积减少，再加入甲基叔丁基醚(30mL)，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mLⅹ3)清洗，收集滤饼，真空烘箱干燥，得到产品4：4.8096g，产率100％。
5
Figure BDA0001967223830000562
将18-167(0.6902g,0.8266mmol),10％Pd/C(0.1g)投入到氢化反应釜加入DMF(30mL)通入氢气，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟—充氢气—抽氢气—充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为0.18MPa。反应结束后，用硅藻土抽滤，用DMF(20mLx3)清洗滤饼，得到产品5。
6
Figure BDA0001967223830000571
将5(0.8366mmol)、4(2g，0.6972mmol)、HBTU(0.3966g，1.0458mmol)、HOBT(0.1414g，1.0458mmol)加入到250mL烧瓶中，加入DMF(20mL)使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30分钟，再缓慢滴加DIEA(0.5185mL，3.1373mmol)，经5分钟滴加完毕。反应继续在-5摄氏度下搅拌反应1小时后，将其置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，加入正己烷(100mLx 3)沉降，下层油状体积减少，再加入甲基叔丁基醚(30mL)，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mLⅹ3)清洗，滤饼再用甲醇/二氯甲烷(1：5)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，洗脱剂用1％氨水和4％-8％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行梯度洗脱，收集滤液，浓缩蒸干，真空烘箱干燥，得产品6:1.9643g,产率78％。
7
Figure BDA0001967223830000572
将6(1.9580g，0.6825mmol)加入250mL烧瓶中，加入二氯甲烷(10mL)使之溶解，再加TFA(0.7603mL,10.2380mmol)，反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液中的二氯甲烷抽干，再加甲基叔丁基醚(20mL)沉降，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mLⅹ3)清洗，滤饼再用甲醇/二氯甲烷(1：5)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，洗脱剂用1％氨水和3％-9％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行梯度洗脱，收集滤液，浓缩蒸干，真空烘箱干燥，得产品7:1.7862g,产率76％。
8
Figure BDA0001967223830000581
将7(0.3939g,0.1144mmol)加入到250mL烧瓶，再加DMF(50mL)使之溶解，再加入DIEA(0.25mL，1.7160mmol)，再加入4ARM-SCM-40K(1.0g,0.0238mmol),加入二氯甲烷(10mL)溶解后，将反应置于常温下低速避光搅拌反应一周。反应结束后，加入正己烷(100mLx 3)沉降，下层油状体积减少，再加入甲基叔丁基醚(30mL)，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mLⅹ3)清洗，滤饼再用甲醇/二氯甲烷(1：5)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，洗脱剂用1％氨水和3％-12％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行梯度洗脱，收集滤液，浓缩蒸干，真空烘箱干燥，得产品8:1.1103g,产率81％。
9
Figure BDA0001967223830000582
将8(1.0606g，0.0236mmol)、M-NH2-2K.HCl(0.2884g，0.1416mmol)、HBTU(0.0537g，0.1416mmol)、HOBT(0.0191g，1.1416mmol)加入到250mL烧瓶中，加入DMF(30mL)使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30分钟，再缓慢滴加DIEA(0.0936mL，0.5664mmol)，经3分钟滴加完毕。反应继续在-5摄氏度下搅拌反应1小时后，将其置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，加入正己烷(100mL x 3)沉降，下层油状体积减少，再加入甲基叔丁基醚(30mL)，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mLⅹ3)清洗，滤饼再用甲醇/二氯甲烷(1：5)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(8g)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，洗脱剂用1％氨水和2％-10％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行梯度洗脱，收集滤液，浓缩蒸干，真空烘箱干燥，得产品6:1.0189g,产率92％。
实施例7化合物14-111的合成
10-42
Figure BDA0001967223830000591
将原料BocNH-GFLG-OBn(13.54g,23.244mmol)、10％的Pd/C催化剂(400mg)加入到氢化反应装置中，然后加入DMF(45mL)使其溶解，并使溶剂没过搅拌子，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟—充氢气—抽氢气—充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为18Psi，然后在常温下过夜反应。于第二日通过TLC点板发现反应完成后进行后处理，取出反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的抽滤漏斗，用DMF(90mL)清洗反应装置，直至反应器被清洗干净不含产物为止，得到10-42的反应产物。
10-43
Figure BDA0001967223830000592
将10-42产物BocNH-GFLG-OH(23.24mmol)、PCB(Palbociclib)(8g,17.88mmol)、HBTU(10.17g,26.82mmol)和HOBT(3.6g,26.82mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(90mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(13.3mL,80.46mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，将反应液转移到1000mL的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)，用乙酸乙酯萃取三次(200mL×3)，合并有机相，再用饱和碳酸氢钠(100mL)清洗一次，然后用饱和氯化钠(100mL)除水后将有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，蒸干，真空烘箱烘干，得到产品16.48g，投下一步反应。
10-44
Figure BDA0001967223830000593
将10-43(16.48g,17.88mmol)于500mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(100mL)溶解，然后加入TFA(18.67mL,251.37mmol)室温下搅拌反应过夜。反应停止，将反应液减压浓缩蒸干，然后加入适量乙酸乙酯溶解，转移到500mL的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(100mL)中和剩余的TFA，中和结束后分离有机相，用乙酸乙酯萃取水相中的产物，萃取3次(150mL×3)，合并有机相再用无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，干法上样，柱层析，用(4％甲醇/1％氨水/二氯甲烷)洗脱，收集产品，浓缩，蒸干,真空烘箱烘干，得到产物15.4g(超重)。
14-90
Figure BDA0001967223830000601
将Boc-Glu-OH(0.85g,3.44mmol)、GFLG-PCB(6.01g,7.31mmol，即10-44)、HOBT(1.61g,11.91mmol)和HBTU(4.14g,10.92mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(60mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(5.2mL,31.46mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，将反应液用正己烷(200mL)、甲基叔丁基醚(400mL)沉降抽滤；取固体，再用少量乙酸乙酯(3mL)溶解，用甲基叔丁基醚(300mL)沉降抽滤；取固体真空烘箱烘干，得到产品14-90，理论重量6.41g。
14-91
Figure BDA0001967223830000602
将物质14-90(6.41g,3.44mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入CH2Cl2(20mL)，使其溶解，将混合液常温条件下搅拌。然后滴加TFA(5.00mL,67.32mmol)，滴加完毕后常温下反应2小时。反应结束后，将反应液蒸干，用正己烷(50mL)、甲基叔丁基醚沉降(200mL)，蒸干，干法上柱，层析柱，用(3％甲醇/0.5％氨水/二氯甲烷)洗脱，收集产品，浓缩，蒸干,真空烘箱烘干，得到产品14-91，4.3g；得到混合产物0.39g。
14-92
Figure BDA0001967223830000603
将物质14-91(4.3g,2.45mmol)、Fmoc-Glu-OtBu(1.46g,3.43mmol)、HOBT(0.54g,11.91mmol)和HBTU(1.49g,10.92mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(100mL)，使其溶解，将混合液置于0℃条件下，搅拌30min后，缓慢滴加DIEA(1.20mL,2.28mmol)，滴加完毕后低温下反应一夜。反应结束后，取出用正己烷(200mL)、甲基叔丁基醚(400mL)沉降，抽滤；取固体真空烘箱烘干，得到固体产品14-92，理论产物重5.30g。
14-93
Figure BDA0001967223830000604
将物质14-92(5.30g,2.45mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入CH2Cl2(20mL)，使其溶解，将混合液常温条件下搅拌。然后滴加TFA(3.00mL,40.39mmol)，滴加完毕后常温下反应2小时。反应结束后，将反应液蒸干，用正己烷(50mL)、甲基叔丁基醚(400mL)沉降，抽滤；取固体干法上柱，层析柱，用(4％-8％甲醇/二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集产品，浓缩，蒸干,真空烘箱烘干，得到产品14-93，4.50g；产率87.2％。
10-65
Figure BDA0001967223830000611
将原料Boc-GFLG-OBn(6.30g,10.80mmol)、10％Pd/C催化剂(100mg)加入到氢化反应装置中，然后加入DMF(30mL)使其溶解，并使溶剂没过搅拌子，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟—充氢气—抽氢气—充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为18Psi，然后在常温下过夜反应。于第二日通过TLC点板发现反应完成后进行后处理，取出反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的抽滤漏斗，用DMF(20mL×3)清洗反应装置三次，直至反应器被清洗干净不含产物为止，得到10-65的反应产物。
10-66
Figure BDA0001967223830000612
将物质10-65(5.33g,10.80mmol)、SB-743921(4.00g,7.74mmol,简称SB7)、HOBT(1.70g,12.58mmol)和HBTU(4.66g,12.29mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(170mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(5.80mL,35.09mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，将反应液用饱和氯化钠(300mL)洗、EA(200mL)萃取三次；合并有机相，旋蒸浓缩至100mL，再用无水硫酸钠除水，抽滤，取滤液旋蒸干，真空烘箱烘干，得到产品10-66，理论重量7.68g。
10-67
Figure BDA0001967223830000613
将物质10-66(7.68g,7.74mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入CH2Cl2(40mL)，使其溶解，将混合液常温条件下搅拌。然后滴加TFA(9.00mL,67.32mmol)，滴加完毕后常温下反应2小时。反应结束后，将反应液蒸干，将反应液用饱和氯化钠(200mL)洗、EA(200mL)萃取三次；合并有机相，旋蒸浓缩至100mL，再用无水硫酸钠除水，抽滤，取滤液旋蒸干，干法上柱，柱层析，用(3％-5％甲醇/1％氨水/二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集产品，浓缩，蒸干,真空烘箱烘干，得到产品10-67，理论重量6.20g，产率89.9％。
14-94
Figure BDA0001967223830000621
将物质14-93(4.50g,2.14mmol)、GFLG-SB7(1.80g,7.31mmol，即10-67)、HOBT(0.54g,11.91mmol)和HBTU(1.32g,10.92mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(150mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(1.0mL,31.46mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，将反应液用正己烷(200mL)、甲基叔丁基醚(400mL)沉降抽滤；取固体，再用少量乙酸乙酯(3mL)溶解，用甲基叔丁基醚(300mL)沉降抽滤；取固体真空烘箱烘干，得到产品14-90，理论重量6.41g。
14-97
Figure BDA0001967223830000622
将14-94(6.00g,2.01mmol)于500mL的圆底烧瓶中，用DMF(230mL)溶解，然后加入吗啉(5.30mL,60.84mmol)室温下搅拌反应2小时，反应停止。用正己烷、甲基叔丁基醚沉降，过滤，取固体干法上样，柱层析，用(5％甲醇/0.5％氨水/二氯甲烷)进行洗脱，收集产品，浓缩，蒸干,真空烘箱烘干，得到产品2.7g，原料，0.32g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,2H),8.95(s,2H),8.31-8.18(m,6H),8.12-8.00(m,9H),7.88(d,J＝8.0Hz,5H),7.55-7.49(m,4H),7.22-7.16(m,25H),5.82(t,J＝16.0Hz,2H),4.55(s,3H),4.35(dd,J＝16.0Hz,8.0Hz,2H),4.14(t,J＝16.0Hz,2H),4.06-4.00(m,5H),3.71-3.61(m,17H),3.19-3.13(m,10H),3.07-3.03(m,3H),2.89(s,1H),2.77-2.73(m,3H),2.42(s,6H),2.31(s,8H),2.24-2.20(m,6H),2.14-2.13(m,2H),1.88-1.77(m,15H),1.62-1.57(m,8H),1.50(t,J＝12.0Hz,6H),1.35-1.34(m,1H),1.24(d,J＝8.0Hz,2H),0.93-0.80(m,24H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]2756.49,[M+Na+]2778.45.
14-99
Figure BDA0001967223830000623
将物质14-97(2.7g,1.37mmol)、Fmoc-Glu-OtBu(0.61g,1.35mmol)、HOBT(0.24g,1.78mmol)和HBTU(0.62g,1.63mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(80mL)，使其溶解，将混合液置于0℃条件下，搅拌30min后，缓慢滴加DIEA(0.74mL,4.48mmol)，滴加完毕后低温下反应一夜。反应结束后，取出用正己烷(200mL)、甲基叔丁基醚(400mL)沉降，抽滤；取固体真空烘箱烘干，得到固体产品14-99，理论产物重3.10g。
14-101
Figure BDA0001967223830000631
将物质14-99(3.10g,0.98mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(200mL)，使其溶解，将混合液常温条件下搅拌。然后滴加吗啉(2.56mL,29.38mmol)，滴加完毕后常温下反应2小时。反应结束后，将反应液蒸干，用正己烷(300mL)、甲基叔丁基醚沉降(600mL)沉降，抽滤，取固体真空烘箱烘干，得到固体产品14-101，理论产物重2.88g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,2H),8.96(s,2H),8.27-8.16(m,6H),8.08-8.03(m,10H),7.95(s,3H),7.89-7.87(m,5H),7.55-7.49(m,4H),7.22-7.16(m,25H),5.84-5.80(t,J＝16.0Hz,2H),4.56(s,3H),4.37-4.35(d,J＝8.0Hz,2H),4.23-4.12(m,4H),4.06-3.95(m,3H),3.61-3.51(m,17H),3.19-3.14(m,10H),3.06-3.03(m,3H),2.89(s,6H),2.73(m,8H),2.42(s,3H),2.31(s,8H),2.24-2.20(m,6H),1.88-1.78(m,16H),1.58-1.50(m,17H),1.50-1.39(m,9H),0.89-0.84(m,24H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]2941.93,[M+Na+]2963.63.
14-102
Figure BDA0001967223830000632
将原料Boc-GFLG-OBn(0.80g,1.37mmol)、10％的Pd/C催化剂(100mg)加入到氢化反应装置中，然后加入DMF(30mL)使其溶解，并使溶剂没过搅拌子，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟—充氢气—抽氢气—充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为18Psi，然后在常温下过夜反应。于第二日通过TLC点板发现反应完成后进行后处理，取出反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的抽滤漏斗，用DMF(20mL×3)清洗反应装置三次，直至反应器被清洗干净不含产物为止，得到14-102的反应产物。
14-103
Figure BDA0001967223830000633
将物质14-101(2.88g,0.98mmol)、14-102(0.68g,1.37mmol)、HOBT(0.29g,2.15mmol)和HBTU(0.70g,1.85mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(200mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.74mL,4.48mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，将反应液用正己烷(200mL)、甲基叔丁基醚(500mL)沉降抽滤；取固体用少量乙酸乙酯(3mL)溶解，用甲基叔丁基醚(300mL)沉降，抽滤；取固体真空烘箱烘干，得到产品14-103，理论重量3.35g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,2H),8.95(s,2H),8.16-8.05(m,15H),7.95-7.87(m,11H),7.55-7.49(m,4H),7.22-7.15(m,30H),5.84-5.80(t,J＝16.0Hz,2H),4.55(s,2H),4.37-4.35(d,J＝8.0Hz,2H),4.17-4.01(m,4H),3.72-3.46(m,14H),3.18-3.13(m,8H),3.06-2.98(m,6H),2.89(s,10H),2.80-2.73(m,14H),2.42(s,6H),2.31-2.20(m,16H),1.88-1.85(m,6H),179-1.72(m,8H),1.58-1.49(m,17H),1.40-1.26(m,22H),0.91-0.82(m,30H).
MALDI-TOF MS:[M+Na+]3437.10.
14-107
Figure BDA0001967223830000641
将物质14-103(3.35g,0.98mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入CH2Cl2(40mL)，使其溶解，将混合液常温条件下搅拌。然后滴加TFA(3.00mL,40.39mmol)，滴加完毕后常温下反应2小时。反应结束后，将反应液蒸干，用正己烷、甲基叔丁基醚沉降，蒸干，干法上柱，层析柱，用(5％-10％甲醇/二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集产品，浓缩，蒸干,真空烘箱烘干，得到产品14-107，1.5g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,2H),8.95(s,2H),8.33-8.17(m,5H),8.11-8.05(m,14H),7.89-7.87(m,5H),7.55-7.48(m,4H),7.24-7.14(m,30H),5.84-5.80(t,J＝16.0Hz,2H),4.55-4.53(m,3H),4.39-4.31(m,3H),4.17-4.13(m,4H),4.03-3.99(m,3H),3.76-3.58(m,16H),3.51(s,1H),3.19-3.13(m,11H),3.07-3.00(m,5H),2.89(s,1H),2.80-2.69(m,5H),2.58-2.54(m,4H),2.42(s,6H),2.31(s,8H),2.24-2.14(m,8H),1.62-1.57(m,9H),152-1.48(m,9H),1.24-1.23(m,1H),0.92-0.79(m,30H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]3259.66,[M+Na+]3257.58.
14-108
Figure BDA0001967223830000651
将14-107(1.30g,0.40mmol)置于250mL圆底烧瓶中然后加入CH2Cl2(80mL)、DMF(100mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.26mL,1.59mmol)，滴加完毕后，将物质4ARM-SCM-40K(3.67g,0.089mmol，购于键凯)、低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌反应四天，每天点TLC板监测。反应结束后，旋蒸蒸干CH2Cl2，后用正己烷(200mL)、甲基叔丁基醚(400mL)沉降，抽滤，取固体干法上样，层析柱(柱子被堵，将硅胶粉掏出用混合溶剂洗，再抽滤，将滤液蒸干)，用(6％-10％甲醇/二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集产品，浓缩，与掏柱子得到的产品合并，蒸干,真空烘箱烘干，得到产品14-108，3.84g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.11(s,6H),8.95(s,6H),8.20-8.16(m,9H),8.15-8.04(m,42H),8.02-8.00(m,12H),7.95-7.94(m,21H),7.89-7.87(m,20H),7.78-7.77(m,2H),7.54-7.48(m,7H),7.21-7.14(m,127H),4.56-4.55(m,10H),4.36-4.33(m,100H),4.01-4.00(m,23H),3.88-3.87(m,29H),3.75-3.51(m,3488H),3.17-3.16(m,41H),3.05-3.00(m,40H),2.89(s,78H),2.73(s,64H),2.68-2.67(m,18H),2.60-2.59(m,22H),2.42(s,38H),2.31-2.30(m,50H),2.25-2.17(m,95H),1.98-1.86(m,66H),1.58-1.51(m,71H),1.19-1.17(m,12H),0.91-0.82(m,120H).化合物14-108的1H-NMR谱图如图3所示。
14-111
Figure BDA0001967223830000652
将14-108(3.00g,0.055mmol)、HOBT(0.12g,0.89mmol)和HBTU(0.25g,0.66mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(170mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.20mL,1.22mmol)，滴加完毕后，将物质M-NH2-2K·HCl(0.67g,0.33mmol，购于键凯)加入，并使其完全溶解，低温下反应2小时，将反应装置放到室温条件下搅拌反应过夜。反应结束后，用正己烷(200mL)、甲基叔丁基醚沉降(500mL)，干法上样，层析柱，用(4％-14％甲醇/二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集浓缩，蒸干，真空烘箱烘干，得到粗产品14-111。再将所得粗产品用少量CH2Cl2(2mL)、DMF(2mL)溶解，用无水乙醇(30mL)、用正己烷(50mL)、甲基叔丁基醚(200mL)除水、除甲醇，抽滤，真空烘箱烘干，得到最终产品14-111,2.60g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,8H),δ8.95(s,11H),8.20-8.16(m,31H),8.08-8.05(m,42H),7.95-7.94(m,8H),7.89-7.87(m,19H),7.77-7.76(m,5H),7.55-7.49(m,15H),7.22-7.21(m,88H),7.17-7.16(m,22H),4.90-4.55(m,91H),4.36-4.35(m,50H),4.17-4.13(m,92H),4.01-3.51(m,4382H),3.25-3.24(m,12H),3.19-3.13(m,19H),3.08-3.00(m,31H),2.89(s,4H),2.76-2.73(m,20H),2.67-2.58(m,19H),2.42(s,29H),2.31(s,39H),2.24-2.14(m,36H),1.88-1.76(m,58H),1.58-1.49(m,68H),1.20-1.12(m,22H),0.88-0.83(m,120H).化合物14-111的1H-NMR谱图如图4所示。
实施例8化合物14-129的合成
14-113
Figure BDA0001967223830000661
将原料16-180(0.41g,0.26mmol)、10％的Pd/C催化剂(300mg)加入到氢化反应装置中，然后加入DMF(30mL)使其溶解，并使溶剂没过搅拌子，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟—充氢气—抽氢气—充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为18Psi，然后在常温下过夜反应。于第二日通过TLC点板发现反应完成后进行后处理，取出反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的抽滤漏斗，用DMF(20mL×3)清洗反应装置三次，直至反应器被清洗干净不含产物为止，得到14-113的反应产物。
14-114
Figure BDA0001967223830000662
将物质14-113(0.31g,0.26mmol)、10-67(1.03g,1.37mmol)、HOBT(0.24g,1.78l)和HBTU(1.07g,2.82l)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(80mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.78mL,4.72mmol)，再在低温下反应2h，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，将反应液转移到1000mL的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)，用乙酸乙酯洗反应瓶，用力摇匀分液漏斗中的混合相，分离有机相，用乙酸乙酯萃取三次(200mL×3)，合并有机相，再用饱和氯化钠(100mL)清洗三次。合并有机相产物，旋蒸浓缩，再用无水硫酸钠除水，乙酸乙酯洗，抽滤。将滤液蒸干，真空烘箱烘干，得到固体产品0.95g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.16-8.14(m,3H),8.08-8.01(m,16H),7.96-7.92(m,2H),7.88-7.80(m,5H),7.68-7.67(m,1H),7.55-7.45(m,7H),7.28-7.16(m,50H),7.14-7.10(m,18H),5.78-5.72(m,3H),4.60-4.50(m,4H),4.30-4.14(m,7H),3.95-3.85(m,3H),3.73-3.39(m,17H),3.09-3.02(m,7H),2.99-2.84(m,9H),2.81-2.74(m,10H),2.70-2.64(m,18H),2.31(s,17H),2.15-2.13(m,9H),1.92-1.76(m,3H),1.60-1.55(m,5H),1.53-1.48(m,13H),1.38-1.31(m,18H),1.27-1.23(m,12H),1.08-1.04(m,2H),0.92-0.79(m,54H).
14-115
Figure BDA0001967223830000671
将物质14-114(0.95g,0.20mmol)置于250mL圆底烧瓶中然后加入CH2Cl2(10mL)，使其溶解，将混合液常温条件下搅拌。然后滴加TFA(2.00mL,26.93mmol)，滴加完毕后常温下反应2小时。反应结束后，将反应液蒸干，用正己烷(50mL)、甲基叔丁基醚(200mL)沉降，蒸干，干法上柱，层析柱，用(5％-8％甲醇/二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集浓缩，蒸干，真空烘箱烘干，用得到产品14-115，0.54g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝8.0Hz,4H),8.35(d,J＝8.0Hz,4H),8.09-8.10(m,6H),8.06(s,2H),7.66(s,4H),7.78-7.64(m,5H),7.59-7.53(m,9H),7.27-7.26(m,40H),7.21-7.16(m,19H),7.13-7.13(m,10H),4.62-4.56(m,3H),4.34-4.29(m,4H),4.18-4.08(m,5H),3.91-3.83(m,6H),3.80-3.79(m,3H),3.73-3.72(m,3H),3.69-3.68(m,2H),3.50-3.51(m,4H),3.17(d,J＝8.0Hz,4H),3.09-3.08(m,2H),3.05-3.06(m,2H),2.92-2.88(m,16H),2.70-2.76(m,12H),2.64(s,20H),2.32(s,16H),1.56-1.61(m,5H),1.47-1.53(m,10H),1.35-1.34(m,9H),1.16-1.25(m,20H),0.82-0.94(m,54H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]4631.67
14-117
Figure BDA0001967223830000672
将14-115(0.54g,0.117mmol)置于250mL圆底烧瓶中然后加入CH2Cl2(10mL)、DMF(20mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.10mL,0.61mmol)，滴加完毕，将物质4ARM-SCM-40K(1.20g,0.089mmol)加入，并使其溶解、后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌反应四天，每天点TLC板监测。反应结束后，旋蒸蒸干CH2Cl2，用正己烷(50mL)、甲基叔丁基醚(200mL)沉降，抽滤，取固体干法上样，层析柱(走柱后，将硅胶粉掏出用混合溶剂洗，再抽滤，取滤液点TLC板，发现是产品，将滤液蒸干，得到含杂产物0.60g)，用(6％-10％甲醇/二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集浓缩，蒸干，真空烘箱烘干，得到产品14-117，0.90g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.54(s,4H),8.70-8.69(m,174H),8.48-8.46(m,1H),8.34-8.33(m,1H),8.13-8.05(m,15H),7.84-7.83(m,1H),7.72-7.71(m,1H),7.38-7.13(m,214H),6.70-6.64(m,2H),5.99-5.97(m,11H),5.51(s,2H),5.33-5.30(m,6H),4.02-4.00(m,34H),3.95-3.90(m,89H),3.81-3.80(m,142H),3.70-3.53(m,3590H),3.17-3.14(m,32H),2.89-2.88(m,65H),2.74-2.72(m,68H),2.66-2.58(m,93H),2.33-2.32(m,43H),2.02-1.96(m,80H),1.37-1.33(m,95H),0.91-0.81(m,216H).
MALDI-TOF MS:从58824.42到60796.75
14-129
Figure BDA0001967223830000681
将14-108(0.90g,0.015mmol)、HOBT(0.04g,0.30mmol)和HBTU(0.06g,0.16mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(80mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.10mL,0.61mmol)，滴加完毕，将物质M-NH2-2K.HCl(0.24g,0.118mmol)、后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，用正己烷(150mL)、甲基叔丁基醚(300mL)沉降，放置于2到8℃冰箱约半小时后取出，抽滤，取固体干法上样，层析柱，用(5％-10％甲醇/二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集浓缩，蒸干，真空烘箱烘干，得到粗产品14-129。再将所得固体产品用少量二氯甲烷(2mL)、DMF(2mL)溶解，用无水乙醇(30mL)、用正己烷(50mL)、甲基叔丁基醚(200mL)除水、除甲醇，抽滤，真空烘箱烘干，得到最终产品14-129,0.60g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.15-7.95(m,132H),7.85-7.80(m,20H),7.68-7.64(m,9H),7.55-7.49(m,45H),7.24-7.19(m,102H),7.15-7.13(m,104H),4.55-4.50(m,48H),4.23-4.14(m,120H),2.88-3.51(m,4337H),4.24-4.17(m,32H),3.08(s,25H),3.01-2.97(m,29H),2.89-2.85(m,36H),2.75-2.73(m,69H),2.67-2.59(m,93H),2.33-2.30(m,76H),2.15-2.11(m,42H),1.82-1.73(m,42H),1.62-1.46(m,82H),1.35-1.32(m,22H),1.24-1.23(m,12H),1.15-1.14(m,18H),0.92-0.79(m,216H).化合物14-129的1H-NMR谱图如图5所示。
MALDI-TOF MS:从67208.19到67746.29
实施例9化合物16-145的合成
3-30
Figure BDA0001967223830000691
称取Boc-GFLG-OBn(自制4.0047g,6.8646mmoL)、10％的Pd/C(0.1006g)放入微型反应釜中，加入DMF(25mL)，装好装置，打开进气与抽气阀门，将内环境抽成真空后关闭抽气阀门，通入H2(16psi)，待反应2分钟后，抽气后，再通H2，反复抽气三次后关闭进气抽气阀门(注意整个操作过程不关闭真空泵)，将H2封于反应釜中，常温过夜。反应结束，在漏斗中装一半硅藻土(压实)，一滴滴将产品用胶头滴管移入漏斗中，抽滤，再用DMF清洗反应釜与漏斗三次(25mL×3)，将液体移入250mL的烧瓶中，作为3-31的原料。
3-31
Figure BDA0001967223830000692
称取LPT(lapatinib的简称3.7999g,6.5377mmoL)、HBTU(3.7195g,9.8066mmoL)、HOBT(1.3253g,9.8066mmoL)放入3-30的DMF溶液中，将反应放入低温恒温反应浴中(-5摄氏度)，反应20分钟后，滴加入DIEA(5mL,12.8714mmoL)，低温搅拌2小时后取出反应置磁力搅拌器上，常温过夜。反应结束，将反应液移入2L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)与乙酸乙酯(400mL)，充分震荡，分离有机相，将水相用乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)，合并有机相，用饱和碳酸氢钠溶液清洗一次(150mL)，饱和氯化钠溶液清洗2次(150mL×2)，把有机相倒入2L的锥形瓶中，加入无水硫酸镁干燥，抽滤，浓缩到100mL后，加入硅胶粉(15g)旋蒸成固体溶液，干法上样，柱层析。用0.5％氨水：2％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集产品，旋干后为油状，再用乙酸乙酯(50mL)溶解，加正己烷(100mL)，超声成均相后抽滤，干燥得产品5.9098g，产率85.65％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.87(s,1H),8.75(s,1H),8.56(s,1H),8.12(s,4H),7.91–7.64(m,3H),7.56–7.41(m,1H),7.40–6.84(m,10H),6.62(s,2H),5.27(s,2H),4.73(s,2H),4.55(s,1H),4.48–4.11(m,3H),4.03(s,1H),3.89–3.39(m,6H),3.03(s,4H),2.69(s,3H),1.99(s,1H),1.70–1.41(m,4H),1.40–1.09(m,9H),0.84(s,6H).
3-34
Figure BDA0001967223830000701
取3-31(5.9g,5.5891mmoL)放入250mL烧瓶中，加二氯甲烷(15mL)溶解，加TFA(4.2mL,55.8910mmoL)常温搅拌过夜。反应结束，将反应液蒸干除去溶剂，乙酸乙酯溶解后移入容积2L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL水相成碱性)与乙酸乙酯(400mL)，充分震荡，分离有机相，将水相用乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)，合并有机相，用饱和碳酸氢钠溶液清洗一次(150mL)，饱和氯化钠溶液清洗2次(150mL×2)，把有机相倒入2L的锥形瓶中，加入无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩成100mL，加正己烷(100mL)，超声成均相后抽滤得产品，滤液加入硅胶粉(5g)旋蒸成固体溶液，干法上样，柱层析，用1％氨水：5％甲醇/氯甲烷洗脱，旋蒸，真空干燥得产品4.0926g，产率76.64％。
16-34
Figure BDA0001967223830000702
称取2-(-2氨基乙氧基)乙醇(18.8680g,190.2226mmoL)倒入500mL圆底烧瓶中，加二氯甲烷(100mL)稀释，再加三乙胺(38.4972mL,380.4452mmoL)，搅拌条件下缓慢加入(Boc)2O(49.8261g,228.2671mmoL)，常温搅拌反应。反应结束，将反应液蒸干，再加入碳酸氢钠粉末，用二氯甲烷稀释，加硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析。用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱得产品27.3g，产率70％。
16-36
Figure BDA0001967223830000703
称取16-24(27.3g,132.8144mmoL)加入500mL反应瓶中，通入氮气保护，加入叔丁醇钾的THF溶液，反应置于0℃条件下，加入溴乙酸乙酯(17.6265mL,159.3773mmoL)，搅拌三小时后，移至室温反应。反应结束，先将反应液蒸干，再加入去离子水与乙酸乙酯，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取至没有产品，合并有机相，用无水硫酸钠粉末干燥，抽滤，滤液干法上样，柱层析。用30％-100％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱得产品20g，产率52％。
15-49
Figure BDA0001967223830000704
称取16-36(8.8g,30.2053mmoL)放入250mL反应瓶中，加1,4-二氧六环，搅拌条件下加入氢氧化锂(1.5922g,66.4516mmoL)，30分钟后加入去离子水至澄清。反应结束，用甲基叔丁基醚：正己烷＝1:1萃取反应液3次(100mL×3)。水相用浓盐酸调至pH＝1，用乙酸乙酯萃取三次(300mL×3)，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶解清洗3次(100mL×3)，浓缩，干法上样，柱层析，用40％乙酸乙酯/石油醚洗脱得产品6g，产率75％。
3-163
Figure BDA0001967223830000711
称取Boc-Glu-(OH)2(6g,24.2669mmoL)、Glu(OBn)2(25.4588g，50.9605mmoL)、HBUT(27.6089g,72.8007mmoL)、HOBT(9.8368g,72.8007mmoL)放入1L反应瓶中，加入DMF(100mL)溶解，在-5℃条件下搅拌30分钟后，滴加DIEA(40mL,242.669mmoL)，低温搅拌2小时后，将反应移至室温反应。反应结束，将反应液倒入1L分液漏斗中，加饱和碳酸氢钠溶液(400mL)，乙酸乙酯(300mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)，合并有机相，用去离子水清洗3次(200mL×3)，浓缩，干法上样，柱层析。用60％-70％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱得产品25g，超产4g。
3-165
Figure BDA0001967223830000712
称取3-163(47.4g，54.7369mmoL)，加入二氯甲烷50mL，加TFA(60mL,821.0541mmoL)超声溶解，用磨口玻璃塞，常温搅拌反应。反应结束，将反应液移至2L分液漏斗中，加饱和碳酸氢钠溶液(600mL)乙酸乙酯(500mL)分离有机相，水相用EA萃取3次(150mL×3)合并有机相，用去离子水清洗1次(300mL)，浓缩，蒸干，干法上样，柱层析。用5％甲醇：1％氨水/二氯甲烷洗脱得产品34g，产率83％。
16-148
Figure BDA0001967223830000713
称取15-49(9g,24.7736mmoL)、3-165(17.2481g,22.5215mmoL)、HBUT(11.9575g,31.5301mmoL)、HOBT(4.2603g,31.5301mmoL)放入500mL反应瓶中，加入DMF(200mL)溶解，在-5℃条件下搅拌30分钟后，滴加DIEA(17mL,101.3468mmoL)，低温搅拌2小时后，将反应移至室温反应。反应结束，将反应液移至2L分液漏斗中，加饱和碳酸氢钠溶液(600mL)和乙酸乙酯(500mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)合并有机相，用去离子水清洗1次(300mL)，浓缩，蒸干，干法上样，柱层析。用60％乙酸乙酯/石油醚洗脱得产品12.5g，产率56％。
9-98
Figure BDA0001967223830000721
取16-98(2g,1.978mmoL)，加入二氯甲烷(10mL)，待部分溶解后，再加入TFA(4.4075mL，59.340mmoL)，超声使完全溶解，用磨口玻璃塞，常温搅拌。经TLC检测，磷钼酸显色，反应完全，停止反应，将反应液蒸干，除去二氯甲烷，再用乙酸乙酯(200mL)溶解，加饱和碳酸氢钠溶液至水相显碱性，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取，直至水相无产品，合并有机相，再用饱和食盐水清洗3次(100mL×3)，浓缩蒸干，柱层析。柱高5cm，用1％氨水：3％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集浓缩蒸干，理论1.802g，实际1.8g，产率99.9％。
9-100
Figure BDA0001967223830000722
取反应物Fmoc-Glu-OtBu(1.1769g，2.7682mmoL)投入250mL反应瓶中，加入DMF(20mL)溶解，置于0℃，再加入9-99(1.8g，1.9758mmoL)与PyAOP(1.4433g，2.7682mmoL)，搅拌0.5小时，缓慢滴加TMP(0.2602mL，1.9758mmoL)低温搅拌至反应结束。反应结束，加饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)，水相中无产品，合并有机相，用饱和食盐水清洗3次(200mL×3)，浓缩，干法上样，柱层析。用2％甲醇/二氯甲烷洗脱，浓缩蒸干，常温烘干，实际2.8g，超产0.2g。
9-102
Figure BDA0001967223830000731
取反应物9-100(1.9758mmoL)放入250mL圆底烧瓶中，加入DMF(40mL)溶解，再加入吗啉(5.1639mL，59.274mmoL)常温搅拌，每隔0.5小时点TLC板。1小时后，反应结束。加饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取直至水相中无产品，合并有机相，用饱和食盐水清洗，浓缩蒸干，干法上样，柱层析，用1％-5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品1.8g，产率83.106％。
9-103
Figure BDA0001967223830000732
称取9-102(1.8g，1.6420mmoL)，加入3-30(理论值，2.2988mmoL),HBTU(84.3030g，222.2946mmoL)、HOBT(30.0387g，222.2946mmoL)置于圆底烧瓶中，加入DMF(50mL)，使其溶解，置于-5℃条件搅拌0.5小时后缓慢滴加DIEA(132.2681mL，800.2606mmoL)，反应2小时后，置于室温下搅拌过夜反应。反应结束，加饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取直至有机相无产品，合并有机相，用饱和食盐水清洗，浓缩蒸干，干法上样，柱层析，用3％甲醇/二氯甲烷依次洗脱得产品1.8g，产率72％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(s,1H),8.30(s,1H),8.16(s,1H),8.11–8.00(m,2H),7.93–7.83(m,2H),7.69(s,1H),7.33(s,16H),7.25(s,2H),7.22–7.21(m,1H),7.20(s,3H),7.18(s,1H),7.15(s,2H),6.90(s,1H),4.54(s,1H),4.41–4.26(m,4H),4.07(s,1H),3.90(s,2H),3.72(s,2H),3.61–3.49(m,6H),3.39(s,4H),3.19(s,3H),3.00(s,1H),2.77(s,1H),2.43(s,4H),2.30(s,2H),2.14(s,4H),2.02(s,2H),1.89(s,4H),1.81–1.72(m,2H),1.62–1.56(m,1H),1.48(s,3H),1.37(s,18H),1.25(s,6H),0.88(s,3H),0.83(s,3H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]1570.36,[M+Na+]1592.52.
16-130
Figure BDA0001967223830000741
称9-103(0.6846g，0.4361mmoL)与含量为10％的Pd/C(50mg)投入氢化反应釜中，加入DMF(40mL)，抽为真空，通入H2，反复操作三次，氢气压力为16psi，搅拌过夜。反应结束，在砂芯漏斗中加入硅藻土，抽滤反应液，再用DMF(25mL×3)清洗3次硅藻土，溶液直接投下一步反应。
16-131
Figure BDA0001967223830000742
称取GFLG-LPT(2g，2.0931mmoL)、HBTU(0.9923g，2.6166mmoL)、HOBT(0.3536g，2.6166mmoL)投入16-130的DMF(110mL)溶液中溶解，在-5℃条件下搅拌30分钟后，缓慢滴加DIEA(0.2962mL，7.8498mmoL)，反应2小时后置于常温反应至结束。反应结束，将反应液移入1L分液漏斗中，加饱和碳酸氢钠溶液(400mL)，析出固体，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取2次(150mLx2)。合并有机相，用饱和氯化钠清洗1次(150mL)，浓缩。滤饼用甲醇与二氯甲烷混合溶剂溶解与萃取得最终有机相合并，加硅胶粉蒸干。干法上样，柱层析。用1％氨水：7％甲醇/二氯甲烷洗脱得产品1.5g，产率71％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.52(s,4H),8.80(s,4H),8.70(m,4H),8.29(s,4H),8.19(s,12H),8.06(s,9H),8.00–7.94(m,10H),7.82(s,4H),7.69–7.65(m,4H),7.47(s,5H),7.32(s,13H),7.19(s,26H),7.14–7.11(m,4H),7.09(s,2H),6.69(s,3H),6.55(s,1H),5.27(s,8H),4.72(s,8H),4.57(s,6H),4.33(s,7H),4.27(s,2H),4.25–4.18(m,7H),4.15(s,2H),4.09–4.05(m,2H),3.86(s,7H),3.74(s,8H),3.62(s,8H),3.06(s,6H),3.01(s,8H),2.74(s,6H),2.68–2.66(m,1H),2.33(m,1H),2.16–2.09(m,8H),1.59(s,5H),1.49–1.46(m,10H),1.35(s,18H),1.24(s,18H),0.84(s,28H),0.79(s,7H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]4956.03,[M+Na+]4977.62.
16-135
Figure BDA0001967223830000751
称16-131(1.4g，0.2822mmoL)投入250mL反应瓶中，加二氯甲烷(20mL)，与TFA(1.0480mL，14.1100mmoL)，超声至反应物溶解，用磨口玻璃塞，搅拌反应。反应结束，先将反应液蒸干，再加乙酸乙酯(30mL)溶解，加入正己烷沉降，反复溶解沉降至产品成粉末状，抽滤，用(20％甲醇：80％二氯甲烷40mL)溶解，加入硅胶粉(8g)蒸干成固体粉末，上样，柱层析。用12％-40％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品1.3g，产率95％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.86(s,3H),8.74(s,3H),8.55(s,3H),8.26–7.94(m,25H),7.75(s,8H),7.47(s,4H),7.36–7.03(m,41H),6.60(s,2H),5.25(s,5H),4.72(s,6H),4.57(s,5H),4.34(s,7H),4.23(s,7H),3.76(s,18H),3.60(s,15H),3.03(s,21H),2.89(s,7H),2.73(s,11H),2.69(s,7H),2.36–2.31(m,3H),2.12(s,9H),1.49(s,13H),1.12(s,15H),0.87–0.75(m,30H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]4799.95,[M+Na+]4821.63.
16-137
Figure BDA0001967223830000752
称取16-135(1.3g，0.2706mmoL)加入DMF溶解，滴加DIEA(0.18mL，1.080mmoL)再加4ARM-SCM-40K(2.3598g，0.0541mmoL)，补加DMF(10mL)，低速避光反应。8天后反应结束，在反应液中倒入甲基叔丁基醚(300mL)，抽滤，滤饼干法上样，柱层析。用10％-15％甲醇/二氯甲烷洗脱得产品1.6g，产率50％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.49(s,2H),8.86(s,6H),8.67(s,7H),8.33–7.64(m,125H),7.50–6.85(m,144H),6.72(s,13H),6.55(s,4H),5.27(s,17H),4.72(s,20H),4.56(s,14H),4.37–4.13(s,54H),4.01(s,9H),3.45–3.29(s,728H),3.01(s,63H),2.89(s,74H),2.73(s,74H),2.15(s,19H),1.50–1.12(m,312H),0.93–0.76(m,120H)。化合物16-137的1H-NMR谱图如图6所示。
MALDI-TOF MS:从60740.1到61026.38,
16-145
Figure BDA0001967223830000761
称取反应物16-137(1.6g，0.0264mmoL)、M-NH2-2K.HCl(0.4293g，0.2108mmoL)、HBTU(0.0600g，0.1581mmoL)、HOBT(0.0214g，0.1581mmoL)投入250mL反应瓶中，加DMF(100mL)溶解，-5℃搅拌30分钟后，缓慢滴加DIEA(87.1uL，0.5270mmoL)，搅拌1小时后至常温低速避光反应。反应结束，在反应液中加入甲基叔丁基醚沉降，抽滤的粉末产品，用甲醇与二氯甲烷的混合溶剂溶解，加入硅胶，蒸干，干法上样，柱层析。用1％氨水：8％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集纯品蒸干，加无水乙醇(10mL)与二氯甲烷(10mL)，超声溶解，加甲基叔丁基醚至有固体析出，抽滤，继续加无水乙醇(10mL)与二氯甲烷(10mL)溶解，甲基叔丁基醚沉降，反复溶解沉降三次，得产品1.3g，产率72％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.85(s,11H),8.75(s,13H),8.55(s,12H),8.10(s,118H),7.88–7.68(m,37H),7.46(s,23H),7.38–7.02(m,175H),6.60(s,10H),5.25(s,31H),4.72(s,37H),4.57(s,28H),4.28(s,88H),3.88(s,129H),3.33(s,2725H),3.09–2.86(m,108H),2.80–2.67(m,27H),2.11(s,23H),1.54(s,55H),0.97–0.72(m,120H)。图7为化合物16-145的1H-NMR谱图。
实施例10化合物17-87的合成
13-195
Figure BDA0001967223830000762
将Boc-GFLG-OBn(15.6242g,26.8138mmol)加入到氢化反应釜中，加入10％的Pd/C(0.2500g)，加入DMF(50mL)使其溶解，用水泵抽掉反应釜里面的空气呈真空，通入氢气，氢气压力为14Psi,然后放掉氢气，水泵抽至真空，再通入氢气，如此重复3次，最后再通入氢气，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，硅藻土用DMF(20mLⅹ3)清洗,滤液装入500mL的圆底烧瓶中，作为下一步反应的原料。
13-196
Figure BDA0001967223830000763
将Palbociclib(10.0000g,22.3448mmol，简称PCB)、HBTU(12.7111g，33.5172mmol)、HOBT(7.8809g，33.5172mmol)加入到含有13-195(13.2076g,26.8138mmol)的DMF(200mL)溶液中，反应置于-5℃条件下搅拌约20分钟,然后缓慢滴加DIEA(16.6200mL,100.5516mmol),20分钟滴加完毕，继续在-5℃搅拌2小时，然后将反应置于室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到2L的烧杯中，加入饱和碳酸氢钠溶液(150mL),析出固体，抽滤，滤饼用去离子水(100mLⅹ4)清洗，滤饼用真空烘箱干燥，得到产品13-196:20.6g,产率100％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.17(s,1H),8.96(s,1H),8.10(dd,J＝12.0,4.2Hz,2H),7.88(t,J＝7.8Hz,2H),7.52(m,7H),6.97(s,1H),5.94–5.61(m,1H),4.39(s,1H),4.00(d,J＝5.4Hz,2H),3.58(dd,J＝16.1,5.4Hz,4H),3.16(d,J＝19.0Hz,4H),2.43(s,3H),2.31(s,3H),2.25(s,2H),1.89(s,2H),1.82–1.70(m,5H),1.66–1.56(m,3H),1.52–1.43(m,2H),1.38(s,9H),1.24(d,J＝6.4Hz,2H),0.86(dd,J＝15.4,6.5Hz,6H)
MALDI-TOF MS:[M+H+]922.50
13-198
Figure BDA0001967223830000771
将13-196(20.6000g,22.3448mmol)投入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(30mL)溶解，然后加入TFA(24.8800mL,335.172mmol)，反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出固体，抽滤，滤饼用甲醇(10mL)和二氯甲烷(40mL)溶解，加入硅胶粉(50g)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和3％-8％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得13-198:17.6012g,产率96％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.17(s,1H),8.96(s,1H),8.16(t,J＝5.5Hz,1H),8.08(d,J＝2.9Hz,1H),7.98(d,J＝8.9Hz,1H),7.89(d,J＝9.0Hz,1H),7.52(m,7H),5.83(p,J＝8.6Hz,1H),4.43(d,J＝5.9Hz,1H),4.00(d,J＝5.5Hz,2H),3.60(s,4H),3.23–3.07(m,6H),2.42(s,3H),2.31(s,3H),2.24(s,2H),2.05(s,1H),1.89(s,2H),1.81–1.71(m,5H),1.60(dd,J＝12.3,6.2Hz,3H),1.47(ddd,J＝19.4,13.3,6.1Hz,2H),1.23(s,1H),0.88(dd,J＝11.5,6.5Hz,6H)；MALDI-TOF MS:[M+H+]822.64,[M+Na+]844.42
13-199
Figure BDA0001967223830000772
将Fmoc-Glu-OtBu(7.2467g,17.0323mmol)投入到500mL的烧瓶里，加入DMF(150mL)使其溶解，反应置于0℃，在搅拌状态下加入13-198(10.0000g,12.1659mmol)、PyAOP(8.8800g,17.0323mmol),搅拌20分钟，再缓慢滴加TMP(1.6000mL,12.1659mmol),5分钟滴加完毕，反应在0℃下搅拌过夜。反应结束，加入正己烷(200mL),出现分层，倾倒上层清液，往下层液体加入正己烷(150mL ⅹ 6)，最终呈油状,加入甲醇(20mL)和二氯甲烷(80mL)使其溶解，加入硅胶粉(45g)，蒸干呈粉末固体，干法上样，柱层析，用5％甲醇的二氯甲烷混合溶液洗脱，收集浓缩，蒸干呈固体，再用真空干燥箱干燥，得产品13-199:13.4636g,产率100％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.17(s,1H),8.96(s,1H),8.14–7.99(m,4H),7.89(d,J＝7.7Hz,3H),7.73(d,J＝7.5Hz,3H),7.51(dd,J＝9.1,2.8Hz,1H),7.42(t,J＝7.4Hz,2H),7.33(m,8H),5.84(dd,J＝17.8,8.9Hz,1H),4.49–4.19(m,4H),4.05–3.83(m,3H),3.79–3.54(m,6H),3.16(d,J＝19.6Hz,5H),2.42(s,3H),2.31(s,3H),2.27–2.20(m,3H),1.93(m,7H),1.77(s,2H),1.66–1.47(m,5H),1.39(s,9H),0.86(dd,J＝16.0,6.5Hz,6H)；MALDI-TOFMS:[M+H+]1229.61
13-203
Figure BDA0001967223830000781
将13-199(13.4636g,10.9511mmol)投入到500mL烧瓶中，加入二氯甲烷(30mL)使其溶解，在搅拌状态下加入TFA(13.5500mL,182.4885mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩，加入甲基叔丁基醚(250mL)，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(100mL x 3)清洗，再用甲醇(20mL)和二氯甲烷(80mL)溶液溶解，加入硅胶粉(35g)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和3％-8％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得13-203:11.7000g,产率82％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.91(s,1H),8.99(s,1H),8.15–8.00(m,4H),7.87(t,J＝11.9Hz,3H),7.72(t,J＝7.2Hz,3H),7.55(dt,J＝8.4,7.8Hz,1H),7.42(d,J＝7.1Hz,2H),7.33(m,8H),5.93–5.80(m,1H),4.27(dd,J＝6.9,2.8Hz,4H),3.99(d,J＝5.2Hz,3H),3.85–3.68(m,2H),3.61(s,4H),3.39–3.14(m,4H),3.02(td,J＝6.6,3.9Hz,1H),2.44(s,3H),2.34(s,3H),2.25(d,J＝7.6Hz,3H),1.93(s,2H),1.83(m,7H),1.61(dd,J＝12.7,6.4Hz,3H),1.50(d,J＝6.9Hz,2H),0.86(dd,J＝16.3,6.5Hz,6H)；MALDI-TOF MS:[M+H+]1173.82,[M+Na+]1195.54
13-176
Figure BDA0001967223830000782
将Boc-GFLG-OBn(7.1784g,12.3194mmol)加入到氢化反应釜中，加入10％的Pd/C(0.1500g)，加入DMF(30mL)使其溶解,用水泵抽掉反应釜里面的空气呈真空，通入氢气，氢气压力为14Psi,然后放掉氢气，水泵抽至真空，再通入氢气，如此重复3次，最后再通入氢气，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，硅藻土用DMF(20mLⅹ3)清洗3次,滤液装入500mL的圆底烧瓶中,作为下一步反应的原料。
13-177
Figure BDA0001967223830000791
将SB-743921(4.9000g,9.4765mmol，简称SB7)、HBTU(5.3908g，14.2148mmol)、HOBT(1.9208g，14.2148mmol)加入到含有13-176(6.0682g,12.3194mmol)的DMF(100mL)中，将反应置于-5℃搅拌20分钟,然后缓慢滴加DIEA(7.0483mL,42.6443mmol),10分钟滴加完毕，继续在-5℃反应1小时，然后将反应置于室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(250mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(100mLⅹ3)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL ⅹ 2)清洗，再用无水硫酸钠(30g)干燥20分钟，抽滤，得滤液，滤液浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥3小时，得产品13-177:9.4000g，产率100％。1H-NMR(400MHz,DMSO)δ8.09(dd,J＝9.3,5.2Hz,3H),7.89(d,J＝7.5Hz,1H),7.65–7.42(m,2H),7.42–7.06(m,14H),6.98(s,1H),5.75(d,J＝6.8Hz,1H),4.39–4.11(m,2H),3.90(d,J＝14.5Hz,1H),3.58(dd,J＝25.3,6.0Hz,4H),3.15(dd,J＝11.9,7.5Hz,1H),2.89(s,1H),2.64(s,2H),2.33(s,3H),1.57(m,4H),1.47(d,J＝7.0Hz,2H),1.36(s,9H),1.23(dd,J＝21.9,9.2Hz,5H),0.96(d,J＝6.3Hz,3H),0.84(dd,J＝14.8,6.4Hz,6H),0.53(d,J＝4.8Hz,2H)
MALDI-TOF MS:[M+H+]991.47
13-183
Figure BDA0001967223830000792
将13-177(9.4000g,9.4765mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(30mL)使其溶解，再加入TFA(10.5000mL,142.1475mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将将反应液浓缩，加入甲基叔丁基醚(150mL)，析出粉末状固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(100mLⅹ 3)清洗，再用甲醇(20mL)和二氯甲烷(80mL)溶液溶解，加入硅胶粉(30g)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和4％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品13-183：7.3g,产率86.4％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.17(dt,J＝11.4,8.0Hz,4H),7.57(dd,J＝8.6,2.0Hz,2H),7.43–6.96(m,15H),6.24(s,2H),5.76(s,1H),4.34(d,J＝6.7Hz,1H),4.17(d,J＝14.4Hz,1H),3.90(d,J＝14.8Hz,1H),3.53(d,J＝11.5Hz,2H),2.85–2.53(m,3H),2.33(s,3H),1.52(m,7H),1.32(s,1H),1.15(dd,J＝38.5,6.6Hz,5H),0.96(d,J＝6.4Hz,3H),0.86(dd,J＝11.2,6.5Hz,6H),0.53(d,J＝5.2Hz,3H)；MALDI-TOF MS:[M+H+]891.23,[M+Na+]913.41
13-204
Figure BDA0001967223830000801
将13-203(9.1503g,7.7986mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入DMF(40mL)使其溶解,将反应置于0℃，加入13-183(7.3g，8.1885mmol)、PyAOP(5.6924g,10.9180mmol),搅拌10分钟后,缓慢滴加TMP(1.0270ml,7.7986mmol)，5分钟滴加完毕，反应在0℃搅拌过夜。反应结束，加入正己烷(200mL),出现分层，倾倒上层清液，往下层液体加入正己烷(150mL)，再次出现分层，倾倒上清液，下层继续加入正己烷(150mL),如此重复6次，最终呈油状，再加入甲基叔丁基醚(200mL)，呈粉末状固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(100mL ⅹ 3)清洗，滤饼再用甲醇(10mL)和二氯甲烷(40mL)溶液溶解，加入硅胶粉(20g)，蒸干,呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和3％-6％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得13-204：15.962g,产率100％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.16(s,1H),8.96(s,1H),8.24(d,J＝5.7Hz,1H),8.17–7.98(m,7H),7.89(d,J＝9.5Hz,4H),7.79–7.64(m,3H),7.61–7.10(m,28H),5.94–5.68(m,2H),4.46–4.12(m,6H),3.98(dd,J＝12.4,7.2Hz,3H),3.77–3.56(m,9H),3.24–3.13(m,4H),3.01(td,J＝6.6,3.9Hz,7H),2.42(s,3H),2.36–2.21(m,10H),1.90(d,J＝11.0Hz,3H),1.83–1.72(m,13H),1.67–1.43(m,8H),1.19(dd,J＝18.9,11.8Hz,1H),0.88(ddt,J＝13.5,9.7,7.8Hz,13H),0.52(s,2H)；MALDI-TOF MS:[M+Na+]2068.53
13-206
Figure BDA0001967223830000802
将13-204(15.9620g,7.7986mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入DMF(30mL)使其溶解，再加入吗啉(10.2000mL,116.979mmol),反应在室温下搅拌1小时后。反应结束，加入正己烷(200mL),分层，倾倒上层清液，往下层液体加入正己烷(150mL ⅹ 6)，最终呈油状，加入甲醇(20mL)和二氯甲烷(80mL)使其溶解，加入硅胶粉(40g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和3％-7％甲醇的二氯甲烷混合溶液进行梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品13-206:11.9000g,产率84％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.16(s,1H),8.96(s,1H),8.36–8.02(m,10H),7.89(d,J＝9.0Hz,1H),7.53(ddd,J＝12.1,8.8,2.4Hz,3H),7.20(dd,J＝28.1,13.3Hz,22H),5.82(dt,J＝24.3,12.1Hz,2H),4.48–4.22(m,2H),4.13(dd,J＝22.6,10.2Hz,1H),4.08–3.89(m,3H),3.81–3.50(m,11H),3.23–3.09(m,6H),2.81–2.67(m,3H),2.42(s,3H),2.39–2.18(m,10H),1.91–1.75(m,11H),1.67–1.43(m,10H),1.19(dd,J＝18.9,11.8Hz,1H),0.88(ddd,J＝19.8,16.3,4.3Hz,16H),0.52(s,2H)
MALDI-TOF MS:[M+H+]1822.87,[M+Na+]1845.64
13-207
Figure BDA0001967223830000811
将13-206(11.9000g,6.5221mmol)、Boc-Gly-0H(1.4853g,8.4788mmol)、HBTU(3.7102g,9.7832mmol)、HOBT(1.3220g,9.7832mmol)加入到500mL烧瓶中，加入DMF(40mL)使其溶解，将反应置于-5℃搅拌10分钟,然后缓慢滴加DIEA(4.8509mL,29.3495mmol),约15分钟滴加完毕，继续在-5℃反应30分钟，然后将反应置于室温下搅拌过夜。反应结束，加入正己烷150mL,出现分层，倾倒上层清液，往下层液体加入正己烷(150mL ⅹ 5)，最终呈油状，再加入甲基叔丁基醚(200mL)，呈粉末状固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(100mL ⅹ 3)清洗，滤饼用甲醇(20mL)二氯甲烷(80mL)溶液溶解，加入硅胶粉(35g)，蒸干,呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和4％-6％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品13-207:12.9250g，产率100％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.16(s,1H),8.96(s,1H),8.27(s,1H),8.15–7.86(m,10H),7.53(ddd,J＝12.0,8.9,2.4Hz,3H),7.36–7.09(m,21H),6.92(t,J＝5.7Hz,1H),5.90–5.74(m,2H),4.46–4.16(m,4H),3.96(dd,J＝23.4,9.8Hz,3H),3.81–3.50(m,12H),3.24–3.06(m,6H),2.86–2.61(m,3H),2.42(s,3H),2.35–2.15(m,10H),1.83(m,11H),1.69–1.40(m,10H),1.36(s,9H),1.18(d,J＝18.9Hz,1H),1.01–0.79(m,16H),0.52(d,J＝4.8Hz,2H)；MALDI-TOF MS:[M+Na+]2003.81
13-208
Figure BDA0001967223830000821
将13-207(12.9250g,6.5221mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(30mL)、TFA(7.2652mL,97.8315mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(100mL ⅹ 3)清洗，再用甲醇(20mL)二氯甲烷(80mL)溶液溶解，加入硅胶粉(30g)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和4％-6％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品13-208：10.9g,产率87％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.16(s,1H),8.96(s,1H),8.33(t,J＝5.5Hz,1H),8.21–7.78(m,10H),7.65–7.41(m,3H),7.41–7.06(m,21H),5.92–5.71(m,2H),4.48–4.12(m,4H),4.01–3.83(m,3H),3.80–3.56(m,11H),3.15(dd,J＝18.0,5.7Hz,7H),2.81–2.60(m,3H),2.42(s,3H),2.37–2.16(m,10H),1.95–1.45(m,21H),1.36–1.09(m,3H),0.87(ddd,J＝21.2,16.1,6.4Hz,16H),0.53(d,J＝5.1Hz,2H)；MALDI-TOF MS:[M+H+]1880.84,[M+Na+]1903.66
13-197
Figure BDA0001967223830000822
将Fmoc-Glu-OtBu(4.0900g,9.6151mmol)投入到500mL的烧瓶里，加入DMF(25mL)使其溶解，反应置于0℃，在搅拌状态下加入H-Glu-(OBn)2.TsOH(5.3372g,10.6834mmol)、PyAOP(7.8000g,14.9572mmol),搅拌约20分钟，缓慢滴加TMP(3.3770mL,25.6402mmol),4分钟滴加完毕，继续在0℃下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入去离子水(150mL)和的乙酸乙酯(250mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(150mL ⅹ 2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(150mL ⅹ 2)清洗，浓缩蒸干，干法上样，柱层析，用20％-50％乙酸乙酯的石油醚混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干，真空烘箱干燥4小时，得产品13-197：6.1g,产率77％。MALDI-TOF MS:[M+Na+]756.99。
13-200
Figure BDA0001967223830000823
将13-197(6.1000g,8.3012mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入DMF(25mL)使其溶解，再加入吗啉(7.2000mL,83.0120mmol),反应在室温下搅拌1小时后。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入去离子水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(100mLⅹ2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(150mL ⅹ 2)清洗，收集浓缩，蒸干，真空烘箱干燥，得产品13-200：4.25g,产率100％。MALDI-TOF MS:[M+H+]513.19,[M+Na+]534.12。
13-201
Figure BDA0001967223830000831
将Boc-GFLG-OBn(6.2881g,10.7916mmol)加入到氢化反应釜中，加入Pd/C(0.2000g)，加入DMF(30mL)使其溶解，用水泵抽掉反应釜里面的空气呈真空，通入氢气，氢气压力为0.14MPa,然后放掉氢气，水泵抽至真空，再通入氢气，如此重复3次，最后再通入氢气，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，硅藻土用DMF(20mLⅹ3)清洗,滤液装入500mL的圆底烧瓶中,得到13-201的DMF溶液。
13-202
Figure BDA0001967223830000832
将13-200(4.2000g,8.3012mmol，)、HBTU(4.7222g，12.4518mmol)、HOBT(1.6826g，12.4518mmol)加入到含有13-201(5.3156g,10.7916mmol)的DMF(500mL)溶液中，将反应置于-5℃条件下搅拌20分钟,然后缓慢滴加DIEA(6.1760mL,37.3554mmol),15分钟滴加完毕，继续在-5℃搅拌2小时后，然后将反应置于室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)和乙酸乙酯(250mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(150mL ⅹ 2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(150mL)清洗，浓缩蒸干，干法上样，柱层析，用30％-50％乙酸乙酯的石油醚混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品13-202：6.4g,产率78％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(d,J＝7.4Hz,1H),8.16(d,J＝7.7Hz,1H),8.06(d,J＝6.3Hz,2H),7.85(d,J＝8.0Hz,1H),7.42–7.29(m,10H),7.24–7.12(m,5H),6.90(t,J＝5.9Hz,1H),4.54(d,J＝3.9Hz,1H),4.31(ddd,J＝19.2,14.5,7.9Hz,1H),4.06(ddd,J＝25.5,13.3,6.9Hz,1H),3.81–3.67(m,2H),3.60–3.46(m,2H),3.00(dd,J＝13.8,4.3Hz,1H),2.84–2.75(m,1H),2.45–2.37(m,2H),2.27–2.13(m,2H),2.08–1.70(m,5H),1.66–1.45(m,4H),1.37(d,J＝10.8Hz,18H),1.27–1.11(m,2H),0.86(dd,J＝19.4,6.4Hz,7H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]987.50,[M+Na+]1009.40。
13-210
Figure BDA0001967223830000841
将13-202(0.6557g,0.6643mmol)加入到氢化反应釜中，加入10％的Pd/C(0.1000g)，加入DMF(30mL)使其溶解，用水泵抽掉反应釜里面的空气呈真空，通入氢气，氢气压力为14Psi,然后放掉氢气，水泵抽至真空，再通入氢气，如此重复3次，最后再通入氢气，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，硅藻土用DMF(20mL ⅹ 3)清洗,滤液装入500mL的圆底烧瓶中，作为下一步反应的原料。
13-211
Figure BDA0001967223830000842
将13-208(3.0000g,1.5944mmol)、HBTU(0.7558g,1.9929mmol)、HOBT(0.2693g,1.9929mmol)加入到含有13-210(0.5360g,0.6643mmol)的DMF(100mL)中，反应置于-5℃条件下搅拌约20分钟,然后缓慢滴加DIEA(0.9881mL,5.9787mmol),3分钟滴加完毕，继续于-5℃反应1小时，然后将反应置于室温下搅拌过夜。反应结束，加入正己烷150mL,分层，倾倒上层清液，往下层液体加入正己烷(150mL x 5)，最终呈油状，再加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出固体，呈粉末状，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(100mLⅹ3)清洗，滤饼用(20％甲醇：80％二氯甲烷)溶液(50mL x 2)清洗，真空烘箱干燥，得产品13-211:2.6g，产率86％.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,2H),9.00(d,J＝32.7Hz,2H),8.38–7.75(m,40H),7.52(ddd,J＝11.9,8.8,2.4Hz,7H),7.35–7.03(m,38H),5.94–5.67(m,2H),4.50(d,J＝44.7Hz,3H),4.39–4.15(m,6H),4.11–3.88(m,5H),3.82–3.50(m,21H),3.37(d,J＝31.5Hz,12H),3.24–3.00(m,15H),2.75(d,J＝12.3Hz,5H),2.32(t,J＝34.5Hz,33H),2.04–1.66(m,18H),1.64–1.45(m,18H),1.33(dd,J＝21.5,17.0Hz,20H),1.26–1.16(m,7H),1.04–0.74(m,38H),0.50(s,7H).MALDI-TOF MS:[M+Na+]4553.27
13-214
Figure BDA0001967223830000851
将13-211(2.6000g,0.5734mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(10mL)使其溶解，再加入TFA(1.7000mL,22.4378mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩成，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出固体,呈粉末状,抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(100mL ⅹ 2)清洗，滤饼用甲醇(10mL)和二氯甲烷(40mL)溶液溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干,呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和8％-12％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品13-214：1.8g,产率72％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,2H),8.95(s,2H),8.50–7.74(m,33H),7.52(ddd,J＝12.0,8.9,2.3Hz,7H),7.33–7.01(m,45H),5.82(p,J＝8.9Hz,2H),4.54(d,J＝8.8Hz,4H),4.38–4.15(m,7H),3.98(dd,J＝40.7,16.5Hz,5H),3.63(d,J＝19.3Hz,21H),3.00(dd,J＝26.6,13.6Hz,12H),2.77(d,J＝5.9Hz,7H),2.58(s,4H),2.42(s,6H),2.35–2.05(m,28H),1.87(t,J＝46.8Hz,20H),1.65–1.39(m,22H),1.32–1.10(m,9H),1.00–0.67(m,40H),0.50(s,6H)；MALDI-TOF MS:[M+H+]4375.92,[M+Na+]4397.67。
13-217
Figure BDA0001967223830000852
将13-214(1.8000g,0.4112mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(10mL)和DMF(70mL)使其溶解，于-5℃缓慢加入DIEA(0.28mL,1.7140mmol),再加入4ARM-SCM-40K(3.5940g,0.0857mmol，购于键凯),搅拌使其溶解,反应在室温下低速避光搅拌一个星期。反应结束，向反应液中加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(50mL)，出现分层，倾倒上层液体，下层油状继续加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(50mL)，如此重复3次，析出固体，过滤，滤饼用甲醇(20mL)和二氯甲烷(80mL)溶液溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和10％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品13-21：2.7g,产率53％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,5H),8.99(d,J＝27.8Hz,7H),8.48–7.60(m,136H),7.50(d,J＝15.8Hz,24H),7.34–7.11(m,182H),5.98–5.78(m,8H),5.32(s,6H),5.13(d,J＝6.0Hz,10H),4.63–4.02(m,133H),3.51(s,3048H),3.26–2.94(m,35H),2.70(d,J＝24.5Hz,58H),2.42(s,24H),2.27(d,J＝27.3Hz,85H),2.01–1.65(m,80H),1.64–1.49(m,94H),1.34(d,J＝6.2Hz,38H),1.17(s,26H),0.91–0.78(m,182H),0.49(s,26H)；
MALDI-TOF MS:从57757.84到61540.95
17-87
Figure BDA0001967223830000861
将13-217(2.7000g,0.0453mmol)投入500mL中，加入DMF(60mL)使其溶解，加入M-NH2-2K.HCl(0.5592g,0.2745mmol,购于键凯)、HBTU(0.1041g,0.2745mmol)、HOBT(0.0370g,0.2745mmol)，将反应置于-5℃条件下搅拌约20分钟,然后缓慢滴加DIEA(0.1665mL,1.0076mmol),滴加完毕，继续于-5℃反应1小时，然后将反应置于室温下避光低速搅拌一个星期。反应结束，加入正己烷150mL,出现分层，倾倒上层清液，往下层液体加入正己烷(250mL x 5)，最终呈油状，用甲醇(20mL)和氯甲烷(80mL)溶液溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干,呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和6％-8％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干呈固体，真空干燥2小时，得粗产品，加入无水乙醇(15mL)溶解，再加入正己烷(100mL),析出固体，过滤，滤饼用正己烷(50mLⅹ3)清洗,滤饼用真空烘箱干燥，得产品17-87：2.34g,产率74％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.33(s,6H),8.96(s,8H),8.39–7.55(m,123H),7.55-7.41(m,20H),7.32–6.85(m,199H),5.83(s,8H),4.77–4.48(m,16H),4.40-3.95(m,23H),3.88(m,106H),3.52(s,4127H),2.91(s,71H),2.82-2.65(m,21H),2.42(s,24H),2.29(m,112H),1.84(m,80H),1.53(m,86H),1.37–1.15(m,38H),1.09–0.72(m,162H),0.50(s,11H)；
MALDI-TOF MS:从66240.77到67307.40
实施例11化合物17-141的合成
18-133
Figure BDA0001967223830000871
将8-125(5.4407g,6.8706mmol，即10-96)投入到250mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(30mL)使其溶解，然后加入TFA(7.6533mL,103.0590mmol)，反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液蒸干浓缩，再将反应液转移至2L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(120mL),乙酸乙酯(100mL),萃取，水相用乙酸乙酯(80mLⅹ3)清洗，合并有机相，再用饱和食盐水(80mLⅹ 3)清洗，浓缩蒸干，真空烘箱干燥,得产品18-133：79.9g,产率100％.
18-136
Figure BDA0001967223830000872
将Fmoc-Glu-OtBu(2.6344g,6.1067mmol)投入到500mL的烧瓶里，加入DMF(50mL)使其溶解，反应置于-5℃，加入18-133(3.8404g,5.5516mmol)、HBTU(3.1581g,8.3273mmol)、HOBT(1.1253g,8.3273mmol),搅拌20分钟，缓慢滴加DIEA(4.1291mL,24.9880mmol),10分钟滴加完毕，反应在-5℃下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入去离子水(150mL)和乙酸乙酯(100mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(100mL ⅹ 3)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(80mL ⅹ 3)清洗，浓缩蒸干，加入二氯甲烷(100mL)溶解，加入硅胶粉(15g),蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用20％-50％乙酸乙酯的石油醚混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品18-136：4.4926g,产率74％。
18-138
Figure BDA0001967223830000881
18-136(4.4926g,4.0908mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入DMF(20mL)使其溶解，再加入吗啉(5.3458mL,61.3614mmol),反应在室温下搅拌1小时。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入去离子水(120mL)和乙酸乙酯(100mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(100mL ⅹ 2)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(80mL ⅹ 3)清洗，浓缩蒸干，真空烘箱干燥，得产品18-138：3.2g,产率73％。
13-201
Figure BDA0001967223830000882
将Boc-GFLG-OBn(6.2881g,10.7916mmol)加入到氢化反应釜中，加入10％Pd/C(0.2000g)，加入DMF(30mL)使其溶解，用水泵抽掉反应釜里面的空气呈真空，通入氢气，氢气压力为0.14MPa,然后放掉氢气，水泵抽至真空，再通入氢气，如此重复3次，最后再通入氢气，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(20mL x 3)清洗3次,滤液装入500mL的圆底烧瓶中,得到13-201的DMF溶液。
18-139
Figure BDA0001967223830000883
将18-138(3.2000g,3.6488)、HBTU(2.0757g，5.4733mmol)、HOBT(0.7396g，5.4733mmol)加入到含有13-201(2.3365g,4.7435mmol)的DMF(100mL)溶液中，将反应置于-5℃，搅拌20分钟,然后缓慢滴加DIEA(2.7139mL,16.4198mmol),5分钟滴加完毕，继续在-5℃搅拌2小时，然后将反应置于室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(120mL)和乙酸乙酯(100mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(100mL ⅹ 3)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(80mL ⅹ 3)清洗，将其浓缩，加入二氯甲烷(100mL)使其溶解，加入硅胶粉(10g),蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和3％-6％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干呈固体，真空烘箱干燥，得产品18-139：3.8g,产率78％。
17-124
Figure BDA0001967223830000891
将18-139(0.6152g,0.4555mmol)加入反应釜中，加入Pd/C(0.1000g)，加入DMF(30mL)使其溶解，用水泵抽掉反应釜里面的空气呈真空，通入氢气，氢气压力为0.14MPa,然后放掉氢气，水泵抽至真空，再通入氢气，如此重复3次，最后再通入氢气，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(20mL ⅹ 3)清洗,滤液装入500mL的圆底烧瓶中，作为下一步的原料。
17-125
Figure BDA0001967223830000892
将17-102(3.0000g,1.5944mmol)、HBTU(0.7774g,2.0498mmol)、HOBT(0.2770g,2.0498mmol)加入到含有17-124(0.4925g,0.4555mmol)的DMF(90mL)溶液中，反应置于-5℃，搅拌20分钟,然后缓慢滴加DIEA(1.0160mL,6.1493mmol),5分钟滴加完毕，继续于-5℃反应1小时，然后将反应置于室温下搅拌过夜。反应结束，加入正己烷150mL,分层，倾倒上层清液，往下层液体加入正己烷(150mL ⅹ 3)，最终呈油状，再加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(100mL ⅹ 3)清洗，滤饼用甲醇(5mL)和二氯甲烷(20mL)溶液溶解，加入乙酸乙酯(150mL),析出固体，过滤，滤饼用真空烘箱干燥，得产品17-125:3.039g，产率100％.
MALDI-TOF MS:[M+H+]6667.23
17-129
Figure BDA0001967223830000901
将17-125(3.0390g,0.4555mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(15mL)、TFA(0.6765mL,9.1100mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液浓缩，加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出固体,抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mL ⅹ 2)清洗，滤饼用甲醇(10mL)和二氯甲烷(40mL))溶液溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干,呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和7％-10％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品17-129：1.2341g,产率42％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,3H),8.95(s,2H),8.50–7.80(m,47H),7.62–7.37(m,10H),7.18(ddd,J＝13.0,9.2,5.1Hz,65H),5.94–5.74(m,3H),4.71-4.50(m,4H),4.42–4.08(m,12H),3.97–3.86(m,9H),3.79–3.56(m,33H),3.25–3.02(m,27H),2.98–2.81(m,12H),2.79–2.63(m,14H),2.42(s,12H),2.35–2.05(m,45H),1.91–1.74(m,28H),1.63–1.41(m,30H),1.33–1.12(m,11H),0.91–0.80(m,47H),0.49(s,10H).
MALDI-TOF MS:[M+Na+]6531.83
17-131
Figure BDA0001967223830000911
将17-129(1.2341g,0.1894mmol)加入到500mL的烧瓶中，加入DMF(50mL)使其溶解，反应置于-5℃，缓慢加入DIEA(0.1304mL,0.7892mmol)，搅拌30分钟，再加入4ARM-SCM-40K(1.6556g,0.0395mmol，购于键凯),于-5℃下低速搅拌使其溶解，然后移至室温下低速避光搅拌一个星期。反应结束，向反应液中加入正己烷(150mL x 3)沉降，下层油状加入甲基叔丁基醚(200mL)，析出固体，过滤，滤饼用甲醇(10mL)和二氯甲烷(40mL)溶液溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干,呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和4％-6％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得产品17-131：1.2812g,产率48％。
17-141
Figure BDA0001967223830000921
将17-131(1.2812g,0.0190mmol)投入500mL中，加入DMF(15mL)使其溶解，加入M-NH2-3K.HCl(0.3537g,0.1138mmol)、HBTU(0.0863g,0.2276mmol)、HOBT(0.0308g,0.2276mmol)，将反应置于-5℃条件下搅拌约20分钟,然后缓慢滴加DIEA(0.0689mL,0.4171mmol),滴加完毕后，在-5℃反应半个小时后，然后将反应置于室温下避光低俗搅拌6天。反应结束，加入正己烷150mL,出现分层，倾倒上层清液，往下层液体加入正己烷(150mLx 5)，最终呈油状，用甲醇(10mL)二氯甲烷(40mL)溶液溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干成粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和4％-6％甲醇二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥2小时，加入无水乙醇(25mL)和二氯甲烷(5mL)溶解，再加入正己烷(200mL),析出固体，过滤，滤饼用正己烷(50mL ⅹ 3)清洗,滤饼用真空烘箱干燥，得产品17-141：1.04g,产率69％。
MALDI-TOF MS:从79562.81到79931.28
实施例12化合物19-42的合成
16-40
Figure BDA0001967223830000922
取反应物Boc-GLG-OBn(自制，10g，22.9616mmoL)投入氢化釜反应中，加入10％Pd/C(250mg)，再加入DMF(30mL)溶解，密闭反应釜，抽真空，通氢气(18psi)，搅拌反应过夜。反应结束，用硅藻土(20g)作滤饼，抽滤反应液，再用DMF洗涤滤饼(30mL×3)，收集滤液进入下一步。
16-41
Figure BDA0001967223830000931
取PCB(PaLbocicLib(PD-0332991))(5.1380g，11.4808mmoL)，HOBT(2.3271g，17.2212mmoL)，HBTU(6.5310g，17.2212mmoL)，投入到16-40(14.9250mmoL)的DMF溶液中，置于-5℃低温恒温浴中搅拌反应30分钟后滴加DIEA(8.5390mL，51.6636mmoL)。2小时后置于常温下反应过夜。反应结束，向反应液中加入去离子水(1L)，抽滤，用甲基叔丁基醚洗涤滤饼3次(200mL×3)。收集滤饼，放入真空烘箱烘干后得产品10g，产率100％。
16-44
Figure BDA0001967223830000932
取SB7(SB-743921)(2.4659g，4.7689mmoL)，HOBT(0.9666g，7.1534mmoL)，HBTU(2.7129g，7.1534mmoL)，投入到16-40(6.1996mmoL)的DMF溶液中，置于-5℃低温恒温浴中搅拌反应30分钟后滴加DIEA(3.5470mL，21.4061mmoL)。2小时后置于常温下搅拌反应过夜。反应结束，向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，反复震荡后静置分层，分出有机相，再将水相用乙酸乙酯萃取3次(200mL×3)，合并有机相，再用饱和氯化钠溶液洗涤有机相3次(200mL×3)，再用无水硫酸钠(100g)干燥有机相，10分钟后抽滤，用乙酸乙酯洗涤滤饼3次(20mL×3)，蒸干滤液，放入真空烘箱烘干后得产品5g，产率100％.
19-45
Figure BDA0001967223830000933
取反应物16-44(4.7689mmoL)投入250mL反应瓶中，加入二氯甲烷(20mL)后再加入TFA(7.0840mL，95.3780mmoL)溶解，搅拌反应过夜。反应结束，向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，反复震荡后静置分层，分出有机相，再将水相用乙酸乙酯萃取3次(200mL×3)，合并有机相，再用饱和氯化钠溶液洗涤有机相3次(200mL×3)，再用无水硫酸钠(100g)干燥有机相，10分钟后抽滤，用乙酸乙酯洗涤滤饼3次(20mL×3)，蒸干滤液，用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加入硅胶粉(20g)，蒸干，干法上样，柱层析。用1％氨水：4％-6％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱,收集产品点，浓缩蒸干，放入真空烘箱烘干后得产品3.5496g，产率80％。
16-47
Figure BDA0001967223830000941
取反应物16-41(11.4808mmoL)投入500mL反应瓶中，加入二氯甲烷(20mL)后再加入TFA(17.0548mL，229.616mmoL)搅拌反应过夜。反应结束，先蒸干反应液，加正己烷(150mL)，静置10分钟，倾倒出上清液，加乙酸乙酯(15mL)超声成均相，再加正己烷沉降，反复操作至有固体析出，抽滤，用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加入硅胶粉(20g)，蒸干，干法上样，柱层析。用1％氨水：3％-5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱,收集产品点，浓缩蒸干，放入真空烘箱烘干后得产品6.4g，产率83％。
16-51
Figure BDA0001967223830000942
取16-47(2.5g，1.6338mmoL)，Fmoc-GLu-OtBu(0.9732g，2.2873mmoL)，PyAOP(1.1926g，2.2873mmoL)，投入250mL反应瓶中，用DMF(20mL)溶解，置于0℃低温恒温浴中，搅拌反应20分钟后，缓慢滴加TMP(0.2152mL，1.6338mmoL)，反应过夜。反应结束，加入甲基叔丁基醚沉降(300mL)，抽滤，将滤饼用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加硅胶粉(15g)，蒸干，干法上样，柱层析。用5％-10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱,收集产品点，浓缩蒸干，放入真空烘箱烘干后得产品2.1g，产率67.64％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.17(s,1H),8.96(s,1H),8.14-7.99(m,4H),7.89(s,3H),7.73(s,3H),7.51(s,1H),7.42(s,2H),7.33(s,2H),5.84(s,1H),4.49-4.19(m,4H),4.05-3.83(m,3H),3.79-3.54(m,6H),3.16(s,5H),2.42(s,3H),2.31(s,3H),2.27-2.20(m,3H),1.93(s,4H),1.77(s,2H),1.66-1.47(m,5H),1.39(s,9H),0.86(s,6H)；
MALDI-TOF MS:[M+H+]1082.60
19-8
Figure BDA0001967223830000943
向16-51(5.0386mmoL)中加入二氯甲烷(20mL)和TFA(7.4849mL，100.772mmoL)溶解，搅拌反应过夜。反应结束，将反应液蒸干后用乙酸乙酯(10mL)溶解，加入甲基叔丁基醚沉降(300mL)。沉降完毕后抽滤，将滤饼用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加硅胶粉(20g)，蒸干，干法上样，柱层析。用8％-10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱,收集产品点，浓缩蒸干，放入真空烘箱烘干后得产品5g，产率96.71％。
19-9
Figure BDA0001967223830000951
称取反应物19-8(5g，4.8276mmoL)，加入DMF(30mL)溶解后放入0℃低温恒温浴中搅拌，再依次加入16-45(3.45g，4.6401mmoL)和PyAOP(3.3870g，6.4961mmoL)，搅拌反应30分钟后缓慢滴加TMP(0.6118mL，4.6401mmoL)。反应结束，加正己烷(150mL)，静置10分钟，倾倒出上清液，加乙酸乙酯(15mL)超声成均相，再加正己烷沉降，反复操作至有固体析出，抽滤，收集滤饼，放入真空烘箱烘干后得产品10.8g，产率100％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.16(s,1H),8.96(s,1H),8.24(s,1H),8.17–7.98(m,7H),7.89(m,4H),7.79–7.64(m,3H),7.61–7.10(m,16H),5.94–5.68(m,2H),4.46–4.12(m,6H),4.00-2.82(m,3H),3.77–3.56(m,9H),3.24–3.13(m,4H),3.01-2.51(m,7H),2.42(s,3H),2.36–2.21(m,10H),2.18-1.88(m,3H),1.83–1.72(m,7H),1.67–1.43(m,8H),1.3-0.95(m,1H),0.90-0.61(m,13H),0.52(s,2H)；
MALDI-TOF MS:[M+H+]1751.90
19-11
Figure BDA0001967223830000952
向19-9(4.4601mmoL)加入DMF(20mL)溶解，再加入吗啉(12.13mL，139.203mmoL)，搅拌反应，1小时后补加吗啉(9mL)，反应3小时。反应结束，加入正己烷(150mL)，静置10分钟，倾倒出上清液，加乙酸乙酯(15mL)超声成均相，再加正己烷沉降，反复操作至有固体析出，抽滤，用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加入硅胶粉(30g)蒸干，干法上样，柱层析。用1％氨水：4％-8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱,收集产品点，浓缩蒸干，放入真空烘箱烘干后得产品4.2g，产率59.23％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,1H),8.96(s,1H),8.09–8.03(m,9H),7.95-7.63(m,1H),7.60-7.52(m,1H),7.50(s,2H),7.25(s,6H),7.14(s,2H),5.91–5.69(m,3H),5.55-4.32(m,1H),4.29(s,1H),4.20-3.86(m,3H),3.79–3.67(m,6H),3.59(s,10H),2.89(s,1H),2.81-2.31(m,11H),2.28-1.99(m,7H),1.94–1.71(m,9H),1.62-0.91(m,4H),0.87-0.62(m,18H),0.52(s,3H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]1529.37,[M+Na+]1551.33
19-13
Figure BDA0001967223830000961
称取反应物19-11(4.2g，2.7447mmoL)，加入DMF(30mL)溶解后放入低温恒温浴中搅拌，再依次加入反应物Fmoc-GLu-OtBu(1.6350g，3.8426mmoL)和PyAOP(2.0035g，3.8426mmoL)，搅拌反应30分钟后滴加TMP(0.3615mL，2.7447mmoL)，反应过夜。反应结束，加入正己烷(150mL)，静置10分钟，倾倒出上清液，加乙酸乙酯(15mL)超声成均相，再加正己烷沉降，反复操作至有固体析出，抽滤，收集滤饼，放入真空烘箱烘干后得产品5.6g，产率100％。
19-14
Figure BDA0001967223830000962
向19-13(2.7447mmoL)中加入DMF(20mL)，再加入吗啉(7.1735mL，82.341)搅拌反应3小时。反应结束，加入正己烷(150mL)，静置10分钟，倾倒出上清液，加乙酸乙酯(15mL)超声成均相，再加正己烷沉降，反复操作至有固体析出，抽滤，用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解加硅胶粉(20g)，蒸干，干法上样，柱层析。用1％氨水：7％甲醇/二氯甲烷洗脱,收集产品点，浓缩蒸干，放入真空烘箱烘干后得产品4.3g，产率91.49％。
MALDI-TOF MS:[M+H+]1714.93,[M+Na+]1736.57
19-20
Figure BDA0001967223830000963
称取反应物19-14(1.6g，0.9327mmoL)，Boc-GLG-OH(自制，1.2125mmoL)，HOBT(0.2g，1.3991mmoL)，HBTU(0.53g，1.3991mmoL)，用DMF(50mL)溶解后至于-5℃低温恒温浴中，搅拌反应30分钟加后缓慢滴加DIEA(0.69mL，4.1922mmoL)，反应2小时后置于常温，反应过夜。反应结束，加入正己烷(150mL)，静置10分钟，倾倒出上清液，加乙酸乙酯(15mL)超声成均相，再加正己烷沉降，反复操作至有固体析出，抽滤，用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解，加入硅胶粉(15g)蒸干，干法上样，柱层析。用1％氨水:4％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集产品点，浓缩蒸干，放入真空烘箱烘干后得产品1.5g，产率52.53％。
MALDI-TOF MS:[M+H+]2042.13,[M+Na+]2064.40
19-33
Figure BDA0001967223830000971
称取反应物19-20(1g，0.4896mmoL)加入二氯甲烷(20mL)和入TFA(1.454mL，19.5808mmoL)溶解，搅拌反应过夜。反应结束，加入正己烷(150mL)，静置10分钟，倾倒出上清液，加乙酸乙酯(15mL)超声成均相，再加正己烷沉降，反复操作至有固体析出，抽滤，收集滤饼，放入真空烘箱烘干后得产品1.2g，产率100％。
19-36
Figure BDA0001967223830000972
取19-33(0.4896mmoL)用DMF(50mL)溶解，加入DIEA(0.869mL，5.268mmoL)，用二氯甲烷(20mL)溶解4ARM-SCM-40K(4.4492g，0.102mmoL，购于键凯)后加入到19-33中，搅拌反应。反应结束，加入甲基叔丁基醚沉降(300mL)，抽滤，将滤饼用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加入硅胶粉(20g)，干法上样，柱层析。用10％-15％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱,收集产品点，浓缩蒸干，放入真空烘箱烘干后得产品1.4g，产率27％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,3H),8.96(s,9H),8.77-8.39(m,16H),8.27-8.12(m,6H),8.09-7.91(m,15H),7.85-7.70(m,7H),7.66–7.57(m,2H),7.57–7.46(m,2H),7.41–7.29(m,23H),7.24(s,16H),7.16-7.10(m,6H),6.54-6.50(m,17H),5.85–5.79(m,1H),5.11(s,7H),4.53-3.90(m,8H),3.70–3.65(m,41H),3.50-2.99(m,4001H),2.90-2.88(m,10H),2.74-2.72(m,9H),2.70-2.66(m,20H),2.60-2.58(m,12H),2.44-2.38(m,13H),2.35–2.29(m,27H),1.84-1.82(m,6H),1.46-1.142(m,10H),1.41-1.27(m,50H),1.24-1.20(m,24H),1.20-1.16(m,46H),1.13-0 92(m,15H),0.87-0.83(m,96H).图8为化合物19-36的1H NMR谱图。
MALDI-TOF MS:从50260.57到51539.80
19-42
Figure BDA0001967223830000981
取19-36(1.4g，0.0276mmoL)，M-NH2-2K·HCl(0.4418g，0.2209mmoL)，HOBT(0.0224g，0.1657mmoL)，HBTU(0.0628g，0.1657mmoL)，用DMF(50mL)溶解后，置于-5℃低温恒温浴中搅拌反应30分钟，再滴加DIEA(0.1787mL，0.7179mmoL)搅拌反应，2小时后置于常温下反应。反应结束，加入甲基叔丁基醚沉降(300mL)，抽滤，将滤饼用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加入硅胶粉(8g)，蒸干，干法上样。用1％氨水：2％-5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，收集产品点，浓缩蒸干，放入真空烘箱烘干后得产品0.1g，产率6.1％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.98-8.94(m,12H),8.27–8.18(m,8H),8.08-8.06(m,48H),7.92–7.83(m,7H),7.65-7.30(m,9H),7.22-6.26(m,78H),3.45-3.38(m,6355H),2.36-2.30(m,161H),2.11-1.72(m,59H),1.58-1.56(m,35H),1.50-1.46(m,48H),1.34-0.96(m,18H),0.88-0.63(m,96H),0.59-0.32(m,9H).图9为化合物19-42的1H-NMR谱图。
实施例13化合物19-72的合成
19-53
Figure BDA0001967223830000982
向氢化反应釜中加入9-103(0.4g，0.2547mmoL)，投入氢化釜反应中，加入10％Pd/C(300mg)，再加入DMF(30mL)溶解，密闭反应釜，抽真空，通氢气(18psi)，搅拌过夜。反应结束，用硅藻土(20g)作滤饼，抽滤反应液，再用DMF洗涤滤饼(30mL×3)，收集滤液进入下一步。
19-54
Figure BDA0001967223830000991
向19-53(0.2547mmoL)中加入3-161(2.5484g，1.2226mmoL，结构和合成过程参见PCT国际专利申请PCT/CN2018/073662实施例M-10中化合物L-10的合成，将Boc-GLG-OBn换成Boc-GFLG-OBn、把PCB换成LPT即可)，HOBT(0.2065g，1.5282mmoL)，HBTU(0.5796g，1.5282mmoL)后置于-5℃低温恒温浴中搅拌反应，0.5小时后滴加DIEA(0.7577mL，4.5846mmoL)，反应过夜。反应结束，向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，反复震荡后静置分层，分出有机相，再将水相用乙酸乙酯萃取3次(200mL×3)，合并有机相，再用饱和氯化钠溶液洗涤有机相3次(200mL×3)，再用无水硫酸钠(100g)干燥有机相，10分钟后抽滤，用乙酸乙酯洗涤滤饼(20mL×3)，向滤液中加入硅胶粉(10g)，蒸干，干法上样，用洗脱剂1％氨水：6％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集产品点，浓缩蒸干，放入真空干燥烘干得产品1.6g，产率69％
19-58
Figure BDA0001967223830000992
向19-54(1.6g)中加入TFA(0.26mL，3.5055mmoL)，二氯甲烷(30mL)溶解后搅拌过夜。反应结束，先蒸干反应液，加正己烷(150mL)，静置10分钟，倾倒出上清液，加乙酸乙酯(15mL)超声成均相，再加正己烷沉降，反复操作至有固体析出，抽滤，将滤饼用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加硅胶粉(10g)，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂1％氨水：7％-8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，收集产品点，浓缩蒸干，放入真空干燥烘干得产品1.2g，产率75.8％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.87-9.53(m,5H),9.03-8.76(m,5H),8.56(s,5H),8.36-8.23(m,10H),8.16–7.99(m,37H),7.87-7.83(m,8H),7.75–7.67(m,9H),7.58-7.43(m,18H),7.36–7.13(m,84H),6.90(s,2H),3.76-6.68(m,5H),6.55-6.03(m,4H),5.26(s,11H),4.86-4.72(m,12H),4.63-4.45(m,17H),4.37-4.29(m,10H),4.25-3.95(m,12H),3.92-3.86(m,20H),3.78–3.64(m,20H),3.65–3.47(m,29H),3.27-3.12(m,8H),3.05(s,7H),3.03(s,10H),2.93(s,15H),2.89(s,7H),2.83–2.69(m,36H),2.31(s,11H),2.13-1.58(m,6H),1.48-1.38(m,19H),1.36–1.32(m,8H),1.24–1.20(m,13H),0.95–0.88(m,16H),0.88–0.83(m,24H),0.82–0.78(m,19H),0.54–0.46(m,11H).图10为化合物19-58的1H-NMR谱图。
MALDI-TOF MS:[M+Na+]8985.60
19-64
Figure BDA0001967223830001001
用DMF(20mL)溶解19-58(1.2g，0.1331mmoL)，用二氯甲烷(20mL)溶解4AMR-SCM-40K(1.1631g，0.02772mmoL,购于键凯)，分别加入到250mL烧瓶中，再滴加DIEA(2mL)，搅拌反应。反应结束，向反应液中加入甲基叔丁基醚沉降(300mL)，抽滤，将滤饼用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加硅胶粉(10g)，蒸干，干法上样，柱层析。用洗脱剂8％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集产品点，浓缩蒸干，放入真空干燥烘干得产品1.1g，产率50.2％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.97–9.75(m,92H),8.54-8.52(m,165H),8.31–8.15(m,60H),7.94-7.90(m,68H),7.92–7.58(m,141H),7.57–7.42(m,46H),7.23(m,77H),6.52-6.48(m,72H),5.29-5.24(m,51H),3.69–3.66(m,659H),3.46-3.38(m,3764H),2.95-2.86(m,16H),2.72-2.70(m,52H),2.35-2.32(m,115H),2.00-1.96(m,24H),1.48-1.46(m,25H),1.36-1.32(m,30H),1.24-1.20(m,207H),1.18-1.16(m,28H),0.86-0.84(m,216H).图11为化合物19-64的1H-NMR谱图。
MALDI-TOF MS:从77323.56到77347.98
19-72
Figure BDA0001967223830001011
用DMF(30mL)溶解19-64(1.1g，0.0142mmoL)后置于-5℃低温恒温浴中，依次加入M-NH2-2K·HCl(0.2311g，0.1134mmoL)，HOBT(0.0115g，0.0851mmoL)，HBTU(0.0323g，0.0851mmoL)，0.5小时后滴加DIEA(0.06mL，0.3687mmoL)，2小时后置于常温下反应。反应结束，向反应液中加入甲基叔丁基醚沉降，抽滤，将滤饼用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加硅胶粉(5g)蒸干，干法上样，柱层析，用洗脱剂6％甲醇/二氯甲烷洗脱，得产品0.6g，产率50％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.10–8.04(m,95H),7.97–7.91(m,84H),7.89–7.82(m,110H),7.49-7.42(m,116H),7.24-7.18(m,118H),7.19-7.13(m,84H),7.08-7.03(m,51H),6.99-6.93(m,67H),5.99-5.86(m,131H),5.58-5.53(m,67H),3.24-3.1(m,4490H),2.89-2.82(m,269H),2.76-2.71(m,104H),2.69-2.65(m,141H),2.38-2.33(m,140H),1.27-1.25(m,124H),1.17-1.14(m,136H),1.06(m,96H),0.88-0.82(m,216H).图12为化合物19-72的1H-NMR谱图。
MALDI-TOF MS:从85257.07到85387.78
实施例14化合物19-80的合成
11-86
Figure BDA0001967223830001012
取反应物Boc-GFLG-OBn(自制，20g)投入氢化釜反应中，加入10％的Pd/C(250mg)，再加入DMF(30mL)溶解，密闭反应釜，抽真空，通氢气(18psi)，搅拌反应过夜。反应结束，用硅藻土(20g)作滤饼，抽滤反应液，再用DMF洗涤滤饼3次(30mL×3)，收集滤液进入下一步。
19-56
Figure BDA0001967223830001013
取PCB(PaLbocicLib(PD-0332991))(4.7264g，10.5611mmoL)，11-86(13.7294mmoL)，HOBT(2.1407g，15.8417mmoL)，HBTU(6.0080g，15.8417mmoL)于500mL烧瓶中，用DMF(30mL)溶解，置于-5℃低温恒温浴中，0.5小时后滴加DIEA(0.7508mL，4.5428mmoL),2小时后置于常温下反应过夜。反应结束，向反应液中加入去离子水(500mL)，抽滤，用甲基叔丁基醚洗涤滤饼3次(300mL×3)，将滤饼用混合溶剂(20％甲醇/二氯甲烷，200mL)溶解后加硅胶粉(50g)，干法上样。用3％－5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，收集产品点，浓缩蒸干，放入真空干燥箱烘干得产品10.3g，产率100％。
19-60
Figure BDA0001967223830001021
向19-56(10.5611mmoL)中加入TFA(19.6107mL，264.0275mmoL)，二氯甲烷(20mL)，搅拌反应。反应结束，向反应液中加入正己烷沉降，静置10分钟，倾倒出上清液，加少量乙酸乙酯超声，加正己烷，反复至有固体析出。沉降完毕后抽滤，将滤饼用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加硅胶粉(50g)，蒸干，干法上样，柱层析。用3％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集产品点，浓缩蒸干，放入真空干燥箱烘干得产品9g，产率80％。
19-66
Figure BDA0001967223830001022
于500mL烧瓶中加入Fmoc-Glu-OtBu(6.23g，14.65mmoL)，GFLG-PCB(8.6g，10.46mmoL，即19-60)，PyAOP(8.2g，15.7mmoL)后用DMF(40mL)溶解，置于-5℃低温恒温浴中，0.5小时滴加TMP(1.38mL，10.46mmoL)，搅拌反应。反应结束，向反应液中加入甲基叔丁基醚(150mL)正己烷(100mL)沉降，反复沉降三次得粉末，抽滤，将滤饼用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加硅胶粉(25g)，蒸干，干法上样，柱层析。用2％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集产品点，浓缩蒸干，放入真空干燥箱烘干得产品5.9g。
19-71
Figure BDA0001967223830001023
向19-66(7.3g，5.93mmoL)中加入二氯甲烷(30mL)溶解后加入TFA(6.61mL，89mmoL)，搅拌反应。反应结束，向反应液中加入甲基叔丁基醚(150mL)和正己烷(100mL)沉降，反复沉降三次得粉末，抽滤，将滤饼用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加硅胶粉(25g)，蒸干，干法上样，柱层析。用2％－5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，收集产品点，浓缩蒸干，放入真空干燥箱烘干得产品6.1g。
MALDI-TOF MS:[M+H+]1173.65,[M+Na+]1195.59
19-62
Figure BDA0001967223830001031
取19-71(1.3g，1.1105mmoL)溶解于500mL烧瓶中，用DMF(20mL)溶解后依次加入GFLG-SB7(0.9g，1.0095mmoL)，HOBT(0.2046g，1.5143mmoL)，HBTU(0.5743，1.5143mmoL)，置于-5℃低温恒温浴中，0.5小时后滴加DIEA(0.7508mL，4.5428mmoL)，2小时后置于常温下反应，次日补加HOBT(0.1023g)，HBTU(0.2871g)，DIEA(0.38mL)。反应结束，向反应液中加入甲基叔丁基醚沉降(300mL)，抽滤，收集滤饼，放入真空干燥箱烘干得产品干燥得产品2.6g，产率100％。
19-68
Figure BDA0001967223830001032
用DMF(20mL)19-62(1.2295mmoL)后加入吗啉(2.638mL，20.285mmoL)，搅拌反应。反应结束，向反应液中加入甲基叔丁基醚(300mL×3)。沉降完毕后抽滤，将滤饼用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加硅胶粉(10g)，蒸干，干法上样，柱层析，用1％氨水:3％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集产品点，浓缩蒸干，放入真空干燥箱烘干得产品2.1g，产率100％。
19-70
Figure BDA0001967223830001041
向19-68(1.0095mmoL)中加入DMF(20mL)后置于-5℃低温恒温浴中，依次加入Fmoc-Glu-OtBu(0.6013g，1.4133mmoL)、HOBT(0.2046g，1.5143mmoL)、HBTU(0.5743，15143mmoL)，0.5小时后滴加DIEA(0.7508mL，4.5428mmoL)，2小时后置于常温下反应。反应结束，向反应液中加入甲基叔丁基醚至析出固体，抽滤，将滤饼用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加硅胶粉(10g)，蒸干，干法上样，柱层)。用1％氨水:3％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集产品点，浓缩蒸干，放入真空干燥箱烘干得产品1.9g，产率83.3％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.12(s,2H),8.95(s,2H),8.10–8.03(m,7H),7.91-7.80(m,5H),7.69-7.55(m,4H),7.41(s,4H),7.35–7.28(m,4H),7.22(s,11H),4.06–3.97(m,6H),3.88(s,3H),3.66-3.39(m,11H),3.16(m,9H),3.06–2.99(m,4H),2.42(s,4H),2.31(s,7H),2.28-2.19(m,5H),2.15–2.09(m,3H),1.99(s,5H),1.63–1.55(m,5H),1.50-1.41(m,7H),1.35(s,9H),1.19(s,1H),1.17(s,2H),1.15(s,1H),1.07-0.91(m,4H),0.90–0.77(m,17H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]2259.78,[M+Na+]2281.78.
19-74
Figure BDA0001967223830001042
用DMF(20mL)溶解19-70(1.9g，0.8407mmoL)后加入吗啉(2.1970mL，25.2205mmoL)，搅拌反应。反应结束，向反应液中加入甲基叔丁基醚至析出固体，抽滤，收集滤饼，浓缩蒸干，放入真空干燥箱烘干得产品，产率88.2％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,2H),8.96(s,2H),8.22–7.76(m,18H),7.52-728.(m,4H),7.19-559(m,14H),5.03-4.53(m,3H),4.35(s,2H),4.26–4.19(m,2H),4.16–4.08(m,2H),4.00(s,2H),3.82-.29(m,10H),3.17-2.91(m,7H),2.89(s,4H),2.71-2.59(m,7H),2.42(s,3H),2.31(s,5H),2.13(s,2H),1.90–1.74(m,8H),1.62–1.46(m,10H),1.38(s,9H),0.93–0.80(m,15H),0.51(s,3H).图14为化合物19-74的1H-NMR谱图。
MALDI-TOF MS:[M+H+]2037.81,[M+Na+]2059.87.
19-76
Figure BDA0001967223830001051
向19-74(1.5g，0.7361mmoL)中加入DMF(20mL)后置于-5℃低温恒温浴中，依次加入Boc-GFLG-OH(自制，1.0305mmoL)，HOBT(0.1492g，1.1042mmoL)，HBTU(0.5658g，1.1042mmoL)，0.5小时后滴加DIEA(0.55mL，3.3145mmoL),2小时后置于常温下反应。反应结束，向反应液中加入甲基叔丁基醚至析出固体，抽滤，收集滤饼，浓缩蒸干，放入真空干燥箱烘干得产品1.5g，产率83％。
19-77
Figure BDA0001967223830001052
向19-76(1.5g，0.5937mmoL)中加入二氯甲烷(20mL)溶解后加入TFA(1.7639mL，23.7491mmoL)，搅拌反应。反应结束，向反应液中加入正己烷沉降，静置10分钟，倾倒出上清液，加少量乙酸乙酯超声，加正己烷沉降，反复沉降至有固体析出。沉降完毕后抽滤，收集滤饼，浓缩蒸干，放入真空干燥箱烘干得产品1.7g，产率100％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.98(s,2H),8.32-8.16(m,2H),8.13-7.92(m,10H),7.89(s,6H),7.54-7.36(m,2H),7.29–7.12(m,28H),3.9 9-2.23(m,49H),2.43(s,4H),2.32(s,6H),1.63–1.54(m,6H),1.49-1.30(m,8H),1.25-1.03(m,3H),0.93–0.77(m,27H).图15为化合物19-77的1H-NMR谱图。
MALDI-TOF MS:[M+H+]2312.26,[M+Na+]2334.75.
19-78
Figure BDA0001967223830001061
用DMF(20mL)溶解19-77(1g，0.421mmoL)，滴加DIEA(0.3627mL，2.1944mmoL),用二氯甲烷(20mL)溶解4AMR-SCM-40K(3.5405g，0.0844mmoL)，分别加入到250mL烧瓶中，搅拌反应。反应结束，向反应液中加入甲基叔丁基醚至析出固体，抽滤，将滤饼用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加硅胶粉(10g)，柱层析。用8％－20％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，收集产品点，浓缩蒸干，放入真空干燥箱烘干得产品2.6g，产率60％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.53(s,7H),10.15(s,10H),8.96(s,11H),8.16(s,18H),8.12-8.01(m,29H),7.97-7.93(m,19H),7.89-7.82(m,11H),7.80–7.72(m,14H),7.53-7.30(m,26H),7.25–7.18(m,49H),6.98-6.96(m,9H),6.67-4.83(m,4H),4.57-4.54(m,13H),4.32-4.16(m,12H),4.10-3.99(m,16H),3.889-3.86(m,14H),3.78–3.74(m,28H),3.71–3.39(m,2839H),3.16–3.09(m,16H),3.06-3.01(m,4H),3.00(s,3H),2.93-2.86(m,25H),2.76-2.71(m,27H),2.67-2.64(s,5H),2.59-2.54(m,9H),2.44-2.41(m,8H),2.39-2.26(m,17H),2.24-2.21(s,6H),2.18-2.16(s,5H),2.00-1.69(m,12H),1.63-1.51(m,17H),1.47-1.43(m,17H),1.35(s,2H),1.34-1.32(m,9H),1.30-1.28(m,3H),1.27-1.26(s,16H),1.25–1.20(m,41H),0.96-0.82(m,72H).图16为化合物19-78的1H-NMR谱图。
MALDI-TOF MS:从50565.51到51768.44
19-80
Figure BDA0001967223830001062
用DMF(30mL)溶解19-78(2.6g，0.051mmoL)后置于-5℃低温恒温浴中，依次加入PEG-2K·HCl(0.8314g，0.4080mmoL，购于键凯)，HOBT(0.0413g，0.3060mmoL)，HBTU(0.1161g，0.3060mmoL)，0.5小时后滴加DIEA(0.219mL，1.326mmoL)，2小时后置于常温下反应。反应结束，向反应液中加入甲基叔丁基醚至析出固体，抽滤，将滤饼用混合溶剂(甲醇20％/二氯甲烷，200mL)溶解后加硅胶粉(10g)，柱层析。用8％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集产品点，浓缩蒸干，放入真空干燥箱烘干得产品1.9g，产率63.3％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.99-8.96(m,22H),8.11-8.09(m,22H),7.89-7.85(m,25H),7.50-7.48(m,43H),7.35-7.30(m,27H),7.21-7.13(m,66H),3.50-3.42(m,4513H),2.91-2.88(m,105H),2.75–2.64(m,43H),2.35-2.34(m,32H),2.19-2.15(m,35H),1.66-1.25(m,118H),0.90-0.83(m,72H).图17为化合物19-80的1H-NMR谱图。
MALDI-TOF MS:从55413.56到59721.74
实施例15化合物20-101的合成
16-150
Figure BDA0001967223830001071
称取反应物Boc-LC-E[E(OBn)2]2(自制1.0251g，1.0138mmoL)投入微型反应釜中，加入10％Pd/C(150mg)，加DMF溶解，抽真空，通入H2,反复操作三次。搅拌反应。反应结束，用硅藻土作为滤饼，抽滤反应液，除去Pd/C，再用DMF清洗3-4遍硅藻土得产品的DMF溶液，投下一步反应。
16-151
Figure BDA0001967223830001072
称取GFLG-PCB(4g，4.8664mmoL)、HBTU(2.3068g,6.0828mmoL)、HOBT(0.8219g,6.0828mmoL)投入500mL反应瓶中，加16-150的DMF溶液中溶解，超声使反应物完全溶解，-5℃搅拌30分钟，缓慢滴加DIEA(3mL，18.2484mmoL)低温搅拌2小时后，放在室温下反应至结束。次日，反应液中已有产品析出，在反应液中加去离子水(1L)，抽滤，由于产品二氯甲烷与甲醇混合溶解无法溶解，所以多次加乙酸乙酯超声(30mL)，正己烷沉降(100mL)，除去部分杂质得产品4.5g，超产0.6g,直接投下一步反应。
16-153
Figure BDA0001967223830001081
称取16-151(3.9g,1.0138mmoL)投入500mL反应瓶中。加二氯甲烷，与TFA(2.6mL，30.141mmoL)，超声使产品溶解，用磨口玻璃塞，搅拌反应。反应结束，先将反应液蒸干，加乙酸乙酯(20mL)超声，加正己烷沉降(200mL)，倾倒，反复溶解，沉降三次。抽滤得粉末产品。只加乙酸乙酯(100mL)，超声成均相，抽滤，滤液中为杂质。得产品5.8g，超产2g。
16-155
Figure BDA0001967223830001082
称取Fmoc-GLu-(OtBu)(0.6039g,1.4193mmoL)、16-153(3.8g,1.0138mmoL)、HBTU(0.5767g,1.5207mmoL)、HOBT(0.2053g,1.5207mmoL)投入500mL反应瓶中，加DMF溶解，超声，最终为均相，置于0℃，30分钟后，缓慢滴加DIEA(1.2mL，6.8432mmoL)低温反应至结束。次日点TLC，未反应完，补加Fmoc-GLu-(OtBu)、HOBT、HBTU各为投料的20％，再加DMSO直到反应物完全溶解。第三天，反应结束，在反应液中加去离子水(1L)，产品析出，抽滤，固体加乙酸乙酯(200mL)，超声成均相，加正己烷(500mL)，抽滤得最终产品4.3g，超产0.07g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,3H),8.95(s,3H),8.29–7.78(m,27H),7.71(s,4H),7.45(m,6H),7.18(m,20H),4.57(s,2H),4.21(s,7H),3.95(m,8H),3.61(s,24H),3.10(m,29H),2.89(s,5H),2.73(s,6H),2.54(s,47H),2.41(s,13H),2.30(s,13H),1.82(m,21H),1.58(s,18H),1.38(m,7H),0.85(m,24H).
16-165
Figure BDA0001967223830001091
称取16-155(4.3g，1.0302mmoL)投入500mL反应瓶中，加二氯甲烷(10mL)溶解，加入TFA(2.2956mL，30.9072mmoL)用磨口玻璃塞，搅拌反应。反应结束，先将反应液蒸干，除去二氯甲烷，再加乙酸乙酯(20mL)溶解，加正己烷沉降成固体产品，抽滤，继续加乙酸乙酯(80mL)，超声成均相，抽滤得产品4g，产率95％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,4H),8.97(s,4H),8.48–7.57(m,38H),7.40(s,3H),7.33–6.98(m,21H),4.57(s,19H),4.14(m56.4Hz,5H),4.05(m22.2Hz,14H),3.61(s,24H),3.39(s,1H),3.19(m15.2Hz,17H),3.05–2.69(m,10H),2.27(m43.1Hz,34H),1.99(s,4H),1.91(s,7H),1.78(s,11H),1.54(m34.4Hz,19H),1.16(m6.6Hz,3H),0.84(m18.2Hz,24H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]4116.24,[M+Na+]4138.52.
20-84
Figure BDA0001967223830001092
称取16-165(4g，0.9714mmoL)、GFLG-SB7(0.9525g，1.0685mmoL)、HOBT(0.1968g，1.4571mmoL)、HBTU(0.5525g，4.3714mmoL)，加入DMSO溶液(100mL)，置于低温恒温浴中(-5℃),搅拌30分钟后，滴加DIEA(0.7225mL，47.992mmoL)，低温反应两小时后，常温搅拌反应。反应结束，反应液倒入去离子水中(400mL)，产物析出。抽滤，滤饼加甲基叔丁基醚(70mL)清洗一次。然后滤饼加入乙酸乙酯(30mL)，超声成均相，再加入正己烷(150mL)。沉降为粉末。再次抽滤，固体用真空干燥箱干燥得产品4.9g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,4H),8.90(s,4H),8.43–8.25(m,0H),8.08(s,23H),7.83(s,12H),7.62(s,3H),7.47(s,7H),7.37–7.30(m,2H),7.24(s,3H),7.17(s,25H),7.10(s,8H),5.84–5.74(m,4H),4.53(s,4H),4.32(s,5H),4.17(s,5H),3.97(s,9H),3.85(s,2H),3.57(s,31H),3.47(s,3H),2.72(s,3H),2.69(s,2H),2.67(s,1H),2.65(s,1H),2.37(s,15H),2.33(s,2H),2.26(s,17H),2.19(s,11H),2.09(s,9H),1.78(s,30H),1.50(s,28H),1.24–1.18(m,1H),1.06(s,9H),0.87(s,4H),0.80(s,30H),0.46(s,2H)
MALDI-TOF MS:[M+H+]4988.58,[M+Na+]5010.27
20-85
Figure BDA0001967223830001101
称取20-84(4.9g)置于500mL烧瓶中，加入DMSO溶液(80mL)，加入吗啉(2.35mL29.142mmoL)，常温搅拌反应，每隔0.5小时点TLC。2小时后反应结束。反应液加甲基叔丁基醚沉降，下层为油状液体，上层为浑浊液体。将油状液体及沉降所得浑浊液体倒入400mL去离子水中，析出黄色固体。抽滤，滤饼加甲基叔丁基醚(70mL)清洗一次。然后滤饼加入乙酸乙酯(30mL)，超声成均相，再加入正己烷(150mL)。沉降为粉末。再次抽滤，固体用真空干燥箱干燥得产品3.6g。产率78％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.25(s,3H),8.95(s,3H),8.56(s,0H),8.12(s,25H),7.85(s,8H),7.55(s,6H),7.18(s,34H),5.81(s,4H),4.57(s,5H),3.61(s,38H),3.24–3.10(m,27H),3.02(s,8H),2.89(s,4H),2.70(s,17H),2.42(s,16H),2.31(s,35H),1.83(s,27H),1.54(s,24H),1.23(s,2H),0.85(m,30H),0.51(s,2H).MALDI-TOF MS:[M+H+]4766.74,[M+Na+]4788.82
20-86
Figure BDA0001967223830001102
称取Fmoc-Glu-OtBu(0.38g，0.9032mmoL)、20-85(3.6g，0.7526mmoL)、HOBT(0.1525g，1.1289mmoL)、HBTU(0.4281g，1.1289mmoL)，加入DMSO溶液(100mL)，滴加DIEA(0.55mL，3.3867mmoL)，常温搅拌反应。反应结束，将反应液倒入去离子水中(400mL)，产物析出。抽滤，滤饼加甲基叔丁基醚(70mL)清洗一次。然后滤饼加入乙酸乙酯(30mL)，超声成均相，再加入正己烷(150mL)。沉降为粉末。再次抽滤，滤液点TLC有大量杂质和极少量产品，固体用真空干燥箱干燥投下一步。
20-88
Figure BDA0001967223830001111
称20-86(0.7526mmoL)置于500mL烧瓶中，加DMSO溶液(100mL)，加入吗啉(1.96mL22.578mmoL)，常温搅拌反应，每隔0.5小时点TLC。1.5小时后，反应结束。反应液倒入去离子水(400mL)中，析出黄色固体。抽滤，滤饼加甲基叔丁基醚(70mL)清洗一次。然后滤饼加入乙酸乙酯(30mL)，超声成均相，再加入正己烷(150mL)。沉降为粉末。再次抽滤，固体用真空干燥箱干燥得产品3.8，超产0.1g。
20-91
Figure BDA0001967223830001112
Boc-GFLG-OH(0.9783mmoL)、20-88(0.7526mmoL)、HOBT(0.1525g，1.1289mmoL)、HBTU(0.4281g，1.1289mmoL)，加入DMSO溶液(100mL)，滴加DIEA(0.55mL，3.3867mmoL)，常温搅拌反应。反应结束，反应液倒入400mL去离子水中，产物析出。抽滤，滤饼加甲基叔丁基醚(70mL)清洗一次。然后滤饼加入乙酸乙酯(30mL)，超声成均相，再加入正己烷(150mL)。沉降为粉，抽滤，固体用真空干燥箱干燥得4g，产率100％。
20-94
Figure BDA0001967223830001113
称20-91(4g,0.7526mmoL)放入250mL烧瓶中，加入二氯甲烷(10mL)，加TFA(3mL,44.578mmoL)，超声溶解，常温搅拌反应。反应结束，反应液蒸干浓缩，浓缩至少量时，加入甲基叔丁基醚(100mL)，超声，再加入正己烷(200mL)沉出粉末，抽滤，滤饼用甲醇与二氯甲烷溶解加硅胶粉(15g)。干法上样，柱层析。柱高9cm，用1％氨水:6％甲醇/二氯甲烷洗脱。得纯品1.5g，产率38％。
20-98
Figure BDA0001967223830001121
称20-94(1.5g)，置于250mL烧瓶中，DMF(90mL)溶解，滴加DIEA(0.2mL)。放入4ARM-SCM-40K(1.65g，0.0395mmoL)加入二氯甲烷(5mL)溶解，置于常温下避光反应，低速搅拌。反应结束后，在锥形瓶中加入甲基叔丁基醚(150mL)，反应液倒入其中，再加入正己烷(200mL)。产物析出。抽滤。柱层析。柱高5cm，洗脱剂1％氨水:6％甲醇/二氯甲烷洗脱得产品1.3g，产率36％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.39-10.20(m,6H),8.94-8.90(m,2H),8.19-8.10(m,35H),8.06-8.01(m,45H),7.92–7.79(m,19H),7.65–7.47(m,7H),7.27-7.25(m,178H),7.14-7.12(m,27H),7.08-7.04(m,36H),6.95-6.90(m,6H),5.94–5.78(m,-6H),4.56-4.52(m,28H),4.36-4.32(m,53H),4.16-4.12(m,47H),3.98-3.90(m,125H),3.31-3.28(m,127H),3.22–3.08(m,42H),3.00-2.96(m,2H),2.76-2.72(m,9H),2.63-2.60(m,24H),2.42-2.40(m,44H),2.28-2.24(m,53H),2.11-2.06(m,16H),2.02–1.73(m,39H),1.58-1.54(m,28H),1.49-1.44(m,28H),1.33-1.32(m,9H),1.30-1.28(m,8H),1.27-1.26(m,23H),1.25-1.24(m,57H),1.23-1.20(m,110H),0.88-0.84(m,120H).图18为化合物20-98的1H-NMR谱图。MALDI-TOF MS:从62548.84到62780.18
20-101
Figure BDA0001967223830001122
称取PEG-3K(0.38g，0.1246mmoL)、20-98(1.3g,0.0207mmoL)、HOBT(0.016g，0.1246mmoL)、HBTU(0.047g，0.1246mmoL)，置于500mL烧瓶中，加入DMF溶液(100mL)，置于低温恒温浴中，30分钟后滴加DIEA(2mL)，1小时后取出常温低速搅拌反应。避光。反应结束后，点TLC无明显产物点。在锥形瓶中加入150mL甲基叔丁基醚，反应液倒入其中，再加入正己烷(200mL)，析出，抽滤。固体干法上样，柱层析。柱高5cm，用1％氨水:4％-10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，蒸干后，加入无水乙醇(10mL)，超声成均相，加入正己烷(100mL)，抽滤。反复溶解、沉降三次。得产品1g，产率66.66％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.14-10.10(m,10H),8.98-8.91(m,12H),8.20-8.16(m,35H),8.07-8.00(m,59H),7.98-7.91(m,10H),7.88-7.82(m,25H),7.69-7.60(m,20H),7.55–7.34(m,17H),7.19-7.11(m,170H),5.82-5.77(m,6H),3.67-3.60(m,258H),3.32-3.29(m,2587H),3.24-3.20(m,30H),3.15-3.13(m,39H),2.89-2.81(m,58H),2.73-2.20(m,28H),2.69-2.67(m,20H),2.66-2.62(m,5H),2.41-2.39(m,81H),2.33-2.30(m,17H),2.30-2.26(m,66H),2.23-2.20(m,34H),2.12-2.10(m,15H),1.81-1.78(m,66H),1.53-1.50(m,82H),0.88–0.81(m,120H).图19为化合物20-101的1H-NMR谱图。MALDI-TOF MS:从74522.05到74732.71
实施例16化合物23-143的合成
10-90
Figure BDA0001967223830001131
将Glu(OBn)2.TsOH(10g,20.02mmol，商购)、Boc-Glu(OH)-OBn(7.43g,22.02mmol，商购)、HBTU(11.39g,30.03mmol)和HOBT(4.06g,30.03mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(150mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(14.89mL,90.09mmol)，滴加完毕后低温下反应2.5小时，然后将反应装置转移到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠(200mL)清洗DMF，用乙酸乙酯萃取水相中的产物，萃取3次(150mL×3)，合并有机相再用无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产物14.7g，投下一步去保护反应。
10-91
Figure BDA0001967223830001132
将10-90(12.95g,20.02mmol)置于500mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(100mL)溶解，然后加入TFA(22.03mL,300.3mmol)室温下搅拌反应过夜，反应停止，将反应液减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠(200mL)中和TFA，用乙酸乙酯萃取水相中的产物，萃取3次(150mL×3)，合并有机相再用无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产物11.8g。
10-96
Figure BDA0001967223830001141
将10-91(10.94g,20.02mmol)、21-130(4.8g,18.2mmol，即15-49)、HBTU(20.7g,54.6mmol)和HOBT(7.4g,54.6mmol)置于1000mL圆底烧瓶中然后加入DMF(150mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(13.5mL,81.9mmol)，滴加完毕后低温下反应2.5小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠(200mL)清洗DMF，用乙酸乙酯萃取水相中的产物，萃取3次(150mL×3)，合并有机相再用无水硫酸钠除水，抽滤，浓缩，干法上样，柱层析，用50％乙酸乙酯/50％石油醚洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品10.8g，产率75.0％。
10-42
Figure BDA0001967223830001142
将原料Boc-GFLG-OBn(13.54g,23.244mmol)、10％的Pd/C催化剂(200mg)加入到氢化反应装置中，然后加入DMF(45mL)使其溶解，并使溶剂没过搅拌子，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟—充氢气—抽氢气—充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为18Psi，然后在常温下过夜反应。于第二日通过TLC点板发现反应完成后进行后处理，取出反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的抽滤漏斗，用DMF(90mL)清洗反应装置，直至反应器被清洗干净不含产物为止，得到10-42的反应产物。
10-43
Figure BDA0001967223830001143
将10-42产物Boc-GFLG-OH(23.24mmol)、Palbociclib(8g,17.88mmol,简称PCB)、HBTU(10.17g,26.82mmol)和HOBT(3.6g,26.82mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(90mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(13.3mL,80.46mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，将反应液转移到1000mL的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)，用乙酸乙酯萃取三次(200mL×3)，合并有机相，再用饱和碳酸氢钠(100mL)清洗一次，然后用饱和氯化钠(100mL)除水后将有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品16.48g，投下一步反应。
10-44
Figure BDA0001967223830001151
将10-43(16.48g,17.88mmol)于500mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(100mL)溶解，然后加入TFA(18.67mL,251.37mmol)室温下搅拌反应过夜。反应停止，将反应液减压浓缩蒸干，然后加入适量乙酸乙酯溶解，转移到500mL的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(100mL)中和剩余的TFA，中和结束后分离有机相，用乙酸乙酯萃取水相中的产物，萃取3次(150mL×3)，合并有机相再用无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，干法上样，柱层析，用4％甲醇/1％氨水/二氯甲烷洗脱，收集产品，浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产物15.4g。
23-102
Figure BDA0001967223830001152
将原料10-96(1.46g,1.84mmol)、10％的Pd/C催化剂(100mg)加入到氢化反应装置中，然后加入DMF(50mL)使其溶解，并使溶剂没过搅拌子，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟—充氢气—抽氢气—充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为18Psi，然后在常温下过夜反应。于第二日通过TLC点板发现反应完成后进行后处理，取出反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的抽滤漏斗，用DMF(10mL×3)清洗反应装置，直至反应器被清洗干净不含产物为止，得到反应产物，投下一步反应。
23-103
Figure BDA0001967223830001153
将23-102(1.84mmol)、10-44(5.0g,6.08mmol)、HBTU(3.15g,8.30mmol)和HOBT(1.12g,8.30mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(150mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(4.12mL,24.90mmol)，滴加完毕后低温下反应2.5小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，先加入正己烷(100mL)沉降，倾倒上清液，再加入甲基叔丁基醚(300mL)沉降，倾倒上清液，重复2次，过滤得到固体产物，用正己烷(100mL)清洗2次后，将滤饼放入真空箱中干燥，得到产物5.4g，产率100％。
23-109
Figure BDA0001967223830001161
将23-103(5.4g,1.84mmol)置于500mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(50mL)溶解，然后加入TFA(2.06mL,27.6mmol)室温下搅拌反应过夜，反应停止，将反应液减压浓缩，加入正己烷(150mL×3)沉降三次，再加入甲基叔丁基醚(250mL×3)沉降三次，抽干，干法上样，柱层析，用6％甲醇/1％氨水/二氯甲烷洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品3.20g。
10-65
Figure BDA0001967223830001162
将原料Boc-GFLG-OBn(6.30g,10.80mmol)、10％的Pd/C催化剂(100mg)加入到氢化反应装置中，然后加入DMF(30mL)使其溶解，并使溶剂没过搅拌子，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟—充氢气—抽氢气—充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为18Psi，然后在常温下过夜反应。于第二日通过TLC点板发现反应完成后进行后处理，取出反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的抽滤漏斗，用DMF(20mL×3)清洗反应装置三次，直至反应器被清洗干净不含产物为止，得到10-65的反应产物。
10-66
Figure BDA0001967223830001163
将物质10-65(5.33g,10.80mmol)、SB-743921(4.00g,7.74mmol,简称SB7)、HOBT(1.70g,12.58mmol)和HBTU(4.66g,12.29mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(170mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(5.80mL,35.09mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，将反应液用饱和氯化钠(300mL)清洗DMF，再用乙酸乙酯(200mL)萃取三次，合并有机相，旋蒸浓缩至100mL，再用无水硫酸钠除水，抽滤，将滤液蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品7.68g。
10-67
Figure BDA0001967223830001171
将10-66(7.68g,7.74mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入二氯甲烷(40mL)，使其溶解，将混合液常温条件下搅拌。然后滴加TFA(9.00mL,67.32mmol)，滴加完毕后常温下反应2小时。反应结束后，将反应液蒸干，再用乙酸乙酯(200mL)溶解后加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)中和剩余的TFA，再用乙酸乙酯萃取三次(200×3mL)，合并有机相，浓缩至100mL，再用无水硫酸钠除水，抽滤，将滤液蒸干，干法上柱，柱层析，用3％甲醇/1％氨水/二氯甲烷洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品3.20g。
23-107
Figure BDA0001967223830001172
将Fmoc-Glu-OtBu(0.8g,1.89mmol)、10-67(1.2g,1.35mmol)、HBTU(0.77g,2.02mmol)和HOBT(0.28g,2.02mmol)置于500mL圆底烧瓶中，然后加入DMF(100mL)使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(1.00mL,6.06mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置转移到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，加入饱和氯化钠(100mL)清洗DMF，用乙酸乙酯萃取水相中的产物，萃取3次(150mL×3)，合并有机相再用无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产物1.75g，产率100％。
23-111
Figure BDA0001967223830001173
将23-107(1.75g,1.35mmol)置于500mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(50mL)溶解，然后加入TFA(1.5mL,20.25mmol)室温下搅拌反应过夜，反应停止，将反应液减压浓缩，加入正己烷(150mL×3)沉降三次，倾倒上清液，再加入甲基叔丁基醚(250mL×3)沉降三次，并倾倒上清液，然后干法上样产物，柱层析，用6％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品1.3g，产率77.8％。
23-113
Figure BDA0001967223830001181
将23-111(1.1g,0.89mmol)、23-109(2.51g,0.89mmol)、HBTU(0.5g,1.33mmol)和HOBT(0.18g,1.33mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(100mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.66mL,3.98mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置转移到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，先加入正己烷(100mL)沉降，倾倒上清液，再加入甲基叔丁基醚(200mL)沉降，并倾倒上清液，重复3次，过滤，用正己烷(100mL)清洗滤饼，将滤饼放入真空箱中干燥，得到固体产物3.61g，产率100％。
23-115
Figure BDA0001967223830001182
将23-113(3.7g,0.89mmol)置于500mL的圆底烧瓶中，用DMF(80mL)溶解，然后加入吗啉(2.33mL,2.67mmol)室温下搅拌反应2小时，反应停止，加入甲基叔丁基醚(300mL)沉降，过滤，再用正己烷(150mL)清洗2次，然后将产物用甲醇(8mL)和二氯甲烷(50mL)溶解，加入硅胶粉(10g)，干法上样，柱层析，用6％甲醇/1％氨水/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品2.7g，产率79.4％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,3H),8.95(s,3H),8.51(s,1H),8.27-8.07(m,17H),7.98-7.85(m,10H),7.55-7.52(m,5H),7.23-7.10(m,28H),5.82(t,J＝16.0Hz,3H),4.59-4.54(m,4H),4.36(d,J＝8.0Hz,1H),4.06-3.97(m,5H),3.90(s,3H),3.75-3.55(m,35H),3.19-3.13(m,13H),3.05-3.00(m,5H),2.89(s,3H),2.80-2.67(m,8H),2.42(s,11H),2.31-2.23(m,12H),2.12(s,4H),1.89(s,10H),1.83-1.77(m,12H),1.62-1.49(m,22H),0.92-0.81(m,30H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]3836.21，[M+Na+]3856.06
23-119
Figure BDA0001967223830001183
将Fmoc-Glu-OtBu(0.42g,0.98mmol)、23-115(2.5g,0.652mmol)、HBTU(0.38g,0.98mmol)和HOBT(0.13g,0.98mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(100mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.49mL,2.93mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，加入甲基叔丁基醚(300mL)沉降，重复3次，过滤，将滤饼用正己烷(100mL)清洗，收集滤饼放入真空箱中干燥，得到产物3.0g，产率100％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,3H),8.95(s,3H),8.35-8.17(m,5H),8.09-8.05(m,10H),7.98-7.95(m,6H),7.89-7.87(m,8H),7.70(t,J＝20.0Hz,4H),7.55-7.48(m,5H),7.40(t,J＝16.0Hz,2H),7.33-7.15(m,30H),4.59-4.51(m,3H),4.37-4.35(m,5H),4.29-4.20(m,5H),4.01-3.90(m,10H),3.61-3.53(m,25H),3.40-3.38(m,2H),3.15(d,J＝20.0Hz,12H),3.08-3.02(m,6H),2.89(s,5H),2.80-2.67(m,8H),2.42(s,10H),2.30(s,10H),2.23(s,6H),2.12-2.10(m,4H),1.88-1.76(m,21H),1.61-1.49(m,22H),1.37(s,9H),1.26-1.24(m,2H),1.11(m,3H),0.88-0.79(m,30H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]4240.59，[M+Na+]4264.41
23-123
Figure BDA0001967223830001191
将23-119(2.98g,0.70mmol)置于500mL的圆底烧瓶中，用DMF(90mL)溶解，然后加入吗啉(1.84mL,21.1mmol)室温下搅拌反应2小时，反应停止，加入甲基叔丁基醚(300mL)沉降，析出固体产物，重复沉降3次，过滤，将滤饼用正己烷(100mL)清洗，收集滤饼，放入真空箱中干燥，得到产物2.5g，产率100％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,3H),8.95(s,3H),8.35-8.18(m,5H),8.09-8.07(m,8H),8.03-7.94(m,9H),7.89-7.82(m,7H),7.55-7.48(m,5H),7.22-7.16(m,30H),4.59-4.51(m,3H),4.37-4.35(m,4H),4.29-4.20(m,3H),4.01-3.90(m,6H),3.61-3.53(m,20H),3.18-3.13(m,14H),3.08-3.02(m,5H),2.89(s,14H),2.73-2.66(m,13H),2.42(s,9H),2.30-2.23(m,13H),2.12(s,5H),1.88-1.77(m,23H),1.58-1.50(m,23H),1.39(s,9H),1.26-1.24(m,1H),0.88-0.82(m,30H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]4023.32，[M+Na+]4040.41
23-128
Figure BDA0001967223830001192
将Boc-GFLG-OH(0.87mmol)、23-123(2.5g,0.62mmol)、HBTU(0.35g,0.93mmol)和HOBT(0.13g,0.93mmol)置于500mL圆底烧瓶中，然后加入DMF(100mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.46mL,2.80mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置转移到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，加入甲基叔丁基醚(400mL)沉降，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚清洗3次(100×3mL)，收集滤饼，放入真空箱中干燥，得到产物2.6g，产率93.3％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,3H),8.95(s,3H),8.24-8.07(m,18H),7.99-7.95(m,7H),7.88(d,J＝8.0Hz,8H),7.55-7.48(m,5H),7.22-7.15(m,34H),4.58-4.51(m,4H),4.37-4.32(m,4H),4.22-4.18(m,2H),4.06-4.00(m,8H),3.90(s,2H),3.74-3.52(m,24H),3.39(s,2H),3.18-3.13(m,8H),3.08-2.99(m,7H),2.89(s,7H),2.80-2.73(m,12H),2.42(s,10H),2.30-2.24(m,20H),2.12(s,6H),1.88-1.76(m,23H),1.58-1.49(m,22H),1.37-1.35(m,18H),1.11(s,5H),0.86-0.82(m,36H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]4493.29，[M+Na+]4516.30
23-135
Figure BDA0001967223830001201
将23-128(2.6g,0.58mmol)置于500mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(50mL)溶解，然后加入TFA(1.72mL,11.57mmol)室温下搅拌反应过夜，反应停止，将反应液减压浓缩，加入正己烷(100mL×3)沉降三次，倾倒上清液，再加入甲基叔丁基醚(300mL×3)沉降三次，过滤，滤饼用正己烷(100mL)清洗，收集滤饼，用甲醇(10mL)和二氯甲烷(60mL)溶解，加入硅胶粉(6g)，干法上样，柱层析，用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品1.20g，产率48％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.09(s,3H),8.91(s,3H),8.53(d,J＝8.0Hz,1H),8.31(d,J＝8.0Hz,1H),8.21-8.14(m,5H),8.08-8.02(m,11H),7.96-7.92(m,6H),7.86(d,J＝12.0Hz,7H),7.52-7.44(m,5H),7.21-7.17(m,28H),7.14-6.96(m,7H),4.63-4.50(m,4H),4.31-4.27(m,5H),4.21-4.14(m,3H),3.99-3.93(m,3H),3.86(s,3H),3.73-3.72(m,3H),3.58-3.50(m,22H),3.44-3.35(m,8H),3.14-3.09(m,17H),3.02-2.96(m,4H),2.86(s,1H),2.77-2.70(m,6H),2.52(s,3H),2.38(s,8H),2.27(s,12H),2.20-2.18(m,7H),2.09-2.05(m,6H),1.84-1.81(m,10H),1.74-1.73(m,12H),1.58-1.53(m,13H),1.46-1.42(m,10H),1.33-1.30(m,1H),1.23-1.19(m,4H),0.89-0.76(m,36H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]4338.95，[M+Na+]4360.27
23-139
Figure BDA0001967223830001211
将23-135(1.15g,0.265mmol)置于250mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(10mL)和DMF(100mL)溶解，然后加入DIEA(0.20mL,1.21mmol)，最后加入高分子4ARM-SCM-40K(2.50g,0.06mmol,购于键凯)，置于室温下避光、以最低搅拌速度搅拌反应4天。反应停止，将反应液减压浓缩，再加入正己烷(300mL)及甲基叔丁基醚(400mL)沉降，过滤，滤饼用正己烷(200mL)清洗3次，收集滤饼，用二氯甲烷(50mL)和甲醇(20mL)溶解，加入硅胶粉(5g)，干法上样，柱层析，用5％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品3.2g，产率91.2％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.28(m,11H),8.96(s,10H),8.25-8.17(m,16H),8.08-8.06(m,48H),7.98-7.96(m,40H),7.87-7.85(m,27H),7.79-7.77(m,2H),7.69-7.67(m,1H),7.55-7.53(m,9H),7.22-7.10(m,146H),6.98(s,4H),5.84-5.79(m,4H),4.62-4.52(m,4H),4.37-4.35(m,10H),4.23-4.18(m,14H),4.04-4.00(m,31H),4.90-4.88(m,24H),3.74-3.51(m,3693H),3.20-3.17(m,56H),3.14-3.12(m,30H),3.05-3.03(m,32H),2.90(s,82H),2.74(s,94H),2.60-2.57(m,22H),2.42(s,44H),2.31(s,47H),2.25-2.21(m,30H),2.15-2.10(m,23H),1.91-1.78(m,88H),1.60-1.50(m,92H),1.23-1.11(m,20H),0.92-0.82(m,144H).图20为化合物23-139的1H-NMR谱图。
23-143
Figure BDA0001967223830001212
将23-139(3.1g,0.053mmol)、M-NH2-2K.HCl(Lot:ZZ255p053)、(0.64g,0.32mmol,购于键凯)，HBTU(0.12g,0.32mmol)和HOBT(0.043g,0.32mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(60mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.19mL,1.16mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置转移到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，加入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(400mL)沉降，析出固体，过滤，滤饼用正己烷(100mL)清洗3次，收集滤饼，用二氯甲烷(100mL)和甲醇(20mL)溶解，加入硅胶粉(10g)，干法上样，柱层析，用5％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品2.2g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,12H),8.95(s,10H),8.28-8.24(m,2H),8.18-8.16(m,18H),8.12-8.06(m,46H),7.98-7.95(m,36H),7.89-7.87(m,25H),7.78-7.75(m,2H),7.68-7.66(m,2H),7.55-7.48(m,16H),7.21-7.15(m,146H),5.84-5.79(m,6H),4.60-4.50(m,13H),4.35-4.33(m,11H),4.20-4.18(m,14H),4.06-4.00(m,24H),3.92-3.86(m,30H),3.78-3.43(m,4447H),3.24-3.13(m,83H),3.08-3.02(m,61H),2.89(s,42H),2.76-2.67(m,75H),2.42(s,47H),2.30-2.24(m,82H),2.14-2.08(m,31H),1.88-1.76(m,88H),1.58-1.49(m,92H),1.16-1.11(m,20H),0.88-0.81(m,144H).图21为化合物23-143的1H-NMR谱图。
实施例17化合物23-161的合成
16-34
Figure BDA0001967223830001221
称取2-(2-氨基乙氧基)乙醇(18.8680g,190.2226mmoL)倒入500mL圆底烧瓶中，加二氯甲烷(100mL)稀释，再加三乙胺(38.4972mL,380.4452mmoL)，搅拌条件下缓慢加入(Boc)2O(49.8261g,228.2671mmoL)，常温搅拌反应。反应结束，将反应液蒸干，再加入碳酸氢钠粉末，用二氯甲烷稀释，加硅胶粉(30g)，蒸干，干法上样，柱层析。用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品27.33g，产率70％。
16-36
Figure BDA0001967223830001222
称取16-34(27.3g,132.8144mmoL)加入500mL反应瓶中，通入氮气保护，加入叔丁醇钾的THF溶液，反应置于0℃条件下，加入溴乙酸乙酯(17.6265mL,159.3773mmoL)，搅拌三小时后，移至室温反应。反应结束，先将反应液蒸干，再加入去离子水与乙酸乙酯，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取至没有产品，合并有机相，用无水硫酸钠粉末干燥，抽滤，滤液干法上样，柱层析。用30％-100％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品20g，产率52％。
15-49
Figure BDA0001967223830001223
称取16-36(8.8g,30.2053mmoL)放入250mL反应瓶中，加1,4-二氧六环，搅拌条件下加入氢氧化锂(1.5922g,66.4516mmoL)，30分钟后加入去离子水至澄清。反应结束，用甲基叔丁基醚：正己烷＝1:1萃取反应液3次(100mL×3)。水相用浓盐酸调至PH＝1，用乙酸乙酯萃取三次(300mL×3)，合并乙酸乙酯相，用饱和氯化钠溶解清洗3次(100mL×3)，浓缩，干法上样，柱层析，用40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品6.0g，产率75％。
3-163
Figure BDA0001967223830001231
称取Boc-Glu-(OH)2(6g,24.2669mmoL)、Glu(OBn)2(25.4588g，50.9605mmoL)、HBUT(27.6089g,72.8007mmoL)、HOBT(9.8368g,72.8007mmoL)放入1L反应瓶中，加入DMF(100mL)溶解，在-5℃条件下搅拌30分钟后，滴加DIEA(40mL,242.669mmoL)，低温搅拌2小时后，将反应移至室温反应。反应结束，将反应液倒入1L分液漏斗中，加饱和碳酸氢钠溶液(400mL)，乙酸乙酯(300mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)，合并有机相，用去离子水清洗3次(200mL×3)，浓缩，干法上样，柱层析。用60％-70％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品25.0g，超产4.0g。
3-165
Figure BDA0001967223830001232
称取3-163(47.4g，54.7369mmoL)，加入二氯甲烷50mL，加TFA(60mL,821.0541mmoL)超声溶解，用磨口玻璃塞，常温搅拌反应。反应结束，将反应液移至2L分液漏斗中，加饱和碳酸氢钠溶液(600mL)乙酸乙酯(500mL)分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)合并有机相，用去离子水清洗1次(300mL)，浓缩，蒸干，干法上样，柱层析。用5％甲醇/1％氨水/二氯甲烷洗脱，浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品34g，产率83％。
16-148
Figure BDA0001967223830001233
称取15-49(9g,24.7736mmoL)、3-165(17.2481g,22.5215mmoL)、HBUT(11.9575g,31.5301mmoL)、HOBT(4.2603g,31.5301mmoL)放入500mL反应瓶中，加入DMF(200mL)溶解，在-5℃条件下搅拌30分钟后，滴加DIEA(17mL,101.3468mmoL)，低温搅拌2小时后，将反应移至室温反应。反应结束，将反应液移至2L分液漏斗中，加饱和碳酸氢钠溶液(600mL)和乙酸乙酯(500mL)分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)合并有机相，用去离子水清洗1次(300mL)，浓缩，蒸干，干法上样，柱层析。用60％的乙酸乙酯/石油醚洗脱，浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品12.5g，产率56％。
9-98
Figure BDA0001967223830001241
取16-148(2g,1.978mmoL)，加入二氯甲烷(10mL)，待部分溶解后，再加入TFA(4.4075mL，59.340mmoL)，超声使完全溶解，用磨口玻璃塞，常温搅拌。经TLC检测，磷钼酸显色，停止反应，将反应液蒸干，除去二氯甲烷，再用乙酸乙酯(200mL)溶解，加饱和碳酸氢钠溶液至水相显碱性，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取，直至水相无产品，合并有机相，再用饱和食盐水清洗3次(100mL×3)，浓缩蒸干，柱层析。柱高5cm，用1％氨水/3％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产物1.8g，产率99.9％。
9-100
Figure BDA0001967223830001242
取反应物Fmoc-Glu-OtBu(1.1769g，2.7682mmoL)投入250mL反应瓶中，加入少量DMF溶解，置于0℃，再加入9-98(1.8g，1.9758mmoL)与PyAOP(1.4433g，2.7682mmoL)，搅拌0.5小时，缓慢滴加TMP(0.2602mL，1.9758mmoL)低温搅拌至反应结束。反应结束，加饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)，水相中无产品，合并有机相，用饱和食盐水清洗3次(200mL×3)，浓缩，干法上样，柱层析。用2％甲醇/二氯甲烷洗脱，浓缩蒸干，放入真空箱中干燥，得到产物2.8g，超产0.2g。
9-102
Figure BDA0001967223830001251
取反应物9-100(理论，1.9758mmoL)放入250mL圆底烧瓶中，加入适量DMF溶解，再加入吗啉(5.1639mL，59.274mmoL)常温搅拌，每隔0.5小时点TLC板。1小时后，反应结束。加饱和碳酸氢钠溶液(200mL)和乙酸乙酯(300mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取直至水相中无产品，合并有机相，用饱和食盐水清洗，浓缩蒸干，干法上样，柱层析，用1％-5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得产品1.8g，产率83.106％。
9-103
Figure BDA0001967223830001252
称取9-102(1.8g，1.6420mmoL)，加入3-30(理论值，2.2988mmoL),HBTU(84.3030g，222.2946mmoL)、HOBT(30.0387g，222.2946mmoL)置于圆底烧瓶中，加入DMF(50mL)，使其溶解，置于-5℃条件搅拌0.5小时后缓慢滴加DIEA(132.2681mL，800.2606mmoL)，反应2小时后，置于室温下搅拌过夜反应。反应结束，加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)和乙酸乙酯(300mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取直至有机相中无产品，合并有机相，用饱和食盐水清洗，浓缩蒸干，干法上样，柱层析，用3％甲醇/二氯甲烷洗脱，浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得产品1.8g，产率72％。
MALDI-TOF MS:[M+H+]1570.36,[M+Na+]1592.52.
23-145
Figure BDA0001967223830001253
将原料9-102(0.43g,0.28mmol)、10％的Pd/C催化剂(100mg)加入到氢化反应装置中，然后加入DMF(30mL)使其溶解，并使溶剂没过搅拌子，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟—充氢气—抽氢气—充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为18Psi，然后在常温下过夜反应。于第二日通过TLC点板发现反应完成后进行后处理，取出反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的抽滤漏斗，用DMF(10mL×3)清洗反应装置，直至反应器被清洗干净不含产物为止，得到反应产物，投下一步反应。
23-146
Figure BDA0001967223830001261
将23-145(0.28mmol)、GFLG-PCB(1g,1.22mmol)、HBTU(0.63g,1.65mmol)和HOBT(0.23g,1.65mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(100mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.82mL,4.98mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，加入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(400mL)沉降，析出固体，过滤，将滤饼用正己烷(100mL)清洗，收集滤饼，放入真空箱中干燥，得到产物1.5g，超重0.28g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,3H),8.96-8.95(m,3H),8.45(d,J＝8.0Hz,1H),8.35(d,J＝8.0Hz,1H),8.18-8.17(m,4H),8.13-8.03(m,12H),7.99-7.95(m,6H),7.89-7.83(m,9H),7.74-7.66(m,6H),7.55-7.49(m,4H),7.44-7.40(m,1H),7.29-7.28(m,3H),7.21-7.14(m,17H),4.62-4.57(m,3H),4.36-4.29(m,3H),4.07-4.00(m,5H),3.89(s,1H),3.72-3.71(m,3H),3.62-3.51(m,20H),3.41(s,20H),3.18-3.13(m,12H),3.03(s,20H),2.94-2.89(m,5H),2.75-2.73(m,2H),2.69-2.64(m,7H),2.44-2.42(m,9H),2.31-2.30(m,7H),2.26-2.23(m,3H),2.14-2.13(m,2H),1.88-1.86(m,24H),1.62-1.50(m,24H),1.37-1.22(m,25H),0.91-0.82(m,30H).
23-148
Figure BDA0001967223830001262
将23-146(1.22g,0.28mmol)置于500mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(30mL)溶解，然后加入TFA(0.31mL,4.20mmol)室温下搅拌反应过夜，反应停止，将反应液减压浓缩，加入甲基叔丁基醚(300mL×3)沉降三次，过滤，将滤饼用正己烷(100mL)清洗，收集滤饼，用甲醇(10mL)和二氯甲烷(60mL)溶解，加入硅胶粉(5g)，干法上样，柱层析，用6％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品0.9g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.56(s,3H),8.97(s,3H),8.56(d,J＝8.0Hz,1H),8.36(d,J＝8.0Hz,1H),8.31-8.17(m,7H),8.11-8.03(m,11H),7.97-7.93(m,4H),7.92-7.84(m,8H),7.83-7.81(m,4H),7.74-7.69(m,5H),7.44-7.40(m,1H),7.34-7.14(m,25H),4.68-4.64(m,1H),4.62-4.56(m,3H),4.37-4.33(m,2H),4.17-4.16(m,2H),4.06-3.97(m,6H),3.90-3.87(m,3H),3.74-3.63(m,17H),3.60-3.51(m,31H),3.44-3.38(m,4H),3.20-3.15(m,8H),3.06-3.03(m,4H),2.89(s,4H),2.75-2.73(m,6H),2.43(s,10H),2.32(s,9H),2.23-2.13(m,10H),1.91-1.78(m,24H),1.59-1.50(m,24H),1.37-1.34(m,2H),1.23-1.18(m,5H),0.90-0.82(m,30H).
MALDI-TOF MS:[M+H+]4268.27,[M+Na+]4289.57.
23-152
Figure BDA0001967223830001271
将23-148(0.9g,0.21mmol)置于500mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(20mL)和DMF(100mL)溶解，然后加入DIEA(0.16mL,0.95mmol)，最后加入高分子4ARM-SCM-40K(Lot:C231-N171101)、(2.01g,0.048mmol，购于键凯)，置于室温下避光、以最低搅拌速度搅拌反应4天。反应停止，将反应液减压浓缩，再加入正己烷(150mL)和甲基叔丁基醚(300mL)沉降，重复3次，过滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷(50mL)和甲醇(10mL)溶解，加入硅胶粉(5g)，干法上样，柱层析，用6％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品1.5g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.23(s,9H),9.05-8.90(m,17H),8.80-8.76(m,9H),8.18-8.06(m,82H),7.87-7.85(m,26H),7.76-7.65(m,6H),7.55-7.53(m,13H),7.38-7.33(m,20H),7.21-7.14(m,83H),7.03-7.69(m,3H),6.72-6.52(m,16H),6.15-5.98(m,44H),5.20-5.10(m,13H),4.60-4.58(m,59H),4.40-4.35(m,73H),4.13-3.51(m,3776H),3.17-3.11(m,115H),3.93-2.73(m,41H),2.67-2.59(m,38H),2.42(s,31H),2.31-2.14(m,66H),1.90-1.76(m,56H),1.58-1.50(m,72H),1.35-1.32(m,21H),1.23-1.22(m,70H),0.87-0.82(m,120H).图22为化合物23-152的1H-NMR谱图。
MALDI-TOF MS:从58533.26到58665.97.
23-161
Figure BDA0001967223830001281
将23-152(1.5g,0.025mmol)、M-NH2-2K.HCl(Lot:ZZ255p053)、(0.64g,0.32mmol，购于键凯)，HBTU(0.06g,0.15mmol)和HOBT(0.02g,0.15mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(80mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.10mL,0.6mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，加入正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(400mL)沉降，重复3次，过滤得到固体产物，将得到的固体产物用二氯甲烷(50mL)和甲醇(10mL)溶解，加入硅胶粉(8g)，干法上样，柱层析，用5％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，蒸干后放入真空箱中干燥，得到产品0.63g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,8H),8.95(s,8H),8.25-8.15(m,67H),8.10-8.06(m,51H),8.03-7.95(m,13H),7.89-7.77(m,26H),7.70-7.63(m,4H),7.50-7.48(m,11H),7.36-7.34(m,3H),7.21-7.15(m,93H),4.58-4.35(m,48H),4.30-4.18(m,70H),4.14-4.35(m,4462H),3.24-3.13(m,109H),3.06-3.02(m,41H),2.91-2.89(m,45H),2.80-2.67(m,71H),2.42(s,53H),2.33-2.12(m,90H),1.88-1.78(m,95H),1.58-1.50(m,95H),1.37-1.35(m,3H),1.30-1.22(m,21H),1.15-1.12(m,6H),0.87-0.82(m,120H).图23为化合物23-161的1H-NMR谱图。
MALDI-TOF MS:从66445.77到66551.28.
实施例18化合物24-12的合成
16-57
Figure BDA0001967223830001282
称取Boc-GFLG-OBn(自制20g,34.3231mmoL)、10％Pd/C(0.4g)放入微型反应釜中，加入DMF(40mL)，装好装置，抽为真空，通入H2(16psi)，反复三次。常温搅拌过夜。反应结束，硅藻土作为滤饼，抽滤，再用DMF清洗三次(20mL×3)，移入500mL的烧瓶中，作为16-158的原料。
16-158
Figure BDA0001967223830001283
称取SB7(SB-743921)(13.6519g,26.4024mmoL)、HBTU(15.0193g,39.6036mmoL)、HOBT(5.3512g,39.6036mmoL)放入16-157的产品瓶中，将反应液放入低温恒温反应浴中(-5摄氏度)，搅拌20分钟后，滴加DIEA(19.7mL,118.8108mmoL)，反应2小时后取出置磁力搅拌器上，室温过夜。反应结束，将反应液移入2L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液溶液(300mL)与乙酸乙酯(400mL)，充分震荡，分离有机相，将水相用乙酸乙酯萃取2次(150mL×2)，合并有机相，用饱和碳酸氢钠溶液清洗一次(200mL)，饱和氯化钠溶液清洗2次(200mL×2)，把有机相倒入2L的锥形瓶中，加入无水硫酸镁干燥，抽滤，浓缩，真空干燥得产品28g，超产2g。
16-159
Figure BDA0001967223830001291
取16-158(26g,26.2197mmoL)放入500mL烧瓶中，加二氯甲烷(15mL)溶解，加TFA(4.2mL,55.8910mmoL)常温搅拌过夜。反应结束，将反应液蒸干除去二氯甲烷溶剂，乙酸乙酯溶解后移入2L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL水相呈碱性)与乙酸乙酯(400mL)，充分震荡，分离有机相，将水相用乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液清洗2次(200mL×2)，把有机相倒入2L的锥形瓶中，加入无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩成100mL，加入硅胶粉旋蒸成固体溶液，干法上样，柱层析，用1％氨水：2％甲醇-5％甲醇/二氯甲烷，梯度洗脱，收集，旋蒸后真空干燥得产品18.8g，产率80％。
16-161
Figure BDA0001967223830001292
称取反应物16-159(7g,7.8518mmoL)、Boc-Glu-OH(0.9245g,3.7390mmoL)、HBTU(4.2526g,11.2170mmoL)、HOBT(1.5156g 11.2170mmoL)投入500mL反应瓶中，加入DMF(100mL)溶解，然后把反应置于低温恒温浴中(-5℃)，搅拌30分钟后。滴加DIEA(5.6mL,33.6510mmoL)，低温反应2小时后置常温反应。反应结束，将反应液移入2L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)与乙酸乙酯(400mL)，充分震荡，分离有机相，将水相用乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液清洗2次(200mL×2)，把有机相倒入2L的锥形瓶中，加入无水硫酸钠干燥，过滤，蒸干后真空干燥得产品8.5g，超产1.1g。
16-162
Figure BDA0001967223830001301
取16-161(7.4g,3.7390mmoL)放入500mL烧瓶中，加二氯甲烷(20mL)溶解，加TFA(8.5mL,112.17mmoL)常温搅拌过夜。反应结束，将反应液蒸干除去二氯甲烷溶剂，乙酸乙酯(35mL)溶解后移入2L分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL水相成碱性)与乙酸乙酯(400mL)，充分震荡，分离有机相，将水相用乙酸乙酯萃取3次(150mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液清洗2次(200mL×2)，把有机相倒入2L的锥形瓶中，加入无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩成100mL，加入硅胶粉旋蒸成固体溶液，干法上样，柱层析，用8％甲醇-1％氨水：9％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，收集，旋蒸后真空干燥得纯品4g，含杂质的产品：1.8g，总产率82.86％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19–8.04(m,11H),7.81(s,2H),7.57–7.46(m,5H),7.27–7.11(m,32H),4.53(s,3H),4.29–4.12(m,5H),3.89(s,2H),3.72–3.48(m,9H),3.17(s,2H),3.04–2.98(m,2H),2.82–2.72(m,4H),2.58(s,5H),2.31(s,7H),2.15(s,2H),1.84–1.74(m,1H),1.67–1.46(m,9H),1.24(s,5H),0.92(s,6H),0.86(s,6H),0.81(s,6H),0.51(s,6H).MALDI-TOF MS:[M+H+]1892.12,[M+Na+]1914.61.
19-66
Figure BDA0001967223830001302
称取Fmoc-GLu-OtBu(2.174g,5.1097mmoL)、加入DMF(20mL)溶解，放入低温恒温反应浴中(0℃)，然后加入GFLG-PCB(3g,3.6498mmoL)、PyAOP(2.6641g,5.1097mmoL)，搅拌30分钟后，滴加TMP(0.4807mL,3.6498mmoL)，低温搅拌过夜。反应结束，在反应液中加入甲基叔丁基醚直到有固体析出，抽滤，用(20％甲醇：80％二氯甲烷30mL)溶解，加入硅胶粉(15g)，蒸干，干法上样，柱层析，用3％甲醇-5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，得产品3.6g，产率80％。
19-71
Figure BDA0001967223830001303
取19-66(3.6g,2.9280mmoL)放入500mL烧瓶中，加二氯甲烷(20mL)溶解，加TFA(4.4mL,58.5637mmoL)常温搅拌过夜。反应结束，将反应液蒸干除去二氯甲烷溶剂，加乙酸乙酯(15mL)超声成均相，加正己烷(100mL)沉降，放入冰箱20分钟，倾倒上清液，再加乙酸乙酯(15mL)与正己烷(100mL)，反复溶解沉降直到产品成为固体，加(20％甲醇：80％二氯甲烷50mL)溶解，加硅胶粉。蒸干上样，柱层析，用5％-8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品3.4g，产率100％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),8.15(s,1H),8.07–8.01(m,3H),7.86(s,4H),7.76–7.56(m,4H),7.41(s,2H),7.32(s,2H),7.24(s,4H),7.22–7.13(m,1H),4.54(s,1H),4.29–4.18(m,3H),4.05–3.92(m,3H),3.78–3.56(m,18H),3.05(s,1H),2.54(s,1H),2.43(s,3H),2.32(s,3H),2.22(s,3H),1.90(s,2H),1.78(s,3H),1.63–1.50(m,4H),0.87(s,6H).
16-170
Figure BDA0001967223830001311
称取反应物16-162(4.7817g,2.5246mmoL)、19-71(3g,2.5246mmoL)、HBTU(1.4248g,3.7869mmoL)、HOBT(0.5117g,3.7869mmoL)投入500mL反应瓶中，加入DMF(150mL)溶解，然后把反应置于低温恒温浴中(-5℃)，搅拌30分钟后。滴加DIEA(1.9mL,11.3607mmoL)，低温反应2小时后置常温反应。反应结束，在反应液中直接加入去离子水(300mL)，析出固体产品，抽滤，加乙酸乙酯(300mL)，超声成均相，加正己烷(200mL)沉降，抽滤，真空干燥得产品8g，超产0.3g。
16-172
Figure BDA0001967223830001312
称取反应物16-170(7.7g,2.5246mmoL)投入500mL反应瓶中，加入DMF(50mL)溶解产品，加入吗啉(6.6mL，75.738mmoL)，搅拌反应，每隔半小时点TLC。1小时后反应结束，在反应液中加入甲基叔丁基醚(100mL)，直到有固体析出，抽滤，再加乙酸乙酯(100mL)，超声成均相，加正己烷(50mL)，抽滤，烘干得产品6.4g,产率88％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,1H),8.96(s,1H),8.25(s,1H),8.15(s,4H),8.10–8.01(m,10H),7.95(s,2H),7.92–7.86(m,3H),7.80(s,1H),7.57–7.47(m,5H),7.28–7.12(m,31H),4.54(s,4H),4.29–4.11(m,6H),3.89(s,3H),3.63(s,8H),3.21–3.13(m,6H),3.09–2.97(m,5H),2.89(s,8H),2.73(s,8H),2.42(s,4H),2.31(s,9H),2.19–2.09(m,4H),1.99(s,3H),1.85(s,10H),1.54(s,15H),1.33(s,2H),1.17(s,4H),0.94–0.78(m,25H),0.51(s,5H).MALDI-TOF MS:[M+Na+]2862.85.
16-173
Figure BDA0001967223830001321
称取反应物16-172(2.4g,0.8444mmoL)、Fmoc-GLu-OtBu(0.4311g,1.0133mmoL)、HBTU(0.1712g,1.2666mmoL)、HOBT(0.4803g 1.2666mmoL)投入250mL反应瓶中，加入DMF(40mL)溶解，然后把反应置于低温恒温浴中(-5℃)，搅拌30分钟后。滴加DIEA(0.63mL,3.7998mmoL)，低温反应2小时后置常温反应。2小时后，点TLC没反应完，补加Fmoc-GLu-OtBu、HBTU、HOBT,重量为投料量的20％，3小时后点TLC，没有明显变化，加甲基叔丁基醚(100mL)至有固体析出，抽滤，加乙酸乙酯(50mL)，正己烷(100mL)，抽滤烘干得产品2.8g，超产0.1g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.20(s,1H),9.03(s,1H),8.26–8.12(m,18H),8.08–8.02(m,6H),7.93(s,8H),7.79(s,5H),7.63–7.55(m,5H),7.47(s,3H),7.34–7.25(m,26H),4.62(s,4H),4.35–4.23(m,9H),4.09(s,3H),3.96(s,4H),3.70(s,15H),3.28–3.19(m,5H),3.11(s,8H),2.96(s,5H),2.80(s,6H),2.49(s,3H),2.38(s,9H),2.19(s,4H),1.89(s,11H),1.67–1.53(m,12H),1.45(s,9H),1.33(s,4H),1.25(s,2H),0.93(s,25H),0.58(s,5H).
16-178
Figure BDA0001967223830001322
称取反应物16-173(2.7g,0.8444mmoL)投入250mL反应瓶中，加入DMF(20mL)溶解产品，加入吗啉(2.2mL，25.332mmoL)，搅拌反应，每隔半小时点TLC。1小时后反应结束，在反应液中加入甲基叔丁基醚(150mL)，再加正己烷(100mL)，超声成均相，抽滤，再用乙酸乙酯(100mL)，加正己烷(100mL)，抽滤，真空干燥得产品2.7g，超产0.15g。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),8.96(s,1H),8.22–7.95(m,16H),7.89(s,2H),7.83–7.75(m,3H),7.57–7.45(m,5H),7.29–7.07(m,36H),4.55(s,2H),4.26–4.12(m,4H),4.01(s,2H),3.89(s,1H),3.74–3.60(m,17H),3.01(s,7H),2.90(s,18H),2.74(s,6H),2.43(s,5H),2.31(s,8H),2.12(s,4H),1.93–1.73(m,10H),1.53(m,14H),1.40(s,9H),0.86(s,25H),0.58–0.40(m,5H).
16-179
Figure BDA0001967223830001331
称取Boc-GFLG-OBn(自制2.5854g,4.4370mmoL)、10％的Pd/C(0.5g)放入微型反应釜中，加入DMF(30mL)，抽为真空，通入H2(16psi)，反复三次。常温过夜。反应结束，硅藻土作为滤饼，抽滤，再用DMF(20mL×3)清洗反应釜与漏斗三次，移入250mL的烧瓶中，作为16-182的原料。
16-182
Figure BDA0001967223830001332
称取16-178(2.5g,0.8444mmoL)、HBTU(0.4803g,1.2666mmoL)、HOBT(0.1711g,1.2666mmoL)放入16-179的产品瓶中，将反应液放入低温恒温反应浴中(-5摄氏度)，搅拌20分钟后，缓慢滴加DIEA(0.6280mL,3.7998mmoL)，反应2小时后取出置磁力搅拌器上，室温过夜。反应结束，在反应液中加甲基叔丁基醚(100mL)，正己烷(150mL)，抽滤，用甲醇与二氯甲烷溶解，加硅胶粉蒸干，干法上样，柱层析，用0.5％氨水：5％甲醇/二氯甲烷洗脱得纯品1.5g，含杂质的产品0.38g。
16-186
Figure BDA0001967223830001341
取16-182(1.5g,0.4283mmoL)放入250mL烧瓶中，加二氯甲烷(10mL)溶解，加TFA(0.96mL,12.8490mmoL)常温搅拌过夜。反应结束，将反应液蒸干除去二氯甲烷溶剂，在反应液中倒入正己烷(100mL),放在冰箱中冷却20分钟，倾倒上清液，下层液中倒乙酸乙酯(20mL)超声，加正己烷(100mL)沉降，瓶壁上为油状，等上清液变清亮，倾倒上清液，再加乙酸乙酯(15mL)，大量正己烷，析出固体产品，抽滤，用(20％甲醇：80％二氯甲烷50mL)溶解，加硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析，用1％氨水：8％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集，旋蒸得产品0.7g，产率50％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),8.89(s,1H),8.49(m,1H),8.28(s,1H),8.12–7.98(m,17H),7.91(s,4H),7.81(s,5H),7.73(s,1H),7.45(s,5H),7.19–7.04(m,37H),4.61(s,1H),4.49(s,4H),4.28(m,3H),4.22–4.07(m,9H),3.94(s,3H),3.82(s,3H),3.70(s,3H),3.57(s,19H),3.13–3.03(m,2H),2.96(s,3H),2.81(s,2H),2.68(s,5H),2.35(s,3H),2.24(s,9H),2.11(s,6H),1.76(s,9H),1.46(s,16H),1.29–1.14(m,6H),0.89–0.70(m,35H),0.44(s,5H).
24-4
Figure BDA0001967223830001342
称取16-186(0.7g，0.2092mmoL)加入DMF(40mL)溶解，加DIEA(0.6915mL，4.184mmoL)，再加4ARM-SCM-40K(1.8285g，0.04358mmoL)，补加二氯甲烷(30mL)，低速避光反应。11天后反应结束，在反应液中倒入甲基叔丁基醚(200mL)，正己烷(200mL)，抽滤，滤饼用用(20％甲醇：80％二氯甲烷30mL)溶解，加硅胶粉(9g)，蒸干，干法上样，柱层析。用6％甲醇-7％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得产品1.7g，产率74％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),8.90-8.88(m,5H),8.18–8.01(m,54H),7.94–7.68(m,20H),7.55–7.48(m,16H),7.38-7.34(m,11H),7.24–7.20(m,74H),7.15-7.11(m,29H),4.58-7.50(m,26H),4.37–4.10(m,103H),4.01–3.87(m,100H),3.32-3.28(m,1479H),2.89-2.84(m,15H),2.79–2.63(m,33H),2.42-2.41(m,11H),2.02–1.95(m,19H),1.526-1.50(m,58H),1.36-1.30(m,134H),0.85–0.75(m,127H),0.50(s,20H).图24为化合物24-4的1H-NMR谱图。
MALDI-TOF MS:从54744.54到54889.20
24-12
Figure BDA0001967223830001351
称取反应物24-4(1.7g，0.03098mmoL)、M-NH2-2K·HCl(0.5g，0.2478mmoL购于键凯)、HBTU(0.0705g，0.18588mmoL)、HOBT(0.0251g，0.18588mmoL)投入250mL反应瓶中，加DMF(40mL)溶解，-5℃搅拌30分钟后，缓慢滴加DIEA(0.1331mL，0.80548mmoL)，搅拌1小时后至常温低速避光反应。(反应液在低温变浑浊，置于常温下超声会变澄清透明。)反应结束，在反应液中加入甲基叔丁基醚(200mL)，正己烷(300mL)，超声成均相，抽滤，粉末用用(20％甲醇：80％二氯甲烷40mL)溶解，加硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析。用6％-7％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，收集纯品蒸干，加无水乙醇(10mL)与二氯甲烷(10mL)，超声溶解，加甲基叔丁基醚至有固体析出，抽滤，继续加无水乙醇(10mL)与二氯甲烷(10mL)溶解，甲基叔丁基醚(100mL)沉降，反复溶解沉降三次，得产品1g，产率52％。
MALDI-TOF MS:从62266.66到63113.03
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,4H),8.96-8.94(m,5H),8.29–7.73(m,98H),7.59–7.40(m,26H),7.13-7.10(m,159H),4.56-4.52(m,24H),4.17-4.08(m,101H),3.30-3.35(m,1281H),3.06–2.88(m,76H),2.72-2.74(m,55H),2.32-2.30(m,59H),2.14-2.10(m,27H),1.86-1.80(m,40H),1.54-1.50(m,57H),1.24-1.16(m,21H),0.88-0.86(m,101H),0.50(s,20H).图25为化合物24-12的1H-NMR谱图。
实施例19化合物26-18的合成
17-137
Figure BDA0001967223830001361
将Fmoc-Glu-OtBu(9.3412g,21.9550mmol)、H-Gly-OBn.TsOH(8.0g，23.7114mmol)、HBTU(12,4893g,32.9325mmol)、HOBT(4.4502g,32.9325mmol)加入到500mL烧瓶中，加入适量DMF(200mL)使其溶解，置于-5℃下搅拌30分钟,再缓慢滴加DIEA(19.9581ml,120.7525mmol)，40分钟滴加完毕,继续于-5℃下搅拌1小时，然后将其置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，将反应液转移到2L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(300mL)和乙酸乙酯(200mL)进行萃取，得到有机相，水相用乙酸乙酯(200mLⅹ3)进行萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(150mLⅹ3)进行清洗，浓缩蒸干,真空烘箱干燥，得到产品17-137:12.5g，产率100％。
18-160
Figure BDA0001967223830001362
将17-137(12.5g，21.9550mmol)加入到250mL烧瓶中，加入DMF(50mL)使之溶解，再加吗啉(19.127mL，219.550mmol)，反应在常温下搅拌反应1小时。反应结束，将反应液转移到2L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(300mL)和乙酸乙酯(200mL)进行萃取，得到有机相，水相用乙酸乙酯(200mL ⅹ 3)进行萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(150mL ⅹ3)进行清洗，浓缩蒸干,然后用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(200mL)溶解，加入硅胶粉(30g)，蒸干，呈粉末状固体,干法上样，柱层析，用1％氨水和2％-5％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体,真空烘箱干燥，得到产品18-160:7.693g，产率91％。
18-166
Figure BDA0001967223830001363
将Boc-GFLG-OBn(8.7g，14.4840mmol)和10％Pd/c(0.2g)投入到氢化反应釜中，然后加入DMF(30mL)使其溶解，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟—充氢气—抽氢气—充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为0.18MPa，然后在常温下过夜反应。反应结束,反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(20mL ⅹ 3)清洗，得到产品18-166,产率100％。
18-167
Figure BDA0001967223830001371
将18-160(4.0g，11.4152mmol)、HBTU(6.4937g,17.1228mmol)、HOBT(2.3138g，17.1228mmol)加入到装有18-166(7.1344g,14.4840mmol)的500mL烧瓶中，加入适量DMF(100mL)使其溶解，置于-5℃下搅拌30分钟。再缓慢滴加DIEA(8.49mL、51.3684mmol)，经20分钟滴加完毕，反应继续在-5℃下搅拌1h，然后将其置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，将反应液转移到2L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(300mL)和乙酸乙酯(200mL)进行萃取，得到有机相，水相用乙酸乙酯(200mL ⅹ 3)进行萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(150mL ⅹ 3)进行清洗，浓缩蒸干，然后用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(30g)，蒸干，呈粉末状固体,干法上样，柱层析，用(2％-3％甲醇,98％-97％二氯甲烷)梯度洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品18-167:7.8g，产率83％。
18-169
Figure BDA0001967223830001372
将18-167(0.4559g，0.4677mmol)和10％Pd/c(0.1g)投入加入到氢化反应装置中，然后加入DMF(30mL)使其溶解，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟—充氢气—抽氢气—充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为0.18MPa，然后在常温下过夜反应。反应结束,反应液用硅藻土过滤，滤饼用DMF(20mL ⅹ 3)清洗，得到产品18-169,产率100％。
18-170
Figure BDA0001967223830001373
将17-102(0.8g，0.4252mmol)、HBTU(0.2419g,0.6378mmol)、HOBT(0.0862g，0.6378mmol)加入到装有18-169(0.3437g，0.4677mmol)的250mL烧瓶中，加入适量DMF(100mL)使其溶解，置于-5℃下搅拌反应30分钟。再缓慢滴加DIEA(0.3162ml、1.9133mmol)，经10分钟滴加完毕。反应继续在-5摄氏度下搅拌反应1h后，将其置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，用正己烷(100mL)震荡，倒掉上清液，重复上述操作三次，再加甲基叔丁基醚(80mL)和少量正己烷(10mL)震荡，倒掉上清液，重复三次，反应液中粉末状固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL x 3)清洗，收集滤饼，真空烘箱干燥，得到产品18-170：1.08g，产率100％。
18-172
Figure BDA0001967223830001381
将18-170(1.0805g，0.4252mmol)加入500mL烧瓶中，加入二氯甲烷(10mL)和TFA(0.4736mL,6.3780mmol)使之溶解，反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(300mL)调节PH至碱性，然后再加乙酸乙酯(200mL)进行萃取，得到有机相，水相用乙酸乙酯(200mL ⅹ 3)进行萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液(150mL ⅹ 3)进行清洗，浓缩蒸干，然后用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干，干法上样，柱层析，用1％氨水和3％-10％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，真空烘箱干燥，得到产品18-172:1.014g，产率87％。
18-182
Figure BDA0001967223830001382
将18-172(0.5457g，0.2288mmol)投入到250mL的烧瓶中，用DMF(20mL)使之溶解，将反应置于-5℃反应30分钟，再缓慢滴加DIEA(0.1733mL，1.0487mmol)，经5分钟滴加完毕。继续搅拌30分钟后，加入4ARM-SCM-40K(2.0g，0.0476mmol，购于键凯)，再加入二氯甲烷(10mL)使之溶解后，反应继续在-5摄氏度下搅拌20分钟，然后将反应置于室温下避光低速搅拌反应一周。反应结束后，将反应中的二氯甲烷蒸干，再加甲基叔丁基醚(20mL)，固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mLⅹ3)清洗，滤饼再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和8％-9％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到产品18-182:1.6184g，产率77％。
26-18
Figure BDA0001967223830001391
将18-182(0.9g，0.0176mmol)、M-NH2-2K.HCl(0.2151g，0.1056mmol，购于键凯)、HBTU(0.0467g,0.1056mmol)、HOBT(0.0166g，0.1056mmol)加入到250mL烧瓶中，加入DMF(50mL)使其溶解，置于-5℃下搅拌反应30分钟。再缓慢滴加DIEA(0.08ml，0.4229mmol)，经5分钟滴加完毕。反应继续在-5摄氏度下搅拌反应1小时，然后将反应置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，用正己烷(100mL)和甲基叔丁基醚(30mL)振荡，倒掉上清液，重复上述操作三次，再用甲基叔丁基醚(100mL)和少量正己烷(10mL)震荡，析出固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL ⅹ 3)清洗，滤饼再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干，呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和5％甲醇的二氯甲烷混合溶液梯度洗脱，收集浓缩，蒸干至固体，真空烘箱干燥，得到粗产品，粗产品用无水乙醇(15mL)和二氯甲烷(5mL)溶解，加入甲基叔丁基醚(100mL ⅹ 3)，析出粉末状固体，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mLⅹ3)清洗，滤饼用真空烘箱干燥，得到产品26-18:0.5559g，产率57％。
实施例20化合物22-207的合成
22-157
Figure BDA0001967223830001392
将Boc-GFLG-OH(9.99g，20.2878mmol)、Niraparib(5g，15.606mmol,简称NPB)、HBTU(8.88g，23.409mmol)、HOBT(3.16g，23.409mmol)加入到500mL烧瓶中，加入DMF(20mL)使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(11.61mL，70.2269mmol)，滴加完毕，继续在-5摄氏度下反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，将反应液转移到1L分液漏斗中，加入饱和NaHCO3(300mL)和乙酸乙酯(200mL),振摇，静置。收集上层有机相，下层水相用乙酸乙酯(150mL×3)萃取，收集有机相并合并，有机相用饱和氯化钠溶液(100mL×2)清洗，浓缩蒸干，真空箱干燥，得产品22-157：17.6g，产率100％。
22-162
Figure BDA0001967223830001401
将22-157(12.41g,15.606mmol)投入到500mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)，在搅拌状态下加入TFA(17.4mL,234.09mmol)，反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液中二氯甲烷抽干，在加入甲基叔丁基醚(200mL)，固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mLⅹ3)清洗，滤饼再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(50g)，干法上柱，柱层析，用(0-1％氨水：6％-8％甲醇：94％-91％二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集浓缩，得产品22-162：10.8g，产率99％
22-192
Figure BDA0001967223830001402
将22-162(2.6g，3.742mmol)、Boc-Glu-OH(0.42g，1.7009mmol)、HBTU(1.93g，5.1027mmol)、HOBT(0.7g，5.1027mmol)加入到500mL烧瓶中，加入DMF(20mL)使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(2.5mL，15.3081mmol)，滴加完毕，继续在-5摄氏度下反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，将正己烷(100mL)加入反应液中震荡，倒掉上清液，重复上述操作三次。在加入二氯甲烷(8mL)溶解后，加入甲基叔丁基醚(100mL)，固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL ⅹ 3)清洗，收集固体，真空箱干燥，得产品22-192:3.2106g,产率100％。
22-193
Figure BDA0001967223830001403
将Fmoc-Glu-(OtBu)(OH)(1.8g，4.3074mmol)、GFLF-SB7(3.2g，3.5895mmol)、HBTU(2.1g，5.3842mmol)、HOBT(0.7g，5.3842mmol)加入到500mL烧瓶中，加入DMF(20mL)使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30分钟，再缓慢滴加DIEA(2.7mL，16.1647mmol)，滴加完毕，继续在-5摄氏度下反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，将正己烷(100mL)加入反应液中震荡，倒掉上清液，重复上述操作三次。在加入二氯甲烷(6mL)溶解后，加入甲基叔丁基醚(100mL)，固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL ⅹ 3)清洗，收集固体，真空箱干燥，得产品22-193:5.5g,产率100％。
22-194
Figure BDA0001967223830001411
将22-192(2.73g,1.7009mmol)投入到250mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)，在搅拌状态下加入TFA(1.89mL,25.5135mmol)，反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液中二氯甲烷抽干，加入甲基叔丁基醚(200mL)，固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL ⅹ3)清洗，滤饼再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(10g)，干法上柱，柱层析，用(1％氨水：4％-6％甲醇：95％-93％二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集浓缩，得产品22-194：2.246g，产率:88％
22-196
Figure BDA0001967223830001412
将22-193(4.66g,3.5895mmol)投入到250mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)，在搅拌状态下加入TFA(4mL,53.8425mmol)，反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液中二氯甲烷抽干，加入甲基叔丁基醚(200mL)，固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mLⅹ3)清洗，滤饼再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(15g)，干法上柱，柱层析，用(1％氨水：5％-8％甲醇：94％-91％二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集浓缩，得产品22-196：4g，产率89.7％
22-198
Figure BDA0001967223830001413
将22-194(0.35g，0.2322mmol)、22-196(0.35g，0.2774mmol)HBTU(0.13g，0.3467mmol)、HOBT(0.05g，0.3467mmol)加入到250mL烧瓶中，加入DMF(15mL)使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(0.17mL，1.0402mmol)，滴加完毕，继续在-5摄氏度下反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，将正己烷(100mL)加入反应液中震荡，倒掉上清液，重复上述操作三次。在加入二氯甲烷溶解(6mL)后，加入甲基叔丁基醚(100mL)，固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL ⅹ 3)清洗，收集固体，真空箱干燥，得产品22-198:1.3g,产率100％
22-199
Figure BDA0001967223830001421
将22-198(0.63g，0.2322mmol)倒入250mL烧瓶中，加入DMF(10mL)使之溶解，再加吗啉(0.4mL，4.6432mmol)，反应在常温下搅拌反应1小时。反应结束后，将正己烷(100mL)加入反应液中震荡，倒掉上清液，重复上述操作三次，在加入甲基叔丁基醚(100mL)，固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL ⅹ 3)清洗，滤饼再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(15g)，干法上柱，柱层析，用(1％氨水：6％-8％甲醇：93％-91％二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集浓缩，得到产品22-199：0.49g，产率85％。
22-200
Figure BDA0001967223830001422
将22-177(0.19g，0.2253mmol，即18-167)和10％Pd/c(0.1g)投入加入到氢化反应装置中，然后加入DMF(30mL)使其溶解，并使溶剂没过搅拌子，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟—充氢气—抽氢气—充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为18Psi，然后在常温下过夜反应。于第二日通过TLC点板发现反应完成后进行后处理，取出反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的抽滤漏斗，抽滤，用DMF(20mLx3)清洗反应装置，直至反应器被清洗干净不含产物为止，得到产品22-200。
22-201
Figure BDA0001967223830001423
将22-199(0.47g，0.1878mmol)、22-200(0.17g，0.2253mmol)HBTU(0.11g，0.2817mmol)、HOBT(0.04g，0.2817mmol)加入到250mL烧瓶中，加入DMF(60mL)使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(0.14mL，0.8451mmol)，滴加完毕，继续在-5摄氏度下反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，将正己烷(100mL)加入反应液中震荡，倒掉上清液，重复上述操作三次。在加入二氯甲烷(6mL)溶解后，加入甲基叔丁基醚(100mL)，固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL ⅹ 3)清洗，收集固体，真空箱干燥，得产品22-201:1g,产率100％。
22-203
Figure BDA0001967223830001431
将22-201(0.6g，0.1878mmol)加入250mL烧瓶中，加入二氯甲烷(10mL)使之溶解，再加TFA(0.42mL，5.634mmol)，反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液中的二氯甲烷抽干，再加甲基叔丁基醚(100mL)沉降，析出固体，滤饼用甲醇/二氯甲烷(1：4)溶解，加入硅胶粉(10g)，蒸干，干法上样，柱层析，洗脱剂用(1％氨水：3％-9％甲醇：96％-90％二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集滤液，浓缩蒸干，得产品22-203:0.437g,产率76％。
22-205
Figure BDA0001967223830001432
将22-203(0.417g,0.1361mmol)加入到250mL烧瓶，再加DMF(20mL)使之溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30min，再缓慢滴加DIEA(0.02mL，0.1237mmol)，滴加完毕，再加入8ARM-SS-40K(0.68g),加入二氯甲烷溶解(10mL)后,将反应置于常温下，遮光，低速搅拌反应一周。反应结束后，将正己烷(100mL)加入反应液中震荡，倒掉上清液，重复上述操作三次，在加入甲基叔丁基醚(100mL)，固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mL ⅹ 3)清洗，滤饼再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(25g)，蒸干，干法上样，柱层析，用(1％氨水：3％-12％甲醇：96％-87％二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集滤液，浓缩蒸干，得产品22-205:0.918g,产率88％。
22-207
Figure BDA0001967223830001433
将22-205(0.898g，0.01331mmol)、M-NH2.HCl-2K(0.27g，0.1331mmol)、HBTU(0.06g，0.1597mmol)、HOBT(0.022g，0.1597mmol)加入到250mL烧瓶中，加入DMF(20mL)使其溶解，置于-5摄氏度下搅拌反应30分钟，再缓慢滴加DIEA(0.097mL，0.5855mmol)，滴加完毕，继续在-5摄氏度下反应1小时，然后置于室温下搅拌反应过夜。反应结束，将正己烷(100mL)加入反应液中震荡，倒掉上清液，重复上述操作三次，在加入甲基叔丁基醚(100mL)，固体析出，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(40mLⅹ3)清洗，滤饼再用甲醇/二氯甲烷(1:4)溶液(100mL)溶解，加入硅胶粉(25g)，蒸干，干法上样，柱层析，洗脱剂用(1％氨水：2％-10％甲醇：97％-89％二氯甲烷)进行梯度洗脱，收集滤液，浓缩蒸干，得产品22-207:1g,产率90％。
实施例21对照化合物13-141的合成
13-141
Figure BDA0001967223830001441
将13-140(0.5953g,0.3164mmol，结构和合成过程参见PCT国际申请PCT/CN2018/073662，实施例M-10中化合物L-10的合成，将Boc-GLG-OBn换成Boc-GFLG-OBn即可)投入到250mL烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)和DMF(10mL)使其溶解，再加入4ARM-SCM-40K(3.0g,0.0678mmol,购于键凯)，反应在常温下低速避光搅拌一周。反应结束，将反应液浓缩，加入甲基叔丁基醚(150mL)，析出固体，过滤，得到粗产品，将其用二氯甲烷(80mL)和甲醇(20mL)溶解，加入硅胶粉，蒸干呈粉末状固体，干法上样，柱层析，用1％氨水和8％甲醇的二氯甲烷混合溶液洗脱，收集产品，浓缩蒸干，得粗产品，真空烘箱干燥2个小时，将其用无水乙醇(10mL)和二氯甲烷(5mL)溶解，加入正己烷(150mL)，析出固体，抽滤，滤饼用正己烷(100mLⅹ 4)清洗，滤饼用真空烘箱干燥，得产品13-141:2.8g,产率80％。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,3H),8.96(s,2H),8.34–7.77(m,50H),7.65–7.41(m,8H),7.27-7.15(m,79H),5.87–5.56(m,3H),4.75–3.91(m,31H),3.51(s,3526H),3.14(s,22H),3.01(d,J＝11.7Hz,18H),2.83–2.66(m,19H),2.42(s,15H),2.12(s,15H),1.98-1.39(m,61H),1.23(s,5H),0.98–0.84(m,46H),0.51(s,7H).图26为化合物13-141的1H-NMR谱图。
MALDI-TOF MS:从50407.96到50723.18
实施例22对照化合物24-6的合成
16-170
Figure BDA0001967223830001451
称取反应物16-162(4.7817g,2.5246mmoL)、19-71(3g,2.5246mmoL)、HBTU(1.4248g,3.7869mmoL)、HOBT(0.5117g,3.7869mmoL)投入500mL反应瓶中，加入DMF(150mL)溶解，然后把反应置于低温恒温浴中(-5℃)，搅拌30分钟后。滴加DIEA(1.9mL,11.3607mmoL)，低温反应2小时后置常温反应。反应结束，在反应液中直接加入去离子水(300mL)，析出固体产品，抽滤，加乙酸乙酯(300mL)，超声成均相，加正己烷(200mL)沉降，抽滤，烘干的产品8g，超产0.3g。
16-172
Figure BDA0001967223830001452
称取反应物16-172(7.7g,2.5246mmoL)投入500mL反应瓶中，加入DMF(50mL)溶解产品，加入吗啉(6.6mL，75.738mmoL)，搅拌反应，每隔半小时点TLC。1小时后反应结束，在反应液中加入甲基叔丁基醚(100mL)，直到有固体析出，抽滤，再加乙酸乙酯(100mL)，超声成均相，加正己烷(50mL)，抽滤，烘干得产品6.4g,产率88％。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,1H),8.96(s,1H),8.25(s,1H),8.15(dd,J＝15.9,7.8Hz,4H),8.10–8.01(m,10H),7.95(s,2H),7.92–7.86(m,3H),7.80(s,1H),7.57–7.47(m,5H),7.28–7.12(m,31H),4.54(ddd,J＝14.5,10.3,6.0Hz,4H),4.29–4.11(m,6H),3.89(d,J＝14.7Hz,3H),3.63(t,J＝9.0Hz,8H),3.21–3.13(m,6H),3.09–2.97(m,5H),2.89(s,8H),2.73(s,8H),2.42(s,4H),2.31(s,9H),2.19–2.09(m,4H),1.99(s,3H),1.85(dd,J＝35.7,19.3Hz,10H),1.54(ddt,J＝47.0,14.1,6.7Hz,15H),1.33(s,2H),1.17(d,J＝7.1Hz,4H),0.94–0.78(m,25H),0.51(s,5H).
MALDI-TOF MS:[M]2839.75,[M+Na+]2862.85.
16-176
Figure BDA0001967223830001461
称取反应物16-172(4g,1.4074mmoL)、Boc-Gly-OH(0.2959g,1.6889mmoL)、HBTU(0.8006g,2.1111mmoL)、HOBT(0.2853g 2.1111mmoL)投入500mL反应瓶中，加入DMF(50mL)溶解，然后把反应置于低温恒温浴中(-5℃)，搅拌30分钟后，滴加DIEA(,1.1mL,6.3333mmoL)，低温反应2小时后置常温反应。反应结束，在反应液中加入甲基叔丁基醚(200mL)，冰箱静置1小时，倾倒上清液，加乙酸乙酯少量，超声，加正己烷(200mL)，静置30分钟，倾倒，再加乙酸乙酯(20mL)，正己烷(200mL)抽滤，烘干得产率6.6g，超产1.7g。
16-184
Figure BDA0001967223830001462
取16-176(4.9g理论,1.6537mmoL)放入500mL烧瓶中，加二氯甲烷(20mL)溶解，加TFA(3.6849mL,49.611mmoL)常温搅拌过夜。反应结束，在反应液中加正己烷(200mL),放入冰箱静置20分钟，倾倒上清液，加少量乙酸乙酯刚好溶解油状物，加正己烷(200mL)倾出上清液，此时油状物比上次明显减少，继续加乙酸乙酯(20mL)，加正己烷(300mL)，析出固体产品，抽滤，加甲醇与二氯甲烷的混合溶剂溶解，加硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析。用1％氨水：5％甲醇/二氯甲烷洗脱得纯品2.1g，含杂质3.2g。
24-6
Figure BDA0001967223830001463
称取反应物16-184(1.05g,0.3622mmoL)放入反应瓶中，加DMF(50mL)、溶解，加4ARM-SCM-40k(3.1662g,0.07546mmoL)再加二氯甲烷(70mL)溶解，用磨口玻璃塞，低速避光反应。反应结束，先用旋转蒸发仪除去二氯甲烷，再加甲基叔丁基醚(400mL)，溶液变浑浊，加正己烷(300mL)抽滤，固体用甲醇与二氯甲烷混合溶剂溶解，加硅胶粉，蒸干上样，柱层析。用4％-7％甲醇/氯甲烷梯度洗脱，收集纯品蒸干，加无水乙醇与二氯甲烷＝1:1体积(20mL)，超声溶解，加甲基叔丁基醚至有固体析出，抽滤，继续加无水乙醇与二氯甲烷溶解，甲基叔丁基醚沉降，反复溶解沉降三次，得产品3.3g,产率82％。
实施例23对照化合物18-158的合成
18-158
Figure BDA0001967223830001471
将18-153(0.6753g,0.1123mmol)投入到250mL烧瓶中，加入二氯甲烷5mL和DMF30mL使其溶解，再加入M-SCM-40K(0.9818g,0.0234mmol)，反应在常温下避光搅拌。反应结束，将反应液二氯甲烷蒸掉，加入约30mL的甲基叔丁基醚，析出固体，过滤，得到粗产品，将其用二氯甲烷和甲醇溶解，加入硅胶粉，蒸干，干法上样，柱层析，用(1％氨水:12％甲醇：87％二氯甲烷)洗脱，收集产品，浓缩蒸干，得产品18-158，将其用无水乙醇(20mL)和二氯甲烷(5mL)溶解，加入甲基叔丁基醚50mL，析出产品，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(50mLx3)清洗，将固体干燥，得产品18-158:1.0g,产率：65％。
实施例24化合物11-180的合成
11-80
Figure BDA0001967223830001472
将原料Boc-GFLG-OBn(5.9147g,10.1508mmol)、10％的Pd/C催化剂(150mg)加入到氢化反应装置中，然后加入DMF(45mL)使其溶解，并使溶剂没过搅拌子，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟—充氢气—抽氢气—充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为18Psi，然后在常温下过夜反应。于第二日通过TLC点板发现反应完成后进行后处理，取出反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的抽滤漏斗中，用DMF(30mL×3)清洗反应装置，直至反应器被清洗干净不含产物为止，得到11-80的反应产物。
10-83
Figure BDA0001967223830001481
将11-80(5g,10.1508mmol))、PKI(4.4792，7.8083mmol，变构的PKI-587简称)、HBTU(1.5827g,11.7125mmol)和HOBT(4.4418g,11.7125mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(90mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(5.8075mL,35.1373mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)，用乙酸乙酯萃取三次(200mL×3)，合并有机相，再用饱和碳酸氢钠(100mL)清洗一次，然后用饱和氯化钠溶液(100mL)除水后将有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，真空干燥箱干燥，得到11-83，产品重9.6g，产率100％，投下一步反应。
11-83
Figure BDA0001967223830001482
将11-81(9.6g,7.8083mmol)于500mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(100mL)溶解，然后加入TFA(17mL,234.249mmol)室温下搅拌反应过夜。反应停止，将反应液减压浓缩蒸干，然后加入适量乙酸乙酯溶解，转移到500mL的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(100mL)中和剩余的TFA，中和结束后分离有机相，用乙酸乙酯萃取水相中的产物，萃取3次(150mL×3)，合并有机相再用无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，干法上样，柱层析，用6％甲醇～10％甲醇/1％氨水/二氯甲烷中进行梯度洗脱，收集产品，浓缩，真空干燥箱烘干得到产物11-83，产物重5.7g，产率77％
11-86
Figure BDA0001967223830001483
将原料Boc-GFLG-OBn(12g,20.5941mmol)、10％Pd/C催化剂(200mg)加入到氢化反应装置中，然后加入DMF(100mL)使其溶解，并使溶剂没过搅拌子，封闭氢化反应装置，进行三抽三充(用真空水泵抽反应体系中的空气约3分钟—充氢气—抽氢气—充氢气---抽氢气---充氢气)后使氢化反应装置上的压力读数为18Psi，然后在常温下过夜反应。于第二日通过TLC点板发现反应完成后进行后处理，取出反应液均匀滴加到装有压实硅藻土的抽滤漏斗中，用DMF(30×3mL)清洗反应装置，直至反应器被清洗干净不含产物为止，得到11-86的反应产物。
11-87
Figure BDA0001967223830001491
将11-86(20.5941mmol)、Lapatinip(简称LPT)(9.5730g,16.4752mmol)、HBTU(9.3721g,24.7129mmol)和HOBT(3.3394g,24.7129mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(100mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(12.25mL,74.1384mmol)，滴加完毕后低温下反应2.5小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，先加入正己烷(100mL)沉降，倾倒上清液后，再加入甲基叔丁基醚(300mL)沉降，重复3次，,取滤饼于真空干燥箱干燥，得粗产品11-87，产物重17.4g，产率100％，投下一步反应。
11-92
Figure BDA0001967223830001492
将11-87(17.4g,16.4752mmol)置于500mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(80mL)溶解，然后加入TFA(36.7mL,494.256mmol)室温下搅拌反应过夜，反应停止，将反应液减压浓缩，加入正己烷(150mL×3)沉降三次，倾倒上清液后再加入甲基叔丁基醚(250mL×3)沉降三次，抽滤，干法上样，柱层析，用2％～10％甲醇/1％氨水/二氯甲烷中进行梯度洗脱，收集浓缩，于真空干燥箱干燥得到产品11-92，产品重11.2g，产率71％
11-99
Figure BDA0001967223830001493
将11-92(6.8225g,7.1403mmol)、Boc-Glu-OH(0.8406g,3.4001mmol)、HBTU(3.8683g,10.2004mmol)和HOBT(1..783g,10.2004mmol)置于500mL圆底烧瓶中，然后加入DMF(50mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(5.1mL,30.6009mmol)，滴加完毕后低温下反应2.5小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，先加入正己烷(100mL)沉降，倾倒上清液后，再加入甲基叔丁基醚(300mL×3)沉降，取滤饼于真空干燥箱干燥，得粗产品11-99，产物重5.8g，产率80％，投下一步去保护反应。
11-105
Figure BDA0001967223830001501
将11-99(5.8g,2.733mmol)置于500mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(80mL)溶解，然后加入TFA(6.1mL,81.99mmol)室温下搅拌反应过夜，反应停止，将反应液减压浓缩，加入正己烷(150mL×3)沉降三次，倾倒上清液后再加入甲基叔丁基醚(250mL×3)沉降三次，抽滤，干法上样，柱层析，用5％～8％甲醇/二氯甲烷中进行梯度洗脱，收集浓缩，于真空干燥箱干燥，得到产品11-105，产品重5.3g，产率96％
11-158
Figure BDA0001967223830001502
将11-105(2.5g,1.2363mmol)、Fmoc-Glu-OtBu(0.7364g,1.7308mmol)、HBTU(0.7032g,1.8544mmol)和HOBT(0.2505g,1.8544mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(100mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.9mL,5.5633mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，先加入正己烷(100mL)沉降，倾倒上清液后，再加入甲基叔丁基醚(200mL×3)沉降，于真空干燥箱干燥，得到固体产物11-158，产品重3.7364g，产率100％，投下一步去保护反应
11-160
Figure BDA0001967223830001503
将11-158(3.7364g,1.2363mmol)置于500mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(50mL)溶解，然后加入TFA(2.8mL,37.0439mmol)室温下搅拌反应过夜，反应停止，将反应液减压浓缩，加入正己烷(150mL×3)沉降三次，倾倒上清液后，再加入甲基叔丁基醚(250mL×3)沉降，抽滤，取滤饼，真空干燥箱干燥，得到粗产品11-160，产品重3.2g，产率100％
11-162
Figure BDA0001967223830001511
将11-160(3.2693g,1.2425mmol)、11-83(1.2958g,1.3668mmol)、HBTU(0.7067g,1.8637mmol)和HOBT(0.2518g,1.8637mmol)置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(50mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.9mL,5.5912mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，先加入正己烷(100mL)沉降，倾倒上清液后，再加入甲基叔丁基醚(200mL×3)沉降，抽滤，得到固体粗产品，于真空干燥箱中干燥后得到产品11-162，产品重4.7447g，产率100％，投下一步去保护反应。
11-166
Figure BDA0001967223830001512
将11-162(4.7447g,1.2411mmol)、置于500mL圆底烧瓶中然后加入DMF(40mL)，使其溶解，加入吗啉(3.3mL,37.2332mmol)于室温下搅拌反应1.5小时。反应结束后，先加入正己烷(100mL)沉降，再加入甲基叔丁基醚(200mL)沉降，重复3次，取滤饼，干法上样，柱层析，用5％～10％甲醇/二氯甲烷进行梯度洗脱，收集产品，浓缩，于真空干燥箱中干燥后得到11-166，产品重2.2g，产率57％
11-168
Figure BDA0001967223830001513
将11-166(2.2g,0.714mmol)、24-40(0.238g,0.295mmol)、HBTU(0.3356g,0.885mmol)和HOBT(0.1058g,0.885mmol)置于250mL圆底烧瓶中然后加入DMF(50mL)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30分钟。然后缓慢滴加DIEA(0.5mL,2.655mmol)，滴加完毕后低温下反应2小时，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，先加入正己烷(100mL)沉降，倾倒上清液后，再加入甲基叔丁基醚(200mL×3)沉降，，析出固体，抽滤，滤饼用正己烷清洗(50mL×2)，滤饼于真空干燥箱中干燥后得到产品11-168，产品重2.0g，产率83％，投下一步去保护反应
11-170
Figure BDA0001967223830001521
将11-168(2.0g,0.2884mmol)置于250mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(35mL)溶解，然后加入TFA(0.7mL,8.6537mmol)室温下搅拌反应过夜，反应停止，将反应液减压浓缩，加入正己烷(150mL×3)沉降三次，再加入甲基叔丁基醚(250mL×3)沉降三次，抽滤，干法上样，柱层析，用6％～8％甲醇/二氯甲烷中进行梯度洗脱，收集浓缩，于真空干燥箱中干燥得到产品11-170，产品重0.7g，产率36％
11-172
Figure BDA0001967223830001522
将11-170(0.7g,0.1032mmol)置于250mL的圆底烧瓶中，用DMF(50mL)溶解，然后加入DIEA(0.1mL,0.43mmol)进行中和，然后加入4ARM-SCM-40K(0.9028g,0.0215mmol,购于键凯，Lot Number：C231-N171101)，室温下避光低速反应一周。反应停止后，加入甲基叔丁基醚(200mL×3)沉降，析出固体产物，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(20mL×3)反复清洗，干法上样，柱层析，用5％～8％甲醇/二氯甲烷中进行梯度洗脱，收集浓缩，于真空干燥箱中干燥得到产品11-172，产品重1.1g，产率78％
11-180
Figure BDA0001967223830001531
将11-172(1.1g,0.016mmol)、HBTU(0.036g,0.0961mmol)和HOBT(0.055g,0.0961mmol)置于250mL的圆底烧瓶中，用DMF(50mL)溶解，然后加入M-NH2-3K.HCl(0.29g,0.0961mmol,购于键凯，Lot Number：zz313p022),室温下避光低速反应2天。反应停止后，加入甲基叔丁基醚(200mL)沉降，析出固体产物，重复沉降3次，抽滤，滤饼用甲基叔丁基醚(20mL×3)反复清洗，干法上柱，柱层析，用5％～10％甲醇/二氯甲烷中进行梯度洗脱，收集浓缩，于真空干燥箱中干燥得到产品11-180，产品重0.9g，产率70％。
实施例25化合物24-12与对照化合物24-6在生理盐水中的溶解性试验
24-6
Figure BDA0001967223830001532
24-12
Figure BDA0001967223830001533
准备两个2mL的样品瓶，设A瓶与B瓶。
Figure BDA0001967223830001534
A瓶加入24-6(4.5mg)，B瓶加入24-12(5.3mg)，分别加0.2mL生理盐水，边震荡边超声，20分钟后观察，A瓶中24-6仍为黄色块状，B瓶中24-12完全溶解，为黄色透明溶液。实验结果如图27所示。
实施例26化合物17-141和对照化合物18-158的溶解性试验
18-158
Figure BDA0001967223830001541
17-141
Figure BDA0001967223830001542
准备两个2mL的样品瓶，设A瓶与B瓶。
Figure BDA0001967223830001543
A瓶加入18-158(2.8mg)，B瓶加入17-141(3.4mg)，分别加入0.2mL生理盐水，边振荡边超声，30分钟后观察，A瓶中18-158仍为黄色小块状，B瓶中17-141完全溶解，为黄色微粘稠透明状溶液。实验结果如图28所示。
实施例27化合物26-18和对照化合物13-141的溶解性试验
13-141
Figure BDA0001967223830001551
26-18
Figure BDA0001967223830001552
准备两个2mL的样品瓶，设A瓶与B瓶。
Figure BDA0001967223830001553
A瓶加入13-141(6.6mg),B瓶加入26-18(7.6mg),分别加入0.2mL生理盐水，边振荡边超声，20分钟后观察，A瓶中13-141仍为黄色小块状，B瓶中26-18完全溶解，为黄色透明状溶液。实验结果如图29所示。
实验例1化合物19-80对人源结肠癌细胞colo205皮下移植瘤的抗肿瘤药效研究
一、实验目的
研究静脉注射(另有药物为腹腔注射或口服)受试物对人源结肠癌细胞colo205皮下移植瘤的抗肿瘤药效。
二、实验材料
细胞：人源结肠癌细胞colo205；
药物：复合药及其对应的小分子药物见下表
Figure BDA0001967223830001554
动物：Balb/c小鼠，雌性
三、药物抑瘤实验
1.瘤株及实体肿瘤移植方法：人源结肠癌细胞colo205由中国医学科学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室细胞房常规保存。肿瘤细胞从液氮内取出，37℃迅速解冻复苏扩增后，接种于健康Balb/c小鼠的右侧腋窝皮下。当移植肿瘤生长达1.0cm直径左右，处死小鼠。在无菌条件下，剥离肿瘤按常规方法传代。
2.肿瘤接种与分组：处死荷瘤鼠在无菌条件下剥离肿瘤，生理盐水清洗数次，剔除坏死的组织，选择生长良好的肿瘤组织分割成2×2mm的组织块，以特制的金属套管针将肿瘤组织块接种于小鼠腋窝皮下。肿瘤组织块移植后当天即分组给药。
表1.最后确定给药方案
Figure BDA0001967223830001561
3.给药途径：腹腔、口服与尾静脉注射多种给药方式混合给药。实验操作过程中给药方式见表2。
表2.实际给药方案
Figure BDA0001967223830001562
4.数据采集：称量小鼠体重，测量肿瘤体积，19天处死小鼠称量瘤重，计算抑瘤率％。
四、实验动物及环境
1、动物种系：Balb/c nu小鼠
2、动物级别：SPF级
3、动物性别和数量：雌性，共18只。
4、动物年龄：6-7周龄。
5、动物体重：16-18克
6、动物来源：北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号：SCXK(京)2016-0006，质量负责人：柯林.赛缪尔.邓恩
7、饲养条件：实验操作全部在北京实验动物研究中心动物房进行(使用许可证编号SYXK(京)2015-0046)。实验动物饲养于清洁级动物室中，由获得资格认可的人员饲养。动物室挂置温湿度计,每天早8:00～10:00测定记录1次，室温控制在22.6±0.4℃,湿度75.8±6.2％，12小时照明，12小时黑暗。标准饲养盒内喂养，每盒5只，盒内保持清洁，试验时按动物实验室使用规定操作。
8、饲料：清洁级鼠料，军事医学科学院实验动物中心，生产许可证号：京动(2000)第015号。
9、饮水：由饮用水瓶供应电渗析超滤净化水，每日冲洗饮水瓶、换水一次。
五、实验设计
实验设计依据：国家食品药品监督管理局颁布的《抗肿瘤药物药效学指导原则》征求意见稿和《细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究指导原则》。
评价指标:
给药组平均瘤重
肿瘤抑制率(％)＝(1-给药组平均瘤重/阴性对照组平均瘤重)×100％
六、实验结果
图30显示了实验动物体重生长曲线。图31显示了肿瘤生长曲线(体积)。图32A-32C显示了各组肿瘤组织照片，从上到下依次为19-80组、SB7+PCB组、生理盐水组。图33为肿瘤重量柱状图，表3显示了肿瘤重量平均值和方差。图34和表4显示了药物抑瘤率。
表3肿瘤组织重量
Figure BDA0001967223830001571
表4药物抑瘤率
分组 抑瘤率
19-80 54.2％
SB7+PCB 27.0％
生理盐水 0.0％
结果显示，化合物19-80的抑瘤率≥50.0％，优于SB7+PCB普通联用，达到明显治疗作用。
实验例2化合物23-161对人源结肠癌细胞colo205皮下移植瘤的抗肿瘤药效研究
一、实验目的
1、静脉注射(另有药物为腹腔注射或口服)受试物对人源结肠癌细胞colo205皮下移植瘤的抗肿瘤药效研究。
二、实验材料
细胞：人源结肠癌细胞colo205；
药物：复合药及其对应的小分子药物见下表
Figure BDA0001967223830001572
Figure BDA0001967223830001581
动物：Balb/c小鼠，雌性
三、药物抑瘤实验
1.瘤株及实体肿瘤移植方法：人源结肠癌细胞colo205由中国医学科学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室细胞房常规保存。肿瘤细胞从液氮内取出，37℃迅速解冻复苏扩增后，接种于健康Balb/c小鼠的右侧腋窝皮下。当移植肿瘤生长达1.0cm直径左右，处死小鼠。在无菌条件下，剥离肿瘤按常规方法传代。
2.肿瘤接种与分组：处死荷瘤鼠在无菌条件下剥离肿瘤，生理盐水清洗数次，剔除坏死的组织，选择生长良好的肿瘤组织分割成2×2mm的组织块，以特制的金属套管针将肿瘤组织块接种于小鼠腋窝皮下。肿瘤组织块移植后当天即分组给药。
表5.最后确定给药方案
Figure BDA0001967223830001582
3.给药途径：腹腔、口服与尾静脉注射多种给药方式混合给药。实验操作过程中给药方式见表6。
表6.实际给药方案
Figure BDA0001967223830001583
4.数据采集：称量小鼠体重，测量肿瘤体积，19天处死小鼠称量瘤重，计算抑瘤率％。
四、实验动物及环境
1、动物种系：Balb/c nu小鼠
2、动物级别：SPF级
3、动物性别和数量：雌性，共18只。
4、动物年龄：6-7周龄。
5、动物体重：16-18克
6、动物来源：北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号：SCXK(京)2016-0006，质量负责人：柯林.赛缪尔.邓恩
7、饲养条件：实验操作全部在北京实验动物研究中心动物房进行(使用许可证编号SYXK(京)2015-0046)。实验动物饲养于清洁级动物室中，由获得资格认可的人员饲养。动物室挂置温湿度计,每天早8:00～10:00测定记录1次，室温控制在22.6±0.4℃,湿度75.8±6.2％，12小时照明，12小时黑暗。标准饲养盒内喂养，每盒5只，盒内保持清洁，试验时按动物实验室使用规定操作。
8、饲料：清洁级鼠料，军事医学科学院实验动物中心，生产许可证号：京动(2000)第015号。
9、饮水：由饮用水瓶供应电渗析超滤净化水，每日冲洗饮水瓶、换水一次。
五、实验设计
实验设计依据：国家食品药品监督管理局颁布的《抗肿瘤药物药效学指导原则》征求意见稿和《细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究指导原则》。
评价指标:
肿瘤抑制率(％)＝(1-给药组平均瘤重/阴性对照组平均瘤重)×100％
六、实验结果
图35显示了实验动物体重生长曲线。图36显示了肿瘤生长曲线(体积)。图37A-37C显示了各组肿瘤组织照片，从上到下依次为23-161组、PCB组、生理盐水组。图38为肿瘤重量柱状图，表7显示了肿瘤重量平均值和方差。图39和表8显示了药物抑瘤率。
表7肿瘤组织重量
Figure BDA0001967223830001591
表8.药物抑瘤率
分组 抑瘤率
23-161 14.3％
PCB -5.8％
生理盐水 0.0％
结果显示，化合物23-161的抑瘤率优于PCB。
实验例3化合物14-111对小鼠结肠癌细胞CT26皮下移植瘤的抗肿瘤药效研究
一、实验目的
1、静脉注射(另有药物为腹腔注射或口服)受试物对小鼠结肠癌细胞CT26皮下移植瘤的抗肿瘤药效研究。
二、实验材料
细胞：小鼠结肠癌细胞CT26；
药物：复合药及其对应的小分子药物；
动物：Balb/c小鼠，雌性。
三、药物抑瘤实验
1.瘤株及实体肿瘤移植方法：小鼠结肠癌细胞CT26由中国医学科学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室细胞房常规保存。肿瘤细胞从液氮内取出，37℃迅速解冻复苏扩增后，接种于健康Balb/c小鼠的右侧腋窝皮下。当移植肿瘤生长达1.0cm直径左右，处死小鼠。在无菌条件下，剥离肿瘤按常规方法传代。
2.肿瘤接种与分组：处死荷瘤鼠在无菌条件下剥离肿瘤，生理盐水清洗数次，剔除坏死的组织，选择生长良好的肿瘤组织分割成2×2mm的组织块，以特制的金属套管针将肿瘤组织块接种于小鼠腋窝皮下。肿瘤组织块移植后当天即分组给药。
表9.最后确定给药方案
Figure BDA0001967223830001601
3.给药途径：腹腔、口服与尾静脉注射多种给药方式混合给药。因为后期给药方式与给药频率有变动，实际实验操作过程中给药方式见表10。
表10.实际给药方案
Figure BDA0001967223830001602
4.数据采集：称量小鼠体重，测量肿瘤体积，13天处死小鼠称量瘤重，计算抑瘤率％。
四、实验动物及环境
1、动物种系：Balb/c小鼠
2、动物级别：SPF级
3、动物性别和数量：雌性，共18只。
4、动物年龄：6-7周龄。
5、动物体重：17-19克
6、动物来源：北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号：SCXK(京)2016-0006，质量负责人：柯林.赛缪尔.邓恩
7、饲养条件：实验操作全部在北京实验动物研究中心动物房进行(使用许可证编号SYXK(京)2015-0046)。实验动物饲养于清洁级动物室中，由获得资格认可的人员饲养。动物室挂置温湿度计,每天早8:00～10:00测定记录1次，室温控制在22.6±0.4℃,湿度75.8±6.2％，12小时照明，12小时黑暗。标准饲养盒内喂养，每盒5只，盒内保持清洁，试验时按动物实验室使用规定操作。
8、饲料：清洁级鼠料，军事医学科学院实验动物中心，生产许可证号：京动(2000)第015号。
9、饮水：由饮用水瓶供应电渗析超滤净化水，每日冲洗饮水瓶、换水一次。
五、实验设计
实验设计依据：国家食品药品监督管理局颁布的《抗肿瘤药物药效学指导原则》征求意见稿和《细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究指导原则》。
评价指标:
给药组平均瘤重
肿瘤抑制率(％)＝(1-给药组平均瘤重/阴性对照组平均瘤重)×100％
六、实验结果
图40显示了实验动物体重生长曲线。图41显示了肿瘤生长曲线(体积)。图42A-42C显示了各组肿瘤组织照片，从上到下依次为生理盐水组、14-111组、SB7+PCB组。图43为肿瘤重量柱状图，表11显示了肿瘤重量平均值和方差。图44和表12显示了药物抑瘤率。
表11肿瘤组织重量
Figure BDA0001967223830001611
表12.药物抑瘤率
Figure BDA0001967223830001612
结果显示，14-111对小鼠结肠癌CT26细胞肿瘤模型抑制效果优于SB7+PCB。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，但本领域技术人员将理解：根据已经公开的所有教导，可以对细节进行各种修改和变动，并且这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims (20)

1.一种如式I所示的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐；
Figure FDA0001967223820000011
其中，PEG1选自单臂或多臂的聚乙二醇链段；
j为PEG1的臂数；
X选自
Figure FDA0001967223820000012
n为2或3；当j大于1(例如为4或8)时，会有多个(例如4个或8个)X同时存在，此时，各个X之间可以相同或不同；
M为氨基酸残基或多肽，选自G、GG、GLG、GFA、GLA或GFLG；当j大于1(例如为4或8)时，会有多个(例如4个或8个)M同时存在，此时，各个M之间可以相同或不同；PEG2为单臂聚乙二醇链段，其与Y通过酰胺键连接；
Y选自：
Figure FDA0001967223820000013
当j大于1(例如为4或8)时，会有多个(例如4个或8个)Y同时存在，此时，各个Y之间可以相同或不同；
W选自Q，
Figure FDA0001967223820000014
Figure FDA0001967223820000015
当j大于1(例如为4或8)时，会有多个(例如4个或8个)W同时存在，此时，各个W之间可以相同或不同；
Q为
Figure FDA0001967223820000021
Z0、Z1、Z2、Z3、Z4各自独立地选自：
Figure FDA0001967223820000022
Z0、Z1、Z2、Z3、Z4之间可以相同或不同，并且，当同时存在多个Z0、多个Z1、多个Z2、多个Z3时或多个Z4时，各个各个Z0之间、各个Z1之间、各个Z2之间、各个Z3之间或各个Z4之间可以相同或不同；
N1、N2、N3、N4各自独立地选自G、GG、GLG、GFA、GLA或GFLG；N1、N2、N3、N4之间可以相同或不同，并且，当同时存在多个N1、多个N2、多个N3或多个N4时，各个N1之间、各个N2之间、各个N3之间、或各个N4之间可以相同或不同；
AC1、AC2、AC3、AC4为药物分子(例如具有抗肿瘤活性的药物分子)，AC1、AC2、AC3、AC4之间可以相同或不同；并且当同时存在多个AC1、多个AC2、多个AC3或多个AC4时，各个AC1之间、各个AC2之间、各个AC3之间、或各个AC4之间可以相同或不同。
2.权利要求1的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，具有以下特征中的一个或多个：
(1)PEG1选自单臂、四臂或八臂的聚乙二醇链段；
(2)PEG1的数均分子量为5k-40k，例如5k-10k或10k-40k；
(3)X为
Figure FDA0001967223820000023
n为2或3；
(4)M为G、GLG、或GFLG；
(5)PEG2的数均分子量为2k-3k、3k-5k、5k-10k或10k-40k；
(6)Y为
Figure FDA0001967223820000024
(7)Q选自：
Figure FDA0001967223820000025
Figure FDA0001967223820000031
(8)AC1、AC2、AC3、AC4各自独立地选自MK2、LPT、PCB、SB7、PKI、NPB。
3.权利要求1-2任一项的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，PEG1为数均分子量为5k-10k的单臂聚乙二醇链段，或数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure FDA0001967223820000032
M为G、GLG、或GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k或3k-5k；Y为
Figure FDA0001967223820000033
W为Q，选自
Figure FDA0001967223820000034
其中，N1、N2均为GFLG或者均为GLG，AC1和AC2选自以下组合：
(1)AC1为MK2，AC2为LPT，
(2)AC1为LPT，AC2为SB7，
(3)AC1为PCB，AC2为SB7，
(4)AC2为SB7，AC1为PCB；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物选自：
Figure FDA0001967223820000035
优选地，
Figure FDA0001967223820000036
的数均分子量为5k；优选地，
Figure FDA0001967223820000037
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000041
优选地，
Figure FDA0001967223820000042
的数均分子量为40k；优选地，
Figure FDA0001967223820000043
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000044
优选地，
Figure FDA0001967223820000045
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA0001967223820000046
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000047
优选地，
Figure FDA0001967223820000048
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA0001967223820000049
的数均分子量为2k；
Figure FDA00019672238200000410
优选地，
Figure FDA00019672238200000411
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA00019672238200000412
的数均分子量为2k。
4.权利要求1-2任一项的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，PEG1为数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure FDA0001967223820000051
M为GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k；Y为
Figure FDA0001967223820000052
W为
Figure FDA0001967223820000053
Z1选自
Figure FDA0001967223820000054
Q选自
Figure FDA0001967223820000055
N1、N2均为GFLG，AC1、AC2选自以下组合：
(1)AC1和AC2均为SB7，
(2)AC1和AC2均为LPT，
(3)AC1为PCB，AC2为SB7，
(4)AC1和AC2为PCB；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物选自：
Figure FDA0001967223820000056
优选地，
Figure FDA0001967223820000057
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA0001967223820000058
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000061
优选地，
Figure FDA0001967223820000062
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA0001967223820000063
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000064
优选地，
Figure FDA0001967223820000065
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA0001967223820000066
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000067
优选地，
Figure FDA0001967223820000068
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA0001967223820000069
的数均分子量为2k。
5.权利要求1-2任一项的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，PEG1为数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure FDA0001967223820000071
M为GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k；Y为
Figure FDA0001967223820000072
W为
Figure FDA0001967223820000073
其中，Z1选自
Figure FDA0001967223820000074
Q为
Figure FDA0001967223820000075
N1、N2、N3均为GFLG，AC1、AC2和AC3选自以下组合：
(1)AC1为PCB、AC2为SB7、AC3为PKI，
(2)AC1、AC2为PCB，AC3为SB7，
(3)AC1、AC2为NPB，AC3为SB7，
(4)AC1、AC2为SB7，AC3为PCB；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物选自：
Figure FDA0001967223820000076
优选地，
Figure FDA0001967223820000077
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA0001967223820000078
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000079
优选地，
Figure FDA00019672238200000710
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA00019672238200000711
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000081
R为八臂聚乙二醇的核心结构；优选地，
Figure FDA0001967223820000082
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA0001967223820000083
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000084
优选地，
Figure FDA0001967223820000085
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA0001967223820000086
的数均分子量为2k。
6.权利要求1-2任一项的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，PEG1为数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure FDA0001967223820000087
M为GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k或3k-5k；Y为
Figure FDA0001967223820000088
W为
Figure FDA0001967223820000089
其中，Z2为
Figure FDA00019672238200000810
Z1选自
Figure FDA00019672238200000811
Figure FDA00019672238200000812
Q选自
Figure FDA00019672238200000813
N1、N2均为GFLG，AC1、AC2选自以下组合：
(1)AC1为LPT，AC2为SB7，
(2)AC1为PCB，AC2为SB7；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物选自：
Figure FDA0001967223820000091
优选地，
Figure FDA0001967223820000092
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA0001967223820000093
的数均分子量为3k或5k；
Figure FDA0001967223820000094
优选地，
Figure FDA0001967223820000095
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA0001967223820000096
的数均分子量为2k。
7.权利要求1-2任一项的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，PEG1为数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure FDA0001967223820000097
M为GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k或3k-5k；Y为
Figure FDA0001967223820000101
W为
Figure FDA0001967223820000102
其中，Z2为
Figure FDA0001967223820000103
Z1选自
Figure FDA0001967223820000104
Figure FDA0001967223820000105
Q选自
Figure FDA0001967223820000106
N1、N2均为GFLG，AC1为PCB、AC2为SB7；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物为：
Figure FDA0001967223820000107
优选地，
Figure FDA0001967223820000108
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA0001967223820000109
的数均分子量为3k。
8.权利要求1-2任一项的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，PEG1为数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure FDA00019672238200001010
M为GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k或3k-5k；Y为
Figure FDA0001967223820000111
W为
Figure FDA0001967223820000112
其中，Z2为
Figure FDA0001967223820000113
Z1为
Figure FDA0001967223820000114
Q为
Figure FDA0001967223820000115
N1、N2、N3均为GFLG，AC1、AC2均为PCB，AC3为SB7；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物为：
Figure FDA0001967223820000116
优选地，
Figure FDA0001967223820000117
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA0001967223820000118
的数均分子量为3k。
9.权利要求1-2任一项的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，PEG1为数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure FDA0001967223820000119
M为GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k或3k-5k；Y为
Figure FDA00019672238200001110
W为
Figure FDA00019672238200001111
其中，Z2和Z1为
Figure FDA00019672238200001112
Q为
Figure FDA00019672238200001113
AC1、AC2为LPT，AC3为PKI；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物为：
Figure FDA0001967223820000121
优选地，
Figure FDA0001967223820000122
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA0001967223820000123
的数均分子量为3k。
10.权利要求1-2任一项的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，PEG1为数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure FDA0001967223820000124
M为GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k或3k-5k；Y为
Figure FDA0001967223820000125
W为
Figure FDA0001967223820000126
其中，Z3为
Figure FDA0001967223820000127
Z2和Z1为
Figure FDA0001967223820000128
Q为
Figure FDA0001967223820000129
N1、N2、N3为GFLG，AC1和AC2为LPT，AC3为PCB；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物为：
Figure FDA00019672238200001210
优选地，
Figure FDA0001967223820000131
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA0001967223820000132
的数均分子量为3k。
11.权利要求1-2任一项的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，其中，PEG1为数均分子量为10k-40k的四臂聚乙二醇链段；X为
Figure FDA0001967223820000133
M为GFLG；PEG2的数均分子量为2k-3k或3k-5k；Y为
Figure FDA0001967223820000134
W为
Figure FDA0001967223820000135
其中，Z2为
Figure FDA0001967223820000136
Z1为
Figure FDA0001967223820000137
Q为
Figure FDA0001967223820000138
N1、N2、N3、N4为GFLG，AC1、AC2、AC3为PCB，AC4为SB7；
优选地，所述聚乙二醇偶联药物为：
Figure FDA0001967223820000139
优选地，
Figure FDA00019672238200001310
的数均分子量为40k，优选地，
Figure FDA00019672238200001311
的数均分子量为2k。
12.权利要求1-11任一项的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐，所述聚乙二醇偶联药物选自以下化合物：
Figure FDA00019672238200001312
其中，
Figure FDA00019672238200001313
的数均分子量为5k；
Figure FDA00019672238200001314
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000141
其中，
Figure FDA0001967223820000142
的数均分子量为40k；
Figure FDA0001967223820000143
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000144
其中，
Figure FDA0001967223820000145
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000146
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000147
其中，
Figure FDA0001967223820000148
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000149
的数均分子量为2k；
Figure FDA00019672238200001410
其中，
Figure FDA00019672238200001411
的数均分子量为40k，
Figure FDA00019672238200001412
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000151
其中，
Figure FDA0001967223820000152
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000153
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000154
其中，
Figure FDA0001967223820000155
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000156
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000157
其中，
Figure FDA0001967223820000158
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000159
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000161
其中，
Figure FDA0001967223820000162
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000163
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000164
其中，
Figure FDA0001967223820000165
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000166
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000167
其中，
Figure FDA0001967223820000168
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000169
的数均分子量为2k；
Figure FDA00019672238200001610
其中，R为八臂聚乙二醇的核心结构；
Figure FDA0001967223820000171
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000172
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000173
其中，
Figure FDA0001967223820000174
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000175
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000176
其中，
Figure FDA0001967223820000177
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000178
的数均分子量为3k；
Figure FDA0001967223820000181
其中，
Figure FDA0001967223820000182
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000183
的数均分子量为5k；
Figure FDA0001967223820000184
其中，
Figure FDA0001967223820000185
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000186
的数均分子量为2k；
Figure FDA0001967223820000191
其中，
Figure FDA0001967223820000192
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000193
的数均分子量为3k；
Figure FDA0001967223820000194
其中，
Figure FDA0001967223820000195
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000196
的数均分子量为3k；
Figure FDA0001967223820000197
Figure FDA0001967223820000201
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000202
的数均分子量为3k
Figure FDA0001967223820000203
Figure FDA0001967223820000204
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000205
的数均分子量为3k；
Figure FDA0001967223820000206
Figure FDA0001967223820000207
的数均分子量为40k，
Figure FDA0001967223820000208
的数均分子量为2k。
13.制备权利要求1-12任一项的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的方法，包括以下步骤：
S1：制备带有氨基的中间体
Figure FDA0001967223820000209
其中，至少一个氨基位于M上，
S2：使带有羧基或活化的羧基的PEG1与中间体
Figure FDA00019672238200002010
发生酰胺化反应，得到权利要求1-12任一项的聚乙二醇偶联药物；
优选地，S1包括以下步骤：
步骤(1)：制备W；
步骤(2)：以W和带有氨基的二羧酸为原料，通过酰胺化反应得到中间体W-Y-COOH；
步骤(3)：通过酰胺化反应，将中间体W-Y-COOH与带有氨基的PEG2相连，得到中间体W-Y-PEG2；
步骤(4)：以中间体W-Y-PEG2，氨基酸或多肽，以及带有氨基的二羧酸为原料，通过酰胺化反应制备中间体
Figure FDA0001967223820000211
其中，PEG1、PEG2、Y、W、M如权利要求1-12任一项所定义。
14.制备权利要求1-12任一项的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐的方法，包括以下步骤：
S1：制备中间体
Figure FDA0001967223820000212
S2：通过酰胺化反应使带有氨基的PEG2与Y相连，得到权利要求1-12任一项的聚乙二醇偶联药物；
优选地，S1包括以下步骤：
步骤(1)：制备W；
步骤(2)：使W与带有氨基的二羧酸中的一个羧基反应，得到中间体W-Y-COOH；
步骤(3)：以中间体W-Y-COOH，以及氨基酸或多肽为原料，通过酰胺化反应制备带有氨基的中间体
Figure FDA0001967223820000213
其中，至少一个氨基位于M上；
步骤(4)：以中间体
Figure FDA0001967223820000214
和带有羧基或活化的羧基的PEG1为原料，通过酰胺化反应制备中间体
Figure FDA0001967223820000215
其中，PEG1、PEG2、X、Y、W、M、j如权利要求1-12任一项所定义。
15.权利要求13或14的方法，步骤(1)中的W通过以下方法制备：
(1)当W为Q时，所述方法包括：以药物，氨基酸或多肽，以及带有氨基的二羧酸为原料，通过酰胺化反应制备Q；
(2)当W为
Figure FDA0001967223820000216
时，所述方法包括：以药物，氨基酸或多肽，以及带有氨基的二羧酸为原料，通过酰胺化反应制备Q；以Q，以及带有氨基的二羧酸为原料，通过酰胺化反应制备W；
(3)当W为
Figure FDA0001967223820000217
Figure FDA0001967223820000221
Figure FDA0001967223820000222
时，所述方法包括：以药物，氨基酸或多肽，以及带有氨基的二羧酸为原料，通过酰胺化反应制备Q；以药物，以及氨基酸或多肽为原料制备N3-AC3和任选的N4-AC4；以Q，N3-AC3和任选的N4-AC4，以及带有氨基的二羧酸为原料，通过酰胺化反应制备W。
16.一种药物组合物，其含有治疗和/或预防疾病有效量的权利要求1-12任一项的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐；优选地，所述组合物还含有一种或多种药学上可接受的辅料；
优选地，所述药物组合物被制成注射剂的形式。
17.权利要求1-12任一项的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防疾病(例如癌症)的药物中的用途，所述疾病为所述聚乙二醇偶联药物中的活性成分所治疗的疾病；
优选地，所述癌症选自：结肠癌、白血病、淋巴瘤、膀胱癌、骨癌、脑瘤、髓母细胞瘤、胶质瘤、乳腺癌、腺瘤/类癌、肾上腺皮质癌、胰岛细胞癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、结肠直肠癌、皮肤癌、食管癌、眼癌、胆囊癌、胃癌、头颈癌、肝癌、黑色素瘤、卡波氏肉瘤、肾癌、口腔癌、肺癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、甲状腺癌、甲状旁腺阴茎癌、前列腺癌、尿道癌、阴道癌、外阴癌、肛门癌、肉瘤，以及所述癌症的转移。
18.一种注射液，其包含权利要求1-12任一项的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐、或权利要求16的药物组合物；优选地，所述注射液以生理盐水作为载体。
19.具有以下任一结构的化合物
Figure FDA0001967223820000231
20.权利要求19的化合物在制备权利要求1-12任一项的聚乙二醇偶联药物或其药学上可接受的盐中的用途。
CN201910108226.6A 2019-02-03 2019-02-03 一种聚乙二醇偶联药物、其制备方法及用途 Active CN111514309B (zh)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910108226.6A CN111514309B (zh) 2019-02-03 2019-02-03 一种聚乙二醇偶联药物、其制备方法及用途
PCT/CN2019/089835 WO2020155497A1 (zh) 2019-02-03 2019-06-03 一种聚乙二醇偶联药物、其制备方法及用途
JP2021545303A JP7362749B2 (ja) 2019-02-03 2019-06-03 ポリエチレングリコール抱合薬ならびにその製造方法および使用
US17/426,747 US20220105189A1 (en) 2019-02-03 2019-06-03 Polyethylene glycol conjugated drug and its preparation method and use
EP19912455.3A EP3919080A4 (en) 2019-02-03 2019-06-03 POLYETHYLENE GLYCOL CONJUGATE MEDICATION, PROCESS FOR ITS PRODUCTION AND ITS USE

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910108226.6A CN111514309B (zh) 2019-02-03 2019-02-03 一种聚乙二醇偶联药物、其制备方法及用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111514309A true CN111514309A (zh) 2020-08-11
CN111514309B CN111514309B (zh) 2021-09-17

Family

ID=71840794

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910108226.6A Active CN111514309B (zh) 2019-02-03 2019-02-03 一种聚乙二醇偶联药物、其制备方法及用途

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20220105189A1 (zh)
EP (1) EP3919080A4 (zh)
JP (1) JP7362749B2 (zh)
CN (1) CN111514309B (zh)
WO (1) WO2020155497A1 (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112457297A (zh) * 2020-11-24 2021-03-09 福建医科大学 一种parp蛋白降解剂及其制备方法与应用
CN113350370A (zh) * 2021-07-07 2021-09-07 再少年(上海)细胞技术有限公司 聚乙二醇在预防和/或治疗肿瘤中的应用
CN114213283A (zh) * 2022-01-04 2022-03-22 攀枝花学院 一锅法制备[2-[1-(Fmoc-氨基)乙氧基]乙氧基]乙酸的方法
WO2022242488A1 (zh) * 2021-05-18 2022-11-24 重庆阿普格雷生物科技有限公司 聚乙二醇偶联药物及其用途

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021104120A1 (zh) 2019-11-28 2021-06-03 重庆阿普格雷生物科技有限公司 一种聚乙二醇偶联药物、其制备方法及用途
CN112843242B (zh) * 2019-11-28 2024-03-01 重庆阿普格雷生物科技有限公司 一种聚乙二醇偶联药物、其制备方法及应用

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004089420A1 (en) * 2003-04-11 2004-10-21 Biopeg Ltd. Polyethylene glycol conjugates releasing nitric oxide
CN102127154A (zh) * 2010-12-17 2011-07-20 华东师范大学 A54-gflg-dox偶联物及其偶联方法和应用
CN103656667A (zh) * 2013-10-25 2014-03-26 四川大学 负载吉西他滨的peg化肽类树状大分子靶向给药系统及其制备方法
CN103768613A (zh) * 2013-10-25 2014-05-07 四川大学 基于gflg的peg化肽类树状大分子给药系统及其制备方法
CN104987504A (zh) * 2015-04-23 2015-10-21 南京明臻医药科技有限公司 聚乙二醇化拉帕替尼及其注射剂和制备方法
CN105601903A (zh) * 2015-12-25 2016-05-25 大连理工大学 一种具有抗癌活性的高分子化合物、其制备方法和应用
CN107670050A (zh) * 2017-08-30 2018-02-09 重庆阿普格雷生物科技有限公司 基于pki‑587的抗癌中间体和聚乙二醇偶联抗癌药物、及其制备方法和应用
CN107670048A (zh) * 2017-08-30 2018-02-09 重庆阿普格雷生物科技有限公司 具有协同抗癌活性的中间体药物和聚乙二醇偶联协同抗癌药物、及其制备方法和应用

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004089420A1 (en) * 2003-04-11 2004-10-21 Biopeg Ltd. Polyethylene glycol conjugates releasing nitric oxide
CN102127154A (zh) * 2010-12-17 2011-07-20 华东师范大学 A54-gflg-dox偶联物及其偶联方法和应用
CN103656667A (zh) * 2013-10-25 2014-03-26 四川大学 负载吉西他滨的peg化肽类树状大分子靶向给药系统及其制备方法
CN103768613A (zh) * 2013-10-25 2014-05-07 四川大学 基于gflg的peg化肽类树状大分子给药系统及其制备方法
CN104987504A (zh) * 2015-04-23 2015-10-21 南京明臻医药科技有限公司 聚乙二醇化拉帕替尼及其注射剂和制备方法
CN105601903A (zh) * 2015-12-25 2016-05-25 大连理工大学 一种具有抗癌活性的高分子化合物、其制备方法和应用
CN107670050A (zh) * 2017-08-30 2018-02-09 重庆阿普格雷生物科技有限公司 基于pki‑587的抗癌中间体和聚乙二醇偶联抗癌药物、及其制备方法和应用
CN107670048A (zh) * 2017-08-30 2018-02-09 重庆阿普格雷生物科技有限公司 具有协同抗癌活性的中间体药物和聚乙二醇偶联协同抗癌药物、及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FRANCESCO M VERONESE ET AL: "PEG-Doxorubicin Conjugates: Influence of Polymer Structure on Drug Release, in Vitro Cytotoxicity, Biodistribution, and Antitumor Activity", 《BIOCONJUGATE CHEM.》 *
SU JEONG SONG ET AL: "Enzyme-responsive destabilization of stabilized plasmid-lipid nanoparticles as an efficient gene delivery", 《EUROPEAN JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES》 *
刘萍: "组织蛋白酶响应的GA修饰的PEG-GFLG-PEI-PLGA肝靶向纳米粒的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》 *
张翠芳: "聚乙二醇偶联拉帕替尼的结构设计和初步活性评价", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *
黄蕾，等: "聚乙二醇（帕布昔利布、SB-743921）联体的化学合成", 《中国处方药》 *
黄蕾: "聚乙二醇偶联（拉帕替尼与变构的PKI-587）的化学合成及生物测试", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112457297A (zh) * 2020-11-24 2021-03-09 福建医科大学 一种parp蛋白降解剂及其制备方法与应用
CN112457297B (zh) * 2020-11-24 2023-04-28 福建医科大学 一种parp蛋白降解剂及其制备方法与应用
WO2022242488A1 (zh) * 2021-05-18 2022-11-24 重庆阿普格雷生物科技有限公司 聚乙二醇偶联药物及其用途
CN113350370A (zh) * 2021-07-07 2021-09-07 再少年(上海)细胞技术有限公司 聚乙二醇在预防和/或治疗肿瘤中的应用
CN114213283A (zh) * 2022-01-04 2022-03-22 攀枝花学院 一锅法制备[2-[1-(Fmoc-氨基)乙氧基]乙氧基]乙酸的方法

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020155497A1 (zh) 2020-08-06
EP3919080A1 (en) 2021-12-08
US20220105189A1 (en) 2022-04-07
EP3919080A4 (en) 2023-01-25
CN111514309B (zh) 2021-09-17
JP7362749B2 (ja) 2023-10-17
JP2022523752A (ja) 2022-04-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111514309B (zh) 一种聚乙二醇偶联药物、其制备方法及用途
CN109843333B (zh) 具有协同抗癌活性的中间体药物和聚乙二醇偶联协同抗癌药物、及其制备方法和应用
CN110167598A (zh) Tlr激动剂化合物的多臂聚合物缀合物以及相关的免疫治疗方法
WO1994024142A1 (en) Novel sphingoglycolipid and use thereof
WO2021104120A1 (zh) 一种聚乙二醇偶联药物、其制备方法及用途
CN105407920A (zh) 靶向癌症、尤其是前列腺癌的合成性抗体模拟化合物(SyAMs)
WO2021103342A1 (zh) 一种聚乙二醇偶联药物、其制备方法及应用
CN101454309B (zh) 焦谷氨酸衍生物的合成和用途
CN111032676A (zh) 包含哈米特林衍生物的抗体药物复合物
WO2021109351A1 (zh) 一种聚乙二醇偶联药物、其制备方法及应用
JP5393482B2 (ja) 抗癌活性を有するテトラサイクリン・アントラキノン系化合物
EP4190361A1 (en) Polyethylene glycol conjugate drug, and preparation method therfor and use thereof
CN113995846B (zh) 聚乙二醇偶联药物增效剂、其制备方法及用途
WO2022242488A1 (zh) 聚乙二醇偶联药物及其用途
RU2805370C1 (ru) Лекарственное средство, представляющее собой конъюгат с полиэтиленгликолем, способ его получения и его применение
WO2018068696A1 (zh) 一种青藤碱及其衍生物的peg修饰物、其制备方法和用途
WO2022092294A1 (ja) サルコペニア関連疾患等の新規治療および予防
WO2023142754A1 (zh) Ezh1/2抑制剂及其制备和抗肿瘤治疗中的应用
WO2024109949A1 (zh) 一种抗肿瘤化合物及其应用
CN116870176A (zh) PSMA靶向的PSMA-PARPi偶联物及制备方法和应用
CN112294972A (zh) Psma激活式抗肿瘤前药cpt-y及其制备方法和应用
WO2015158306A1 (zh) 一类乙二醛酶i不可逆抑制剂及其制备方法和用途
JP2009280540A (ja) ガドリニウム化合物及びｍｒｉ用造影剤

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant