CN112305232A - 血液与特定蛋白的混合质控物及其质控方法 - Google Patents

血液与特定蛋白的混合质控物及其质控方法 Download PDF

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宋瑞霞
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Abstract

本发明公开了一种混合质控物，包括五分类白细胞模拟物至少两种特定蛋白抗原。这种混合质控物选择至少两种特定蛋白和五分类白细胞模拟物进行联用，在应用于五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪时，能够同时完成对血常规和两种特定蛋白的监测。这种混合质控物可以用于五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪的日常质控，监控和评价分析仪检测结果的精密度。本发明还公开了上述混合质控物的质控方法。

Description

血液与特定蛋白的混合质控物及其质控方法
技术领域
本发明涉及血液检测领域，特别是涉及一种血液与特定蛋白的混合质控物及其质控方法。
背景技术
一些特定蛋白，如CRP(C反应蛋白)和SAA(血清蛋白样蛋白A)检测是作为诊断急性感染、心血管疾病以及癌症等十分有效的指标。SAA(血清淀粉样蛋白A)与CRP相仿，用以评估急性相反应进程。SAA与CRP在不同的感染种类，如病毒感染和细菌感染，和不同的感染阶段，如早期和中期的反应是不一致的。通过血常规、CRP和SAA的联合检测，可以更加及时准确反应感染的种类和阶段，提供更优的治疗方案。当这两种特定蛋白，与血常规检测联用时，可以有效地鉴别感染原的种类，提供针对性的治疗方案。现市面上已经出现五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪，但没有同时对血常规和至少两种特定蛋白的进行质控的质控物。
现在有多种五分类血常规质控物的实现方法，一般采用人或动物的红细胞、白细胞等加工后模拟质控物中的红细胞、白细胞以及血小板等无法完成同时对血常规和CRP的监测。
美国专利6548646公开了一种CRP质控物的制备方法，其基于血清或者血浆基质，在配套的分析仪上检测时，重复性等性能表现较好。该质控品也无法完成同时对血常规和CRP的监测。
目前，需要有一种针对同时进行血常规和至少两种特定蛋白检测的分析仪的质控品，用于这种仪器的质量控制。
发明内容
基于此，有必要提供一种特定蛋白抗原和五分类白细胞模拟物联用的血液特定蛋白混合质控物。
此外，还有必要提供一种上述血液特定蛋白混合质控物的质控方法。
一种血液与特定蛋白的混合质控物，包括五分类白细胞模拟物和至少两种特定蛋白抗原。
在一个实施例中，特定蛋白抗原选自CRP抗原，血清淀粉样蛋白抗原，降钙素原抗原，白细胞介素-6抗原，人绒毛膜促性腺激素抗原，生长激素抗原，黄体生成素抗原，甲胎蛋白抗原以及癌胚抗原中的至少两种。
在一个实施例中，特定蛋白抗原为CRP抗原和血清淀粉样蛋白抗原；优选的，所述CRP抗原在所述血液与特定蛋白的混合质控物中的浓度为1mg/L～100mg/L，所述血清淀粉样蛋白抗原在所述血液与特定蛋白的混合质控物中的浓度为2mg/L～200mg/L。
在一个实施例中，特定蛋白抗原为CRP抗原和血清淀粉样蛋白抗原，CRP抗原和血清淀粉样蛋白抗原的比例为1∶2～1∶2.5。
进一步的，所述血液与特定蛋白的混合质控物还包括基质保存液，所述基质保存液采用缓冲液配制，所述基质保存液中含有水溶性蛋白质、多羟基化合物以及小分子氨基酸和表面活性剂，优选的，表面活性剂为非离子表面活性剂，浓度为0.005％-5％，例如0.005-1％；更优选的表面活性剂选自Triton X-100、吐温20、吐温40、吐温60或吐温80。优选的，所述基质保存液中含有浓度为0.1g/L～10g/L的水溶性蛋白质、1g/L～50g/L的多羟基化合物以及1g/L～50g/L的小分子氨基酸。
进一步的，五分类白细胞模拟物包括嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞，所述五分类白细胞模拟物的浓度为1×109个/L～30×109个/L。所述五分类白细胞模拟物为哺乳动物白细胞。
进一步的，质控物还包括红细胞模拟物，所述红细胞模拟物的浓度为1×1012个/L～6×1012个。所述红细胞模拟物为人红细胞。
进一步的，质控物还包括血小板模拟物，所述血小板模拟物的浓度为10×109个/L～1000×109个/L。所述血小板模拟物为哺乳动物血小板或红细胞。
进一步的，所述缓冲液为柠檬酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液；所述水溶性蛋白质为牛血清蛋白或人血清白蛋白；所述多羟基化合物为甘露醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖或海藻糖；所述小分子氨基酸为甘氨酸、赖氨酸、小分子多肽或肽多糖。
一种血液与特定蛋白的混合质控物的质控方法，包括如下步骤：
提供血液与特定蛋白的混合质控物，所述血液与特定蛋白的混合质控物包括五分类白细胞模拟物和至少两种特定蛋白抗原；
提供五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪；
提供待测血液样本；
分析所述血液与特定蛋白的混合质控物在所述五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪上得到的白细胞计数和至少两种特定蛋白抗原读数；以及
分析所述待测血液样本在所述五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪上得到的白细胞计数和所述至少两种特定的蛋白抗原读数。
进一步的，混合质控物为前述的血液与特定蛋白的混合质控物。
这种血液特定蛋白混合质控物含有至少两种特定蛋白抗原和五分类白细胞模拟物，在应用于五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪时，能够同时完成对血常规和至少两种特定蛋白的监测。这种血液特定蛋白混合质控物可以用于五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪的日常质控，监控和评价分析仪检测结果的精密度。
附图说明
图1为一实施方式的血液与特定蛋白的混合质控物的质控方法的流程图；
图2为实施例1制得的嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪Diff通道检测得到的分类散点图，横坐标表示侧向散射光强度，纵坐标表示前向散射光强度；
图3为实施例1制得的嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪Baso通道检测得到的直方图；
图4为实施例1制得的嗜酸性粒细胞在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪Diff通道检测得到的分类散点图，横坐标表示侧向散射光强度，纵坐标表示前向散射光强度；
图5为实施例1制得的红细胞模拟物在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪RBC通道检测得到的直方图；
图6为实施例1制得的血小板模拟物在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪PLT通道检测得到的直方图；
图7为实施例1制得的混合质控物在迈瑞全血CRP分析仪Diff通道检测得到的分类散点图；
图8为实施例1制得的混合质控物在迈瑞全血CRP分析仪Baso通道检测得到的直方图；
图9为实施例2制得的淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪Diff通道检测得到的分类散点图，横坐标表示侧向散射光强度，纵坐标表示前向散射光强度；
图10为实施例2制得的淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪Baso通道检测得到的直方图；
图11为实施例2制得的嗜中性粒细胞在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪Diff通道检测得到的分类散点图，横坐标表示侧向散射光强度，纵坐标表示前向散射光强度；
图12为实施例2制得的嗜酸性粒细胞在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪Diff通道检测得到的分类散点图，横坐标表示侧向散射光强度，纵坐标表示前向散射光强度；
图13为实施例2制得的红细胞模拟物在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪RBC通道检测得到的直方图；图14为实施例2制得的血小板模拟物在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪PLT通道检测得到的直方图；
图15为实施例2制得的混合质控物在迈瑞全血CRP分析仪Diff通道检测得到的分类散点图；
图16为实施例2制得的混合质控物在迈瑞全血CRP分析仪Baso通道检测得到的直方图；
图17为实施例3制得的混合质控物在迈瑞BC-55/58系列血细胞分析仪Diff通道检测得到的分类散点图，横坐标表示侧向散射光强度，纵坐标表示前向散射光强度；
图18为实施例3制得的混合质控物在迈瑞BC-55/58系列血细胞分析仪Baso通道检测得到的分类散点图，横坐标表示侧向散射光强度，纵坐标表示前向散射光强度；
图19为实施例3制得的混合质控物在迈瑞全血CRP分析仪Diff通道检测得到的分类散点图；
图20为实施例3制得的混合质控物在迈瑞全血CRP分析仪Baso通道检测得到的直方图；
图21为实施例4制得的混合质控物在迈瑞BC-68系列血细胞分析仪Baso通道检测得到的分类散点图，横坐标表示侧向散射光强度，纵坐标表示荧光强度；
图22为实施例4制得的混合质控物在迈瑞BC-68系列血细胞分析仪Baso通道检测得到的分类散点图，横坐标表示侧向散射光强度，纵坐标表示前向散射光强度；
图23为实施例4制得的混合质控物在SYSMEX XE系列血细胞分析仪Baso通道检测得到的分类散点图，横坐标表示侧向散射光强度，纵坐标表示荧光强度；
图24为实施例4制得的混合质控物在SYSMEX XE系列血细胞分析仪Baso通道检测得到的分类散点图，横坐标表示侧向散射光强度，纵坐标表示前向散射光强度；
图25为实施例4制得的混合质控物在迈瑞全血CRP分析仪Diff通道检测得到的分类散点图；
图26为实施例4制得的混合质控物在迈瑞全血CRP分析仪Baso通道检测得到的直方图；
图27A为实施例5制得的混合物质控物在迈瑞全血CRP/SAA分析仪DIFF通道检测得到的分类散点图；
图27B为实施例5制得的混合物质控物在迈瑞全血CRP/SAA分析仪WNB通道检测得到的分类散点图；
图28A为实施例6制得的混合物质控物在迈瑞全血CRP/SAA分析仪DIFF通道检测得到的分类散点图；
图28B为实施例6制得的混合物质控物在迈瑞全血CRP/SAA分析仪WNB通道检测得到的分类散点图；
图29A为实施例7制得的混合物质控物在迈瑞全血CRP/SAA分析仪DIFF通道检测得到的分类散点图；
图29B为实施例7制得的混合物质控物在迈瑞全血CRP/SAA分析仪WNB通道检测得到的分类散点图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
当选择两种特定蛋白抗原，例如CRP抗原、SAA抗原和五分类白细胞模拟物进行联用时，一般认为两种抗原的存在，会影响各类细胞模拟物的稳定性，而且两个抗原可能也会相互影响。申请人经过研究，发现CRP抗原和SAA抗原对白细胞模拟物基本没有影响，使用合适的基质，抗原获得长期稳定的五分类白细胞、SAA抗原和CRP抗原的复合血液质控品，一个质控品即可完成血常规检测和至少两种特定蛋白检测的质控，使用方便且结果更准确。
一实施方式的混合质控物，包括五分类白细胞模拟物、CRP抗原、SAA抗原、红细胞模拟物、血小板模拟物和基质保存液。
将五分类白细胞模拟物、CRP抗原、SAA抗原、红细胞模拟物和血小板模拟物分别保存在基质保存液中，接着按比例混合，即可得到所需的混合质控物。
在其他的实施方式中，红细胞模拟物和血小板模拟物均可以省略。
CRP抗原可以选用纯化的人CRP抗原，或者商品化的CRP抗原，其在使用免疫比浊法的分析仪上检测时，可知CRP浓度，或者通过溯源方式得知浓度。混合质控物中，CRP抗原的浓度可以为1mg/L～100mg/L。SAA抗原也可以选用纯化的人SAA抗原，或者商品化的CRP抗原，SAA抗原的浓度可以为2mg/L～200mg/L。优选地，选用纯化的人特定蛋白抗原，其在使用免疫比浊法的分析仪上检测时，可准确表征CRP和SAA。在混合质控物中，CRP抗原和血清淀粉样蛋白抗原的比例为1∶2～1∶2.5，提供三个浓度水平的，符合临床需求的质控品。
混合质控物中，五分类白细胞模拟物的浓度为1×109个/L～30×109个/L。五分类白细胞模拟物包括嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞，以模拟血液中白细胞的性质。
本申请的五分类白细胞模拟物，含有白细胞的五个亚型细胞，能够模拟白细胞的性质，在全自动血液分析仪上散射光或荧光信号检测中，被区分开，展现白细胞五分类的结果。这种五分类白细胞模拟物在使用荧光、激光散射及电阻抗方法的血细胞分析仪上可准确模拟人白细胞。
该五分类白细胞模拟物可以通过如下操作制备得到：取新鲜抗凝血，裂解红细胞后，分离洗涤白细胞，适当固定后，可以得到白细胞一个或多个细胞亚型的模拟物，调整各亚型的浓度后混合得到目标浓度的五分类白细胞模拟物。此外，也有文献公开了从鸟类、爬行动物或哺乳动物的红细胞制备白细胞模拟物，或者白细胞各亚型的方法。一些动物的白细胞和人类白细胞性质有所差异，可以通过渗透压、辅助试剂以及温度等条件调节细胞体积及细胞内颗粒复杂程度，再固定来模拟人类的白细胞各亚型。基本上，能在散射光检测信号中模拟白细胞各亚型的模拟物均可制备本申请的五分类白细胞模拟物。
本实施方式中，五分类白细胞模拟物可以由人类血液中的白细胞或者与人白细胞类似的哺乳动物白细胞制备，一般包括：牛白细胞、猪白细胞、羊白细胞、马白细胞、兔白细胞等。
本实施方式中，五分类白细胞模拟物的操作可以为：取新鲜EDTA抗凝血，用Tris-NH4Cl溶液溶解红细胞，离心分离白细胞，弃上清，再用PBS洗涤白细胞2次，得到嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞以及嗜碱性粒细胞；取新鲜EDTA抗凝血，离心后吸去上清中的血浆以及脂肪等，用Tris-NH4Cl溶液溶解沉淀的红细胞，离心分离白细胞，弃上清，再使用Tris-NH4Cl溶液溶解残留红细胞，离心分离白细胞，弃上清，用PBS洗涤牛白细胞2次，得到嗜酸性粒细胞；将嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞以及嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞混合，得到五分类白细胞模拟物。
在另一个具体实施方式中，混合质控物还可以含有红细胞模拟物，红细胞模拟物的浓度为1×1012个/L～6×1012个。红细胞模拟物可以由人红细胞制备，取新鲜的抗凝血，除去白细胞和血小板后，通过合适的溶液调整和固定红细胞，获得红细胞模拟物。例如，过滤去除血液中的白细胞和血小板得到悬浮的红细胞后，使用强氧化剂及低浓度的醛类处理红细胞来稳定细胞膜并减缓代谢，再固定后制备红细胞模拟物。这种红细胞模拟物既可在使用荧光及电阻抗方法的血细胞分析仪上模拟红细胞，还可保证被溶血，而不干扰白细胞及特定蛋白的测量。
在另一个具体实施方式中，混合质控物还可以含有血小板，血小板模拟物的浓度为10×109个/L～1000×109个/L。血小板模拟物可以由与人血小板类似的哺乳动物血小板或哺乳动物红细胞制备，一般包括：牛血小板、猪血小板、羊血小板、马血小板、羊红细胞等。
血小板模拟物可以通过如下操作制备得到：取新鲜柠檬酸抗凝血，静置过夜，分层后取上清中低速离心，取上清，再高速离心弃上清，用柠檬酸-PEG缓冲液洗涤沉淀2次，并取部分上清，将搜集的上清合并，得到血小板；调节血小板的密度后固定，固定完成后离心并弃上清，洗涤后得到血小板模拟物。
这种血小板模拟物可在使用荧光及电阻抗方法的血细胞分析仪上准确模拟血小板。
在另一个具体实施方式中，混合质控物还含有基质保存液，为各细胞的模拟物和特定蛋白抗原提供微环境，基质保存液采用缓冲液配制，基质保存液中含有水溶性蛋白质、多羟基化合物以及小分子氨基酸。一般的，基质保存液可以为含有浓度为0.1g/L～10g/L的水溶性蛋白质、1g/L～50g/L的多羟基化合物以及1g/L～50g/L的小分子氨基酸。
基质保存液中含有水溶性蛋白质、多羟基化合物以及小分子氨基酸，一方面可以模拟人血液的各项生理条件，另一方面降低了五分类白细胞模拟物、红细胞模拟物和血小板模拟物的免疫原性，避免了CRP抗原等特定蛋白抗原与其产生免疫反应。
缓冲液可以为柠檬酸盐缓冲液(CPBS)或磷酸盐缓冲液(PBS)。水溶性蛋白质为牛血清蛋白或人血清白蛋白。多羟基化合物为甘露醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖或海藻糖。小分子氨基酸为甘氨酸、赖氨酸、小分子多肽或肽多糖。
小分子多肽一般指由氨基酸构成的无蛋白质二级或三级结构的高活性肽。
申请人通过研究发现，这几种物质配伍效果好，添加多羟基化合物如乳糖、葡萄糖等为细胞提供能量，添加细胞稳定剂如甘露醇、海藻糖等，小分子氨基酸如甘氨酸、小分子多肽等能模拟人血液的各项生理条件，且不与细胞及抗原等发生反应，同时作为保护试剂，可保证各细胞稳定存在。再添加水溶性蛋白质，封闭细胞表面的抗原结合位点，避免细胞与特定蛋白抗原发生反应，以及添加一定的表面活性剂，在不损伤细胞的同时，能增强特定蛋白抗原的可溶性，保证抗原在类血清基质中稳定存在。同时添加防腐试剂如氯霉素，尼泊金酯等，能提供抑菌系统，保证质控物长时间的保存。
优选的，在此基础上，增加表面活性剂，特别是非离子表面活性剂，例如TritonX100、吐温20、吐温40或吐温80，控制好表面活性剂的用来，即控制其溶解细胞的能力，意外发现，这样的基质保存液，一方面能降低新加的一个特定蛋白抗原对模拟细胞的影响，另一方面减少两种特定蛋白抗原间的相互影响，使得血常规质控品、CRP抗原和SAA抗原在单一质控物中长期保存。
这种混合质控物含有至少两种特定蛋白抗原和五分类白细胞模拟物，在应用于五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪时，能够同时完成对血常规和至少两种特定蛋白的监测。这种混合质控物可以用于五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪的日常质控，监控和评价分析仪检测结果的精密度。
如图1所示的上述血液与特定蛋白的混合质控物的质控方法，包括如下步骤：
S10、血液与特定蛋白的混合质控物。
血液与特定蛋白的混合质控物如上所述。
S20、提供五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪。
本实施方式中，五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪选择为迈瑞全血CRP分析仪。
S30、提供待测血液样本。
待测血液样本经过常规处理得到。
本实施方式中，S10、S20和S30之间的顺序可以互换，没有先后的区别。
S40、分析S10得到的血液与特定蛋白的混合质控物在S20得到的五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪上得到的白细胞计数和至少一种特定蛋白抗原读数。
S50、分析S30得到的待测血液样本在S20得到的五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪上得到的白细胞计数和至少一种特定蛋白抗原读数。
这种血液与特定蛋白的混合质控物可以用于五分类血常规与CRP联合检测的分析仪的日常质控，监控和评价分析仪检测结果的精密度。
在本实施例中，以特定蛋白抗原为CRP抗原为例。本领域技术人员能够理解，本文中的C-反应蛋白是临床上需要检测的特定蛋白的一种，其他可以用与C-反应蛋白类似方法学检测的特定蛋白还有血清淀粉样蛋白A(简称SAA)、降钙素原(简称PCT)、白细胞介素-6(简称IL-6)人绒毛膜促性腺激素、生长激素、黄体生成素、甲胎蛋白以及癌胚抗原等。当这些和CRP测量原理类似的特定蛋白需要和血常规在一个仪器上，利用同一次采血完成测定的情况下，也存在和CRP相同的技术问题，也可以用本申请的方案来解决。
下面为具体实施例。
除非特别说明，实施例中使用的到的仪器、设备和溶液均为常规选择。实施例中，血细胞分析仪为迈瑞BC-53系列、BC-55/58系列、BC-68系列以及SYSMEX XE系列血细胞分析仪，五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪为迈瑞全血CRP/SAA分析仪，CRP抗原购自罗氏诊断产品上海有限公司，规格为1000-3000mg/L，SAA抗原购自海肽生物科技(上海)有限公司，抗原浓度1000-3000mg/L。
实施例1
本实施例中使用的基质保存液采用PBS配制含有浓度为1g/L的牛血清蛋白、2g/L的乳糖、2g/L的甘露醇、7g/L的海藻糖、3g/L的甘氨酸、5g/L的多聚赖氨酸以及0.1g/L的氯霉素。
1、五分类白细胞模拟物的制备。
(1)嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的制备。
取新鲜EDTA抗凝牛血，用Tris-NH4Cl溶液溶解红细胞，离心分离牛白细胞，弃上清。再用PBS洗涤白细胞2次，并调节细胞密度至约1.5×1010个/升。
分别加入终浓度为1％的甲醛30℃固定白细胞20h，再加入终浓度为0.025％的戊二醛30℃固定白细胞4.5h。
离心固定后白细胞，弃上清，同等条件下用PBS再洗涤2次，得到的嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞用基质保存液进行保存。
如图2所示，制得的嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪Diff通道检测时，出现了3群较为明显的散点，此3群粒子在前向散射光(FS)测量的细胞体积，以及侧向散射光(SS)测量的颗粒复杂度上均有不同程度的区分，可以被准确地划分为淋巴细胞、单核细胞和嗜中性粒细胞。
如图3所示，制得的嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪Baso通道检测时，嗜碱性粒细胞出现在图3靠右的位置。
结合图2和图3，制得的嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞可以在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪上分别被准确的监控计数。
(2)嗜酸性粒细胞的制备。
取新鲜EDTA抗凝牛血，离心后吸去上清中的血浆以及脂肪等，用Tris-NH4Cl溶液溶解沉淀的红细胞，离心分离牛白细胞，弃上清。再使用Tris-NH4Cl溶液溶解残留红细胞，离心分离牛白细胞，弃上清。用PBS洗涤牛白细胞2次，并调节细胞密度至约1.5×1010个/升。
加入终浓度为1％的戊二醛30℃过夜固定白细胞。离心固定后白细胞，弃上清，同等条件下用PBS再洗涤2次，得到的嗜酸性粒细胞用基质保存液进行保存。
如图4所示，制得的嗜酸性粒细胞在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪Diff通道检测时，其细胞聚集性较好，在前向散射光(FS)与侧向散射光(SS)均有十分明显的信号，可在血细胞分析仪上被准确地划分为嗜酸性粒细胞，从而监控嗜酸性粒细胞的计数。
(3)得到五分类白细胞模拟物。
将(1)制得的嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞以及(2)制得的嗜酸性粒细胞按照体积比为10∶1混合，得到保存在基质保存液中的五分类白细胞模拟物。
2、红细胞模拟物的制备。
取人悬浮红细胞，使用白细胞过滤器过滤白细胞、血小板等，向过滤后的悬浮红细胞中加入终浓度分别为0.06％的重铬酸钾以及0.0125％的戊二醛，室温处理2h，离心后弃上清，并用生理盐水以及基质保存液在上述条件下各洗涤一次，得到的红细胞模拟物保存至基质保存液中。
如图5所示，制得的红细胞模拟物在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪RBC通道检测时，通过电阻抗方法可以表征红细胞的体积分布等信息，在血细胞分析仪上被准确识别为红细胞，从而监控红细胞相关参数。
3、血小板模拟物的制备。
取新鲜柠檬酸抗凝猪血，静置过夜，分层后取上清中低速离心，取上清，再高速离心弃上清，用柠檬酸-PEG缓冲液洗涤沉淀2次，并取部分上清，将搜集的上清合并。调整血小板计数至1×1012个/升，加入终浓度为0.015％的戊二醛，室温反应30min，离心固定后血小板，弃上清，再用柠檬酸-PEG缓冲液洗涤2次，得到的血小板模拟物保存至基质保存液中。
如图6所示，制得的血小板模拟物在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪PLT通道检测时，通过电阻抗方法可以表征血小板的体积分布等信息，在血细胞分析仪上被准确识别为血小板，从而监控血小板相关参数。
4、混合质控。
将制得的五分类白细胞模拟物、红细胞模拟物、血小板模拟物和高纯度CRP抗原以基质保存液为调节试剂，配制成为混合质控物。其中，CRP抗原的浓度如表1所示，五分类白细胞模拟物、红细胞模拟物、血小板模拟物和基质保存液的体积比为2∶30∶1∶67。
制得的混合质控物使用迈瑞全血CRP分析仪通过免疫比浊方法检测CRP，CRP结果如下表1所示，混合后Diff散点图及Baso直方图分别如图7和图8所示。
表1：实施例1制得的混合质控物的CRP检测结果对照表。
理论浓度 实际测试浓度 相对偏差
CRP浓度1 5.71 5.95 4.20％
CRP浓度2 22.86 26.28 14.96％
CRP浓度3 45.71 47.50 3.92％
结合表1、图7和图8，可以看出，实施例1制得的混合质控物使用迈瑞全血CRP分析仪测试时，既能完全保留五分类血常规质控物的所有特征，还能准确表征CRP。
实施例2
本实施例中使用的基质保存液采用PBS配制，含有2g/L的牛血清蛋白、1g/L的葡萄糖、2g/L的蔗糖、8g/L的海藻糖、2g/L的甘露醇、5g/L的赖氨酸、5g/L的肽多糖以及0.1g/L的硫酸卡那霉素。
1、五分类白细胞模拟物的制备。
(1)淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的制备。
取新鲜EDTA抗凝猪血，静置过夜，分层后取上清离心，弃上清，用Tris-NH4Cl溶液溶解红细胞，离心分离猪白细胞，再用PBS洗涤沉淀2次，并调整计数至10×1010个/升。将浓缩的猪白细胞与细胞分离液按2∶1混合，中低速离心，取中间层白细胞用PBS洗涤2次后调整计数至约1.5×1010个/升。
分别加入终浓度为1％的甲醛30℃固定白细胞20h，再加入终浓度为0.025％的戊二醛30℃固定白细胞4.5h。
离心固定后白细胞，弃上清，同等条件下用PBS再洗涤2次，得到的淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞用基质保存液进行保存。
如图9所示，制备的淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪Diff通道检测时，出现了2群较为明显的散点，此2群粒子在前向散射光(FS)测量的细胞体积，以及侧向散射光(SS)测量的颗粒复杂度上均有不同程度的区分，可以被准确地划分为淋巴细胞和单核细胞。
如图10所示，制备的淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪Baso通道检测时，嗜碱性粒细胞出现在直方图靠右的位置。
结合图9和图10，制得的淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞可以在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪上分别被准确的监控计数。
(2)嗜中性粒细胞的制备。
取新鲜EDTA抗凝牛血，离心后吸去上清中的血浆以及脂肪等，用Tris-NH4Cl溶液溶解沉淀的红细胞，离心分离牛白细胞，弃上清。再使用Tris-NH4Cl溶液溶解残留红细胞，离心分离牛白细胞，弃上清。用PBS洗涤牛白细胞2次，并调节细胞密度至大约1.5×1010个/升。
分别加入终浓度为1％的甲醛30℃固定白细胞20h，再加入终浓度为0.025％的戊二醛30℃固定白细胞4.5h。
离心固定后白细胞，弃上清，同等条件下用PBS再洗涤2次，得到的嗜中性粒细胞用基质保存液进行保存。
如图11所示，制备的嗜中性粒细胞在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪Diff通道检测时，其细胞聚集性较好，在前向散射光(FS)与侧向散射光(SS)均有十分明显的信号，可在血细胞分析仪上被准确地划分为嗜中性粒细胞，从而监控嗜中性粒细胞计数。
(3)嗜酸性粒细胞的制备。
取新鲜EDTA抗凝猪血，静置过夜，分层后取上清离心，弃上清，用Tris-NH4Cl溶液溶解红细胞，离心分离猪白细胞，再用PBS洗涤沉淀2次，并调整计数至10×1010个/升。将浓缩的猪白细胞与细胞分离液按1∶1混合，中低速离心，取底层白细胞用PBS洗涤2次后调整计数至约1.5×1010个/升。
加入终浓度为1％的戊二醛30℃过夜固定白细胞。离心固定后白细胞，弃上清，同等条件下用PBS再洗涤2次，得到的嗜酸性粒细胞用基质保存液进行保存。
如图12所示，上述方法制备的嗜酸性粒细胞在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪Diff通道检测时，其细胞聚集性较好，在前向散射光(FS)与侧向散射光(SS)均有十分明显的信号，可在血细胞分析仪上被准确地划分为嗜酸性粒细胞，从而监控嗜酸性粒细胞计数。
(4)得到五分类白细胞模拟物。
将(1)制得的淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞、(2)制得的嗜中性粒细胞以及(3)制得的嗜酸性粒细胞按照体积比为3∶2∶1混合，得到保存在基质保存液中的五分类白细胞模拟物。
2、红细胞模拟物的制备。
取人悬浮红细胞，使用白细胞过滤器过滤白细胞及血小板等，向滤后的悬浮红细胞中加入终浓度分别为0.05％的亚硝酸钠以及0.0125％的戊二醛，室温处理2h后，离心后弃上清，并用生理盐水以及保存液在上述条件下各洗涤一次，得到的红细胞模拟物用基质保存液进行保存。
如图13所示，制得的红细胞模拟物在迈瑞BC-53系列血细胞分析仪RBC通道检测时，通过电阻抗方法可以表征红细胞的体积分布等信息，在血细胞分析仪上被准确识别为红细胞，从而监控红细胞相关参数。
3、血小板模拟物的制备。
取抗凝羊血，使用白细胞过滤器过滤白细胞等，向5％的NaCl溶液中加入滤后羊血，调整血小板计数至1×1012个/升，并分别加入终浓度为0.1％的甲醛和0.05％的戊二醛，室温反应15min，用5倍体积生理盐水终止反应，并用生理盐水洗涤3次，得到的血小板模拟物保存至保存液中。
如图14所示，制得的血小板模拟物在血细胞分析仪PLT通道检测时，通过电阻抗方法可以表征血小板的体积分布等信息，在血细胞分析仪上被准确识别为血小板，从而监控血小板相关参数。
4、CRP复合质控。
将制得的五分类白细胞模拟物、红细胞模拟物、血小板模拟物和高纯度CRP抗原以基质保存液为调节试剂，配制成为混合质控物。其中，CRP抗原的浓度如表2所示，五分类白细胞模拟物、红细胞模拟物、血小板模拟物和基质保存液的体积比为2∶20∶1∶10。
制得的混合质控物使用迈瑞全血CRP分析仪通过免疫比浊方法检测CRP，CRP结果如下表2所示，混合后Diff散点图及Baso直方图分别如图15和图16所示。
表2：实施例2制得的混合质控物的CRP检测结果对照表。
理论浓度 实际测试浓度 相对偏差
CRP浓度1 5.71 5.51 -3.50％
CRP浓度2 22.86 25.34 10.85％
CRP浓度3 45.71 43.95 -3.85％
结合表2、图15和图16，可以看出，实施例2制得的混合质控物使用迈瑞全血CRP分析仪测试时，既能完全保留五分类血常规质控物的所有特征，还能准确表征CRP。
实施例3
本实施例中使用的基质保存液采用CPBS配制，含有1g/L的牛血清蛋白、5g/L的乳糖、2g/L的蔗糖、5g/L的海藻糖、2g/L的甘露醇、5g/L的甘氨酸、5g/L的肽多糖、以及0.2g/L的尼泊金酯。
1、五分类白细胞模拟物的制备。
(1)嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的制备。
同实施例1中嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的制备。
(2)嗜酸性粒细胞的制备。
同实施例1中嗜酸性粒细胞的制备。(3)得到五分类白细胞模拟物。
将(1)制得的嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞以及(2)制得的嗜酸性粒细胞按照体积比为6∶1混合，得到保存在基质保存液中的五分类白细胞模拟物。
2、红细胞模拟物的制备。
同实施例1中红细胞模拟物的制备。
3、血小板模拟物的制备。
同实施例1中血小板模拟物的制备。
4、CRP复合质控。
将制得的五分类白细胞模拟物、红细胞模拟物、血小板模拟物和高纯度CRP抗原以基质保存液为调节试剂，配制成为混合质控物。其中，CRP抗原的浓度如表3所示，五分类白细胞模拟物、红细胞模拟物、血小板模拟物和基质保存液的体积比为2∶11∶1∶1。
制得的混合质控物使用迈瑞全血CRP分析仪通过免疫比浊方法检测CRP，CRP结果如下表3所示，混合后的全血CRP质控物在迈瑞BC-55/58系列血细胞分析仪Diff及Baso散点图分别如图17和图18所示，在迈瑞全血CRP分析仪Diff散点图及Baso直方图分别如图19和图20所示。
表3：实施例3制得的混合质控物的CRP检测结果对照表。
理论浓度 实际测试浓度 相对偏差
CRP浓度1 5.71 5.50 -3.68％
CRP浓度2 22.86 25.31 10.72％
CRP浓度3 45.71 44.34 -3.00％
结合表3、图17、图18、图19和图20，可以看出，实施例3制得的混合质控物使用迈瑞BC-55/58系列血细胞分析仪和迈瑞全血CRP分析仪测试时，既能完全保留五分类血常规质控物的所有特征，还能准确表征CRP。
实施例4
本实施例中使用的基质保存液采用PBS配制，2g/L的牛血清蛋白、2g/L的葡萄糖、3g/L的乳糖、3g/L的甘露醇、5g/L的海藻糖、5g/L的多聚赖氨酸、5g/L的肽多糖以及0.2g/L的尼泊金酯。
1、五分类白细胞模拟物的制备。
(1)嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的制备。
同实施例1中嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的制备。
(2)嗜酸性粒细胞的制备。
同实施例1中嗜酸性粒细胞的制备。
(3)得到五分类白细胞模拟物。
将(1)制得的嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞以及(2)制得的嗜酸性粒细胞按照体积比为8∶1混合，得到保存在基质保存液中的五分类白细胞模拟物。
2、红细胞模拟物的制备。
同实施例1中红细胞模拟物的制备。
3、血小板模拟物的制备。
同实施例1中血小板模拟物的制备。
4、CRP复合质控。
将制得的五分类白细胞模拟物、红细胞模拟物、血小板模拟物和高纯度CRP抗原以基质保存液为调节试剂，配制成为混合质控物。其中，CRP抗原的浓度如表4所示，五分类白细胞模拟物、红细胞模拟物、血小板模拟物和基质保存液的体积比为1∶10∶1∶8。
制得的混合质控物使用迈瑞全血CRP分析仪通过免疫比浊方法检测CRP，CRP结果如下表4所示，混合后的全血CRP质控物在迈瑞BC-68系列血细胞分析仪Diff及Baso散点图分别如图21和图22所示，在SYSMEX XE系列血细胞分析仪Diff及Baso散点图分别如图23和图24所示，迈瑞全血CRP分析仪Diff散点图及Baso直方图分别如图25和图26所示。
表4：实施例4制得的混合质控物的CRP检测结果对照表。
理论浓度 实际测试浓度 相对偏差
CRP浓度1 5.71 5.84 2.28％
CRP浓度2 22.86 26.14 14.35％
CRP浓度3 45.71 45.43 -0.61％
结合表4、图21、图22、图23、图24、图25和图26，可以看出，实施例4制得的混合质控物使用迈瑞BC-68系列血细胞分析仪、SYSMEX XE系列血细胞分析仪和迈瑞全血CRP分析仪测试时，既能完全保留五分类血常规质控物的所有特征，还能准确表征CRP。说明实施例4制备的混合质控物应用在其他品牌的血细胞分析仪上时，也具有显著的五分类效果。
实施例5
本实施例中使用的基质保存液同实施例1的基质保存液。
1、五分类白细胞模拟物的制备。
(1)嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的制备。
同实施例1中嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的制备。
(2)嗜酸性粒细胞的制备。
同实施例1中嗜酸性粒细胞的制备。
(3)得到五分类白细胞模拟物。
将(1)制得的嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞以及(2)制得的嗜酸性粒细胞按照体积比为8∶1混合，得到保存在基质保存液中的五分类白细胞模拟物。
2、红细胞模拟物的制备。
同实施例1中红细胞模拟物的制备。
3、血小板模拟物的制备。
同实施例1中血小板模拟物的制备。
4、混合质控物。
将制得的五分类白细胞模拟物、红细胞模拟物、血小板模拟物、高纯度CRP抗原和SAA抗原以基质保存液为调节试剂，配制成为混合质控物。其中，CRP抗原和SAA抗原的浓度如表5所示，五分类白细胞模拟物、红细胞模拟物、血小板模拟物和基质保存液的体积比为1∶10∶1∶8。
制得的混合质控物使用迈瑞全血CRP/SAA分析仪通过免疫比浊方法检测CRP和SAA，结果如下表5所示，混合后的全血CRP质控物在迈瑞全血CRP/SAA分析仪Diff及WNB散点图分别如图27A和图27B所示。
表5：实施例5制得的混合质控物的CRP和SAA检测结果对照表。
Figure BDA0002149787500000181
Figure BDA0002149787500000191
结合表5、图27A和27B，可以看出，实施例5制得的混合质控物使用在使用全血CRP/SAA分析仪测试时，既能完全保留五分类血常规质控物的所有特征，还能较准确表征CRP和SAA。说明实施例本申请的基质保存液，不仅能提供一个微环境，让血常规质控和一种特定蛋白抗原共存，还可以让血常规质控与两种特定蛋白抗原共存。
实施例6
本实施例中使用的基质保存液采用CPBS配制，含有1g/L的牛血清蛋白、5g/L的乳糖、2g/L的蔗糖、5g/L的海藻糖、2g/L的甘露醇、5g/L的甘氨酸、5g/L的肽多糖、0.01％Triton X-100以及0.2g/L的尼泊金酯。
1、五分类白细胞模拟物的制备。
(1)嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的制备。
同实施例1中嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的制备。
(2)嗜酸性粒细胞的制备。
同实施例1中嗜酸性粒细胞的制备。
(3)得到五分类白细胞模拟物。
将(1)制得的嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞以及(2)制得的嗜酸性粒细胞按照体积比为8∶1混合，得到保存在基质保存液中的五分类白细胞模拟物。
2、红细胞模拟物的制备。
同实施例1中红细胞模拟物的制备。
3、血小板模拟物的制备。
同实施例1中血小板模拟物的制备。
4、混合质控物。
将制得的五分类白细胞模拟物、红细胞模拟物、血小板模拟物、高纯度CRP抗原和SAA抗原以基质保存液为调节试剂，配制成为混合质控物。其中，CRP抗原和SAA抗原的浓度如表5所示，五分类白细胞模拟物、红细胞模拟物、血小板模拟物和基质保存液的体积比为2∶11∶1∶1。
制得的混合质控物使用迈瑞全血CRP/SAA分析仪通过免疫比浊方法检测CRP和SAA，结果如下表6所示，混合后的全血CRP质控物在迈瑞全血CRP/SAA分析仪Diff及WNB散点图分别如图28A和图28B所示。
表6：实施例6制得的混合质控物的CRP和SAA检测结果对照表。
Figure BDA0002149787500000201
结合表6、图28A和28B，可以看出，实施例6制得的混合质控物使用在使用全血CRP/SAA分析仪测试时，既能完全保留五分类血常规质控物的所有特征，还能较准确表征CRP和SAA。说明实施例本申请的基质保存液，相比实施例5的保存液，增加了一种表面活性剂，特别是一种非离子表面活性剂，优选Triton X-100，能更好地实现血常规质控与两种特定蛋白抗原共存。
实施例7
本实施例中使用的基质保存液采用PBS配制，2g/L的牛血清蛋白、2g/L的葡萄糖、3g/L的乳糖、3g/L的甘露醇、5g/L的海藻糖、5g/L的多聚赖氨酸、5g/L的肽多糖、0.005％吐温80以及0.2g/L的尼泊金酯。
1、五分类白细胞模拟物的制备。
(1)嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的制备。
同实施例1中嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的制备。
(2)嗜酸性粒细胞的制备。
同实施例1中嗜酸性粒细胞的制备。
(3)得到五分类白细胞模拟物。
将(1)制得的嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞以及(2)制得的嗜酸性粒细胞按照体积比为8∶1混合，得到保存在基质保存液中的五分类白细胞模拟物。
2、红细胞模拟物的制备。
同实施例1中红细胞模拟物的制备。
3、血小板模拟物的制备。
同实施例1中血小板模拟物的制备。
4、混合质控物。
将制得的五分类白细胞模拟物、红细胞模拟物、血小板模拟物、高纯度CRP抗原和SAA抗原以基质保存液为调节试剂，配制成为混合质控物。其中，CRP抗原和SAA抗原的浓度如表7所示，五分类白细胞模拟物、红细胞模拟物、血小板模拟物和基质保存液的体积比为2∶12∶1∶5。
表7：实施例7制得的混合质控物的CRP和SAA检测结果对照表。
Figure BDA0002149787500000211
结合表7、图29A和29B，可以看出，实施例7制得的混合质控物使用在使用全血CRP/SAA分析仪测试时，既能完全保留五分类血常规质控物的所有特征，还能较准确表征CRP和SAA。说明实施例本申请的基质保存液，相比实施例5的保存液，增加了一种表面活性剂，特别是一种非离子表面活性剂，例如吐温80，能更好地实现血常规质控与两种特定蛋白抗原共存。
结合实施例1～7，可以看出，不同来源和不同制备方法制得的血细胞(白细胞、红细胞和血小板)模拟物与特定蛋白抗原混合得到的混合质控物，在应用于五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪时，都能够完成同时对血常规及特定蛋白的监测。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (25)

1.一种血液与特定蛋白的混合质控物，其特征在于，包括五分类白细胞模拟物和至少两种特定蛋白抗原。
2.根据权利要求1所述的混合质控物，其特征在于，所述特定蛋白抗原选自CRP抗原，血清淀粉样蛋白抗原，降钙素原抗原，白细胞介素-6抗原，人绒毛膜促性腺激素抗原，生长激素抗原，黄体生成素抗原，甲胎蛋白抗原以及癌胚抗原中的至少两种。
3.根据权利要求1所述的混合质控物，其特征在于，所述特定蛋白抗原为CRP抗原和血清淀粉样蛋白抗原；优选的，所述CRP抗原在所述血液与特定蛋白的混合质控物中的浓度为1mg/L～100mg/L，所述血清淀粉样蛋白抗原在所述血液与特定蛋白的混合质控物中的浓度为2mg/L～200mg/L。
4.根据权利要求1所述的混合质控物，所述特定蛋白抗原为CRP抗原和血清淀粉样蛋白抗原，CRP抗原和血清淀粉样蛋白抗原的比例为1∶2～1∶2.5。
5.根据权利要求1-4任一项所述的混合质控物，其特征在于，所述血液与特定蛋白的混合质控物还包括基质保存液，所述基质保存液采用缓冲液配制，所述基质保存液中含有水溶性蛋白质、多羟基化合物以及小分子氨基酸和表面活性剂，优选的，表面活性剂为非离子表面活性剂；更优选的表面活性剂选自Triton X-100、吐温20、吐温40或吐温80；优选的，所述表面活性剂的浓度为0.005％～5％，更优选的表面活性剂的浓度为0.005％～1％。
6.根据权利要求1-6任一项所述的质控物，其特征在于，所述五分类白细胞模拟物包括嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞，所述五分类白细胞模拟物的浓度为1×109个/L～30×109个/L。
7.根据权利要求6所述的质控物，其特征在于，所述五分类白细胞模拟物为哺乳动物白细胞。
8.根据权利要求1-7任一项所述的质控物，其特征在于，所述质控物还包括红细胞模拟物，所述红细胞模拟物的浓度为1×1012个/L～6×1012个。
9.根据权利要求8所述的质控物，其特征在于，所述红细胞模拟物为人红细胞。
10.根据权利要求1-9任一项所述的质控物，其特征在于，所述质控物还包括血小板模拟物，所述血小板模拟物的浓度为10×109个/L～1000×109个/L。
11.根据权利要求10所述的质控物，其特征在于，所述血小板模拟物为哺乳动物血小板或红细胞。
12.根据权利要求1-11任一项所述的混合质控物，其特征在于，包括基质保存液，所述基质保存液采用缓冲液配制，所述基质保存液中含有浓度为0.1g/L～10g/L的水溶性蛋白质、1g/L～50g/L的多羟基化合物以及1g/L～50g/L的小分子氨基酸。
13.根据权利要求5-12任一项所述的质控物，所述缓冲液为柠檬酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液；和/或所述水溶性蛋白质为牛血清蛋白或人血清白蛋白；和/或所述多羟基化合物为甘露醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖或海藻糖；和/或所述小分子氨基酸为甘氨酸、赖氨酸、小分子多肽或肽多糖。
14.一种血液与特定蛋白的混合质控物的质控方法，其特征在于，包括如下步骤：
提供血液与特定蛋白的混合质控物，所述血液与特定蛋白的混合质控物包括五分类白细胞模拟物和至少两种特定蛋白抗原；
提供五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪；
提供待测血液样本；
分析所述血液与特定蛋白的混合质控物在所述五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪上得到的白细胞计数和至少两种特定蛋白抗原读数；以及
分析所述待测血液样本在所述五分类血常规与特定蛋白联合检测的分析仪上得到的白细胞计数和所述至少两种特定的蛋白抗原读数。
15.根据权利要求14所述的质控方法，其特征在于，所述特定蛋白抗原为CRP抗原，所述CRP抗原在所述血液与特定蛋白的混合质控物中的浓度为1mg/L～100mg/L。
16.根据权利要求14-16任一项所述的质控方法，其特征在于，所述特定蛋白抗原为血清淀粉样蛋白抗原，所述血清淀粉样蛋白抗原在所述血液与特定蛋白的混合质控物中的浓度为2mg/L～200mg/L。
17.根据权利要求14-17任一项所述的质控方法，其特征在于，所述五分类白细胞模拟物包括嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞，所述五分类白细胞模拟物在所述血液与特定蛋白的混合质控物中的浓度为1×109个/L～30×109个/L。
18.根据权利要求14-18任一项所述的质控方法，其特征在于，所述血液与特定蛋白的混合质控物还包括红细胞模拟物，所述红细胞模拟物的浓度为1×1012个/L～6×1012个。
19.根据权利要求14-19任一项所述的质控方法，其特征在于，所述血液与特定蛋白的混合质控物还包括血小板模拟物，所述血小板模拟物的浓度为10×109个/L～1000×109个/L。
20.根据权利要求14-19任一项所述的质控方法，其特征在于，所述质控物中还含有基质液，所述基质保存液采用缓冲液配制，所述基质保存液中含有水溶性蛋白质、多羟基化合物以及小分子氨基酸。
21.根据权利要求20所述的质控方法，其特征在于，所述缓冲液为柠檬酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液。
22.根据权利要求20所述的质控方法，所述基质保存液中含有浓度为0.1g/L～10g/L的水溶性蛋白质、1g/L～50g/L的多羟基化合物以及1g/L～50g/L的小分子氨基酸。
23.根据权利要求20-22任一项所述的质控方法，所述水溶性蛋白质为牛血清蛋白或人血清白蛋白，和/或所述多羟基化合物为甘露醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖或海藻糖，和/或所述小分子氨基酸为甘氨酸、赖氨酸、小分子多肽或肽多糖。
24.根据权利要求20-23任一项所述质控方法，所述基质保存液还包括表面活性剂，优选的表面活性剂为非离子表面活性剂；更优选的表面活性剂选自TritonX-100、吐温20、吐温40、吐温60或吐温80。
25.根据权利要求24所述质控方法，所述表面活性剂的浓度为0.005％～5％，优选的表面活性剂的浓度为0.005％～1％。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN110857905A (zh) * 2018-08-22 2020-03-03 湖南爱威医疗科技有限公司 粪便分析仪的质控物及其制备方法
CN113985029A (zh) * 2021-10-25 2022-01-28 中元汇吉生物技术股份有限公司 一种适用于提升免疫比浊试剂稳定性的组合物
CN113759112B (zh) * 2021-09-27 2022-05-24 北京美联泰科生物技术有限公司 一种脑特异性蛋白产物9.5的冻干方法

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