CN111504887B - 一种溶血素及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种溶血素及其制备方法，包括水、碳酸氢钾、氯化铵和乙二胺四乙酸二钠，还包括牛血清白蛋白、甲醛和乙二醇。增添了蛋白保护剂BSA和甲醛，再加上保持细胞形态的乙二醇，跟现有配方相比，该溶血素适用于流式细胞术中使用，检测生物标志物时，减少了靶点蛋白的降解，从而提高了检测灵敏度，更加真实的体现了靶点蛋白的表达情况，另外乙二醇可以保证目标细胞不被破坏，更加完美的将不同类型细胞区分开。

Description

一种溶血素及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物化学技术领域，尤其涉及一种新型配方的溶血素及其制备方法。。

背景技术

溶血素是一种能使红细胞裂解并释放出血红蛋白的物质。现有的溶血素配方一般是采用氯化铵溶解在缓冲溶液中，最低会加入EDTA来增加细胞分散性。但是上述配方配置的溶血素的缺点在于：红细胞的裂解效果不好，经常出现红细胞裂解不完全现象，而且极易对目标细胞造成破坏，使其形态和颗粒度都发生一定的改变，导致细胞分群不明显。

因此本发明专利发明人，针对上述技术问题，旨在发明一种新型配方的溶血素及其制备方法。

发明内容

为克服上述缺点，本发明的目的在于提供一种溶血素及其制备方法。

为了达到以上目的，本发明采用的技术方案是：一种溶血素，包括水、碳酸氢钾（KHCO3）、氯化铵（NH4Cl）和乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2），还包括牛血清白蛋白（BSA）、甲醛（CH2O）和乙二醇（(CH2OH)2）。

优选地，1000ml的所述溶血素中含有1g碳酸氢钾，8.3g氯化铵，0.037g乙二胺四乙酸二钠，牛血清蛋白20g，甲醛溶液16mL，乙二醇溶液28mL。

优选地，所述甲醛溶液的甲醛的质量分数为37-40%，所述乙二醇的密度为1.115-1.118g/mL。

一种溶血素的制备方法，

S1，分别称取碳酸氢钾1g，氯化铵8.3g，乙二胺四乙酸二钠0.037g和牛血清白蛋白20g，放入容量瓶中；

S2，加入纯水800mL，充分溶解后调节混合溶液pH至7.2；

S3，分别加入甲醛溶液16mL和乙二醇溶液28mL，再用纯水定容至1000mL，充分摇匀；

S4，将步骤3中的溶液用一次性滤器过滤除杂质。

本发明一种溶血素及其制备方法的有益效果是，增添了蛋白保护剂BSA和甲醛，再加上保持细胞形态的乙二醇，跟现有配方相比，该溶血素适用于流式细胞术中使用，检测生物标志物时，减少了靶点蛋白的降解，从而提高了检测灵敏度，更加真实的体现了靶点蛋白的表达情况，另外乙二醇可以保证目标细胞不被破坏，更加完美的将不同类型细胞区分开。

附图说明

图1为实施例1中新批次的溶血素作用下的测试结果图。

图2为实施例1中旧批次的溶血素作用下的测试结果图。

图3为实施例2中新批次的溶血素作用下的测试结果图。

图4为实施例2中旧批次的溶血素作用下的测试结果图。

图5为实施例3中新批次的溶血素作用下的测试结果图。

图6为实施例4中旧批次的溶血素作用下的测试结果图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。

本实施例中的一种溶血素，包括水、碳酸氢钾（KHCO3）、氯化铵（NH4Cl）和乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2），还包括牛血清白蛋白（BSA）、甲醛（CH2O）和乙二醇（(CH2OH)2），1000ml的所述溶血素中含有1g碳酸氢钾，8.3g氯化铵，0.037g乙二胺四乙酸二钠，牛血清蛋白20g，甲醛溶液16mL，乙二醇溶液28mL，所述甲醛溶液的甲醛的质量分数为37-40%，所述乙二醇的密度为1.115-1.118g/mL。

按新旧配方分别适配溶血素。

按新配方及其制备方法制备溶血素：

S1，分别称取碳酸氢钾1g，氯化铵8.3g，乙二胺四乙酸二钠0.037g和牛血清白蛋白20g，放入容量瓶中；

S2，加入纯水800mL，充分溶解后调节混合溶液pH至7.2；

S3，分别加入甲醛溶液16mL和乙二醇溶液28mL，再用纯水定容至1000mL，充分摇匀；

S4，将步骤3中的溶液用一次性滤器过滤除杂质。

按旧配方及其制备方法制备溶血素：

S1,分别称取碳酸氢钾1.0g、氯化铵8.3g、EDTA-Na2 0.037g,加纯水至800mL充分溶解；

S2，调pH至7.2，加纯水定容至1000mL；

S3，将步骤2中的溶液用一次性滤器过滤除杂质。

实施例一，溶血素新旧配方下的红细胞裂解效果对比。

实验步骤：

取EDTA抗凝的人外周血100ul到流式管底，加入自产的CD45-PE-CY7（流式抗体试剂，检测血液中CD45蛋白表达）10ul到100ul的外周血的中，避光孵育20min，分别加入2ml的新旧溶血素,避光孵育10-15min,1000r/min离心5min,去上清，加200ul PBS混匀后用流式细胞仪上机检测。即，新旧溶血素作为变量进行对照实验。

实验结果参见附图1和2，通过流式质控发现,新的溶血素使用后白细胞占比77.81%，红细胞占比15.99%,白细胞和红细胞分群明显；而旧的溶血素使用后白细胞占比65.30%，红细胞占比19.60%，白细胞和红细胞之间出现少量重叠。通过新旧溶血素的对比，很明显能够看到，新的溶血素对于红细胞的裂解效果更优于旧的溶血素。

实施例二，溶血素新旧配方对粒单淋细胞区分效果对比

实验步骤：

取EDTA抗凝的人外周血100ul到流式管底，分别加入2ml的溶血素,避光孵育10-15min ,1000r离心5min,去上清，加200ul PBS混匀后用流式细胞仪上机检测。即新旧配方下的溶血素为变量，进行对照实验。

实验结果参见附图3和4，通过对比，新旧批次的溶血素裂红后，粒单淋分群都比较明显，但是旧批次淋巴细胞和红细胞分群不明显，原因是红细胞裂解不完全，从而新批次的效果更好。附图中的红为红细胞；白为白细胞；粒为中性粒细胞；单为单核细胞；淋为淋巴细胞，图4中的E9指淋巴细胞。

实施例三，溶血素新旧配方对蛋白靶标的检测效果对比

以CD3-FITC为例进行检测

实验步骤：

取EDTA抗凝的人外周血100ul到流式管底，加入自产的CD3-FITC 10ul 到100ul的外周血的中，避光孵育20min，分别加入2ml的溶血素,避光孵育10-15min ,1000r离心5min,去上清，加200ul PBS混匀后用流式细胞仪上机检测。即新旧配方下的溶血素为变量，进行对照实验。

实验结果参见附图5和 6，以CD3抗原为例，通过流式图明显能够看到新批次淋巴细胞分群良好，淋巴细胞占比较高，CD3-FITC的阳性比率达到65.67%；而旧批次淋巴细胞和红细胞分群较差，淋巴细胞占比较少，CD3-FITC的阳性比率只有61.67%。

通过上述三个实施例，可以看出增添了蛋白保护剂BSA和甲醛，再加上保持细胞形态的乙二醇，跟现有配方相比，该溶血素适用于流式细胞术中使用，检测生物标志物时，减少了靶点蛋白的降解，从而提高了检测灵敏度，更加真实的体现了靶点蛋白的表达情况，另外乙二醇可以保证目标细胞不被破坏，更加完美的将不同类型细胞区分开。

以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人了解本发明的内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (3)

1.一种溶血素，包括水、碳酸氢钾、氯化铵和乙二胺四乙酸二钠，其特征在于：还包括牛血清白蛋白、甲醛和乙二醇，1000ml的所述溶血素中含有1g碳酸氢钾，8.3g氯化铵，0.037g乙二胺四乙酸二钠，牛血清蛋白20g，甲醛溶液16mL，乙二醇溶液28mL。

2.根据权利要求1所述的一种溶血素，其特征在于：所述甲醛溶液的甲醛的质量分数为37-40％，所述乙二醇的密度为1.115-1.118g/mL。

3.一种溶血素的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，S1，分别称取碳酸氢钾1g，氯化铵8.3g，乙二胺四乙酸二钠0.037g和牛血清白蛋白20g，放入容量瓶中；

S2，加入纯水800mL，充分溶解后调节混合溶液pH至7.2；

S3，分别加入甲醛溶液16mL和乙二醇溶液28mL，再用纯水定容至1000mL，充分摇匀；

S4，将步骤3中的溶液用一次性滤器过滤除杂质。

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