CN109843333B

CN109843333B - 具有协同抗癌活性的中间体药物和聚乙二醇偶联协同抗癌药物、及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN109843333B
Application number: CN201880003668.8A
Authority: CN
Inventors: 李高全; 汪斌; 李大军; 张倩; 黄蕾; 陈毛芬; 吴晓丹; 彭良艳; 何婷婷; 张艳艳; 唐云; 刘欢; 税举媛; 张翠芳; 李建环
Original assignee: Chongqing Upgra Biological Sci & Tech Ltd
Current assignee: Chongqing Upgra Biological Sci & Tech Ltd
Priority date: 2017-08-30
Filing date: 2018-01-22
Publication date: 2023-02-03
Anticipated expiration: 2038-01-22
Also published as: CN107670048B; CN109843333A; US20200261588A1; EP3677284A1; US11484600B2; CN107670048A; JP2020531591A; WO2019041733A1; EP3677284A4

Abstract

具有协同抗癌活性的中间体药物和聚乙二醇偶联协同抗癌药物，其制备方法和应用。该中间体药物的结构通式为(I)，聚乙二醇偶联协同抗癌药物的结构通式为(II)，上述药物能够实现多种抗癌药物之间的联合用药，避免在单独服用多种抗癌药物时由于药物之间的相互影响以及药代动力学而导致的毒性反应，且有利于克服癌症的多药耐药性，具有协同增效的作用，可用于制备抗癌药物及用于治疗癌症。

Description

具有协同抗癌活性的中间体药物和聚乙二醇偶联协同抗癌药物、及其制备方法和应用

本申请要求于2017年08月30日提交中国专利局的申请号为CN201710761572.5、名称为“具有协同抗癌活性的中间体药物和聚乙二醇偶联协同抗癌药物、及其制备方法和应用”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。

技术领域

本发明涉及癌症治疗领域，具体而言，涉及一种具有协同抗癌活性的中间体药物和聚乙二醇偶联协同抗癌药物、及其制备方法、应用和癌症治疗方法。

背景技术

癌症是一种非常复杂和致命的疾病，是发达国家和发展中国家目前正在经历的一个巨大的健康危机。在2012年，全球有超过1400万例新的癌症病例发生，到2020年，世界范围内将有1500万多个新增癌症患者，这对任何国家的社会、经济和医疗都将带来严重的影响。

癌症治疗的临床结果普遍令人失望，在很大程度上归因于这种毁灭性疾病的异质性和复杂性。传统的手术和放疗仅用于局部疾病的治疗，而激素治疗、化疗、免疫治疗和靶向治疗用于单独治疗或与别的治疗方法联用。多年来，包括化疗在内的单一和组合疗法已经发展成为有效治疗方法。当然，联合治疗的临床效果并不像预期的那样好，通常都有更高的毒性，还受限于药物成分无法以自由分子形式达到所需时空分布，也就是说，在适当的时机将药物成分运送到正确的位置。除非使用有效的药物载体，否则药物成分之间的物理化学和药代动力学性质的固有差异会阻止这种情况的发生。目前，肿瘤化疗耐药性或多药耐药性的出现已经成为肿瘤化疗研究者面临的主要挑战。

发明内容

本发明的第一方面目的在于提供一种如式I所示的具有协同抗癌活性的中间体药物或其衍生物、或其药学上可接受的盐及其制备方法、应用和治疗方法。

本发明的第二方面目的在于提供一种如式II所示的聚乙二醇偶联协同抗癌药物或其衍生物、或其药学上可接受的盐及其制备方法、应用和治疗方法。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种如式I所示的具有协同抗癌活性的中间体药物或衍生物、或其药学上可接受的盐；

其中，i＝2、3、4或5；Z选自带有氨基的二羧酸、多羧酸或其相应的酰基取代物；N选自氨基酸、二肽或多肽；AC选自带有氨基、羟基、羧基或者酰基的抗癌药物。

一种如式II所示的聚乙二醇偶联协同抗癌药物或衍生物、或其药学上可接受的盐；

其中，PEG选自单臂或多臂的聚乙二醇或聚乙二醇的衍生物；X选自

Y选自带有氨基的羧酸或其相应的酰基取代物；

如权利要求1～3任一项如式I所示的具有协同抗癌活性的中间体药物，或衍生物、或其药学上可接受的盐；

m＝0、1或2；n＝1～5；j＝PEG的臂数。

一种式I所示的具有协同抗癌活性的中间体药物或衍生物、或其药学上可接受的盐的制备方法，其包括：

将具有协同作用的至少两个抗癌药物分别与氨基酸或肽及其衍生物发生酰胺化反应，得到具有式I中N-AC结构单元的第一中间体；

将任意一个第一中间体与带有氨基的二羧酸、多羧酸或其相应的酰基取代物发生酰胺化反应，得到具有式I中Z-N-AC结构单元的第二中间体；以及将第二中间体与剩余的第一中间体发生酰胺化反应，得到式I所示的中间体药物

一种如式II所示的聚乙二醇偶联协同抗癌药物或衍生物、或其药学上可接受的盐的制备方法，其包括：

将式I所示的中间体药物与带有氨基的羧酸或其相应的酰基取代物发生酰胺化反应，得到具有式II中

结构单元的第四中间体；以及将第四中间体与聚乙二醇或其衍生物通过酰胺键偶联，得到式II所示的产品。

如式I所示的具有协同抗癌活性的中间体药物或衍生物、或其药学上可接受的盐在制备抗癌药物中的应用。

如式I所示的具有协同抗癌活性的中间体药物或其衍生物、或其药学上可接受的盐在治疗癌症中的应用。

一种抗癌药物，包括如式I所示的具有协同抗癌活性的中间体药物或其衍生物、或其药学上可接受的盐。

如式II所示的聚乙二醇偶联协同抗癌药物或衍生物、或其药学上可接受的盐在制备抗癌药物中的应用。

如式II所示的聚乙二醇偶联协同抗癌药物或衍生物、或其药学上可接受的盐在治疗癌症中的应用。

一种抗癌药物，包括如式II所示的聚乙二醇偶联协同抗癌药物或衍生物、或其药学上可接受的盐。

一种癌症的治疗方法，其采用本发明提供抗癌药物。

与现有技术相比，本发明的有益效果例如包括：

本发明以带有氨基的二羧酸或多羧酸以及氨基酸或多肽为连接件，将具有协同增效作用的至少两个抗癌药物联用，得到抗癌双药或抗癌多药，形成多种抗癌药物之间的联合用药，避免在单独服用多种抗癌药物时由于药物之间的相互影响以及药代动力学而导致的毒性反应。这种中间体药物可用于制备抗癌药物，例如制备单一的纳米药物中的多靶点有效载荷。

在上述基础上，本发明以聚乙二醇为载体，由于聚乙二醇高分子链的末端只有一个接枝位置，难以同时接枝多个抗癌药。而双药或多药联用又是解决肿瘤多药耐药性所必须的。发明人经过多年的研究，通过多步有机合成手段，解决了“如何在聚乙二醇高分子链的末端接枝多个抗癌药物”的这一难题，可以较容易地合成聚乙二醇偶联抗癌双药甚至聚乙二醇偶联抗癌多药，实现多靶点、多疗法同时给药，可以大幅度降低毒性，且有利于克服癌症的多药耐药性，具有协同增效的作用，可用于制备抗癌药物，具有重大的临床价值和广阔的市场前景。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1为第五实施例中提供的化合物I-c的合成路线图；

图2为第六实施例中提供的化合物II-c的合成路线图；

图3为第七实施例中提供的化合物I-d的合成路线图；

图4为第八实施例中提供的化合物II-d的合成路线图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

本实施方式提供一种如式I所示的具有协同抗癌活性的中间体药物或其衍生物、或其药学上可接受的盐；

由式I可知，这种中间体药物，以氨基酸或多肽为连接链，以带有氨基的二羧酸或多羧酸为连接桥，将具有协同增效作用的至少两个抗癌药物偶联在一起，形成抗癌双药或抗癌多药，与同时使用单一抗癌药相比，毒性降低，药效增强。

N选自氨基酸(例如甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸等)、二肽(例如GG，即甘氨酸-甘氨酸；GS，即甘氨酸-丝氨酸；RE，即精氨酸和谷氨酸)、或者多肽，比如三肽或四肽。其中，三肽(例如GLG，即甘氨酸-亮氨酸-甘氨酸；GFA，即甘氨酸-苯丙氨酸-丙氨酸；GLA，即甘氨酸-亮氨酸-丙氨酸)，四肽(例如GFLG，即甘氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-甘氨酸)。采用氨基酸或多肽为连接链，利用其分子结构中的氨基和羧基作为连接基团分别与抗癌药物和带有氨基的二羧酸或多羧酸进行酰胺化反应，反应活性强，且生物相溶性好。

Z选自带有氨基的二羧酸、多羧酸或其相应的酰基取代物。Z可以是带有氨基的二羧酸，Z也可以是带有氨基的多羧酸，Z还可以是带有氨基的二羧酸相应的酰基取代物，Z还可以是带有氨基的多羧酸相应的酰基取代物。当Z为带有氨基的三羧酸时，可在其上通过酰基偶联3个具有协同增效作用的抗癌药物，形成抗癌三药。同理，当Z为带有氨基的四羧酸时，可形成抗癌四药。

进一步地，Z带有的结合位点数量小于抗癌药物的数量。通常一个结合位点(例如一个羧基)可以结合一个或者一种抗癌药物，但是如果先将两个或者两种抗癌药物先结合到一起，再将结合了两个或者两种抗癌药物的有机物结合到同一个位点上，这样就可以形成同一个结合位点结合两个或两种抗癌药物。同理，同一个结合位点也可以结合三个及三个以上数量或者种类的抗癌药物。

进一步地，当Z为带有氨基的二羧酸时，Z选自谷氨酸、谷氨酸的衍生物、天冬氨酸、天冬氨酸的衍生物、带有氨基的戊二酸或带有氨基的戊二酸的衍生物中的任意一种。谷氨酸和天冬氨酸均为带有两个羧基的天然氨基酸，反应活性强，能够通过高活性的酰基偶联两个酰胺化的抗癌药物。

AC选自带有氨基、羟基、羧基或者酰基的抗癌药物，抗癌药物可以通过氨基、羟基、羧基或者酰基与氨基酸形成酰胺键，得到氨基酸修饰的抗癌药物；抗癌药物也可以通过氨基、羟基、羧基或者酰基与氨基酸与多肽形成酰胺键，得到多肽修饰的抗癌药物，便于使用Z进行偶联。

进一步地，抗癌药物包括免疫治疗癌症药物、化疗药物或靶向药物，更为优选的，至少一种AC选自免疫治疗癌症药物，至少一种AC选自化疗药物或靶向药物，且免疫治疗癌症药物与化疗药物或靶向药物具有协同作用。可选的，至少一种所述AC选自所述化疗药物，至少一种所述AC选自所述靶向药物，且所选的所述化疗药物与所述靶向药物具有协同作用。可选的，至少一种AC选自免疫治疗癌症药物，至少一种AC选自化疗药物，至少一种AC选自靶向药物，且免疫治疗癌症药物、化疗药物和靶向药物中的至少两者具有协同作用；进一步可选的，免疫治疗癌症药物、化疗药物和靶向药物中的三者具有协同作用。

由此，即可得到免疫治疗癌症药物-化疗药物联用的抗癌双药，或者免疫治疗癌症药物-靶向药物联用的抗癌双药，或者化疗药物-靶向药物联用的抗癌双药，或者免疫治疗癌症药物-化疗药物-靶向药物联用的抗癌三药，以此实现抗癌药物的多疗法联合用药。

其中，免疫治疗癌症的药物可以选自：来那度胺(Lenalidomide)、咪喹莫特(Imiquimod)、雷西莫特(Resiquimod)、NLG919，Epacadostat；

化疗药物可以选自：紫杉醇、多柔比星、5-氟脲嘧啶(5-FU)、SB-743921、贝洛替康、埃托泊苷；

靶向药物可以选自：达拉非尼、曲美替尼、帕布昔利布(Palbociclib)、ABT-888、Niraparib、去末端双甲基的PKI-587、变构的PKI-587、AZD-5363、MK-2206、拉帕替尼(Lapatinib ditosylate)、多韦替尼、Quisinostat、BIIB021。

抗癌药物还可以选自：Linifanib、MK-2206、TAK-580、SMK-17、JNJ-7706621、SNS-032、Ribociclib、Niraparib、HSP-990、XL-019、NVP-BSK805、Golotimod、Indoximod、PD-1/PD-L1inhibitor 2、PD-1/PD-L1inhibitor 1、Voreloxin、伊马替尼、Ponatinib、Dasatinib、Bosutinib、吉非替尼、Vandetanib、Sunitinib、Nintedanib、Crizotinib、和Ceritinib。

SB-743921的结构式为：

MK-2206的结构式为：

BIIB021的结构式为：

ABT-888的结构式为：

Linifanib(ABT-869)的结构式为：

Lapatinib ditosylate的结构式为：

MK-2206 2HCl的结构式为：

TAK-580(MLN2480)的结构式为：

SMK-17的结构式为：

JNJ-7706621的结构式为：

SNS-032(BMS-387032)的结构式为：

HSP-990的结构式为：

XL-019的结构式为：

NVP-BSK805的结构式为：

PD-1/PD-L1inhibitor 2的结构式为：

PD-1/PD-L1inhibitor 1的结构式为：

NLG919的结构式为：

伊马替尼，包括去末端甲基的伊马替尼，其结构式为：

Ponatinib，包括去末端甲基的Ponatinib，其结构式为：

Bosutinib，包括去末端三级胺上甲基的Bosutinib，其结构式为：

吉非替尼，包括将末端吗啉环变构为一级胺的吉非替尼，其结构式为：

Vandetanib，包括去末端甲基的Vandetanib，其结构式为：

Sunitinib，包括将末端三级胺变构为一级胺的Sunitinib，其结构式为：

Nintedanib，包括去末端三级胺甲基的Nintedanib，其结构式为：

进一步地，抗癌药物还可以选自由苯丁酸氮介、美法仑、氮甲、洛莫司汀、司莫司汀、链佐星、氯脲霉素、卡铂、奥沙利铂、洛铂、替加氟、卡莫氟、氟铁龙、阿糖胞苷、依诺他宾、棕榈酰阿糖胞苷、安西他宾、氮杂胞苷、巯嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁、甲氨蝶呤、放线菌素D、博来霉素、柔红霉素、表柔比星、佐柔比星、阿柔比星、米托蒽醌、比生群、丝裂霉素C、羟喜树碱、喜树碱、伊立替康、拓扑替康、鲁比替康、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、多西他赛、尼洛替尼、厄诺替尼、埃克替尼、阿法替尼、索拉非尼、帕唑替尼、凡德他尼、维罗非尼、克唑替尼、鲁索利替尼、阿西替尼、瑞戈非尼、卡博替尼、曲美替尼、达拉非尼、依鲁替尼、伊德利赛、乐伐替尼、硼替佐米、卡非佐米、依维莫司、西罗莫司、托法替尼、奥拉帕尼、阿帕西普、罗米地辛、贝利司他、帕比司他、帕利夫明、坦西莫司、伏立诺他、idelalisib,AZD9291,Cobimetinib,vismodegib,ixazomib,sonidegib,omacetaxine mepesuccinate,Venetoclax,Enzalutamide,Calicheamicins,Autistatins,Maytansinoids、雌二醇、他莫昔芬、己烯雌酚、托瑞米芬、艾多昔芬、米普昔芬、屈洛昔芬、雷洛昔芬、阿佐昔芬、氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、睾酮、5α-二氢睾酮、甲睾酮、非那雄胺、度他雄胺、地塞米松、视黄酸、烟酸、烟酰胺、替莫唑胺、达卡巴嗪、依托泊苷、小白菊内脂、白藜芦醇、吉西他滨、二甲双胍、三氟拉嗪、甲硫哒嗪、盐霉素、姜黄素、BKM120、BYL719、pictilisib、XL765、PF-05212384、PF-04691502、GS-9820、dactolisib、copanlisib、GDC-0941、GSK2141795、RG7422、BGT226、XL147、SAR260301、GSK2636771、GSK2269557、GSK2126458、GSK1059615、RG7604、RG7666、AMG319、MLN1117、AZD5363、AZD8186、AZD6482、MK-8669、BGT226、GSK1059615、AZD8055、ipatasertib、GSK2110183、GSK690693、RG7440、Vemurafenib、LGX818、RG7304、MLN2480、Trametinib、MEK162、pimasertib、RG7167,TAK-733、Gefitinib、erlotinib、afatinib、dacomitinib、AZD8931、AEE788、BGJ398、LY2874455、AZD4547、TKI258、motesanib、Fostamatinib、GS-9973、TAK-659、MLN8237、AZD1152、tozasertib、AMG 900、MK-5108、TAK-901、GSK1070916、PF-03814735、LDK378、RG7853、RG7601、ABT-199、ABT-737、ABT-263、SAR405838、RG7388、JNJ-26854165、Tofacitinib、ruxolitinib、momelotinib、baricitinib、LY2784544、GSK2586184、GLPG0634、AZD1480、foretinib、LY2801653,SAR125844,AMG 208,AMG 337、Vorinostat,romidepsin,LBH589,JNJ-26481585、erismodegib,BMS-833923,LY2940680,PF-04449913、MK-8776,LY2603618,RG7741,AZD7762、olaparib,rucaparib,AZD2461、dinaciclib,LEE011,LY2835219,BAY 1000394,AZD5438、losmapimod,dilmapimod,LY2228820、MK-0752,PF-03084014，LY3039478，

组成的组中的至少两种。

更进一步地，式I中i＝2，AC选自Veliparib和变构的PKI-587组成的组、帕布昔利布(英文名：Palbociclib，简称PCB)和变构的PKI-587组成的组、拉帕替尼和去末端双甲基的PKI-587组成的组、拉帕替尼和AZD5363组成的组、咪喹莫特和紫杉醇组成的组、或来那度胺和去末端双甲基的PKI-587组成的组。这几组抗癌药物均表现出一定的协同增效性，可用于制备抗癌双药。

其中，变构的PKI-587的结构为

去末端双甲基的PKI-587的结构为

AZD5363的结构式为

优选地，该中间体药物可以是如下任一化合物：

其中，ABT为ABT-888，PKI为变构的PKI-587；

其中，PCB为帕布昔利布，PKI为变构的PKI-587；

其中，LPT为拉帕替尼，AZD为AZD5363；

其中，LPT为拉帕替尼，PKI为变构的PKI-587；

其中，LPT为拉帕替尼，PKI_a为去末端双甲基的PKI-587。

上述如式I所示的中间体药物的制备方法，其包括：

步骤S1:将具有协同作用的至少两个所述抗癌药物分别与氨基酸、氨基酸的衍生物、二肽、二肽的衍生物、多肽或多肽的衍生物发生酰胺化反应，得到具有所述式I中N-AC结构单元的第一中间体。

优选地，所述第一中间体的合成方法包括：将带有氨基保护基团的氨基酸、氨基酸的衍生物、二肽、二肽的衍生物、多肽或多肽的衍生物在多肽缩合试剂的存在下，与抗癌药物进行酰胺化连接后，氨基去保护。

其中，多肽缩合试剂包括HBTU、HOBT、HBTU。反应中还加入了生物碱DIEA(N,N-二异丙基乙胺)，反应温度为-10～10℃，优选为-4～4℃。

为了增强反应的特异性，氨基酸或多肽及其衍生物上的氨基在反应前使用氨基保护基团进行保护，氨基保护基团为烷样羰基类氨基保护基，例如可以是叔丁氧羰基(Boc)、笏甲氧羰基(Fmoc)、苄氧羰基(Cbz)、三甲基硅乙氧羰基(Teoc)等。

步骤S2:将任意一个所述第一中间体与带有氨基的二羧酸、带有氨基的多羧酸、带有氨基的二羧酸相应的酰基取代物或者带有氨基的多羧酸相应的酰基取代物发生酰胺化反应，得到具有所述式I中Z-N-AC结构单元的第二中间体。

优选的，所述第二中间体的合成方法包括：将第一中间体与同时带有氨基保护基团和羧基保护基团的所述带有氨基的二羧酸、多羧酸或其相应的酰基取代物在PyAOP的存在下与第一中间体进行酰胺化连接后，羧基去保护。

更进一步的选择使用氨基被保护的谷氨酸叔丁酯、天冬氨酸叔丁酯，或者使用Fmoc保护的谷氨酸叔丁酯、Fmoc保护的天冬氨酸叔丁酯。同时保护氨基和羧基，有利于提高反应速率，减少副产物，降低偶联难度。

步骤S3:将所述第二中间体与剩余的所述第一中间体发生酰胺化反应，得到式I所示的中间体药物

优选的，式I所示的所述中间体药物的合成方法还包括：将所述第二中间体与至少一个所述第一中间体在PyAOP以及2，4，6-三甲基吡啶的存在下于-10℃～10℃发生酰胺化反应，氨基去保护。

进一步地，先将至少两个或者两种抗癌药物先结合到一起，再将结合了至少两个或者两种抗癌药物的有机物与氨基酸或肽及其衍生物发生酰胺化反应，所述式I所示的药物中间体至少一个结合位点连接有至少两个或者两种抗癌药物。

该制备方法中选择氨基酸或多肽为连接链，制得酰胺化的抗癌药物，即第一中间体，降低至少两个抗癌药物同时与带有氨基的多羧酸偶联时的空间位阻，降低反应难度。且在该中间体药物中涉及的反应类型均为酰胺化反应，酰胺化反应的选择性高、反应速率块、异构体副产物少，因此使用该合成方法所得产品的收率高、反应速度快。由该方法制备的该具有协同抗癌活性的中间体药物或其衍生物、或其药学上可接受的盐，可用于制备抗癌药物，如制备单一的纳米药物中的多靶点有效载荷。制备抗癌药物时，可以添加赋形剂、或者制成各种便于给药的剂型。

上述具有协同抗癌活性的中间体药物或其衍生物、或其药学上可接受的盐，或者相应的抗癌药物可以用于治疗癌症。

本实施方式还提供一种如式II所示的聚乙二醇偶联协同抗癌药物或其衍生物、或其药学上可接受的盐；

Y选自带有氨基的羧酸或其相应的酰基取代物；

如式I所示的具有协同抗癌活性的中间体药物，或衍生物、或其药学上可接受的盐；

m＝0、1或2；n＝1～5；j＝PEG的臂数。

本实施方式提供的式II化合物，以聚乙二醇为载体，通过延长链(Y)与上述制备得到的中间体药物

偶联，制得聚乙二醇偶联协同抗癌药物或衍生物，其不仅保留了抗癌药物各自的性能，还具有协同增效的作用，与单一的抗癌药物或者与

相比，与聚乙二醇偶联后抗癌药物联用后毒性大幅度降低、水溶性和生物稳定性提高，且具有显著的被动靶向性，以及极低的多药耐药性。

PEG选自单臂或多臂的聚乙二醇或聚乙二醇的衍生物，PEG可以是单臂的聚乙二醇或者单臂的聚乙二醇的衍生物，也可以是多臂的聚乙二醇或者多臂的聚乙二醇的衍生物。优选地，PEG为单臂、双臂、四臂或八臂的聚乙二醇，或者PEG为单臂、双臂、四臂或八臂的聚乙二醇的衍生物；更为优选的，PEG的分子量为12000、20000、或40000道尔顿。

进一步的，Y选自

其中，a＝0～8；b＝0～8；a、b不同时为0。可选的，a和b均为整数。Y为延长链，有利于增加支链的数量，降低与聚乙二醇偶联的难度，提高聚乙二醇偶联协同抗癌药物或衍生物中抗癌药物的释放效率。

更为优选地，所述Y选自

(n＝1～1000)、

较为具体的，该聚乙二醇偶联协同抗癌药物或衍生物、或其药学上可接受的盐，其为如下任一化合物：

其中，ABT为ABT-888，PKI为变构的PKI-587；

其中，PCB为帕布昔利布，PKI为变构的PKI-587；

其中，LPT为拉帕替尼，AZD为AZD5363；

其中，LPT为拉帕替尼，PKI为变构的PKI-587；

其中，LPT为拉帕替尼，PKI_a为去末端双甲基的PKI-587。

一种如式II所示的聚乙二醇偶联协同抗癌药物或其衍生物、或其药学上可接受的盐的制备方法，其包括：

步骤S1：将式I所示的中间体药物与带有氨基的羧酸或其相应的酰基取代物发生酰胺化反应，得到具有式II中

结构单元的第四中间体。

优选的，所述第四中间体的合成方法包括：将带有氨基保护基团的所述带有氨基的羧酸或其相应的酰基取代物在多肽缩合试剂的存在下，与所述第三中间体进行酰胺化连接后，氨基去保护。

步骤S2：将第四中间体与聚乙二醇或其衍生物通过酰胺键偶联，得到式II所示的产品。

从反应路线上分析，合成这种聚乙二醇偶联协同抗癌药物或衍生物还有一种方式，即先将一种抗癌药物偶联到聚乙二醇上之后，得到抗癌药物-聚乙二醇复合物；再将另一种或几种抗癌药物与所得到的抗癌药物-聚乙二醇复合物反应偶联得到以聚乙二醇为载体的抗癌双药或者抗癌多药。发明人经多年研究，发现在得到抗癌药物-聚乙二醇复合物后，由于空间位阻及反应的能垒高，很难在其结构上再引入第二个抗癌药物，采用这种方法合成时，产物收率低、副产物多，难以在工业上放大生产。而本实施方式提供的这种制备方法，即先合成抗癌双药或者抗癌多药，再将其通过延长链与聚乙二醇偶联，制法简单、反应温和、反应速率快、产率高，适合于工业化生产。

这种聚乙二醇偶联抗癌双药甚至聚乙二醇偶联抗癌多药，能够实现多靶点、多疗法同时给药，可以大幅度降低毒性，且有利于克服癌症的多药耐药性，具有协同增效的作用，可用于制备抗癌药物，具有重大的临床价值和广阔的市场前景。

聚乙二醇偶联抗癌双药甚至聚乙二醇偶联抗癌多药或其衍生物、或其药学上可接受的盐，还可以进一步被加工成其他形式的抗癌药物，可以添加赋形剂、或者制成各种便于给药的剂型。

上述聚乙二醇偶联抗癌双药甚至聚乙二醇偶联抗癌多药或其衍生物、或其药学上可接受的盐，或者相应的抗癌药物可以用于治疗癌症。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述：

第一实施例

合成如式I-1所示的具有协同抗癌活性的中间体药物：

实施例1-1

制备：

将甘氨酸(11.1194g，148.12mmol)加入1L圆底烧瓶中，加入1,4-二氧六环(150ml)溶解，加入磁子，加入2N NaOH(88.88ml，177.78mmol)，搅拌条件下加入Boc酸酐(48.5g，222.22mmol)。反应结束，将反应液移至旋转蒸发仪下浓缩，将浓缩液转移到1L分液漏斗中，加入乙醚100ml洗涤，重复两次。分离水相及有机相，水相加入1mol/L盐酸调pH至pH＝4。乙酸乙酯萃取水相(150ml×5),合并有机相，有机相加入无水硫酸钠干燥，抽滤，甲苯除水，蒸干，得化合物A-1，产率为100％。

实施例1-2

制备：

在500ml圆底烧瓶中加入ABT-888(4.8448g，19.8301mmol，上海楼岚)，化合物A-1(4.1691g，23.7962mmol)，HBTU(11.2806g，29.7452mmol)，HOBT(4.0192g，29.7452mmol)，用N,N-二甲基甲酰胺(80ml)溶解。将溶液在0℃低温恒温反应浴中冷却20分钟，然后缓慢滴加DIEA(15.53ml，89.2356mmol)。2小时后移至室温，搅拌过夜。将反应液倒入饱和NaHCO₃溶液(200mL)中，用乙酸乙酯萃取(200mL×3)。然后用饱和碳酸氢钠溶液(200mL×2)淋洗，有机相用无水MgSO₄干燥，抽滤，加入硅胶粉做固体溶液。干法上样，柱层析二氯甲烷至7％甲醇/3％氨水/二氯甲烷梯度洗脱。收集产品，蒸干得化合物B-1 9.7g，产率100％。

实施例1-3

制备

向500ml圆底烧瓶中加入化合物B-1(7.8g，19.4271mmol),加入二氯甲烷80ml溶解，搅拌条件下加入TFA(29.77ml，388.5430mmol)，室温过夜搅拌反应，反应结束，将反应液浓缩，加入适量甲醇，使粗品溶解，并加入适量碳酸氢钠固体粉末中和多余的TFA，中和结束后，抽滤，滤液中加入适量硅胶粉做成固体溶液，干法上样，柱层析，1％甲醇/二氯甲烷至5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，至1％氨水/5％甲醇/二氯甲烷至4％氨水/8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱。收集产品，蒸干得化合物C-1 4.8740g，产率87％。

实施例1-4

制备

将化合物C-1(4.7g,15.5887mmol)、Fmoc保护的谷氨酸叔丁酯(9.2862g,21.8242mmol)、PyAOP(11.3787g,21.8242mmol)置于250ml圆底烧瓶中，然后加入100mlDMF，将混合液置于-5℃条件下搅拌30min，在此条件下缓慢滴加2,4,6-三甲基吡啶(2.06ml,15.5887mmol)，滴加完毕后，低温下反应2h，然后将反应液转移至零度冰箱中搅拌反应1天。反应结束，将反应液转移至2L的圆底烧瓶中，然后加入约800ml乙醚进行沉降，沉降后加入硅胶粉做固体溶液。干法上样，柱层析，1％甲醇/二氯甲烷至7％甲醇/二氯甲烷进行梯度洗脱，收集浓缩产品，得化合物D-1 9.6957g，产率为85.6％。

实施例1-5

制备

向300ml圆底烧瓶中加入化合物D-1(9.6957g，13.3366mmol),加入二氯甲烷50ml溶解，搅拌条件下加入TFA(20.5ml，266.7318mmol)，室温过夜搅拌反应，反应结束，将反应液浓缩，加入适量甲醇，使粗品溶解，并加入适量碳酸氢钠固体粉末中和多余的TFA，中和结束后，抽滤，滤液中加入适量硅胶粉做成固体溶液，干法上样，柱层析，3％甲醇/二氯甲烷至8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱。蒸干，得化合物E-1 8.4g，产率93.9％。

ITMS+c ESI Full ms[120.00-1000.00][M+H⁺]：653.40，[M+Na⁺]：675.40，[M+K⁺]：691.32。

¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)δ12.70-12.00(m,1H),9.52-8.25(m,1H),8.25-7.75(m,4H),7.80-7.52(m,4H),7.49-7.10(m,4H),4.35-4.15(m,3H),4.15-3.90(m,3H),3.90-3.70(m,4H),2.75-2.60(m,1H),2.20-2.15(m,1H),2.15-1.95(m,2H),1.95-1.88(m,3H),1.86-1.81(m,1H),1.76-1.65(m,1H)。

实施例1-6

制备

在500ml圆底烧瓶中加入变构的PKI-587(10g，17.43071mmol，长沙康鹏)，化合物A-1(3.665g，20.9169mmol)，HBTU(9.9156g，26.1461mmol)，HOBT(3.533g，26.1461mmol)，用N,N-二甲基甲酰胺(80ml)溶解。将溶液在0℃低温恒温反应浴中冷却20分钟，然后缓慢滴加DIEA(13.65ml，78.4382mmol)。2小时后移至室温，搅拌过夜。将反应液倒入饱和NaHCO₃溶液(200mL)中，用乙酸乙酯萃取(200mL×3)。合并有机相，有机相中加入硅胶粉做固体溶液，干法上样，柱层析，1％甲醇/二氯甲烷至5％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，至3％氨水/6％甲醇/二氯甲烷洗脱。蒸干得化合物F-1，产率100％。

实施例1-7

制备

向500ml圆底烧瓶中加入化合物F-1(12.7314g，17.4307mmol),加入二氯甲烷100ml溶解，搅拌条件下加入TFA(26.7ml，348.614mmol)，室温过夜搅拌反应，反应结束，将反应液浓缩，加入适量甲醇，使粗品溶解，并加入适量碳酸氢钠固体粉末中和多余的TFA，中和结束后，抽滤，滤液中加入适量硅胶粉做成固体溶液，干法上样，柱层析，二氯甲烷至3％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，至2％氨水/5％甲醇/二氯甲烷至6％氨水/7％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱。收集产品，蒸干得化合物G-1 6.6g，产率60.1％

实施例1-8

制备

将化合物E-1(3.8784g,5.9458mmol)、化合物G-1(2.5g,3.9638mmol)、PyAOP(3.10g,5.9458mmol)置于200ml圆底烧瓶中，然后加入20ml DMF，将混合液置于-5℃条件下搅拌30min，在此条件下缓慢滴加2,4,6-三甲基吡啶(0.52ml,3.9638mmol)，滴加完毕后，低温下反应2h，然后将反应液转移至零度冰箱中搅拌反应1天。第二天，追加11-58(1.0g，1.5855mmol)，2,4,6-三甲基吡啶(0.208ml,1.5855mmol)，将反应液转移至零度冰箱中反应，反应结束，将反应液转移至2L的圆底烧瓶中，然后加入无水乙醚进行沉降，加入硅胶粉做固体溶液，干法上样，柱层析，1％甲醇/二氯甲烷至6％甲醇/二氯甲烷进行梯度洗脱，至2％氨水/6％甲醇/二氯甲烷至4％氨水/7％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱收集浓缩产品，得化合物H-1 3.3g，产率78％。

实施例1-9

制备

向500ml圆底烧瓶中加入化合物H-1(3.25g，2.5700mmol),加入DMF(15ml)溶解，搅拌条件下加入吗啉(3.7ml，77.0995mmol)，室温条件下搅拌3小时，反应结束。将反应液转移至2L圆底烧瓶中，加入无水乙醚沉降，除去乙醚相，沉降物用适量的甲醇/二氯甲烷溶解，抽干。湿法上样，柱层析，5％甲醇/二氯甲烷，至4％氨水/9％甲醇/二氯甲烷洗脱。蒸干，得化合物I-1 2.7g，产率100％。

ITMS+c ESI Full ms[300.00-1600.00][M+H⁺]:1043.61,[M+Na⁺]:1065.64

¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)δ12.70-12.30(m,1H),9.35-9.20(m,1H),9.10-8.95(m,2H),8.35-8.25(m,2H),8.15-8.05(m,1H),7.85-7.75(m,1H),7.70-7.65(m,1H),7.60-7.50(m,4H),7.40-7.35(m,2H),7.30-7.20(m,1H),4.15-4.05(m,6H),4.03-3.95(m,2H),3.96-3.90(m,2H),3.90-3.70(m,11H),3.54-3.43(m,7H),3.42-3.40(m,1H),3.15-3.10(m,1H),2.25-2.14(m,3H),2.14-2.06(m,2H),2.06-1.97(m,3H),1.96-1.92(m,1H),1.90-1.86(m,3H),1.85-1.80(m,1H),1.62-1.50(m,1H)。

第二实施例

合成如式D-2所示的聚乙二醇偶联协同抗癌药物或衍生物：

实施例2-1

制备

向1L圆底烧瓶中加入磁子，加入H₂NCH₂CH₂OCH₂CH₂OH(9.542ml，95.1113mmol)，加入二氯甲烷150ml溶解，加入三乙胺(26.5133ml，190.2226mmol)，搅拌条件下加入Boc酸酐(24.9096g，114.1335mmol)。反应结束，将反应液转移至旋转蒸发仪下浓缩，加入甲醇溶解，搅拌条件下加入碳酸氢钠粉末(13g)中和三乙胺，抽滤，加入硅胶粉做固体溶液。干法上样，柱层析10％乙酸乙酯/石油醚至50％乙酸乙酯/石油醚梯度洗脱，3％甲醇/乙酸乙酯至6％甲醇/乙酸乙酯梯度洗脱。收集产品，蒸干得到化合物

16.3341g，产率83.77％。

将化合物

(16.334g，75.581mmol)放入1L圆底烧瓶中，加入四氢呋喃200ml，将反应液置于-5℃条件下搅拌，通氮气保护下通过分液器逐滴滴加叔丁醇钾(75.58ml，75.581mmol)，40min后，加入溴乙酸乙酯(10.56ml，95.4972mmol)，将温度调至0℃，搅拌三小时后，将反应液转移至室温搅拌过夜。反应完毕，向反应液中加入100ml水，置于旋转蒸发仪下浓缩。将反应液转移至1L的分液漏斗中，加入100ml水，乙酸乙酯萃取(100ml×2)，合并有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，加入硅胶粉做成固体溶液，干法上样，柱层析，用10％乙酸乙酯/石油醚至35％乙酸乙酯/石油醚进行梯度洗脱。收集产品，蒸干得化合物

15.0g，产率68.13％

将化合物

(15g，51.4862mmol)放入500ml圆底烧瓶中，加入1,4-二氧六环(100ml)，在搅拌条件下加入氢氧化锂(5.28g，113.2697mmol)，滴加水，直至溶液呈现澄清的黄色。反应完成后，将反应液置于旋转蒸发仪下旋转浓缩，将反应液转移至1L分液漏斗中，加入50ml水，加入正己烷:乙醚1:1(200ml×2)萃取。分液后，向水相中滴加盐酸(1mol/L)直至pH＝1.乙酸乙酯萃取水相(100ml×4)，合并有机相，无水硫酸钠干燥有机相，抽滤，甲苯除水，于旋转蒸发仪上旋转蒸干，得化合物A-2。

实施例2-2

制备

在500ml圆底烧瓶中加入化合物I-1(2.5g，2.3965mmol)，化合物A-2(0.9458g，3.5974mmol)，HBTU(1.3633g，3.5974mmol)，HOBT(0.4857g，3.5974mmol)，用N,N-二甲基甲酰胺(30ml)溶解。将溶液在0℃低温恒温反应浴中冷却20分钟，然后缓慢滴加DIEA(1.9ml，10.7481mmol)。2小时后移至室温，搅拌过夜。反应结束，将反应液转移至2L圆底烧瓶中，加入无水乙醚沉降，除去乙醚相，沉降物用适量的甲醇/二氯甲烷溶解，抽干。湿法上样，柱层析，4％甲醇/二氯甲烷，至2％氨水/4％甲醇/二氯甲烷至3％氨水/8％甲醇/二氯甲烷洗脱。蒸干，化合物B-2 3.0g，产率97％。

实施例2-3

制备

向500ml圆底烧瓶中加入化合物B-2(2.95g，2.2890mmol),加入二氯甲烷20ml溶解，搅拌条件下加入TFA(3.5ml，45.7932mmol)，室温过夜搅拌反应，反应结束，将反应液浓缩，加入适量甲醇，使粗品溶解，并加入适量碳酸氢钠固体粉末中和多余的TFA，中和结束后，抽滤，湿法上样，柱层析，5％甲醇/二氯甲烷洗脱，至2％氨水/6％甲醇/二氯甲烷至3％氨水/8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱。收集产品，蒸干得化合物C-2 2.6229g，产率96.5％

ITMS+c ESI Full ms[400.00-1800.00][M+H⁺]:1188.78,[M+Na⁺]:1210.69。

¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)δ12.60-12.40(m,1H),9.45-9.20(m,3H),8.30-8.25(m,2H),8.20-8.10(m,1H),8.00-7.92(m,1H),7.80-7.75(m,2H),7.75-7.70(m,1H),7.70-7.60(m,1H),7.60-7.50(m,5H),7.40-7.35(m,2H),4.40-4.35(m,1H),4.15-4.00(m,3H),4.00-3.85(m,6H),3.88-3.75(m,8H),3.75-3.70(m,2H),3.70-3.60(m,9H),3.60-3.55(m,7H),3.55-3.40(m,2H),3.20-3.10(m,4H),3.00-2.90(m,2H),2.20-2.05(m,4H),2.05-1.95(m,3H),1.90-1.85(m,4H),1.80-1.70(m,1H)。

实施例2-4

制备

向200ml圆底烧瓶中加入化合物C-2(2.3766g，2mmol)，加入二氯甲烷15ml溶解，并加入DMF(15ml)助溶。加入高分子聚乙二醇4ARM-SCM-40K(10g，0.25mmol，北京键凯)，加入磁子，搅拌器12转/min条件下搅拌。反应完成，将反应液转移至2L圆底烧瓶中，加入无水乙醚沉降，抽滤。抽滤物加入二氯甲烷溶解，湿法上样。柱层析，二氯甲烷至5％甲醇/二氯甲烷，至4％氨水/8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱。收集产品，蒸干得化合物D-2 10.2g。

MALDI-TOF-MS[25000-60000]42124-45870；最高峰：44322

¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)δ12.60-12.40(m,4H),9.30-9.20(m,4H),9.10-9.05(m,4H),9.05-8.95(m,4H),8.30-8.25(m,10H),8.17-8.05(m,4H),7.95-7.90(m,2H),7.73-7.75(m,5H),7.75-7.65(m,5H),7.65-7.58(m,5H),7.58-7.52(m,17H),7.40-7.35(m,9H),7.23-7.18(m,4H),7.15-7.06(m,3H),4.40-4.30(m,5H),4.10-4.00(m,5H),4.00-3.90(m,5H),3.90-3.85(m,24H),3.80-3.70(m,20H),3.60-3.45(m,9130H),3.45-3.40(m,44H),3.40-3.35(m,64H),3.20-3.15(m,4H),3.06-2.85(m,9H),2.40-2.30(m,15H),2.05-1.95(m,12H),1.80-1.70(m,9H)。

第三实施例

合成如式I-3所示的具有协同抗癌活性的中间体药物：

实施例3-1

制备

在500ml圆底烧瓶中加入帕布昔利布(6.0g，13.4078mmol，北京安司莫森)，化合物A-1(2.8189g，16.0894mmol)，HBTU(7.6272g，20.1117mmol)，HOBT(2.7191g，20.1117mmol)，用N,N-二甲基甲酰胺(75ml)溶解。将溶液在0℃低温恒温反应浴中冷却20分钟，然后缓慢滴加DIEA(10.5ml，60.3351mmol)。2小时后移至室温，搅拌过夜。将反应液倒入饱和NaHCO₃溶液(200mL)中，用乙酸乙酯萃取(200mL×2)合并有机相，有机相用无水MgSO4干燥，抽滤。蒸干得化合物

产品8.4g，产率100％。

向300ml圆底烧瓶中加入化合物B-3(8.1077g，13.4078mmol),加入二氯甲烷80ml溶解，搅拌条件下加入TFA(20.5ml，268.156mmol)，室温过夜搅拌反应，反应结束，将反应液浓缩，加入适量甲醇，使粗品溶解，并加入适量碳酸氢钠固体粉末中和多余的TFA，中和结束后，抽滤，滤液中加入适量硅胶粉做成固体溶液，干法上样，柱层析，1％甲醇/二氯甲烷至2％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，至1％氨水/4％甲醇/二氯甲烷至5％氨水/7％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱。收集产品，蒸干得化合物C-3 5.0428g，产率75％

实施例3-2

制备

将化合物C-3(5.0428g,9.9917mmol)、Fmoc保护的谷氨酸叔丁酯(5.9520g,13.9884mmol)、PyAOP(7.2933g,13.9884mmol)置于300ml圆底烧瓶中，然后加入100ml DMF，将混合液置于-5℃条件下搅拌30min，在此条件下缓慢滴加2,4,6-三甲基吡啶(1.32ml,9.9917mmol)，滴加完毕后，低温下反应2h，然后将反应液转移至零度冰箱中搅拌反应1天。反应结束，将反应液转移至2L的圆底烧瓶中，然后加入约500ml乙醚进行沉降，沉降后加入硅胶粉做固体溶液。干法上样，柱层析，1％甲醇/二氯甲烷至7％甲醇/二氯甲烷进行梯度洗脱，收集浓缩产品，得化合物

7.9g产率86.7％。

向500ml圆底烧瓶中加入化合物D-3(7.9g，8.6637mmol),加入二氯甲烷80ml溶解，搅拌条件下加入TFA(13.3ml，170.3274mmol)，室温过夜搅拌反应，反应结束，将反应液转移至旋转蒸发仪下浓缩，加入少量二氯甲烷溶解，加入正己烷沉降，反复沉降三次，可除去大部分杂质。产品加入适量甲醇，使粗品溶解，并加入适量碳酸氢钠固体粉末中和多余的TFA，中和结束后，抽滤。蒸干化合物E-3 7g，产率94.4％

ITMS+c ESI Full ms[200.00-1600.00][M+H⁺]:856.61,[M+Na⁺]:878.53,[M+K⁺]:894.52

¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)δ12.30-11.85(m,1H),10.30-10.20(m,1H),9.00-8.95(m,1H),8.10-8.05(m,1H),8.05-7.95(m,1H),7.85-7.80(m,1H),7.75-7.70(m,2H),7.65-7.60(m,1H),7.60-7.50(m,1H),7.50-7.40(m,2H),7.40-7.30(m,2H),5.90-5.75(m,1H),4.15-4.05(m,2H),4.05-3.95(m,1H),3.25-3.15(m,3H),2.65-2.60(m,2H),2.45-2.40(m,4H),2.35-2.30(m,5H),2.28-2.15(m,2H),2.00-1.83(m,3H),1.82-1.70(m,4H),1.65-1.52(m,2H),1.30-1.20(m,1H)。

实施例3-3

制备

将化合物E-3(6.1075g,7.1349mmol)、化合物G-1(2.5g,3.9639mmol)、PyAOP(3.10g,5.9459mmol)置于200ml圆底烧瓶中，然后加入40ml DMF，将混合液置于-5℃条件下搅拌30min，在此条件下缓慢滴加2,4,6-三甲基吡啶(0.52ml,3.9639mmol)，滴加完毕后，低温下反应2h，然后将反应液转移至零度冰箱中搅拌反应1天。第二天，追加11-58(0.5g，0.7928mmol)，2,4,6-三甲基吡啶(0.10ml,0.7928mmol)，将反应液转移至零度冰箱中反应，反应结束，将反应液转移至2L的圆底烧瓶中，然后加入无水乙醚进行沉降，沉降抽干，湿法上样，柱层析，3％甲醇/二氯甲烷至6％甲醇/二氯甲烷进行梯度洗脱，至2％氨水/5％甲醇/二氯甲烷至3％氨水/6％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱收集浓缩产品，得化合物

1.5g，产率100％。

向500ml圆底烧瓶中加入H-3(6.4g，4.3606mmol),加入DMF15ml溶解，搅拌条件下加入吗啉(11.5ml，0.1308mmol)，室温条件下搅拌3小时，反应结束。将反应液转移至2L圆底烧瓶中，加入无水乙醚沉降，除去乙醚相，沉降物用适量的甲醇/二氯甲烷溶解，抽干。湿法上样，柱层析，4％甲醇/二氯甲烷至5％甲醇/二氯甲烷洗脱，至2％氨水/5％甲醇/二氯甲烷至4％氨水/8％甲醇/二氯甲烷洗脱。蒸干，得化合物I-3 5.9g，产率100％。

ITMS+c ESI Full ms[200.00-1600.00][M+H⁺]:1246.82,[M+Na⁺]:1268.76

¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)δ10.20-10.00(m,1H),9.10-9.00(m,1H),9.05-8.90(m,2H),8.35-8.25(m,2H),8.10-8.00(m,2H),7.90-7.80(m,1H),7.60-7.45(m,5H),7.45-7.35(m,2H),5.85-5.80(m,1H),4.17-4.12(m,1H),4.06-4.02(m,1H),4.00-3.97(m,1H),3.97-3.90(m,2H),3.90-3.70(m,8H),3.70-3.55(m,13H),3.55-3.40(m,8H),3.30-3.27(m,3H),3.25-3.20(m,3H),3.15-3.10(m,2H),2.30-2.20(m,4H),1.95-1.85(m,3H),1.84-1.72(m,3H),1.70-1.50(m,3H)。

第四实施例

合成如式C-4所示的聚乙二醇偶联协同抗癌药物或衍生物：

实施例4-1

制备

在500ml圆底烧瓶中加入化合物I-3(5.8g，4.6564mmol)，化合物A-2(1.8376g，6.9846mmol)，HBTU(2.4688g，6.9846mmol)，HOBT(1.3086g，6.9846mmol)，用N,N-二甲基甲酰胺(50ml)溶解。将溶液在0℃低温恒温反应浴中冷却20分钟，然后缓慢滴加DIEA(3.65ml，20.9538mmol)。2小时后移至室温，搅拌过夜。反应结束，将反应液转移至2L圆底烧瓶中，加入无水乙醚沉降，除去乙醚相，沉降物用适量的甲醇/二氯甲烷溶解，抽干。湿法上样，柱层析，4％甲醇/二氯甲烷，至2％氨水/4％甲醇/二氯甲烷至3％氨水/8％甲醇/二氯甲烷洗脱。蒸干，得化合物

6.2g，产率89.8％

向500ml圆底烧瓶中加入化合物A-4(6.1g，4.0893mmol),加入二氯甲烷20ml溶解，搅拌条件下加入TFA(6.3ml，81.7859mmol)，室温过夜搅拌反应，反应结束，将反应液浓缩，加入适量甲醇，使粗品溶解，并加入适量碳酸氢钠固体粉末中和多余的TFA，中和结束后，抽滤，湿法上样，柱层析，5％甲醇/二氯甲烷，至2％氨水/5％甲醇/二氯甲烷至4％氨水/8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱。收集产品，蒸干化合物B-4 4.9g，产率86％

ITMS+c ESI Full ms[300.00-1600.00][M+H⁺]:1391.84,[M+Na⁺]:1413.77

¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)δ10.15-10.05(m,1H),9.15-9.05(m,1H),9.05-8.90(m,2H),8.35-8.20(m,3H),8.10-8.00(m,2H),7.75-7.60(m,2H),7.60-7.55(m,4H),7.45-7.30(m,2H),5.85-5.80(m,1H),4.45-4.35(m,1H),4.25-4.10(m,1H),4.10-3.90(m,4H),3.90-3.85(m,3H),3.85-3.70(m,7H),3.70-3.55(m,29H),3.40-3.35(m,6H),3.30-3.25(m,3H),3.25-3.10(m,3H),2.60-2.57(m,1H),2.45-2.40(m,2H),2.35-2.30(m,2H),2.30-2.18(m,3H),2.05-1.75(m,5H),1.65-1.45(m,2H).

实施例4-2

制备

向200ml圆底烧瓶中加入化合物A-4(2.7832g，2mmol)，加入二氯甲烷15ml溶解，并加入DMF(15ml)助溶。加入高分子4ARM-SCM-40K(10g，0.25mmol，北京键凯)，加入磁子缓慢搅拌。反应完成，将反应液转移至2L圆底烧瓶中，加入无水乙醚沉降，抽滤。抽滤物加入二氯甲烷溶解，湿法上样。柱层析，二氯甲烷至5％甲醇/二氯甲烷，至4％氨水/8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱。收集产品，蒸干得化合物C-4 10.8g。

MALDI-TOF-MS[25000-60000]45172-48292，最高峰：46670

¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)δ10.15-10.05(m,4H),9.15-9.05(m,4H),9.05-8.90(m,8H),8.35-8.25(m,12H),8.10-8.05(m,8H),7.90-7.85(m,4H),7.75-7.62(m,8H),7.60-7.50(m,16H),7.40-7.30(m,8H),5.90-5.80(m,4H),4.45-4.35(m,5H),4.20-4.10(m,6H),4.10-3.95(m,16H),3.95-3.85(m,26H),3.85-3.70(m,38H),3.70-3.60(m,78H),3.60-3.58(m,39H),3.58-3.40(m,3559H),3.40-3.35(m,25H),3.25-3.10(m,14H),2.30-2.20(m,13H),2.00-1.70(m,22H),1.65-1.53(m,8H)。

第五实施例

合成如式I-5所示的具有协同抗癌活性的中间体药物：

合成路线如图1所示：

实施例5-1

制备

将化合物A-1(3.0148g，17.2099mmol)，拉帕替尼(10g,17.2099mmol，武汉远成共创科技有限公司)，HBTU(9.6881g,25.8149mmol)，HOBT(3.4881g,25.8149mmol)加入至500mL的圆底烧瓶中,用DMF(150mL)溶解，将溶液在-5℃低温恒温反应仪中冷却20分钟，然后缓慢滴加DIEA(13.4902mL,77.4447mmol)。反应2h后移至室温搅拌，过夜。反应停止，将反应液转移至2L得分液漏斗中，加入300mL饱和NaHCO₃溶液，然后用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，再用饱和NaHCO₃溶液和饱和食盐水分别淋洗一次，将最终有机相用无水MgSO₄干燥，抽滤，然后减压浓缩将液体蒸干得化合物

12.70g，产率100％。

将化合物B-5(12.7g,17.2099mmol)置于圆底烧瓶中，用50ml CH₂Cl₂溶解，搅拌条件下加入TFA(26.4mL，344.1985mmol)，室温搅拌过夜。反应结束，减压浓缩，用适量无水甲醇溶解，加入NaHCO₃固体粉末中和剩余的TFA。中和完全，过滤，滤液中加入适量硅胶粉，做成固体溶液，干法上样。柱层析，先用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，再用2.5％氨水/7％甲醇/二氯甲烷至5％氨水/10％甲醇/二氯甲烷进行梯度洗脱。收集产品，减压浓缩蒸干得化合物

:10.98g,产率99.6％.

将化合物C-5(9g,14.1013mmol)、Fmoc保护的谷氨酸叔丁酯(8.40g,19.7418mmol)、PyAOP(10.2930g,19.7418mmol)置于1L圆底烧瓶中，然后加入260ml DMF，将混合液置于-5℃条件下搅拌30min，在此条件下缓慢滴加2,4,6-三甲基吡啶(1.86ml,14.1013mmol)，滴加完毕后，低温下反应2h，然后将反应液转移至零度冰箱中搅拌反应2天。反应结束，将反应液转移至1L的分液漏斗中，然后加入约300ml饱和食盐水，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，并用饱和食盐水淋洗两次，合并有机相，浓缩蒸干，用适量二氯甲烷溶解，湿法上样，柱层析，先用二氯甲烷洗脱，再用1％甲醇/二氯甲烷至6％甲醇/二氯甲烷进行梯度洗脱，收集浓缩产品，得化合物

14.7g,产率99％。

在烧瓶中加入化合物D-5(14.7g,28.6884mmol)用100ml二氯甲烷溶解，在室温下搅拌，然后再搅拌条件下缓慢滴加三氟乙酸(TFA)(44mL，573.7674mmol)，置于室温搅拌过夜。反应结束，停止反应，用旋转蒸发仪减压旋蒸蒸干，将蒸干的粗品用二氯甲烷溶解，用正己烷沉降，倒去正己烷相，重复三次，出去大量杂质，收集产品，减压浓缩蒸干得化合物E-5:13.9g,产率99.6％。

ITMS-c ESI Q 1MS[200.00-1100.00][M-H⁺]:987.41

ITMS+c ESIQ 1MS[200.00-1100.00][M+H⁺]:989.32

实施例5-2

制备去末端双甲基的PKI-587(即PKI_a)的过程：

将P-5(4.2g，8.31mmol)投入反应瓶中，加入NMP(40ml),再依次加入DIEA(6.44g,49.86mmol)和HBTU(15.76g，41.35mmol),室温搅拌溶解1小时，加入tert-butylpiperidin-4-ylcarbamate(6.66g，33.23mmol),室温条件下反应三夜，停止反应，加入水和DCM，分层，水层用DCM萃取两次，合并有机相，水洗四次，饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水各洗涤一次，无水硫酸镁干燥，减压浓缩得油状物，室温下加入甲醇42ml，析晶半小时，过滤，滤液干燥得浅红色固体4.2g，产率73.5％。

ITMS+c ESI Full ms[150.00-1200.00][M+H⁺]688.35。

将上述浅红色固体(3g，4.36mmol)投入反应瓶中，加入二氧六环45ml，冰浴下滴加5M HCl(15ml)，滴加完毕后，室温条件下反应48h，停止反应，过滤，滤饼用碳酸氢钠溶液洗涤，甲醇洗涤得白色固体，真空干燥得PKI_a 2.2g，产率85％。

¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)δ9.60-9.40(m,2H),8.45-8.25(m,2H),7.80-7.60(m,1H),7.60-7.51(m,4H),7.40-7.25(m,2H),4.00-3.55(m,18H),3.40-2.98(m,3H),1.90-1.60(m,2H),1.50-1.30(m,3H)

ITMS+c ESI Full ms[150.00-1200.00][M+H⁺]588.37。

实施例5-3

制备

将PKI_a(1g,1.7027mmol)、化合物A-1(328.11mg,1.8730mmol)、HBTU(958.51mg,2.5541mmol)和HOBT(345.10mg,2.5541mmol)置于500ml圆底烧瓶中，然后加入15ml DMF，将混合液置于-5℃条件下搅拌，在此条件下缓慢滴加DIEA(1.33ml,7.6622mmol)，滴加完毕后，低温下反应2h，然后将反应液转移至室温搅拌过夜反应。反应结束，将反应液转移至2L的分液漏斗中，加入200ml的饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水淋洗两次，合并有机相，用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液浓缩蒸干，然后用适量二氯甲烷溶解，准备湿法上样，柱层析，用3％甲醇/二氯甲烷至8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，收集浓缩，得纯产品化合物

1.6293g,产率100％。

将化合物F-5(500mg，0.6716mmol)置于200ml圆底烧瓶中，加入约10ml二氯甲烷使其溶解，在搅拌条件下加入TFA(0.5ml,6.716mmol)，室温过夜搅拌反应，反应结束，将反应液浓缩，加入适量甲醇，使粗品溶解，并加入适量碳酸氢钠固体粉末中和多余的TFA，中和结束后，抽滤，滤液浓缩蒸干，然后用适量二氯甲烷溶解，湿法上样，柱层析，先用4％甲醇/二氯甲烷至7％甲醇/二氯甲烷进行梯度洗脱，最后用3％氨水/6％甲醇/二氯甲烷至4％氨水/8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，收集产品，浓缩蒸干得化合物G-5:360mg。产率84％。

实施例5-4

制备

将化合物G-5(2g,3.1011mmol)、化合物E-5(3.3761g,3.4112mmol)、PyAOP(2.2643g,4.3429mmol)置于100ml圆底烧瓶中，然后加入50ml DMF，将混合液置于-5℃条件下搅拌30min，在此条件下缓慢滴加2,4,6-三甲基吡啶(0.41ml,3.1011mmol)，滴加完毕后，低温下反应2h，然后将反应液转移至-2℃条件下搅拌过夜反应。反应结束，将反应液用无水乙醚沉降，倒去乙醚相，重复两次，沉降物用适量二氯甲烷溶解，湿法上样，柱层析，先用2％甲醇/二氯甲烷至8％甲醇/二氯甲烷进行梯度洗脱，最后用3％氨水/8％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集浓缩产品，得化合物H-5 4g,产率100％。

将化合物H-5(4g，2.4745mmol)置于500ml圆底烧瓶中，加入约20mlDMF使其溶解，在搅拌条件下加入吗啉(6.5ml,74.2364mmol)，室温搅拌反应3h，反应结束，将反应液用乙醚沉降，出去大量紫外杂质，倒去乙醚相，然后将沉淀物用甲醇和二氯甲烷混合液溶解，准备湿法上样，柱层析，先用3％甲醇/二氯甲烷至8％甲醇/二氯甲烷进行梯度洗脱，最后用3％氨水/8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，收集产品，浓缩蒸干得化合物I-5 2.23g。产率70％。

¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)δ9.95-9.85(m,1H),9.10-9.00(m,1H),8.97-8.88(m,1H),8.76-8.70(m,1H),8.60-8.50(m,1H),8.40-8.33(m,1H),8.32-8.25(m,2H),8.24-8.16(m,1H),8.05-7.95(m,2H),7.92-7.83(m,1H),7.82-7.78(m,1H),7.75-7.65(m,1H),7.59-7.43(m,5H),7.37-7.25(m,4H),7.21-7.15(m,1H),7.15-7.03(m,1H),6.70-6.55(m,1H),5.35-5.20(m,2H),4.80-4.64(m,2H),4.40-4.10(m,3H),3.90-3.65(m,13H),3.64-3.58(m,9H),3.40-3.32(m,2H),3.10-3.00(m,3H),2.28-2.10(m,2H),1.90-1.67(m,6H),1.65-1.56(m,1H),1.40-1.28(m,2H)

ITMS+c ESI Full ms[200.00-2000.00][M+H⁺]:1394.38

第六实施例

合成如式F-6所示的聚乙二醇偶联协同抗癌药物或衍生物：

合成路线如图2所示：

实施例6-1

制备

将谷氨酸双苯甲酯(42.0g,128.2795mmol),Boc保护的谷氨酸(14.4122g,58.3089mmol),HBTU(65.6482g,174.9266mmol)和HOBT(23.6361g,174.9266mmol)的混合物溶于DMF(300mL)中，在-5℃的低温恒温反应浴冷却30分钟，滴加DIEA(91.41mL，524.7799mmol),滴加完毕后在-5℃的反应浴中继续反应1小时，然后将反应瓶转移至室温，反应两天后，将反应混合物转移至饱和碳酸氢钠溶液(400mL)，用乙酸乙酯萃取(300mL×3)，合并有机相用饱和碳酸氢钠溶液清洗两次(200mL×2)，用硫酸镁干燥，浓缩，在层析硅胶柱上，以10％-50％乙酸乙酯-石油醚洗脱液进行分离，得到

16.1克。

将化合物A-6(16g,18.4760mmol)置于500mL的圆底烧瓶中，然后加入约二氯甲烷(50mL)使其溶解，搅拌条件下加入TFA(14.2mL,184.7596mmol)。室温条件下搅拌过夜，将反应液在旋转蒸发仪上浓缩，除去大量TFA，然后将粗品用甲醇溶解，加入NaHCO₃固体粉末，中和，过滤，浓缩干燥，通过10％-90％的乙酸乙酯-石油醚和5％的甲醇-乙酸乙酯完成柱层析分离，得到化合物

24克。

将化合物B-6(14g,18.2796mmol)，BocNHCH₂CH₂OCH₂CH₂OCH₂COOH(7.2113g,27.4194mmol)，HBTU(13.7203g,76.5593mmol)和HOBT(4.9399g,36.5593mmol)置于500mL圆底烧瓶中，然后加入DMF(150mL)，在-5℃条件下搅拌20分钟，开始缓慢滴加DIEA(19.10mL,109.6778mmol)，滴完后在-5℃继续反应2小时，置于室温，搅拌反应过夜，将反应液转移至盛有饱和NaHCO₃溶液(300mL)中，用乙酸乙酯(500mL)萃取，有机相溶液以硫酸镁干燥，过滤，浓缩，在硅胶柱上以15％-60％乙酸乙酯-石油醚和4-5％甲醇-乙酸乙酯纯化，得到

7.5克。

实施例6-2

制备化合物E-6，结构见图2

将化合物I-5(2.23g,1.6014mmol)、化合物C-6(0.2588g,0.4mmol)、HBTU(0.9g,2.4mmol)、HOBT(0.3243g,2.4mmol)置于500ml圆底烧瓶中，然后加入30ml DMF，将混合液置于-5℃条件下搅拌30min，在此条件下缓慢滴加DIEA(1.25ml,7.2mmol)，滴加完毕后，低温下反应2h，然后将反应液转移至-2℃条件下搅拌过夜反应。反应结束，将反应液用无水乙醚沉降，倒去乙醚相，重复两次，沉降物用适量甲醇和二氯甲烷溶解，加入适量硅胶粉，做成固体溶液，准备干法上样，柱层析，先用2％二氯甲烷进行洗脱，再用3％氨水/7％甲醇/二氯甲烷至5％氨水/9％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集浓缩产品，得氨基被Boc保护的E-6，即化合物D-6，1.6g,产率72％。

将化合物D-6(1.4g，0.2277mmol)置于200ml圆底烧瓶中，加入约15ml二氯甲烷使其溶解，在搅拌条件下加入TFA(0.52ml,6.8314mmol)，室温过夜搅拌反应，反应结束，将反应液用旋转蒸发仪浓缩，除去大量TFA，然后用甲醇和二氯甲醇溶解，用固体碳酸氢钠中和剩余的TFA，中和完毕后，过滤，滤液中加入适量硅胶粉，做成固体溶液，干法上样，柱层析，先用200ml二氯甲烷洗脱，然后用5％甲醇/二氯甲烷等度洗脱，最后用加入适量甲醇，使粗品溶解，并加入适量碳酸氢钠固体粉末中和多余的TFA，中和结束后，抽滤，滤液中加入适量硅胶粉做成固体溶液，干法上样，柱层析，用2％氨水/5％甲醇/二氯甲烷至3％氨水8％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，收集产品，浓缩蒸干得化合物E-6 1.09g。产率80％。

¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)δ9.95-9.75(m,4H),9.20-9.06(m,5H),89.06-8.95(m,4H),8.80-8.69(m,4H),8.64-8.50(m,4H),8.35-8.15(m,14H),8.15-8.06(m,3H),8.05-7.98(m,7H),7.94-7.85(m,4H),7.85-7.75(m,5H),7.75-7.66(m,4H),7.64-7.42(m,20H),7.40-7.22(m,19H),7.20-7.12(m,4H),7.10-7.00(m,3H),6.72-6.65(m,2H),6.60-6.50(m,2H),6.50-6.40(m,3H),5.35-5.15(m,8H),4.85-4.65(m,8H),4.40-4.00(m,26H),4.00-3.72(m,46H),3.71-3.53(m,45H),3.52-3.48(m,3H),3.45-3.40(m,4H),3.200-3.15(m,16H),3.10-2.95(m,14H),2.30-2.10(m,8H),2.05-1.85(m,6H),1.85-1.65(m,14H)

MALDI-TOF MS[5500-6500][M+H⁺]:6052,[M+Na⁺]:6079

实施例6-3

制备化合物F-6

将化合物E-6(1.09g,0.1802mmol)于200ml圆底烧瓶中，然后加入约30ml二氯甲烷和10mlDMF使化合物M-3溶解，最后加入Y-NHS-40K(5.0466g,0.1201mmol),室温条件下搅拌遮光反应，反应停止，用无水乙醚沉降，过滤，滤饼用二氯甲烷溶解，准备湿法上样，柱层析，用二氯甲烷洗脱，再用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，最后用3％氨水/8％甲醇/二氯甲烷洗脱，得F-6:5.7g。

MALDI-TOF MS：41503-43007

第七实施例

合成如式D-7所示的具有协同抗癌活性的中间体药物：

合成路线如图3所示：

实施例7-1

制备

将AZD5363(100mg,0.2335mmol，上海楼岚)、Boc-Gly(40.9041mg,0.2335mmol)、HBTU(131.4439mg,0.3502mmol)和HOBT(47.3253mg,0.3502mmol)置于100ml圆底烧瓶中，然后加入DMF(6ml)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30min，然后缓慢滴加DIEA(0.183ml,1.0507mmol)，滴加完毕后，低温下反应2h，然后将反应温度升到0℃搅拌过夜反应。反应结束，将反应液转移至0.25L的分液漏斗中，加入30ml饱和碳酸氢钠溶液，然后用乙酸乙酯萃取两次(20ml×2)，合并有机相，再用饱和碳酸氢钠溶液淋洗两次(20ml×2l)有机相，合并有机相，将有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，湿法上样，柱层析，用3％甲醇/乙酸乙酯至4％甲醇/乙酸乙酯梯度洗脱，最后用4％三乙胺/甲醇/乙酸乙酯洗脱，收集浓缩，得化合物A-775.8mg,产率56％.

ITMS+c ESI Full MS[200.00-1100.00][M+H⁺]：586.31,[M+Na⁺]:608.27

将化合物A-7(1g，1.7080mmol)于100mL的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(15mL)溶解，然后加入TFA(2.6mL,34.1618mmol)。室温条件下搅拌反应过夜。反应停止，将反应液减压浓缩蒸干，然后用适量甲醇溶解，搅拌条件下加入碳酸氢钠固体粉末中和剩余的TFA，中和结束后，过滤，滤液中加入适量硅胶粉，做成固体溶液，干法上样，柱层析，用2％氨水/5％甲醇/二氯甲烷至4％氨水/9％甲醇/乙二氯甲烷收集产品，浓缩蒸干得化合物B-7 763.8mg，产率100％。

ITMS+c ESI Full MS[120.00-1000.00][M+H⁺]:486.20，[M+Na⁺]:508.17

实施例7-2

制备

将化合物B-7(83.58mg,0.1722mmol)、化合物E-3(170.4mg,0.1722mmol)、PyAOP(125.7mg,0.2410mmol)置于25ml圆底烧瓶中，然后加入DMF(3ml)，将混合液置于-5℃条件下搅拌30min，在此条件下缓慢滴加2,4,6-三甲基吡啶(0.06ml,0.1722mmol)，滴加完毕后，低温下反应2h，然后将反应液转移至零度冰箱中搅拌反应2天。反应结束，将反应液转移至0.25L的分液漏斗中，然后加入约20ml饱和食盐水，用乙酸乙酯萃取四次，合并有机相，浓缩蒸干，用适量二氯甲烷溶解，湿法上样，柱层析，收集浓缩产品，得化合物

250.92mg,产率99％。

将化合物C-7(128mg，0.08235mmol)置于50ml圆底烧瓶中，加入约DMF(1.2ml)使其溶解，在搅拌条件下加入吗啉(0.144ml,1.6470mmol)，室温搅拌反应3h，反应结束，将反应液用乙醚沉降，出去大量紫外杂质，倒去乙醚相，然后将沉淀物用二氯甲烷混合液溶解，准备湿法上样，柱层析，先用5％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，再用3％氨水/8％甲醇/二氯甲烷洗脱，收集产品，浓缩蒸干得化合物D-7 108mg，产率99％。

¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)δ11.85-11.60(m,1H),10.00-9.80(m,1H),8.80-8.70(m,1H),8.60-8.50(m,1H),8.40-8.25(m,2H),8.25-8.15(m,2H),8.15-8.10(m,1H),8.02-7.98(m,1H),7.96-7.92(m,1H),7.85-7.76(m,1H),7.75-7.65(m,1H),7.51-7.44(m,1H),7.35-7.25(m,6H),7.24-7.12(m,2H),7.12-7.05(m,1H),6.73-6.65(m,1H),6.62-6.55(m,1H),.30-5.25(m,2H),4.91-4.82(m,1H),4.80-4.69(m,1H),4.65-4.50(m,1H),4.49-4.36(m,3H),4.34-4.26(m,1H),3.90-3.80(m,1H),3.80-3.70(m,3H),3.68-3.60(m,1H),3.40-3.30(m,3H),3.10-3.00(m,3H),2.35-2.20(m,2H),2.15-2.03(m,3H),2.20-1.85(m,2H),1.70-1.55(m,6H)

MALDI-TOF MS[1200-1300][M+Na+]:1256.6

ITMS+c ESIQ 1MS[300.00-1300.00][M+H⁺]:1234.76，[M+Na⁺]:1256.63

第八实施例

合成如式C-8所示的聚乙二醇偶联协同抗癌药物或衍生物：

合成路线如图4所示：

将化合物D-7(0.95g,0.7702mmol)、化合物B-2(0.2026g,0.7702mmol)、HBTU(0.4336g,1.1554mmol)和HOBT(0.1561g,1.1554mmol)置于500ml圆底烧瓶中，然后加入DMF(80ml)，将混合液置于-5℃条件下搅拌，在此条件下缓慢滴加DIEA(0.6ml,3.4661mmol)，滴加完毕后，低温下反应1h，然后将反应液转移至室温搅拌过夜反应。反应结束，将反应液转移至1L的圆底烧瓶中，用正己烷沉降，倒去正己烷相，沉降物用甲醇和二氯甲烷溶解，加入适量硅胶粉，做成固体溶液，准备干法上样。柱层析，用2％氨水/4％甲醇/二氯甲烷至3％氨水/6％甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，收集浓缩，得化合物A-8 660mg,产率58％。

将化合物A-8(650mg，0.4397mmol)置于100ml圆底烧瓶中，加入约15ml二氯甲烷使其溶解，在搅拌条件下加入TFA(0.67ml,8.7934mmol)，室温搅拌反应3h，反应结束，将反应液浓缩抽干，然后用适量得甲醇溶解，搅拌条件下加入固体碳酸氢钠粉末中和剩余的TFA，中和结束，过滤，滤液中加入适量硅胶粉，做成固体溶液，准备干法上样。柱层析，先用2％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，再用2％氨水/5％甲醇/二氯甲烷至3％氨水/8％甲醇/二氯甲烷进行梯度洗脱，收集产品，浓缩蒸干得化合物B-8 550mg。产率91％。

将化合物B-8(550mg，0.3986mmol)置于100ml圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(30ml)和DMF(6ml)使其溶解，然后加入4ARM-SCM-40K(2.8972g,0.06643mmol)，室温搅拌反应2周，反应结束，将反应液用无水乙醚沉降，过滤，滤饼用二氯甲烷溶解，湿法上样，柱层析，先用二氯甲烷进行洗脱，再用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，最后用3％氨水/8％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集产品，浓缩蒸干得化合物C-8 9-140 2.0g。产率71％。

¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)δ11.70-11.60(m,4H),10.00-9.75(m,4H),8.80-8.60(m,4H),8.60-8.50(m,4H),8.37-8.25(m,8H),8.25-8.15(m,4H),8.15-8.05(m,8H),8.04-7.98(m,4H),7.98-7.83(m,8H),7.82-7.78(m,4H),7.77-7.70(m,4H),7.38-7.25(m,32H),7.25-7.12(m,8H),7.11-7.05(m,4H),6.80-6.12(m,4H),6.70-6.55(m,4H),5.38-5.22(m,8H),4.91-4.82(m,4H),4.80-4.69(m,4H),4.58-4.50(m,4H),4.49-4.33(m,12H),4.30-4.15(m,8H),3.98-3.90(m,8H),3.85-3.74(m,16H),3.65-3.58(m,8H),3.59-3.48(m,4192.68H),3.40-3.35(m,24H),3.10-3.00(m,20H),2.30-2.18(m,8H),2.15-2.04(m,8H),2.04-1.92(m,12H),1.90-1.75(m,24H)

MALDI-TOF MS[40000-50000]最高峰46130.8。

第九实施例

合成如式J-9所示的药物中间体：

实施例9-1

制备化合物

将原料Boc-NH-GFLG-OBn(3.0054g,5.148mmol，购于南京药石科技股份有限公司)、10％钯/碳催化剂(75mg)加入到氢化反应装置中，然后加入DMF(30ml)使其溶解，并使溶剂没过搅拌子，封闭氢化反应装置，使用水泵抽出反应体系中的空气约3分钟，再充氢气，如此重复三次后，使氢化反应装置上的压力读数为18psi，然后在常温下搅拌反应过夜。通过TLC点板发现反应完成后进行后处理，取出反应液均匀滴加到装有压实硅澡土的抽滤漏斗，用DMF(20ml)清洗反应装置，直至反应器被清洗干净不含产物为止，得到

(Boc-NH-GFLG-OH)的反应产物的DMF溶液，直接供下一步使用。

将上述产物Boc-NH-GFLG-OH(5.149mmol)、拉帕替尼(2.601g,4.477mmol，武汉远成共创科技有限公司)、HBTU(2.547g,6.715mmol)和HOBT(0.907g,6.715mmol)置于250ml圆底烧瓶中然后加入DMF(90ml)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30min。然后缓慢滴加DIEA(3.33ml,20.147mmol)，滴加完毕后低温下反应2h，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，后处理得到化合物

3.7347g，产率79.025％。

将A-9(7.3782g,6.989mmol)于250ml的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(75ml)溶解，然后加入TFA(5.192ml,69.89mmol)室温下搅拌反应过夜。反应停止，将反应液减压浓缩蒸干，然后加入适量乙酸乙酯溶解，转移到500ml的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(100ml)中和剩余的TFA，中和结束后分离有机相，用乙酸乙酯萃取水相中的产物，萃取3次(150ml*3)，合并有机相再用无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，干法上样，柱层析，用4％甲醇/1％氨水/二氯甲烷洗脱，收集产品，浓缩，蒸干得到化合物B-9，4.7308g，产率70.85％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.86(s,1H),8.75-8.74(m,1H),8.56(s,1H),8.22-8.01(m,5H),7.82-7.73(m,2H),7.53-7.49(m,1H),7.33-7.11(m,11H),6.70-6.55(m,2H),5.27(s,2H),4.76-4.60(m,3H),4.38-4.26(m,3H),3.77-3.62(m,3H),3.39-3.37(m,1H),3.07-3.02(m,6H),2.86-2.82(m,1H),1.82(s,2H),1.61-1.49(m,3H),0.88-0.80(m,6H).

实施例9-2

制备化合物

将化合物B-9，即GFLG-LPT(4.6g,4.81mmol)、Boc-NHCH₂CH₂O-CH₂CH₂OCH₂COOH(1.52g,5.772mmol,购于长沙康鹏医药有限公司)、HBTU(2.74g,7.22mmol)和HOBT(0.976g,7.22mmol)置于500ml圆底烧瓶中然后加入DMF(138ml)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30min。然后缓慢滴加DIEA(3.58ml,21.65mmol)，滴加完毕后低温下反应2h，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，后处理得到化合物

3.19g，产率55.38％。

将上述化合物(3.13g,2.61mmol)于100ml的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(45ml)溶解，然后加入TFA(1.94ml,26.1mmol)室温下搅拌反应4天。反应停止，将反应液减压浓缩蒸干，然后加入适量乙酸乙酯溶解，转移到500ml的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(100ml)中和剩余的TFA，中和结束后分离有机相，用乙酸乙酯萃取水相中的产物，萃取3次(150ml*3)，合并有机相再用无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，干法上样，柱层析，用4％甲醇/2％氨水/二氯甲烷洗脱，收集产品，浓缩，蒸干得到化合物C-9 2.072g，产率72.1％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75-8.74(m,1H),8.56(s,1H),8.14-8.12(m,3H),8.02-8.01(m,2H),7.82-7.73(m,3H),7.50-7.47(m,1H),7.35-7.11(m,11H),6.70-6.55(m,2H),5.27(s,2H),4.76-4.70(m,2H),4.59-4.53(m,1H),4.38-4.13(m,3H),3.89-3.75(m,5H),3.58-3.52(m,7H),3.37-3.34(m,1H),3.07-3.03(m,5H),2.80-2.77(m,1H),2.64-2.61(m,2H),1.98-1.47(m,5H),0.88-0.80(m,6H)；MALDI-TOF MS:[M+H⁺]1100.30,[M-H⁺]1098.25,[M+Na⁺]1122.25.

实施例9-3

制备化合物

将Fmoc-Glu-OH(OtBu)(0.54g,1.27mmol)置于100ml圆底烧瓶中，然后加入DMF(21mL)使其溶解，随后加入化合物C-9,即LC-GFLG-LPT(1.0g,0.908mmol)、PyAOP(0.66g,1.27mmol)后置于0℃条件下搅拌30min，然后缓慢滴加2,4,6-三甲基吡啶(0.12ml,0.908mmol)，滴加完毕后在此低温下反应3天。反应结束后，后处理得到纯产物

0.388g，合并得到产物1.419，产率94.2％。

MALDI-TOF MS:[M+H⁺]1507.45,[M-H⁺]1505.40,[M+Na⁺]1529.45.

将化合物D-9(1.35g,0.895mmol)置于100ml的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(15ml)溶解，然后加入TFA(4.5ml)室温下搅拌反应过夜。反应停止，将反应液减压浓缩蒸干，然后加入二氯甲烷(5ml)溶解，加入正己烷(50ml)摇匀，使产物析出，放入冰箱中静止30min后，倒掉上清液，再次用二氯甲烷(5ml)溶解，加入正己烷(50ml)摇匀，使产物析出，放入冰箱中静止30min，重复此操作两次。将析出的产物减压浓缩蒸干，收集产品，得到E-9 1.585g。

MALDI-TOF MS:[M-H⁺]1449.40.

实施例9-4

制备化合物

将Boc-NH-GFLG-OH(10.297mmol)、变构的PKI-587(5.136g,8.954mmol，长沙康鹏)、HBTU(5.094g,13.431mmol)和HOBT(1.8149g,13.431mmol)置于250ml圆底烧瓶中然后加入DMF(95ml)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30min。然后缓慢滴加DIEA(6.659ml,40.293mmol)，滴加完毕后低温下反应2h，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(200ml)，用乙酸乙酯萃取三次(200ml*3)，合并有机相，再用饱和碳酸氢钠(100ml)清洗一次，然后用饱和氯化钠(100ml)除水后将有机相收集于2L的圆底烧瓶中，于冰箱中过夜放置结晶，抽滤，得到化合物

9.1019g，产率96.98％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.43(d,J＝16.0Hz,2H),8.29-8.27(m,3H),7.95-7.88(m,2H),7.58-7.54(m,4H),7.40-7.38(m,2H),7.24-7.22(m,5H),6.93(t,J＝8.0Hz,1H),4.55-4.35(m,2H),3.98-3.51(m,28H),3.04-3.00(m,1H),2.89-2.69(m,1H),1.64-1.50(m,3H),1.36(s,9H),0.90-0.83(m,6H).MALDI-TOF MS:[M+H⁺]1048.50,[M-H⁺]1046.40,[M+Na⁺]1070.45.

将化合物F-9(3.007g,2.862mmol)于250ml的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(35ml)溶解，然后加入TFA(2.125ml,28.62mmol)室温下搅拌反应过夜。反应停止，将反应液减压浓缩蒸干，然后加入适量乙酸乙酯溶解，转移到500ml的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(100ml)中和剩余的TFA，中和结束后分离有机相，用乙酸乙酯萃取水相中的产物，萃取3次(150ml*3)，合并有机相发现有固体析出，抽滤，点TLC板发现析出的固体为产物，收集产品，得到化合物G-9 2.2522g，产率83.001％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝9.20(d,J＝12.0Hz,2H),8.30-8.27(m,4H),7.96-7.94(t,J＝8.0Hz,1H),7.58-7.54(m,4H),7.40-7.38(m,2H),7.26-7.24(m,5H),5.23(s,2H),4.63(s,1H),4.38-4.37(m,1H),3.99-3.50(m,28H),3.07-3.03(m,1H),2.80-2.77(m,1H),1.62-1.49(m,3H),0.91-0.84(m,6H).MALDI-TOF MS:[M+H⁺]948.40.

实施例9-5

制备化合物

将化合物G-9，即GFLG-PKI(2.18g,2.299mmol)、Boc-NHCH₂CH₂O-CH₂CH₂OCH₂COOH(0.73g,2.759mmol)、HBTU(1.31g,3.449mmol)和HOBT(0.47g,3.449mmol)置于250ml圆底烧瓶中然后加入DMF(66ml)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30min。然后缓慢滴加DIEA(1.71ml,10.346mmol)，滴加完毕后低温下反应2h，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，后处理得到产品，1.2286g，产率34.4％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝9.08(s,1H),8.98(s,1H),8.30-8.11(m,4H),7.89-7.77(m,2H),7.58-7.53(m,4H),7.40-7.38(m,2H),7.23-7.17(m,5H),6.79-6.77(t,J＝8.0Hz,1H),4.56-4.55(t,J＝4.0Hz,1H),4.36-4.34(m,1H),3.89-3.51(m,34H),3.36-3.33(m,2H),3.06-3.05(m,3H),2.78-2.76(m,1H),1.62-1.50(m,3H),1.36(s,9H),0.90-0.83(m,6H).

将上述所得产品(2.02g,1.69mmol)于100ml的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(21ml)溶解，然后加入TFA(1.25ml,16.9mmol)室温下搅拌反应4天。反应停止，将反应液减压浓缩蒸干，然后加入适量乙酸乙酯溶解，转移到500ml的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(100ml)中和剩余的TFA，中和结束后分离有机相，用乙酸乙酯萃取水相中的产物，萃取3次(150ml*3)，合并有机相再用无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，干法上样，柱层析，用6％甲醇/2％氨水/二氯甲烷洗脱，收集产品，浓缩，蒸干得到化合物H-9 1.057g，产率56.4％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.08(s,1H),9.05(s,1H),8.30-8.12(m,4H),7.90-7.82(m,2H),7.58-7.53(m,4H),7.40-7.38(m,2H),7.25-7.20(m,5H),4.56-4.55(t,J＝4.0Hz,1H),4.36-4.34(m,1H),3.89-3.51(m,34H),3.05-3.02(m,1H),2.79-2.62(m,3H),1.63-1.48(m,5H),0.90-0.83(m,6H).MALDI-TOF MS:[M+H⁺]1093.45,[M-H⁺]1091.40,[M+Na⁺]1115.40.

实施例9-6

制备化合物J-9：

将化合物E-9(1.30g,0.895mmol)置于100ml圆底烧瓶中，然后加入DMF(20ml)使其溶解，随后加入化合物H-9，即LC-GFLG-PKI(0.979g,0.895mmol)、PyAOP(0.56g,1.2mmol)后置于0℃条件下搅拌30min，然后缓慢滴加2,4,6-三甲基吡啶(0.45ml,3.41mmol)，滴加完毕后在此低温下反应2天。反应结束后，将反应液转移到1000ml的分液漏斗中，加入去离子水(200ml)清洗，用乙酸乙酯洗反应瓶，用力摇匀分液漏斗中的混合相，分离有机相，用乙酸乙酯萃取三次(200ml*3)，合并有机相，再用饱和氯化钠(100ml)清洗三次。加入甲醇和二氯甲烷溶解附在瓶壁上的反应产物，合并产物，抽滤，滤液浓缩，干法上样，柱层析，用10％甲醇/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，得到化合物

1.123g，产率72.9％。

将化合物I-9(1.07g,0.423mmol)于100ml的圆底烧瓶中，用DMF(13ml)溶解，然后加入吗啉(1.11ml,12.7mmol)室温下搅拌反应2.5h，反应停止。将反应液转移到1000ml的分液漏斗中，加入饱和氯化钠(100ml)，用乙酸乙酯洗反应瓶，用力摇匀分液漏斗中的混合相，分离有机相，用乙酸乙酯萃取三次(200ml*3)，合并有机相，再用饱和氯化钠(100ml)清洗三次。加入甲醇和二氯甲烷溶解附在瓶壁上的反应产物，合并有机相产物，抽滤，滤液浓缩，干法上样，柱层析，用8％甲醇/2％氨水/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，得到化合物J-90.5664g，产率74.9％。

第十实施例

合成如式C-9所示的聚乙二醇偶联抗癌药物或衍生物：

将化合物J-9(0.55g,0.239mmol)、Boc-Gly(0.05g,0.286mmol)、HBTU(0.14g,0.359mmol)和HOBT(0.048g,0.359mmol)置于100ml圆底烧瓶中然后加入DMF(12ml)，使其溶解，将混合液置于-5℃条件下搅拌30min。然后缓慢滴加DIEA(0.18ml,1.08mmol)，滴加完毕后低温下反应2h，然后将反应装置放到室温条件下搅拌过夜反应。反应结束后，将反应液转移到1L的分液漏斗中，用乙酸乙酯洗反应瓶，加入去离子水(200ml)，摇匀，分离有机相，用乙酸乙酯萃取三次(200ml*3)，合并有机相，然后用饱和氯化钠(100ml)除水，抽滤，滤液浓缩，干法上样，柱层析，用6％甲醇/2％氨水/二氯甲烷进行洗脱，收集浓缩，得到化合物

0.5723g,产率97.3％。

将化合物A-9(0.55g,0.223mmol)于100ml的圆底烧瓶中，用二氯甲烷(11mL)溶解，然后加入TFA(1.85ml,24.91mmol)室温下搅拌反应1天。反应停止，将反应液减压浓缩蒸干，然后加入适量乙酸乙酯溶解，转移到500ml的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠(100mL)中和剩余的TFA，中和结束后分离有机相，用乙酸乙酯萃取水相中的产物，萃取5次(100mL×5)，合并有机相再用无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，干法上样，柱层析，用6％甲醇/2％氨水/二氯甲烷洗脱，收集产品，浓缩，蒸干得到化合物

0.474g，产率90.0％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝9.89-9.87(m,1H),9.13(s,1H),9.04(s,1H),8.75-8.74(m,1H),8.56(s,1H),8.50(d,J＝8.0Hz,1H),8.29(d,J＝12.0Hz,2H),8.22-8.12(m,5H),8.01-8.00(m,2H),7.91-7.87(m,2H),7.82-7.71(m,4H),7.55(t,J＝20.0Hz,4H),7.48(dd,J＝16.0,12.0Hz,2H),7.40-7.28(m,6H),7.23-7.06(m,12H),6.20(d,J＝4.0Hz,1H),5.27(s,2H),4.75-4.70(m,2H),4.58-4.54(m,2H),4.36-4.11(m,7H),3.98-3.74(m,21H),3.66-3.41(m,29H),3.22-3.16(m,5H),3.07-3.02(m,5H),2.76-2.67(m,3H),2.08(t,J＝8.0Hz,2H),1.84-1.74(m,2H),1.62-1.61(m,2H),1.52-1.49(m,3H),1.25-1.03(m,1H),0.90-0.79(m,12H).

将化合物B-9(0.400g,0.169mmol)置于100ml圆底烧瓶中，然后加入约二氯甲烷(20mL)和DMF(6mL)溶解，最后加入M-SCM-10K(1.495g,0.141mmol),室温条件下搅拌遮光反应3天，反应停止，浓缩，用无水乙醚沉降，过滤，滤饼用二氯甲烷溶解，准备湿法上样，柱层析，用二氯甲烷洗脱，再用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，最后用3％氨水/8％甲醇/二氯甲烷洗脱，得化合物C-9 1.70g。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝9.88-9.86(m,1H),9.10(s,1H),9.00(s,1H),8.75-8.73(m,1H),8.56(s,1H),8.29(d,J＝8.0Hz,2H),8.24-7.95(m,10H),7.87-7.71(m,6H),7.55(t,J＝16.0Hz,4H),7.48(dd,J＝16.0,8.0Hz,2H),7.40-7.06(m,16H),5.26(s,2H),4.75-4.70(m,2H),4.58-4.53(m,2H),4.35-4.34(m,3H),4.23-4.20(m,4H),3.98-3.41(m,992H),3.24-3.16(m,6H),3.06-3.02(m,5H),2.89-2.67(m,5H),2.07-1.93(m,2H),1.62-1.49(m,5H),1.24-1.07(m,1H),0.89-0.79(m,12H).MALDI-TOF MS范围：12100-13500。

第十一实施例

合成如式M-10的化合物的抗癌药物：

步骤S1，对式A-10的化合物进行处理备用。

将Boc-NH-GLG-OBn(6.0045g,13.7873mmol，南京药石)加入到氢化反应釜中，加入10％的Pd/C(0.1005g)，加入DMF(30mL)使其溶解，通入氢气，氢气压力为14psi，反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液通过压紧的硅藻土层过滤，滤饼用DMF(20mL×3)清洗，滤液转移至250mL的圆底烧瓶中。

步骤S2，制备式B-10的化合物。

将Palbociclib(7.1547g,15.9870mmol，简称PCB，北京安司莫森)、HBTU(9.0944g，23.9805mmol)、HOBT(3.2405g，23.9805mmol)加入到含有式A-10(6.3500g,18.3851mmol)DMF溶液的250mL烧瓶中，将反应置于-5℃条件下搅拌约20分钟,然后缓慢滴加DIEA(11.8906mL,71.9415mmol)，滴加完毕后，反应在-5℃搅拌1小时后，然后将反应置于室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到2L的烧杯中，加入800mL饱和碳酸氢钠溶液,析出固体，抽滤，滤饼用甲苯(100mLx5)除水，干燥，得到产品式B-10的化合物:12.1g,产率93.91％。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.17(s,1H),8.96(s,1H),8.10(dd,J＝12.0,4.2Hz,2H),7.88(t,J＝7.8Hz,2H),7.52(dd,J＝9.1,3.0Hz,1H),6.97(s,1H),5.94-5.61(m,1H),4.39(s,1H),4.00(d,J＝5.4Hz,2H),3.58(dd,J＝16.1,5.4Hz,4H),3.16(d,J＝19.0Hz,4H),2.43(s,3H),2.31(s,3H),2.25(s,2H),1.89(s,2H),1.82-1.70(m,2H),1.66-1.56(m,3H),1.52-1.43(m,2H),1.38(s,9H),1.24(d,J＝6.4Hz,2H),0.86(dd,J＝15.4,6.5Hz,6H)；MALDI-TOF MS:[M+H⁺]775.25,[M⁺]774.45

步骤S3，制备式C-10的化合物。

将式B-10的化合物(7.0271g,9.0681mmol)投入到250mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(20mL)溶解，然后加入TFA(5.3873mL,72.5492mmol)，反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液蒸干，然后用适量甲醇溶解，加入少量碳酸氢钠固体粉末中和TFA，抽滤，滤液蒸干，干法上样，柱层析，用(5％甲醇:1％氨水:94％二氯甲烷)洗脱，收集浓缩，得产品式C-10的化合物:5.2531g,产率：85.60％。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.17(s,1H),8.96(s,1H),8.16(t,J＝5.5Hz,1H),8.08(d,J＝2.9Hz,1H),7.98(d,J＝8.9Hz,1H),7.89(d,J＝9.0Hz,1H),7.52(dd,J＝9.1,3.0Hz,1H),5.83(p,J＝8.6Hz,1H),4.43(d,J＝5.9Hz,1H),4.00(d,J＝5.5Hz,2H),3.60(s,4H),3.23-3.07(m,6H),2.42(s,3H),2.31(s,3H),2.24(s,2H),2.05(s,1H),1.89(s,2H),1.81-1.71(m,2H),1.60(dd,J＝12.3,6.2Hz,3H),1.47(ddd,J＝19.4,13.3,6.1Hz,2H),1.23(s,1H),0.88(dd,J＝11.5,6.5Hz,6H)；MALDI-TOF MS:[M+H⁺]675.30

步骤S4，制备式D-10的化合物。

将Fmoc-Glu-OtBu(2.6402g,6.2055mmol)投入到250mL的烧瓶里，加入约70mL的DMF使其溶解，置于0℃恒温反应浴中，在搅拌状态下加入式C-10化合物(3.0176g,4.4325mmol)、PyAoP(3.2354g,6.2055mmol),约30分钟后，缓慢滴加TMP(0.589mL,4.4325mmol)，反应在0℃下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到2L的分液漏斗中，加入去离子水(300mL)和乙酸乙酯(300mL)进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×4)清洗，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液蒸干浓缩，干法上样，柱层析，用(5％甲醇：95％二氯甲烷)进行洗脱，收集产品，蒸干浓缩，得产品式D-10的化合物:4.8342g，产率：100％。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.17(s,1H),8.96(s,1H),8.14-7.99(m,4H),7.89(d,J＝7.7Hz,3H),7.73(d,J＝7.5Hz,3H),7.51(dd,J＝9.1,2.8Hz,1H),7.42(t,J＝7.4Hz,2H),7.33(t,J＝7.4Hz,2H),5.84(dd,J＝17.8,8.9Hz,1H),4.49-4.19(m,4H),4.05-3.83(m,3H),3.79-3.54(m,6H),3.16(d,J＝19.6Hz,5H),2.42(s,3H),2.31(s,3H),2.27-2.20(m,3H),1.93(dd,J＝20.8,7.7Hz,4H),1.77(s,2H),1.66-1.47(m,5H),1.39(s,9H),0.86(dd,J＝16.0,6.5Hz,6H)；MALDI-TOF MS:[M-H⁺]1080.60

步骤S5，制备式E-10的化合物。

将式D-10化合物(4.8342g,4.4584mmol)投入到100mL烧瓶中，加入约35mL二氯甲烷使其溶解，在搅拌状态下加入TFA(4.1779mL,56.259mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液蒸干，加入少量二氯甲烷使其溶解，加入正己烷(100mL×3)进行沉降，固体蒸干，得产品式E-10化合物:5.78g，产率100％。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.91(s,1H),8.99(s,1H),8.15-8.00(m,4H),7.87(t,J＝11.9Hz,3H),7.72(t,J＝7.2Hz,3H),7.55(dt,J＝8.4,7.8Hz,1H),7.42(d,J＝7.1Hz,2H),7.33(t,J＝7.4Hz,2H),5.93-5.80(m,1H),4.27(dd,J＝6.9,2.8Hz,4H),3.99(d,J＝5.2Hz,3H),3.75(dd,J＝16.8,5.9Hz,2H),3.61(s,4H),3.19(d,J＝21.3Hz,4H),3.02(td,J＝6.6,3.9Hz,1H),2.44(s,3H),2.34(s,3H),2.25(d,J＝7.6Hz,3H),1.93(s,2H),1.83(dd,J＝15.5,8.3Hz,4H),1.61(dd,J＝12.7,6.4Hz,3H),1.50(d,J＝6.9Hz,2H),0.86(dd,J＝16.3,6.5Hz,6H)；MALDI-TOF MS:[M-H⁺]1024.35

步骤S6，对式F-10的化合物进行处理备用。

将Boc-NH-GLG-OBn(3g,6.6149mmol，南京药石)加入到氢化反应釜中，加入10％的Pd/C(0.0500g)，加入DMF(30mL),通入氢气，氢气压强为14psi,反应在室温下搅拌过夜。反应结束后，将反应液抽滤，滤饼用DMF(20mL×3)清洗3次，滤液装入250mL的圆底烧瓶中,得到F-10。

步骤S7，制备式G-10的化合物。

将SB-743921(2.8503g,5.5124mmol，简称SB7，南京药石)、HBTU(2.7223g，8.2686mmol)、HOBT(1.1172g，8.2686mmol)加入到含有F-10(2.2834g,6.6149mmol)的DMF溶液的250mL烧瓶中，将反应置于-5℃搅拌约20分钟,然后缓慢滴加DIEA(4.0999mL,24.8058mmol),滴加完毕后，在-5℃反应1小时后，然后将反应置于室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)和乙酸乙酯(300mL)，进行萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(200mL×3)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL×3)清洗，再用无水硫酸钠干燥，过滤，得滤液，滤液浓缩蒸干，干法上样，柱层析，用(1％氨水：3.5％甲醇：95.5％二氯甲烷)进行洗脱，收集产品，浓缩蒸干，得产品式G-10化合物:3.6983g，产率79.45％。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.09(dd,J＝9.3,5.2Hz,3H),7.89(d,J＝7.5Hz,1H),7.65-7.42(m,2H),7.42-7.06(m,8H),6.98(s,1H),5.75(d,J＝6.8Hz,1H),4.39-4.11(m,2H),3.90(d,J＝14.5Hz,1H),3.58(dd,J＝25.3,6.0Hz,4H),3.15(dd,J＝11.9,7.5Hz,1H),2.89(s,1H),2.64(s,2H),2.33(s,3H),1.57(d,J＝6.6Hz,1H),1.47(d,J＝7.0Hz,2H),1.36(s,9H),1.23(dd,J＝21.9,9.2Hz,5H),0.96(d,J＝6.3Hz,3H),0.84(dd,J＝14.8,6.4Hz,6H),0.53(d,J＝4.8Hz,2H)；MALDI-TOF MS:[M+H⁺]844.25,[M-H⁺]842.30,[M+Na⁺]866.25

步骤S8，制备式H-10的化合物。

将式G-10的化合物(3.6483g,3.6791mmol)加入到100mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(25mL)使其溶解，再加入TFA(2.1857mL,29.4328mmol)，在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液蒸干，用甲醇溶解，加入碳酸氢钠固体粉末(20g)中和剩余的TFA，过滤，滤液浓缩蒸干，干法上样，柱层析，用(0.5％氨水：5％甲醇：94.5％二氯甲烷)进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品式H-10的化合物：2.4881g,产率90.86％。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.17(dt,J＝11.4,8.0Hz,4H),7.57(dd,J＝8.6,2.0Hz,2H),7.43-6.96(m,9H),6.24(s,2H),5.76(s,1H),4.34(d,J＝6.7Hz,1H),4.17(d,J＝14.4Hz,1H),3.90(d,J＝14.8Hz,1H),3.53(d,J＝11.5Hz,2H),2.85-2.53(m,3H),2.33(s,3H),1.52(dd,J＝38.0,6.6Hz,3H),1.32(s,1H),1.15(dd,J＝38.5,6.6Hz,5H),0.96(d,J＝6.4Hz,3H),0.86(dd,J＝11.2,6.5Hz,6H),0.53(d,J＝5.2Hz,3H)；MALDI-TOF MS:[M+H⁺]744.25,[M-H⁺]742.25,[M+Na⁺]766.25

步骤S9，制备式I-10的化合物。

将式E-10的化合物(2.8900g,2.8108mmol)加入到250mL的直筒反应瓶中，加入DMF(40mL)使其溶解,将反应置于0℃，加入式H-10的化合物(2.0921g，2.8108mmol)、PyAOP(1.7585g,3.3729mmol),反应约30分钟后,缓慢滴加2,4,6-三甲基吡啶(0.3700ml,2.8108mmol)，反应在0℃搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到2L分液漏斗中，加入去离子水(300mL)和乙酸乙酯(250mL)萃取，得有机相，水相用EA(150mL×4)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200m×3)清洗，再用无水硫酸钠干燥有机相,抽滤，得滤液,将滤液浓缩蒸干，干法上样，柱层析，用(7％甲醇+93％二氯甲烷)洗脱，收集浓缩，得式I-10的化合物：2.8780g，产率58.36％。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.16(s,1H),8.96(s,1H),8.24(d,J＝5.7Hz,1H),8.17-7.98(m,7H),7.89(d,J＝9.5Hz,4H),7.79-7.64(m,3H),7.61-7.10(m,16H),5.94-5.68(m,2H),4.46-4.12(m,6H),3.98(dd,J＝12.4,7.2Hz,3H),3.77-3.56(m,9H),3.24-3.13(m,4H),3.01(td,J＝6.6,3.9Hz,7H),2.42(s,3H),2.36-2.21(m,10H),1.90(d,J＝11.0Hz,3H),1.83-1.72(m,7H),1.67-1.43(m,8H),1.19(dd,J＝18.9,11.8Hz,1H),0.88(ddt,J＝13.5,9.7,7.8Hz,13H),0.52(s,2H)；MALDI-TOF MS:[M+H⁺]1751.90,[M⁺]1750.75

步骤S11，制备式J-10的化合物。

将式I-10的化合物(2.8725g,1.6373mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入DMF(20mL)使其溶解，再加入吗啉(4.2792mL,49.1190mmol),反应在室温下搅拌，约1小时后，反应结束，在搅拌状态下加入乙醚(150mL)，沉降约30分钟，倾倒上清液，下层固体用正己烷(150mL×3)进行沉降，得到固体，蒸干，干法上样，柱层析，用(1％氨水：6％甲醇+93％二氯甲烷)进行洗脱，收集滤液，浓缩蒸干，得产品式J-10化合物:1.5427g,产率61.49％。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.16(s,1H),8.96(s,1H),8.36-8.02(m,10H),7.89(d,J＝9.0Hz,1H),7.53(ddd,J＝12.1,8.8,2.4Hz,3H),7.20(dd,J＝28.1,13.3Hz,10H),5.82(dt,J＝24.3,12.1Hz,2H),4.48-4.22(m,2H),4.13(dd,J＝22.6,10.2Hz,1H),4.08-3.89(m,3H),3.81-3.50(m,11H),3.23-3.09(m,6H),2.81-2.67(m,3H),2.42(s,3H),2.39-2.18(m,10H),1.91-1.75(m,5H),1.67-1.43(m,10H),1.19(dd,J＝18.9,11.8Hz,1H),0.88(ddd,J＝19.8,16.3,4.3Hz,16H),0.52(s,2H)；MALDI-TOF MS:[M⁺]1528.85

步骤S12，制备式K-10的化合物。

将式J-10的化合物(1.5427g,1.0068mmol)、Boc-Gly-0H(0.2117g,1.2082mmol)、HBTU(0.5727g,5102mmol)、HOBT(0.2041g,1.5102mmol)加入到250mL烧瓶中，加入DMF(25mL)使其溶解，将反应置于-5℃条件下搅拌约30分钟,然后缓慢滴加DIEA(0.7488mL,4.5306mmol),滴加完毕后，在-5℃反应1小时后，然后将反应置于室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液转移到1L的分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(250mL)和乙酸乙酯(200mL)，进行萃取，得到有机相，水相用乙酸乙酯(150mL×3)清洗，合并有机相，有机相用饱和食盐水(150mL×3)清洗，再用无水硫酸钠干燥，抽滤，得滤液，滤液浓缩蒸干，干法走柱，柱层析，用(1％氨水+6％甲醇+95.5％二氯甲烷)进行洗脱，收集产品，浓缩蒸干，得产品式K-10的化合物:1.4322g，产率84.20％。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.16(s,1H),8.96(s,1H),8.27(s,1H),8.15-7.86(m,10H),7.53(ddd,J＝12.0,8.9,2.4Hz,3H),7.36-7.09(m,9H),6.92(t,J＝5.7Hz,1H),5.90-5.74(m,2H),4.46-4.16(m,4H),3.96(dd,J＝23.4,9.8Hz,3H),3.81-3.50(m,12H),3.24-3.06(m,6H),2.86-2.61(m,3H),2.42(s,3H),2.35-2.15(m,10H),1.83(d,J＝44.8Hz,5H),1.69-1.40(m,10H),1.36(s,9H),1.18(d,J＝18.9Hz,1H),1.01-0.79(m,16H),0.52(d,J＝4.8Hz,2H)；MALDI-TOF MS:[M+H⁺]1686.95,[M⁺]1685.95,[M+Na⁺]1708.95

步骤S13，制备式L-10的化合物。

将式K-10的化合物(1.4108g,0.8351mmol)加入到250mL的烧瓶中，加入二氯甲烷(10mL)使其溶解，再加入TFA(0.6175mL,8.3510mmol),反应在室温下搅拌过夜。反应结束，将反应液蒸干，用乙酸乙酯溶解，将反应液转移到1L得分液漏斗中，加入饱和碳酸氢钠溶液(250mL)和乙酸乙酯(200mL)萃取，得有机相，水相用乙酸乙酯(150mL×4)清洗，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，进行抽滤，滤液浓缩蒸干，干法上样，柱层析，用(1％氨水+6％甲醇+93％二氯甲烷)和(1％氨水+7％甲醇+93％二氯甲烷)进行洗脱，收集浓缩蒸干，得产品式L的化合物：1.2235g,产率92.33％。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.16(s,1H),8.96(s,1H),8.33(t,J＝5.5Hz,1H),8.21-7.78(m,10H),7.65-7.41(m,3H),7.41-7.06(m,9H),5.92-5.71(m,2H),4.48-4.12(m,4H),4.01-3.83(m,3H),3.80-3.56(m,11H),3.15(dd,J＝18.0,5.7Hz,7H),2.81-2.60(m,3H),2.42(s,3H),2.37-2.16(m,10H),1.95-1.45(m,15H),1.36-1.09(m,3H),0.87(ddd,J＝21.2,16.1,6.4Hz,16H),0.53(d,J＝5.1Hz,2H)；MALDI-TOF MS:[M⁺]1585.70,[M+Na⁺]1608.70

步骤S14，制备式M-10的化合物。

将式L-10的化合物(0.8398g,0.5293mmol)投入到250mL烧瓶中，加入二氯甲烷(25mL)和DMF(4mL)使其溶解，再加入M-SCM-10K(4.6715g,0.4410mmol，北京键凯)，反应在常温下避光搅拌。反应结束，将反应液浓缩约20mL，加入二氯甲烷(10mL)使其溶解，加入乙醚(150mL)，析出固体，过滤，滤饼用乙醚(150mL×4)清洗，得到粗产品，将固体用二氯甲烷溶解，浓缩蒸干，干法上样，柱层析，用(1％氨水+6％甲醇+93％二氯甲烷)洗脱，收集产品，浓缩蒸干，得固体产品，将固体用少量无水乙醇溶解，用乙醚(150mL×2)进行沉降，抽滤，滤饼用乙醚(150mL×4)清洗，将固体蒸干得产品式M-10的化合物:4.9270g，产率：92.59％。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.15(d,J＝6.3Hz,1H),8.96(s,1H),8.24(d,J＝24.7Hz,2H),8.17-7.81(m,10H),7.53(ddd,J＝12.0,8.8,2.3Hz,3H),7.20(d,J＝41.3Hz,9H),5.90-5.70(m,2H),4.47-4.16(m,7H),4.08-3.44(m,920H),3.14(dd,J＝22.7,9.9Hz,7H),2.66(d,J＝7.7Hz,3H),2.42(s,3H),2.35-2.15(m,10H),1.80(dd,J＝47.2,23.2Hz,5H),1.52(d,J＝50.5Hz,10H),1.22(d,J＝13.7Hz,1H),0.98-0.74(m,16H),0.51(s,2H)

试验例

一、试验方案

1、试验对象及材料

实验动物：Balb/c nude裸鼠，SPF级；来源是上海灵畅生物科技有限公司；许可证号为SCXK(沪)2013-0018，合格证号2013001828988；周龄为16-18周，雌性。

实验组受试药物：第十一实施例制备的如式M-10所示的化合物，分子量12066，黄色粉末，储存条件4℃；称取如式M-10所示的化合物，加入生理盐水超声溶解后给药，每次配两次药量，剩余药物4℃保存。

空白对照组试剂：生理盐水，购买自山东康宁药业，批号A16071105。

1460培养液：上海源培生物，货号L210KJ。

FCS:Sciencell，货号0500。

100*青霉素链霉素双抗：Gibco，货号10378-016。

2、实验方案

2.1模型建立

a)复苏并扩增Colo-205细胞；

b)待扩增到足够的细胞，收集细胞，用不含血清的1640培养基配置成浓度为2×10⁷cell/ml的细胞悬液；

c)裸鼠右侧皮下接种，0.1ml/只，即每只裸鼠接种细胞数为2×10⁶个；接种20只。

2.2分组与给药

测量Colo-205皮下肿瘤大小，挑选16只荷瘤鼠，根据肿瘤体积随机分成2组，每组8只。分组当天记为Day1，当天开始给药。分组及给药方案见表1：

表1.动物分组与给药

2.3观察和监测

每三天测量肿瘤大小及体重，观察并记录动物状态。

2.4实验终点

最后一次测量后次日，动物二氧化碳安乐死。荷瘤小鼠拍照、剥瘤、瘤体拍照并称重后结束实验。

3、检测指标及计算、统计分析方法

3.1肿瘤体积(tumor volume,TV)

TV＝1/2×a×b²，其中a、b分别表示长、宽。

3.2相对肿瘤体积(Relative Tumor Volume，RTV)

RTV＝TV₁/TV_t×100，其中TV₁为分笼给药时(即Day1)肿瘤体积，TV_t为每一次测量时的肿瘤体积。

3.3相对肿瘤增值率T/C(％)

T/C(％)＝(T_RTC/C_RTV)×100

T_RTC治疗组RTC；C_RTV空白对照组RTV。

3.4瘤重抑瘤率IR(％)

IR(％)＝(C_TW-T_TW)/C_TW×100

T_TW：治疗组瘤重；C_TW：空白对照组瘤重；TW(timor weight)：肿瘤重量。

3.5统计分析

试验数据采用平均值±标准差(mean±SD)表示，体重及肿瘤体积采用Student’st-test检验。P<0.05表示具有显著性差异，P<0.01表示具有极显著性差异。

二、试验结果

1、体重

小鼠分组当天记为Day1,分组时每组动物体重均为20g左右，从分组当天(Day1)至实验终点(Day11)每三天一次测量动物体重。结果如表2所示，自分组后Control组小鼠的体重正常增长，M-10给药组动物体重呈现逐渐下降趋势。实验终点时，给药组体重与Control组之间有极显著性差异。Day10测量时发现给药组4^#小鼠体重下降严重，仅12.45g，Day11该小鼠死亡。

表2受式化合物对Colo-205荷瘤小鼠体重的影响

(数据采用mean±SD表示)

vs Control,**p<0.01

2、肿瘤体积

小鼠接种后待皮下瘤长至100-200mm3时依肿瘤体积随机分组，分组时各组小鼠肿瘤体积约为210mm3，从分组当天(Day1)至实验终点(Day11)每三天测量一次动物肿瘤体积。结果显示(表3)，试验终点时，Cortrol组小鼠的肿瘤体积为1411.47mm3，RTV为680.32％，肿瘤模型正常工作。

由肿瘤生长曲线可见，试验终点时，Control组肿瘤体积为1411.47mm3。M-10给药组小鼠的肿瘤体积在第一次给药后增长缓慢，之后逐渐减小，实验终点时肿瘤体积为41.95mm³，肿瘤体积(TV)及相对肿瘤体积(RTV)与Control组相比均有极显著性差异。

表3受试化合物对Colo205裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

(数据采用Mean±SD表示)

vs Control，**p<0.01

3、实验终点肿瘤重量

完成药效试验后，将荷瘤小鼠采用二氧化碳安乐死，剥瘤后对瘤体进行拍照、称重。结果显示(表4)，Control组瘤重为0.90g，M-10给药组的瘤重为0.013g；抑瘤率为98.5％。给药组的瘤重和抑瘤率与Control组相比均有显著差异。由图4可直观的观察到化合物对Colo205荷瘤小鼠肿瘤的影响。

表4实验实验终点各组肿瘤重量

(数据采用Mean±SD表示，n＝8)

组别	瘤重TW(g)	抑瘤率IR(％)
			Control	0.90±0.31	—
M-10	0.013±0.004**	98.5

vs Control，**p<0.01

4、结果分析

1)本次试验，为考察化合物的药效，对Colo205荷瘤小鼠进行了给药治疗。待皮下瘤长至200mm³时依肿瘤体积随机分组，当天开始给药。分组时各组小鼠肿瘤体积约为210mm3，试验终点时，Cortrol组小鼠的肿瘤体积为1411.47mm3，RTV为680.32％，肿瘤模型正常工作。

2)由肿瘤生长曲线可见，试验终点时，Control组肿瘤体积为1411.47mm³。M-10给药组小鼠的肿瘤体积先增长后减少，实验终点时肿瘤体积为41.95mm3，肿瘤体积(TV)及相对肿瘤体积(RTV)与Control组相比均有显著性差异。

3)实验终点时，Control组瘤重为0.90g，M-10给药组的瘤重分别为0.013g；抑瘤率为98.5％。给药组的瘤重和抑瘤率与Control组相比有显著差异。

4)由体重增长曲线可见，自分组后Control组小鼠的体重呈先下降后上升的趋势，M-10给药组动物体重呈逐渐下降趋势。实验终点时，给药组体重与Control组之间有极显著性差异。Day10测量时发现给药组4#小鼠体重下降严重，仅12.45g，Day11该小鼠死亡。

5)在实验过程中我们发现，给药M-10组后小鼠出现体重下降，皮肤干燥皲裂，体表温度低以及轻微稀便等现象。

本实验成功建立了裸鼠Colo205皮下移植瘤模型并考察了受试化合物对该肿瘤生长的影响。在本实验体系及所设剂量下，化合物M-10对该动物模型肿瘤生长的具有较强的抑制作用。

尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

工业实用性

本发明提供的中间体药物或其衍生物、或其药学上可接受的盐，可用于制备抗癌药物，例如制备单一的纳米药物中的多靶点有效载荷，可用于治疗癌症。本发明提供的制备方法，可以较容易地合成聚乙二醇偶联抗癌双药甚至聚乙二醇偶联抗癌多药，实现多靶点、多疗法同时给药，可以大幅度降低毒性，且有利于克服癌症的多药耐药性，具有协同增效的作用，可用于制备抗癌药物，可用于治疗癌症，具有重大的临床价值和广阔的市场前景。