CN111303129B - 具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂及其制备方法 - Google Patents

具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111303129B
CN111303129B CN202010194183.0A CN202010194183A CN111303129B CN 111303129 B CN111303129 B CN 111303129B CN 202010194183 A CN202010194183 A CN 202010194183A CN 111303129 B CN111303129 B CN 111303129B
Authority
CN
China
Prior art keywords
kinase inhibitor
lapatinib
target kinase
antitumor activity
succinic anhydride
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010194183.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111303129A (zh
Inventor
陈飞虹
王省
郭伟恒
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Southeast University
Original Assignee
Southeast University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Southeast University filed Critical Southeast University
Priority to CN202010194183.0A priority Critical patent/CN111303129B/zh
Publication of CN111303129A publication Critical patent/CN111303129A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111303129B publication Critical patent/CN111303129B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂及其制备方法，分子结构式如下：
Figure DDA0002416123290000011
分子式为C49H44ClFN4O9S，分子量为918.25，中文名称为拉帕替尼‑紫檀芪琥珀酸酯。该化合物具有很好的抗肿瘤活性，对胃癌SGC‑7901、肺癌A549的IC50＜1μM。

Description

具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及多靶点激酶抑制剂及其制备方法，特别涉及具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂及其制备方法。
背景技术
癌症，也叫恶性肿瘤。恶性肿瘤可以破坏组织、器官的结构和功能，引起坏死出血合并感染，患者最终可能由于器官功能衰竭而死亡，恶性肿瘤已经超过心脑血管成为人类健康的最大敌人。胃癌(gastric carcinoma)是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，在我国各种恶性肿瘤中发病率居首位，胃癌发病有明显的地域性差别，在我国的西北与东部沿海地区胃癌发病率比南方地区明显为高。好发年龄在50岁以上，男女发病率之比为2∶1。由于饮食结构的改变、工作压力增大以及幽门螺杆菌的感染等原因，使得胃癌呈现年轻化倾向。胃癌可发生于胃的任何部位，其中半数以上发生于胃窦部，胃大弯、胃小弯及前后壁均可受累。绝大多数胃癌属于腺癌，早期无明显症状，或出现上腹不适、嗳气等非特异性症状，常与胃炎、胃溃疡等胃慢性疾病症状相似，易被忽略，因此，目前我国胃癌的早期诊断率仍较低。
人表皮生长因子2(HER2)是HER2过度表达的胃癌中首个被验证的新型靶点。目前对于胃癌靶点检测的经验有限，随着肿瘤分子生物学的发展，肿瘤的治疗进入了分子靶向治疗时代。其中，上皮生长因子受体家族(HER/ErbB)在胃癌中存在广泛异常表达，并与胃癌的发生、发展及预后等密切相关。拉帕替尼作为EGFR/HER2双受体酪氨酸激酶抑制剂，在胃癌的各期临床试验中均显示了良好的结果。研究发现胃癌中EGFR和HER2较正常组织存在明显的高表达。而EGFR/HER2的异常表达，可以激活下游相关信号通路，直接或者间接的引起细胞无限增殖而导致恶性肿瘤的发生，因此许多新型的分子靶向治疗药物都是通过针对这两种受体，从而发挥抗肿瘤的治疗效果。临床前研究显示，拉帕替尼能够有效地抑制两个HER2扩增的胃癌细胞株，抑制HER2、EGFR和下游信号蛋的磷酸化，导致G1期阻滞，诱导c-Myc和p27kip1的下调。
发明内容
发明目的：本发明目的是提供具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂。
本发明另一目的是提供具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂的制备方法。
技术方案：本发明提供具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂，分子结构式如下：
Figure BDA0002416123280000021
分子式为C49H44ClFN4O9S，分子量为918.25，中文名称为拉帕替尼-紫檀芪琥珀酸酯。
所述的具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)以拉帕替尼、丁二酸酐、三乙胺为起始原料，加热条件下进行反应，除去溶剂后水洗，得到黄色固体，即拉帕替尼-丁二酸酐复合物；
(2)将拉帕替尼-丁二酸酐复合物与碳二亚胺、1-羟基苯并三唑在室温下搅拌反应，再加入三乙胺继续搅拌反应，得乳黄色混合溶液；
(3)将紫檀芪加入黄色混合溶液中，加热条件下反应，即得。
进一步地，所述步骤(1)中拉帕替尼与过量丁二酸酐、三乙胺反应。丁二酸酐、三乙胺过量可以使反应产率更高，在该比例下反应产率最大，未反应的丁二酸酐、三乙胺可水洗除去，操作简便。所述紫檀芪与过量拉帕替尼-丁二酸酐复合物、碳二亚胺、1-羟基苯丙三唑、三乙胺反应。拉帕替尼-丁二酸酐复合物易于制备，碳二亚胺、1-羟基苯丙三唑、三乙胺易于获得，过量反应可以提高缩合反应的产率，在该比例下反应产率最高。
进一步地，所述步骤(3)反应时间8～12h。该温度下最适合该缩合反应的进行，在反应进行8～12h即可达到反应的终点，避免反应时间过长造成副反应的发生。
进一步地，所述步骤(1)拉帕替尼、丁二酸酐溶解在二氯甲烷溶液中。所述步骤(2)1-羟基苯并三唑溶解在30mlN，N-二甲基甲酰胺溶液中。
进一步地，其可单药或联合用药。
基于拉帕替尼的多种作用机制，单药或联合用药对其他肿瘤有抑制作用。将抗氧化剂紫檀芪与传统的抗肿瘤药物结合起来，其效果明显高于单一的有效成分。紫檀芪表现出良好的抑制胃癌生长的作用。在胃癌细胞中血管生成是促血管生长因子和内源性抗血管生成因子协调作用的复杂过程，PI3K/AKT/mTOR通路促进血管生成并在大多数人体肿瘤中激活，活化的PI3K激活AKT，进而磷酸化结节性硬化复合物蛋白2(tuberous sclerosiscomplex-2，TSC-2)，抑制TSC-1/TSC-2复合物生成，从而解除对Ras蛋白脑组织同源类似物(Ras homology enriched in brain，Rheb)的抑制作用，激活mTOR复合物1(mTOR complex1，mTORC1)，进而抑制真核起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)，解除对真核起始因子4E(eIF-4E)的抑制，促进缺氧诱导因子1α(HIF1α)表达，进而诱导VEGF表达，VEGF可与血管内皮细胞作用，增加血管通透性并促进血管内皮细胞增殖，促进血管生成，而经紫檀芪处理的膀胱癌细胞中AKT和mTOR活性降低，抑制上述过程，进而抑制肿瘤血管再生。此外，紫檀芪处理脑内转移性肿瘤细胞时，通过降低c-Met mRNA表达抑制c-Met，进而抑制MAPK，降低IL-1B表达，从而显著抑制IL-8和趋化因子(c-x-c基序)配体1(chemokine(C-X-C motif)ligand 1，CXCL1)表达，并抑制IL-8和CXCL1介导的白细胞介素8/c-x-c趋化因子受体1(CXCR1)信号通路，最终抑制血管生成。
有益效果：本发明的多靶点激酶抑制剂拉帕替尼类似物具有很好的抗肿瘤活性，对胃癌SGC-7901的IC50＜1μM。
具体实施方式
实施例1：制备具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂、拉帕替尼类似物
本实施例所用试剂：纯度不小于98％的拉帕替尼，丁二酸酐，达沙替尼，碳二亚胺，1-羟基苯并三唑，市售分析纯三乙胺，市售分析纯二氯甲烷，市售分析纯N，N-二甲基甲酰胺。
制备过程：将拉帕替尼、丁二酸酐溶解在二氯甲烷溶液中，加入三乙胺，拉帕替尼、丁二酸酐、三乙胺的物质的量之比是1∶1.5∶1.5，在40℃条件下反应12h，除去溶剂后水洗，得到黄色固体，即拉帕替尼-丁二酸酐复合物。
称取拉帕替尼-丁二酸酐复合物200mg(0.2951mmol)，碳二亚胺45.78mg(0.2951mmol)，1-羟基苯并三唑39.88mg(0.2951mmol)溶解在30mlN，N-二甲基甲酰胺溶液中，于40℃下反应0.5h，得到乳黄色混合溶液。量取40.5ml三乙胺加入混合溶液中继续反应0.5h。称取紫檀芪120mg(0.295mmol)加入混合溶液中，45℃下反应8～12h，反应结束后，除去溶剂，过柱纯化得到122mg黄色固体。
1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ：9.92(d，J＝12Hz，1H)，8.76(s，1H)，8.56(s，1H)，8.17-8.12(m，1H)，8.04(d，J＝12Hz，1H)，7.76(t，J＝6Hz，2H)，7.6(d，J＝12Hz，2H)，7.50-7.46(m，1H)，7.34(d，J＝6Hz，2H)，7.28(t，J＝6Hz，2H)，7.19(t，J＝12Hz，1H)，7.14-7.06(m，4H)，6.78(s，2H)，6.67-6.55(m，1H)，6.43(s，1H)，5.27(s，2H)，4.80(s，1H)，4.73(s，1H)，3.89(t，J＝6Hz，1H)，3.79(s，6H)，3.60(t，J＝12Hz，1H)，3.39(t，J＝6Hz，2H)，3.07(s，1H)，3.05(s，3H)，2.93(s，1H)，2.90-2.85(m，2H).
13C NMR(150MHz DMSO-d6)δ：172.03，171.86，171.52，163.49，161.88，161.14，158.01，154.88，153.04，151.57，150.49，150.23，149.46，140.15(d，J＝7.5Hz)，139.46，134.99，133.56，131.07(d，J＝9Hz)，129.01，128.45，127.86，124.63(d，J＝9Hz)，123.81，122.96(d，J＝9Hz)，122.45(d，J＝7.5Hz)，121.55，117.47，117.21，115.79，115.25，115.11，114.79，114.59，114.45，111.42，108.29，104.96，100.43，69.88，55.69，51.75，44.94，41.25，41.13，29.70，28.57.
实施例2：抗肿瘤活性测试
接种细胞：用含10％胎牛血清的培养基(RMPI1640或DMEM)将几种癌细胞配成单细胞悬液，在96孔板中每孔接种5000-10000个细胞，每孔体积为100μL，培养过夜。加入待测化合物溶液(固定浓度40μM初筛，在该浓度对肿瘤细胞生长抑制在50％附近的化合物设5个浓度进入梯度复筛)，每孔终体积100μL，每个化合物均设三复孔。显色：37℃，5％CO2的培养箱中培养48h后，每孔加入10μL的MTT，继续孵育4h后终止培养，弃去孔内上清液，每孔加入130μL的DMSO，振荡10min使结晶物充分溶解。比色：选择490nm波长，用酶联免疫检测仪(Bio-Rad680)读取各孔OD值，记录结果，以浓度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲线，应用两点法(Reed and Muench法)计算化合物的IC50(μM)值。设置对照组拉帕替尼，实验条件及处理方法同上。
结果见下表1：
表1不同物质的IC50(μM)值
Figure BDA0002416123280000041
从结果可以看出，化合物具有很好的体外肿瘤生长抑制活性，对胃癌SGC-7901的IC50＜1μM。

Claims (8)

1.一种具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂，分子结构式如下：
Figure FDA0002416123270000011
分子式为C49H44ClFN4O9S，分子量为918.25。
2.权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)以拉帕替尼、丁二酸酐、三乙胺为起始原料，加热条件下进行反应，除去溶剂后水洗，得到黄色固体，即拉帕替尼-丁二酸酐复合物；
(2)将拉帕替尼-丁二酸酐复合物与碳二亚胺、1-羟基苯并三唑在室温下搅拌反应，再加入三乙胺继续搅拌反应，得乳黄色混合溶液；
(3)将紫檀芪加入黄色混合溶液中，加热条件下反应，即得。
3.根据权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中拉帕替尼与过量丁二酸酐、三乙胺反应。
4.根据权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂的制备方法，其特征在于：所述紫檀芪与过量拉帕替尼-丁二酸酐复合物、碳二亚胺、1-羟基苯并三唑、三乙胺反应。
5.根据权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)反应时间8～12h。
6.根据权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)拉帕替尼、丁二酸酐溶解在二氯甲烷溶液中。
7.根据权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)1-羟基苯并三唑溶解在30ml N，N-二甲基甲酰胺溶液中。
8.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂，其特征在于：其可单药或联合用药。
CN202010194183.0A 2020-03-18 2020-03-18 具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂及其制备方法 Active CN111303129B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010194183.0A CN111303129B (zh) 2020-03-18 2020-03-18 具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010194183.0A CN111303129B (zh) 2020-03-18 2020-03-18 具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111303129A CN111303129A (zh) 2020-06-19
CN111303129B true CN111303129B (zh) 2021-10-19

Family

ID=71153438

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010194183.0A Active CN111303129B (zh) 2020-03-18 2020-03-18 具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111303129B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115475253B (zh) * 2021-05-31 2023-09-29 东南大学 拉帕替尼-癌细胞干性抑制剂偶联物、制法、药物组合物和应用

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102911163A (zh) * 2011-08-01 2013-02-06 杭州民生药业有限公司 喹唑啉衍生物、含该衍生物的组合物及所述衍生物的制药用途
CN105503746A (zh) * 2014-09-05 2016-04-20 财团法人交大思源基金会 用于促进癌细胞凋亡的化合物、其医药组合物及其用途
CN106632287A (zh) * 2016-12-19 2017-05-10 陕西师范大学 靛红杂合喹唑啉类化合物合成的靛红衍生物及其在制备抗肿瘤药物中的应用
US20170334886A1 (en) * 2014-08-28 2017-11-23 Codexis, Inc. N-substituted 4-aminoquinazoline derivatives and methods of use
CN107652275A (zh) * 2017-10-27 2018-02-02 沈阳工业大学 喹唑啉衍生物及其制备方法和用途
WO2019041733A1 (zh) * 2017-08-30 2019-03-07 重庆阿普格雷生物科技有限公司 具有协同抗癌活性的中间体药物和聚乙二醇偶联协同抗癌药物、及其制备方法和应用
CN109942630A (zh) * 2019-02-28 2019-06-28 上海市第十人民医院 基于柳胺酚和紫檀芪的天然活性分子偶联化合物及其用途
CN110330490A (zh) * 2019-06-14 2019-10-15 东南大学 一种具有抗肿瘤活性的达沙替尼类似物及其制备方法

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102911163A (zh) * 2011-08-01 2013-02-06 杭州民生药业有限公司 喹唑啉衍生物、含该衍生物的组合物及所述衍生物的制药用途
US20170334886A1 (en) * 2014-08-28 2017-11-23 Codexis, Inc. N-substituted 4-aminoquinazoline derivatives and methods of use
CN105503746A (zh) * 2014-09-05 2016-04-20 财团法人交大思源基金会 用于促进癌细胞凋亡的化合物、其医药组合物及其用途
CN106632287A (zh) * 2016-12-19 2017-05-10 陕西师范大学 靛红杂合喹唑啉类化合物合成的靛红衍生物及其在制备抗肿瘤药物中的应用
WO2019041733A1 (zh) * 2017-08-30 2019-03-07 重庆阿普格雷生物科技有限公司 具有协同抗癌活性的中间体药物和聚乙二醇偶联协同抗癌药物、及其制备方法和应用
CN107652275A (zh) * 2017-10-27 2018-02-02 沈阳工业大学 喹唑啉衍生物及其制备方法和用途
CN109942630A (zh) * 2019-02-28 2019-06-28 上海市第十人民医院 基于柳胺酚和紫檀芪的天然活性分子偶联化合物及其用途
CN110330490A (zh) * 2019-06-14 2019-10-15 东南大学 一种具有抗肿瘤活性的达沙替尼类似物及其制备方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
C-2(E)-4-(Styryl)aniline substituted diphenylpyrimidine derivatives (Sty-DPPYs) as specific kinase inhibitors targeting clinical resistance related EGFRT790M mutant;Anran Song et al.;《Bioorganic & Medicinal Chemistry》;20170318;第25卷;第2724-2729页 *
Hybrid Compounds as Multitarget Directed Anticancer Agents;Ertan Kucuksayan et al.;《Current Topics in Medicinal Chemistry》;20171231;第17卷(第11期);第1-12页 *
Iridium(III) Complex–Derived Polymeric Micelles with Low Dark Toxicity and Strong NIR Excitation for Phototherapy and Chemotherapy;Jian Zhao et al.;《Small》;20200316;第16卷;第1-9页及Supporting Information *
Novel Chimeric Histone Deacetylase Inhibitors: A Series of Lapatinib Hybrides as Potent Inhibitors of Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR), Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 (HER2),and Histone Deacetylase Activity;Siavosh Mahboobi et al.;《Journal of Medicinal Chemistry》;20101116;第53卷;第8546-8555页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111303129A (zh) 2020-06-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110372669B (zh) 一种基于crbn配体诱导egfr降解的化合物及其制备方法、药物组合物和应用
CN111303129B (zh) 具有抗肿瘤活性的多靶点激酶抑制剂及其制备方法
WO2015083833A1 (ja) 新規キナゾリン誘導体
KR20130092541A (ko) 피롤일 치환된 다이하이드로인돌 2 온 유도체, 그의 제조 방법 및 용도
CN111484435B (zh) 四氢吡咯烷类化合物或其药学上可接受的盐及其制备方法和应用
CN101878203A (zh) 作为抗癌剂的新的4-(四唑-5-基)喹唑啉衍生物
CN112300082A (zh) 一种苯基哌嗪喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐、制法与用途
CN101475513B (zh) Raf和HDAC小分子双重抑制剂及其制备方法和应用
Ito et al. Maternal undernutrition induces the expression of hypoxia-related genes in the fetal brain
CN109988110B (zh) 4-苯氧基喹啉并磺酰脲类化合物、合成该化合物的中间体及其制备方法和用途
CN109535068B (zh) 吡啶取代查尔酮类化合物或其可药用的盐及其制备方法和用途
WO2009100655A1 (zh) 芳环并三嗪类衍生物及其应用
JP2021508319A (ja) Ａｋｔ阻害剤としての塩形態及びその結晶形態
CN111170980B (zh) 一种毛蕊异黄酮衍生物及其合成方法和应用
CN101283998B (zh) 溴酚类化合物在制备治疗恶性肿瘤药物中的应用
CN108743595B (zh) 一种nk细胞免疫检查点抑制剂及其制备方法
KR20190012556A (ko) 신규한 벤질리덴아세톤 유도체 및 이의 용도
CN108558780B (zh) 一种苯并香豆素喹唑啉酮衍生物及用作dapk基因甲基化抑制剂的生物医药用途
CN111217890B (zh) 一种抑制mkk7-jnk通路信号传递的靶向抗癌多肽及其应用
CN109549931B (zh) 一种抗肿瘤药物的冻干粉剂及其制备方法
CN108558779B (zh) 一种喹唑啉酮衍生物及用作dapk基因甲基化抑制剂的生物医药用途
Pierce Jr et al. Therapy of heterotransplanted choriocarcinoma
Qin et al. The Role of Interleukin-22 Receptor1 in the Proliferation and Apoptosis of Colonrectal Cancer
CN117624133A (zh) 一种二氢喹啉类衍生物及在肺癌治疗中的应用
Jian-qing et al. Effect of Tumor Necrosis Factor (TNF) on survivin expression in NCI-H520 cell strain

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant