RU2805370C1 - Лекарственное средство, представляющее собой конъюгат с полиэтиленгликолем, способ его получения и его применение - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к конъюгированному с полиэтиленгликолем лекарственному средству формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, способу его получения, фармацевтической композиции, содержащей конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство формулы (I), и его применению для приготовления лекарственного средства для лечения рака. Также предложен интермедиат для получения конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства формулы (I). 9 н. и 6 з.п. ф-лы, 15 ил., 4 пр.

(I)

Description

Область техники

Настоящее изобретение относится к области медицины и касается конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства, способа его получения и его применения.

Предшествующий уровень техники

ПЭГ-илированное лекарственное средство имеет большое преимущество в сравнении с оригинальным лекарственным средством благодаря повышению водорастворимости молекул лекарственного средства (что очень важно для лекарств с очень низкой растворимостью, таких как паклитаксел, камптотецин или соединения платины);и это может предотвращать или уменьшать агломерацию лекарства, его иммуногенность и антигенность. Большинство низкомолекулярных противораковых лекарственных средств могут оставаться в кровотоке всего несколько минут, в то время как конъюгаты полимер-(противораковое лекарство) могут задерживаться в кровотоке на десятки или сотни часов, и даже дольше, что обеспечивает преимущество благодаря «эффекту повышенной проницаемости и накопления» (EPR эффект), вызванному протечками в капиллярах опухоли. Благодаря увеличенному гидродинамическому объему конъюгатов полимер-(противораковое лекарство), почечное выведение лекарственных средств уменьшается, лекарства защищены от ферментативного разложения, время полужизни лекарства в плазме крови увеличивается и повышается биодоступность лекарственного средства. Более того, концентрация противораковых лекарственных средств может сильно повышаться в пораженных органах, тканях или клетках по механизму пассивного или активного EPR таргетирования, тем самым значительно уменьшая токсичные побочные эффекты, вызываемые низкомолекулярными противораковыми лекарствами во всем теле. Кроме того, конъюгаты полимер-(противораковое лекарство) могут ограничивать клеточную абсорбцию лекарств по эндоцитозному пути, который ведет к доставке лекарства в лизосомы, благодаря этому нет эффекта развития лекарственной резистентности, обуславливаемого p-гликопротеиновой откачкой;конъюгаты полимер-(противораковое лекарство) могут также стимулировать или восстанавливать работу иммунной системы, что приводит к гибели раковых клеток.

Компании NEKTAR и ENZON в США успешно разработали конъюгированные с полиэтиленгликолем лекарственные средства. В настоящее время 15 конъюгированных с полиэтиленгликолем лекарственных средств одобрены FDA для продажи на рынке, и 36 новых клинических лекарственных средств находятся на первой, второй, третьей фазе клинических испытаний или на фазе рассмотрения заявки на регистрацию нового лекарственного средства. Однако все перечисленные выше ПЭГ-илированные лекарственные средства представляют собой ПЭГ-илированные индивидуальные лекарственные средства.

В китайском патенте ZL201510996205.4 раскрыто, что гемцитабин, лекарство для проведения химиотерапии, и AZD7762, представляющий собой ингибитор Chk1, одновременно пришиты на четырехрукий полиэтиленгликолевый носитель. Ингибитор Chk1 сам по себе не обладает противораковым действием, но при комбинировании с гемцитабином он может усиливать действие этого химиотерапевтического лекарства. В китайских патентах ZL201710761441.7 и ZL201710761572.5 раскрыто одновременное пришивание двух противораковых лекарственных средств на один сайт в полиэтиленгликоле, тем самым обеспечивается ингибирование разных биологических каналов передачи сигнала в раковых клетках и мишеней, и достигается свободная комбинация двух методов лечения.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение направлено на решение, по крайней мере в определенной степени, одной из технических проблем из предшествующего уровня техники. Так, в настоящем изобретении описано конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство, которое обладает прекрасной активностью в подавлении опухоли. Способ получения по настоящему изобретению позволяет эффективно и удобно получить конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство по настоящему изобретению.

Конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство

В первом аспекте настоящего изобретения, в настоящем изобретении описано конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль.

В конъюгированном с полиэтиленгликолем лекарственном средстве по настоящему изобретению, несколько одинаковых или разных молекул лекарств сконъюгированы вместе с применением аминокислоты или полипептида в качестве линкерной цепочки, и дикарбоновой кислоты с аминогруппой (например, природной аминокислоты с двумя карбоксильными группами) в качестве связующего мостика. Можно регулировать тип, соотношение и загрузку лекарственного средства. В формуле (I), ПЭГ представляет собой однорукий полиэтиленгликолевый сегмент, и его среднечисловой молекулярный вес может составлять от 2000 (2k) до 40000 (40k), например от 5k до 10k, или от 10k до 40k, например, около 2k, около 5k, около 10k, около 20k, около 30k или около 40k. В некоторых вариантах осуществления, ПЭГ реагирует с карбоксильной группой в главной цепи по терминальной аминогруппе, формируя амидную связь. Альтернативно, ПЭГ реагирует с аминогруппой в главной цепи по терминальной карбоксильной группе, формируя амидную связь. В некоторых вариантах осуществления, молекулярный вес ПЭГ включает терминальную группу в нем (т.е., производное ПЭГ, несущее реакционноспособную группу), и в некоторых вариантах осуществления, молекулярный вес ПЭГ равен молекулярному весу полиэтиленгликоля и X или X' в сумме, что может составлять от 2k до 40k, например, от 2k до 3k, от 3k до 5k, от 5k до 10k, или от 10k до 40k, например, около 2k, около 3k, около 5k, около 10k, около 40k.

(I)

где:

M представляет собой -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, -C(=O)-, -NH-C_1-6 алкилен-NH-, -C(=O)-C_1-6 алкилен-NH-, , , , , , , , , или ПЭГ_m;где ПЭГ_m представляет собой однорукий или многорукий (например, четырехрукий, восьмирукий, предпочтительно четырехрукий) полиэтиленгликолевый сегмент, и его среднечисловой молекулярный вес составляет 5k-40k, предпочтительно 5k-10k или 10k-40k, более предпочтительно 5k или 10k;

A1, A1' каждый независимо представляют собой , , , , , , или ;

A2 независимо представляет собой прямую связь или ;

L1 независимо представляет собой прямую связь или -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-;

W1, W1', W2 каждый независимо представляют собой Q1, , , , , , , , , , , , или ;

Z4, Z3, Z2, Z1, Z0 каждый независимо представляют собой , , , , , , , , , или ;

Q представляет собой -N-AC;

Q1 представляет собой -N1-AC1;

Q2 представляет собой -N2-AC2;

N, N1, N2 каждый независимо представляют собой GFLG, G, , или (предпочтительно ) ;

AC, AC1, AC2 каждый независимо представляют собой молекулы лекарств (например, молекулы лекарств с противоопухолевой активностью), предпочтительно PCB, DOX, LPT, SB7, PKA, SN38, PTX или NPB;

n1, n2 каждый независимо равны 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6;

Y, Y' каждый независимо представляют собой прямую связь, GLFG, -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, , или ;

X, X' каждый независимо представляют собой , или ;

ПЭГ представляет собой однорукий полиэтиленгликолевый сегмент, и его среднечисловой молекулярный вес независимо представляет равен 5k-40k;

j1 равен 1, 2, 3, 4, 5 или 6;

j2, j3 каждый независимо равны 0 или 1.

Следует отметить, что в некоторых вариантах осуществления ПЭГ_m связан с остальной частью структуры соединения формулы (I) через карбонил.

Альтернативно, в конъюгированном с полиэтиленгликолем лекарственном средстве по настоящему изобретению, несколько одинаковых или разных молекул лекарств сконъюгированы вместе с применением аминокислоты или полипептида в качестве линкерной цепочки, и дикарбоновой кислоты с аминогруппой (например, природной аминокислоты с двумя карбоксильными группами) в качестве связующего мостика. Можно регулировать тип, соотношение и загрузку лекарственного средства. В форме (I), ПЭГ представляет собой однорукий полиэтиленгликолевый сегмент, и его среднечисловой молекулярный вес может составлять от 2k до 40k, например от 5k до 10k, или от 10k до 40k, например, около 2k, около 5k, около 10k, около 20k, около 30k или около 40k. В некоторых вариантах осуществления, ПЭГ реагирует с карбоксильной группой в главной цепи по терминальной аминогруппе, формируя амидную связь. Альтернативно, ПЭГ реагирует с аминогруппой в главной цепи по терминальной карбоксильной группе, формируя амидную связь. В некоторых вариантах осуществления, молекулярный вес ПЭГ включает терминальную группу в нем (т.е., производное ПЭГ, несущее реакционноспособную группу), и в некоторых вариантах осуществления, молекулярный вес ПЭГ равен молекулярному весу полиэтиленгликоля и X или X' в сумме, что может составлять от 2k до 40k, например, от 2k до 3k, от 3k до 5k, от 5k до 10k, или от 10k до 40k, например, около 2k, около 3k, около 5k, около 10k, около 40k

где:

M представляет собой -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, -C(=O)-, -NH-C_1-6 алкилен-NH-, -C(=O)-C_1-6 алкилен-NH-, , , , , , , или ;

A1, A1' каждый независимо представляют собой , или ;

A2 независимо представляет собой прямую связь или ;

L1 независимо представляет собой прямую связь или -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-;

W1, W1', W2 каждый независимо представляют собой Q1, , , , , , , , , или ;

Z4, Z3, Z2, Z1, Z0 каждый независимо представляют собой , , , или ;

Q представляет собой -N-AC;

Q1 представляет собой -N1-AC1;

Q2 представляет собой -N2-AC2;

N, N1, N2 каждый независимо представляют собой GFLG, G, или ;

AC, AC1, AC2 каждый независимо представляют собой молекулы лекарств (например, молекулы лекарств с противоопухолевой активностью), предпочтительно PCB, DOX, LPT, SB7, PKA, SN38 или PTX;

n1, n2 каждый независимо равны 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6;

Y, Y' каждый независимо представляют собой прямую связь, GLFG, -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, , или ;

X, X' каждый независимо представляют собой , или ;

ПЭГ представляет собой однорукий полиэтиленгликолевый сегмент, и его среднечисловой молекулярный вес независимо равен 5k-40k;

j1 равен 1, 2, 3, 4, 5 или 6;

j2, j3 каждый независимо представляют собой 0 или 1.

В некоторых вариантах осуществления, конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство имеет структуру, представленную формулой (II), формулой (III), формулой (IV) или формулой (V):

В некоторых вариантах осуществления, конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство имеет структуру, представленную формулой (II), где:

M представляет собой -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, , -NH-C_1-6 алкилен-NH-, , , , , , или ПЭГ_m, предпочтительно , , , , , , , , или ПЭГ_m, где ПЭГ_m представляет собой однорукий или многорукий (например, четырехрукий, восьмирукий, предпочтительно четырехрукий) полиэтиленгликолевый сегмент, и его среднечисловой молекулярный вес составляет 5k-40k, предпочтительно 5k-10k или 10k-40k, более предпочтительно 5k или 10k,

A1 независимо представляет собой , , , , или , предпочтительно , , , , или ,

Y независимо представляет собой прямую связь, , GLFG, -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, или , предпочтительно прямую связь, , GLFG, , или ,

X независимо представляет собой , или ,

W1 независимо представляет собой , , , , , или ,

Z4, Z3, Z2, Z1, Z0 каждый независимо представляют собой , , , , , , , или , предпочтительно , , , , , , , или ,

Q представляет собой -N-AC,

Q1 представляет собой -N1-AC1,

Q2 представляет собой -N2-AC2,

N, N1, N2 каждый независимо представляют собой G, GFLG, , или (предпочтительно ),

AC, AC1, AC2 каждый независимо представляют собой SN38, PKA, PCB, LPT, SB7, PTX или NPB,

среднечисловой молекулярный вес ПЭГ независимо равен 5k-40k.

Альтернативно, в некоторых вариантах осуществления, конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство имеет структуру, представленную формулой (II), где:

M представляет собой -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, , -NH-C_1-6 алкилен-NH-, , , , или , предпочтительно , , , , , , или ,

A1 независимо представляет собой , или , предпочтительно , или ,

Y независимо представляет собой прямую связь, GLFG, -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, или , предпочтительно прямую связь, GLFG, , или ,

X независимо представляет собой , или ,

W1 независимо представляет собой , , или ,

Z4, Z3, Z2, Z1, Z0 каждый независимо представляют собой , или , предпочтительно , или ,

Q представляет собой -N-AC,

Q1 представляет собой -N1-AC1,

Q2 представляет собой -N2-AC2,

N, N1, N2 каждый независимо представляют собой G, GFLG, или ,

AC, AC1, AC2 каждый независимо представляют собой SN38, PKA, PCB, LPT или SB7,

среднечисловой молекулярный вес ПЭГ независимо равен 5k-40k.

В некоторых вариантах осуществления,

M представляет собой -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, A1 представляет собой , Y представляет собой , X представляет собой , W1 представляет собой , Z4, Z2 и Z1 представляют собой , Z3 и Z0 представляют собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой , X представляет собой , W1 представляет собой , Z4, Z2 и Z1 представляют собой , Z3 и Z0 представляют собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 и N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой PCB, AC2 представляет собой PKA.

В некоторых вариантах осуществления, M представляет собой -NH-C_1-6 алкилен-NH-, A1 представляет собой , Y представляет собой GLFG, X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой GLFG, X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q представляет собой -N-AC, N представляет собой G, AC представляет собой SN38.

В некоторых вариантах осуществления, M представляет собой или , A1 представляет собой , Y представляет собой прямую связь или -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, X представляет собой или , W1 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой прямую связь, X представляет собой , W1 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q представляет собой -N-AC, N представляет собой GFLG, AC представляет собой LPT.

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой , X представляет собой , W1 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q представляет собой -N-AC, N представляет собой GFLG, AC представляет собой PCB.

В некоторых вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой прямую связь, X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой прямую связь, X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1, N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой NPB, AC2 представляет собой PCB.

В некоторых вариантах осуществления, M представляет собой ПЭГ_m, ПЭГ_m представляет собой однорукий полиэтиленгликолевый сегмент, и его среднечисловой молекулярный вес составляет 5k-40k, предпочтительно 5k-10k или 10k-40k, более предпочтительно 5k, A1 представляет собой , Y представляет собой прямую связь, X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой ПЭГ_m, ПЭГ_m представляет собой однорукий полиэтиленгликолевый сегмент, и его среднечисловой молекулярный вес составляет 5k-40k, предпочтительно 5k-10k или 10k-40k, более предпочтительно 5k, A1 представляет собой , Y представляет собой прямую связь, X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q представляет собой -N-AC, N представляет собой G, AC представляет собой SN38.

В некоторых вариантах осуществления, M представляет собой ПЭГ_m, ПЭГ_m представляет собой многорукий (например, четырехрукий, восьмирукий, предпочтительно четырехрукий) полиэтиленгликолевый сегмент, и его среднечисловой молекулярный вес составляет 5k-40k, предпочтительно 5k-10k или 10k-40k, более предпочтительно 10k, A1 представляет собой , Y представляет собой прямую связь, X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой ПЭГ_m, ПЭГ_m представляет собой многорукий (например, четырехрукий, восьмирукий, предпочтительно четырехрукий) полиэтиленгликолевый сегмент, и его среднечисловой молекулярный вес составляет 5k-40k, предпочтительно 5k-10k или 10k-40k, более предпочтительно 10k, A1 представляет собой , Y представляет собой прямую связь, X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1, N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой LPT, AC2 представляет собой PCB.

В некоторых вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой , X представляет собой , W1 представляет собой , Z3 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой , X представляет собой , W1 представляет собой , Z3 is , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1, N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой LPT, AC2 представляет собой PCB.

В некоторых вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой , X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой , X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1, N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой LPT, AC2 представляет собой PCB.

В некоторых вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой прямую связь, X представляет собой , W1 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой прямую связь, X представляет собой , W1 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q представляет собой -N-AC, N представляет собой , AC представляет собой PTX.

В некоторых вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой , X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой , X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q представляет собой -N-AC, N представляет собой G, AC представляет собой SN38.

В некоторых вариантах осуществления, где:

M представляет собой , , , ,
-C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, , или , A1 представляет собой или , Y представляет собой прямую связь, GLFG, -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)- или , X представляет собой , или , W1 представляет собой или , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой .

Альтернативно, в некоторых вариантах осуществления, где:

M представляет собой , , , , -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, или , A1 представляет собой или , Y представляет собой прямую связь, GLFG, -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)- или , X представляет собой , или , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой , X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 и N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой SB7, AC2 представляет собой PCB.

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой , X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 и N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой SB7, AC2 представляет собой PCB.

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой GLFG, X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 и N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой SB7, AC2 представляет собой PCB.

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой , X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 и N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой SB7, AC2 представляет собой PCB.

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой GLFG, X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 и N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой SB7, AC2 представляет собой PCB.

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой , X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 и N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой SB7, AC2 представляет собой LPT.

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой или , A1 представляет собой , Y представляет собой прямую связь, X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 и N2 представляют собой GFLG, AC1, AC2 каждый независимо представляют собой PCB, SB7 или LPT.

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой , X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q представляет собой -N-AC, N представляет собой GFLG, AC представляет собой PCB.

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , Y представляет собой прямую связь, X представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q представляет собой -N-AC, N представляет собой GFLG, AC представляет собой NPB.

В некоторых вариантах осуществления, конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство имеет структуру, представленную формулой (III), где:

M представляет собой , -C(=O)-C_1-6 алкилен-NH- или
-C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, предпочтительно , или ,

A1, A1' каждый независимо представляют собой , , или , предпочтительно , , или ,

Y, Y' каждый независимо представляют собой прямую связь или ,

X и X' представляют собой ,

W1, W1' каждый независимо представляют собой , Q1, , , , , или ,

Z4, Z3, Z2, Z1, Z0 каждый независимо представляют собой , , , или , предпочтительно , , , , или ,

Q представляет собой -N-AC,

Q1 представляет собой -N1-AC1,

Q2 представляет собой -N2-AC2,

N, N1, N2 каждый независимо представляют собой GFLG, G, или ,

AC, AC1, AC2 каждый независимо представляют собой SN38, PKA, PCB, PTX, LPT, SB7 или DOX,

среднечисловой молекулярный вес ПЭГ независимо составляет 5k-40k.

Альтернативно, в некоторых вариантах осуществления, конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство имеет структуру, представленную формулой (III), где:

M представляет собой , -C(=O)-C_1-6 алкилен-NH- или
-C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, предпочтительно , или ,

A1, A1' каждый независимо представляют собой или , предпочтительно или ,

Y, Y' каждый независимо представляют собой прямую связь или ,

X и X' представляют собой ,

W1, W1' каждый независимо представляют собой Q1, ,

, , , или ,

Z4, Z3, Z2, Z1, Z0 каждый независимо представляют собой , , , или , предпочтительно , , , , или ,

Q1 представляет собой -N1-AC1,

Q2 представляет собой -N2-AC2,

N1, N2 каждый независимо представляют собой GFLG, G, или ,

AC1, AC2 каждый независимо представляют собой SN38, PKA, PCB, PTX, LPT, SB7 или DOX,

среднечисловой молекулярный вес ПЭГ независимо составляет 5k-40k.

В некоторых вариантах осуществления,

M представляет собой , A1 представляет собой , A1' представляет собой , Y представляет собой прямую связь, Y' представляет собой , W1 представляет собой , W1' представляет собой , Z4, Z2 и Z0 представляют собой , Z3 и Z1 представляют собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , A1' представляет собой , Y представляет собой прямую связь, Y' представляет собой , W1 представляет собой , W1' представляет собой , Z4, Z2 и Z0 представляют собой , Z3 и Z1 представляют собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 представляет собой G, N2 представляет собой GFLG, AC1 представляет собой SN38, AC2 представляет собой PKA.

В некоторых вариантах осуществления, M представляет собой
-C(=O)-C_1-6 алкилен-NH-, A1 представляет собой , A1' представляет собой , Y представляет собой прямую связь, Y' представляет собой , W1 представляет собой , W1' представляет собой Q1, Z2 и Z0 представляют собой , Z1 представляет собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , A1' представляет собой , Y представляет собой прямую связь, Y' представляет собой , W1 представляет собой , W1' представляет собой Q1, Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 представляет собой G или , N2 представляет собой GFLG, AC1 представляет собой PTX или DOX, AC2 представляет собой PCB или LPT.

В некоторых вариантах осуществления, M представляет собой -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, A1 и A1' представляют собой , Y и Y' представляют собой прямую связь, W1 представляет собой , W1' представляет собой , Z3 и Z1 представляют собой , Z2 и Z0 представляют собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 и A1' представляют собой , Y и Y' представляют собой прямую связь, W1 представляет собой , W1' представляет собой , Z3 и Z1 представляют собой , Z2 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 и N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой SB7, AC2 представляет собой PCB.

В некоторых вариантах осуществления, M представляет собой
-C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, A1 и A1' представляют собой , Y и Y' представляют собой прямую связь, W1 представляет собой , W1' представляет собой Q1, Z1 и Z0 представляют собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 и A1' представляют собой , Y и Y' представляют собой прямую связь, W1 представляет собой , W1' представляет собой Q1, Z1 и Z0 представляют собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 и N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой PCB, AC2 представляет собой LPT.

В некоторых вариантах осуществления, M представляет собой
-C(=O)-C_1-6 алкилен-NH-, A1 представляет собой , A1' представляет собой , Y и Y' представляют собой прямую связь, W1 и W1' представляют собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , A1 представляет собой , A1' представляет собой , Y и Y' представляют собой прямую связь, W1 и W1' представляют собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q представляет собой -N-AC, N представляет собой GFLG, AC представляет собой SB7.

В некоторых вариантах осуществления, конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство имеет структуру, представленную формулой (IV), где:

M представляет собой или ,

A1 представляет собой , предпочтительно ,

X представляет собой ,

W1 независимо представляет собой , или ,

Z4, Z3, Z2, Z1, Z0 каждый независимо представляют собой , или , предпочтительно , или ,

Q представляет собой -N-AC,

Q1 представляет собой -N1-AC1,

Q2 представляет собой -N2-AC2,

N1 и N2 представляют собой GFLG,

AC1, AC2 каждый независимо представляют собой PCB, SB7, LPT, PKA,

среднечисловой молекулярный вес ПЭГ независимо составляет 5k-40k.

В некоторых вариантах осуществления,

M представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 и N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой LPT, AC2 представляет собой SB7.

В некоторых вариантах осуществления, M представляет собой , W1 представляет собой , Z4 и Z1 представляют собой , Z3, Z2 и Z0 представляют собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой , W1 представляет собой , Z4 и Z1 представляют собой , Z3, Z2 и Z0 представляют собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 и N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой PCB, AC2 представляет собой PKA.

В некоторых вариантах осуществления, M представляет собой или , W1 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, M представляет собой или , W1 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q представляет собой -N-AC, N представляет собой GFLG, AC представляет собой LPT или PCB.

В некоторых вариантах осуществления, конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство имеет структуру, представленную формулой (V), где:

L1 представляет собой -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, предпочтительно ,

A2 представляет собой , предпочтительно ,

M представляет собой ,

A1 представляет собой , предпочтительно ,

Y представляет собой ,

X представляет собой ,

W1, W2 каждый независимо представляют собой ,

Z2, Z1, Z0 каждый независимо представляют собой , или , предпочтительно , или ,

Q1 представляет собой -N1-AC1,

Q2 представляет собой -N2-AC2,

N1 и N2 представляют собой GFLG,

AC1, AC2 каждый независимо представляют собой PCB или SB7,

среднечисловой молекулярный вес ПЭГ равен 5k-40k.

В некоторых вариантах осуществления,

W1 и W2 представляют собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой .

В некоторых частных вариантах осуществления, W1 и W2 представляют собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 и N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой PCB, AC2 представляет собой SB7.

Во втором аспекте настоящего изобретения, в настоящем изобретении описано конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство или его фармацевтически приемлемая соль, где конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство выбрано из следующих:

1	где имеет среднечисловой молекулярный вес 20k
2	где имеет среднечисловой молекулярный вес 5k
3	где имеет среднечисловой молекулярный вес 40k
4	где имеет среднечисловой молекулярный вес 20k
5	где имеет среднечисловой молекулярный вес 10k
6	где имеет среднечисловой молекулярный вес 40k
7	где имеет среднечисловой молекулярный вес 10k
8	где имеет среднечисловой молекулярный вес 5k
9	где имеет среднечисловой молекулярный вес 5k
10	где имеет среднечисловой молекулярный вес 40k
11	где имеет среднечисловой молекулярный вес 5k
12	где имеет среднечисловой молекулярный вес 20k
13	где имеет среднечисловой молекулярный вес 10k
14	где имеет среднечисловой молекулярный вес 20k
15	где имеет среднечисловой молекулярный вес 20k
16	где имеет среднечисловой молекулярный вес 20k
17	где имеет среднечисловой молекулярный вес 10k
18	где имеет среднечисловой молекулярный вес 20k
19	где имеет среднечисловой молекулярный вес 5k
20	где имеет среднечисловой молекулярный вес 5k
21	где имеет среднечисловой молекулярный вес 5k
22	где имеет среднечисловой молекулярный вес 10k
23	где имеет среднечисловой молекулярный вес 10k
24	где имеет среднечисловой молекулярный вес 10k
25	где имеет среднечисловой молекулярный вес 10k
26	где имеет среднечисловой молекулярный вес 5k
27	где имеет среднечисловой молекулярный вес 10k, имеет среднечисловой молекулярный вес 5k
28	где имеет среднечисловой молекулярный вес 10k
29	где имеет среднечисловой молекулярный вес 10k
30	где имеет среднечисловой молекулярный вес 5k
31	где имеет среднечисловой молекулярный вес 5k
32	где имеет среднечисловой молекулярный вес 10k

.

Интермедиат и способ получения

В третьем аспекте настоящего изобретения, в настоящем изобретении описан интермедиат для получения описанного выше конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли, где указанный интермедиат выбран: из следующих

35-11
43-11
27-121
25-221
25-226
25-227
42-34
37-45
45-6
45-9
41-27
37-81
35-90
44-161
41-119
49-124
40-171
42-134
41-131
29-248

.

В четвертом аспекте настоящего изобретения, в настоящем изобретении описан способ получения описанного выше конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли, включающий следующие стадии:

(1) получение интермедиата или , где M, A1, W1, Y и j1 имеют указанные выше значения, где:

в получении интермедиата , когда Y отличен от прямой связи, то -Y-OH содержит терминальную карбоксильную группу, когда Y представляет собой прямую связь, то содержит терминальную карбоксильную группу,

в получении интермедиата , когда Y отличен от прямой связи, то -Y-H содержит терминальную аминогруппу, когда Y представляет собой прямую связь, то содержит терминальную аминогруппу;

(2) введение ПЭГ с аминогруппой или активированной аминогруппой в реакцию амидирования с интермедиатом , или введение ПЭГ с карбоксильной группой или активированной карбоксильной группой в реакцию амидирования с интермедиатом , получая описанное выше конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство.

В пятом аспекте настоящего изобретения, в настоящем изобретении описан интермедиат для получения описанного выше конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства формулы (III) или его фармацевтически приемлемой соли, где интермедиат выбран из следующих:

10-97
10-98
39-14
39-15
29-210
27-202
27-218
27-224
35-155

.

В шестом аспекте настоящего изобретения, в настоящем изобретении описан способ получения описанного выше конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства формулы (III) или его фармацевтически приемлемой соли, включающий следующие стадии:

(1) получение интермедиата , где M, A1, A1', W1, W1', Y, Y' и j1 имеют указанные выше значения, где:

когда Y или Y' отличен от прямой связи, то -Y-H или -Y'-H содержит терминальную аминогруппу,

когда Y или Y' представляет собой прямую связь, то или содержит терминальную аминогруппу;

(2) введение ПЭГ с карбоксильной группой или активированной карбоксильной группой в реакцию амидирования с интермедиатом , получая описанное выше конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство.

В седьмом аспекте настоящего изобретения, в настоящем изобретении описан интермедиат для получения описанного выше конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства формулы (IV) или его фармацевтически приемлемой соли, где интермедиат выбран из следующих:

39-30
26-258

.

В восьмом аспекте настоящего изобретения, в настоящем изобретении описан способ получения описанного выше конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства формулы (IV) или его фармацевтически приемлемой соли, включающий следующие стадии:

(1) получение интермедиата , где M, A1, W1 и j1 имеют указанные выше значения, где содержит терминальную аминогруппу;

(2) введение ПЭГ с карбоксильной группой или активированной карбоксильной группой в реакцию амидирования с интермедиатом , получая описанное выше конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство.

В девятом аспекте настоящего изобретения, в настоящем изобретении описан интермедиат для получения описанного выше конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства формулы (V) или его фармацевтически приемлемой соли, где интермедиат выбран из следующих:

35-36

.

В десятом аспекте настоящего изобретения, в настоящем изобретении описан способ получения описанного выше конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства формулы (V) или его фармацевтически приемлемой соли, включающий следующие стадии:

(1) получение интермедиата , где M, A1, A2, W1, W2, L1, Y и j1 имеют указанные выше значения, где -Y-OH содержит терминальную карбоксильную группу;

(2) введение ПЭГ с аминогруппой или активированной аминогруппой в реакцию амидирования с интермедиатом , получая описанное выше конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство.

Фармацевтическая композиция и фармацевтическое применение

В одном аспекте настоящего изобретения, в настоящем изобретении описана фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически и/или профилактически эффективное количество конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства или его фармацевтически приемлемой соли по настоящему изобретению;данная композиция дополнительно содержит одно или больше фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, таких как носители и/или растворители. Носители и/или растворители включают (но не ограничиваются только ими): ионообменные смолы, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, белки плазмы крови, такие как белки плазмы крови человека, буферные вещества, такие как фосфат, глицерин, сорбиновая кислота, сорбат калия, смесь частичных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, вода, соль или электролит, такой как протамин сульфат, динатрия гидрофосфат, гидрофосфат калия, хлорид натрия, соль цинка, коллоидный оксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, целлюлоза, полиэтиленгликоль, натрия карбоксиметилцеллюлоза, полиакрилат, пчелиный воск, полиэтилен-полиоксипропилен блок-сополимер и ланолин.

Фармацевтическая композиция может быть приготовлена в виде любой фармацевтически приемлемой дозированной формы. Фармацевтическую композицию можно также вводит пациенту, нуждающемуся в таком лечении, любым подходящим способом, таким как пероральное, парентеральное, ректальное или легочное введение. В случае перорального пути введения, фармацевтическая композиция может вводиться в состав общеизвестных твердых препаратов, таких как таблетки, капсулы, пилюли, гранулы и т.д.;ее можно также вводить в состав жидких препаратов для перорального введения, таких как растворы или суспензии для перорального введения, и сироп. Когда фармацевтическая композиция вводится в состав препаратов для перорального введения, могут добавляться подходящие наполнители, связующие вещества, разрыхлители, лубриканты и т.п.. В случае парентерального введения, фармацевтическая композиция может вводиться в состав инъекционных препаратов, включая инъекционные растворы, стерильные порошки для инъекций и концентрированные растворы для инъекций. Когда фармацевтическая композиция вводится в состав инъекционных препаратов, их можно получать общеизвестными в области фармацевтики способами. В случае инъекционных препаратов, можно не добавлять или добавлять подходящие добавки, в зависимости от природы лекарственного средства. В случае ректального введения, фармацевтическая композиция может вводиться в состав суппозиториев и т.п.. В случае легочного введения, фармацевтическая композиция может вводиться в состав ингаляционного препарата или спрея. Предпочтительно, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению вводится в состав инъекционного препарата, такого как раствор для инъекции. Альтернативно, стандартный физраствор используется как носитель в растворах для инъекции.

В другом аспекте, в настоящем изобретении описано применение конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли в получении лекарственного средства для лечения и/или предотвращения заболевания (такого как рак). Заболевание представляет собой заболевание, которое подвергается лечению активным ингредиентом в конъюгированном с полиэтиленгликолем лекарственном средстве.

В другом аспекте, в настоящем изобретении описано конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении и/или предотвращении заболевания (такого как рак). Заболевание представляет собой заболевание, которое подвергается лечению активным ингредиентом в конъюгированном с полиэтиленгликолем лекарственном средстве.

В настоящем изобретении рак означает заболевание, характеризующееся пролиферацией клеток, включая (но не ограничиваясь только ими): рак кишечника, лейкоз, лимфома, рак мочевого пузыря, рак костей, опухоль мозга, медуллобластома, глиома, рак груди, аденома/карциноид, рак надпочечника, рак панкреатических островков, рак шейки матки, рак эндометрия, рак яичника, колоректальный рак, рак кожи, рак пищевода, рак глаза, рак желчного пузыря, рак желудка, рак головы и шеи, рак печени, меланома, саркома Капоши, рак почки, рак ротовой полости, рак легкого, рак носоглотки, нейробластома, рак яичника, рак поджелудочной железы, рак щитовидной железы, рак паращитовидной железы, рак полового члена, рак простаты, рак уретры, рак вагины, рак вульвы, рак анального отверстия, саркома и т.д., включая метастазы указанных видов рака.

В другом аспекте, в настоящем изобретении описан способ лечения и/или предотвращения заболевания (такого как рак), включающий введение эффективного количества конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли пациенту, нуждающемуся в этом. Режим дозировки можно подобрать для достижения оптимального желаемого ответа. Например, можно вводить однократную дозу лекарственного средства, можно вводить несколько раздельных доз на протяжении некоторого времени, или дозу можно пропорционально снижать или повышать в соответствии со срочными показаниями к лечению. Следует отметить, что доза может варьироваться в зависимости от типа и степени тяжести патологического состояния, которое необходимо облегчить, и она может представлять собой одну или несколько доз. Следует также понимать, что для каждого конкретного пациента необходимо подбирать свой режим дозировки в соответствии с потребностями пациента и профессиональным мнением специалиста, осуществляющего введение композиции или контролирующего введение композиции.

В настоящем изобретении, термин "пациент" включает человека и животных, отличных от человека. Примеры людей-пациентов включают пациентов, страдающих от заболеваний, таких как описанные в настоящем тексте, или людей, не страдающих такими заболеваниями. В настоящем изобретении, «животные, отличные от человека» включают всех позвоночных, таких как не-млекопитающие (например, птицы, амфибии и рептилии) и млекопитающие, такие как нечеловекообразные обезьяны, сельскохозяйственные животные и/или домашние животные (такие как овцы, собаки, кошки, коровы, свиньи и т.д.).

Разъяснение или определение терминов.

В настоящем изобретении, действующее вещество, подходящее для конъюгирования с полиэтиленгликолем, может представлять собой молекулу лекарственного средства, содержащую по меньшей мере одну аминогруппу, гидроксильную группу, карбоксильную группу или ацильную группу, например, молекулу лекарственного средства, имеющего противоопухолевую активность, содержащую по меньшей мере одну аминогруппу, гидроксильную группу, карбоксильную группу или ацильную группу, такого как MK2, LPT, PCB, SB7, PKA, NPB и т.п., которые представляют собой следующие:

Аббревиатура	Название	CAS номер или структурная формула
MK2	MK-2206⋅2HCl	1032350-13-2
LPT	Лапатиниб	231277-92-2
PCB	Палбоциклиб	571190-30-2
SB7	SB-743921	940929-33-9
PKA	Производное PKI-587, в котором две терминальные метильные группы удалены (в сравнении с PKI-587)
NPB	Нирапариб (MK-4827)	1038915-60-4

Если ниже не указано иное, все технические и научные термины, применяющиеся в настоящем тексте, имеют общеизвестное квалифицированным специалистам в данной области значение. Описание применяющихся в настоящем тексте технологий соответствует известным в данной области технологиям, включая технические изменения или эквиваленты, очевидные для квалифицированных специалистов в данной области. Несмотря на то, что описанные ниже термины хорошо понятны квалифицированным специалистам в данной области, ниже даны определения для более ясного понимания настоящего изобретения.

При использовании в настоящем тексте, "ПЭГ" представляет собой аббревиатуру для полиэтиленгликоля, которая относится к гомополимеру с повторяющимися фрагментами -CH₂CH₂O-, включая однорукий полиэтиленгликоль, многорукий полиэтиленгликоль и их производные, такие как производные с реакционноспособной функциональной группой, такой как аминогруппа или карбоксильная группа, в качестве терминальной группы. В настоящем изобретении, руки многорукого полиэтиленгликоля предпочтительно имеют ту же степень полимеризации. Когда указывается молекулярный вес многорукого полиэтиленгликоля, молекулярный вес означает общий молекулярный вес каждой руки. В структурной формуле по настоящему изобретению, подстрочная буква “m” или “n” у повторяющегося фрагмента полиэтиленгликоля означает степень полимеризации полиэтиленгликоля. Когда полиэтиленгликоль представляет собой многорукий полиэтиленгликоль, буква “m” или “n” представляет собой степень полимеризации каждой руки.

В разных разделах настоящей спецификации заместители в раскрытых соединениях по настоящему изобретению описаны в терминах типов групп или интервалов. Следует особо указать, что настоящее изобретение включает каждую независимую субкомбинацию каждого члена этих типов групп и интервалов. Например, термин “C₁-C₆ алкил” в частности означает метил, этил, C₃ алкил, C₄ алкил, C₅ алкил и C₆ алкил.

Если не указано иное, термин "алкил" означает насыщенную линейную или разветвленную одновалентную углеводородную группу, содержащую 1 - 6 атомов углерода (C₁-C₆ алкильная группа), или 1 - 4 атомов углерода (C₁-C₄ алкильная группа), или 1 - 3 атомов углерода (C₁-C₃ алкильная группа), где алкильная группа может быть независимо и необязательно замещена одним или больше заместителями, указанными в настоящем тексте, включая (но не ограничиваясь только ими) дейтерий, аминогруппу, гидроксильную группу, циано-группу, F, Cl, Br, I, меркапто-группу, нитро-группу, оксо-группу (= O) и т.п.. Примеры алкильной группы включают (но не ограничиваются только ими) метил (Me, -CH₃), этил (Et, -CH₂CH₃), н-пропил (n-Pr, -CH₂CH₂CH₃), изо-пропил (i-Pr, -CH(CH₃)₂), н-бутил (n-Bu, -CH₂CH₂CH₂CH₃), изо-бутил (i-Bu, -CH₂CH(CH₃)₂), втор-бутил (втор-Bu, -CH(CH₃)CH₂CH₃), трет-бутил (т-Bu, -C(CH₃)₃), н-пентил (-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃), 2-пентил (-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₃), 3-пентил (-CH(CH₂CH₃)₂), 2-метил-2-бутил (-C(CH₃)₂CH₂CH₃), 3-метил-2-бутил (-CH(CH₃)CH(CH₃)₂), 3-метил-1-бутил (-CH₂CH₂CH(CH₃)₂), 2-метил-1-бутил (-CH₂CH(CH₃)CH₂CH₃), н-гексил (-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃), 2-гексил (-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₂CH₃), 3-гексил (-CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃)), 2-метил-2-пентил (-C(CH₃)₂CH₂CH₂CH₃), 3-метил-2-пентил (-CH(CH₃)CH(CH₃)CH₂CH₃), 4-метил-2-пентил (-CH(CH₃)CH₂CH(CH₃)₂), 3-метил-3-пентил (-C(CH₃)(CH₂CH₃)₂), 2-метил-3-пентил (-CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)₂), 2,3-диметил-2-бутил (-C(CH₃)₂CH(CH₃)₂), 3,3-диметил-2-бутил (-CH(CH₃)C(CH₃)₃), н-гепти, н-октил и т.п.. Термин "алкил" и его префикс "алк" при использовании в настоящем тексте оба включают линейные и разветвленные насыщенные углеродные цепочки.

Термин "алкилен" означает насыщенную двухвалентную углеводородную группу, получаемую удалением двух атомов водорода от линейной или разветвленной насыщенной алкильной группы, например "C₁-C₆ алкилен" образуется из C₁-C₆ алкила, "C₁-C₄ алкилен" образуется из C₁-C₄ алкила, "C₁-C₃ алкилен" образуется из C₁-C₃ алкила,. Алкиленовая группа может быть замещенной или незамещенной, и заместитель может представлять собой (но не ограничен только ими) дейтерий, гидроксильную группу, аминогруппу, галоген, циано-группу, арил, гетероарил, алкокси-группу, алкил, алкенил, алкинил, гетероциклил, меркапто-группу, нитро-группу или арилокси-группу. Примеры алкиленовой группы включают (но не ограничиваются только ими) метилен (-CH₂-), этилен (-CH₂-CH₂-), изопропилиден (-CH₂-CH(CH₃)-), этан-1,1-диил, 2-метоксипропан-1,1-диил, 2-гидроксипропан-1,1-диил, 2-метил-2-гидроксипропан- 1,1-диил и т.п.. Определение алкильной группы дано выше.

Кроме того, следует отметить, что если не указано иное, то выражения “каждый … независимо представляют собой” и “… и … каждый независимо представляют собой”, применяющиеся в настоящем тексте, являются взаимозаменяемыми, и оба должны пониматься в широком смысле. Они означают, что определенные опции, выраженные одним и тем же символом в разных группах, не влияют друг на друга, или что определенные опции, выраженные одним и тем же символом в одной группе, не влияют друг на друга.

При использовании в настоящем тексте, когда переменная представляет собой “прямую связь”, это означает, что нет линкерной группы, и, соответственно, нет заместителя у этой линкерной группы. Например, в -X-Y-Z, если Y представляет собой прямую связь, то этот фрагмент представляет собой -X-Z, и соответственно, нет заместителя у Y.

При использовании в настоящем тексте, термин "фармацевтически приемлемая соль" соединения по настоящему изобретению включает соль данного соединения с кислотой и соль данного соединения с основанием, такую как гидрохлоридная, гексафторфосфатная и меглуминовая соль.

При использовании в настоящем тексте, волнистая линия "" в структурной формуле означает положение, по которому другая группа связана со структурой, представленной данной структурной формулой.

При использовании в настоящем тексте, термин "эффективное количество" означает количество соединения, которое обеспечивает облегчение одного или больше симптомов заболевания, подвергающегося лечению, в определенной степени после его введения.

При использовании в настоящем тексте, термин "лечение" означает реверсию, уменьшение степени тяжести или ингибирование заболевания или патологического состояния, к которому данный термин применяется, или развития одного или больше симптомов такого заболевания или патологического состояния, или предотвращение заболевания или патологического состояния, или одного или больше симптомов такого заболевания или патологического состояния

Полезный эффект

Конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство по настоящему изобретению обладает прекрасной противоопухолевой активностью. Согласно способу получения по настоящему изобретению, конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство по настоящему изобретению можно получить эффективно и удобно.

Краткое описание чертежей

На Фиг. 1 показано получение лекарственных средств 44-2 и 27-134;

На Фиг. 2 показаны значения поглощения для лекарственных средств 44-2 и 27-134;

На Фиг. 3 показано ингибирующее действие лекарственного средства 44-2 на MDA-MB-231 раковые клетки;

На Фиг. 4 показано ингибирующее действие лекарственного средства 27-134 на Colo205 раковые клетки;

На Фиг. 5 показаны результаты вычисления IC₅₀ для лекарственных средств 44-2 и 27-134;

На Фиг. 6, Фиг. 7 и Фиг. 8 показан тренд роста опухоли для каждой группы в Примере 3;

На Фиг. 9, Фиг. 10 и Фиг. 11 приведены схематические диаграммы степени ингибирования веса опухоли для каждой группы в Примере 3;

На Фиг. 12 приведены фотографии умерщвленных животных каждой группы в Примере 3;

На Фиг. 13 приведены фотографии опухолей в каждой группе в Примере 3;

На Фиг. 14 показан тренд роста опухоли для каждой группы в Примере 4;

На Фиг. 15 приведена схематическая диаграмма степени ингибирования веса опухоли для каждой группы в Примере 4.

Подробное описание

Варианты осуществления настоящего изобретения будут описаны ниже подробнее в связке с примерами. Однако квалифицированному специалисту в данной области будет понятно, что описанные ниже примеры приведены исключительно для иллюстрации настоящего изобретения, а не для ограничения объема настоящего изобретения. Примеры без указания конкретных условий были реализованы в стандартных условиях или в условиях, рекомендованных производителями. Применявшиеся реагенты и приборы, для которых не указан производитель, представляют собой стандартные продукты, которые можно приобрести у коммерческих поставщиков.

Использующиеся в примерах аббревиатуры имеют следующие значения:

G	Остаток глицина	L	Остаток лейцина
F	Остаток фенилаланина	Asp	Остаток аспарагиновой кислоты
E	Остаток глютамата	Glu	Остаток глютамата
ДМФА	N, N-диметилформамид	ТФУК	Трифторуксусная кислота
t-Bu	Трет-бутил	Bn	Бензил
Boc	Трет-бутоксикарбонил	Fmoc	Флуоренил метоксикарбонил
HOBT	1-гидроксибензотриазол	Ts	п-толуолсульфонил
HBTU	O-бензотриазол-тетраметилмочевина гексафторфосфат	LPT	Лапатиниб
DIEA	N, N-диизопропилэтиламин	SB7	SB-743921
ЭА	Этилацетат	PCB	Палбоциклиб
TMP	2,4,6-триметилпиридин	NPB	Нирапариб
GFLG	Остаток глицин-фенилаланин-лейцин-глицин
PyAOP	(3H-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридин-3-окси)трис-1-пирролидинилфосфония гексафторфосфат
LC	NH2-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2-COOH или -NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2-CO-

Ниже указан источник и структура некоторых исходных соединений:

M-NH₂-2K.HCl

JenKem, mПЭГ - СH₂CH₂ - NH₂ HCl

M-NH₂-3K.HCl

JenKem, mПЭГ - СH₂CH₂ - NH₂ HCl

M-NH₂-5K.HCl

JenKem, mПЭГ - СH₂CH₂ - NH₂ HCl

M-SCM-10K

JenKem,

Пример 1 Синтез соединение

1. Синтез 37-14 (Соединение № 10)

Путь синтеза следующий:

Детали синтеза описаны ниже:

25-71

Boc-Glu-OH (приобретено у Ark Pharm, 15.0 г, 60.6673 ммоль), HBTU (приобретено у Aladdin, 69.0225 г, 182.0022 ммоль), HOBT (приобретено у Innochem, 24.5921 г, 182.0022 ммоль) и H-Glu (OBn)₂⋅TosOH (приобретено у Ark Pharm, 63.6473 г, 127.4014 ммоль) помещали в 1000-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (300 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли по каплям DIEA (90.2 мл, 546.0066 ммоль). После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли в делительную воронку насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (400 мл) и этилацетат (300 мл), полученный раствор встряхивали и оставляли отстаиваться для экстракции, затем органическую фазу отделяли от водной фазы. После этого добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали и оставляли отстаиваться для экстракции, затем органическую фазу отделяли от водной фазы. После этого добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали и оставляли отстаиваться для экстракции, затем органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 25-71: 67.9 г.

25-73

25-71 (52.5355 г, 60.6673 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли при перемешивании трифторуксусную кислоту (ТФУК, 67.6 мл, 910.0101 ммоль), и затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана. Результирующий раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли в делительную воронку насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (400 мл) и этилацетат (300 мл), полученный раствор встряхивали и оставляли отстаиваться для экстракции, затем органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали и оставляли отстаиваться для экстракции, затем органическую фазу отделяли от водной фазы. После этого добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали и оставляли отстаиваться для экстракции, затем органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха. Полученный сухой продукт растворяли в смеси растворителей (100 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли 150 мл порошкообразного силикагеля и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку, колоночную хроматографию с использованием элюента (60%-100% этилацетат: 40%-0% петролейный эфир и 1%-4% метанол: 99%-96% этилацетат). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 25-73: 44.4 г, выход: 95.56%.

16-34

2-(2-Аминоэтокси)этанол (18.8680 г, 190.2226 ммоль) выливали в 500-миллилитровую круглодонную колбу и разводили дихлорметаном (100 мл), затем добавляли триэтиламин (38.4972 мл, 380.4452 ммоль), медленно добавляли (Boc)₂O (49.8261 г, 228.2671 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор упаривали досуха, добавляли порошкообразный бикарбонат натрия, полученную смесь разводили дихлорметаном, добавляли порошкообразный силикагель и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку, колоночную хроматографию с элюированием смесью 50% этилацетат/петролейный эфир, получая таким образом продукт 27.3 г, выход 70%.

16-36

16-24 (27.3 г, 132.8144 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу, создавали инертную атмосферу азота, добавляли раствор трет-бутоксида калия в ТГФ, раствор охлаждали до 0°C, затем добавляли этил бромацетат (17.6265 мл, 159.3773 ммоль), и полученный раствор сначала перемешивали в течение 3 часов, и затем при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали досуха, затем добавляли деионизованную воду и этилацетат для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом до полного извлечения продукта из водной фазы, и полученные органические фазы объединяли. Органическую фазу сушили безводным порошком сульфата натрия, проводили фильтрование при отсасывании и проводили загрузку сухого образца на колонку, колоночную хроматографию с элюированием в градиенте 30%-100% этилацетат/петролейный эфир, получая таким образом продукт 20 г, выход 52%.

24-36

16-36 (17.9 г, 61.4402 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу, добавляли 1,4-диоксан, добавляли при перемешивании гидроксид лития (3.2386 г, 135.1685 ммоль), и через 30 минут добавляли деионизованную воду до полной прозрачности раствора. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали три раза (100 мл×3) смесью метилтретбутилового эфира и н-гексана (1:1). Водную фазу доводили до pH = 1 добавлением концентрированной соляной кислоты, затем экстрагировали три раза этилацетатом (300 мл×3), этилацетатные фазы объединяли, проводили растворение и промывку насыщенным раствором хлорида натрия три раза (100 мл×3), и полученный раствор упаривали. Проводили загрузку сухого образца на колонку, колоночную хроматографию с элюированием смесью 40%-100% этилацетат/петролейный эфир, получая таким образом продукт 10.1 г, выход 62%.

25-75

Boc-LC-OH (синтезирован по методике, описанной для синтеза 24-36, 15.0236 г, 57.0608 ммоль), HBTU (32.4596 г, 85.5912 ммоль), HOBT (11.5651 г, 85.5912 ммоль) и 25-73 (43.7 г, 57.0608 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (150 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (61.5 мл, 342.3648 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли в делительную воронку насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (400 мл) и этилацетат (300 мл), полученный раствор встряхивали и оставляли отстаиваться для экстракции, затем органическую фазу отделяли от водной фазы. После этого насыщенный добавляли в органическую фазу водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали и оставляли отстаиваться для экстракции, затем органическую фазу отделяли от водной фазы. После этого добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали и оставляли отстаиваться для экстракции, затем органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха. Полученный сухой продукт растворяли в смеси растворителей (100 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли 150 мл порошкообразного силикагеля и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку, колоночную хроматографию с использованием элюента (1% аммиак в воде: 1%-2% метанол: 98%-97% дихлорметан). Элюированный продукт собирали и упаривали досуха, получая таким образом продукт 25-75: 42.1 г, выход: 72.97%.

22-181

25-75 (26.7 г, 26.4064 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли при перемешивании трифторуксусную кислоту (ТФУК, 19.6 мл, 264.064 ммоль), и затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана. Затем реакционный раствор сначала переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли в делительную воронку насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (400 мл) и этилацетат (300 мл), полученный раствор встряхивали и оставляли отстаиваться для экстракции, затем органическую фазу отделяли от водной фазы. После этого добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали и оставляли отстаиваться для экстракции, затем органическую фазу отделяли от водной фазы. После этого добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали и оставляли отстаиваться для экстракции, затем органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 22-181: 20.3 г, выход: 84.2%.

35-3

Fmoc-L-Lys (Boc)-OH (приобретено у Accela, 1.39 г, 2.967 ммоль), 22-181 (2.70 г, 2.967 ммоль), HBTU (1.69 г, 4.4505 ммоль), HOBT (0.6 г, 4.4505 ммоль) помещали в 100-миллилитровую колбу, и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли по каплям DIEA (2.21 мл, 13.3515 ммоль). После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку и экстрагировали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл) и этилацетатом (250 мл), органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл x 1), и полученные органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл x 1), упаривали досуха, получая таким образом продукт 35-3: 4.0 г.

35-4

35-3 (4.04 г, 2.967 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли при перемешивании трифторуксусную кислоту (3.31 мл, 44.505 ммоль), и затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали до небольшого количества. Промывание при перемешивании проводили с добавлением н-гексана (120 мл) для удаления трифторуксусной кислоты, надосадочный раствор отбрасывали, и н-гексан (120 мл) добавляли в нижний маслянистый раствор. Эти операции повторяли три раза. В конце получали вязкий маслянистый продукт. Полученный маслянистый продукт сушили, получая 35-4: 3.74 г.

25-102

Boc-GFLG-OBn (синтезирован по известной в литературе методике, 6.8282 г, 11.7184 ммоль) и 10% Pd/C (50 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования и растворяли в ДМФА (30 мл). Реактор для проведения гидрирования герметично закрывали, подавали водород под давлением 1.6 МПа, и затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор собирали и равномерно добавляли по каплям в делительную воронку с песчаным ядром, заполненную спрессованной диатомовой землей, и затем проводили фильтрование при отсасывании. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (60 мл) до тех пор, пока в ней не оставалось никакого продукта, получая таким образом раствор продукта реакции

35-6

35-4 (3.74 г, 32.967 ммоль), 25-102 (1.75 г, 3.560 ммоль), HBTU (1.69 г, 4.451 ммоль), HOBT (0.6 г, 4.451 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли по каплям DIEA (4.4 мл, 26.703 ммоль). После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку и экстрагировали деионизованной водой (200 мл) и этилацетатом (200 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл x 2), и полученные органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл x 2), упаривали досуха и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 35-6: 5.1 г.

35-7

35-6 (5.1 г, 2.967 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли морфолин (3.9 мл, 44.505 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку и экстрагировали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл) и этилацетатом (200 мл), органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл x 2), и полученные органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл x 1) и упаривали. Порошкообразный силикагель (30 г) добавляли, и полученную смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку, колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного раствора аммиака и 3%-5% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 35-7: 3.4 г, выход 77%.

35-11

35-7 (3.4 г, 2.27 ммоль), янтарную кислоту (0.12 г, 1.03 ммоль, приобретено у InnoChem), HBTU (1.17 г, 3.09 ммоль), HOBT (0.42 г, 3.09 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу, и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.53 мл, 9.27 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку и экстрагировали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (200 мл) и этилацетатом (250 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл x 3) и объединяли полученные органические фазы. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл x 2) и упаривали. Порошкообразный силикагель (30 г) добавляли, и полученную смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образа на колонку, колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного раствора аммиака и 5% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 35-11: 3.0 г, выход 96%.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.59 - 8.43 (м, 1H), 8.36 - 8.26 (м, 2H), 8.20 - 8.14 (м, 1H), 8.01 - 7.87 (м, 6H), 7.78 - 7.61 (м, 3H), 7.38 - 7.11 (м, 55H), 6.93-6.95 (м, 2H), 5.21 - 4.97 (м, 15H), 4.53-4.52 (м, 1H), 4.42 - 4.22 (м, 7H), 4.15-4.13 (м, 1H), 3.89-3.87 (м, 3H), 3.76 - 3.43 (м, 19H), 3.18-3.16 (м, 5H), 2.31-2.98 (м, 7H), 2.84 - 2.64 (м, 6H), 2.44 - 2.38 (м, 8H), 2.37 - 2.28 (м, 8H), 2.21 - 2.10 (м, 5H), 2.08 - 1.81 (м, 11H), 1.81 - 1.68 (м, 3H), 1.51 - 1.40 (м, 4H), 1.50 - 1.41 (м, 7H), 1.29 - 1.16 (м, 18H), 1.28 - 1.16 (м, 12H), 0.93 - 0.75 (м, 12H).

30-30

Boc-GFLG-OH (синтезирован по методике, описанной для синтеза 25-102, 13.97 ммоль), PCB (5 г, 11.17 ммоль), HBTU (6.35 г, 16.76 ммоль) и HOBT (2.26 г, 16.76 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (100 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли по каплям DIEA (8.31 мл, 50.28 ммоль). После окончания добавления полученный раствор перемешивали при пониженной температуре в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции смесь фильтровали, осадок на фильтре промывали деионизованной водой (1000 мл), получая желтое твердое вещество, которое сушили, получая таким образом продукт 10.3 г.

30-33

30-30 (10.3 г, 11.17 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (50 мл), затем добавляли ТФУК (12.45 мл, 167.55 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали при пониженном давлении, и затем три раза осаждали н-гексаном (50 мл) и метилтретбутиловым эфиром (400 мл). Твердый продукт отделяли фильтрованием и растворяли в дихлорметане и метаноле. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 5% метанола и 1% водного аммиака. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 8.6 г, выход 94%.

28-258

Fmoc-Glu-OtBu (3.223 г, 7.5915 ммоль, приобретено у Ark pharm), 30-33 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 30-33) (5.2 г, 6.3263 ммоль), HBTU (3.5988 г, 9.4895 ммоль), HOBT (1.282 г, 9.4895 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и перемешивали в течение 10 минут. Затем медленно добавляли DIEA (4.7 мл, 28.4684 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при 0°C в течение ночи. После окончания реакции добавляли н-гексан (300 мл) и метилтретбутиловый эфир (50 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и н-гексан (300 мл) и метилтретбутиловый эфир (50 мл) добавляли в нижнюю маслянистую жидкую фазу для дополнительного осаждения, и эти операции повторяли пять раз, получая вязкий маслянистый продукт. Полученный маслянистый продукт затем сушили, получая таким образом продукт 28-258: 7.78 г.

28-260

28-258 (7.78 г, 6.3263 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (30 мл), добавляли ТФУК (9/396 мл, 126.52 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали, добавляли в упаренную реакционную смесь метилтретбутиловый эфир (300 мл) для отделения твердого вещества, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (80 мл x 3) и сушили, получая продукт 28-260: 8.1 г.

25-130

Boc-GFLG-OH (синтезирован по методике, описанной для синтеза 25-102, 4.9738 г, 10.0977 ммоль), HBTU (4.4186 г, 11.6513 ммоль), HOBT (1.5743 г, 11.6513 ммоль) и SB-743291 (4.0162 г, 7.7675 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (60 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (5.8 мл, 34.9538 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли в делительную воронку насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (400 мл) и этилацетат (300 мл), полученный раствор встряхивали и оставляли отстаиваться для экстракции, затем органическую фазу отделяли от водной фазы. После этого добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали и оставляли отстаиваться для экстракции, затем органическую фазу отделяли от водной фазы. После этого добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали и оставляли отстаиваться для экстракции, затем органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 25-130: 7.7023 г.

25-132

25-130 (7.7023 г, 7.7675 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (5 мл), добавляли ТФУК (8.7 мл, 116.5125 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали для удаления дихлорметана. Затем добавляли в полученный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, затем добавляли н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) в нижний маслянистый раствор для осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая маслянистое твердое вещество. Полученное маслянистое твердое вещество растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли метилтретбутиловый эфир (150 мл) в полученный раствор для осаждения порошкообразного твердого вещества, и затем отделяли твердый продукт фильтрованием. Полученный твердый продукт растворяли в смеси растворителей (50 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (80 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку, колоночную хроматографию при элюировании смесью растворителей (1% водного аммиака: 3%-4% метанол: 96%-95% дихлорметан). Элюированный продукт собирали и упаривали досуха, получая таким образом продукт 25-132: 5.4 г, выход: 77.98%.

28-264

28-260 (7.4 г, 6.3263 ммоль), 25-132 (5.9218 г, 6.6426 ммоль), HBTU (3.5988 г, 9.4895 ммоль), HOBT (1.2823 г, 9.4895 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (110 мл), полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 10 минут. Затем медленно добавляли по каплям DIEA (4.7 мл, 28.4684 ммоль). После окончания добавления полученный раствор перемешивали при 0°C в течение ночи. После окончания реакции, добавляли н-гексан (300 мл) и метилтретбутиловый эфир (50 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, добавляли н-гексан (300 мл) и метилтретбутиловый эфир (50 мл) в нижнюю маслянистую жидкую фазу для дополнительного осаждения, и эти операции повторяли шесть раз, получая вязкий маслянистый продукт. Полученный маслянистый продукт растворяли в метаноле (10 мл) и дихлорметане (40 мл), добавляли метилтретбутиловый эфир (450 мл) в полученный раствор для отделения твердого вещества, и затем фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (100 мл x 3) и сушили, получая таким образом продукт 28-264: 12.9 г.

28-265

28-264 (12.9 г, 6.3263 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (50 мл), добавляли морфолин (16.5 мл, 189.789 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции добавляли н-гексан (300 мл) и метилтретбутиловый эфир (50 мл) для расслоения реакционного раствора, надосадочный раствор отбрасывали, добавляли н-гексан (300 мл) и метилтретбутиловый эфир (50 мл) в нижнюю маслянистую жидкую фазу для дополнительного осаждения, и эти операции повторяли пять раз, получая вязкий маслянистый продукт. Полученный маслянистый продукт растворяли в дихлорметане (20 мл) и метаноле (80 мл), добавляли метилтретбутиловый эфир (350 мл) в полученный раствор для отделения твердого вещества, и затем фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (120 мл x 2) и сушили, получая таким образом продукт 28-265: 11.5 г.

37-1

28-265 (11.54 г, 6.3263 ммоль), Boc-Gly-OH (1.3299 г, 7.5916 ммоль, приобретено у Ark pharm), HBTU (3.5988 г, 9.4895 ммоль), HOBT (1.2823 г, 9.4895 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (80 мл), полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 10 минут. Затем медленно добавляли DIEA (4.7053 мл, 28.4684 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 30 минут, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли н-гексан (300 мл) и метилтретбутиловый эфир (50 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, добавляли н-гексан (300 мл) и метилтретбутиловый эфир (50 мл) в нижнюю маслянистую жидкую фазу для дополнительного осаждения, и эти операции повторяли четыре раза, получая вязкий маслянистый продукт. Затем добавляли дихлорметан (70 мл) и метилтретбутиловый эфир (350 мл) к маслянистому продукту для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50мл x 3) и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 37-1: 12.5 г.

37-2

37-1 (12.537 г, 6.3263 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (30 мл), добавляли ТФУК (14.09 мл, 189.789 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (250 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (100 мл×3) и растворяли в смеси растворителей, состоящей из метанола (60 мл) и дихлорметана (240 мл), добавляли порошкообразный силикагель (25 г), и смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 15% водного аммиака и 7%-8% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 37-2: 9.7 г, выход 82%.

35-13

35-11 (0.38 г, 0.124 ммоль) и Pd/C (0.0210 г) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (30 мл), подавали водород под давлением 1.8 МПа, и затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю, и диатомовую землю на фильтре промывали диметилформамидом (20 мл x 3), получая раствор в ДМФА, содержащий 35-13.

35-14

37-2 (2.0 г, 1.063 ммоль), HBTU (0.56 г, 1.4832 ммоль), HOBT (0.2 г, 1.4832 ммоль) помещали в раствор ДМФА (90 мл), содержащий 35-13 (0.364 г, 0.1236 ммоль), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 10 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.74 мл, 4.4496 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 60 минут, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл), полученный раствор встряхивали для расслоения, надосадочный раствор отбрасывали, добавляли к нижнему жидкому слою н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл), и эти операции повторяли шесть раз, получая вязкий маслянистый продукт. Затем добавляли дихлорметан (30 мл) и метилтретбутиловый эфир (250 мл) к маслянистому продукту для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (100 мл x 3), растворяли в смеси растворителей, состоящей из метанола (30 мл)/дихлорметана (120 мл), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили колоночную хроматографию, элюируя дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 5%-7% метанола. Элюированный продукт собирали и упаривали досуха, получая таким образом продукт 35-14: 1.2 г, выход 56%.

35-16

35-14 (1.2 г, 0.0695 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу, растворяли в дихлорметане (15 мл), добавляли ТФУК (1.0322 мл, 13.6 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали до небольшого количества, добавляли метилтретбутиловый эфир (100 мл) к остатку от упаривания, при этом выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл x 3) и растворяли в смеси растворителей, состоящей из метанола (30 мл) и дихлорметана (120 мл), добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и полученную смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака: 6%-7% метанола. Элюированный продукт собирали и упаривали досуха, получая таким образом продукт 35-16: 0.74 г, выход 67%.

37-14

35-16 (0.3011 г, 0.01754 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (25 мл), добавляли M-SCM-40K (1.5227 г, 0.0369 ммоль, приобретено у JenKem), обрабатывали смесь ультразвуком для полного растворения реагентов и оставляли реакционную смесь в темноте на 7 дней при медленном перемешивании при комнатной температуре. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (120 мл) и метилтретбутиловый эфир (40 мл), надосадочный раствор отбрасывали и добавляли к нижнему жидкому слою н-гексан (120 мл) и метилтретбутиловый эфир (40 мл). Эти операции повторяли три раза, получая вязкий маслянистый продукт. Метилтретбутиловый эфир (100 мл) добавляли к маслянистому продукту для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл x 3), растворяли в смеси растворителей, состоящей из метанола (30 мл) и дихлорметана (120 мл), добавляли порошкообразный силикагель (25 г), и полученную смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 6%-7% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха, сушили в вакуумном термошкафу в течение 1 часа и растворяли в безводном этаноле (5 мл) и дихлорметане (20 мл). Затем метилтретбутиловый эфир (80 мл) добавляли в полученный раствор для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл×2) и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 37-14: 0.98 г, выход: 58%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.18 - 10.11 (м, 4H), 9.21 - 8.97 (м, 4H), 8.24 - 7.89 (м, 61H), 7.58 - 7.43 (м, 12H), 7.30 - 7.08 (м, 99H), 5.91 - 5.77 (м, 4H), 4.64 - 4.68 (м, 23H), 4.38 - 4.14 (м, 57H), 4.07 - 3.89 (м, 81H), 3.60 - 3.45 (м, 7482H), 3.24 - 2.96 (м, 7H), 2.82 - 2.65 (м, 43H), 2.42 - 2.40 (м, 12H), 2.35 - 2.26 (м, 32H), 2.25 - 2.03 (м, 11H), 1.95 - 1.67 (м, 26H), 1.63 - 1.41 (м, 40H), 1.37 - 1.15 (м, 19H), 1.17 - 1.05 (м, 17H), 0.90 - 0.77 (м, 72H), 0.52 - 0.46 (м, 8H).

2. Синтез 10-109 (Соединение № 16)

Путь синтеза следующий:

Детали синтеза описаны ниже

23-210

Boc-Glu-(OH) -OBn (приобретено у Accela, 10 г, 29.64 ммоль), Glu-(OBn)₂·TosOH (16.3 г, 32.61 ммоль), HBTU (16.9 г, 44.46 ммоль) и HOBT (6.1 г, 44.46 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (200 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (22 мл, 133.4 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при пониженной температуре в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (200 мл), затем проводили три раза экстракцию этилацетатом (200 мл × 3), и полученные органические фазы объединяли. Насыщенный водный раствор хлорида натрия (200 мл × 2) добавляли в органическую фазу, затем дважды проводили экстракцию этилацетатом (100 мл × 2). Органическую фазу сушили безводным сульфатом натрия, упаривали досуха, получая таким образом продукт (31.4 г).

29-1

23-210 (31.4 г, 29.64 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (100 мл), добавляли ТФУК (33 мл, 444.6 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали досуха при пониженном давлении. Насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (200 мл) добавляли в реакционный раствор, затем проводили три раза экстракцию этилацетатом (200 мл × 3), и органические фазы объединяли. Насыщенный водный раствор хлорида натрия (200 мл) добавляли в органическую фазу, затем дважды проводили экстракцию этилацетатом (100 мл × 2). Органическую фазу сушили безводным сульфатом натрия и затем упаривали досуха для проведения следующей реакции.

29-3

29-1 (16.2 г, 29.64 ммоль), 10-102 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 24-36, 38.5 г, 38.5 ммоль), HBTU (16.8 г, 44.4 ммоль) и HOBT (6 г, 44.4 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (200 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (22 мл, 133.2 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при пониженной температуре в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (200 мл), затем проводили три раза экстракцию этилацетатом (200 мл × 3), и органические фазы объединяли. Насыщенный водный раствор хлорида натрия (200 мл × 2) добавляли в органическую фазу, затем дважды проводили экстракцию этилацетатом (100 мл × 2). Органическую фазу сушили безводным сульфатом натрия, упаривали досуха, получая таким образом продукт (34.1 г). Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием 45%-ным этилацетатом. Элюированный продукт собирали и упаривали досуха. Получали 11.1 г чистого продукта и хранили его в холодильнике до последующего использования, а 10.7 г чистого продукта отбирали и запускали в реакцию снятия защиты.

30-28

Boc-GFLG-OBn (синтезирован по известной в литературе методике, 19.0 г, 32.6 ммоль), 10% Pd/C катализатор (300 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (50 мл), при этом уровень растворителя был выше мешалки. Реактор для проведения гидрирования герметично закрывали и проводили три цикла откачки и заполнения (т.е. откачку воздуха из реакционной системы вакуумным водяным насосом в течение примерно 3 минут - заполнение водородом - откачку водорода - заполнение водородом - откачку водорода - заполнение водородом), так что давление в реакторе для проведения гидрирования составляло 18 фунт/кв.дюйм, и затем реакционный раствор оставляли при комнатной температуре на ночь. На второй день, после того как мониторинг методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) показал полное завершение реакции, проводили обработку реакционной смеси. Реакционный раствор извлекали и по каплям переносили на фильтровальную воронку, заполненную диатомовой землей. Реактор промывали диметилформамидом (90 мл) до полного извлечения продукта, получая таким образом продукт реакции.

30-29

30-28 (17.9 ммоль), LPT (8 г, 13.77 ммоль), HBTU (7.83 г, 20.65 ммоль) и HOBT (2.79 г, 20.65 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (100 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (10.24 мл, 61.96 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при пониженной температуре в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли деионизованную воду (1000 мл) для отмывки от ДМФА. Выпадало в осадок светло-желтое твердое вещество, его сушили, получая таким образом продукт 14.53 г.

14-128

30-29 (14.53 г, 13.77 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (150 мл), добавляли ТФУК (15.34 мл, 206.55 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали при пониженном давлении, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (200 мл) для нейтрализации ТФУК, продукт из водной фазы экстрагировали три раза этилацетатом (150 мл × 3), и полученные органические фазы объединяли. Органическую фазу сушили безводным сульфатом натрия, проводили фильтрование при отсасывании, фильтрат упаривали и сушили. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 5% метанол/0.5% водного аммиака/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали, получая чистый продукт (13.15 г).

10-85

29-3 (1.95 г, 2.46 ммоль) и 10% Pd/C (0.1 г) помещали в реактор для проведения гидрирования и растворяли в ДМФА (30 мл). Реактор для проведения гидрирования герметично закрывали и проводили три цикла откачки и заполнения, так что давление в реакторе для проведения гидрирования составляло 0.18 МПа, и затем полученный раствор оставляли на ночь для прохождения реакции при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Осадок на фильтре промывали диметилформамидом (20 мл×3), получая таким образом продукт 10-85, выход 100%.

10-86

10-85 (1.28 г, 2.46 ммоль), GFLG-LPT (синтезирован по методике, описанной для синтеза 14-128, 8.0 г, 8.37 ммоль), HBTU (4.20 г, 11.07 ммоль), HOBT (1.49 г, 11.07 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (40 мл), полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (5.69 мл, 34.44 ммоль) по каплям в течение 3 минут. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Добавляли метилтретбутиловый эфир (80 мл) и небольшое количество н-гексана (10 мл), полученный раствор встряхивали, и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Из реакционного раствора выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 3), и промытый осадок на фильтре собирали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 10-86: 8.2 г, выход 100%.

10-87

10-86 (8.2 г, 2.46 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (8 мл), ТФУК (2.7 мл, 36.90 ммоль), полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали на роторном испарителе, получая вязкий маслянистый продукт, затем добавляли метилтретбутиловый эфир (60 мл) к маслянистому продукту. Из раствора выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1: 4), добавляли порошкообразный силикагель (40 г), и полученную смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 4.5%-6% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 18-87: 5.56 г, выход 70%.

10-83

29-3 (9.9 г, 12.5019 ммоль) частично растворяли в дихлорметане (10 мл), затем добавляли ТФУК (18.5716 мл, 250.0379 ммоль) и обрабатывали ультразвуком для полного растворения соединения. Закрывали колбу стеклянной пробкой, и реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре. Полное прохождение реакции определяли методом ТСХ с цветным проявлением фосфомолибденовой кислотой. Реакционный раствор упаривали досуха, дихлорметан удаляли, и полученное твердое вещество растворяли в этилацетате (200 мл). Насыщенный водный раствор бикарбоната натрия добавляли до тех пор, пока водная фаза не стала щелочной. Затем органическую фазу отделяли, водную фазу экстрагировали этилацетатом до полного извлечения продукта из водной фазы, и полученные органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия три раза (100 мл×3), упаривали досуха, получая таким образом продукт (8.7 г, выход выше расчетного на 0.1 г).

10-92

10-83 (1.6 г, 2.31 ммоль), Fmoc-Lys (Boc) -OH (1.14 г, 2.43 ммоль), HBTU (1.32 г, 3.47 ммоль), HOBT (0.47 г, 3.47 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу, растворяли в необходимом количестве ДМФА (40 мл), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.72 мл, 10.39 ммоль) по каплям в течение 3 минут. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Метилтретбутиловый эфир (80 мл) и небольшое количество н-гексана (10 мл) добавляли, полученный раствор встряхивали, и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Из реакционного раствора выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1: 4), добавляли порошкообразный силикагель (30 г), и полученную смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 1%-5% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 10-92: 2.4 г, выход 92.3%.

10-88

10-92 (0.57 г, 0.506 ммоль) и 10% Pd/C (0.1 г) помещали в реактор для проведения гидрирования и растворяли в ДМФА (30 мл). Реактор для проведения гидрирования герметично закрывали и проводили три цикла откачки и заполнения, так что давление в реакторе для проведения гидрирования составляло 0.18 МПа, и затем полученный раствор оставляли на ночь для прохождения реакции при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Осадок на фильтре промывали диметилформамидом (20 мл×3), получая таким образом продукт 10-88: 0.434, выход 100%.

10-89

10-88 (0.434 г, 0.506 ммоль), 10-87 (5.56 г, 1.722 ммоль), HBTU (0.864 г, 2.277 ммоль), HOBT (0.307 г, 2.277 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу, растворяли в необходимом количестве ДМФА (40 мл), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.171 мл, 7.084 ммоль) по каплям в течение 30 минут. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Метилтретбутиловый эфир (80 мл) и небольшое количество н-гексана (10 мл) добавляли, полученный раствор встряхивали, и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Из реакционного раствора выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл × 3), промытый осадок на фильтре собирали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 10-89: 5.34 г, выход 100%.

10-90

10-89 (5.34 г, 0.506 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (10 мл), добавляли морфолин (0.88 мл, 10.12 ммоль), и затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Метилтретбутиловый эфир (80 мл) и небольшое количество н-гексана (10 мл) добавляли, полученный раствор встряхивали, и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Из реакционного раствора выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл × 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4). Порошкообразный силикагель (30 г) добавляли, и смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 3%-7% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 10-90: 2.65 г, выход 51%.

10-71

30-33 (3.5 г, 4.26 ммоль), Fmoc-Lys (Boc) -OH (2.2 г, 4.69 ммоль), HBTU (2.42 г, 6.39 ммоль), HOBT (0.86 г, 6.39 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в необходимом количестве ДМФА (40 мл), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (3.17 мл, 19.17 ммоль) по каплям в течение 30 минут. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Метилтретбутиловый эфир (80 мл) и небольшое количество н-гексана (10 мл) добавляли, полученный раствор встряхивали, и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Из реакционного раствора выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл × 3), и промытый осадок на фильтре собирали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 10-71: 5.42 г, выход 100%.

10-76

10-71 (5.42 г, 4.26 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (10 мл), добавляли морфолин (7.42 мл, 85.2 ммоль), и затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Метилтретбутиловый эфир (80 мл) и небольшое количество н-гексана (10 мл) добавляли, полученный раствор встряхивали, и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Из реакционного раствора выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4). Полученный раствор упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 10-76: 4.473 г, выход 100%.

10-77

10-76 (4.473 г, 4.26 ммоль), янтарный ангидрид (1.29 г, 12.89 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в необходимом количестве ДМФА (40 мл), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (2.82 мл, 17.04 ммоль) по каплям в течение 30 минут. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Метилтретбутиловый эфир (80 мл) и небольшое количество н-гексана (10 мл) добавляли, полученный раствор встряхивали, и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Из реакционного раствора выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл × 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4). Порошкообразный силикагель (30 г) добавляли, и смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 5%-8% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 10-77: 2.98 г, выход 61%.

10-97

10-77 (0.28 г, 0.245 ммоль), 10-90 (2.65 г, 0.62 ммоль), HBTU (0.139 г, 0.368 ммоль), HOBT (0.049 г, 0.368 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в необходимом количестве ДМФА (40 мл), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.18 мл, 1.1 ммоль) по каплям в течение 30 минут. После окончания добавления раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Метилтретбутиловый эфир (80 мл) и небольшое количество н-гексана (10 мл) добавляли, полученный раствор встряхивали, и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Из реакционного раствора выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 3), и промытый осадок на фильтре собирали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 10-97: 2.8 г, выход 100%.

10-98

10-97 (2.8 г, 0.245 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (8 мл), добавляли ТФУК (0.546 мл, 7.35 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали на роторном испарителе, получая вязкий маслянистый продукт, затем добавляли метилтретбутиловый эфир (60 мл) к маслянистому продукту. Из раствора выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4). Порошкообразный силикагель (30 г) добавляли, и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 5%-10% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 10-98: 1.38 г, выход: 60%

10-109

10-98 (1.29 г, 0.1134 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (10 мл), добавляли M-SCM-20K (0.54 г, 0.054 ммоль, приобретено у JenKem), полученный раствор оставляли в темноте на одну неделю при медленном перемешивании при комнатной температуре. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (40 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл×3) и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 6%-12% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 10-109: 0.7 г, выход 51%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 7.46 - 6.89 (м, 225H), 4.21 - 4.08 (м, 111H), 3.55-3.49 (м, 3882H), 3.08 - 2.64 (м, 209H), 2.45-2.40 (м, 10H), 2.34-2.28 (м, 28H), 0.88-0.83 (м, 60H).

3. Синтез 39-17 (Соединение № 14)

Путь синтеза следующий

Детали синтеза описаны ниже:

41-1

Boc-Glu-OH (1.2 г, 4.8 ммоль), GFLF-PCB (синтезирован по методике, описанной для синтеза 30-33, 8.2 г, 9.7 ммоль), HBTU (5.5 г, 14.4 ммоль) и HOBT (1.9 г, 14.4 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (50 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (7.1 мл, 43.2 ммоль) по каплям, и полученный раствор продолжали перемешивать в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор деионизованную воду (200 мл), в осадок выпадало светло-желтое твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре сушили, получая таким образом продукт (22 г).

41-2

41-1 (22 г, 11.8 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли по каплям ТФУК (26.3 мл, 354 ммоль), и затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали, добавляли для осаждения н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (300 мл), затем проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре растворяли в дихлорметане (80 мл) и метаноле (20 мл), добавляли порошкообразный силикагель, и проводили упаривание, загрузку сухого остатка на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием от смеси 1% водного аммиака/3% метанол/дихлорметан до смеси 1% водного аммиака/5% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали, получая таким образом продукт 5.9 г, выход 70.2%.

41-4

41-2 (5.9 г, 3.36 ммоль), Boc-LC-OH (0.88 г, 3.36 ммоль), HBTU (1.9 г, 5.04 ммоль) и HOBT (0.68 г, 5.04 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (20 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (2.5 мл, 15.12 ммоль) по каплям, полученный раствор продолжали перемешивать в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в полученный раствор н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (300 мл) для осаждения твердого вещества, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре сушили в вакууме.

41-6

41-4 (7.9 г, 3.9 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли по каплям ТФУК (8.7 мл, 117 ммоль), и затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали, осаждали добавлением н-гексана (100 мл) и метилтретбутилового эфира (300 мл), проводили фильтрование при отсасывании, отделяя твердый продукт, затем его сушили. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием от смеси 1% водного аммиака/3% метанол/дихлорметан до смеси 1% водного аммиака/5% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали, получая целевой продукт.

24-205

Реагенты 15-91 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 35-3, 0.33 г, 0.1503 ммоль) и 10% Pd/C (30 мг) помещали в микрореактор, растворяли в ДМФА (30 мл), вводили H₂ (20 фунт/кв.дюйм), и полученный раствор перемешивали. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали при отсасывании через диатомовую землю для удаления Pd/C, и затем диатомовую землю промывали 4 раза диметилформамидом, получая ДМФА раствор 24-205, который использовали для проведения следующей реакции.

41-7

41-6 (0.84 г, 0.44 ммоль), 24-247 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 24-205, 0.88 г, 0.091 ммоль), HBTU (0.07 г, 0.546 ммоль) и HOBT (0.2 г, 0.546 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (20 мл), и затем полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.27 мл, 1.638 ммоль) по каплям, и полученный раствор продолжали перемешивать в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор осаждали н-гексаном (100 мл) и метилтретбутиловым эфиром (300 мл) для отделения твердого вещества, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре сушили в вакууме.

41-9

Реагент 41-7 (0.7 г, 0.082 ммоль) растворяли в ДМФА (30 мл), добавляли морфолин (0.214 мл, 2.46 ммоль), и полученный раствор перемешивали до завершения реакции. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения, получая продукт в виде порошка, и проводили фильтрование при отсасывании. Проводили загрузку вещества в сухом виде на колонку и колоночную хроматографию при элюировании в градиенте от смеси 1% водного аммиака / 5% метанол/дихлорметан до смеси 1% водного аммиака / 12% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт (0.5 г).

39-1

Boc-Asp-OH (приобретено у damas-beta, 0.18 г, 0.8 ммоль), GFLG-SB7 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 25-132, 1.5 г, 1.68 ммоль), HBTU (0.9 г, 2.4 ммоль) и HOBT (0.32 г, 2.4 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (20 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.19 мл, 7.2 ммоль) по каплям, и полученный раствор продолжали перемешивать в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор деионизованную воду (200 мл), полученный раствор экстрагировали три раза этилацетатом (100 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл), упаривали досуха. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием от смеси 1% водного аммиака / 2% метанол/дихлорметан до смеси 1% водного аммиака / 3% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали и упаривали досуха, получая продукт, который использовали для проведения следующей реакции.

39-5

39-1 (1.5 г, 0.8 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу и растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли ТФУК (1.78 мл, 24 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали, экстрагировали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (200 мл) и этилацетатом (100 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (100 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл) и упаривали досуха, получая таким образом продукт 1.1 г, выход 73.3%.

39-6

39-5(1.1 г, 0.58 ммоль), Fmoc-Lys (Boc) -OH (0.28 г, 0.609 ммоль), HBTU (0.32 г, 0.87 ммоль) и HOBT (0.11 г, 0.87 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (20 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.43 мл, 2.61 ммоль) по каплям, полученный раствор продолжали перемешивать в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали деионизованной водой (200 мл) и этилацетатом (100 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (100 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл) и упаривали досуха, получая таким образом продукт (1.3 г).

39-8

39-6 (1.5 г, 0.58 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли морфолин (1.51 мл, 17.4 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали деионизованной водой (200 мл) и этилацетатом (100 мл), органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (100 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл), упаривали досуха, и полученный продукт использовали для проведения следующей реакции.

39-10

39-8 (0.58 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (20 мл). Затем добавляли DIEA (0.38 мл, 2.32 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 30 минут. Янтарный ангидрид (0.17 г, 2.32 ммоль) добавляли и продолжали перемешивать полученный раствор. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали деионизованной водой (200 мл) и этилацетатом (100 мл), органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (100 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл), упаривали досуха, и полученный продукт использовали для проведения следующей реакции.

39-14

Реагенты 41-9 (0.5 г, 0.06 ммоль), 39-10 (0.134 г, 0.060 ммоль), HBUT (0.034 г, 0.09 ммоль), HOBT (0.012 г, 0.09 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.044 мл, 0.27 ммоль) по каплям, через 1 час реакционный раствор доводили до комнатной температуры и перемешивали. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения, получая порошкообразный продукт. Проводили загрузку сухого вещества на колонку и колоночную хроматографию, с элюированием от смеси 1% водного аммиака / 4% метанол/дихлорметан до 1% водного аммиака / 10% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт упаривали досуха, получая целевой продукт 0.5 г, выход 80%.

39-15

39-14 (0.5 г) растворяли в дихлорметане (5 мл) и ТФУК (0.106 мл, 1.42 ммоль) при обработке ультразвуком, и полученный раствор перемешивали. После окончания реакции раствор упаривали и добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения, получая порошкообразный продукт. Проводили загрузку вещества в сухом виде на колонку и колоночную хроматографию при элюировании в градиенте от смеси 1% водного аммиака / 6% метанол/дихлорметан до 1% водного аммиака / 10% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 0.1 г.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.19 - 10.15 (м, 7H), 9.11 - 8.89 (м, 7H), 8.36 - 8.00 (м, 37H), 7.94 - 7.85 (м, 13H), 7.54 - 7.47 (м, 11H), 7.30 - 7.11 (м, 89H), 6.74 - 6.63 (м, 2H), 5.87 - 5.78 (м, 6H), 4.66 - 3.37 (м, 118H), 3.29 - 2.53 (м, 123H), 2.45 - 2.39 (м, 24H), 2.34 - 2.18 (м, 59H), 2.14 - 1.42 (м, 107H), 0.94 - 0.76 (м, 72H).

39-17

Реагент 39-15 (1 г) растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли M-SCM-20K (0.4 г), и полученный раствор перемешивали при медленной скорости мешалки в темноте. После окончания реакции результирующий раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (50 мл) и н-гексаном (100 мл) для отделения твердого вещества, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре растворяли в дихлорметане (50 мл), добавляли порошкообразный силикагель в полученный раствор, и проводили загрузку вещества в сухом виде на колонку и колоночную хроматографию при элюировании в градиенте от дихлорметана до смеси 1% водного аммиака / 6% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха, затем растворяли в безводном этаноле (10 мл), полученный раствор обрабатывали ультразвуком, получая гомогенную фазу, и затем добавляли н-гексан (50 мл) для осаждения. Эту операцию осаждения повторяли три раза. Осадок сушили в вакууме, получая таким образом продукт 0.15 г.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.20 - 10.12 (м, 2H), 9.00 - 8.90 (м, 2H), 8.16 - 7.83 (м, 40H), 7.42 - 7.04 (м, 123H), 4.64 -4.13 (м, 129H), 4.03- 3.97 (м, 35H), 3.81 - 3.80 (м, 26H), 3.70 - 3.66 (м, 149H), 3.51- 3.50 (м, 876H), 3.27 - 2.64 (м, 20H), 2.43 - 2.24 (м, 54H), 2.17- 1.41 (м, 24H), 0.97 - 0.73 (м, 72H).

4. Синтез 43-27 (Соединение № 6)

Путь синтеза следующий

34-15

Boc-L-Lys (Fmoc)-OH (приобретено у Aladdin, 2.78 г, 5.927 ммоль), 22-181 (5.4 г, 5.927 ммоль), HBTU (3.38 г, 8.891 ммоль), HOBT (1.2 г, 8.891 ммоль) помещали в 100-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (50 мл), затем полученный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (5.878 мл, 35.565 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 3 часов. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли деионизованную воду (200 мл) и этилацетат (200 мл), и полученный раствор встряхивали для экстрагирования. Водную фазу промывали этилацетатом (150 мл x 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл x 1), упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 34-15: 8.07 г.

34-17

34-15 (8.0 г, 5.927 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (15 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (4.4 мл, 59.271 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали до небольшого количества, добавляли н-гексан (150 мл) для расслоения полученного раствора при встряхивании, надосадочный раствор отбрасывали, добавляли н-гексан (150 мл) к нижнему маслообразному слою, и эти операции повторяли шесть раз. В итоге получали вязкий маслянистый продукт, который сушили, получая продукт 34-17: 7.5 г.

34-19

34-17 (7.5 г, 5.92 ммоль), 34-18 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 25-102, 3.5 г, 7.11 ммоль), HBTU (3.36 г, 8.88 ммоль), HOBT (1.2 г, 8.88 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (50 мл), затем полученный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (8.8 мл, 53.28 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течении 3 часов. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли деионизованную воду (200 мл) и этилацетат (200 мл), и полученный раствор встряхивали для экстрагирования. Водную фазу промывали этилацетатом (150 мл x 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл x 1), упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 34-19: 10.3 г.

34-21

34-19 (10.3 г, 5.92 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли морфолин (7.8 мл, 88.8 ммоль), полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали насыщенным раствором хлорида натрия (150 мл) и этилацетатом (250 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл x 1), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл x 2), упаривали досуха. Полученный сухой продукт растворяли в метаноле (30 мл) и дихлорметане (120 мл), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и полученную смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого вещества на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 3% метанола, получая таким образом продукт 34-21: 5.37 г, выход 60%.

43-8

34-21 (1.6 г, 1.06 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (30 мл), добавляли триэтиламин (0.29 мл, 2.12 ммоль), полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 15 минут и затем добавляли по каплям фенил хлорформиат (0.13 мл, 1.06 ммоль). После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали дихлорметаном (250 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали дихлорметаном (200 мл × 1), и органические фазы объединяли. Порошкообразный силикагель (20 г) добавляли, и полученную смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 4% метанола, получая таким образом продукт 43-8: 0.9 г, выход 56%.

43-11

43-8 (0.9 г, 0.55 ммоль), 34-21 (0.83 г, 0.55 ммоль) помещали в 100-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли триэтиламин (0.0771 мл, 0.55 ммоль), и полученный раствор перемешивали при 80°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали этилацетатом (200 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл), и органическую фазу отделяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (150 мл), добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 5%-36% метанола, получая таким образом продукт 43-11: 0.95 г, выход 57%.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.57 - 8.48 (м, 2H), 8.37 - 8.24 (м, 2H), 8.21 - 8.12 (м, 2H), 8.08 - 7.95 (м, 4H), 7.94 - 7.80 (м, 4H), 7.76 - 7.65 (м, 2H), 7.51 (с, 1H), 7.44 - 7.25 (м, 40H), 7.24 - 7.10 (м, 11H), 7.01 - 6.81 (м, 2H), 5.17 - 5.01 (м, 15H), 4.54 (д, J = 4.4 Гц, 2H), 4.41 - 4.16 (м, 10H), 3.94 - 3.86 (м, 4H), 3.78 - 3.68 (д, J = 4.4 Гц, 4H), 3.66 - 3.49 (м, 13H), 3.45 (д, J = 6.0 Гц, 2H), 3.42 - 3.36 (м, 6H), 3.24 - 3.15 (д, J = 5.5 Гц, 4H), 3.08 - 2.97 (м, 2H), 2.94 - 2.86 (м, 4H), 2.83 - 2.71 (м, 3H), 2.46 - 2.32 (м, 9H), 2.23 - 2.11 (м, 4H), 1.81 - 1.68 (м, 4H), 1.68 - 1.53 (м, 5H), 1.53 - 1.42 (м, 7H), 1.34 (д, J = 5.9 Гц, 18H), 1.31 - 1.10 (м, 19H), 0.93 - 0.75 (м, 13H).

43-15

34-23 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 43-11, 0.377 г, 0.1236 ммоль) и 10% Pd/C (0.0400 г) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (30 мл), подавали водород под давлением 1.8 МПа, и затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор извлекали и фильтровали через диатомовую землю, и диатомовую землю на фильтре промывали диметилформамидом (20 мл × 3), затем использовали его без дополнительной очистки для проведения следующей реакции.

43-21

43-15 (0.288 г, 0.1236 ммоль), 37-2 (2.0 г, 1.063 ммоль), HBTU (0.56 г, 1.4832 ммоль), HOBT (0.2 г, 1.4832 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (40 мл), полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.74 мл, 4.4496 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут, затем перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор осаждали три раза н-гексаном (120 мл) и метилтретбутиловым эфиром (30 мл), получая вязкий маслянистый продукт. Затем добавляли к маслянистому продукту метилтретбутиловый эфир (250 мл) для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл × 3), растворяли в дихлорметане (150 мл) и метаноле (30 мл), добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и полученную смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 5 % - 6 % метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 43-21: 1.6 г, выход 75%.

43-24

43-21 (1.6 г, 0.09 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (1 мл, 13.47 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали до небольшого количества, Метилтретбутиловый эфир (150 мл) добавляли к остатку от упаривания для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл×3) и растворяли в смеси растворителей, состоящей из метанола (30 мл) и дихлорметана (120 мл), добавляли порошкообразный силикагель (20 г), полученный раствор упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 6% - 8% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 43-24: 1.11 г, выход 73%.

43-27

43-24 (0.4 г, 0.023 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (25 мл), добавляли M-SCM-40K (1.983 г, 0.048 ммоль) и обрабатывали смесь ультразвуком для полного растворения реагентов, реакционный раствор перемешивали в темноте 7 дней при низкой скорости мешалки при комнатной температуре. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (50 мл), надосадочный раствор отбрасывали и добавляли к нижнему жидкому слою н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (50 мл). Эти операции повторяли три раза, получая вязкий маслянистый продукт. Затем добавляли метилтретбутиловый эфир (120 мл) к маслянистому продукту для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл × 3), растворяли в смеси растворителей, состоящей из метанола (30 мл) и дихлорметана (120 мл), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и полученную смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 5%-6% метанола. Элюированный продукт собирали и упаривали досуха, получая твердое вещество. Это твердое вещество сушили в вакуумном термошкафу в течение 1 часа и растворяли в безводном этаноле (5 мл) и дихлорметане (20 мл). Затем добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (80 мл) для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл×2) и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 43-27: 0.9 г, выход: 38%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.16 - 10.13 (м, 5H), 8.99 - 8.93 (м, 6H), 8.29 - 7.95 (м, 84H), 7.92 - 7.85 (м, 14H), 7.59 - 7.44 (д, J = 3.3 Гц, 70H), 7.33 - 7.03 (м, 154H), 4.53 - 4.41 (м, 55H), 3.72 - 3. 41 (м, 7336H), 3.20 - 3.03 (м, 123H), 2.42 - 2.38 (м, 25H), 2.36 - 2.15 (48, 71H), 1.94 - 1.69 (м, 48H), 1.65 - 1.39 (м, 71H), 1.36 - 1.08 (м, 235H), 0.99 - 0.68 (м, 124H), 0.56 - 0.39 (м, 16H).

5. Синтез 27-134 (Соединение № 18)

Путь синтеза следующий

27-120

ДМФА (10 мл) помещали в колбу с 27-119 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 35-3, 1 г, 0.7345 ммоль), проводили обработку ультразвуком для полного растворения соединения, добавляли морфолин (0.64 мл, 7.345 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (100 мл) и этилацетатом (200 мл), оставляли расслаиваться, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл * 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали упаривали до объема примерно 50 мл, затем промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия (100 мл * 3). Полученные органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 27-120 (1.4317 г, 100%)

27-121

Янтарную кислоту (0.039 г, 0.3339 ммоль), HBTU (0.3798 г, 1.0017 ммоль), HOBT (0.1354 г, 1.0017 ммоль) помещали в колбу с 27-120 (0.8368 г, 0.7345 ммоль) и растворяли в необходимом количестве ДМФА, затем полученный раствор охлаждали до -5°C и медленно добавляли по каплям DIEA (0.50 мл, 3.0051 ммоль). После окончания добавления реакционный раствор перемешивали полчаса, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции, добавляли избыточное количество насыщенного водного раствора бикарбоната натрия до тех пор, пока раствор не становился щелочным, полученный раствор экстрагировали этилацетатом (200 мл), оставляли для расслоения, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл * 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали до объема примерно 100 мл. Остаток от упаривания промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия (100 мл * 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали досуха и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (50 мл), упаривали досуха, переносили сухой остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 6% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 27-121 (0.5811 г, 73.72%)

27-123

27-121 (0.5811 г, 0.2462 ммоль) помещали в реактор для проведения гидрирования, добавляли Pd/C (0.1 г) и ДМФА (20 мл), подавали водород под давлением 1.4 МПа, затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Осадок на фильтре промывали диметилформамидом (15 мл × 3), и фильтрат переносили в 250-миллилитровую круглодонную колбу, получая 27-123 как сырой материал для проведения следующей реакции.

27-128

35-12 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 37-2, 1.8 г, 0.9566 ммоль), HBTU (0.54 г, 1.4348 ммоль), HOBT (0.19 г, 1.4348 ммоль) помещали в колбу с 27-123 (0.1782 г, 0.1087 ммоль) и растворяли в необходимом количестве ДМФА, затем полученный раствор охлаждали до -5°C и медленно добавляли по каплям DIEA (0.23 мл, 4.3045 ммоль). После окончания добавления полученный раствор перемешивали полчаса, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор смесь (250 мл) метилтретбутиловый эфир : н-гексан = 1 : 5, полученный раствор встряхивали и оставляли для расслоения, надосадочный раствор отбрасывали, и описанные выше операции повторяли три раза. Затем добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (200 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (40 мл), полученный раствор упаривали досуха, получая твердый порошок. Переносили сухое вещество на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 3-5% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 27-128 (0.8 г, 44.69 %)

27-132

Дихлорметан помещали в колбу с 27-128 (0.8 г, 0.0483 ммоль), проводили обработку ультразвуком для полного растворения соединения, затем добавляли ТФУК (0.107 мл, 1.4503 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции упаривали дихлорметан из реакционного раствора, добавляли метилтретбутиловый эфир (100 мл), полученный раствор встряхивали для отделения твердого вещества, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (40 мл), и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 7~10% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 27-132 (0.5633 г, 71.34 %).

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.21-10.17 (м, 4H), 9.15 - 8.87 (м, 8H), 8.47 - 7.69 (м, 91H), 7.60 - 6.88 (м, 202H), 6.78 - 6.62 (м, 4H), 5.93 - 5.60 (м, 13H), 5.35-5.29 (м, 1H), 4.57-4.53 (м, 9H), 4.27 (м, 23H), 4.07 - 3.22 (м, 166H), 3.21 - 2.85 (м, 40H), 2.85 - 2.53 (м, 28H), 2.44 - 2.04 (м, 87H), 2.04 - 1.95 (м, 7H), 1.83-1.79 (м, 41H), 1.55-1.49 (м, 55H), 1.38 - 0.99 (м, 92H), 0.86-0.82 (м, 103H), 0.52-0.47 (м, 39H).

27-134

27-132 (0.2633 г, 0.01610 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли M-SCM-20K (0.7955 г, 0.03703 ммоль, приобретено у JenKem), обрабатывали ультразвуком для растворения соединения, и затем полученный раствор оставляли в темноте на одну неделю при медленном перемешивании при комнатной температуре. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (200 мл) и н-гексан (70 мл) для отделения твердого вещества, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл×3) и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (50 мл), полученный раствор упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 7% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 27-134 (0.5876 г, 61.85 %).

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ9.06-9.02 (м, 19H), 8.98-8.92 (м, 11H), 8.28 - 7.93 (м, 69H), 7.87-7.82 (м, 25H), 7.55-7.49 (м, 32H), 7.44 - 6.95 (м, 116H), 6.92-6.88 (м, 10H), 6.76 - 6.63 (м, 26H), 5.40 - 5.25 (м, 29H), 4.62 - 4.43 (м, 38H), 4.39 - 4.07 (м, 64H), 3.72-3.68 (м, 3897H), 3.19 - 3.10 (м, 20H), 2.91-2.86 (м, 19H), 2.83 - 2.57 (м, 62H), 2.36 - 2.06 (м, 66H), 2.05 - 1.89 (м, 38H), 1.51-1.45 (м, 50H), 1.39 - 0.97 (м, 242H), 0.95 - 0.64 (м, 87H).

6. Синтез 44-2 (Соединение № 3)

Путь синтеза следующий

25-189

7-Этил-10-гидроксикамптотецин (также именуется SN38, 20 г, 50.9684 ммоль) и трет-бутил дифенилхлорсилан (приобретено у Innochem, TBDPSCl, 79.5 мл, 305.8104 ммоль) помещали в 1-литровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (250 мл) и триэтиламине (Et₃N, 42.5 мл, 305.8104 ммоль), затем полученный раствор помещали в масляную баню при 37°C и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали досуха при пониженном давлении для удаления дихлорметана, полученное твердое вещество растворяли в дихлорметане (20 мл), раствор осаждали н-гексаном (200 мл) для отделения твердого продукта и фильтровали. Осадок на фильтре промывали н-гексаном (100 мл), фильтрат хранили в холодильнике при 2°-8° в течение 30 минут, вынимали и фильтровали, осадок на фильтре промывали н-гексаном (100 мл). Эти операции повторяли пять раз, получая твердый продукт. Полученный твердый продукт сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 25-189: 23.9 г, выход: 74.34%.

25-199

Boc-глицин (Boc-Gly-OH, 7.9647 г, 45.4661 ммоль), 25-189 (23.9 г, 37.8884 ммоль) и DMAP (0.9258 г, 7.5777 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (100 мл), реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение примерно 30 минут, затем добавляли дициклогексилкарбодиимид (DCC, 15.6350 г, 75.7767 ммоль), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 3 часов. После окончания реакции результирующий раствор сначала фильтровали для удаления DCC, осадок на фильтре промывали дихлорметаном (60 мл), фильтрат собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 25-199: 29.8549 г.

25-200

25-199 (29.8549 г, 37.8884 ммоль) помещали в 100-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли ТФУК (42.2 мл, 568.326 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана, далее раствор осаждали н-гексаном (150 мл), надосадочный раствор отбрасывали, и затем нижний маслянистый слой осаждали н-гексаном (150 мл). Эти операции повторяли три раза, получая маслянистое твердое вещество. Полученное маслянистое твердое вещество растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (100 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1%-4% метанол: 99%-96% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 25-200: 23.4557 г, выход: 90.04%.

25-211

Boc-Gly-OH (приобретено у Aladdin, 3.0 г, 17.1252 ммоль), HBTU (9.7418 г, 25.6878 ммоль), HOBT (3.4709 г, 25.6878 ммоль) и H-Glu (OBzl)-OBzl·TosOH (8.5554 г, 17.1252 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (50 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли по каплям DIEA (12.7 мл, 77.0634 ммоль). После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали 2 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (400 мл) и этилацетат (300 мл), раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. После этого добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха, полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей (50 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (50 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1%-2% метанол: 99%-98% этилацетат). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 25-211: 6.9213 г, выход: 83.41%.

25-220

25-211 (2.6890 г, 5.5382 ммоль) и 10% Pd/C (50 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования и растворяли в ДМФА (30 мл). Реактор для проведения гидрирования герметично закрывали, подавали водород под давлением 1.6 МПа, затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор собирали и равномерно добавляли по каплям в делительную воронку с песчаным ядром, заполненную спрессованной диатомовой землей, и проводили фильтрование при отсасывании. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (60 мл) до полного извлечения продукта, получая таким образом раствор продукта реакции

25-222

25-220 (1.6853 г, 5.5382 ммоль), HBTU (6.3009 г, 16.6146 ммоль), HOBT (2.2450 г, 16.6146 ммоль) и 25-200 (8.3810 г, 12.1841 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (50 мл), и раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (8.2 мл, 49.8438 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали 2 часа. После окончания реакции результирующий раствор сначала переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. После этого добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования. Органическую фазу упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 25-222: 9.0 г, выход: 98.85%.

MALDI-TOF MS: [M - H⁺] 1641.76.

25-224

25-222 (9.0 г, 5.4745 ммоль) помещали в 100-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли ТФУК (6.1 мл, 82.1178 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана, затем раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (400 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха, полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей (70 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель (50 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (2%-7% метанол: 98%-93% этилацетат). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 25-224: 6.0 г, выход: 70.99%.

MALDI-TOF MS: [M + Na⁺] 1565.64.

25-203

Fmoc-Glu (OtBu)-OH (приобретено у Ark Pharm, 4.0646 г, 9.5134 ммоль), HBTU (5.4118 г, 14.2701 ммоль), HOBT (1.9282 г, 14.2701 ммоль) и 25-201 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 22-181, 9.1 г, 9.9890 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (60 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (7.1 мл, 42.8103 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5° в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 25-203: 12.5430 г.

25-210

25-203 (12.5430 г, 9.5134 ммоль) помещали в 100-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (ТФУК, 10.6 мл, 142.701 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана. Затем результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. После этого добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем органическую фазу упаривали досуха, полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей (50 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в раствор порошкообразный силикагель (50 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1%-5% метанол: 99%-95% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 25-210: 9.0 г, выход: 74.94%.

MALDI-TOF MS: [M + Na⁺] 1284.24.

25-221

25-210 (9.0 г, 7.1295 ммоль), HBTU (3.9376 г, 10.3828 ммоль), HOBT (1.4029 г, 10.3828 ммоль) и этилендиамин моногидрат (приобретено у TCl, 0.2 мл, 3.4609 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (60 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (5.1 мл, 31.1483 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. После этого добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем органическую фазу упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 25-221: 8.8211 г.

MALDI-TOF MS: [M + Na⁺] 2570.22.

25-226

25-221 (8.8211 г, 3.4609 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (10 мл), добавляли морфолин (4.5 мл, 51.9135 ммоль) при перемешивании, и затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа. После окончания реакции результирующий раствор сначала переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. После этого добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем органическую фазу упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 25-226: 7.2828 г.

MALDI-TOF MS: [M + Na⁺] 2125.39.

25-227

25-226 (3.2368 г, 1.5382 ммоль), HBTU (1.7500 г, 4.6146 ммоль), HOBT (0.6235 г, 4.6146 ммоль) и 25-207 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 25-102) (1.7426 г, 3.5379 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (60 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (2.3 мл, 13.8438 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, и затем температуру доводили до комнатной и перемешивали 2 часа. После окончания реакции результирующий раствор сначала переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. После этого добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем органическую фазу упаривали досуха, полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей (50 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (50 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1% водного аммиака / 2%-6% метанол: 97%-93% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 25-227: 2.0618 г, выход: 43.9%.

MALDI-TOF MS: [M + Na⁺] 3076.43.

25-236

25-227 (0.6519 г, 0.2135 ммоль) и 10% Pd/C (50 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования и растворяли в ДМФА (30 мл). Реактор для проведения гидрирования герметично закрывали, подавали водород под давлением 1.6 МПа, затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор собирали и равномерно добавляли по каплям в делительную воронку с песчаным ядром, заполненную спрессованной диатомовой землей, и проводили фильтрование при отсасывании. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (50 мл) до полного извлечения продукта, получая таким образом раствор продукта реакции

25-238

Раствор 25-236 (0.4980 г, 0.2135 ммоль), HBTU (0.9716 г, 2.5620 ммоль), HOBT (0.3462 г, 2.5620 ммоль) и 25-224 (2.9 г, 1.8784 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.3 мл, 7.6860 ммоль) по каплям. После окончания добавления реакционный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 3 часов. После окончания реакции результирующий раствор сначала переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем органическую фазу упаривали досуха, полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей (50 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (30 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (3%-10% метанол: 97%-90% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 25-238: 1.9233 г, выход: 61.96%.

25-243

25-238 (1.9233 г, 0.1323 ммоль) помещали в 100-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (5 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (ТФУК, 0.2 мл, 1.9843 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали для удаления дихлорметана. Затем результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем органическую фазу упаривали досуха, полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей (50 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (30 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1%-5% метанол: 99%-95% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 25-243: 0.7924 г, выход: 71.01%.

25-260

25-243 (0.4738 г, 0.033 ммоль) и M-SCM-40K (приобретено у Jenkem Technology, 3.0 г, 0.0727 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (20 мл), и затем реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре в темноте в течение 1 недели. После окончания реакции добавляли н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (10 мл) для расслоения реакционного раствора, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли н-гексан (300 мл) и метилтретбутиловый эфир (50 мл) в нижнюю маслянистую жидкую фазу для дополнительного осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая в итоге вязкий маслянистый продукт. Затем добавляли дихлорметан (5 мл) в полученный вязкий маслянистый продукт, и раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (60 мл), получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл), получая твердый продукт. Полученный твердый продукт растворяли в смеси растворителей (50 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (40 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (4%-12% метанол: 96%-88% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 25-260: 1.6 г, выход: 50.17%.

44-2

25-260 (0.8233 г, 0.0085 ммоль) растворяли в ТГФ (20 мл);TBAF⋅3H₂O (0.0860 г, 0.2726 ммоль) растворяли в ТГФ (10 мл);тетрагидрофурановый раствор TBAF добавляли в тетрагидрофурановый раствор 25-260, добавляли некоторое количество разбавленного раствора соляной кислоты (30 мл, 0.05 моль/л), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в темноте в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали досуха, добавляли безводный этанол (20 мл), полученный раствор упаривали при пониженном давлении досуха. Эти операции повторяли три раза. Полученное твердое вещество растворяли в ДМФА (1.0 мл), добавляли в полученный раствор изопропанол (50 мл) для осаждения, получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре затем растворяли в ДМФА (3.0 мл), добавляли в полученный раствор изопропанол (50 мл) для осаждения, получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали изопропанолом (30 мл). Твердое вещество, полученное на второй стадии, растворяли в дихлорметане (2.0 мл), добавляли для осаждения метилтретбутиловый эфир (50 мл), получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре растворяли в дихлорметане (2.0 мл), добавляли метилтретбутиловый эфир (50 мл) для осаждения, получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (30 мл) и сушили, получая таким образом продукт 44-2: 0.5519 г, выход: 69.79%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ9.45-9.29 (м, 80H), 9.09-7.93 (м, 103H), 7.65-7.56 (м, 20H), 7.30-7.19 (м, 81H), 6.97-6.95 (с, 40H), 5.46-5.42 (м, 59H), 5.15-5.12 (м, 87H), 4.05-3.54 (м, 6944H), 2.93-2.89 (м, 97H), 2.74 - 2.66 (м, 39H), 2.34-2.31 (м, 20H), 2.09-2.06 (м, 106H), 1.90-1.72 (м, 104H), 1.48-1.45 (м, 31H), 1.31-1.21 (м, 119H), 0.95-0.84 (м, 96H).

7. Синтез 42-52 (Соединение № 1)

Путь синтеза следующий

42-20

Fmoc-Glu-OtBu (приобретено у Accela, 3.2226 г, 7.5741 ммоль), HBTU (4.3086 г, 11.3612 ммоль), HOBT (1.5351 г, 11.3612 ммоль) и 44-19 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 22-181, 6.9 г, 7.5741 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (60 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (7.5 мл, 45.4460 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 2 часов. После окончания реакции результирующий раствор сначала переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем органическую фазу упаривали досуха, полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей (50 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (80 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (4%-12% метанол: 96%-88% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 42-20: 6.9 г, выход: 69.10%.

42-25

42-20 (5.0 г, 3.7923 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли при перемешивании ТФУК (4.2 мл, 56.8845 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана, полученный раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), смесь встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. После этого добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Органическую фазу упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 42-25: 4.7872 г.

33-143

1,2-бис(2-аминоэтокси)этан (приобретено у TCl, 50 мл, 340.7327 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (150 мл), добавляли триэтиламин (94.8928 мл, 681.4654 ммоль), и затем медленно добавляли по каплям ди-трет-бутил дикарбонат (приобретено у Innochem, 74.3751 г, 340.7321 ммоль) при перемешивании при комнатной температуре. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции добавляли порошкообразный силикагель, и полученную смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 2%-3% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 33-143, выход 10%.

42-27

42-25 (4.7872 г, 3.7923 ммоль), HBTU (2.1573 г, 5.6885 ммоль), HOBT (0.7686 г, 5.6885 ммоль) и 33-143 (0.9888 г, 3.9819 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (60 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (2.8 мл, 17.0654 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течении 2 часов. После окончания реакции результирующий раствор сначала переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (200 мл), раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем органическую фазу упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 42-27: 5.4 г, выход: 95.40%.

42-30

42-27 (5.4 г, 3.6177 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (10 мл), добавляли морфолин (4.7 мл, 54.2635 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа. После окончания реакции результирующий раствор сначала переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (200 мл), смесь встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем органическую фазу упаривали досуха, полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей (50 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель (80 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1% водного аммиака/1%-6% метанол: 98%-93% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 42-30: 3.0140 г, выход: 65.58%.

42-34

42-30 (3.0140 г, 2.3724 ммоль), HBTU (1.2269 г, 3.2352 ммоль), HOBT (0.4371 г, 3.2352 ммоль) и глутаровую кислоту (0.1425 г, 1.0784 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (50 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.6 мл, 9.7056 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течении 2 часов, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем органическую фазу упаривали досуха, полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей (50 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (50 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1% водного аммиака/2%-5% метанол: 97%-94% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 42-34: 2.8437 г, выход: 100%.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.60 - 8.22 (м, 5H), 8.19 - 7.63 (м, 11H), 7.55 - 7.11 (м, 40H), 5.10-5.07 (м, 16H), 3.56-3.47 (м, 20H), 3.19-3.17 (м, 8H), 3.09 - 3.01 (м, 4H), 2.99 - 2.65 (м, 16H), 2.43-2.42 (м, 8H), 2.17-2.09 (м, 32H), 1.36-1.34 (м, 18H).

42-15

Раствор 42-14 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 25-102, 5.5320 г, 11.2308 ммоль), HBTU (5.8080 г, 15.3147 ммоль), HOBT (2.0693 г, 15.3147 ммоль) и PKA (PKA представляет собой диметильное производное нового клинического лекарственного средства PKI-587, 6.0 г, 10.2098 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (80 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (7.6 мл, 45.9441 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции, добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и добавляли к нижнему жидкому слою н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали. Эти операции повторяли три раза, получая вязкий продукт. Затем полученный вязкий продукт растворяли в дихлорметане (5 мл), добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) для осаждения, получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 42-15: 10.8450 г.

42-18

42-15 (10.8450 г, 10.2098 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (5 мл), добавляли ТФУК (11.4 мл, 153.1470 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана, затем добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (150 мл) для осаждения, получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 42-18: 9.8230 г, выход: 100%.

42-24

42-20 (1.8683 г, 1.4170 ммоль) и 10% Pd/C (50 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования и растворяли в ДМФА (30 мл). Реактор для проведения гидрирования герметично закрывали, подавали водород под давлением 1.6 МПа, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор собирали и равномерно добавляли по каплям в делительную воронку с песчаным ядром, заполненную спрессованной диатомовой землей, и затем проводили фильтрование при отсасывании. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (60 мл) до полного извлечения продукта, получая таким образом раствор продукта реакции

42-26

Раствор 42-24 (1.3574 г, 1.4170 ммоль), HBTU (3.2243 г, 8.5020 ммоль), HOBT (1.1488 г, 8.5020 ммоль) и 42-18 (8.0 г, 6.2350 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (80 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (4.2 мл, 25.5060 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 3 часов. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и добавляли к нижнему жидкому слою н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали. Эти операции повторяли три раза, получая вязкий продукт. Затем полученный вязкий продукт растворяли в дихлорметане (5 мл), добавляли метилтретбутиловый эфир (100 мл) для осаждения, получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 42-26: 6.7086 г.

42-28

42-26 (6.7086 г, 1.4170 ммоль) помещали в 100-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли ТФУК (1.6 мл, 21.2550 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана, добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (150 мл) для осаждения, получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и растворяли в смеси 20% метанол/дихлорметан (60 мл), добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (70 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (2%-11% метанол: 98%-89% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 42-28: 5.4 г, выход: 81.46%.

42-32

42-28 (4.4 г, 0.9405 ммоль), HBTU (0.5350 г, 1.4108 ммоль), HOBT (0.1906 г, 1.4108 ммоль) и 25-254 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 30-33) (0.8504 г, 1.0346 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (60 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.7 мл, 4.2324 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 3 часов. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли к нижнему жидкому слою н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали. Эти операции повторяли три раза, получая вязкий продукт. Затем полученный вязкий продукт растворяли в дихлорметане (5 мл), добавляли метилтретбутиловый эфир (100 мл) для осаждения, получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и растворяли в смеси 20% метанол/ дихлорметан (60 мл), добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (50 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (3%-15% метанол: 97%-85% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 42-32: 3.6 г, выход: 69.82%.

42-36

42-32 (3.6 г, 0.6567 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (30 мл), добавляли морфолин (0.9 мл, 9.8505 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли к нижнему жидкому слою н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали. Эти операции повторяли три раза, получая вязкий продукт. Затем полученный вязкий продукт растворяли в дихлорметане (5 мл), добавляли метилтретбутиловый эфир (100 мл) для осаждения, получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и растворяли в смеси 20% метанол/ дихлорметан (60 мл), добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (30 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1% водного аммиака/2%-7% метанол: 97%-92% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 42-36: 3.2 г, выход: 92.64%.

42-40

42-36 (3.2 г, 0.6084 ммоль), HBTU (0.3461 г, 0.9126 ммоль), HOBT (0.1233 г, 0.9126 ммоль) и Boc-LC-OH (синтезирован по методике, описанной для синтеза 24-36, 0.1762 г, 0.6692 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (60 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.5 мл, 2.7378 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли к нижнему жидкому слою н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали. Эти операции повторяли три раза, получая вязкий продукт. Затем полученный вязкий продукт растворяли в дихлорметане (5 мл), добавляли метилтретбутиловый эфир (100 мл) для осаждения, получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 42-40: 3.3473 г.

42-41

42-40 (3.3473 г, 0.6084 ммоль) помещали в 100-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли ТФУК (0.7 мл, 9.1260 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана, добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) для осаждения, получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и растворяли в смеси 20% метанол/дихлорметан (60 мл), добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (40 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1% водного аммиака / 3%-10% метанол: 96%-89% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 42-41: 2.1 г, выход: 63.86%.

42-37

42-34 (1.0 г, 0.3792 ммоль) и 10% Pd/C (40 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования и растворяли в ДМФА (30 мл). Реактор для проведения гидрирования герметично закрывали, подавали водород под давлением 1.6 МПа, затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор собирали и равномерно добавляли по каплям в делительную воронку с песчаным ядром, заполненную спрессованной диатомовой землей, и проводили фильтрование при отсасывании. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (60 мл) до полного извлечения продукта, получая таким образом раствор продукта реакции

42-43

42-41 (2.1 г, 0.3885 ммоль), HBTU (0.2007 г, 0.5292 ммоль), HOBT (0.0715 г, 0.5292 ммоль) и раствор 42-37 (0.0845 г, 0.0441 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (50 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.3 мл, 1.5876 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и добавляли к нижнему жидкому слою н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и эти операции повторяли пять раз, получая вязкий продукт. Затем полученный вязкий продукт растворяли в дихлорметане (5 мл), добавляли метилтретбутиловый эфир (100 мл) для осаждения, получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл), растворяли в смеси растворителей (80 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (30 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1% водного аммиака/4%-8% метанол: 95%-91% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 42-43: 1.0 г, выход: 50.38%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.31-10.27 (м, 52H), 8.53 - 7.91 (м, 88H), 7.80-7.71 (м, 28H), 7.62 - 7.26 (м, 55H), 7.04-6.98 (м, 32H), 5.76 (с, 48H), 5.44-5.22 (м, 80H), 4.78 - 4.27 (м, 76H), 4.07-4.02 (м, 61H), 3.92 - 3.20 (м, 2292H), 3.17-3.03 (м, 53H), 2.67-2.59 (м, 118H), 2.33-2.09 (м, 98H), 1.78-1.61 (м, 54H), 1.41 - 0.70 (м, 127H).

42-50

42-43 (1.0 г, 0.0222 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (5 мл), добавляли ТФУК (0.1 мл, 0.6615 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали для удаления дихлорметана, добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (150 мл) для осаждения, получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и растворяли в смеси 20% метанол/дихлорметан (50 мл), добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (30 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1% водного аммиака/4%-10% метанол: 95%-89% дихлорметан). Элюированный продукт собирали и упаривали досуха, получая таким образом продукт 42-50: 0.4772 г, выход: 47.97%.

42-52

42-50 (0.4472 г, 0.0106 ммоль) и M-SCM-20K (0.5004 г, 0.0233 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (30 мл), затем реакционный раствор пермешивали в темноте при комнатной температуре 7 дней. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и добавляли к нижнему жидкому слою н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали. Эти операции повторяли три раза, получая вязкий продукт. Затем полученный вязкий продукт растворяли в дихлорметане (5 мл), добавляли метилтретбутиловый эфир (100 мл) для осаждения, получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл), растворяли в смеси растворителей (80 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (40 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с использованием элюента (1% водного аммиака/4%-10% метанол: 95%-89% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 42-52: 0.547 г, выход: 58.96%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 9.36 - 8.90 (м, 144H), 8.53 - 7.94 (м, 349H), 7.94 - 7.48 (м, 250H), 7.32-7.22 (м, 231H), 7.15-7.09 (м, 27H), 7.03-6.96 (м, 16H), 4.54-4.23 (м, 380H), 4.10 - 3.36 (м, 3418H), 3.19-3.03 (м, 106H), 2.90-2.73 (м, 50H), 2.63-2.59 (м, 380H), 2.41-2.30 (м, 61H), 2.22- 2.12 (м, 95H), 1.98-1.49 (м, 288H), 1.40-1.35 (м, 59H), 1.15-1.03 (м, 75H), 0.91-0.85 (м, 240H).

8. Синтез 37-200 (Соединение № 2)

Путь синтеза следующий

37-192

Пентатетрамин дисульфат (4.33 г, 13.20 ммоль, приобретено у Pharmaron) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (30 мл), добавляли триэтиламин (14.8 мл, 105.6 ммоль), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Фенил хлорформиат (9.95 мл, 79.2 ммоль) медленно добавляли по каплям, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали дихлорметаном (200 мл) и деионизованной водой (200 мл), органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали дихлорметаном (200 мл × 1), органические фазы объединяли, добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и полученную смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 5% метанола, получая таким образом продукт 37-192: 3.3 г, выход 42%.

37-45

35-31 (2.73 г, 2.196 ммоль, синтезирован по методике, описанной для синтеза 34-17), трет-бутил сукцинат (0.459 г, 2.635 ммоль, приобретено у InnoChem), HBTU (1.249 г, 3.294 ммоль), HOBT (0.445 г, 3.294 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (70 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.633 мл, 9.882 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течении 3 часов. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли деионизованную воду (200 мл) и этилацетат (200 мл), и полученный раствор встряхивали для экстрагирования. Водную фазу промывали этилацетатом (150 мл x 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл x 1), упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 37-45: 3.1 г.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.52 (д, J = 7.3 Гц, 1H), 8.30 (д, J = 7.4 Гц, 1H), 7.99 - 7.93 (м, 4H), 7.88 (д, J = 7.3 Гц, 2H), 7.68 (т, J = 7.2 Гц, 3H), 7.51 (т, J = 7.6 Гц, 1H), 7.43 - 7.18 (м, 22H), 5.16 - 5.01 (м, 7H), 4.45 - 4.07 (м, 7H), 3.70 - 3.46 (м, 4H), 3.43 - 3.29 (м, 10H), 3.24 - 3.12 (м, 4H), 2.46 - 2.28 (м, 7H), 2.17 (т, J = 7.9 Гц, 2H), 1.39 - 1.24 (м, 9H).

47-19

37-45 (0.5137 г, 0.3624 ммоль) и Pd/C (0.010 г) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (30 мл), подавали водород под давлением 1.8 МПа, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор извлекали и фильтровали через диатомовую землю. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (20 мл × 3), и растворы в ДМФА объединяли как сырой продукт для проведения следующей реакции.

47-21

47-19 (0.38 г, 0.3624 ммоль), 37-2 (3 г, 1.5944 ммоль), HBTU (0.8246 г, 2.1744 ммоль), HOBT (0.2938 г, 2.1744 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (95 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.078 мл, 6.523 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор осаждали три раза н-гексаном (120 мл) и метилтретбутиловым эфиром (30 мл), получая вязкий маслянистый продукт. Затем добавляли к маслянистому продукту метилтретбутиловый эфир (250 мл) для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл x 3) и растворяли в дихлорметане (150 мл) и метаноле (30 мл), добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 4 % - 8 % метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 47-21: 2.5 г, выход 83%.

43-123

47-21 (2.5 г, 0.2938 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), добавляли морфолин (7.67 мл, 88.14 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции добавляли н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (20 мл) для расслоения реакционного раствора, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли в нижнюю маслянистую жидкую фазу н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (20 мл) для дополнительного осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая вязкий маслянистый продукт. Метилтретбутиловый эфир (150 мл) добавляли к маслянистому продукту для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 2), растворяли в дихлорметане (20 мл) и метаноле (80 мл), добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 6%-10% метанола, получая таким образом продукт 43-123: 1.85 г, выход 77%.

37-195

43-123 (1.85 г, 0.2628 ммоль), 37-192 (0.0326 г, 0.0531 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), добавляли триэтиламин (0.0336 мл, 0.239 ммоль), полученный раствор перемешивали при 80°C в течение ночи. После окончания реакции добавляли н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (20 мл) для расслоения реакционного раствора, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли в нижнюю маслянистую жидкую фазу н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (20 мл) для дополнительного осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая вязкий маслянистый продукт. Метилтретбутиловый эфир (150 мл) добавляли к маслянистому продукту для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 2), растворяли в дихлорметане (20 мл) и метаноле (80 мл), добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и полученную смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 6%-7% метанола, получая таким образом продукт 37-195: 0.7 г, выход 40%.

37-199

37-195 (0.7 г, 0.021 ммоль) помещали в 100-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли ТФУК (4.67 мл, 6.29 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (100 мл×3) и растворяли в смеси растворителей, состоящей из метанола (20 мл) и дихлорметана (80 мл), добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 6%-8% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 37-199: 0.697 г, выход 43%.

37-200

37-199 (0.3 г, 0.009 ммоль) помещали в 100-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (40 мл), добавляли M-NH₂-5K.HCl (0.2772 г, 0.0543 ммоль, приобретено у JenKem), HBTU (0.21 г, 0.543 ммоль), HOBT (0.073 г, 0.543 ммоль), и полученный раствор перемешивали при -5°C при низкой скорости мешалки в течение примерно 10 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.7 мл, 4.32 ммоль) по каплям, раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 20 минут, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали в темноте 7 дней при низкой скорости мешалки. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли к нижнему жидкому слою н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл). Эти операции повторяли три раза, получая вязкий маслянистый продукт. Метилтретбутиловый эфир (100 мл) добавляли к маслянистому продукту для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (30 мл × 3) и растворяли в смеси растворителей, состоящей из метанола (40 мл) и дихлорметана (160 мл), добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 4%-7% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха, сушили в вакуумном термошкафу в течение 1 часа и растворяли в безводном этаноле (2 мл) и дихлорметане (30 мл). Затем добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (200 мл) для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл×2) и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 37-200: 0.27 г, выход: 56%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.19 - 10.05 (м, 16H), 9.06 - 8.84 (м, 15H), 8.32 - 7.77 (м, 251H), 7.59 - 7.46 (м, 45H), 7.31 - 7.05 (м, 313H), 5.92 - 5.66 (м, 25H), 4.61 - 4.49 (м, 25H), 4.43 - 4.29 (м, 14H), 4.26 - 4.16 (м, 40H), 4.05 - 3.84 (м, 31H), 3.70 - 3.61 (м, 113H), 3.58 - 3. 41 (м, 1856H), 3.26 - 3.24 (м, 28H), 3.20 - 3.17 (м, 44H), 3.14 - 3.11 (м, 32H), 3.07 - 2.87 (м, 99H), 2.81 - 2.69 (м, 75H), 2.67 - 2.60 (м, 35H), 2.45 - 2.37 (м, 87H), 2.36 - 2.28 (м, 118H), 2.27 - 2.08 (м, 116H), 1.94 - 1.69 (м, 145H), 1.62 - 1.42 (м, 151H), 1.30 - 1.16 (м, 44H), 0.94 - 0.75 (м, 247H), 0.53 - 0.46 (м, 35H).

9. Синтез 35-78 (Соединение № 4)

Путь синтеза следующий

45-57

Пентаэритритол (5 г, 36.7242 ммоль, приобретено у Aladdin) помещали в 500-миллилитровую колбу, добавляли раствор трет-бутоксида калия в ТГФ (146.8968 мл, 146.8968 ммоль), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 20 минут. Затем медленно добавляли по каплям бензил бромацетат (24.5129 мл, 161.5865 ммоль). После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали смесь в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли деионизованную воду (300 мл) и этилацетат (300 мл), и полученный раствор встряхивали для экстрагирования. Водную фазу промывали этилацетатом (250 мл × 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл × 1), упаривали досуха, полученное твердое вещество растворяли в дихлорметане (300 мл), добавляли порошкообразный силикагель (55 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием петролейным эфиром, содержащим 20% этилацетата. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 45-57: 12.3 г, выход 46%.

35-33

35-32 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 42-25, 9.364 г, 7.418 ммоль), Gly-OtBu.HCl (1.243 г, 7.418 ммоль, приобретено у InnoChem), HBTU (4.219 г, 11.126 ммоль), HOBT (1.503 г, 11.126 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (11.034 мл, 66.758 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали деионизованной водой (200 мл) и этилацетатом (200 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл x 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл x 2), упаривали досуха и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 35-33: 10.2 г.

35-34

35-33 (10.203 г, 7.418 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), добавляли морфолин (9.69 мл, 111.27 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл) и этилацетатом (200 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл × 1), упаривали досуха, добавляли порошкообразный силикагель (35 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 0.5% водного аммиака и 3% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 35-34: 5.2 г, выход 61%.

35-35

35-34 (5.2 г, 4.509 ммоль), янтарный ангидрид (1.35 г, 13.527 ммоль, приобретено у InnoChem) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), затем полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (4.47 мл, 27.053 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать в течение 1 часа, после этого температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку и экстрагировали деионизованной водой (200 мл) и этилацетатом (200 мл), органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл × 2), упаривали досуха и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 35-35: 4.7 г, выход: 83%.

35-36

35-35 (4.7 г, 3.75 ммоль), 35-31 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 34-17, 5.203 г, 4.125 ммоль), HBTU (2.133 г, 5.625 ммоль), HOBT (0.76 г, 5.625 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (2.789 мл, 16.875 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали насыщенным водным раствором хлорида натрия (270 мл) и этилацетатом (240 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл x 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл x 2) и упаривали досуха, добавляли порошкообразный силикагель (15 г) и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 4%-6% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха, сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 35-36: 6.3 г, выход: 67%.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.52 (д, J = 6.8 Гц, 2H), 8.31 (д, J = 6.8 Гц, 3H), 8.20 (с, 1H), 8.08 (с, 1H), 7.96 (м, 2H), 7.86 (м, 3H), 7.78 - 7.54 (м, 4H), 7.54 - 7.46 (м, 2H), 7.39 - 7.26 (м, 42H), 4.26 - 4.16 (м, 11H), 4.12 - 3.84 (м, 3H), 3.72 - 3.47 (м, 15H), 3.25 - 3.10 (м, 10H), 2.99 - 2.84 (м, 3H), 2.81 - 2.67 (м, 2H), 2.45 - 2.34 (м, 13H), 2.23 - 2.11 (м, 6H), 1.42 - 1.34 (м, 9H), 1.29 - 1.24 (д, J = 6.6 Гц, 28H).

35-48

35-36 (0.463 г, 0.185 ммоль) и Pd/C (0.030 г) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (30 мл), подавали водород под давлением 1.8 МПа, и затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор извлекали и фильтровали через диатомовую землю. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (20 мл x 3), получая раствор в ДМФА, содержащий C7.

35-49

35-48 (0.329 г, 0.185 ммоль), 37-2 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 37-2, 3.0 г, 1.594 ммоль), HBTU (0.842 г, 2.22 ммоль), HOBT (0.3 г, 2.22 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (90 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.1 мл, 6.66 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор осаждали три раза н-гексаном (150 мл) и метилтретбутиловым эфиром (40 мл), получая вязкий маслянистый продукт. Затем добавляли к маслянистому продукту метилтретбутиловый эфир (250 мл) для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл x 3), растворяли в дихлорметане (130 мл) и метаноле (25 мл), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и полученную смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 0.5% водного аммиака и 5 % - 12% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 35-49: 2.7 г, выход 87%.

35-73

35-49 (2.7 г, 0.1615 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), добавляли пиперидин (0.479 мл, 4.8443 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции добавляли н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (20 мл) для расслоения реакционного раствора, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (20 мл) в нижнюю маслянистую жидкую фазу для дополнительного осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая вязкий маслянистый продукт. Метилтретбутиловый эфир (150 мл) добавляли к маслянистому продукту для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл × 2), растворяли в дихлорметане (20 мл) и метаноле (80 мл), добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 5%-7% метанола, получая таким образом продукт 35-73: 1.2 г, выход 45%.

35-74

45-57 (0.118 г, 0.1655 ммоль) и Pd/C (0.01 г) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (30 мл), подавали водород под давлением 1.8 МПа, и затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор извлекали и фильтровали через диатомовую землю. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (20 мл × 3), получая раствор в ДМФА, содержащий 35-74.

35-75

35-73 (1.2 г, 0.0727 ммоль), 35-74 (0.375 г, 0.0165 ммоль), HBTU (0.375 г, 0.99 ммоль), HOBT (0.134 г, 0.99 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.492 мл, 2.975 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор осаждали три раза н-гексаном (150 мл) и метилтретбутиловым эфиром (40 мл), получая вязкий маслянистый продукт. Затем добавляли метилтретбутиловый эфир (250 мл) к маслянистому продукту для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл × 3), растворяли в дихлорметане (130 мл) и метаноле (25 мл), добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 6% - 9% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 35-75: 0.8 г, выход 73%.

35-77

35-75 (0.8 г, 0.012 ммоль) помещали в 100-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли ТФУК (10 мл, 134.65 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (70 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл×3) и растворяли в смеси растворителей, состоящей из метанола (20 мл) и дихлорметана (80 мл), добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и полученную смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 4%-8% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 35-77: 0.4 г, выход 51%.

35-78

35-77 (0.4 г, 0.0061 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (25 мл), добавляли M-NH₂-20K.HCl (0.379 г, 0.036 ммоль, приобретено у JenKem), HBTU (0.137 г, 0.36 ммоль), HOBT (0.049 г, 0.36 ммоль), и полученный раствор перемешивали при -5°C при низкой скорости мешалки примерно 10 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.1313 мл, 0.7945 ммоль) по каплям, полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 20 минут, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали в темноте 7 дней при низкой скорости мешалки. После окончания реакции добавляли н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) в реакционный раствор для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) к нижнему жидкому слою для осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая вязкий маслянистый продукт. Метилтретбутиловый эфир (100 мл) добавляли к маслянистому продукту для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (30 мл x 3) и растворяли в смеси растворителей, состоящей из метанола (40 мл) и дихлорметана (160 мл), добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 4%-7% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха, сушили в вакуумном термошкафу в течение 1 часа и растворяли в безводном этаноле (2 мл) и дихлорметане (30 мл). Затем добавляли метилтретбутиловый эфир (140 мл) в полученный раствор для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл×2) и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 35-78: 0.46 г, выход: 70%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.23 - 9.98 (м, 34H), 9.12 - 8.76 (м, 32H), 8.25 - 8.13 (м, 116H), 8.12 - 7.95 (м, 240H), 7.84 - 7.64 (м, 95H), 7.57 - 7.31 (м, 99H), 7.21 - 6.91 (м, 630H), 5.88 -5.63 (м, 56H), 4.76 - 4.48 (м, 64H), 4.33 - 4.26 (м, 154H), 4.05 - 3.83 (м, 116H), 3.71 - 3.62 (м, 241H), 3.59- 3.41 (м, 3840H), 3.42 - 3.37 (м, 91H), 3.27 - 3.21 (м, 393H), 3.19 - 3.11 (м, 149H), 3.09 - 3.93 (м, 72H), 2.85 - 2.73 (м, 102H), 2.52 - 2.42 (м, 116H), 2.34 - 2.07 (м, 369H), 1.91 - 1.84 (м, 120H), 1.78 - 1.63 (м, 123H), 1.61 - 1.52 (м, 265H), 1.29 - 0.92 (м, 89H), 0.85 - 0.63 (м, 461H), 0.60 - 0.47 (м, 81H).

10. Синтез 33-200 (Соединение № 5)

Путь синтеза следующий

45-1

24-143 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 34-17, 5 г, 3.6723 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (20 мл), полученный раствор охлаждали в бане, имеющей постоянную температуру -5°C. Затем добавляли DIEA (2.5390 мл, 18.3615 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 30 минут. Добавляли янтарный ангидрид (1.1025 г, 11.0170 ммоль), через 1 час раствор начинали перемешивать при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли этилацетат (200 мл) и деионизованную воду (150 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали два раза этилацетатом (100 мл×2) до полного извлечения продукта из водной фазы, и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали один раз насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл) и упаривали досуха, получая таким образом продукт (5 г, выход выше расчетного на 0.1 г, выход 100%).

45-6

Реагенты 45-1 (4.9 г, 3.5990 ммоль), NH₂-Gly-OtBu⋅HCl (приобретено у Accela, 0.4721 г, 3.5990 ммоль), HBTU (2.0473 г, 5.3985 ммоль), HOBT (0.7294 г, 5.3985 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (4 мл, 24.2933 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали при пониженной температуре до завершения реакции. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли этилацетат (200 мл) и деионизованную воду (150 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали два раза этилацетатом (100 мл×2) до полного извлечения продукта из водной фазы, и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали один раз насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл) и упаривали, добавляли порошкообразный силикагель, упаривали смесь, переносили сухой остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 50%-100% этилацетат/петролейный эфир, получая таким образом продукт 3.5 г, выход 66%.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.34 - 8.18 (м, 2H), 8.01 - 7.85 (м, 4H), 7.72 -7.64 (м, 3H), 7.43 - 7.22 (м, 26H), 5.14 - 5.03 (м, 8H), 4.41 - 4.06 (м, 8H), 3.94 - 3.86 (м, 2H), 3.71 - 3.66 (м, 2H), 3.58 - 3.49 (м, 4H), 3.42 - 3.36 (м, 2H), 3.22 - 3.13 (м, 3H), 2.98 - 2.88 (м, 2H), 2.47 - 1.81 (м, 17H), 1.39 - 1.37 (м, 9H), 1.28 - 1.20 (м, 3H).

MALDI-TOF MS: [M+H⁺] 1474.70, [M+Na⁺] 1496.70.

33-190

Реагенты 45-6 (0.4702 г, 0.3189 ммоль) и 10% Pd/C (50 мг) помещали в микрореактор, растворяли в ДМФА (30 мл), заполняли водородом (20 фунт/кв.дюйм), и полученный раствор перемешивали. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали при отсасывании через диатомовую землю для удаления Pd/C, и затем диатомовую землю промывали 3-4 раза диметилформамидом, получая раствор продукта в ДМФА для проведения следующей реакции.

33-191

33-162 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 37-2, 3 г, 1.5944 ммоль), HBTU (0.7256 г, 1.9134 ммоль), HOBT (0.2585 г, 1.9134 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в диметилформамидном растворе 33-190, проводили обработку ультразвуком для полного растворения реагентов, и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.9487 мл, 5.7402 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали при пониженной температуре до завершения реакции. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) и н-гексан (150 мл), проводили обработку ультразвуком в течение 5 минут, полученный раствор ставили в холодильник, оставляли на 20 минут, надосадочный раствор отбрасывали, добавляли к нижнему жидкому слою этилацетат (20 мл), проводили обработку ультразвуком в течение 2 минут, добавляли н-гексан (100 мл) в полученный раствор и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре растворяли в смеси 20% метанол/дихлорметан (70 мл), добавляли порошкообразный силикагель, упаривали смесь, переносили сухой остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 1% водного аммиака/ 5% метанол/дихлорметан, и затем смесью 1% водного аммиака/10% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 1.9 г, выход 70%.

33-192

33-191 (1.9 г, 0.2218 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли морфолин (0.5796 мл, 6.6540 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (100 мл), проводили обработку ультразвуком в течение 5 минут и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре растворяли в смеси 20% метанол/дихлорметан (50 мл), добавляли порошкообразный силикагель в полученный раствор, упаривали смесь, переносили сухой остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 1% водного аммиака / 7%/ дихлорметан, и затем смесью 1% водного аммиака / 15% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 1.3 г, выход 72%.

45-2

Дипентаэритритол (приобретено у ACROS, 5 г, 19.6634 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу, создавали инертную атмосферу азота, добавляли раствор трет-бутоксида калия в ТГФ (141.57 мл, 141.5762 ммоль), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 1 часа. Добавляли фенил бромацетат (30.4445 г, 141.5762 ммоль), и раствор перемешивали 3 часа, а затем при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали досуха, затем деионизованную воду и этилацетат добавляли для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом до полного извлечения продукта из водной фазы, и органические фазы объединяли. Органическую фазу сушили безводным порошком сульфата натрия, проводили фильтрование при отсасывании и проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием в градиенте 3%-5% этилацетат/петролейный эфир, получая таким образом продукт 13.9 г, выход 62%.

45-12

Реагенты 45-2 (0.2541 г, 0.0223 ммоль) и 10% Pd/C (50 мг) помещали в микрореактор, растворяли в ДМФА (30 мл), заполняли водородом (20 фунт/кв.дюйм), и полученный раствор перемешивали. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали при отсасывании через диатомовую землю для удаления Pd/C, и затем диатомовую землю промывали 3-4 раза диметилформамидом, получая раствор продукта в ДМФА для проведения следующей реакции.

33-195

33-192 (1.3 г, 0.1558 ммоль), HBTU (0.0761 г, 0.2007 ммоль), HOBT (0.0271 г, 0.2007 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в диметилформамидном растворе 45-12, проводили обработку ультразвуком для полного растворения реагентов, и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.0995 мл, 0.6021 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали при пониженной температуре до завершения реакции. После окончания реакции добавляли метилтретбутиловый эфир (100 мл) и н-гексан (150 мл) в реакционный раствор, проводили обработку ультразвуком в течение 5 минут, полученный раствор ставили в холодильник, оставляли на 20 минут, надосадочный раствор отбрасывали, добавляли этилацетат (20 мл) к нижнему жидкому слою, проводили обработку ультразвуком в течение 2 минут, добавляли н-гексан (100 мл) в полученный раствор, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре растворяли в смеси 20% метанол/дихлорметан (70 мл), добавляли порошкообразный силикагель в полученный раствор, упаривали смесь, переносили сухой остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 1% водного аммиака/5% метанол/дихлорметан, и затем смесью 1% водного аммиака / 15% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 0.8 г, выход 53%.

33-197

33-195 (0.8 г, 0.0158 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли ТФУК (0.03572 мл, 0.4749 ммоль) и обрабатывали ультразвуком для полного растворения соединения. Закрывали колбу стеклянной пробкой, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции напрямую добавляли метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (100 мл) в реакционный раствор, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре сушили в вакууме, получая таким образом продукт 0.6 г, выход 75%.

33-200

Реагенты 33-197 (0.6 г, 0.0119 ммоль), M-NH₂HCL-10K (0.1 г, 0.0099 ммоль), HBTU (0.0056 г, 0.0149 ммоль), HOBT (0.0020 г, 0.0149 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (15 мл) при обработке ультразвуком, и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.0073 мл, 0.0446 ммоль) по каплям, полученный раствор перемешивали в течение 1 часа и затем при комнатной температуре в темноте при низкой скорости мешалки. После окончания реакции добавляли метилтретбутиловый эфир (200 мл) в реакционный раствор для осаждения и проводили фильтрование при отсасывании, получая порошкообразный продукт. Порошкообразный продукт растворяли в смеси растворителей 20% метанол/дихлорметан, и добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (3 г). Проводили упаривание, загрузку сухого остатка на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием от смеси 6% метанол/дихлорметан до смеси 1% водного аммиака/10% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали и упаривали досуха, полученное твердое вещество растворяли в дихлорметане (5 мл) при обработке ультразвуком, добавляли метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (50 мл) в полученный раствор и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре затем растворяли в дихлорметане, добавляли метилтретбутиловый эфир и н-гексан для осаждения, и процесс растворения и осаждения повторяли три раза, получая таким образом продукт 0.5 г, выход 71%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.17 - 10.13 (м, 18H), 8.97 -8.93 (м, 32H), 8.25 - 7.88 (м, 412H), 7.59 - 7.48 (м, 93H), 7.32 - 7.16 (м, 459H), 5.92 - 5.67 (м, 58H), 4.40 - 3.99 (м, 672H), 3.51 - 3.50 (м, 3560H), 3.29 - 2.99 (м, 344H), 2.94 - 2.64 (м, 264H), 2.45 - 2.05 (м, 133H), 1.93 - 1.06 (м, 301H), 0.99 - 0.74 (м, 432H).

11. Синтез 40-123 (Соединение № 7)

Путь синтеза следующий

45-8

Реагент 42-27 помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли морфолин (7.2 мл, 83.4 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 3 часа. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения, получая порошкообразный продукт. Проводили загрузку вещества в сухом виде на колонку и колоночную хроматографию при элюировании в градиенте от смеси 1% водного аммиака / 2% метанол/дихлорметан до смеси 1% водного аммиака / 6% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт (4 г).

45-9

Реагенты E4 (4 г, 3.14 ммоль), SA-OtBu ((приобретено у Accela, 0.54, 3.14 ммоль), HBUT (1.78 г, 4.71 ммоль), HOBT (0.63 г, 4.71 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (40 мл), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 0.5 часа. Затем медленно добавляли DIEA (2.3 мл, 14.13 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор деионизованную воду (100 мл) и этилацетат (100 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (50 мл×3) до полного извлечения продукта из водной фазы, и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным раствором хлорида натрия (50 мл×2) и упаривали досуха, получая таким образом продукт 3.5 г, выход 79%.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.58 - 8.43 (м, 1H), 8.35 - 8.23 (м, 1H), 8.06 - 7.76 (м, 4H), 7.74 - 7.65 (м, 1H), 7.37 - 7.27 (м, 20H), 5.13 - 5.02 (м, 8H), 4.41 - 4.13 (м, 4H), 3.95 - 3.85 (м, 2H), 3.53 - 3.46 (м, 9H), 3.25 - 2.99 (м, 8H), 2.89-2.87 (м, 1H), 2.73-2.71 (м, 1H), 2.46 - 2.30 (м, 9H), 2.21 - 1.79 (м, 12H), 1.37 - 1.34 (м, 18H).

MALDI-TOF MS: [M+H⁺] 1426.75, [M+Na⁺] 1448.75.

33-145

Реагенты Fmoc-E (OtBu) (OH) (1.39 г, 3.29 ммоль), GFLG-LPT (синтезирован по методике, описанной для синтеза 14-128, 3 г, 3.13 ммоль), HBUT (1.78 г, 4.7 ммоль), HOBT (0.63 г, 4.7 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 0.5 часа. Затем медленно добавляли DIEA (2.34 мл, 14.2 ммоль) по каплям, и через 1 час реакционный раствор нагревали до комнатной температуры и перемешивали. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор деионизованную воду (100 мл) и этилацетат (100 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (50 мл×3) до полного извлечения продукта из водной фазы, и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным раствором хлорида натрия (50 мл×2) и упаривали досуха. Выход 100%.

33-147

33-145 (3.13 ммоль) растворяли в дихлорметане (5 мл) и ТФУК (6.63 мл, 89.4 ммоль) при обработке ультразвуком, и полученный раствор перемешивали. После окончания реакции результирующий раствор упаривали, добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения, получая порошкообразный продукт. Переносили полученное сухое вещество на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 2% метанол/дихлорметан и затем смесью 6% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 2.8 г, выход 70%.

39-11

Реагенты 33-147 (2.8 г, 2.14 ммоль), GFLG-SB7 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 25-132, 2 г, 2.247 ммоль), HBUT (1.21 г, 3.21 ммоль), HOBT (0.43 г, 3.21 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 0.5 часа. Затем медленно добавляли DIEA (1.59 мл, 9.63 ммоль) по каплям, через 1 час реакционный раствор нагревали до комнатной температуры и перемешивали. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор деионизованную воду (100 мл) и этилацетат (100 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (50 мл×3) до полного извлечения продукта из водной фазы, и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным раствором хлорида натрия (50 мл×2) и упаривали досуха, получая таким образом продукт 4.6 г. Выход 100%.

39-12

Реагент 39-11 (2.14 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли морфолин (5.59 мл, 64.2 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 3 часа. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор деионизованную воду (300 мл) и этилацетат (150 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (50 мл×3) до полного извлечения продукта из водной фазы, и органические фазы объединяли. Выход 100%.

39-13

Реагенты 39-12 (2.14 ммоль), Boc-Gly-OH (0.39, 2.247 ммоль), HBUT (1.21 г, 3.21 ммоль), HOBT (0.43 г, 3.21 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (50 мл), и раствор перемешивали при -5°C в течение 0.5 часа. Затем медленно добавляли DIEA (1.59 мл, 9.63 ммоль) по каплям, через 1 час реакционный раствор нагревали до комнатной температуры и перемешивали. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор деионизованную воду (300 мл) и этилацетат (150 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (50 мл×3) до полного извлечения продукта из водной фазы, и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным раствором хлорида натрия (50 мл×2) и упаривали досуха, выход 100%.

39-20

39-13 (2.14 ммоль) растворяли в дихлорметане (5 мл) и ТФУК (4.7 мл, 64.2 ммоль), при обработке ультразвуком, и полученный раствор перемешивали. После окончания реакции результирующий раствор упаривали, добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения, получая порошкообразный продукт. Переносили полученное сухое вещество на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 1% водного аммиака/3% метанол/дихлорметан и затем смесью 1% водного аммиака / 6% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 3 г, выход 69%.

45-29

Реагент 45-9 (0.22 г, 0.1551 ммоль) помещали в реактор для проведения гидрирования, добавляли по каплям ДМФА по внутренней стенке для растворения реагента, добавляли 10% Pd/C (0.05 г), заполняли водородом, и полученный раствор перемешивали в течение ночи. После окончания реакции фильтровали результирующий раствор при отсасывании через воронку с песчаным ядром, заполненную спрессованной диатомовой землей, для удаления Pd/C, затем диатомовую землю промывали 3-4 раза диметилформамидом (40 мл), получая таким образом раствор продукта для проведения следующей реакции.

45-30

Реагенты 39-20 (1.5 г, 0.7445 ммоль), 45-29 (0.10551 ммоль), HBUT (0.3529 г, 0.9306 ммоль), HOBT (0.1257 г, 0.9306 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (50 мл), полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 0.5 часа. Затем медленно добавляли DIEA (0.4614 мл, 2.7918 ммоль) по каплям, через 1 час реакционный раствор нагревали до комнатной температуры и перемешивали. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения, получая порошкообразный продукт. Переносили полученное сухое вещество на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 1% водного аммиака/4% метанол/дихлорметан, и затем смесью 1% водного аммиака/10% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт упаривали досуха, получая таким образом продукт 1.4 г, выход 40%.

45-35

45-35 (1.4 г) растворяли в дихлорметане (5 мл) и ТФУК (0.5741 мл, 7.73 ммоль) при обработке ультразвуком, и полученный раствор перемешивали. После окончания реакции результирующий раствор упаривали, добавляли в раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения, получая порошкообразный продукт. Переносили полученное сухое вещество на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 1% водного аммиака/5% метанол/дихлорметан, и затем смесью 1% водного аммиака/10% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 1.2 г, выход 80%.

45-65

Реагенты 35-74 (2 г, 5.4 ммоль), янтарный спирт (5.5082 г, 47.86 ммоль) и DMAP (0.2922 г, 2.392) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (50 мл), полученный раствор перемешивали при -5°C, и быстро добавляли порциями DCC (9.8750 г, 47.86 ммоль). Реакциооный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали, и фильтрат упаривали досуха. Проводили загрузку вещества в сухом виде на колонку и колоночную хроматографию при элюировании в градиенте от смеси 10% этилацетат/петролейный эфир до этилацетата, получая таким образом продукт 3 г, выход 81%.

40-121

Реагент 45-35 (1.2 г, 0.101 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), полученный раствор помещали в охлаждающую баню с постоянной температурой (-5°C) и перемешивали в течение 30 минут, после этого добавляли DIEA (0.1 мл) по каплям. Затем добавляли 45-65 (0.015 г, 0.021 ммоль). После растворения полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в темноте при низкой скорости мешалки. После окончания реакции помещали метилтретбутиловый эфир (150 мл) в коническую колбу, реакционный раствор выливали в коническую колбу, затем добавляли н-гексан (200 мл), продукт выпадал в осадок, и проводили фильтрование при отсасывании. Проводили колоночную хроматографию (высота колонки: 5 см) при градиентном элюировании от смеси 7% метанол/дихлорметан до смеси 1% водного аммиака / 10% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 0.7 г.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.14-10.12 (м, 12H), 9.02-9.00 (м, 4H), 8.95 -8.94 (м, 14H), 8.18-8.16 (м, 41H), 8.13-8.05 (м, 90H), 7.86-7.83 (м, 30H), 7.55 - 7.47 (м, 41H), 7.26 - 7.17 (м, 274H), 7.11-7.08 (м, 65H), 7.02-7.00 (м, 44H), 6.73-6.64 (м, 6H), 4.39 - 4.13 (м, 71H), 4.03 - 3.45 (м, 268H), 3.22 - 2.66 (м, 207H), 2.41-2.38 (м, 59H), 2.31-2.28 (м, 99H), 2.26 - 1.97 (м, 127H), 1.88-1.47 (м, 281H), 0.97 - 0.73 (м, 288H).

40-123

M-NH₂⋅HCL -10K (0.0528 г, 0.05 ммоль), 40-121 (0.37 г, 0.012 ммоль), HOBT (0.009 г, 0.072 ммоль), HBTU (0.027 г, 0.072 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), полученный раствор помещали в охлаждающую баню с постоянной температурой. Через 30 минут добавляли DIEA (0.035 мл, 0.216 ммоль) по каплям, через 1 час реакционный раствор нагревали до комнатной температуры и перемешивали в темноте при низкой скорости мешалки. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (50 мл) и н-гексан (150 мл) для осаждения, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре растворяли в смеси 20% метанол: 80% дихлорметан (50 мл). Переносили смесь на колонку и проводили колоночную хроматографию (высота колонки: 5 см) при элюировании в градиенте 1% водного аммиака/5-10% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт упаривали досуха и растворяли в безводном этаноле (5 мл) и дихлорметане (2 мл), раствор обрабатывали ультразвуком, получая гомогенную фазу, добавляли н-гексан (100 мл) и проводили фильтрование при отсасывании. Процесс растворения и осаждения повторяли три раза. Осадок сушили в вакууме, получая таким образом продукт 0.45 г.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.12-10.10 (м, 16H), 8.93-8.91 (м, 16H), 8.19-8.06 (м, 172H), 7.84-7.67 (м, 65H), 7.21-7.11 (м, 354H), 4.54 -3.89 (м, 134H), 3.48-3.46 (м, 3578H), 3.21-3.11 (м, 175H), 2.89-2.87 (м, 28H), 2.79-2.66 (м, 80H), 2.43-2.07 (м, 353H), 1.93-1.43 (м, 340H), 0.96 - 0.74 (м, 288H).

12. Синтез 41-40 (Соединение № 13)

Путь синтеза следующий

39-27

Реагенты Fmoc-Glu-OH (приобретено у Aladdin, 0.7719 г, 2.0899 ммоль), 31-155 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 27-120, 5 г, 4.3887 ммоль), HBUT (2.3777 г, 6.2697 ммоль), HOBT (0.8472 г, 6.2697 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (40 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (3.1208 мл, 18.8091 ммоль) по каплям, полученный раствор перемешивали при пониженной температуре в течение 2 часов, и затем при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли деионизованную воду (200 мл) и этилацетат (300 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (100 мл×3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным раствором хлорида натрия (150 мл×2) и упаривали досуха, получая таким образом продукт 5.5 г, выход 100%.

39-29

Реагент 39-27 (5.4 г, 2.0899 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (20 мл) и перемешивали при комнатной температуре. Затем добавляли морфолин (4.5544 мл, 52.2475 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли деионизованную воду (200 мл) и этилацетат (300 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (100 мл×3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным раствором хлорида натрия (150 мл×2), упаривали до 100 мл и добавляли порошкообразный силикагель (15 г). Упаривали смесь, переносили сухой остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 1% водного аммиака / 0.5% метанол/дихлорметан, и затем смесью 1% водного аммиака / 2% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 3.9848 г, выход 73%.

41-26

Реагент 31-155 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 27-120, 1 г, 0.87 ммоль) растворяли в ДМФА (20 мл), полученный раствор перемешивали при 0°C и добавляли DIEA (0.58 мл, 3.51 ммоль) по каплям. Через 30 минут добавляли янтарный ангидрид (0.26 г, 2.16 ммоль). После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли деионизованную воду (100 мл) и этилацетат (100 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (50 мл×3) до полного извлечения продукта из водной фазы, и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали досуха, выход 100%.

41-27

Реагенты 39-29 (2.0 г, 0.87 ммоль), 41-26 (0.4721 г, 0.87 ммоль), HBTU (0.49 г, 1.30 ммоль), HOBT (0.17 г, 1.30 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.64 мл, 3.91 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали при пониженной температуре до завершения реакции. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли этилацетат (200 мл) и деионизованную воду (150 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали два раза этилацетатом (100 мл×2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали один раз насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл), упаривали, добавляли порошкообразный силикагель и упаривали, переносили остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 50%-100% этилацетат/петролейный эфир, получая таким образом продукт 1.8 г, выход 60%.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.57 - 8.47 (м, 3H), 8.35 - 7.88 (м, 10H), 7.75 -7.65 (м, 3H), 7.39 - 7.27 (м, 60H), 6.76 - 6.61 (м, 3H), 5.15 - 5.02 (м, 24H), 4.42 - 4.29 (м, 9H), 3.93 - 3.87 (м, 5H), 3.61 - 3.47 (м, 13H), 3.42 - 3.36 (м, 7H), 2.90 - 2.80 (м, 6H), 2.47 - 2.39 (м, 12H), 2.23 - 1.68 (м, 31H), 1.38 - 1.14 (м, 55H).

41-33

Реагенты 41-27 (0.41 г, 0.113 ммоль) и 10% Pd/C (0.166 г) растворяли в ДМФА (30 мл), помещали в реактор для гидрирования, подавали водород под давлением 18 фунт/кв.дюйм, и полученный раствор перемешивали. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали при отсасывании через диатомовую землю для удаления Pd/C, и затем диатомовую землю промывали четыре раза диметилформамидом (25 мл × 4), получая таким образом раствор продукта.

41-34

Реагенты 39-20 (3.0 г, 1.48 ммоль), 41-33 (0.2858 г, 0.113 ммоль), HBTU (0.77 г, 2.034 ммоль), HOBT (0.27 г, 2.034 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.0 мл, 6.102 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали при пониженной температуре до завершения реакции. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения, получая порошкообразный продукт. Переносили полученное сухое вещество на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 1% водного аммиака/2% метанол/дихлорметан, и затем 1% водного аммиака/10% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 1.64 г, выход 55%.

41-35

41-34 (1.64 г, 0.06215 ммоль) растворяли в дихлорметане (5 мл) и ТФУК (0.41 мл, 5.5935 ммоль) при обработке ультразвуком, и полученный раствор перемешивали. После окончания реакции результирующий раствор упаривали, добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения, получая порошкообразный продукт. Переносили полученное сухое вещество на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 1% водного аммиака/5% метанол/дихлорметан, и затем 1% водного аммиака/10% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 1.13 г, выход 70%.

41-40

Реагенты 41-35 (1.1 г, 0.04350 ммоль) и M-SCM-10K (1.43 г, 0.14355 ммоль) растворяли в ДМФА (20 мл), и полученный раствор перемешивали при медленной скорости мешалки в темноте. После окончания реакции результирующий раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (50 мл) и н-гексаном (100 мл), и проводили фильтрование при отсасывании. Остаток переносили на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя в градиенте от дихлорметана до смеси 1% водного аммиака / 8% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт затем упаривали досуха и растворяли в безводном этаноле (10 мл), полученный раствор обрабатывали ультразвуком, получая гомогенную фазу, затем добавляли н-гексан (50 мл) для осаждения. Эту операцию осаждения повторяли три раза. Осадок сушили в вакууме, получая таким образом продукт 1 г. Выход 41%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.58 - 8.53 (м, 5H), 8.13 - 7.92 (м, 111H), 7.72 - 7.65 (м, 34H), 7.58 - 7.46 (м, 51H), 7.41 - 7.33 (м, 88H), 7.30 - 7.16 (м, 241H), 5.29 - 5.23 (м, 12H), 5.16 - 5.08 (с, 19H), 4.15 - 4.12 (м, 48H), 4.05 - 3.97 (м, 75H), 3.51 - 3.50 (м, 3285H), 3.25 - 3.23 (м, 173H), 3.16 - 2.98 (м, 242H), 2.93 - 2.85 (м, 54H), 2.76 - 2.72 (м, 50H), 2.68 - 2.65 (м, 55H), 2.36 - 2.27 (м, 74H), 0.94 - 0.75 (м, 216H).

13. Синтез 39-55 (Соединение № 12)

Путь синтеза следующий

39-31

33-22 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 22-181, 0.5 г, 0.54 ммоль) помещали в 100-миллилитровую круглодонную колбу и растворяли в дихлорметане (10 мл) при обработке ультразвуком. Фенил хлорформиат (0.3 мл, 2.19 ммоль) добавляли, и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли фенил хлорформиат (0.13 мл, 1.09 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали при пониженной температуре в течение 2 часов. После окончания реакции добавляли деионизованную воду (200 мл) и этилацетат (300 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (100 мл×3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным раствором хлорида натрия (150 мл×2) и упаривали досуха, получая таким образом продукт 0.5 г.

39-30

39-29 (1.4 г, 0.59 ммоль), 39-31 (0.5 г, 0.54 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл). Затем добавляли DIEA (0.1 мл), и полученный раствор перемешивали при 80°C до завершения реакции. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли деионизованную воду (100 мл) и этилацетат (150 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (50 мл×3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл×2), упаривали до 50 мл, добавляли порошкообразный силикагель (6 г) и упаривали смесь, переносили сухой остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 2% метанол/дихлорметан, и затем смесью 3% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 1.3 г, выход 65.38%.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.57 - 8.47 (м, 3H), 8.40 - 8.06 (м, 6H), 8.01 - 7.65 (м, 4H), 7.38 - 7.28 (с, 60H), 7.22 - 7.11 (м, 1H), 5.14 - 5.03 (м, 24H), 4.42 - 4.31 (м, 8H), 3.94 - 3.86 (м, 5H), 3.60 - 3.48 (м, 13H), 2.88 - 2.81 (м, 4H), 2.47 - 2.37 (м, 11H), 2.22 - 2.13 (м, 6H), 2.10 - 1.72 (м, 23H), 1.37 - 1.31 (м, 29H), 1.26 - 1.21 (м, 18H), 0.88 - 0.82 (м, 2H).

39-51

39-30 (0.16 г, 0.048 ммоль) и 10% Pd/C (70 мг) растворяли в ДМФА (30 мл), помещали в реактор для гидрирования, подавали водород под давлением 18 фунт/кв.дюйм, и полученный раствор перемешивали. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали при отсасывании через диатомовую землю для удаления Pd/C, и затем диатомовую землю промывали четыре раза диметилформамидом (25 мл×4), получая таким образом раствор продукта.

39-52

39-20 (1.25 г, 0.625 ммоль), 39-51 (0.048 ммоль), HBTU (0.32 г, 0.864 ммоль), HOBT (0.11 г, 0.864 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), проводили обработку ультразвуком для полного растворения реагентов, и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.42 мл, 2.59 ммоль) по каплям, и реакционный раствор перемешивали при пониженной температуре 2 часа, затем при комнатной температуре до завершения реакции. После окончания реакции, добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (250 мл), проводили обработку ультразвуком в течение 5 минут, надосадочный раствор отбрасывали, добавляли к нижнему жидкому слою этилацетат (20 мл), проводили обработку ультразвуком в течение 3 минут, добавляли метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (100 мл) для отделения твердого вещества, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре растворяли в смеси 20% метанол/дихлорметан (20 мл), добавляли порошкообразный силикагель (10 г), упаривали смесь, переносили сухой остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 1% водного аммиака/6% метанол/дихлорметан, и затем смесью 1% водного аммиака/15% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 0.6 г.

39-53

39-52 (0.6 г) растворяли в дихлорметане (15 мл) и ТФУК (0.2267 мл, 3.0521 ммоль), и обрабатывали ультразвуком для полного растворения соединения. Закрывали колбу стеклянной пробкой, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор упаривали для удаления дихлорметана, добавляли этилацетат (20 мл), проводили обработку ультразвуком в течение 2 минут, добавляли метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (70 мл), и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре растворяли в смеси 20% метанол/дихлорметан при обработке ультразвуком, добавляли порошкообразный силикагель (6 г), упаривали, переносили остаток от упаривания на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя в градиенте от смеси 1% водного аммиака/6% метанол/дихлорметан до смеси 1% водного аммиака/15% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 0.3 г.

39-55

39-53 (0.6 г) растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли M-SCM-20K (0.9378 г), обрабатывали смесь ультразвуком для полного растворения реагентов, и затем полученный раствор перемешивали в темноте при низкой скорости мешалки. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (70 мл) для отделения твердого вещества, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре растворяли в смеси 20% метанол/дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и упаривали, переносили остаток от упаривания на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя в градиенте от дихлорметана до смеси 1% водного аммиака / 15% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и затем растворяли в безводном этаноле (3 мл), и полученный раствор обрабатывали ультразвуком, получая гомогенную фазу. Затем добавляли метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (50 мл), и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре затем растворяли в безводном этаноле (3 мл), добавляли метилтретбутиловый эфир и н-гексан для осаждения. процесс растворения и осаждения повторяли три раза. Проводили фильтрование при отсасывании, и осадок на фильтре сушили, получая таким образом продукт 0.8 г.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 9.93 - 9.81 (м, 7H), 9.09 - 9.01 (м, 14H), 8.79 - 7.94 (м, 163H), 7.87 - 6.50 (м, 404H), 5.79- 5.70 (м, 5H), 5.29- 5.23 (м, 18H), 4.81 - 4.00 (м, 138H), 3.51 - 3.50 (м, 2227H), 3.25 - 2.64 (м, 177H), 2.36 - 1.91 (м, 101H), 1.55 - 1.32 (м, 293H), 0.88 - 0.72 (м, 216H).

14. Синтез 29-235 (Соединение № 15)

26-250

Boc-Lys (Boc)-OH (приобретено у Arm Pharm, 0.3769 г, 1.0879 ммоль), 26-232 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 22-181, 0.989 ммоль), HBTU (0.5627 г, 1.4835 ммоль), HOBT (0.2005 г, 1.4835 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (40 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.7356 мл, 4.4505 ммоль) по каплям в течение 3 минут. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C при перемешивании в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли для экстрагирования очищенную воду (120 мл) и этилацетат (80 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (80 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия (80 мл×3), упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая сырой продукт 26-250: выход 100%.

26-255

26-250 (0.989 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли ТФУК (2.2182 мл, 29.87 ммоль) и затем полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали досуха, получая маслянистый продукт. Остаток от упаривания растворяли в этилацетате (50 мл), добавляли в полученный раствор избыточное количество твердого бикарбоната натрия до нейтрализации (пока не прекращалось выделение пузырьков газа), и фильтровали. Добавляли в фильтрат порошкообразный силикагель (15 г), и полученный раствор затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 3%-6% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 26-255: 0.8 г, выход 81%.

26-258

26-255 (0.8 г, 0.7698 ммоль), 41-26 (2.0990 г, 1.6936 ммоль), HBTU (0.8761 г, 2.3095 ммоль), HOBT (0.3121 г, 2.3095 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.1458 мл, 6.9285 ммоль) по каплям в течение 3 минут. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C при перемешивании в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли очищенную воду (120 мл) и этилацетат (80 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (80 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия (80 мл × 3), упаривали досуха. Твердый остаток растворяли в смеси метанол/дихлорметан (1: 4) (200 мл), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 3%-5% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 26-258: 1.6884 г, выход 63%.

29-152

29-147 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 42-20, 1.7952 г, 1.3616 ммоль) и 10% Pd/C (0.03 г) помещали в реактор для проведения гидрирования, и растворяли в ДМФА (30 мл), Реактор для проведения гидрирования герметично закрывали и проводили три цикла откачки и заполнения, так что давление в реакторе для проведения гидрирования составляло 0.18 МПа, затем полученный раствор оставляли на ночь для прохождения реакции при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Осадок на фильтре промывали диметилформамидом (20 мл×3), получая таким образом продукт 29-152, выход 100%.

29-153

29-152 (1.3616 ммоль), 42-18 (6.0 г, 6.2632 ммоль), HBTU (3.0990 г, 8.1696 ммоль), HOBT (1.1040 г, 8.1696 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (60 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (4.0532 мл, 24.5088 ммоль) по каплям в течение 7 минут, и полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Затем добавляли метилтретбутиловый эфир (80 мл) и небольшое количество н-гексана (10 мл), полученный раствор встряхивали, и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Из реакционного раствора выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4). Порошкообразный силикагель (30 г) добавляли, и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 5%-8% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 29-153: 3.6 г, выход 47%.

29-157

29-153 (3.6 г, 1.3493 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли ТФУК (1.5031 мл, 20.2401 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали досуха, получая маслянистый продукт. Затем добавляли метилтретбутиловый эфир (40 мл), при этом выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 3), и промытый осадок на фильтре собирали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 29-157, выход 100%.

29-162

29-157 (1.3493 ммоль), GFLG-PCB (синтезирован по методике, описанной для синтеза 30-33, 1.220 г, 1.4842 ммоль), HBTU (0.7676 г, 2.0240 ммоль), HOBT (0.2735 г, 2.0240 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (60 мл), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.0 мл, 6.0719 ммоль) по каплям в течение 3 минут. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Затем добавляли метилтретбутиловый эфир (80 мл) и небольшое количество н-гексана (10 мл), полученный раствор встряхивали, и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Из реакционного раствора выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 3), и промытый осадок на фильтре собирали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 29-162: выход 100%.

29-164

29-162 (1.3493 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (15 мл), добавляли морфолин (1.2 мл, 13.493 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Затем добавляли метилтретбутиловый эфир (80 мл) и небольшое количество н-гексана (10 мл), полученный раствор встряхивали, и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Из реакционного раствора выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 5%-9% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 29-164: 4.1 г, выход 59%.

29-167

29-164 (4.1 г, 0.7795 ммоль), Boc-Gly-OH (0.1502 г, 8574 ммоль), HBTU (0.4434 г, 1.1692 ммоль), HOBT (0.1578 г, 0.1.1692 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (40 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.5797 мл, 3.5076 ммоль) по каплям, и реакционный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Затем добавляли метилтретбутиловый эфир (80 мл) и небольшое количество н-гексана (10 мл), полученный раствор встряхивали, и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Из реакционного раствора выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 3), и промытый осадок на фильтре собирали и сушили в вакуумном термошкафу, получая целевой продукт, выход 100%.

29-194

29-167 (0.7795 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (5 мл), добавляли ТФУК (0.8683 мл, 11.6921 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали досуха, получая маслянистый продукт. Затем добавляли метилтретбутиловый эфир (250 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (100 мл×3) и растворяли в смеси метанол (60 мл) /дихлорметан (240 мл), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и полученную смесь затем упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 3%-8% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая целевой продукт: 3.2 г, выход 76%.

29-196

Реагенты 26-258 (0.2545 г, 0.073 ммоль), 10% Pd/C (40 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (30 мл), затем подавали водород под давлением 1.8 МПа, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (20 мл×3), и диметилформамидные растворы объединяли для использования в следующей реакции.

29-197

Реагенты 29-194 (3.2 г, 0.9211 ммоль), 29-196 (0.073 ммоль), HBTU (0.5 г, 1.3159 ммоль), HOBT (0.1778 г, 1.3159 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.6525 мл, 3.9477 ммоль) по каплям, реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл), раствор ставили в холодильник на 30 минут, потом твердый осадок отделяли фильтрованием при отсасывании. Осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 1% водного аммиака / 3% метанол/дихлорметан, и затем смесью 1% водного аммиака / 10% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 2.2 г, выход 67%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.17-10.13 (м, 10H), 9.10-8.84 (м, 88H), 8.35 - 7.43 (м, 676H), 7.37-6.69 (м, 420H), 5.87-5.73 (м, 12H), 4.60 - 4.09 (м, 217H), 3.96 - 3.43 (м, 1173H), 3.21 - 2.65 (м, 524H), 2.30 - 1.66 (м, 440H), 1.59 - 1.08 (м, 541H), 0.92-0.75 (м, 360H).

29-201

29-197 (2.2 г) растворяли в дихлорметане (10 мл) и ТФУК (4 мл) при обработке ультразвуком, и полученный раствор перемешивали. После окончания реакции результирующий раствор упаривали досуха, получая маслянистый продукт. Метилтретбутиловый эфир (100 мл) добавляли для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Переносили полученное сухое вещество на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 1% водного аммиака/4% метанол/дихлорметан, и затем смесью 1% водного аммиака / 10% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 1.4 г, выход 52%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.13-10.07 (м, 10H), 9.37-9.29 (м, 63H), 9.09 - 8.84 (м, 51H), 8.55-8.49 (м, 20H), 8.03-7.38 (м, 560H), 7.12-7.06 (м, 376H), 6.74 - 6.64 (м, 13H), 5.36-5.28 (м, 12H), 4.57 - 4.19 (м, 153H), 3.85-3.60 (м, 803H), 3.16 - 3.01 (м, 317H), 2.30 - 2.10 (м, 150H), 1.91-1.72 (м, 143H), 1.54-1.44 (м, 127H), 1.34-1.15 (м, 940H), 0.93 - 0.76 (м, 360H).

29-235

Реагенты 29-201 (1.0g) и M-SCM-20K (1.2163 г, 0.0589 ммоль) растворяли в ДМФА (20 мл), и полученный раствор перемешивали при медленной скорости мешалки в темноте 1 неделю. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл), полученный раствор ставили в холодильник на 30 минут, твердый осадок отделяли фильтрованием при отсасывании. Осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку вещества в сухом виде на колонку и колоночную хроматографию при элюировании в градиенте от смеси 1% водного аммиака/3% метанол/дихлорметан до смеси 1% водного аммиака/8% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт затем упаривали досуха, растворяли в безводном этаноле (10 мл), полученный раствор обрабатывали ультразвуком, получая гомогенную фазу, и затем добавляли н-гексан (50 мл) для осаждения. Эту операцию осаждения повторяли три раза. Осадок сушили в вакууме, получая таким образом продукт 1.3 г. Выход 61%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.05-9.88 (м, 10H), 9.41-9.30 (м, 62H), 9.11 - 8.89 (м, 50H), 8.58-8.51 (м, 20H), 8.11-7.40 (м,, 562H), 7.15-7.08 (м, 378H), 6.78 - 6.66 (м, 13H), 5.38-5.31 (м, 15H), 4.58 - 4.21 (м, 151H), 3.95-3.65 (м, 796H), 3.52 - 3.43 (м, 3706H), 3.19 - 3.07 (м, 321H), 2.32- 2.13 (м, 148H), 1.93-1.76 (м, 146H), 1.58-1.46 (м, 125H), 1.36-1.16 (м, 935H), 0.98 - 0.74 (м, 366H).

15. Синтез 37-108 (Соединение № 17)

Путь синтеза следующий

37-39

Эритритол (приобретено у Aladdin, 2.5 г, 20.4717 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ТГФ (130 мл), затем полученный раствор перемешивали при 0°C. В инертной атмосфере азота медленно добавляли по каплям раствор трет-бутоксида калия в ТГФ (1 моль/л) (98.2642 мл, 98.2642 ммоль). После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать 5 часов. Затем медленно добавляли бензил бромацетат (14.5937 мл, 92.1225 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать 2 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (200 мл) и этилацетат (250 мл), и полученный раствор встряхивали для экстрагирования. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл x 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл x 2), упаривали досуха. Полученный сухой продукт растворяли в дихлорметане, добавляли порошкообразный силикагель (50 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием петролейным эфиром, содержащим 1.5%-5% этилацетат. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 37-39: 4.8 г, выход 33%.

37-49

37-39 (1.03 г, 1.441 ммоль) и 10% Pd/C (0.040 г) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (30 мл), затем подавали водород под давлением 1.8 МПа, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (20 мл x 3), и диметилформамидные растворы объединяли как сырой продукт для проведения следующей реакции.

37-67

37-49 (0.14 г, 0.3013 ммоль), 37-66 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 35-4, 1.9 г, 1.506 ммоль), HBTU (1.537 г, 4.0528 ммоль), HOBT (0.5473 г, 4.0528 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (2.01 мл, 12.1585 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку и экстрагировали деионизованной водой (200 мл) и этилацетатом (200 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл × 2), упаривали досуха и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 37-67: 1.61 г.

37-68

37-67 (1.6053 г, 0.3013 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), добавляли морфолин (2.6245 мл, 30.125 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку и экстрагировали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл) и этилацетатом (200 мл), органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл x 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл x 1), упаривали досуха, добавляли порошкообразный силикагель (20 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 0.5% водного аммиака и 5%-8% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 37-68: 0.59 г, выход 45%.

37-79

33-143 (3.7248 г, 15.0 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (30 мл), добавляли триэтиламин (2.598 мл, 18.4912 ммоль), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Фенил хлорформиат (1.39 мл, 11.0947 ммоль) медленно добавляли по каплям, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали дихлорметаном (200 мл) и деионизованной водой (200 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали дихлорметаном (200 мл x 1), органические фазы объединяли, добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 3% метанола, получая таким образом продукт 37-79: 2.34 г, выход 69%.

37-81

37-68 (0.59 г, 0.1329 ммоль), 37-79 (0.2938 г, 0.7975 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (40 мл), и полученный раствор перемешивали при 80°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали этилацетатом (200 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл), и органическую фазу отделяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (150 мл), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 6%-8% метанола, получая таким образом продукт 37-81: 0.27 г, выход 39%.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.32 - 8.14 (м, 20H), 7.41 - 7.38 (м, 80H), 7.26 - 7.10 (м, 4H), 6.21 - 5.93 (м, 8H), 5.34- 5.20 (м, 32H), 4.51 - 4.45 (м, 16H), 3.96 - 3.81 (м, 24H), 3.63 - 3.04 (м, 32H), 2.21 - 2.05 (м, 64H), 1.84 - 1.55 (м, 16H), 1.48 - 1.33 (м, 36H), 1.25 (м, 9H).

37-89

37-81 (0.27 г, 0.0488 ммоль) и 10% Pd/C (0.070 г) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (30 мл), подавали водород под давлением 1.8 МПа, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (20 мл x 3), и диметилформамидные растворы объединяли как сырой продукт для проведения следующей реакции.

37-91

37-89 (0.1998 г, 0.0488 ммоль), 37-38 (синтезирован по методике, описанной для синтеза 39-20,1.769 г, 0.87796 ммоль), HBTU (0.4442 г, 1.1712 ммоль), HOBT (0.1583 г, 1.1712 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.58 мл, 3.5136 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции, добавляли н-гексан (250 мл) и метилтретбутиловый эфир (40 мл) для расслаивания реакционного раствора, надосадочный раствор отбрасывали, добавляли в нижнюю маслянистую жидкую фазу н-гексан (250 мл) и метилтретбутиловый эфир (40 мл) для дополнительного осаждения, и эти операции повторяли четыре раза, получая вязкий маслянистый продукт. Метилтретбутиловый эфир (150 мл) добавляли к маслянистому продукту для отделения твердого вещества, затем смесь фильтровали, добавляли порошкообразный силикагель (15 г) и упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 8%-10% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 37-91: 1.2 г, выход: 68%.

37-101

37-91 (1.2 г, 0.0488 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу, растворяли в дихлорметане (20 мл) и трифторуксусной кислоте (0.7248 мл, 9.76 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции добавляли в раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл×3) и растворяли в смеси растворителей, состоящей из метанола (20 мл) и дихлорметана (80 мл), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 8%-12% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 37-101: 0.69 г, выход 40%.

37-108

37-101 (0.3 г, 0.0084 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (35 мл), добавляли M-SCM-10K (0.5348 г, 0.0505 ммоль, приобретено у JenKem) и обрабатывали смесь ультразвуком для полного растворения реагентов, затем реакционный раствор перемешивали в темноте 7 дней при низкой скорости мешалки при комнатной температуре. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и добавляли н-гексан (130 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) к нижнему жидкому слою. Эти операции повторяли три раза, получая вязкий маслянистый продукт. Метилтретбутиловый эфир (100 мл) добавляли к маслянистому продукту для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл x 3), растворяли в смеси растворителей, состоящей из метанола (30 мл) и дихлорметана (120 мл), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 6%-9% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу в течение 1 часа. Полученный сухой продукт растворяли в безводном этаноле (7 мл) и дихлорметане (20 мл), добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл×2) и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 37-108: 0.3 г, выход: 52%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.49 - 8.22 (м, 49H), 8.12 - 8.03 (м, 212H), 7.91 - 7.66 (м, 48H), 7.36 - 7.01 (м, 388H), 6.97 - 6.85 (м, 16H), 6.70 - 6.01 (м, 40H), 5.34 - 5.16 (м, 64H), 4.92 - 4.26 (м, 144H), 4.09 - 4.03 (м, 152H), 3.76 - 3.54 (м, 86H), 3.51 - 3.41 (м, 3722H), 3.44 - 3.19 (м, 160H), 2.93 - 2.72 (м, 48H), 2.46 - 2.05 (м, 192H), 1.84 - 1.55 (м, 144H), 1.25 - 0.91 (м, 297H).

16. Синтез 29-226 (Соединение № 8)

Путь синтеза следующий

29-168

Fmoc-Glu-OtBu (4 г, 9.401 ммоль, приобретено у InnoChem), H-Gly-OtBu·HCl (1.7 г, 10.3415 ммоль, приобретено у InnoChem), HBTU (5.3 г, 14.1021 ммоль) и HOBT (1.9 г, 14.1021 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (70 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (7.0 мл, 42.3061 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали очищенной водой (100 мл) и этилацетатом (80 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (80 мл × 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу экстрагировали насыщенным водным раствором хлорида натрия (150 мл×3), упаривали досуха и сушили, получая сырой продукт.

29-171

29-168 (9.401 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу, растворяли в дихлорметане (10 мл) и ТФУК (7.0 мл, 94.01 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали на роторном испарителе, получая маслянистый продукт, который переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (100 мл) для доведения рН до щелочного, затем добавляли этилацетат (80 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (80 мл × 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу экстрагировали насыщенным водным раствором хлорида натрия (100 мл×3), упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая сырой продукт, выход 100%.

29-173

29-171 (9.401 ммоль), H-Glu-(OtBu)₂ (2.6789 г, 10.3415 ммоль), HBTU (5.3 г, 14.1021 ммоль) и HOBT (1.9 г, 14.1021 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (70 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (7.0 мл, 42.3061 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали очищенной водой (100 мл) и этилацетатом (80 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (80 мл × 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу экстрагировали насыщенным водным раствором хлорида натрия (150 мл×3), упаривали досуха и сушили, получая сырой продукт.

29-184

29-173 (9.401 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (10 мл), добавляли морфолин (8.2 мл, 94.01 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали очищенной водой (100 мл) и этилацетатом (80 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (80 мл×2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу экстрагировали насыщенным водным раствором хлорида натрия (150 мл×3) и упаривали, добавляли порошкообразный силикагель (20 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 4%-8% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 3.7 г, выход 74%.

29-185

Fmoc-Gly-OH (2.2 г, 7.5985 ммоль, приобретено у InnoChem), 29-184 (3.7 г, 6.9078 ммоль), HBTU (3.9 г, 10.3616 ммоль), HOBT (1.400 г, 10.3616 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (70 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (5.1 мл, 31.0849 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали очищенной водой (100 мл) и этилацетатом (80 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (80 мл ⅹ 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу экстрагировали насыщенным водным раствором хлорида натрия (150 мл×3) и упаривали, добавляли порошкообразный силикагель (25 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 3%-7% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 4.5 г, выход 77%.

29-209

29-185 (0.9281 г, 1.0354 ммоль) и 10% Pd/C катализатор (30 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (30 мл), затем реактор для проведения гидрирования герметично закрывали, заполняли водородом так что давление в реакторе для проведения гидрирования составляло 18 фунт/кв.дюйм, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор извлекали и равномерно добавляли по каплям в фильтровальную воронку, заполненную уплотненной диатомовой землей. Реакционный сосуд и диатомовую землю промывали диметилформамидом (30 мл x 3), фильтрат собирали, получая таким образом продукт реакции.

K-7

Boc-Glu-(OH)₂ (0.39 г, 1.5738 ммоль, приобретено у InnoChem), 34-17 (4.5 г, 3.3051 ммоль), HBTU (1.8 г, 4.7216 ммоль) и HOBT (0.6380 г, 4.7216 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (50 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (2.3 мл, 14.1647 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали очищенной водой (100 мл) и этилацетатом (80 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (80 мл × 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу экстрагировали насыщенным водным раствором хлорида натрия (150 мл×3), упаривали досуха и сушили, получая сырой продукт.

K-8

K-7 (1.5738 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу, растворяли в дихлорметане (10 мл) и ТФУК (1.7531 мл, 15.738 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали досуха, получая маслянистый продукт. Полученный маслянистый продукт переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (100 мл), доводя значение рН до щелочного, затем добавляли этилацетат (80 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли, Водную фазу экстрагировали этилацетатом (80 мл × 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу экстрагировали насыщенным водным раствором хлорида натрия (100 мл×3), и упаривали, добавляли порошкообразный силикагель (20 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 3%-8% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 3.2 г, выход 77%.

29-210

K-8 (3.0 г, 1.1389 ммоль), 29-209 (1.0354 ммоль), HBTU (0.5891 г, 1.5531 ммоль) и HOBT (0.2099 г, 1.5531 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (50 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.7701 мл, 4.6595 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Затем добавляли метилтретбутиловый эфир (80 мл) и небольшое количество н-гексана (10 мл), полученный раствор встряхивали, и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Выпадал твердый осадок из реакционного раствора, и его отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 3%-8% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 2.7 г, выход 79%.

K-10

24-36 (4 г, 15.1924 ммоль), H-Glu-(OBn)₂ (6.9 г, 13.8112 ммоль, приобретено у InnoChem), HBTU (7.8567 г, 20.7169 ммоль), HOBT (2.8 г, 20.7169 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (70 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (10.2723 мл, 62.1506 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (100 мл) и этилацетатом (80 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (80 мл × 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу экстрагировали насыщенным водным раствором хлорида натрия (150 мл×3), и упаривали, добавляли порошкообразный силикагель (20 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 1%-3% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 8.7 г, выход 62%.

K-11

K-10 (2.7 г, 4.7469 ммоль) и 10% Pd/C катализатор (30 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (30 мл), затем реактор для проведения гидрирования герметично закрывали, заполняли водородом так что давление в реакторе для проведения гидрирования составляло 18 фунт/кв.дюйм, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор извлекали и равномерно добавляли по каплям в фильтровальную воронку, заполненную уплотненной диатомовой землей. Реакционный сосуд и диатомовую землю промывали диметилформамидом (30 мл x 3), и фильтрат собирали, получая таким образом продукт реакции.

K-12

K-11 (2.1484 ммоль), G-SN38-TBDPS (синтезирован по методике, описанной для синтеза 25-200, 3.0 г, 4.3614 ммоль), HBTU (2.4443 г, 6.4453 ммоль) и HOBT (0.8710 г, 6.4453 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (50 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (3.1959 мл, 19.3360 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (80 мл), колбу ставили в холодильник на 30 минут, твердый осадок отделяли фильтрованием при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (30 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и сушили, получая сырой продукт.

K-13

K-12 (2.1484 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу, растворяли в дихлорметане (5 мл) и ТФУК (2.3932 мл, 32.226 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали досуха, получая маслянистый продукт, добавляли к маслянистому продукту метилтретбутиловый эфир (60 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (30 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (20 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 3%-8% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 2.7 г, выход 72%.

K-14

K-11 (2.5985 ммоль), 42-18 (6.0 г, 6.2363 ммоль), HBTU (2.9563 г, 7.7953 ммоль) и HOBT (1.0534 г, 7.7953 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (50 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (3.8653 мл, 23.360 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (80 мл), колбу ставили в холодильник на 30 минут, твердый осадок отделяли фильтрованием при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (30 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и сушили, получая сырой продукт.

K-15

K-14 (2.5985 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу, растворяли в дихлорметане (5 мл) и ТФУК (2.8946 мл, 38.9775 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали досуха, получая маслянистый продукт, добавляли к маслянистому продукту метилтретбутиловый эфир (60 мл) для отделения твердого вещества, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (30 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (20 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 3%-8% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 3.3 г, выход 61%.

29-212

29-210 (0.6579 г, 0.1972 ммоль) и 10% Pd/C катализатор (30 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (30 мл), затем реактор для проведения гидрирования герметично закрывали, заполняли водородом так что давление в реакторе для проведения гидрирования составляло 18 фунт/кв.дюйм, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор извлекали и равномерно добавляли по каплям в фильтровальную воронку, заполненную уплотненной диатомовой землей. Реакционный сосуд и диатомовую землю промывали диметилформамидом (30 мл x 3) и собирали фильтрат, получая таким образом продукт реакции.

29-213

K-15 (3.3 г, 1.6566 ммоль), 29-212 (0.5391 г, 0.1972 ммоль), HBTU (0.8975 г, 2.3667 ммоль) и HOBT (0.3198 г, 2.3667 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (50 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.1735 мл, 7.1 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при 0°C в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (80 мл), колбу ставили в холодильник на 30 минут, твердый осадок отделяли фильтрованием при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (30 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и сушили, получая сырой продукт.

29-214

29-213 (0.1972 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу, растворяли в дихлорметане (5 мл) и ТФУК (0.22 мл, 2.958 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали досуха, получая маслянистый продукт, добавляли к маслянистому продукту метилтретбутиловый эфир (60 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (30 мл × 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (20 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 3%-9% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 2.7 г, выход 69%.

29-216

29-214 (2.7 г, 0.1405 ммоль), K-13 (0.5117 г, 0.2951 ммоль), HBTU (0.1599 г, 0.4215 ммоль), HOBT (0.057 г, 0.4215 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА, и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем добавляли DIEA (0.2090 г, 1.2645 ммоль), и полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли метилтретбутиловый эфир (80 мл), колбу ставили в холодильник на 30 минут, твердый осадок отделяли фильтрованием при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (30 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и сушили, получая сырой продукт.

29-220

29-216 (0.1405 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (8 мл), добавляли морфолин (0.3378 мл, 3.8778 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Затем добавляли метилтретбутиловый эфир (80 мл) и небольшое количество н-гексана (10 мл), полученный раствор встряхивали, и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Из реакционного раствора выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали, растворяли в смеси метанол/дихлорметан (1: 4) (10 мл), и полученный раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром. Эти операции повторяли три раза, получая сырой продукт.

29-221

M-SCM-5K (0.8773 г, 0.1667 ммоль, приобретено у JenKem) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (20 мл). Затем добавляли DIEA (0.3443 мл, 2.0833 ммоль), полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 10 минут, после этого медленно добавляли из капельной воронки диметилформамидный (20 мл) раствор 29-220 (1.0 г, 0.0416 ммоль) в течение примерно 2 часов. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 15 минут, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали в темноте одну неделю при низкой скорости мешалки. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (80 мл), колбу ставили в холодильник на 30 минут, твердый осадок отделяли фильтрованием при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (30 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (10 г) и упаривали смесь досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 4%-15% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 1.6 г, выход 58%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 9.27 - 9.02 (м, 62H), 8.36-7.95 (м, 171H), 7.77-7.51 (м, 115H), 7.34 - 7.12 (м, 157H), 6.69-6.65 (м, 13H), 4.57-4.50 (м, 34H), 4.31-4.17 (м, 71H), 3.91-3.80 (м, 207H), 3.55-3.45 (м, 1430H), 3.26-3.20 (м, 12H), 3.12-3.05 (м, 71H), 2.93-2.88 (м, 12H), 2.81-2.65 (м, 50H), 2.25-2.19 (м, 61H), 1.89 - 1.19 (м, 298H), 0.85-0.79 (м, 96H).

29-226

29-221 в 250-миллилитровой колбе растворяли сначала с добавлениемТГФ (10 мл) и затем разбавленной соляной кислоты (10 мл, 0.05 моль/л), добавляли TBAF (67 мг, 0.256 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 3 часа. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали, получая маслянистый продукт, затем добавляли безводный этанол к маслянистому продукту для удаления воды, и полученный раствор упаривали досуха. Эти операции повторяли три раза и получали твердый продукт. Полученный твердый продукт растворяли в ДМФА (20 мл), затем осаждали изопропанолом (30 мл). Эти операции повторяли три раза. Полученное твердое вещество растворяли в дихлорметане и небольшом количестве безводного этанола, и затем осаждали метилтретбутиловым эфиром. Эти операции повторяли три раза. Осадок сушили, получая таким образом продукт 1.1 г, выход 72%

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 9.06-9.00 (м, 40H), 8.29-8.22 (м, 50H), 8.15 - 7.95 (м, 96H), 7.73 - 7.47 (м, 121H), 7.29-7.08 (м, 170H), 4.59-4.11 (м, 99H), 3.95 - 3.73 (м, 240H), 3.53-3.48 (м, 1434.3H), 3.24 - 3.00 (м, 110H), 2.92-2.87 (м, 9H), 2.80-5.65 (м, 45H), 2.14-2.08 (м, 45H), 1.91 - 1.28 (м, 244H), 0.85-0.81 (м, 96H)

17. Синтез 27-253 (Соединение № 9)

Путь синтеза следующий

27-181

29-168 (3.33 г, 5.8079 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (20 мл), обрабатывали ультразвуком для полного растворения соединения, добавляли морфолин (5.06 мл, 58.079 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл) и этилацетатом (200 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (200 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали при пониженном давлении и сушили, получая таким образом продукт 4.2 г, выход больше количественного.

27-184

27-181 (2.03 г, 5.8079 ммоль), Fmoc-Gly-OH (1.72 г, 5.8079 ммоль, приобретено у InnoChem), HBTU (3.3 г, 8.7119 ммоль) и HOBT (1.13 г, 8.7119 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (100 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (4.32 мл, 26.1356 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл) и этилацетатом (200 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (200 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали при пониженном давлении, добавляли порошкообразный силикагель (60 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с использованием элюента (2%-3% метанол: 97%-98% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали при пониженном давлении и сушили, получая таким образом продукт 2.68 г, выход: 73.42%.

27-201

27-184 (2.68 г, 4.9669 ммоль) и 10% Pd/C катализатор (100 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (50 мл), затем реактор для проведения гидрирования герметично закрывали, подавали водород под давлением 18 фунт/кв.дюйм, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции согласно данным ТСХ-мониторинга, реакционный раствор собирали и равномерно добавляли по каплям в делительную воронку с песчаным ядром, заполненную спрессованной диатомовой землей, затем проводили фильтрование при отсасывании. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (30 мл × 3), получая таким образом раствор продукта реакции

27-202

27-201 (1.57 г, 2.9123 ммоль), 34-17 (3.34 г, 2.6475 ммоль), HBTU (1.50 г, 3.9713 ммоль) и HOBT (0.54 г, 3.9713 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (100 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.97 мл, 11.9138 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор насыщенный водный раствор хлорида натрия (200 мл) и этилацетат (200 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (200 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали при пониженном давлении, добавляли порошкообразный силикагель (60 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с использованием элюента (3 % метанол: 97 % дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали при пониженном давлении, и сушили, получая продукт 3.58 г, выход: 75.84%.

27-204

27-202 (3.58 г, 1.9456 ммоль) и 10% Pd/C катализатор (100 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (50 мл), затем реактор для проведения гидрирования герметично закрывали, подавали водород под давлением 18 фунт/кв.дюйм, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции согласно данным ТСХ-мониторинга, реакционный раствор собирали и равномерно добавляли по каплям в делительную воронку с песчаным ядром, заполненную спрессованной диатомовой землей, и проводили фильтрование при отсасывании. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (30 мл × 3), получая таким образом раствор продукта реакции

M-6

K-11 (0.65 г, 1.6590 ммоль), 30-33 (3 г, 3.6498 ммоль), HBTU (0.94 г, 2.4885 ммоль) и HOBT (0.34 г, 2.4885 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (100 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.23 мл, 7.4655 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции, добавляли в реакционный раствор н-гексан (50 мл) и метилтретбутиловый эфир (400 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и затем добавляли в полученный раствор н-гексан и метилтретбутиловый эфир для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Твердый продукт отделяли фильтрованием при отсасывании и сушили, получая таким образом продукт 5.9 г, выход больше количественного.

M-7

M-6 (3.32 г, 1.6590 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (50 мл), добавляли ТФУК (2.35 мл, 16.590 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, После окончания реакции раствор упаривали при пониженном давлении, добавляли в полученный раствор н-гексан (50 мл) и метилтретбутиловый эфир (400 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и затем добавляли в полученный раствор н-гексан и метилтретбутиловый эфир для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Твердый продукт отделяли фильтрованием при отсасывании и растворяли в дихлорметане и метаноле. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 7% метанол/1 % водного аммиака/ дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 2.5 г, выход 79.36 %.

27-212

M-7 (2.5 г, 1.3244 ммоль), 27-204 (0.43 г, 0.3010 ммоль), HBTU (0.69 г, 1.806 ммоль) и HOBT (0.24 г, 1.806 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (100 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.90 мл, 5.418 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (50 мл) и метилтретбутиловый эфир (400 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и затем добавляли в полученный раствор н-гексан и метилтретбутиловый эфир для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Твердый продукт отделяли фильтрованием при отсасывании и сушили, получая таким образом продукт 4.5 г, выход больше количественного.

27-234

27-212 (2.69 г, 0.3010 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (50 мл), добавляли ТФУК (0.22 мл, 3.010 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, После окончания реакции результирующий раствор упаривали при пониженном давлении, добавляли в полученный раствор н-гексан (50 мл) и метилтретбутиловый эфир (400 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, затем добавляли в полученный раствор н-гексан и метилтретбутиловый эфир для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Твердый продукт отделяли фильтрованием при отсасывании и растворяли в дихлорметане и метаноле. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 8% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая продукт 1.9 г, выход 71.76%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.17-10.13 (м, 8H), 8.99-8.91 (м, 8H), 8.34 - 8.14 (м, 16H), 8.14 - 7.94 (м, 24H), 7.88- 7.67 (м, 30H), 7.45 - 7.05 (м, 49H), 5.83-5.77 (м, 10H), 5.35-5.28 (м, 5H), 4.56 -3.98 (м, 51H), 3.74 - 3.49 (м, 60H), 3.15 - 2.99 (м, 48H), 2.81 - 2.66 (м, 19H), 2.41 - 2.03 (м, 68H), 1.89-1.85 (м, 50H), 1.57-1.51 (м, 43H), 1.34- 1.23 (м, 18H), 0.98 - 0.77 (м, 72H).

27-214

Паклитаксел (также именуется PTX, 0.5 г, 0.5855 ммоль), TBDMS-Cl (приобретено у Innochem, 0.53 г, 3.5310 ммоль), имидазол (0.2 г, 2.9425 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в безводном ДМФА (20 мл), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор разводили дихлорметаном (200 мл), промывали поочередно насыщенным раствором NH₄Cl (50 мл), деионизованной водой (50 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (100 мл), и полученную органическую фазу сушили безводным сульфатом натрия. Проводили загрузку образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью петролейный эфир:этилацетат = 1: 1. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт (0.35 г, выход 62.5%), в котором гидрокси-группа в положении 2' паклитаксела защищена группой TBDMS.

27-235

Fmoc-Gly-OH (0.44 г, 1.4476 ммоль), EDCI (0.28 г, 1.4476 ммоль), DMAP (0.02 г, 0.1810 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в безводном дихлорметане (50 мл) и безводном ДМФА (25 мл), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 15 минут. Затем добавляли 27-214 (0.35 г, 0.3619 ммоль), и полученный раствор оставляли на ночь для прохождения реакции при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор разводили дихлорметаном (200 мл), промывали поочередно насыщенным раствором NH₄Cl (100 мл), деионизованной водой (50 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (100 мл), и полученную органическую фазу сушили безводным сульфатом натрия. Проводили загрузку образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 3% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт (0.31 г, выход 68.89%), в котором прошла этерификация по гидрокси-группе в положении 7.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.83 (м, 1H), 7.99 (м, 2H), 7.92 - 7.81 (м, 4H), 7.76 - 7.59 (м, 6H), 7.57 - 7.27 (м, 12H), 7.21 (м, 1H), 5.99 (с, 1H), 5.86 (м, 1H), 5.56 - 5.40 (м, 3H), 5.01 (м, 1H), 4.80 (с, 2H), 4.26 (с, 3H), 3.66 (м, 3H), 2.45 (с, 3H), 1.99 (с, 6H), 1.65 (с, 5H), 1.55 (с, 3H), 1.00 (м, 6H), 0.80 (с, 9H), 0.05 (м, 6H).

27-239

27-235 (0.31 г, 0.2487 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, добавляли пиперидин (0.25 мл, 2.487 ммоль) и ДМФА (5 мл), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа. После окончания реакции результирующий раствор упаривали при пониженном давлении для удаления пиперидина, получая раствор продукта реакции в ДМФА.

27-240

27-234 (1.9 г, 0.2135 ммоль), 27-239 (0.2487 ммоль), HBTU (0.12 г, 0.3203 ммоль) и HOBT (0.04 г, 0.3203 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (30 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.17 мл, 0.9608 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции, добавляли в реакционный раствор н-гексан (50 мл) и метилтретбутиловый эфир (400 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и затем добавляли в полученный раствор н-гексан и метилтретбутиловый эфир для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Твердый продукт отделяли фильтрованием при отсасывании и растворяли в небольшом количестве смеси метанола и дихлорметана, затем добавляли в полученный раствор н-гексан (50 мл) и метилтретбутиловый эфир (400 мл) для осаждения, проводили фильтрование при отсасывании. Процесс растворения и осаждения повторяли три раза, получая таким образом продукт 1.6 г, выход 75.82 %.

27-243

27-240 (1.6 г, 0.1615 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (10 мл), обрабатывали ультразвуком для полного растворения соединения, добавляли морфолин (0.14 мл, 1.615 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (25 мл) и метилтретбутиловый эфир (200 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и затем добавляли в полученный раствор н-гексан и метилтретбутиловый эфир для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Твердый продукт отделяли фильтрованием при отсасывании и растворяли в дихлорметане и метаноле. Проводили загрузку образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 7% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 1.2 г, выход 78.43 %.

27-247

27-243 (1.2 г, 0.1268 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли M-SCM-5K (1.45 г, 0.2790 ммоль, приобретено у JenKem), обрабатывали ультразвуком для растворения соединения, реакционный раствор перемешивали в темноте одну неделю при низкой скорости мешалки при комнатной температуре. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (25 мл) и метилтретбутиловый эфир (200 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и затем добавляли в полученный раствор н-гексан и метилтретбутиловый эфир для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Твердый продукт отделяли фильтрованием при отсасывании и растворяли в дихлорметане и метаноле. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 9% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 1.9 г, выход 75.70 %.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.16-10.12 (м, 8H), 9.02-8.98 (м, 11H), 8.08-7.98 (м, 55H), 7.72-7.64 (м, 14H), 7.56 - 7.09 (м, 49H), 7.05-6.98 (м, 2H), 6.69-6.65 (м, 3H), 5.80- 5.37 (м, 21H), 5.14 - 4.75 (м, 20H), 4.56-4.30 (м, 35H), 4.03-4.38 (м, 45H), 3.51 (с, 1120H), 3.44 - 3.04 (м, 65H), 2.77- 2.68 (м, 13H), 2.41 - 2.04 (м, 55H), 2.02 - 1.69 (м, 39H), 1.68 - 1.26 (м, 66H), 1.18 - 1.12 (м, 5H), 1.06 - 0.69 (м, 45H), 0.09-0.06 (м, 3H).

27-253

27-247 (1.9 г, 0.0958 ммоль), TBAF (0.06 г, 0.1916 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ТГФ (20 мл), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 1.5 часа. После окончания реакции результирующий раствор упаривали при пониженном давлении, получая твердый продукт, растворяли его в ДМФА (5 мл), добавляли в полученный раствор изопропанол для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Отделяли твердый продукт фильтрованием. Полученное твердое вещество растворяли в дихлорметане (10 мл), и раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром. Эти операции повторяли три раза. Полученный твердый продукт сушили, получая продукт 0.75 г, выход 62.5 %.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ10.16-10.10 (м, 8H), 9.02-8.97 (м, 11H), 8.55 - 7.81 (м, 58H), 7.70-7.62 (м, 9H), 7.21-6.99 (м, 53H), 6.71-6.66 (м, 5H), 5.88-5.84 (м, 10H), 5.37- 4.96 (м, 10H), 4.59-4.28 (м, 27H), 4.14 - 3.81 (м, 32H), 3.57-3.48 (с, 1101H), 3.19-3.15 (м, 61H), 2.81-2.76 (м, 7H), 2.44- 2.27 (с, 68H), 1.82 - 1.43 (м, 89H), 1.36-1.32 (м, 36H), 0.90 - 0.79 (м, 40H).

18. Синтез 49-5(Соединение № 11)

Путь синтеза следующий

27-216

27-202 (3 г, 1.6826 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (50 мл), добавляли ТФУК (1.25 мл, 16.826 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, После окончания реакции результирующий раствор упаривали при пониженном давлении, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (200 мл) и этилацетат (200 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (200 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали при пониженном давлении и сушили, получая таким образом продукт 4.3 г, выход больше количественного.

27-218

27-216 (2.90 г, 1.6826 ммоль), Gly-OtBu (0.24 г, 1.8509 ммоль, приобретено у InnoChem), HBTU (0.96 г, 2.5239 ммоль) и HOBT (0.34 г, 2.5239 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (100 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.25 мл, 7.5717 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор насыщенный водный раствор хлорида натрия (200 мл) и этилацетат (200 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (200 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали при пониженном давлении и сушили в вакууме, получая таким образом продукт 6.6 г, выход больше количественного.

27-221

27-218 (2 г, 1.0867 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (50 мл), добавляли ТФУК (0.81 мл, 10.867 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, После окончания реакции результирующий раствор упаривали при пониженном давлении, добавляли в реакционный раствор насыщенный водный раствор хлорида натрия (200 мл) и этилацетат (200 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (200 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали при пониженном давлении, и сушили, получая таким образом продукт 4.3 г, выход больше количественного.

27-224

27-221 (1.94 г, 1.0867 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (20 мл) при обработке ультразвуком, добавляли Boc-NHNH₂ (0.16 г, 1.1954 ммоль), DCC (0.67 г, 3.2601 ммоль) и DMAP (0.026 г, 0.2173 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор насыщенный водный раствор хлорида натрия (200 мл) и этилацетат (200 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (200 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали при пониженном давлении, проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 3% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 1.62 г, выход 78.64%.

27-259

27-224 (1.62 г, 0.8535 ммоль), и 10% Pd/C катализатор (100 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (30 мл), затем реактор для проведения гидрирования герметично закрывали, подавали водород под давлением 18 фунт/кв.дюйм, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции согласно данным ТСХ-мониторинга, реакционный раствор собирали и равномерно добавляли по каплям в делительную воронку с песчаным ядром, заполненную спрессованной диатомовой землей, и проводили фильтрование при отсасывании. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (30 мл × 3), получая таким образом раствор продукта реакции

27-205

K-11 (0.69 г, 1.4272 ммоль), 14-128 (3 г, 3.1398 ммоль), HBTU (1.62 г, 4.2816 ммоль) и HOBT (0.58 г, 4.2816 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (50 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (2.12 мл, 12.8448 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 2 часов, температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (50 мл) и метилтретбутиловый эфир (400 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, затем добавляли в полученный раствор н-гексан и метилтретбутиловый эфир для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Твердый продукт отделяли фильтрованием при отсасывании и сушили, получая таким образом продукт 5.1 г.

27-231

27-205 (3.03 г, 1.4272 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (50 мл), добавляли ТФУК (1.06 мл, 14.272 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, После окончания реакции результирующий раствор упаривали при пониженном давлении, добавляли в полученный раствор н-гексан (50 мл) и метилтретбутиловый эфир (400 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли в полученный раствор н-гексан и метилтретбутиловый эфир для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Твердый продукт отделяли фильтрованием при отсасывании и растворяли в дихлорметане и метаноле. Проводили загрузку образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 8% метанол/1% водного аммиака/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 2 г, выход 69.20%.

27-260

27-259 (0.35 г, 0.2248 ммоль), 27-231 (2 г, 0.9891 ммоль), HBTU (0.51 г, 1.3488 ммоль) и HOBT (0.18 г, 1.3488 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (100 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.67 мл, 4.0464 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 2 часов, температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (50 мл) и метилтретбутиловый эфир (400 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и добавляли в полученный раствор н-гексан и метилтретбутиловый эфир для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Полученное твердое вещество растворяли в дихлорметане и метаноле, проводили загрузку образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 6% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 1.3 г, выход 60.46%.

27-265

27-260 (1.3 г, 0.1361 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (10 мл), обрабатывали ультразвуком для полного растворения соединения, добавляли морфолин (0.12 мл, 1.361 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (25 мл) и метилтретбутиловый эфир (200 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и добавляли в полученный раствор н-гексан и метилтретбутиловый эфир для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Твердый продукт отделяли фильтрованием при отсасывании и растворяли в дихлорметане и метаноле. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 6% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 0.91 г, выход 73.39%.

49-1

49-265 (0.91 г, 0.0999 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли M-SCM-5K (1.14 г, 0.2198 ммоль, приобретено у JenKem), обрабатывали ультразвуком для растворения соединения, и полученный раствор оставляли в темноте на одну неделю при медленном перемешивании при комнатной температуре. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (25 мл) и метилтретбутиловый эфир (200 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и затем добавляли в полученный раствор н-гексан и метилтретбутиловый эфир для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Твердый продукт отделяли фильтрованием при отсасывании и растворяли в дихлорметане и метаноле. Проводили загрузку образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 9% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 1.23 г, выход 63.07%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 9.85-9.79 (м, 6H), 8.77-8.71 (м, 7H), 8.55 - 7.91 (м, 63H), 7.89 - 7.63 (м, 23H), 7.47 - 6.98 (м, 93H), 6.69 - 6.54 (с, 7H), 5.27-5.21 (м, 14H), 4.72 - 4.57 (м, 20H), 4.41 - 4.12 (м, 32H), 3.85 - 3.79 (м, 43H), 3.55-3.48 (м, 1115H), 3.27 - 3.12 (м, 19H), 3.09 - 2.95 (м, 32H), 2.90 - 2.60 (м, 32H), 2.14 - 1.70 (м, 31H), 1.54 - 1.14 (м, 95H), 0.86-0.79 (м, 51H).

49-3

49-1 (1.23 г, 0.0632 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли ТФУК (0.094 мл, 1.264 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (25 мл) и метилтретбутиловый эфир (200 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и затем добавляли в полученный раствор н-гексан и метилтретбутиловый эфир для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Твердый продукт отделяли фильтрованием при отсасывании и растворяли в дихлорметане и метаноле. Проводили загрузку образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 9% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 0.98 г, выход 80.33%.

49-5

49-3 (0.98 г, 0.0506 ммоль) помещали в 500-миллилитровую высушенную круглодонную колбу, растворяли в безводном метаноле (10 мл), добавляли ТФУК (0.018 мл, 0.253 ммоль) и адриамицин (также именуется DOX, 0.028 г, 0.0506 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (25 мл) и метилтретбутиловый эфир (200 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и затем добавляли в полученный раствор н-гексан и метилтретбутиловый эфир для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Твердый продукт отделяли фильтрованием при отсасывании и растворяли в дихлорметане и метаноле. Проводили загрузку образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 9% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили. Полученный сухой продукт растворяли в безводном спирте (5 мл) и дихлорметане (1 мл), и полученный раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (40 мл). Эти операции повторяли три раза. Фильтровали смесь, и осадок на фильтре сушили, получая таким образом продукт (0.65 г, выход 65%), в котором наблюдалось образование гидразоновой связи по карбонилу в положении 13 адриамицина.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.28 (с, 5H), 8.98-8.94 (м, 8H), 8.58-8.51 (м, 8H), 8.34-7.92 (м, 79H), 7.49-7.45 (м, 10H), 7.46-7.10 (м, 82H), 6.68 (с, 5H), 6.54 (с, 3H), 5.26 (с, 20H), 4.80-4.71 (м, 16H), 4.56 (с, 10H), 4.41-4.06 (м, 42H), 3.95-3.74 (м, 45H), 3.52-3.50 (м, 1289H), 3.11-2.97 (м, 57H), 2.78-2.74 (м, 26H), 2.11 (с, 26H), 1.60-1.52 (м, 40H), 1.00-0.61 (м, 72H).

19. Синтез 39-42 (Соединение № 19)

Путь синтеза следующий

39-40

GFLG-LPT (1.0 г, 1.04 ммоль, синтезирован по методике, описанной для синтеза 14-128), 39-51 (0.08 ммоль), HBTU (0.54 г, 1.44 ммоль), HOBT (0.19 г, 1.44 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу, растворяли в ДМФА (30 мл), проводили обработку ультразвуком для полного растворения реагентов, и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.71 мл, 4.32 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали при пониженной температуре 2 часа, затем при комнатной температуре до завершения реакции. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (250 мл), проводили обработку ультразвуком в течение 5 минут, надосадочный раствор отбрасывали, добавляли к нижнему жидкому слою этилацетат (20 мл), проводили обработку ультразвуком в течение 3 минут, добавляли метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (100 мл) для отделения твердого вещества, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре растворяли в смеси 20% метанол/дихлорметан (20 мл), добавляли порошкообразный силикагель (10 г) и упаривали смесь, переносили сухой остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 3% метанол/дихлорметан, и затем смесью 10% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 0.2 г.

39-41

39-40 (0.2 г) растворяли в дихлорметане (15 мл), добавляли ТФУК (0.033 мл, 0.444 ммоль) и обрабатывали ультразвуком для полного растворения соединения. Закрывали колбу стеклянной пробкой и перемешивали полученный раствор при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор упаривали для удаления дихлорметана, добавляли этилацетат (20 мл), проводили обработку ультразвуком в течение 2 минут и затем добавляли метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (70 мл) для осаждения твердого вещества. Проводили фильтрование при отсасывании, и осадок на фильтре сушили в вакууме, получая таким образом продукт 0.2 г.

39-42

39-41 (0.6 г) растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли M-SCM-5K (0.9378 г), обрабатывали смесь ультразвуком для полного растворения реагентов, и полученный раствор перемешивали в темноте при низкой скорости мешалки. После окончания реакции, добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (70 мл) для отделения твердого вещества, проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре растворяли в смеси 20% метанол/дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель (10 г), упаривали смесь, переносили сухой остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 1% водного аммиака/4% метанол/дихлорметан, и затем смесью 1% водного аммиака / 8% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и растворяли в безводном этаноле (3 мл), полученный раствор обрабатывали ультразвуком, получая гомогенную фазу. Затем добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (50 мл), и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре затем растворяли в безводном этаноле (3 мл) и осаждали метилтретбутиловым эфиром и н-гексаном. Процесс растворения и осаждения повторяли три раза. Проводили фильтрование при отсасывании и сушили осадок на фильтре, получая таким образом продукт 0.15 г.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.06 - 9.84 (м, 3H), 8.84 - 8.36 (м, 4H), 8.29- 7.65 (м, 85H), 7.57 - 6.79 (м, 187H), 6.73-6.51 (м, 15H), 4.83 - 4.07 (м, 86H), 3.50 - 3.49 (м, 512H), 3.08-2.99 (м, 81H), 1.70 - 1.17 (м, 125H), 0.90-0.80 (м, 72H).

20. Синтез 41-32 (Соединение № 20)

Путь синтеза следующий

41-29

Реагенты GFLG-LPT (1.0 г, 1.48 ммоль, синтезирован по методике, описанной для синтеза 14-128), 41-33 (0.077 ммоль), HBTU (0.35 г, 0.924 ммоль), HOBT (0.1 г, 0.924 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.45 мл, 2.772 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали при пониженной температуре до завершения реакции. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения, получая порошкообразный продукт. Переносили полученное сухое вещество на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 1% водного аммиака / 2% метанол/дихлорметан, и затем смесью 1% водного аммиака / 10% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 0.6 г.

41-31

41-29 (0.6 г) растворяли в дихлорметане (5 мл) и ТФУК (0.17 мл, 2.31 ммоль) при обработке ультразвуком, и полученный раствор перемешивали. После окончания реакции результирующий раствор упаривали, добавляли метилтретбутиловый эфир (100 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения, получая порошок. Полученный порошок сушили в вакууме, получая таким образом продукт 0.6 г.

41-32

Реагенты 41-31 (0.6 г, 0.044 ммоль) и M-SCM-5K (1.6 г, 0.30 ммоль) растворяли в ДМФА (20 мл), и реакционный раствор перемешивали при низкой скорости мешалки в темноте. После окончания реакции результирующий раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (50 мл) и н-гексаном (100 мл), и проводили фильтрование при отсасывании. Остаток переносили на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя в градиенте от дихлорметана до смеси 1% водного аммиака / 8% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт затем упаривали досуха и растворяли в безводном этаноле (10 мл), полученный раствор обрабатывали ультразвуком, получая гомогенную фазу, и затем добавляли н-гексан (50 мл) для осаждения. Эту операцию осаждения повторяли три раза. Осадок сушили в вакууме, получая таким образом продукт 0.4 г.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 9.91 - 9.83 (м, 8H), 8.80 - 8.72 (м, 10H), 8.58 - 8.50 (м, 10H), 8.27 - 7.96 (м, 82H), 7.63 -7.49 (м, 128H), 7.24 - 7.14 (м, 51H), 6.71 - 6.50 (м, 7H), 5.29 - 5.21 (м, 22H), 4.52 - 4.40 (м, 82H), 4.04 -3.98 (м, 54H), 3.51-3.50 (м, 600H), 3.17 - 3.14 (м, 83H), 3.03 - 2.97 (м, 122H), 2.88 - 2.86 (м, 15H), 0.91 - 0.70 (м, 72H).

21. Синтез 33-207 (Соединение № 21)

Путь синтеза следующий

33-194

GFLG-PCB (синтезирован по методике, описанной для синтеза 30-33, 2 г, 2.43 ммоль), HBTU (1.15 г, 3.03 ммоль), HOBT (0.41 г, 3.03 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в диметилформамидном растворе 33-190, проводили обработку ультразвуком для полного растворения реагентов, и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.5 мл, 9.108 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали при пониженной температуре до завершения реакции. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) и н-гексан (150 мл), проводили обработку ультразвуком в течение 5 минут, полученный раствор ставили в холодильник на 20 минут, надосадочный раствор отбрасывали, добавляли этилацетат (20 мл) к нижнему жидкому слою, проводили обработку ультразвуком в течение 2 минут, добавляли н-гексан (100 мл) и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре сушили в вакууме, получая таким образом продукт 1.4 г.

33-196

33-194 (1.4 г, 0.32 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (70 мл), добавляли морфолин (0.84 мл, 9.6 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (100 мл), и проводили обработку ультразвуком в течение 5 минут для отделения твердого вещества. Проводили фильтрование при отсасывании, и осадок на фильтре сушили в вакууме, получая таким образом продукт 1.3 г.

33-199

33-196 (1.3 г, 0.316 ммоль), HBTU (0.153 г, 0.406 ммоль), HOBT (0.0541 г, 0.406 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в диметилформамидном растворе 45-12 (19 мл, 0.0452 ммоль), добавляли ДМСО (80 мл) и проводили обработку ультразвуком для полного растворения реагентов, затем реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.2 мл, 1.22 ммоль) по каплям, и через 1 час раствор нагревали и перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор деионизованную воду (100 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре сушили в вакууме, получая таким образом продукт 1.3 г.

33-204

33-199 (1.3 г, 0.316 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли ТФУК (0.7 мл, 9.48 ммоль) и обрабатывали ультразвуком для полного растворения соединения. Закрывали колбу стеклянной пробкой, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции напрямую добавляли метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (100 мл) в реакционный раствор, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре сушили в вакууме, получая таким образом продукт 1.2 г.

33-207

Реагенты 33-199 (1.20 г, 0.048 ммоль), M-NH₂HCL-5K (2.0 г, 0.38 ммоль), HBTU (0.21 г, 0.576 ммоль), HOBT (0.077 г, 0.576 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (75 мл) при обработке ультразвуком, и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.0073 мл, 0.0446 ммоль) по каплям, полученный раствор перемешивали в течение 1 часа и затем при комнатной температуре в темноте при низкой скорости мешалки. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (200 мл) для осаждения и проводили фильтрование при отсасывании, получая порошкообразный продукт. Полученный порошкообразный продукт растворяли в смеси растворителей 20% метанол/дихлорметан и добавляли силикагель (6 г). Проводили упаривание, загрузку сухого остатка на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием от смеси 6% метанол/дихлорметан до смеси 1% водного аммиака / 10% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт собирали и упаривали досуха, полученное твердое вещество растворяли в дихлорметане (5 мл) при обработке ультразвуком, добавляли метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (50 мл), и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре растворяли в дихлорметане, и полученный раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром и н-гексаном. Процесс растворения и осаждения повторяли три раза, получая таким образом продукт 0.5 г.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.58 - 10.39 (м, 14H), 9.05 -8.89 (м, 13H), 8.23 - 7.66 (м, 169H), 7.26 - 6.91 (м, 165H), 3.51 - 3.50 (м, 1957H), 3.26 - 3.22 (м, 148H), 2.97 - 2.83 (м, 232H), 2.34 - 2.28 (м, 86H), 1.94- 1.45 (м, 282H), 0.94-0.75 (м, 144H).

22. Синтез 29-160 (Соединение № 22)

Путь синтеза следующий

29-150

Реагенты 30-33 (3.5 г, 4.2581 ммоль), 29-149 (синтезирован по методике, описанной для синтеза W3, 0.3275 ммоль), HBTU (2.2359 г, 5.8958 ммоль), HOBT (0.7967 г, 5.8958 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (50 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (2.9 мл, 17.6873 ммоль) по каплям, полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл), полученный раствор ставили в холодильник на 30 минут, после этого твердый осадок отделяли фильтрованием при отсасывании. Осадок на фильтре собирали, и сушили, получая сырой продукт.

29-154

29-150 (0.3275 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл) и ТФУК (0.3648 мл) при обработке ультразвуком, и полученный раствор перемешивали. После окончания реакции результирующий раствор упаривали досуха, получая маслянистый продукт. Метилтретбутиловый эфир (100 мл) добавляли к маслянистому продукту для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Переносили полученное сухое вещество на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 1% водного аммиака/4% метанол/дихлорметан, и затем смесью 1% водного аммиака/10% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 1.0 г, выход 30%.

29-160

Реагенты 29-154 (0.4 г) и M-SCM-10K (0.75 г, 0.07 ммоль) растворяли в ДМФА (20 мл), и полученный раствор перемешивали при медленной скорости мешалки в темноте в течение недели. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл), полученный раствор ставили в холодильник на 30 минут, и твердый осадок отделяли фильтрованием при отсасывании. Осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку вещества в сухом виде на колонку и колоночную хроматографию при элюировании в градиенте от смеси 1% водного аммиака/3% метанол/дихлорметан до смеси 1% водного аммиака/8% метанол/дихлорметан. Элюированный продукт упаривали досуха и растворяли в безводном этаноле (8 мл) и небольшом количестве дихлорметана, и полученный раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (50 мл). Эту операцию осаждения повторяли три раза. Осадок сушили в вакууме, получая таким образом продукт 0.6 г. Выход 55%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.18-10.09 (м, 8H), 9.12-8.90 (м, 17H), 8.25 - 7.82 (м, 72H), 7.503-7.44 (м, 13H), 7.19-7.15 (м, 41H), 7.05 - 6.97 (м, 11H), 6.90-6.81 (м, 7H), 6.69-6.64 (м, 5H), 5.36-5.26 (м, 9H), 4.59 - 4.32 (м, 27H), 4.05-3.84 (м, 31H), 3.52-3.48 (м, 1925H), 2.32-2.85 (м, 28H), 2.76-2.69 (м, 39H), 2.43-2.38 (м, 23H), 2.33-2.22 (м, 50H), 1.99 - 1.74 (м, 85H), 1.60-1.45 (м, 59H), 1.37- 1.32 (м, 48H), 1.25-1.18 (м, 40H), 0.89-0.78 (м, 72H).

23. Синтез 35-98 (Соединение № 23)

37-88

Дигликольамин (25.84 мл, 260.59 ммоль, приобретено у TCI) помещали в 1-литровую колбу и растворяли в дихлорметане (50 мл), добавляли триэтиламин (72.64 мл, 521.18 ммоль), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 1 часа. Трет-бутил дикарбонат растворяли в дихлорметане и медленно добавляли по каплям в колбу. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали до небольшого количества, добавляли порошкообразный силикагель (50 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием петролейным эфиром, содержащим 50%-60% этилацетата, получая таким образом продукт 37-88: 53.4861 г.

37-148

37-88 (53.4861 г, 260.59 ммоль) помещали в 1-литровую колбу, перемешивали при 0°C в течение 30 минут и медленно добавляли по каплям раствор трет-бутоксида калия в ТГФ (286.64 мл, 1 моль/л, 286.64 ммоль). После окончания добавления реакционный раствор перемешивали еще 1 час. Затем медленно добавляли по каплям этил бромацетат (28.82 мл, 260.59 ммоль). После окончания добавления реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали деионизованной водой (200 мл) и этилацетатом (200 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 1), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали досуха. Полученный сухой продукт растворяли в метаноле (30 мл) и дихлорметане (120 мл), добавляли порошкообразный силикагель (100 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием петролейным эфиром, содержащим 20% этилацетат, получая таким образом продукт 37-148: 52.1 г, выход 68.6%.

37-151

37-148 (52.1 г, 178.8 ммоль) помещали в 1-литровую колбу и растворяли в 1,4-диоксане (100 мл), добавляли гидроксид лития (9.4 г, 393.4 ммоль), и реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре 30 минут, затем добавляли очищенную воду (200 мл), и раствор перемешивали еще 2 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали н-гексаном (125 мл) и метилтретбутиловым эфиром (125 мл). Водную фазу доводили до pH = 2 добавлением концентрированной соляной кислоты, затем экстрагировали этилацетатом (200 мл × 2), и органические фазы объединяли. Добавляли порошкообразный силикагель и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием петролейным эфиром, содержащим 50%-60% этилацетат, получая таким образом продукт 37-151: 45.1 г, выход: 96%.

35-82

Boc-Glu-OH (20.0 г, 80.89 ммоль, приобретено у Ark Pharm), HBTU (92.02 г, 242.66 ммоль), HOBT (32.8 г, 242.66 ммоль) и H-Glu (OBn)₂·TsOH (84.861 г, 161.8 ммоль, приобретено у Ark Pharm) помещали в 1000-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (200 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (120.32 мл, 728 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, экстрагировали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (600 мл) и этилацетатом (300 мл), водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 1), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл × 2), упаривали досуха, получая таким образом продукт 35-82: 70 г.

35-84

35-82 (70 г, 80.89 ммоль) помещали в 1000-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (50 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (300 мл, 4044.5 ммоль) при перемешивании, и реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали, добавляли этилацетат (300 мл) и насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (300 мл), при этом выделялось большое количество пузырьков газа, твердый бикарбонат натрия добавляли до повышения pH выше 7, и затем проводили экстракцию. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 1), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали досуха, получая 35-84: 62 г.

35-85

37-151 (19.36 г, 73.5364 ммоль), HBTU (41.83 г, 110.3045 ммоль), HOBT (14.91 г, 110.3045 ммоль) и 35-84 (61.95 г, 80.89 ммоль) помещали в 1000-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (200 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (54.69 мл, 330.9136 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (500 мл) и этилацетат (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 1), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали до небольшого количества, добавляли порошкообразный силикагель и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием петролейным эфиром, содержащим 50%-70% этилацетата, получая таким образом продукт 35-85: 51 г, выход: 69%.

35-86

35-85 (23.4 г, 23.14 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (30 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (85.93 мл, 1157.13 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали, добавляли этилацетат (300 мл) и насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (300 мл), при этом выделялось большое количество пузырьков газа, твердый бикарбона натрия добавляли до повышения рН выше 7, и затем проводили экстракцию. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 1), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали досуха, получая 35-86: 18.2 г, выход: 86%.

35-88

35-86 (18.2 г, 19.98 ммоль), HBTU (11.36 г, 29.97 ммоль), HOBT (4.05 г, 29.97 ммоль) и Boc-Lys (Fmoc) -OH (8.5 г, 18.16 ммоль, приобретено у Accela) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (100 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (14.86 мл, 89.90 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 1), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали до небольшого количества, добавляли порошкообразный силикагель и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием петролейным эфиром, содержащим 80%-100% этилацетата, получая таким образом продукт 35-88: 19.6 г, выход: 79%.

35-89

35-88 (7.0 г, 5.1413 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (5.7270 мл, 77.1191 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали, результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (150 мл × 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл × 2), упаривали досуха, получая таким образом продукт 35-89: 6.4853 г.

35-90

35-89 (4.2 г, 3.33 ммоль), HBTU (1.72 г, 4.54 ммоль), HOBT (0.61 г, 4.54 ммоль) и моно-трет-бутил сукцинат (0.53 г, 3.03 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (40 мл), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (2.25 мл, 13.62 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли деионизованную воду (300 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 1), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали до небольшого количества, добавляли порошкообразный силикагель и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 3% метанола, получая таким образом продукт 35-90: 4.3 г.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.62 - 8.53 (м, 1H), 8.40 - 8.24 (д, J = 7.4 Гц, 1H), 7.95 - 7.81 (м, 1H), 7.88 - 7.82 (д, J = 7.5 Гц, 3H), 7.77 - 7.64 (м, 3H), 7.51 - 7.43 (м, 2H), 7.38 - 7.29 (м, 22H), 7.24 - 7.12 (т, J = 5.6 Гц, 1H), 5.15 - 5.01 (м, 9H), 4.46 - 4.15 (м, 8H), 3.92 - 3.82 (м, 2H), 3.64 - 3.50 (м, 4H), 3.38 - 3.27 (м, 2H), 3.20 -3.13 (д, J = 5.0 Гц, 2H), 3.01 - 2.89 (м, 3H), 2.48 - 2.32 (м, 10H), 2.18 - 2.10 (т, J = 8.0 Гц, 2H), 2.05 - 1.71 (м, 7H), 1.56 - 1.46 (д, J = 5.9 Гц, 1H), 1.40 - 1.37 (м, 2H), 1.36 - 1.21 (м, 10H).

35-93

35-90 (0.622 г, 0.4390 ммоль) и Pd/C (0.0300 г) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (30 мл), подавали водород под давлением 1.8 МПа, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (20 мл × 3), и диметилформамидные растворы объединяли как сырой продукт для проведения следующей реакции.

37-53

Boc-Leu-OH.H₂O (40 г, 160.44 ммоль, приобретено у InnoChem), Gly-OBn.TsOH (56.837 г, 168.462 ммоль, приобретено у Ark pharm), HBTU (66.93 г, 176.48 ммоль), HOBT (23.85 г, 176.48 ммоль) помещали в 1000-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (250 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (145.85 мл, 882.4356 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (250 мл) и этилацетат (300 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл x 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл x 2), упаривали досуха. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием петролейным эфиром, содержащим 30%-40% этилацетата, получая таким образом продукт 37-53: 60.7 г.

37-54

37-53 (60.7 г, 160.44 ммоль) помещали в 1000-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (40 мл), добавляли ТФУК (95 мл, 1283.52.9 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (350 мл) и этилацетат (300 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (1500 мл x 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали досуха, получая таким образом продукт 37-54: 45 г.

37-56

37-54 (45 г, 160.44 ммоль), Boc-Phe-OH (40.438 г, 152.42 ммоль, приобретено у aladdin), HBTU (66.93 г, 1276.48 ммоль), HOBT (23.85 г, 176.48 ммоль) помещали в 1000-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (250 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (119.85 мл, 722 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (350 мл) и этилацетат (300 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл x 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (250 мл x 2), упаривали досуха, получая таким образом продукт 37-56: 84 г.

37-59

37-56 (84 г, 160.44 ммоль) помещали в 1000-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (40 мл), добавляли ТФУК (95 мл, 1283.52.9 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 2-литровую коническую колбу, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (350 мл), выделялось большое количество пузырьков газа, медленно добавляли твердый бикарбонат натрия до повышения рН выше 7, в осадок выпадало твердое вещество, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали очищенной водой (100 мл x 2) и сушили, получая таким образом продукт 37-59: 68 г.

37-62

37-59 (68.27 г, 152.42 ммоль), Boc-Gly-OH (25.37 г, 144.799 ммоль, приобретено у aladdin), HBTU (63.58 г, 167.66 ммоль), HOBT (63.58 г, 167.66 ммоль) помещали в 1000-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (250 мл), и затем реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (113.3 мл, 685.89 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (300 мл) и этилацетат (350 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл x 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (250 мл x 2) и оставляли при комнатной температуре на 1.5 часа для отделения твердого вещества, после этого смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали смесью этилацетат: петролейный эфир (3: 7) (150 мл × 5), получая таким образом продукт 37-62: 72.8 г.

37-149

37-62 (30 г, 51.4871 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (30.6 мл, 411.9 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (200 мл), при этом выделялось большое количество пузырьков газа, затем медленно добавляли твердый бикарбонат натрия до повышения рН выше 7, выпадало в осадок твердое вещество, после этого смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали деионизованной водой (150 мл × 4) и сушили, получая таким образом продукт 37-149: 24.85 г.

37-152

Boc-Glu-OH (5.7864 г, 23.4032 ммоль, приобретено у Ark pharm), 37-149 (24.85 г, 51.4871 ммоль), HBTU (26.626 г, 70.2096 ммоль), HOBT (9.4874 г, 70.2096 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (150 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 10 минут. Затем медленно добавляли DIEA (34.8 мл, 210.628 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (200 мл) и этилацетат (300 мл), и полученный раствор встряхивали для экстрагирования. Водную фазу промывали этилацетатом (150 мл × 1), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали досуха. Сухой остаток растворяли в метаноле (20 мл) и дихлорметане (100 мл), добавляли порошкообразный силикагель (50 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 4%-8% метанола. Элюированный продукт собирали, и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 37-152: 19.2 г, выход: 69.8%.

37-154

37-152 (19.2 г, 16.3215 ммоль) помещали в 1000-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (30 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (9.6966 мл, 130.5722 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали до небольшого количества, добавляли к остатку от упаривания метилтретбутиловый эфир (200 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (100 мл×3) и сушили, получая таким образом продукт 37-154: 17.5 г.

37-156

Boc-Gly-OH (3.4310 г, 19.5858 ммоль, приобретено у Ark Pharm), 37-154 (17.5 г, 16.3215 ммоль), HBTU (9.2847 г, 24.4823 ммоль), HOBT (3.3083 г, 24.4823 ммоль) помещали в 1000-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (150 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 10 минут. Затем медленно добавляли DIEA (12.14 мл, 73.4468 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор этилацетат (200 мл), метилтретбутиловый эфир (200 мл) и н-гексан (300 мл) для отделения твердого вещества, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (100 мл×3) и сушили, получая таким образом продукт 37-156: 19.2 г.

37-158

37-156 (10.499 г, 8.5125 ммоль) и 10% Pd/C (0.10 г) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (50 мл), подавали водород под давлением 1.8 МПа, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (20 мл × 3), и полученные диметилформамидные растворы объединяли как сырой продукт для проведения следующей реакции.

37-159

37-158 (8.965 г, 0.4390 ммоль), палбоциклиб (8 г, 17.8763 ммоль, также именуется PCB), HBTU (9.6848 г, 25.5375 ммоль), HOBT (3.4509 г, 25.5375 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (130 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (12.6626 мл, 76.6125 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (100 мл) для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (100 мл × 3) и сушили, получая таким образом продукт 37-159: 16.3 г.

37-161

37-159 (16.3 г, 8.5125 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (30 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (18.964 мл, 255.375 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (250 мл) для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл × 3) и растворяли в дихлорметане (240 мл) и метаноле (60 мл), добавляли порошкообразный силикагель (50 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 5% - 7% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 37-161: 11.2 г, выход 73%.

35-94

35-93 (0.464 г, 0.4390 ммоль), 37-161 (3.5 г, 1.9315 ммоль), HBTU (0.9988 г, 2.6338 ммоль), HOBT (0.3559 г, 2.6338 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (50 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.306 мл, 7.9015 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 40 минут, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор осаждали два раза н-гексаном (100 мл) и метилтретбутиловым эфиром (60 мл), получая вязкий маслянистый продукт. Метилтретбутиловый эфир (100 мл) добавляли к маслянистому продукту для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл × 2) и сушили, получая таким образом продукт 35-94: 3.614 г.

35-95

35-94 (3.614 г, 0.4390 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (25 мл), добавляли морфолин (1.7 мл, 19.7507 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции добавляли метилтретбутиловый эфир (150 мл) для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл × 3), растворяли в дихлорметане (200 мл) и метаноле (50 мл), добавляли порошкообразный силикагель (20 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 5%-9% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили, получая таким образом продукт 35-95: 0.7 г, выход 20%.

37-172

45-57 (0.0412 г, 0.0565 ммоль) и 10% Pd/C (0.10 г) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (50 мл), подавали водород под давлением 1.8 МПа, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (20 мл × 3), и диметилформамидные растворы объединяли как сырой продукт для проведения следующей реакции.

35-96

37-172 (0.007 г, 0.0199 ммоль), 35-95 (0.7 г, 0.0874 ммоль), HBTU (0.45 г, 1.192 ммоль), HOBT (0.16 г, 1.192 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (35 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.59 мл, 3.575 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 20 минут, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор осаждали один раз н-гексаном (150 мл) и метилтретбутиловым эфиром (60 мл), получая вязкий маслянистый продукт. Метилтретбутиловый эфир (100 мл) добавляли к маслянистому продукту для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл × 2) и сушили, получая таким образом продукт 35-96: 0.6434 г.

35-97

35-96 (0.6436 г, 0.0199 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (25 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (2.073 мл, 27.92 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали до небольшого количества, добавляли к остатку от упаривания метилтретбутиловый эфир (150 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл×3), растворяли в смеси растворителей, состоящей из метанола (30 мл) и дихлорметана (120 мл), добавляли порошкообразный силикагель (10 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 5% - 8% метанола. Элюированный продукт собирали и упаривали досуха, получая таким образом продукт 35-97: 0.23 г, выход 36%.

35-98

35-97 (0.23 г, 0.0072 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (10 мл), добавляли M-NH₂.HCl-10K (0.452 г, 0.043 ммоль, приобретено у JenKem), HBTU (0.163 г, 0.43 ммоль), HOBT (0.058 г, 0.43 ммоль), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 15 минут при низкой скорости мешалки. Затем медленно добавляли DIEA (0.1226 мл, 0.7415 ммоль) по каплям, и полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 20 минут, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали в темноте 7 дней при низкой скорости мешалки. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (40 мл), надосадочный раствор отбрасывали и добавляли к нижнему жидкому слою н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (40 мл). Эти операции повторяли два раза, получая вязкий маслянистый продукт. Метилтретбутиловый эфир (100 мл) добавляли, получая вязкий продукт. Полученный вязкий продукт растворяли в смеси растворителей, состоящей из метанола (30 мл) и дихлорметана (120 мл), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 8%-11% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха, сушили в вакуумном термошкафу и растворяли в безводном этаноле (10 мл) и дихлорметане (15 мл). Затем добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (200 мл) для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл×3) и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 35-98: 0.3 г, выход 57%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 9.24 - 9.10 (м, 5H), 8.53 - 8.13 (м, 134H), 7.96- 7.82 (м, 85H), 7.86 - 7.64 (м, 68H), 7.59- 7.42 (м, 68H), 7.41 - 7.34 (м, 71H), 7.30 - 7.21 (м, 69H), 7.17 - 7.04 (м, 28H), 6.99 - 6.73 (м, 5H), 6.68 - 6.53 (м, 5H), 4.45 - 4.23 (м, 8H), 4.14 - 4.01 (м, 21H), 3.79 - 3.54 (м, 304H), 3.51 - 3.42 (м, 3763H), 3.14 - 3.03 (м, 205H), 2.98 - 2.73 (м, 298H), 2.79 - 2.70 (м, 270H), 2.62 - 2.51 (м, 17H), 2.40 - 2.35 (м, 26H), 2.31 - 2.24 (м, 22H), 2.12 - 1.90 (м, 21H), 1.84 - 1.62 (м, 17H), 1.44 - 1.29 (м, 221H), 1.25 - 1.16 (м, 173H).

24. Синтез 44-172 (Соединение № 24)

25-241

Boc-Gly-OH (3.0 г, 17.1252 ммоль, приобретено у Ark Pharm), HBTU (9.7418 г, 25.6878 ммоль), HOBT (3.4709 г, 25.6878 ммоль) и H-Glu (OBzl)-OBzl⋅TosOH (8.5554 г, 17.1252 ммоль, приобретено у Ark Pharm) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (50 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (12.7 мл, 77.0634 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали 2 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (400 мл) и этилацетат (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), раствор встряхивали для экстрагирования, затем органическую фазу отделяли от водной фазы, добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха. Полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей (50 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (50 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1%-2% метанол: 99%-98% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 25-241: 6.9213 г, выход: 83.41%.

42-105

25-241 (2.0 г, 4.1276 ммоль) и 10% Pd/C (100 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования и растворяли в ДМФА (30 мл). Реактор для проведения гидрирования герметично закрывали, подавали водород под давлением 2.0 МПа, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор собирали и равномерно добавляли по каплям в делительную воронку с песчаным ядром, заполненную спрессованной диатомовой землей, затем проводили фильтрование при отсасывании. Диатомовую землю промывали диметилформамидом до полного извлечения продукта, получая таким образом раствор продукта реакции

43-116

Boc-GFLG-OBn (9.9 г, 17 ммоль, синтезирован по методике, описанной для синтеза 37-62) и 10% Pd/C (0.025 г) помещали в реактор для гидрирования, растворяли в ДМФА (40 мл), подавали водород под давлением 2.1 МПа, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Диатомовую землю промывали три раза диметилформамидом (20 мл × 3), и фильтрат переносили в 500-миллилитровую круглодонную колбу как сырой продукт для проведения следующей реакции.

42-89

Диметилформамидный раствор 43-116 (8.4534 г, 17.1618 ммоль), нирапариб (4.5821 г, 14.3015 ммоль, также именуется NPB), HBTU (8.1356 г, 21.4523 ммоль) и HOBT (2.8986 г, 21.4523 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (60 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (10.6 мл, 64.3568 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем добавляли в водную фазу этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Полученные органические фазы объединяли, добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем органическую фазу упаривали досуха и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 42-89: 11.3695 г.

42-90

42-89 (11.3695 г, 14.3015 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (30 мл), добавляли ТФУК (15.9 мл, 214.5225 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали для удаления дихлорметана и осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), получая порошкообразное твердое вещество, после этого смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и растворяли в смеси растворителей (60 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель (65 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (0%-2% метанол: 100%-98% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 42-90: 8.6 г, выход: 86.6%.

42-107

Раствор 42-105 (1.2560 г, 4.1276 ммоль), 42-90 (6.3095 г, 9.0807 ммоль), HBTU (4.6961 г, 12.3828 ммоль) и HOBT (1.6732 г, 12.3828 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (60 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (6.1 мл, 37.1484 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая маслянистое твердое вещество. Полученное маслянистое твердое вещество растворяли в дихлорметане (10 мл), полученный раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), при этом выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, и твердый продукт отделяли фильтрованием. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 42-107: 6.8432 г.

42-110

42-107 (6.4832 г, 4.1276 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (15 мл), добавляли ТФУК (4.6 мл, 61.9140 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана и осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), получая порошкообразное твердое вещество, после этого смесь фильтровали. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (100 мл), растворяли в смеси растворителей (100 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (70 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (0.5% водного аммиака / 2%-10% метанол: 97.5%-89.5% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 42-110: 2.9609 г, выход: 46.05%.

44-156

Fmoc-Lys (Boc)-OH (3.6002 г, 7.6839 ммоль, приобретено у Accela), 35-86 (9.1 г, 9.9890 ммоль), HBTU (4.3710 г, 11.5258 ммоль) и HOBT (1.5574 г, 11.5258 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (80 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (7.6 мл, 46.4032 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали 3 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Этилацетат (100 мл) добавляли в водную фазу, полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем полученные органические фазы объединяли, добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 44-148: 10.4619 г.

44-157

44-156 (10.4619 г, 7.6839 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (10 мл), добавляли морфолин (10.0 мл, 115.2583 ммоль) при перемешивании, и реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения. Эти операции повторяли пять раз, получая вязкое твердое вещество. Это вязкое вещество растворяли в смеси растворителей (60 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (50 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1%-5% метанол: 99%-95% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 44-157: 8.7542 г, выход: 100%.

45-91

Глицерин (5 г, 54.295 ммоль, приобретено у Innochem) помещали в 500-миллилитровую колбу, создавали инертную атмосферу азота, добавляли раствор трет-бутоксида калия в ТГФ (211 мл, 211.7505 ммоль), полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 3 часов, добавляли бензил бромацетат (30.964 г, 195.46 ммоль), полученный раствор перемешивали в течение 2 часов, а затем при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали досуха, затем добавляли деионизованную воду и этилацетат для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали этилацетатом до полного извлечения продукта из водной фазы, и органические фазы объединяли. Органическую фазу сушили безводным порошком сульфата натрия, проводили фильтрование при отсасывании, фильтрат переносили на колонку и провоидил колоночную хроматографию при градиентном элюировании смесью 1%-2% этилацетат/петролейный эфир, получая таким образом продукт 9 г, выход 31%.

36-186

45-91 (0.5 г, 0.9318 ммоль) и 10% Pd/C (0.0200 г) помещали в реактор и растворяли в ДМФА (30 мл). Воздух из реактора откачивали водяным вакуумным насосом, подавали водород под давлением 0.16 МПа, после этого водород снова откачивали из реактора вакуумным водяным насосом, и снова заполняли реактор водородом. Эти операции повторяли три раза. Наконец, заполняли реактор водородом и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Осадок на фильтре промывали диметилформамидом (20 мл × 3), и диметилформамидные растворы объединяли как сырой продукт, который далее использовали в следующей стадии.

44-161

Раствор 36-186 (0.5021 г, 1.8862 ммоль), 44-157 (8.5957 г, 7.5448 ммоль), HBTU (3.2190 г, 8.4879 ммоль) и HOBT (1.1469 г, 8.4879 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (80 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (4.2 мл, 25.4637 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали 3 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (400 мл) и этилацетат (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Этилацетат (200 мл) добавляли в водную фазу, полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем полученные органические фазы объединяли, добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха. Полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей (60 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (50 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (2%-8% метанол: 98%-92% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 44-161: 3.2551 г, выход: 47.54%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.33 - 8.02 (м, 18H), 7.50 - 7.17 (м, 60H), 5.36 - 4.94 (м, 24H), 4.55 - 4.50 (м, 12H), 3.95 - 3.87 (м, 6H), 3.67 - 3.47 (м, 25H), 3.39 - 3.16 (м, 16H), 2.47 - 2.38 (м, 24H), 2.25 - 1.94 (м, 12H), 1.94 - 1.79 (м, 6H), 1.57 - 1.46 (м, 6H), 1.38 (с, 27H), 1.26 - 1.23 (м, 6H).

44-166

44-161 (1.0 г, 0.2755 ммоль, получен самостоятельно) и 10% Pd/C (50 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (30 мл). Реактор для проведения гидрирования герметично закрывали, подавали водород под давлением 1.6 МПа, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор собирали и равномерно добавляли по каплям в делительную воронку с песчаным ядром, заполненную спрессованной диатомовой землей, затем проводили фильтрование при отсасывании. Диатомовую землю промывали диметилформамидом до полного извлечения продукта, получая таким образом раствор продукта реакции

44-167

Раствор 44-166 (0.3181 г, 0.1248 ммоль), 42-110 (2.8 г, 1.7974 ммоль), HBTU (0.8519 г, 2.2464 ммоль) и HOBT (0.3035 г, 2.2464 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (30 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.1 мл, 6.7392 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая маслянистое твердое вещество. Полученное маслянистое твердое вещество растворяли в дихлорметане (10 мл), полученный раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), при этом выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отделяли фильтрованием. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 44-167: 2.4242 г.

44-168

44-167 (1.7663 г, 0.0840 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли ТФУК (1.0 мл, 12.6010 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана и затем осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), получая порошкообразное твердое вещество, после этого смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и растворяли в смеси растворителей (100 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (50 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1% водного аммиака / 3%-10% метанол: 96%-89% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 44-168: 0.9538 г, выход: 54.79%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.61 - 8.57 (м, 20H), 8.46 - 7.80 (м, 196H), 7.77 - 7.44 (м, 53H), 7.44 - 7.04 (м, 166H), 5.33 - 5.31 (м, 3H), 4.67 - 4.18 (м, 77H), 4.11 - 3.92 (м, 46H), 3.86 - 3.84 (м, 40H), 3.79 - 3.57 (м, 44H), 3.19 - 3.04 (м, 45H), 2.94 - 2.89 (м, 52H), 2.88 - 2.71 (м, 102H), 2.17 - 1.90 (м, 60H), 1.61 - 1.51 (м, 96H), 1.28 - 1.21 (м, 178H), 0.96 - 0.78 (м, 144H).

44-172

44-168 (0.8105 г, 0.0420 ммоль) и M-SCM-10K (2.0019 г, 0.1890 ммоль, приобретено у JenKem) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (10 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.7 мл, 4.2 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 10 минут и затем при комнатной температуре в течение недели. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (20 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения. Эти операции повторяли пять раз, получая маслянистое твердое вещество. Полученное маслянистое твердое вещество растворяли в дихлорметане (10 мл) и осаждали метилтретбутиловым эфиром (60 мл), при этом выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отделяли фильтрованием. Осадок на фильтре растворяли в смеси растворителей (100 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель (50 мл) и проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1% водного аммиака / 2%-10% метанол: 97%-89% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 44-172: 0.6468 г, выход: 29.53%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.61 - 8.57 (м, 20H), 8.46 - 7.80 (м, 196H), 7.77 - 7.44 (м, 53H), 7.44 - 7.04 (м, 166H), 5.33 - 5.31 (м, 3H), 4.67 - 4.18 (м, 77H), 4.11 - 3.92 (м, 46H), 3.86 - 3.84 (м, 40H), 3.79 - 3.57 (м, 44H), 3.58 - 3.44 (м, 2853H), 3.24 - 3.04 (м, 45H), 2.94 - 2.89 (м, 52H), 2.88 - 2.71 (м, 102H), 2.17 - 1.90 (м, 60H), 1.61 - 1.51 (м, 96H), 1.28 - 1.21 (м, 178H), 0.94 - 0.77 (м, 144H).

25. Синтез 41-126 (Соединение № 25)

39-81

N-Boc-L-глутаминовой кислоты 5-бензиловый эфир (10 г, 29.6 ммоль, приобретено у Aladdin), H-Glu (Obzl) -Obzl⋅TsOH (16.2 г, 32.6 ммоль, приобретено у Ark Pharm), HOBT (6 г, 44.4 ммоль), HBTU (16.8 г, 44.4 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу, растворяли в ДМФА (80 мл), проводили обработку ультразвуком для полного растворения реагентов, и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (22 мл, 133.4 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали в тех же условиях до завершения реакции. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор деионизованную воду (100 мл), полученный раствор экстрагировали три раза этилацетатом (100 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия (100 мл × 2), упаривали досуха. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 30% этилацетат/петролейный эфир. Элюированный продукт собирали, упаривали, и упаривали досуха, получая целевой продукт.

39-83

39-81 (29.6 ммоль) растворяли в дихлорметане (5 мл), добавляли ТФУК (22 мл, 296 ммоль) и обрабатывали ультразвуком для полного растворения соединения. Закрывали колбу стеклянной пробкой, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (300 мл), полученный раствор экстрагировали три раза этилацетатом (100 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия (100 мл), упаривали досуха.

41-115

Fmoc-L-Lys(Boc)-OH (5.1430 г, 10.9767 ммоль, приобретено у Accela), 39-83 (6 г, 10.9767 ммоль), HBTU (6.2442 г, 16.4651 ммоль), HOBT (1.8257 г, 16.4651 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (50 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Медленно добавляли DIEA (8.2 мл, 19.3954 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали очищенной водой и этилацетатом, и органическую фазу упаривали, получая таким образом продукт 4.6 г.

41-116

Реагент 41-115 (4.6 г, 4.6132 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), добавляли морфолин (8 мл, 92.2639 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 3 часа. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор насыщенный водный раствор хлорида натрия (150 мл) и этилацетат (200 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (50 мл×3) до полного извлечения продукта из водной фазы, и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным раствором хлорида натрия (50 мл×2) и упаривали досуха, получая таким образом продукт 4 г.

41-117

41-116 (4 г, 5.1620 ммоль), 39-114 (1.8 г, 5.1620 ммоль), HBTU (2.9364 г, 7.7429 ммоль), HOBT (1.0462 г, 7.7429 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (40 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Медленно добавляли DIEA (8.45 мл, 50.9319 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор осаждали петролейным эфиром, нижний жидкий слой собирали, добавляли очищенную воду и проводили фильтрование при отсасывании. Описанные выше операции повторяли три раза. Полученное твердое вещество собирали и сушили, получая таким образом продукт 5 г, выход 87%.

41-118

Реагент 41-117 (5 г, 5.6303 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), добавляли морфолин (9 мл, 103.24 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор осаждали петролейным эфиром, нижний жидкий слой собирали, добавляли очищенную воду и проводили фильтрование при отсасывании. Полученное твердое вещество собирали и сушили, получая таким образом продукт 2.6 г, выход 58%.

41-119

41-118 (2.6 г, 2.9353 ммоль), HBTU (1.4312 г, 3.7740 ммоль), HOBT (0.5099 г, 3.7740 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в диметилформамидном растворе 45-121 (т.е., 36-186, 0.8387 ммоль), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Медленно добавляли DIEA (2.1 мл, 12.852 ммоль) по каплям, и раствор перемешивали при -5°C в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор насыщенный водный раствор хлорида натрия (150 мл) и этилацетат (200 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали три раза этилацетатом (50 мл×3) до полного извлечения продукта из водной фазы, и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным раствором хлорида натрия (50 мл×2) и упаривали досуха. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 1%-7% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 0.5 г, выход 55.6%.

41-120

41-119 (0.1 г, 0.0348 ммоль) и 10% Pd/C (150 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли при перемешивании в диметилформамиде (35 мл), который добавляли медленно, затем подавали водород под давлением 300 фунт/кв.дюйм, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. На следующий день реакционный раствор фильтровали при отсасывании через воронку с диатомовой землей для удаления Pd/C, получая диметилформамидный раствор продукта, который напрямую использовали в следующей стадии.

41-93

Fmoc-Glu-OH (1.6433 г, 4.4485 ммоль, приобретено у Aladdin), GFLG-NPB (синтезирован по методике, описанной для синтеза 42-90, 6.8 г, 9.7867 ммоль), HBTU (5.0615 г, 13.3455 ммоль), HOBT (1.8032 г, 13.3455 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (50 мл), и полученный раствор перемешивали при пониженной и постоянной температуре -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (6.6 мл, 40.0365 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали в тех же условиях еще 3 часа. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (30 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения и проводили фильтрование при отсасывании. Полученное твердое вещество переносили в 500-миллилитровую круглодонную колбу и упаривали досуха, получая таким образом продукт 10.2 г, выход 100%.

41-95

41-93 (7.6 г, 4.4485 ммоль) растворяли в ДМФА (40 мл), добавляли морфолин (7.8 мл, 88.97 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор этилацетат (100 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения и проводили фильтрование при отсасывании. Полученное твердое вещество переносили в 500-миллилитровую круглодонную колбу, добавляли порошкообразный силикагель, упаривали смесь, переносили сухой остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 3% метанол/ дихлорметан, получая таким образом продукт 4.4 г, выход 65.7%.

36-81

37-62 (14.95 г, 25.654 ммоль и 10% Pd/C (0.300 г) помещали в реактор и растворяли в ДМФА (40 мл). Откачивали воздух из реактора вакуумным водяным насосом, подавали водород под давлением 0.16 МПа, водород снова откачивали из реактора вакуумным водяным насосом, и реактор снова заполняли водородом. Эти операции повторяли три раза. Наконец заполняли реактор водородом, и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Осадок на фильтре промывали диметилформамидом (20 мл × 3), и диметилформамидные растворы объединяли как сырой продукт, который напрямую использовали в следующей стадии.

36-84

36-81 (5.3 г, 10.7255 ммоль), палбоциклиб (4 г, 8.9380 ммоль, также именуется PCB), HBTU (5 г, 13.4069 ммоль), HOBT (1.8 г, 13.4069 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и перемешивали при -5°C в течение примерно 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (6.6 мл, 40.2208 ммоль) по каплям, и полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной, и реакцию вели при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и добавляли к нижнему маслообразному слою н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (50 мл). Эти операции повторяли три раза, получая маслянистый продукт. Метилтретбутиловый эфир (200 мл) добавляли к маслянистому продукту для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре сушили, получая 36-84: 15.9 г.

36-98

36-84 (15.9 г, 8.938 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли ТФУК (6.6 мл, 89.38 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали до 10 мл, добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (200 мл), при этом выпадал в осадок порошкообразный продукт, который отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл × 3), растворяли в смеси растворителей (200 мл) 20% метанол: 80% дихлорметан, добавляли силикагель (60 мл), и смесь упаривали досуха, получая порошкообразное твердое вещество. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 0.5% водного аммиака / 2%-5% метанола. Элюированный продукт собирали и упаривали досуха, получая таким образом продукт 36-98: 8.5 г, выход: 91.4%.

41-92

Fmoc-Glu (OtBu)-OH (3.3522 г, 7.7879 ммоль, приобретено у Ark Pharm), 36-98 (6.8 г, 8.2728 ммоль), HBTU (4.7061 г, 12.4092 ммоль), HOBT (1.6767 г, 12.4092 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), и полученный раствор перемешивали при пониженной и постоянной температуре -5°C в течение 0.5 часа. Медленно добавляли DIEA (6.2 мл, 37.2276 ммоль) по каплям, и раствор перемешивали в тех же условиях еще 3 часов. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (30 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения и проводили фильтрование при отсасывании. Полученное твердое вещество переносили в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в смеси 20% метанол/дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель, упаривали, переносили остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 2% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 8.9 г, выход 100%.

41-97

41-92 (8.9 г, 7.2447 ммоль) помещали в реакционную колбу и растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли ТФУК (8 мл, 108.6709 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 3 часа. После окончания реакции результирующий раствор упаривали для удаления дихлорметана, добавляли метилтретбутиловый эфир (30 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения и проводили фильтрование при отсасывании. Полученное твердое вещество в виде порошка переносили в 500-миллилитровую круглодонную колбу и упаривали досуха, получая таким образом продукт 8.5 г, выход 100%.

41-98

41-95 (4.4 г, 2.9319 ммоль), 41-97 (3.6121 г, 3.0785 ммоль), HBTU (1.6679 г, 4.3979 ммоль), HOBT (0.5492 г, 4.3979 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), и полученный раствор перемешивали при пониженной и постоянной температуре 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (2.2 мл, 13.1936 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали в тех же условиях еще 3 часов. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (30 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения и проводили фильтрование при отсасывании. Полученное твердое вещество в виде порошка переносили в 2-литровую круглодонную колбу и упаривали досуха, получая таким образом продукт 7.7873 г.

41-103

41-98 (6.2 г, 2.3343) растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли морфолин (6 мл, 70.0298 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (100 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения и проводили фильтрование при отсасывании. Полученное твердое вещество в виде порошка переносили в 500-миллилитровую круглодонную колбу и упаривали досуха, получая таким образом продукт 5.68 г.

41-104

41-103 (5.5 г, 2.2598 ммоль), Boc-Gly-OH (0.4157 г, 2.3728 ммоль, приобретено у Aladdin), HBTU (1.2855 г, 3.3897 ммоль), HOBT (0.4580 г, 3.3897 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), и полученный раствор перемешивали при пониженной и постоянной температуре -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.7 мл, 10.1692 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали в тех же условиях еще 3 часов. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор этилацетат (30 мл) и н-гексан (200 мл) для осаждения и проводили фильтрование при отсасывании несколько раз. Полученное твердое вещество в виде порошка переносили в 2-литровую круглодонную колбу и упаривали досуха, полученный продукт использовали для проведения следующей реакции.

41-105

41-104 (5.8 г, 2.2598 ммоль) и дихлорметан (20 мл) помещали в колбу, медленно добавляли по каплям ТФУК (5 мл, 67.2110 мл), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 3 часа. После окончания реакции дихлорметан удаляли на роторном испарителе, полученный раствор осаждали этилацетатом (30 мл) и н-гексаном (200 мл), и проводили фильтрование при отсасывании несколько раз. Полученное твердое вещество в виде порошка переносили в 500-миллилитровую круглодонную колбу и упаривали досуха, получая таким образом продукт 5.5 г, выход 98%.

41-122

41-105 (0.8660 г, 0.3476 ммоль), HBTU (0.1975 г, 0.5215 ммоль), HOBT (0.0705 г, 0.5215 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в диметилформамидном растворе 41-120 (0.0348 ммоль), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (2 мл, 12.1005 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор очищенную воду для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре сушили, получая таким образом продукт 0.84 г, выход 100%.

41-125

41-122 (0.84 г, 0.0348 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (30 мл) при обработке ультразвуком, добавляли ТФУК (0.3 мл, 0.2326 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. На следующий день реакционный раствор сначала упаривали для удаления дихлорметана, затем добавляли метилтретбутиловый эфир для осаждения и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре сушили, получая таким образом продукт 0.8 г, выход 100%.

41-126

41-125 (0.8 г, 0.0348 ммоль) растворяли в ДМФА (20 мл) и добавляли M-SCM-10K (1.1058 г, 0.1044 ммоль, приобретено у JenKem), обрабатывали смесь ультразвуком для полного растворения реагентов, и полученный раствор перемешивали в темноте при низкой скорости мешалки. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (70 мл) для отделения твердого вещества, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре растворяли в смеси 20% метанол/дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель (3 г), упаривали смесь, переносили сухой остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 1% водного аммиака+5%-10% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 0.35 г, выход 19.4%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.13-10.12 (м, 7H), 9.29-9.27 (м, 16H), 8.95-8.92 (м, 7H), 8.57-8.56 (м, 17H), 8.18-8.16 (м, 37H), 8.14 - 7.95 (м, 137H), 7.89-7.87 (м, 50H), 7.59-7.54 (м, 43H), 7.35-7.25 (м, 176H), 5.83-5.81 (м, 7H), 5.16-5.08 (м, 6H), 4.57- 4.35 (м, 58H), 4.13-4.10 (м, 25H), 4.08-4.06 (м, 49H), 3.84-3.82 (м, 26H), 3.72-3.65 (м, 128H), 3.51-3.49 (м, 2888H), 3.24-3.19 (м, 30H), 3.13-3.10 (м, 44H), 3.06-3.02 (м, 40H), 2.91-2.90 (м, 14H), 2.78-2.74 (м, 35H), 2.65-2.60 (м, 26H), 2.41-2.30 (м, 47H), 2.21-1.96 (м, 84H), 1.83-1.75 (м, 91H), 1.64-1.39 (м, 156H), 1.20 -1.16 (м, 24H), 0.90-0.85 (м, 162H).

26. Синтез 49-136 (Соединение № 26)

49-96

Fmoc-Lys (Boc) -OH (3 г, 6.4029 ммоль, приобретено у Accela), HBTU (3.64 г, 9.6044 ммоль), HOBT (1.30 г, 9.6044 ммоль) помещали в колбу с H-Glu (OBn)₂ (3.36 г, 6.7230 ммоль, приобретено у Ark Pharm), растворяли в необходимом количестве ДМФА, и затем при -5°C медленно добавляли DIEA (4.76 мл, 28.8131 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали полчаса, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали насыщенным раствором NaCl (200 мл) и этилацетатом (200 мл), оставляли для расслоения, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 3), органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (6.96 г, выход выше расчетного).

49-118

49-96 (2 г, 2.5710 ммоль) и 10% Pd/C (0.05 г) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (20 мл), подавали водород под давлением 300 фунт/кв.дюйм, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Осадок на фильтре промывали диметилформамидом (15 мл × 3) три раза, и фильтрат переносили в 250-миллилитровую круглодонную колбу, получая таким образом продукт как сырой материал для проведения следующей реакции.

49-101

39-84 (8 г, 10.4459 ммоль), HBTU (5.94 г, 15.6689 ммоль), HOBT (2.12 г, 15.6689 ммоль) помещали в колбу с 49-17 (3.69 г, 10.4459 ммоль), растворяли в необходимом количестве ДМФА, затем при -5°C медленно добавляли DIEA (7.77 мл, 47.0066 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали полчаса, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали насыщенным раствором NaCl (200 мл) и этилацетатом (200 мл), оставляли для расслоения, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали досуха, полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (100 мл), и полученную смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием 100% дихлорметаном. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (9.6 г, 83.48 %)

49-104

ДМФА помещали в колбу с 49-101 (9.6 г, 8.7193 ммоль), проводили обработку ультразвуком для полного растворения соединения, добавляли морфолин (7.59 мл, 87.193 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали насыщенным раствором NaCl (200 мл) и этилацетатом (200 мл), оставляли для расслоения, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали досуха, полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (100 мл), и полученную смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 3%~5% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (5.3 г, 69.19 %)

49-119

49-104 (4.74 г, 5.3991 ммоль), HBTU (2.92 г, 7.7130 ммоль), HOBT (1.04 г, 7.7130 ммоль) помещали в колбу с 49-118 (1.53 г, 2.5710 ммоль), растворяли в необходимом количестве ДМФА, и затем при -5°C медленно добавляли DIEA (4.76 мл, 28.8131 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали полчаса, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали насыщенным раствором NaCl (200 мл) и этилацетатом (200 мл), оставляли для расслоения, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (8.65 г, выход выше расчетного)

49-123

ДМФА помещали в колбу с 49-119 (5.96 г, 2.5710 ммоль), проводили обработку ультразвуком для полного растворения соединения, добавляли морфолин (5.19 мл, 25.710 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали насыщенным раствором NaCl (200 мл) и этилацетатом (200 мл), оставляли для расслоения, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (7.6 г, выход выше расчетного)

49-124

Boc-Gly-OH (0.49 г, 2.8281 ммоль, приобретено у Aladdin), HBTU (1.46 г, 3.8565 ммоль), HOBT (0.52 г, 3.8565 ммоль) помещали в колбу с 49-123 (5.39 г, 2.5710 ммоль), растворяли в необходимом количестве ДМФА, и затем при -5°C медленно добавляли DIEA (4.76 мл, 28.8131 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали полчаса, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали насыщенным раствором NaCl (200 мл) и этилацетатом (200 мл), оставляли для расслоения, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали досуха, полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (100 мл), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 2%~5% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (3.2 г, 55.27%)

49-125

49-124 (1 г, 0.4437 ммоль) и 10% Pd/C (0.05 г) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (20 мл), подавали водород под давлением 300 фунт/кв.дюйм, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Осадок на фильтре промывали диметилформамидом (15 мл × 3) три раза, и фильтрат переносили в 250-миллилитровую круглодонную колбу, получая целевой продукт как сырой материал для проведения следующей реакции.

49-128

47-98 (2.56 г, 3.7271 ммоль), HBTU (2.02 г, 5.3244 ммоль), HOBT (0.72 г, 5.3244 ммоль) помещали в колбу с 49-125 (0.68 г, 0.4437 ммоль), растворяли в необходимом количестве ДМФА, и затем при -5°C медленно добавляли DIEA (2.64 мл, 15.9732 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали полчаса, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали насыщенным раствором NaCl (200 мл) и этилацетатом (200 мл), оставляли для расслоения, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (4.3 г, выход выше расчетного)

49-134

Дихлорметан помещали в колбу с 49-128 (3.06 г, 0.4437 ммоль), проводили обработку ультразвуком для полного растворения соединения, добавляли ТФУК (2.27 мл, 4.437 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали для удаления дихлорметана и основного количества ТФУК, затем добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (200 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали. Эти операции повторяли три раза. Проводили фильтрование при отсасывании и получали твердый продукт. Полученное твердое вещество растворяли в смеси дихлорметана и метанола. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 3~6% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (1.3 г, 43.92%). ¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.39 (с, 4H), 8.05-7.98 (м, 24H), 7.81-7.36 (м, 99H), 7.10-7.04 (м, 6H), 5.39-5.24 (м, 14H), 3.16-2.65 (м, 122H), 1.37-1.16 (м, 62H), 1.05-0.80 (м, 72H).

49-135

49-134 (1.3 г, 0.1943 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу, растворяли в ДМФА (20 мл) и M-SCM-5K (2.27 г, 0.4274 ммоль, приобретено у JenKem), обрабатывали ультразвуком для растворения соединения и затем при -5°C медленно добавляли DIEA (0.90 мл, 5.4401 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали полчаса, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали в темноте одну неделю при низкой скорости мешалки. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (25 мл) и метилтретбутиловый эфир (200 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, затем добавляли в полученный раствор н-гексан и метилтретбутиловый эфир для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Проводили фильтрование при отсасывании и получали твердый продукт. Полученное твердое вещество растворяли в смеси дихлорметана и метанола. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 6~10% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (2.1 г, 63.25%).

49-136

49-135 (2.1 г, 0.1229 ммоль), TBAF (0.51 г, 1.9671 ммоль), ТГФ (20 мл) и разведенную HCl (20 мл) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали при пониженном давлении, получая твердый продукт, который растворяли в ДМФА (5 мл) и добавляли в полученный раствор изопропанол для осаждения. Эти операции повторяли три раза. Отделяли твердый продукт фильтрованием. Полученное твердое вещество растворяли в дихлорметане (10 мл) и добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир для осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая твердый продукт. Полученное твердое вещество сушили, получая таким образом продукт (1.2 г, 64.17%).

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.10-7.91 (м, 21H), 7.81-7.24 (м, 25H), 7.06-6.95 (м, 8H), 5.36-5.10 (м, 22H), 3.55-3.46 (м, 1056H), 3.18-2.36 (м, 133H), 1.37-1.16 (м, 62H).

27. Синтез 40-176 (Соединение № 27)

36-143

36-81 (8.45 г, 17.1618 ммоль), лапатиниб (8.3 г, 14.3015 ммоль, также именуется LPT), HBTU (8.1 г, 21.4522 ммоль), HOBT (2.9 г, 21.4522 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и перемешивали при -5°C в течение примерно 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (10.6 мл, 64.3567 ммоль) по каплям, и полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный раствор NaHCO₃ (200 мл) и этилацетат (200 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл × 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия (100мл × 2) и упаривали досуха, получая 36-143: 14 г, выход: 92.8%.

36-145

36-143 (14 г, 14.3015 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли ТФУК (10.6 мл, 143.015 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали до 10 мл, добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (200 мл), при этом выпадал в осадок порошкообразный продукт, который отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл × 3), растворяли в смеси растворителей (200 мл) 20% метанол: 80% дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель (60 мл), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака / 5%-10% метанола. Элюированный продукт собирали и упаривали досуха, получая таким образом продукт 36-145: 6.2 г, выход 92.1%.

40-164

Fmoc-L-Lys(Boc)-OH (0.18 г, 0.3855 ммоль, приобретено у Accela), 44-208 (2 г, 0.3855 ммоль, Соединение № 29), HBTU (0.2193 г, 0.5783 ммоль), HOBT (0.0781 г, 0.5783 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (40 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Медленно добавляли DIEA (0.2878 мл, 1.7348 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир и н-гексан для осаждения, и проводили фильтрование при отсасывании. Полученное твердое вещество растворяли в смеси 10% метанол/дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель, проводили упаривание, загрузку сухого остатка на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием смесью 1% водного аммиака + 4%-8% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 1.8 г, выход 82.9%.

40-165

40-164 (1.8 г, 0.3193 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (30 мл), добавляли морфолин (0.5563 мл, 6.3852 ммоль), проводили обработку ультразвуком для полного растворения реагентов, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (100 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре сушили, получая таким образом продукт 1.7293 г, выход 100%.

40-167

Fmoc-Gly-OH (0.0949 г, 0.3193 ммоль, приобретено у Accela), 40-165 (1.7 г, 0.3193 ммоль), HBTU (0.1817 г, 0.4790 ммоль), HOBT (0.0647 г, 0.4790 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (50 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.2384 мл, 1.4369 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (100 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре сушили, получая таким образом продукт 1.8 г, выход 100%.

40-169

40-167 (1.8 г, 0.3193 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (30 мл), добавляли морфолин (0.5563 мл, 6.3852 ммоль), обрабатывали ультразвуком для полного растворения соединения, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (150 мл) и н-гексан (100 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Полученное твердое вещество растворяли в смеси 10% метанол/дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель, проводили упаривание, загрузку сухого остатка на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием смесью 1% водного аммиака + 4%-8% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 1.5 г, выход 85.85%.

40-171

40-169 (1.5 г, 0.2741 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли DIEA (0.1895 мл, 1.1420 ммоль) и 4ARM-SCM-10K (0.6222 г, 0.0571 ммоль), обрабатывали смесь ультразвуком для полного растворения реагентов, и полученный раствор перемешивали в темноте при низкой скорости мешалки. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (200 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Полученный твердый продукт растворяли в смеси 10% метанол/дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель (5 г), смесь упаривали, переносили сухой остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 5%-15% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 1.2 г, выход 66.67%.

40-175

40-171 (1.2 г, 0.0371 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (15 мл), добавляли ТФУК (0.1379 мл, 1.8562 ммоль) и обрабатывали ультразвуком для полного растворения соединения. Закрывали колбу стеклянной пробкой, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор упаривали для удаления дихлорметана, добавляли метилтретбутиловый эфир (150 мл), проводили обработку ультразвуком в течение 2 минут для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Полученный твердый продукт растворяли в смеси растворителей 20% метанол/дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель, и смесь упаривали досуха на роторном испарителе. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием смесью 1% водного аммиака + 5%-15% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 0.8 г, выход 80.21%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 10.15-9.90 (м, 14H), 9.05-9.03 (м, 1H), 8.94-8.93 (м, 2H), 8.76-8.71 (м, 12H), 8.61-8.55 (м, 11H), 8.25-7.58 (м, 155H), 7.52-7.41 (м, 16H), 7.36-6.99 (м, 198H), 6.71-6.63 (м, 10H), 6.57-6.50 (м, 4H), 5.29-5.22 (м, 26H), 4.80 - 4.52 (м, 39H), 4.42-4.10 (м, 58H), 4.06 - 3.89 (м, 14H), 3.86 - 3.74 (м, 31H), 3.70-3.56 (м, 65H), 3.54 - 3.42 (м, 907H), 3.22-2.98 (м, 81H), 2.91-2.60 (м, 37H), 2.43 - 2.09 (м, 68H), 1.93-1.44 (м, 124H), 1.39-1.14 (м, 144H), 0.90-0.75 (м, 120H).

40-176

40-175 (0.8 г, 0.0282 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли DIEA (0.0932 мл, 0.5640 ммоль), и M-SCM-5K (0.6206 г, 0.1186 ммоль), обрабатывали смесь ультразвуком для полного растворения реагентов, и полученный раствор перемешивали в темноте при низкой скорости мешалки. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (150 мл) для отделения твердого вещества и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре растворяли в смеси 10% метанол/дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель в полученный раствор, смесь упаривали, переносили сухой остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 5%-15% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 0.9 г, выход 69.23%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 9.88-9.81 (м, 9H), 8.94-8.55 (м, 17H), 8.21-7.98 (м, 61H), 7.87-7.71 (м, 21H), 7.47-7.45 (м, 12H), 7.23-7.14 (м, 292H), 6.67-6.53 (м, 11H), 5.26 -5.23 (м, 19H), 4.75-4.57 (м, 17H), 4.35-4.19 (м, 35H), 3.51-3.33 (м, 2730H), 3.06-3.01 (м, 111H), 2.62-2.60 (м, 62H), 2.40-2.37 (м, 68H), 2.18 - 1.76 (м, 221H), 1.60-1.48 (м, 91H), 1.24-1.16 (м, 57H), 0.88-0.78 (м, 120H).

28. Синтез 46-51 (Соединение № 28)

39-227

H-Glu (oBzl)-oBzl (15 г, 30.02 ммоль), Boc-Gly-OH (5.25 г, 30.02 ммоль), HBTU (6.08 г, 45.03 ммоль), HOBT (17.07 г, 45.03 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (22.33 мл, 135.11 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать 1 час, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли очищенную воду (200 мл) и этилацетат (200 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл x 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл x 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия (100 мл * 2), упаривали, проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием в градиенте 20%-50% этилацетат/петролейный эфир, получая таким образом продукт 10 г, выход 69%

33-232

39-227 (2 г, 4.28 ммоль) и 10% Pd/C (0.075 г) помещали в реактор, растворяли в ДМФА (40 мл), подавали водород под давлением 0.16 МПа, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Осадок на фильтре промывали диметилформамидом (20 мл × 3), и диметилформамидные растворы объединяли как сырой продукт, который напрямую использовали в следующей стадии.

33-233

14-128 (6 г, 6.27 ммоль), HBTU (3.2 г, 8.55 ммоль), HOBT (1.15 г, 8.55 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (4.2 мл, 25.65 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли н-гексан (100 мл × 3) для осаждения, нижний маслянистый слой продукта растворяли в небольшом количестве дихлорметана и добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир для отделения твердого вещества. Полученное твердое вещество сушили, получая таким образом продукт 8 г, выход выше расчетного.

33-235

33-233 (8 г, 9.4 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли ТФУК (13 мл, 188 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали до 10 мл, добавляли в полученный раствор метилтретбутиловый эфир (200 мл), при этом выпадал в осадок порошкообразный продукт, который отделяли фильтрованием при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл × 3), растворяли в смеси растворителей (200 мл) 20% метанол : 80% дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель (100 мл), и полученную смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 0.5%-1% водного аммиака / 4%-7% метанола. Элюированный продукт собирали и упаривали досуха, получая таким образом продукт 6 г.

44-180

35-85 (5.4828 г, 5.4225 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли ТФУК (6.0 мл, 81.3375 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана, полученный раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (400 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем этилацетат (100 мл) добавляли в водную фазу, полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Полученные органические фазы объединяли, добавляли в органическую фазу деионизованную воду (400 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 44-180: 4.7556 г, выход: 96.27%.

44-181

44-180 (4.7556 г, 5.2202 ммоль), Boc-L-Lys (Fmoc)-OH (2.2235 г, 4.7456 ммоль), HBTU (2.6996 г, 7.1185 ммоль) и HOBT (0.9618 г, 7.1185 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (80 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (4.7 мл, 46.1032 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 4 часов. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (400 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в водную фазу этилацетат (100 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Полученные органические фазы объединяли, добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 44-181: 6.4613 г.

44-182

44-181 (6.4613 г, 4.7456 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли ТФУК (5.3 мл, 71.184 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана, полученный раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), смесь встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в водную фазу этилацетат (100 мл), раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем полученные органические фазы объединяли, добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 44-182: 5.9861 г.

44-183

44-182 (5.9861 г, 4.7456 ммоль), моно-трет-бутил сукцинат (0.9920 г, 4.7456 ммоль), HBTU (2.6996 г, 7.1185 ммоль) и HOBT (0.9618 г, 7.1185 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (80 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (4.7 мл, 46.1032 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 4 часов. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (400 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в водную фазу этилацетат (100 мл), смесь встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем полученные органические фазы объединяли, добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу и упаривали досуха. Полученный сухой продукт растворяли в смеси растворителей (100 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель (60 мл), проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1%-2% метанол: 99%-98% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 44-183: 4.6123 г, выход: 69.45%.

46-36

44-183 (1.9313 г, 1.3624 ммоль) и 10% Pd/C (80 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования и растворяли в ДМФА (30 мл). Реактор для проведения гидрирования герметично закрывали, подавали водород под давлением 2.0 МПа, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор собирали и равномерно добавляли по каплям в делительную воронку с песчаным ядром, заполненную спрессованной диатомовой землей, затем проводили фильтрование при отсасывании. Диатомовую землю промывали диметилформамидом до полного извлечения продукта, получая таким образом раствор продукта реакции

46-39

Раствор 46-36 (0.4349 г, 0.4114 ммоль), 46-35 (4.1058 г, 1.9748 ммоль, синтезирован по методике, описанной для синтеза 33-235), HBTU (0.9361 г, 2.4684 ммоль) и HOBT (0.3335 г, 2.4684 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (80 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.2 мл, 7.4054 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая маслянистое твердое вещество. Полученное маслянистое твердое вещество растворяли в дихлорметане (10 мл), полученный раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), при этом выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отделяли фильтрованием. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 46-39: 3.8267 г.

46-41

46-39 (3.8267 г, 0.4114 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли ТФУК (4.6 мл, 61.71 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана, затем осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), получая порошкообразное твердое вещество, и смесь фильтровали. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (100 мл), получая таким образом продукт 46-41: 2.794 г, выход: 73.46%.

46-42

46-41 (2.794 г, 0.3022 ммоль), 36-98 (0.3726 г, 0.0.4533 ммоль), HBTU (0.1719 г, 0.4533 ммоль) и HOBT (0.0613 г, 0.4533 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (80 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.3 мл, 1.8132 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая маслянистое твердое вещество. Полученное маслянистое твердое вещество растворяли в дихлорметане (10 мл), полученный раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), при этом выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отделяли фильтрованием. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 46-42: 3.0369 г.

46-44

46-42 (3.0369 г, 0.3022 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (10 мл), добавляли морфолин (0.5 мл, 5.4395 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая маслянистое твердое вещество. Полученное маслянистое твердое вещество растворяли в дихлорметане (10 мл), и раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), при этом выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отделяли фильтрованием. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл), получая таким образом продукт 46-44: 0.4886 г, выход: 16.5%.

42-92

Boc-L-Lys (Fmoc)-OH (9.0 г, 19.2086 ммоль), гидрохлорид бензилового эфира глицина (4.2608 г, 21.1295 ммоль), HBTU (10.9270 г, 28.8129 ммоль) и HOBT (3.8932 г, 28.8129 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (60 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (14.3 мл, 86.4387 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 3 часов. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Этилацетат (100 мл) затем добавляли в водную фазу, полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Полученные органические фазы объединяли, добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Затем добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и водную фазу отделяли. Органическую фазу упаривали досуха и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 42-92: 11.8271 г.

42-93

42-92 (11.8271 г, 19.2086 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (40 мл), добавляли ТФУК (21.4 мл, 288.129 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали для удаления дихлорметана и осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), получая порошкообразное твердое вещество, смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 42-93: 9.9040 г.

42-128

42-93 (9.9040 г, 19.2086 ммоль), моно-трет-бутил сукцинат (3.6805 г, 21.1295 ммоль), HBTU (10.9270 г, 28.8129 ммоль) и HOBT (3.8932 г, 28.8129 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (100 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (14.2 мл, 86.4387 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (400 мл) и этилацетат (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Этилацетат (200 мл) добавляли в водную фазу, полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем полученные органические фазы объединяли, добавляли в органическую фазу водный раствор хлорида натрия (300 мл), смесь встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 42-128: 12.9040 г.

42-133

42-128 (12.9040 г, 19.2086 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли морфолин (25.1 мл, 288.1290 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (400 мл) и этилацетат (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Этилацетат (200 мл) добавляли в водную фазу, полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем полученные органические фазы объединяли, добавляли в органическую фазу деионизованную воду (400 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 42-133: 8.6350 г.

42-134

Раствор 42-133 (7.5191 г, 16.7263 ммоль), 44-149 (то есть, 36-186, 2.4930 г, 4.6462 ммоль), HBTU (7.9291 г, 20.9079 ммоль) и HOBT (2.8251 г, 20.9079 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (80 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (10.4 мл, 62.7237 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (400 мл) и этилацетат (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Этилацетат (200 мл) добавляли в водную фазу, полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем полученные органические фазы объединяли, добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали, и остаток от упаривания растворяли в смеси растворителей (60 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в раствор порошкообразный силикагель (40 мл), проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (2%-8% метанол: 98%-92% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 42-134: 4.8 г, выход: 66.19%.

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.38 - 8.35 (м, 3H), 8.11 - 8.01 (м, 3H), 7.56 (т, J = 5.2 Гц, 3H), 7.44 - 7.27 (м, 15H), 5.12 (с, 6H), 4.36 - 4.17 (м, 3H), 3.97 - 3.80 (м, 6H), 3.33 (с, 11H), 3.06 (м, 6H), 2.45 - 2.31 (м, 12H), 1.69 - 1.46 (м, 12H), 1.36 (м, 27H), 1.32 - 1.26 (м, 6H).

46-46

42-134 (0.5 г, 0.3204 ммоль) и 10% Pd/C (50 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования и растворяли в ДМФА (30 мл). Реактор для проведения гидрирования герметично закрывали, подавали водород под давлением 2.0 МПа, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор собирали и равномерно добавляли по каплям в делительную воронку с песчаным ядром, заполненную спрессованной диатомовой землей, затем проводили фильтрование при отсасывании. Диатомовую землю промывали диметилформамидом до полного извлечения продукта, получая таким образом раствор продукта реакции

46-47

Раствор 46-46 (0.0194 г, 0.0151 ммоль), 46-44 (0.4886 г, 0.0497 ммоль), HBTU (0.0257 г, 0.0678 ммоль) и HOBT (0.0092 г, 0.0678 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (100 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.1 мл, 1.057 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая маслянистое твердое вещество. Полученное маслянистое твердое вещество растворяли в дихлорметане (10 мл), раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), при этом выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отделяли фильтрованием. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 46-47: 0.4628 г.

46-49

46-47 (0.4628 г, 0.0151 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (10 мл), добавляли ТФУК (5 мл, 2.265 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана, затем осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), получая порошкообразное твердое вещество, после этого смесь фильтровали. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (100 мл), растворяли в смеси растворителей (80 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (50 мл), проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1% водного аммиака / 6%-10% метанол: 93%-89% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 46-49: 0.2613 г, выход: 56.64%.

46-51

46-49 (0.2613 г, 0.0085 ммоль), M-NH₂⋅HCl-10K (0.3253 г, 0.0308 ммоль), HBTU (0.0146 г, 0.0385 ммоль) и HOBT (0.0052 г, 0.0385 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (20 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.1 мл, 1.9422 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали в темноте при низкой скорости мешалки в течение одной недели. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения. Эти операции повторяли пять раз, получая твердый порошок, который отделяли фильтрованием. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (100 мл), растворяли в смеси растворителей (60 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (50 мл), проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1% водного аммиака/5%-15% метанол: 94%-84% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 46-51: 0.2251 г, выход: 42.66%.

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.97 - 8.53 (м, 41H), 8.32 - 7.90 (м, 183H), 7.90 - 7.60 (м, 57H), 7.54 - 7.45 (м, 27H), 7.38 - 6.99 (м, 254H), 6.67 - 6.53 (м, 21H), 5.26 - 5.24 (м, 42H), 4.87 - 4.03 (м, 168H), 3.87 - 3.40 (м, 2876H), 3.24 - 3.11 (м, 110H), 3.10 - 2.93 (м, 142H), 2.92 - 2.70 (м, 108H), 2.69 - 2.61 (м, 20H), 2.43 - 2.00 (м, 104H), 1.86 - 1.47 (м, 162H), 1.23-1.11 (м, 61H), 0.99 - 0.66 (м, 162H).

29. Синтез 44-234 (Соединение № 29)

36-200

35-84 (8.99 г, 11.7386 ммоль), Boc-L-Lys (Fmoc)-OH (5.0 г, 10.6714 ммоль), HBTU (6.0706 г, 16.0072 ммоль) и HOBT (2.1629 г, 16.0072 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (80 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (10.6 мл, 64.0287 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 3 часов. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), полученный раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем этилацетат (100 мл) добавляли в водную фазу, раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Полученные органические фазы объединяли, добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 36-200: 12.9804 г.

44-207

36-200 (11.9 г, 9.7832 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли ТФУК (10.9 мл, 146.748 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана и затем осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), получая порошкообразное твердое вещество, после этого смесь фильтровали. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (100 мл), получая таким образом продукт 44-207: 8.351 г, выход: 76.47%.

44-208

Моно-трет-бутил сукцинат (1.5638 г, 8.9775 ммоль), 44-207 (8.351 г, 7.4812 ммоль), HBTU (4.2558 г, 11.2218 ммоль) и HOBT (1.5163 г, 11.2218 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (80 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (9.9 мл, 59.8499 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 3 часов. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл) и этилацетат (200 мл), раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в водную фазу этилацетат (100 мл), раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем полученные органические фазы объединяли, добавляли в органическую фазу насыщенный водный раствор хлорида натрия (300 мл), раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Затем добавляли в органическую фазу деионизованную воду (300 мл), раствор встряхивали для экстрагирования, и органическую фазу отделяли от водной фазы. Органическую фазу и упаривали досуха. Полученный сухой продукт растворяли в смеси растворителей (100 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (50 мл), проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (2%-8% метанол: 98%-92% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 44-208: 2.5268 г, выход: 35.85%.

44-212

44-208 (2.5268 г, 1.9858 ммоль) и 10% Pd/C (60 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования и растворяли в ДМФА (30 мл). Реактор для проведения гидрирования герметично закрывали, подавали водород под давлением 2.2 МПа, и реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор собирали и равномерно добавляли по каплям в делительную воронку с песчаным ядром, заполненную спрессованной диатомовой землей, и проводили фильтрование при отсасывании. Диатомовую землю промывали диметилформамидом до полного извлечения продукта, получая таким образом раствор продукта реакции

44-213

Раствор 44-212 (1.0846 г, 1.1893 ммоль), 36-145 (5.0 г, 5.2329 ммоль), HBTU (2.7062 г, 7.1358 ммоль) и HOBT (0.9642 г, 7.1358 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (80 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (3.5 мл, 21.4074 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали 3 часа. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, затем добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая маслянистое твердое вещество. Полученное маслянистое твердое вещество растворяли в дихлорметане (10 мл), раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), при этом выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отделяли фильтрованием. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 44-213: 5.5443 г.

44-215

44-213 (5.5443 г, 1.1893 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли ТФУК (1.3 мл, 17.8395 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана, затем осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), получая порошкообразное твердое вещество, после этого смесь фильтровали. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (100 мл), получая таким образом продукт 44-215: 5.0 г, выход: 91.28%.

44-218

44-215 (5.0 г, 1.0856 ммоль), 36-98 (1.16 г, 1.4113 ммоль), HBTU (0.6176 г, 1.6284 ммоль) и HOBT (0.22 г, 1.6284 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (80 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.1 мл, 6.5136 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали 3 часа. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и затем добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая маслянистое твердое вещество. Полученное маслянистое твердое вещество растворяли в дихлорметане (10 мл), раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), при этом выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отделяли фильтрованием. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 44-218: 5.8728 г.

44-219

44-218 (5.8728 г, 1.0856 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (20 мл), добавляли морфолин (1.9 мл, 21.7120 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, и затем добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения. Эти операции повторяли пять раз, получая маслянистое твердое вещество. Полученное маслянистое твердое вещество растворяли в дихлорметане (10 мл), раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), при этом выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отделяли фильтрованием. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл), растворяли в смеси растворителей (100 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли порошкообразный силикагель (60 мл), проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1% водного аммиака / 3%-15% метанол: 96%-84% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 44-219: 0.8841 г, выход: 15.7%.

44-221

Раствор 46-46 (0.0611 г, 0.0473 ммоль), 44-219 ((0.8841 г, 0.1704 ммоль), HBTU (0.0808 г, 0.2130 ммоль) и HOBT (0.0288 г, 0.2130 ммоль) помещали в 500-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (30 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.1 мл, 0.6628 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали в темноте в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали, затем добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая маслянистое твердое вещество. Полученное маслянистое твердое вещество растворяли в дихлорметане (10 мл), раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), при этом выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отделяли фильтрованием. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл) и сушили в термошкафу, получая таким образом продукт 44-221: 0.7946 г.

44-232

44-221 (0.7946 г, 0.0473 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли ТФУК (0.5 мл, 7.095 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали при пониженном давлении для удаления дихлорметана и затем осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), получая порошкообразное твердое вещество, после этого смесь фильтровали. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (100 мл), растворяли в смеси растворителей (60 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (30 мл), проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1% водного аммиака / 3%-10% метанол: 96%-89% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 44-232: 0.2239 г, выход: 28.46%.

44-234

44-232 (0.2239 г, 0.0135 ммоль), M-NH₂⋅HCl-10K (0.5547 г, 0.0525 ммоль), HBTU (0.0230 г, 0.0606 ммоль) и HOBT (0.0082 г, 0.0606 ммоль) помещали в 250-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в ДМФА (80 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.1 мл, 0.5385 ммоль) по каплям. После окончания добавления раствор перемешивали при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали в темноте в течение недели. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения, надосадочный раствор отбрасывали и затем добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для осаждения. Эти операции повторяли три раза, получая маслянистое твердое вещество. Полученное маслянистое твердое вещество растворяли в дихлорметане (10 мл), раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (150 мл), при этом выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отделяли фильтрованием. Полученный твердый продукт промывали метилтретбутиловым эфиром (60 мл), растворяли в смеси растворителей (100 мл) 20% метанол/дихлорметан, добавляли в полученный раствор порошкообразный силикагель (50 мл), проводили упаривание, загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию при элюировании смесью (1% водного аммиака / 3%-10% метанол: 96%-89% дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт 44-234: 0.2549 г, выход: 39.2%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.95 - 8.51 (м, 17H), 8.26 - 7.92 (м, 115H), 7.53- 7.46 (м, 16H), 7.35 - 7.25 (м, 38H), 7.19 - 7.17 (м, 84H), 4.84 - 4.07 (м, 110H), 4.05 - 3.98 (м, 13H), 3.53 - 3.51 (м, 2874H), 3.25 - 2.94 (м, 117H), 2.89 - 2.85 (м, 73H), 2.77 - 2.73 (м, 47H), 2.69 - 2.61 (м, 16H), 2.41 - 2.29 (м, 52H), 2.23 - 1.75 (м, 71H), 1.59 - 1.48 (м, 77H), 1.34 - 1.23 (м, 30H), 0.85 - 0.83 (м, 60H)

30. Синтез 35-167 (Соединение № 32)

35-124

Fmoc-Gl-OH (3.57 г, 9.66 ммоль), HBTU (10.99 г, 28.9 ммоль), HOBT (3.91 г, 28.9 ммоль) и H-Glu-(OtBu)-OtBu.HCl (6.57 г, 20.28 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (150 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (8.78 мл, 53.11 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли деионизованную воду (200 мл) и этилацетат (250 мл) для экстрагирования, водную фазу промывали этилацетатом (200 мл), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл), упаривали досуха, получая таким образом продукт 35-124: 8.2 г.

35-125

35-124 (8.2 г, 9.62 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (30 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (21.4 мл, 288.6 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор метилтретбутиловый эфир (200 мл) для отделения твердого вещества, и смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (50 мл × 2) и сушили, получая таким образом продукт 35-125: 6 г.

35-121

Fmoc-Gly-OH (9 г, 30.27 ммоль), HBTU (16 г, 42.19 ммоль), HOBT (6 г, 44.4 ммоль) и H-Glu-(OtBu)-OtBu.HCl (8 г, 27.05 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (80 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (25 мл, 148.5 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли деионизованную воду (200 мл) и этилацетат (300 мл) для экстрагирования, водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл × 2), упаривали досуха, получая таким образом продукт 35-121: 14 г, выход: 87.5%.

35-122

35-121 (14 г, 26 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (200 мл), добавляли морфолин (14 мл, 260 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали деионизованной водой (200 мл) и этилацетатом (200 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл × 1), упаривали досуха, получая таким образом продукт 35-122: 68.2 г.

35-126

35-122 (8.1 г, 25.6 ммоль), HBTU (12.1 г, 31.98 ммоль), HOBT (4.3 г, 31.98 ммоль) и 35-125 (3.35 г, 5.33 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (50 мл), реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение примерно 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (15.9 мл, 95.94 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, экстрагировали деионизованной водой (250 мл) и этилацетатом (300 мл), водную фазу промывали этилацетатом (150 мл × 1), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл × 1) и упаривали досуха. Полученный сухой продукт растворяли в метаноле (20 мл) и дихлорметане (80 мл), добавляли порошкообразный силикагель (30 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 5%-8% метанола, получая таким образом продукт 35-126: 9.7 г.

35-128

35-126 (9.7 г, 5.33 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (150 мл), добавляли морфолин (4.6 мл, 53.3 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор н-гексан (200 мл) и метилтретбутиловый эфир (50 мл), полученный раствор встряхивали для расслоения, надосадочный раствор отбрасывали, и затем добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (200 мл) и метилтретбутиловый эфир (50 мл). Эти операции повторяли 4 раза, получая в итоге маслянистый продукт. Полученный маслянистый продукт сушили, получая 35-128: 6.36 г, выход: 75%.

35-111

Fmoc-Gl-OtBu (5 г, 11.8 ммоль), HBTU (6.7 г, 17.7 ммоль), HOBT (2.4 г, 17.7 ммоль) и H-Gly-OBn.HCl (2.5 г, 12.37 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу, растворяли в ДМФА (80 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (11 мл, 64.9 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли деионизованную воду (200 мл) и этилацетат (300 мл) для экстрагирования, водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 2), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл × 2), упаривали досуха, получая таким образом продукт 35-111: 5.7 г.

35-112

35-111 (6.7 г, 11.8 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (45 мл), добавляли морфолин (8.22 мл, 94.4 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, добавляли деионизованную воду (150 мл) и этилацетат (250 мл) для экстрагирования, и органическую фазу отделяли. Водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл × 1), упаривали досуха, получая таким образом продукт 35-112: 3.2 г, выход 78%.

35-113

35-112 (3.2 г, 9.1 ммоль), HBTU (5.2 г, 13.65 ммоль), HOBT (1.8 г, 13.65 ммоль) и Fmoc-Gly-OH (3.2 г, 10.92 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение примерно 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (7 мл, 42.39 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, экстрагировали деионизованной водой (250 мл) и этилацетатом (300 мл), водную фазу промывали этилацетатом (150 мл × 1), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл × 1) и упаривали досуха. Полученный сухой продукт растворяли в метаноле (20 мл) и дихлорметане (80 мл), добавляли порошкообразный силикагель (30 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием этилацетатом, содержащим 30%-70% петролейного эфира, получая таким образом продукт 35-113: 5.7 г.

35-114

35-113 (5.7 г, 9.1 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (30 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (20.4 мл, 273 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали до небольшого количества, добавляли н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (40 мл) для расслоения реакционного растора, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли к нижнему жидкому слою н-гексан (150 мл) и метилтретбутиловый эфир (40 мл), получая вязкий маслянистый продукт. Полученный маслянистый продукт сушили, получая таким образом продукт 35-114: 3.59 г, выход 68%.

35-142

35-128 (10.2 г, 6.4 ммоль), HBTU (1.36 г, 3.59 ммоль), HOBT (0.49 г, 3.59 ммоль) и 35-114 (3 г, 5.3 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (40 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение примерно 20 минут. Затем DIEA медленно добавляли (5 мл, 29.15 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали деионизованной водой (250 мл) и этилацетатом (300 мл), водную фазу промывали этилацетатом (150 мл × 1), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл × 1) и упаривали досуха. Полученный сухой продукт растворяли в метаноле (20 мл) и дихлорметане (80 мл), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 4%-8% метанола, получая таким образом продукт 35-142: 4 г, выход 81%.

35-144

35-142 (9.2 г, 1.86 ммоль) и 10% Pd/C (0.050 г) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (40 мл), подавали водород под давлением 1.8 МПа, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (20 мл × 3), и диметилформамидные растворы объединяли как сырой продукт для проведения следующей реакции.

35-115

Boc-Lys (Fmoc) -OH (4.7 г, 10 ммоль), HBTU (5.7 г, 15 ммоль), HOBT (2.0 г, 15 ммоль) и H-Gly-OBn.HCl (2.2 г, 11 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (50 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (9.1 мл, 55 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 1-литровую делительную воронку, экстрагировали насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл) и этилацетатом (250 мл), водную фазу промывали этилацетатом (200 мл × 1), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (200 мл × 2), упаривали досуха, получая таким образом продукт 35-115: 6.5 г.

35-116

35-115 (7.9 г, 12.81 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (7.4 мл, 100 ммоль) при перемешивании, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали до небольшого количества и два раза осаждали н-гексаном (150 мл) и метилтретбутиловым эфиром (40 мл), получая вязкий маслянистый продукт. Полученный маслянистый продукт сушили, получая таким образом продукт 35-116: 5.2 г.

35-146

35-144 (8.9 г, 4.3 ммоль), HBTU (2.45 г, 6.45 ммоль), HOBT (0.9 г, 6.45 ммоль) и 35-116 (2.7 г, 4.3 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (200 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение примерно 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (3.9 мл, 23.65 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции добавляли н-гексан (200 мл) и метилтретбутиловый эфир (40 мл) для расслаивания реакционного раствора, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (200 мл) и метилтретбутиловый эфир (40 мл). Эти операции повторяли три раза, получая вязкий маслянистый продукт. Полученный маслянистый продукт сушили, получая таким образом продукт 35-146: 11 г.

35-148

35-146 (11 г, 4.3 ммоль) и 10% Pd/C (0.050 г) помещали в реактор для проведения гидрирования, растворяли в ДМФА (40 мл), подавали водород под давлением 1.8 МПа, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Диатомовую землю промывали диметилформамидом (20 мл × 3), и диметилформамидные растворы объединяли как сырой продукт для проведения следующей реакции.

35-155

35-148 (6.8 г, 2.75 ммоль), HBTU (1.4 г, 3.75 ммоль), HOBT (0.51 г, 3.75 ммоль) и 35-128 (4 г, 2.5 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу, растворяли в ДМФА (150 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение примерно 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1.86 мл, 11.25 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции добавляли н-гексан (200 мл) и метилтретбутиловый эфир (40 мл) для расслаивания реакционного раствора, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (200 мл) и метилтретбутиловый эфир (40 мл). Эти операции повторяли три раза, получая вязкий маслянистый продукт. Полученный маслянистый продукт растворяли в дихлорметане и метаноле, добавляли порошкообразный силикагель (20 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 0.5% водного аммиака и 4%-10% метанола. Элюированный продукт собирали, и сушили, получая таким образом продукт 35-155: 1.2 г, выход: 12%. ¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.13- 8.05 (м, 22H), 7.85- 7.55 (м, 8H), 7.38- 7.28 (м, 8H), 4.71-4.33 (м, 7H), 4.31 - 4.09 (м, 14H), 3.85-3.42 (м, 12H), 3.18 - 2.35 (м, 4H), 2.31-2.29 (м, 32H), 2.07 - 1.91 (м, 26H), 1.89 - 1.55 (м, 6H), 1.45-1.38 (м, 144H), 1.25 - 1.11 (м, 2H).

35-157

35-155 (1.2 г, 0.3 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (25 мл), добавляли морфолин (4 мл, 43.68 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции добавляли н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для расслаивания реакционного раствора, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл). Эти операции повторяли три раза, получая вязкий маслянистый продукт. Полученный маслянистый продукт сушили, получая таким образом продукт 35-157: 1.02 г.

35-159

35-157 (1.02 г, 0.3 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу, растворяли в дихлорметане (30 мл) и трифторуксусной кислоте (10 мл, 134 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали до небольшого количества, добавляли н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для расслаивания реакционного раствора, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) к нижнему жидкому слою, получая вязкий маслянистый продукт. Полученный маслянистый продукт сушили, получая таким образом продукт 35-159: 0.8 г.

35-161

35-159 (0.1 г, 0.0367 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл). Затем добавляли DIEA (0.6 мл, 3.63 ммоль), полученный раствор перемешивали в течение 30 минут, добавляли M-SCM-10K (0.85 г, 0.081 ммоль, приобретено у JenKem), и реакционный раствор нагревали до комнатной температуры и перемешивали в темноте 7 дней при низкой скорости мешалки. После окончания реакции добавляли н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для расслаивания реакционного раствора, надосадочный раствор отбрасывали, и добавляли в нижний маслянистый раствор н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл). Эти операции повторяли три раза, получая маслянистый продукт. Полученный маслянистый продукт растворяли в метаноле (30 мл) и дихлорметане (120 мл), добавляли порошкообразный силикагель (20 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 6%-10% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт 35-161: 0.87 г, выход: 58%.

35-167

35-161 (0.5 г, 0.02 ммоль), 35-99 (0.45 г, 0.5 ммоль, синтезирован по методике, описанной для синтеза 25-132), HBTU (0.l5 г, 0.05 ммоль), HOBT (0.06 г, 0.05 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (35 мл), и реакционный раствор перемешивали при -5°C в течение 20 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.22 мл, 1.4 ммоль) по каплям. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут, затем температуру доводили до комнатной и перемешивали в темноте 6 дней при низкой скорости мешалки. После окончания реакции добавляли н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) для расслаивания реакционного раствора, надосадочный раствор отбрасывали и добавляли н-гексан (100 мл) и метилтретбутиловый эфир (30 мл) в нижний маслянистый раствор. Эти операции повторяли три раза, получая вязкий маслянистый продукт. Полученный маслянистый продукт растворяли в метаноле (30 мл) и дихлорметане (120 мл), добавляли порошкообразный силикагель (15 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 7%-10% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая целевой продукт. 35-167: 0.24 г, выход: 50%. ¹H -ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 9.04-9.03 (м, 2H), 8.37-8.34 (м, 29H), 8.18 - 8.02 (м, 42H), 8.01 - 7.80 (м, 48H), 7.61-7.59 (м, 38H), 7.39 -7.36 (м, 25H), 7.27 - 6.95 (м, 190H), 6.69-6.66 (м, 4H), 4.67 - 4.49 (м, 13H), 4.38 - 4.23 (м, 16H), 4.19 - 4.12 (м, 10H), 3.90-3.87 (м, 11H), 3.79-3.75 (м, 9H), 3.70-3.68 (м, 16H), 3.61-3.58 (м, 20H), 3.51-3.49 (м, 1941H), 3.14 - 3.03 (м, 68H), 2.68 - 2.59 (м, 73H), 2.35-2.34 (м, 39H), 1.61 - 1.54 (м, 16H), 1.48 (м, 34H), 1.34-1.32 (м, 31H), 1.23-1.21 (м, 186H), 0.95 - 0.81 (м, 139H), 0.52 -0.05 (м, 28H).

31. Синтез 41-137 (Соединение № 30)

49-17

6-Аминокапроновую кислоту (4.61 г, 35.1407 ммоль) помещали в 1-литровую колбу, добавляли смесь (150 мл) ТГФ: H₂O =1 :1 для полного растворения соединения, и полученный раствор перемешивали при 0℃. Добавляли твердый карбонат натрия (7.45 г, 70.2814 ммоль), проводили обработку ультразвуком для растворения соединения, и полученный раствор перемешивали при 0℃ 30 минут. Fmoc-Cl (10 г, 38.6548 ммоль) растворяли в 30 мл ТГФ и медленно добавляли по каплям в реакционный раствор. После окончания добавления полученный раствор нагревали до комнатной температуры и перемешивали. После окончания реакции растворяли 50 г лимонной кислоты в 450 мл деионизованной воды и добавляли в реакционный раствор, доводя pH до 3. Затем полученный раствор переносили в 1-литровую делительную воронку и экстрагировали этилацетатом (300 мл × 3). Органическую фазу собирали и упаривали досуха. Полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (50 мл), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 2% метанол/дихлорметан проводили. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (7.7 г, 86.51 %).

45-158

Паклитаксел (10 г, 11.71 ммоль, также именуется PTX, приобретено у Beisheng, Chongqing), имидазол (3.986 г, 58.5 ммоль, приобретено у InnoChem) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (100 мл), добавляли трет-бутилдиметил хлорсилан (10.59 г, 70.26 ммоль, приобретено у InnoChem) в защитной атмосфере азота, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали насыщенным раствором хлорида аммония и дихлорметаном. Органическую фазу упаривали досуха, получая таким образом продукт 11.3 г, выход 100%.

45-161

49-17 (4.2 г, 11.9297 ммоль), 45-158 (11 г, 11.3616 ммоль), DMAP (0.2776 г, 2.2723 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (50 мл), добавляли DCC (11.7212 мл, 56.808 ммоль) порциями при перемешивании при -5℃, и затем реакционный раствор перемешивали при -5℃ в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали насыщенным водным раствором хлорида натрия и этилацетатом, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали один раз этилацетатом, и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия, добавляли в органическую фазу порошкообразный силикагель, упаривали, переносили остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию при градиентном элюировании смесью 20%-25% этилацетат/петролейный эфир, получая таким образом продукт 8 г, выход 54.05%.

45-163

45-161 (7.5 г, 5.7535 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА, добавляли морфолин (10.024 мл, 115.0695 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали насыщенным водным раствором хлорида натрия и этилацетатом, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали один раз этилацетатом, и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия, добавляли порошкообразный силикагель в органическую фазу, упаривали, переносили остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию при градиентном элюировании смесью 20%-25% этилацетат/петролейный эфир, получая таким образом продукт 4.5 г, выход 72.58%.

41-123

Fmoc-E (OH)₂ (2 г, 5.34142 ммоль, приобретено у Aladdin), E(OtBu)₂ (3.3632 г, 11.3698 ммоль, приобретено у Innochem), HBTU (6.1598 г, 16.2426 ммоль), HOBT (2.1947 г, 16.2426 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), и полученный раствор перемешивали при пониженной и постоянной температуре 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (8 мл, 48.7277 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали в тех же условиях 3 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, экстрагировали этилацетатом (150 мл) и деионизованной водой (300 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали несколько раз этилацетатом (300 мл) до полного извлечения продукта из водной фазы, и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали, добавляли порошкообразный силикагель, упаривали, переносили остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 4% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 5 г, выход выше расчетного 0.4 г.

41-124

41-123 (5 г, 5.8684 ммоль) растворяли в ДМФА, добавляли морфолин (10.2 мл, 117.638 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции результирующий раствор осаждали петролейным эфиром, надосадочный раствор отбрасывали, добавляли очищенную воду к нижнему жидкому слою и проводили фильтрование при отсасывании. Твердый осадок собирали и объединяли, растворяли в ДМФА, добавляли очищенную воду и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре сушили, получая продукт 3.3 г, выход 89%.

41-127

Fmoc-Lys(Boc)-OH (2.455 г, 5.2399 ммоль, приобретено у Aladdin), 41-124 (3.3 г, 5.2399 ммоль), HBTU (2.9528 г, 7.8760 ммоль), HOBT (1.0520 г, 7.8760 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), и полученный раствор перемешивали при пониженной и постоянной температуре 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (3.9 мл, 23.5797 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали в тех же условиях 3 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, экстрагировали этилацетатом (150 мл) и деионизованной водой (300 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали несколько раз этилацетатом (300 мл) до полного извлечения продукта из водной фазы, и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали, добавляли порошкообразный силикагель, упаривали, переносили остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 50% этилацетат/петролейный эфир, получая таким образом продукт 3.4 г, выход 77%.

41-128

45-91 (0.6183 г, 1.1523 ммоль) помещали в реактор для проведения гидрирования;растворяли в ДМФА (30 мл), добавляли 10% Pd/C (100 мг), добавляли ДМФА (30 мл) для растворения реагентов. Вводили H₂ (300 фунт/кв.дюйм), и полученный раствор перемешивали в течение ночи, получая таким образом продукт для проведения следующей реакции.

41-130

41-127 (3.4 г, 4.0764 ммоль) растворяли в ДМФА, добавляли морфолин (7.1 мл, 81.5280 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, экстрагировали этилацетатом (150 мл) и деионизованной водой (300 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали несколько раз этилацетатом (300 мл) до полного извлечения продукта из водной фазы, и органические фазы объединяли. Органическую фазу сушили, получая таким образом продукт 3.49 г.

41-131

41-130 (3.5 г, 4.0764 ммоль), 41-128 (1.523 ммоль), HBTU (1.9664 г, 5.1852 ммоль), HOBT (0.7006 г, 5.1852 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), и полученный раствор перемешивали при постоянной пониженной температуре 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (2.6 мл, 15.5556 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали в тех же условиях 3 часа. После окончания реакции результирующий раствор переносили в 2-литровую делительную воронку, экстрагировали этилацетатом (150 мл) и деионизованной водой (300 мл), и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали несколько раз этилацетатом (300 мл) до полного извлечения продукта из водной фазы, и органические фазы объединяли. Органическую фазу упаривали досуха и сушили, получая таким образом продукт (3.5 г, выход выше расчетного 0.3 г), для проведения следующей реакции.

41-132

41-131 (3.2 г, 1.1523 ммоль) помещали в колбу и растворяли в дихлорметане (20 мл), добавляли ТФУК (20 мл, 276.552 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор сначала упаривали для удаления части ТФУК, затем осаждали этилацетатом (200 мл) и н-гексаном (200 мл), и проводили фильтрование при отсасывании. Полученное твердое вещество в виде порошка переносили в 2-литровую круглодонную колбу и упаривали досуха, получая таким образом продукт 2 г.

41-133

41-132 (0.28 г, 0.1545), M-SCM-5K (3.279 г, 0.6178 ммоль, приобретено у JenKem) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (30 мл), и полученный раствор перемешивали при постоянной пониженной температуре 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (1 мл, 6.0172 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в темноте в течение недели. После окончания реакции результирующий раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (200 мл) и н-гексаном (50 мл), и проводили фильтрование при отсасывании, получая порошкообразный продукт 1 г, выход 38.46%.

41-134

41-133 (0.1064 г, 0.0062 ммоль), 45-163 (0.1 г, 0.0925 ммоль), HBTU (0.0421 г, 0.1109 ммоль), HOBT (0.0150 г, 0.1109 ммоль) помещали в 100-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (20 мл), и полученный раствор перемешивали при пониженной и постоянной температуре 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.5 мл, 0.3329 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали в тех же условиях в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (200 мл) и н-гексаном (50 мл), и фильтровали при отсасывании, получая порошкообразный продукт. Этот продукт растворяли с получением раствора. Раствор упаривали, добавляли порошкообразный силикагель, упаривали, переносили остаток на колонку и проводили колоночную хроматографию, элюируя смесью 4% метанол/дихлорметан, получая таким образом продукт 0.1 г, выход 55.56%.

41-137

41-134 (0.7 г, 0.0234 ммоль), TBAF (1.4684 г, 5.6160 ммоль) помещали в 100-миллилитровую колбу и растворяли в ТГФ (20 мл), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре 3 часа. После окончания реакции результирующий раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром (200 мл) и н-гексаном (50 мл), и фильтровали при отсасывании, получая порошкообразный продукт. Проводили загрузку сухого образца на колонку и колоночную хроматографию с элюированием смесью 4% метанол/дихлорметан провоили, получая таким образом продукт 0.35 г, выход 50%.

¹H-ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.55-8.54 (м, 8H), 7.96-7.94 (м, 3H), 7.82-7.80 (м, 7H), 7.57-7.39 (м, 21H), 7.29-7.24 (м, 18H), 7.22-7.21 (м, 28H), 6.97-6.90 (м, 48H), 6.78-6.61 (м, 86H), 5.77-5.76 (м, 9H), 5.37-5.32 (м, 3H), 5.09 - 5.04 (м, 5H), 4.52 - 4.42 (м, 3H), 4.35-4.23 (м, 9H), 3.51-3.49 (м, 1414H), 3.32-3.31 (м, 41H), 3.06 -3.01 (м, 77H), 2.74-2.71 (м, 26H), 2.61-2.59 (м, 14H), 2.05 - 1.96 (м, 55H), 1.74-1.67 (м, 44H), 1.46 - 1.39 (м, 76H), 1.24-1.21 (м, 91H), 1.16-1.14 (м, 22H), 1.05-1.01 (м, 112H), 0.87-0.79 (м, 28H).

32. Синтез 49-166 (Соединение № 31)

39-80

Boc-Glu-OH (5.0 г, 20.22 ммоль, приобретено у Aladdin), H-Glu (OBzl)-OBzl⋅TsOH (21.2 г, 42.46 ммоль, приобретено у Ark Pharm), HOBT (8 г, 60.66 ммоль), HBTU (23 г, 60.66 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (80 мл), проводили обработку ультразвуком для полного растворения реагентов, и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (30 мл, 181 ммоль) по каплям, и полученный раствор перемешивали при пониженной температуре до окончания реакции. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор деионизованную воду (100 мл), раствор экстрагировали три раза этилацетатом (100 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия (100 мл) и упаривали досуха. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием от смеси 40% этилацетат/петролейный эфир до смеси 50% этилацетат/петролейный эфир. Элюированный продукт собирали и упаривали досуха.

39-84

39-80 (19.2 ммоль) растворяли в дихлорметане (5 мл), добавляли ТФУК (14 мл, 192 ммоль) и обрабатывали ультразвуком для полного растворения соединения. Закрывали колбу стеклянной пробкой, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (300 мл), раствор экстрагировали три раза этилацетатом (100 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия (100 мл) и упаривали досуха.

47-96

7-Этил-10-гидроксикамптотецин (15.00 г, 38.23 ммоль, также именуется SN38) помещали в 1000-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (150 мл), добавляли трет-бутилдифенилхлорсилан (59.64 мл, 229.36 ммоль, приобретено у Accela) и триэтиламин (31.88 мл, 229.36 ммоль), реакционный раствор помещали в масляную баню при 37°C и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали, получая вязкий раствор, который осаждали н-гексаном (150 мл), получая твердый продукт, и проводили фильтрование при отсасывании. Осадок на фильтре сушили, получая таким образом продукт (23.15 г, 96%).

47-97

47-96 (23.15 г, 36.70 ммоль), Boc-Gly-OH (8.71 г, 49.70 ммоль, приобретено у Aladdin), DMAP (0.94 г, 7.65 ммоль) помещали в 1000-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (150 мл), и реакционный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем добавляли DCC (39.41 г, 191.15 ммоль) в три приема, с интервалами 30 минут. После окончания добавления полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 2 часов, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор осаждали н-гексаном (200 мл) и петролейным эфиром (50 мл). Эти операции повторяли три раза, и смесь фильтровали, получая твердый продукт. Полученный твердый продукт сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (27.53 г, 94%).

47-98

47-97 (27.53 г, 34.50 ммоль) помещали в 1000-миллилитровую круглодонную колбу, растворяли в дихлорметане (50 мл) и трифторуксусной кислоте (28.40 мл, 382.30 ммоль), и реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор деионизованную воду (200 мл), полученный раствор экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл × 2) и упаривали, добавляли порошкообразный силикагель, и смесь упаривали досуха, получая порошкообразный продукт. Проводили колоночную хроматографию с элюированием в градиенте (1%-3% CH₃OH, остальное CH₂Cl₂). Элюированный продукт собирали и упаривали, получая таким образом продукт (16.98 г, 72%).

29-242

Fmoc-Lys (Boc) -OH (5.0 г, 10.6714 ммоль, приобретено у Aladdin), H-Gly-OBn (3.7802 г, 11.2050 ммоль, приобретено у Innochem), HBTU (6.0705 г, 16.0072 ммоль), HOBT (2.1630 г, 16.0072 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (50 мл), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (7.9371 мл, 48.0215 ммоль) по каплям, полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор деионизованную воду (200 мл), раствор экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл), упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая сырой продукт.

29-243

29-242 (6.57 г, 10.6714 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в необходимом количестве дихлорметана, добавляли ТФУК (7.9248 мл, 106.714 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали, получая маслянистый раствор, добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия для повышения pH до тех пор, пока раствор не становился щелочным, полученный раствор экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл), упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая сырой продукт.

29-245

Boc-Lys (Boc) -OH (4.2805 г, 11.7385 ммоль, приобретено у Ark Pharm), 29-243 (5.50 г, 10.6714 ммоль), HBTU (6.0705 г, 16.0072 ммоль), HOBT (2.1630 г, 16.0072 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (50 мл), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (7.9371 мл, 48.0215 ммоль) по каплям, полученный раствор продолжали перемешивать при 0°C в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор деионизованную воду (200 мл), раствор экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл), упаривали досуха и сушили в вакуумном термошкафу, получая сырой продукт.

29-246

Морфолин (9.24 мл, 106.714 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу с 29-245 (9.0 г, 10.6714 ммоль), растворяли в ДМФА (10 мл), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор деионизованную воду (200 мл), раствор экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл), упаривали, добавляли порошкообразный силикагель, и смесь упаривали досуха, получая порошкообразный продукт. Проводили колоночную хроматографию при элюировании в градиенте (1% водного аммиака, 4%-5% метанол, остальное дихлорметан). Элюированный продукт собирали, упаривали, получая таким образом продукт 29-246: 3.7 г. Выход 56%.

21-221

Эритритол (4.5 г, 36.849 ммоль) помещали в 500-миллилитровую двугорлую колбу и растворяли в ТГФ (60 мл) при обработке ультразвуком, и полученный раствор перемешивали при 0°C. После заполнения колбы азотом добавляли трет-бутоксид калия (200 мл, 184.245 ммоль), и полученный раствор перемешивали при 0°C в течение 2 часов. Затем добавляли бензил бромацетат (29.187 мл, 184.245 ммоль), полученный раствор перемешивали в течение 3 часов и затем перемешивали при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор экстрагировали очищенной водой и этилацетатом, и органическую фазу упаривали. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием смесью 1%-2% этилацетат/петролейный эфир, получая таким образом продукт 5 г, выход 20%.

38-120

21-221 (0.64 г, 0.9793 ммоль) и 10% Pd/C (100 мг) помещали в реактор для проведения гидрирования, медленно добавляли ДМФА (30 мл) для растворения реагента при перемешивании, подавали водород под давлением 300 фунт/кв.дюйм, и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. На следующий день реакционный раствор фильтровали при отсасывании на фильтровальной воронке через диатомовую землю для удаления Pd/C, получая диметилформамидный раствор продукта, который напрямую использовали в следующей стадии.

29-248

38-120 (0.39 г, 1.0966 ммоль), 29-246 (3.0 г, 4.8249 ммоль), HBTU (2.4951 г, 6.5795 ммоль), HOBT (0.8891 г, 6.5795 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (50 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (3.2624 мл, 19.7384 ммоль) по каплям, полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C при перемешивании в течение 1 часа, и затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор деионизованную воду (200 мл), раствор экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл), упаривали, добавляли порошкообразный силикагель, и смесь упаривали досуха, получая порошкообразный продукт. Проводили колоночную хроматографию при элюировании в градиенте (50%-80% этилацетат, остальное петролейный эфир). Элюированный продукт собирали, упаривали, получая таким образом продукт (1.6 г, 53%).

49-79

29-248 (0.52 г, 0.1878 ммоль) и 10% Pd/C (0.0, 5 г) помещали в реактор для проведения гидрирования и растворяли в ДМФА (30 мл). Реактор для проведения гидрирования герметично закрывали и проводили три цикла откачки и заполнения так что давление в реакторе для проведения гидрирования составляло 0.18 МПа, и полученный раствор оставляли на ночь для прохождения реакции при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Осадок на фильтре промывали диметилформамидом (20 мл×3), получая диметилформамидный раствор продукта как сырой материал для проведения следующей реакции.

49-80

49-79 (0.45 г, 0.1878 ммоль), M-NH₂HCl-5K (4.91 г, 0.9389 ммоль, приобретено у JenKem), HBTU (0.43 г, 1.1237 ммоль), HOBT (0.15 г, 1.1267 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (60 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.56 мл, 3.3780 ммоль) по каплям, и полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, и затем при комнатной температуре в темноте в течение 3 дней при низкой скорости мешалки. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Полученный раствор встряхивали с метилтретбутиловым эфиром (80 мл) и небольшим количеством н-гексана (10 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Из реакционного раствора выпадало в осадок порошкообразное твердое вещество, которое отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (20 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 1% водного аммиака и 3%-7% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (3.2 г, 73.73%).

49-153

49-80 (3.2 г, 0.1383 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу, растворяли в дихлорметане (5 мл) и ТФУК (0.82 мл, 11.0640 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в темноте в течение ночи при низкой скорости мешалки. После окончания реакции результирующий раствор упаривали на роторном испарителе, получая маслянистый раствор, затем добавляли метилтретбутиловый эфир (60 мл). Из раствора выпадал осадок в виде твердого порошка, который отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл × 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (20 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 3%-12% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (1.74 г, 56.35 %).

49-157

39-84 (5.16 г, 6.7433 ммоль), моно-трет-бутил сукцинат (1.40 г, 8.0920 ммоль, приобретено у Accela), HBTU (3.84 г, 10.1149 ммоль), HOBT (1.36 г, 10.1149 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (50 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (10.03 мл, 60.6897 ммоль) по каплям, полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C при перемешивании в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции добавляли в реакционный раствор деионизованную воду (200 мл), полученный раствор экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3), и органические фазы объединяли. Органическую фазу промывали два раза насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл), упаривали, добавляли порошкообразный силикагель, и смесь упаривали досуха, получая порошкообразный продукт. Проводили колоночную хроматографию при элюировании в градиенте (50%-90% этилацетат, остальное петролейный эфир). Элюированный продукт собирали и упаривали, получая таким образом продукт (5.66 г, 90.99%).

49-158

49-157 (2.8 г, 3.0367 ммоль) и 10% Pd/C (0.08 г) помещали в реактор для проведения гидрирования и растворяли в ДМФА (30 мл). Реактор для проведения гидрирования герметично закрывали и проводили три цикла откачки и заполнения, так что давление в реакторе для проведения гидрирования составляло 0.18 МПа, и полученный раствор оставляли на ночь для прохождения реакции при комнатной температуре. После окончания реакции результирующий раствор фильтровали через диатомовую землю. Осадок на фильтре промывали диметилформамидом (20 мл×3), получая раствор продукта в ДМФА как сырой материал для проведения следующей реакции.

49-159

49-158 (1.71 г, 3.0367 ммоль), 47-98 (8.77 г, 12.7541 ммоль), HBTU (6.90 г, 18.2202 ммоль), HOBT (2.46 г, 18.2202 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (60 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение примерно 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (13 мл, 78.9542 ммоль) по каплям, и полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, затем температуру доводили до комнатной и вели реакцию при перемешивании в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Полученный раствор встряхивали с метилтретбутиловым эфиром (80 мл) и небольшим количеством н-гексана (10 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Из раствора выпадал осадок в виде твердого порошка, который отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (60 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Переносили вещество на колонку и проводили колоночную хроматографию при градиентном элюировании дихлорметаном, содержащим 3%-7% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (11.3 г, выход выше расчетного).

49-161

49-159 (9.84 г, 3.0367 ммоль) помещали в 250-миллилитровую колбу и растворяли в дихлорметане (8 мл), добавляли ТФУК (8 мл), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После окончания реакции результирующий раствор упаривали на роторном испарителе, получая маслянистый раствор, затем добавляли метилтретбутиловый эфир (60 мл). Из раствора выпадал осадок в виде твердого порошка, который отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (60 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 1%-4% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (2.7 г, 27.92%).

49-162

49-153 (1.19 г, 0.0535 ммоль), 49-161 (1.5 г, 0.4710 ммоль), HBTU (0.24 г, 0.6422 ммоль), HOBT (0.08 г, 0.6422 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу и растворяли в ДМФА (60 мл), и полученный раствор перемешивали при -5°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли DIEA (0.60 мл, 3.6395 ммоль) по каплям, и полученный раствор продолжали перемешивать при -5°C в течение 1 часа, и затем при комнатной температуре в темноте в течение ночи при низкой скорости мешалки. После окончания реакции результирующий раствор встряхивали с н-гексаном (100 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Полученный раствор встряхивали с метилтретбутиловым эфиром (80 мл) и небольшим количеством н-гексана (10 мл), и надосадочный раствор отбрасывали. Описанные выше операции повторяли три раза. Из раствора выпадал осадок в виде твердого порошка, который отфильтровывали при отсасывании. Осадок на фильтре промывали метилтретбутиловым эфиром (40 мл x 3), промытый осадок на фильтре собирали и растворяли в смеси растворителей (100 мл) метанол/дихлорметан (1:4), добавляли порошкообразный силикагель (20 г), и смесь упаривали досуха, получая твердый порошок. Проводили загрузку сухого продукта на колонку и колоночную хроматографию с градиентным элюированием дихлорметаном, содержащим 3%-15% метанола. Элюированный продукт собирали, упаривали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (0.95 г, 37.25%).

49-166

49-162 (0.95 г, 0.0199 ммоль) помещали в 500-миллилитровую колбу, растворяли в ТГФ (10 мл) и разбавленной соляной кислоте (10 мл, 0.05 ммоль/л) при обработке ультразвуком, добавляли TBAF (0.5 г, 1.9133 ммоль), и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в темноте 3 часа. После окончания реакции результирующий раствор упаривали досуха. Полученный сухой продукт растворяли в ДМФА (5 мл), и раствор осаждали изопропанолом. Эти операции повторяли три раза. Осадок растворяли в безводном этаноле и небольшом количестве дихлорметана, и полученный раствор осаждали метилтретбутиловым эфиром. Эти операции повторяли три раза. Полученное твердое вещество собирали и сушили в вакуумном термошкафу, получая таким образом продукт (0.75 г, 93.75%).

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО-d6) δ 8.36-8.18 (м, 32H), 8.12-7.89 (м, 56H), 7.81-7.76 (м, 16H), 7.35 (с, 100H), 7.05-6.96 (м, 27H), 5.95-5.18 (м, 124H), 4.25-3.81 (м, 156H), 3.53-3.49 (м, 3706H), 3.12-2.78 (м, 123H), 2.08 (с, 109H), 1.47-1.20 (м, 211H), 0.99-0.78 (м, 136H).

Пример 2. Тест активности

27-134 (Соединение № 18), 44-2 (Соединение № 3) в приведенном ниже описании были взяты как примеры, а метод тестирования для остальных соединений был такой же, и ингибирующее действие на раковые клетки также было значительным.

I. Материалы для эксперимента:

1. Покупные образцы: Colo205, MDA-MB-231 раковые клетки, 2 лекарства (27-134, 44-2)

2. Оборудование и реагенты для эксперимента: мультифункциональный планшет-ридер PerkinElmer, набор для детектирования пролиферации и цитотоксичности на клетках CCK8.

II. Метод проведения эксперимента

Препараты лекарственных средств: лекарства готовили в виде 0.1 г/мл растворов в физрастворе, что соответствует молярной концентрации 7.4537 мМ для каждого лекарственного средства.

1. Клетки выращивали и обрабатывали трипсином. Клетки превращали в суспензию клеток в соответствующей среде. Суспензию инокулировали в 96-луночный планшет по 100 мкл на лунку, с плотностью клеток примерно 10-15%. Выращивание продолжали в инкубаторе при 37°C и 5% CO₂ в течение 6 часов, до присоединения клеток к стенкам.

2. Согласно необходимой концентрации лекарственного средства готовили лекарство-содержащие среды с разными концентрациями методом последовательных разбавлений. Две группы с разными градиентными комбинациями одного лекарственного средства скринировали на одном планшете, как показано на Фиг. 1.

3. Градиент лекарственного средства: добавляли 100 мкл свежих сред для выращивания (общий объем 200 мкл, концентрация лекарственного средства показана на Фиг. 1), содержащих соответствующие лекарственные средства, полученные на стадии 2, и продолжали выращивание в течение 48 часов.

4. После 48 часов инкубирования с лекарственным средством, изначальную среду удаляли.

5. Добавляли 100 мкл среды (содержит 10% CCK8) в каждую лунку и продолжали выращивание в клеточном инкубаторе в течение 2 часов.

6. Измеряли поглощение при 450 нм, полученные результаты показаны на Фиг. 2.

III. Анализ результатов эксперимента:

1. Степень ингибирования клеток для каждой концентрации лекарственного средства вычисляли по полученным результатам следующим образом:

96%	86%	76%	69%	64%	41%	15%	6%	-1%	0%
20	6.67	2.22	0.74	0.25	0.08	0.027	0.009	0.003	0
83%	75%	73%	67%	34%	13%	6%	9%	5%	0%
5	1.67	0.56	0.19	0.06	0.021	0.007	0.002	0.001	0
100%	92%	82%	78%	58%	26%	21%	12%	5%	0%
60	20.00	6.67	2.22	0.74	0.25	0.082	0.027	0.009	0
92%	81%	79%	45%	19%	12%	5%	4%	0%	0%
10	3.33	1.11	0.37	0.12	0.041	0.014	0.005	0.002	0

2. Диаграмма:

Ингибирующее действие лекарственного средства 44-2 на раковые клетки MDA-MB-231 показано на Фиг. 3.

Ингибирующее действие лекарственного средства 27-134 на раковые клетки Colo205 показано на Фиг. 4.

3. Вычисление значения IC₅₀ для индивидуального лекарственного средства

Полученные результаты показаны на Фиг. 5.

Пример 3. Предварительный тест противоопухолевой эффективности in vivo нескольких тестовых образцов на NPG мышиной опухолевой модели подкожного трансплантата клеток рака груди человека BT474.

1. Материалы для эксперимента:

Метод приготовления препарата:

Разбавитель для тестовых образцов: брали необходимое количество ПЭГ300 и абсолютного спирта, и добавляли раствор хлорида натрия для инъекций, доводя содержание ПЭГ300 и абсолютного спирта до 20% (об/об).

Тестовые образцы: 41-32, 41-40 и 39-55 брали соответственно в нужном объеме и добавляли нужное количество каждого разбавителя для тестовых образцов, соответственно получая растворы с концентрациями 8.3 мг/мл, 4.6 мг/мл и 5.5 мг/мл.

SB7.HCL: брали нужное количество SB7.HCL (коэффициент для пересчета: 93.4%), добавляли определенное количество этанола (5%, об/об) для растворения и, после полного растворения, добавляли нужное количество раствора хлорида натрия для инъекций, получая раствор с концентрацией 0.5 мг/мл.

LPT: брали нужное количество LPT, добавляли определенный объем 0.5% раствора CMC-Na, после чего перемешивали до однородности на магнитной мешалке, получая раствор с концентрацией 0.56 мг/мл.

Отрицательный контроль: использовали разбавитель для тестовых образцов.

Хранение и утилизация полученных растворов: полученные тестовые образцы и контрольные образцы хранили при 2-8°C или в ящике со льдом до применения, и оставшиеся тестовые образцы и контрольные образцы после использования утилизировали как медицинские отходы.

Клетки рака груди человека BT474: получали из Cell Resource Center of Shanghai Institutes for Biological Sciences of Chinese Academy of Sciences, культивировали в следующих условиях: RPMI1640 + 10% FBS, 37°C, 5% CO₂.

Вид и линия животных: NPG мыши

Уровень животных: уровень SPF (свободны от патогенной флоры)

Источник животных: Beijing Vitalstar Biotechnology Co., Ltd.

Возраст животных при инокулировании опухоли: примерно 4-5 недель.

Вес животных при инокулировании опухоли: примерно 15-18 г. Вес животных одного пола находился в пределах 80-120% от среднего веса.

Пол и число животных: самки, 60 мышей, 36 модельных животных прошли скрининг для финальных экспериментов, остальные животные были отправлены к ветеринару либо подвергнуты эвтаназии.

Животных содержали в условиях системы независимой вентиляции, максимум 6 животных из каждой группы в каждой клетке, и жилище животных соответствовало уровню SPF (свободно от патогенной микрофлоры), контролируемые условия были следующие: комнатная температура 20-26°C, относительная влажность 40-70% и режим освещения - чередование 12-часовых циклов свет/темнота.

Питание: каждый день предоставлялось соответствующее стандартам питание для мышей (производитель: Beijing Keao Xieli Feed Co., Ltd.). Животные имели неограниченный доступ к еде и воде.

2. Метод проведения эксперимента:

Клетки BT474 приводили к активное жизненное состояние и проводили амплификацию клеток. По достижении достаточного числа клеток, клетки в логарифмической фазе роста собирали для инокулирования. Таблетку с замедленным высвобождением эстрогена (17 бета-эстрадиол, product No.: SE-121, Innovative Research of America) помещали под кожу на задней поверхности шеи NPG мышей перед инокулированием клеток. Суспензию клеток BT474 с концентрацией 7.5×10⁷/мл и Matrigel Basement membrane Matrix (BD Co.) смешивали в соотношении 1:1 по объему, получая суспензию клеток с концентрацией 3.75×10⁷/мл. Инокулировали 0.2 мл суспензии клеток в жировое тело правой молочной железы. После инокулирования наблюдали рост опухоли, и в итоге 36 животных с объемом опухоли 66.83-324.35 мм³ были отобраны и использовались для теста.

Животных с опухолью случайным образом распределяли на 6 групп по объему опухоли и весу тела, включая: группа 1 (группа на отрицательном контроле, разбавитель для тестовых образцов), группа 2 (LPT, 20 мг/кг), группа 3 (SB7+ LPT, 5+5.6 мг/кг), группа 4 (41-32, т.е. Соединение № 20, 83 мг/кг), группа 5 (41-40, т.е. Соединение № 13, 46 мг/кг) и группа 6 (39-55, т.е. Соединение № 12, 55 мг/кг), по 6 животных в каждой группе, объем введения 10 мл/кг. Отрицательный контроль, SB7, 41-32, 41-40 и 39-55 вводили внутривенно;LPT вводили внутрижелудочно. Группам 2 и 4 осуществляли введение 1 раз каждые 3 дня (введение останавливали 1 раз в День 19 из-за недостаточной дозировки лекарственного средства), а остальным группам осуществляли введение один раз в неделю, на протяжении 4 недель, в День 29 животных подвергали эвтаназии. Во время эксперимента общие клинические симптомы животных регистрировали 2 раза в день, а вес тела и диаметр опухоли измеряли два раза в неделю. Опухоль отделяли после эвтаназии и взвешивали. Вычисляли объем опухоли, относительный объем опухоли (RTV), коэффициент относительной пролиферации опухоли T/C% и коэффициент ингибирования веса опухоли IR_TW%. Коэффициент относительной пролиферации опухоли T/C% ≤ 40% для группы и RTV у этой группы, значительно отличающийся от RTV у группы на отрицательном контроле (P ≤ 0.05), принимали за индикатор эффективности, и IR_TW ≥ 60% принимали за вспомогательный индикатор эффективности.

A. Измерение диаметра опухоли:

Тестируемое животное: все животные

Время тестирования: день распределения по группам (т.е. D1, день первого введения), 2 раза в неделю после первого введения, и перед эвтаназией, большой и малый диаметры опухоли измеряли штангенциркулем и записывали, а также вычисляли объем опухоли.

Объем опухоли вычисляли по следующей формуле:

V=1/2×большой диаметр×малый диаметр²

B. Определение терапевтической эффективности по объему опухоли

Относительный объем опухоли (RTV) и коэффициент относительной пролиферации опухоли T/C% вычисляли по следующей формуле:

RTV=V_t/V₀

V_t: объем опухоли, полученный при измерении опухоли в каждый определенный день

V₀: начальный объем опухоли (до введения)

T/C%= средний RTV в группе с введением вещества/средний RTV в контрольной группе × 100 %

Если T/C% был ≤ 40%, и RTV в группе с введением вещества статистически достоверно отличался от RTV в контрольной группе (P < 0.05), это значит что достигался эффект ингибирования роста опухоли;с другой стороны, если T/C% был > 40%, это значит что рост опухоли не ингибируется.

C. Определение терапевтической эффективности по весу опухоли

После эксперимента опухолевые узлы отделяли и взвешивали, и сравнивали разницу веса опухоли между группами для вычисления коэффициента ингибирования опухоли IR_TW. IR_TW>60% принимали за индикатор эффективности. Вычисления проводили по следующей формуле:

IR_TW (%) = (W_{Контр.группа} - W_{группа с введением вещества}) /W_{Контр.группа} × 100%

3. Результаты эксперимента:

Во время эксперимента 1 животное в группе 2 умерло в D19;2 животных в группе 3 умерло в D15 и D25, соответственно, из них у 1 животного после вскрытия обнаружили белые пескоподобные частицы в мочевом пузыре, причина смерти видимо связана с инокулированием эстрогеновой таблетки;причиной смерти 2 других животных предположительно является токсичность контроля. Вес животных в группах 1-6 все постепенно увеличивались, и не наблюдалось значимых различий (P >0.05) между группами.

В группе на отрицательном контроле (группа 1), опухоль постепенно увеличивалась в ходе эксперимента, к окончанию эксперимента (D29) группа 1 имела средний объем опухоли 1938.55±511.20 мм³ и средний RTV 14.98±8.63;средний объем опухоли в группах 2-6 составлял 1313.80±241.46 мм³, 1463.75±1088.95 мм³, 1232.77±652.36 мм³, 1616.52±985.05 мм³, 346.96±203.35 мм³ соответственно, и средние значения RTV для них составляли 8.13±2.92, 8.80±3.57, 8.27±3.92, 11.61±8.28, 2.26±1.32 соответственно, и объем опухоли в группе 6 в период D15-D29 был существенно ниже, чем в группе 1 (P ≤ 0.05);RTV в группе 6 в D12 был существенно ниже, чем в группе 1 (P ≤ 0.05), и не наблюдалось значимых различий в объеме опухоли и RTV между другими группами (P >0.05).

Тренд роста опухоли для каждой группы показан на Фиг. 6, Фиг. 7 и Фиг. 8.

К окончанию эксперимента (D29), значения T/C% в группах 2-6 составляли 54.27%, 58.74%, 55.21%, 77.54% и 15.07%, соответственно, и значения IR_TW% в них составляли 45.73%, 41.26%, 44.79%, 22.46% и 84.93%, соответственно, и T/C% в группе 6 снижался ниже 40% в период D12-D29.

В конце эксперимента опухоли всех животных взвешивали после эвтаназии. Средний вес опухолей в группах 1-6 составлял 1.807±0.350 г, 1.226±0.370 г, 1.185±0.934 г, 0.899±0.428 г, 1.287±0.746 г, 0.266±0.167 г, соответственно, вес опухоли в группе 6 был значимо ниже, чем в группе 1 (P ≤ 0.05). Значения IR_TW% в группах 2-6 составляли 32.15%, 34.42%, 50.25%, 28.78%, 85.28%, соответственно.

Схематические диаграммы коэффициента ингибирования веса опухоли для каждой группы показаны на Фиг. 9, Фиг. 10 и Фиг. 11. На Фиг. 12 показана фотография животных после эвтаназии в каждой группе. На Фиг. 13 показаны фотографии опухолей в каждой группе.

Вывод: в условиях проведения эксперимента во всех группах с введением вещества наблюдался эффект ингибирования роста опухоли, в разной степени, на NPG мышиной опухолевой модели подкожного трансплантата клеток рака груди человека BT474. Тестовый образец 39-55, который вводили инъекцией в хвостовую вену в дозе 55 мг/кг, показывал выраженный эффект ингибирования роста опухоли на NPG мышиной опухолевой модели подкожного трансплантата клеток рака груди человека BT474, и этот эффект был сильнее, чем у комбинации SB7, который вводили инъекцией в хвостовую вену в дозе 5 мг/кг, и LPT, который вводили внутрижелудочно в дозе 5.6 мг/кг. LPT при введении внутрижелудочно в дозе 20 мг/кг, 41-32 при введении внутривенной инъекцией в дозе 83 мг/кг и 41-40 при введении внутривенной инъекцией в дозе 46 мг/кг оказывали определенный ингибирующий эффект в NPG мышиной опухолевой модели подкожного трансплантата клеток рака груди человека BT474.

Пример 4. Предварительный тест противоопухолевой эффективности in vivo тестовых образцов на BALB/c «голой» мышиной опухолевой модели подкожного трансплантата клеток рака кишечника человека COLO-205

1. Материалы для эксперимента

Тестовый образец

Название: 39-17 (т.е. Соединение № 14);концентрация: 10 мг/мл.

Носитель/отрицательный контроль

Название: раствор хлорида натрия для инъекций;lot No.: 4B19091206;спецификация: 100 мл: 0.9 г;внешний вид: бесцветная прозрачная жидкость;условия хранения: хранение в запаянном контейнере;производитель: Shandong Qidu Pharmaceutical Co., Ltd.

Приготовление тестового образца и контрольного образца:

Метод приготовления:

Тестовый образец: использовали напрямую, без разбавления.

SB7.HCL: брали нужное количество SB7.HCL (коэффициент для пересчета: 93.4%), добавляли определенное количество этанола (5%, об/об) для растворения и, после полного растворения, добавляли нужное количество раствора хлорида натрия для инъекций, получая раствор с концентрацией 0.3 мг/мл.

PCB: брали нужное количество PCB, добавляли определенный объем 0.5% раствора CMC-Na, после чего перемешивали до однородности на магнитной мешалке, получая раствор с концентрацией 1.04 мг/мл.

Отрицательный контроль: использовали раствор хлорида натрия для инъекций.

Хранение и утилизация полученных растворов: полученные тестовые образцы и контрольные образцы хранили при 2-8°C или в ящике со льдом до применения, и оставшиеся тестовые образцы и контрольные образцы после использования утилизировали как медицинские отходы.

Клетки рака кишечника человека COLO-205: получали из Cell Resource Center of Institute of Basic Medicine of Chinese Academy of Medical Sciences, культивировали в RPMI1640 + 10% FBS, 37°C, 5% CO₂.

Вид и линия животных: BALB/c «голые» мыши

Уровень животных: уровень SPF (свободны от патогенной флоры)

Источник животных: Beijing Charles River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.

Возраст животных при инокулировании опухоли: примерно 4-5 недель.

Вес животных при инокулировании опухоли: примерно 15-18 г. Вес животных одного пола находился в пределах 80-120% от среднего веса.

Пол и число животных: самцы, 25 мышей, 18 модельных животных прошли скрининг для финальных экспериментов, остальные животные либо содержались дальше, либо подвергнуты эвтаназии.

Животных содержали в условиях системы независимой вентиляции, максимум 6 животных из каждой группы в каждой клетке, и жилище животных соответствовало уровню SPF (свободно от патогенной микрофлоры), контролируемые условия были следующие: комнатная температура 20-26°C, относительная влажность 40-70% и режим освещения - чередование 12-часовых циклов свет/темнота.

Питание: каждый день предоставлялось соответствующее стандартам питание для мышей (производитель: Beijing Keao Xieli Feed Co., Ltd.). Животные имели неограниченный доступ к еде и воде.

2. Метод проведения эксперимента:

Клетки COLO-205 приводили к активное жизненное состояние и проводили амплификацию клеток. По достижении достаточного числа клеток, клетки в логарифмической фазе роста собирали для инокулирования. Учитывая реальное количество клеток, концентрацию клеток доводили до 5×10⁷/мл и инокулировали подкожно в правую подмышку 25 мышам по 0.2 мл на особь. Отслеживали рост опухоли после инокулирования. Когда объем опухоли составлял примерно 100-300 мм³, проводили скрининг животных по объему опухоли, исключая тех, у кого объем опухоли был слишком большой, и мышей без опухоли, и в итоге 18 животных с развившейся опухолью были отобраны и использовались для теста.

Отобранные 18 животных с опухолью случайным образом распределяли на 3 группы включая: группа 1 (группа на отрицательном контроле, инъекция раствора хлорида натрия), группа 2 (SB7+ PCB, 3+10.4 мг/кг) и группа 3 (39-17, 153 мг/кг), по 6 животных в каждой группе, объем введения 10 мл/кг для отрицательного контроля, SB7, PCB, и 15.3 мл/кг для 39-17. Отрицательный контроль, SB7 и 39-17 вводили внутривенно, а PCB вводили внутрижелудочно, один раз в неделю на протяжении 3 недель, в День 22 животных подвергали эвтаназии. Во время эксперимента общие клинические симптомы животных регистрировали 2 раза в день, а вес тела и диаметр опухоли измеряли два раза в неделю. Опухоль отделяли после эвтаназии и взвешивали. Вычисляли объем опухоли, относительный объем опухоли (RTV), коэффициент относительной пролиферации опухоли T/C% и коэффициент ингибирования веса опухоли IR_TW%. Коэффициент относительной пролиферации опухоли T/C% ≤ 40% для группы и RTV у этой группы, значительно отличающийся от RTV у группы на отрицательном контроле (P ≤ 0.05), принимали за индикатор эффективности, и IR_TW ≥ 60% принимали за индикатор эффективности.

A. Измерение диаметра опухоли:

Тестируемое животное: все животные

Время тестирования: день распределения по группам (т.е. D1, день первого введения), 2 раза в неделю после первого введения, и перед эвтаназией, большой и малый диаметры опухоли измеряли штангенциркулем и записывали, а также вычисляли объем опухоли.

Объем опухоли вычисляли по следующей формуле:

V=1/2×большой диаметр×малый диаметр²

B. Определение терапевтической эффективности по объему опухоли

Относительный объем опухоли (RTV) и коэффициент относительной пролиферации опухоли T/C% вычисляли по следующей формуле:

RTV=V_t/V₀

V_t: объем опухоли, полученный при измерении опухоли в каждый определенный день

V₀: начальный объем опухоли (до введения)

T/C%= средний RTV в группе с введением вещества/средний RTV в контрольной группе × 100 %

Если T/C% был ≤ 40%, и RTV в группе с введением вещества статистически достоверно отличался от RTV в контрольной группе (P < 0.05), это значит что достигался эффект ингибирования роста опухоли;с другой стороны, если T/C% был > 40%, это значит что рост опухоли не ингибируется.

C. Определение терапевтической эффективности по весу опухоли

После эксперимента опухолевые узлы отделяли и взвешивали, и сравнивали разницу веса опухоли между группами для вычисления коэффициента ингибирования опухоли IR_TW. IR_TW>60% принимали за индикатор эффективности. Вычисления проводили по следующей формуле:

IR_TW (%) = (W_{Контр.группа} - W_{группа с введением вещества}) /W_{Контр.группа} × 100%

3. Результаты эксперимента:

Во время эксперимента 1 животное в группе 3 умерло в D8;и вес животного после смерти составил 14.5 г, при этом вес животного перед смертью был выше, что видимо связано с токсичностью 39-17;2 животных в группе 1 умерло в D19 и D20 соответственно, при этом у 1 животного перед смертью наблюдалось опухолевое язвообразование, что видимо связано со слишком большой нагрузкой опухолевыми клетками. Вес животных в группе 1 постепенно уменьшался, вес животных в группе 2 немного увеличивался и затем уменьшался, а вес животных в группе 3 постепенно увеличивался. Вес животных в группе 3 был очевидно выше, чем в группе 1 (P >0.05) в период D8-D22, и он был значительно выше, чем в группе 2 (P ≤ 0.05) в период D12-D22.

В группе на отрицательном контроле (группа 1), опухоль постепенно увеличивалась на протяжении эксперимента, к концу эксперимента (D22) группа 1 имела средний объем опухоли 1900.58±489.19 мм³ и средний RTV 16.03±6.43;средний объем опухоли в группах 2-3 составлял 774.06±228.43 мм³, 33.83±37.01 мм³, соответственно, и средний RTV у них составлял 6.38±1.81, 0.24±0.21 соответственно, объем опухоли в группе 2 в период D5-D22 был существенно ниже, чем в группе 1 (P ≤ 0.05), и объем опухоли в группе 3 в период D5-D22 был значительно меньше, чем в группах 1 и 2 (P ≤ 0.05);RTV в группе 2 в период D5-D19 был существенно меньше, чем в группе 1 (P ≤ 0.05), и объем опухоли в группе 3 в период D5-D22 был существенно меньше, чем в группах 1 и 2 (P ≤ 0.05).

Тренд роста опухоли для каждой группы показан на Фиг. 14.

К окончанию эксперимента (D22), значения T/C% в группах 2-3 составляли 59.68%, 1.88%, соответственно, и значения IR_TW% в них составляли 40.32%, 98.12%, соответственно. T/C% в группе 3 снижался ниже 40% в период D5-D22, и он был существенно ниже, чем в группе 1 (P ≤ 0.05).

В конце эксперимента опухоли всех животных взвешивали после эвтаназии. Средний вес опухолей в группах 1-3 составлял 1.551±0.290 г, 0.607±0.173 г, 0.036±0.036 г, соответственно, вес опухоли в группах 2-3 был значимо ниже, чем в группе 1 (P ≤ 0.05). Значения IR_TW% в группах 2-3 составляли 60.86%, 97.68%, соответственно.

Схематические диаграммы коэффициента ингибирования веса опухоли для каждой группы показаны на Фиг. 15.

Вывод: в условиях проведения эксперимента, тестовый образец 39-17, который вводили инъекцией в хвостовую вену в дозе 153 мг/кг, показывал выраженный эффект ингибирования роста опухоли на мышиной опухолевой модели подкожного трансплантата клеток рака кишечника человека COLO-205, и комбинация SB7, который вводили инъекцией в хвостовую вену в дозе 3 мг/кг, и PCB, который вводили внутрижелудочно в дозе 10.4 мг/кг также оказывала выраженный ингибирующий эффект в данной опухолевой модели. Эффект 39-17 был очевидно сильнее, чем у комбинации PCB и SB7.

Несмотря на то, что частные варианты осуществления настоящего изобретения были описаны подробно, квалифицированным специалистам в данной области будет понятно, что могут вноситься различные модификации и изменения деталей в раскрытые варианты, и что эти изменения входят в рамки объема притязаний настоящей заявки. Полный объем настоящего изобретения охватывается Формулой изобретения и ее эквивалентами.

Claims (75)

1. Конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль

,

(I)

где

M представляет собой -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, или ;

A1, A1’ каждый независимо представляет собой ;

A2 представляет собой прямую связь;

L1 представляет собой прямую связь;

W1, W1’, W2 каждый независимо представляет собой , , , или ;

Z3, Z2, Z1, Z0 каждый независимо представляет собой , , или ;

Q представляет собой -N-AC;

Q1 представляет собой -N1-AC1;

Q2 представляет собой -N2-AC2;

N, N1, N2 представляют собой GFLG;

AC, AC1, AC2 каждый независимо представляет собой PCB, LPT или SB7;

n1, n2 каждый независимо равен 1, 2, 3, 4 или 5;

Y, Y’ представляют собой прямую связь;

X, X’ представляют собой ;

ПЭГ представляет собой однорукий полиэтиленгликолевый сегмент, и его среднечисловой молекулярный вес независимо составляет 5k-40k;

j1 равен 1 или 2;

j2, j3 каждый независимо равен 0 или 1.

2. Конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, имеющее структуру, представленную формулой (III)

,

(III)

где

M представляет собой -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-,

A1, A1’ каждый независимо представляет собой

Y, Y’ представляют собой прямую связь,

X и X’ представляют собой ,

W1, W1’ каждый независимо представляет собой или ,

Z3, Z2, Z1, Z0 каждый независимо представляет собой или , ,

Q1 представляет собой -N1-AC1,

Q2 представляет собой -N2-AC2,

N1, N2 представляют собой GFLG,

AC1, AC2 каждый независимо представляет собой PCB или SB7,

среднечисловой молекулярный вес ПЭГ независимо составляет 5k-40k.

3. Конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство или его фармацевтически приемлемая соль по п. 2, где

M представляет собой -C(=O)-C_1-6 алкилен-C(=O)-, A1 и A1’ представляют собой , Y и Y’ представляют собой прямую связь, W1 представляет собой , W1’ представляет собой , Z3 и Z1 представляют собой , Z2 и Z0 представляют собой .

4. Конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство или его фармацевтически приемлемая соль по п. 2, где

M представляет собой , A1 и A1’ представляют собой , Y и Y’ представляют собой прямую связь, W1 представляет собой , W1’ представляет собой , Z3 и Z1 представляют собой , Z2 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 и N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой SB7, AC2 представляет собой PCB.

5. Конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, имеющее структуру, представленную формулой (IV)

,

(IV)

где

M представляет собой ,

A1 представляет собой ,

X представляет собой ,

W1 представляет собой ,

Z2, Z1, Z0 каждый независимо представляет собой , или ,

Q1 представляет собой -N1-AC1,

Q2 представляет собой -N2-AC2,

N1 и N2 представляют собой GFLG,

AC1, AC2 каждый независимо представляет собой SB7 или LPT,

среднечисловой молекулярный вес ПЭГ независимо составляет 5k-40k.

6. Конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство или его фармацевтически приемлемая соль по п. 5, где

M представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой .

7. Конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство или его фармацевтически приемлемая соль по п. 5, где

M представляет собой , W1 представляет собой , Z2 представляет собой , Z1 представляет собой , Z0 представляет собой , Q1 представляет собой -N1-AC1, Q2 представляет собой -N2-AC2, N1 и N2 представляют собой GFLG, AC1 представляет собой LPT, AC2 представляет собой SB7.

8. Конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство или его фармацевтически приемлемая соль, где конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство выбрано из следующих:

12
где имеет среднечисловой молекулярный вес 20k 14
где имеет среднечисловой молекулярный вес 20k

9. Интермедиат для получения конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 2-4, где интермедиат выбран из следующих:

39-14 39-15

10. Способ получения конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 2-4, включающий следующие стадии:

(1) получение интермедиата , где M, A1, A1’, W1, W1’, Y, Y’ и j1 имеют значения, указанные в любом из пп. 2-4, где

когда Y или Y’ отличен от прямой связи, то -Y-H или -Y’-H содержит терминальную аминогруппу,

когда Y или Y’ представляет собой прямую связь, то или содержит терминальную аминогруппу;

(2) введение ПЭГ с карбоксильной группой или активированной карбоксильной группой в реакцию амидирования с интермедиатом , получая конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство по любому из пп. 2-4.

11. Интермедиат для получения конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 5-7, где интермедиат выбран из следующих:

39-30 26-258

12. Способ получения конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 5-7, включающий следующие стадии:

(1) получение интермедиата , где M, A1, W1 и j1 имеют значения, указанные в любом из пп. 5-7, где содержит терминальную аминогруппу;

(2) введение ПЭГ с карбоксильной группой или активированной карбоксильной группой в реакцию амидирования с интермедиатом , получая конъюгированное с полиэтиленгликолем лекарственное средство по любому из пп. 5-7.

13. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью в подавлении опухоли, содержащая терапевтически и/или профилактически эффективное количество конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-8; композиция дополнительно содержит одно или больше фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.

14. Применение конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-8 в получении лекарственного средства для лечения и/или предотвращения заболевания, где заболевание выбрано из рака молочной железы и рака толстой кишки.

15. Способ лечения и/или предотвращения заболевания, включающий введение эффективного количества конъюгированного с полиэтиленгликолем лекарственного средства или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-8 пациенту, нуждающемуся в этом, где заболевание выбрано из рака молочной железы и рака толстой кишки.