CN111481548A

CN111481548A - 4-(2,6-二氯苄氧基)-3-(3-氨基吡啶)苯并[d]异噁唑在制药中的用途

Info

Publication number: CN111481548A
Application number: CN201910085935.7A
Authority: CN
Inventors: 周璐; 莫明广; 叶德泳; 杨金童; 楚勇; 朱泽云
Original assignee: Fudan University
Current assignee: Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2019-01-29
Filing date: 2019-01-29
Publication date: 2020-08-04

Abstract

本发明属制药领域，涉及如式I结构所示的4‑(2,6‑二氯苄氧基)‑3‑(3‑氨基吡啶)苯并[d]异噁唑(化合物I)在制药中的新用途，尤其涉及4‑(2,6‑二氯苄氧基)‑3‑(3‑氨基吡啶)苯并[d]异噁唑或其药学上可接受的盐在制备预防和治疗炎症性肠病药物中的应用。本发明经葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的炎症性肠病(IBD)小鼠模型实验观察小鼠的IBD病理损伤，结果表明，所述化合物I能减缓炎症性肠病小鼠的疾病活动指数，减缓小鼠的直肠萎缩，并提高小鼠的生存率，实验结果表明，所述的化合物I可用于制备预防和治疗炎症性肠病的药物。

Description

4-(2,6-二氯苄氧基)-3-(3-氨基吡啶)苯并[d]异噁唑在制药中的用途

技术领域

本发明属制药领域，涉及4-(2,6-二氯苄氧基)-3-(3-氨基吡啶)苯并[d]异噁唑在制药中的用途，具体涉及4-(2,6-二氯苄氧基)-3-(3-氨基吡啶)苯并[d]异噁唑(化合物I)在制药中的新用途，尤其涉及4-(2,6-二氯苄氧基)-3-(3-氨基吡啶)苯并[d] 异噁唑或其药学上可接受的盐在制备预防和治疗炎症性肠病药物中的应用。

背景技术

据报道，炎症性肠病(IBD)包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)，在欧美发达国家发病率比较高，亚洲发病率较低。随着生活水平的上升，近年来该疾患在我国有逐渐增加的趋势。研究者普遍认为，IBD的发病是多因素的，包括基因、环境、饮食和生活习惯等，最终表现为肠道免疫细胞对肠道微生物等抗原产生过强的免疫反应，从而分泌出大量的炎症因子，例如TNF-α,IL-6和IL-1β等，导致肠粘膜的损伤，引起IBD的各种病理症状。

研究表明，IBD的发生与体内的鞘脂的失衡有非常紧密的联系(Abdel Hadi, DiVito,&Riboni,J.Lipid Res.,2016,47(3),673-676)；SMS2的缺失能抑制炎症性肠病导致的结肠癌(Ohnishi et al.,FASEB J.,2017,31(9),3816-3830)；Toshio Ohnishi 等研究者用葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导SMS2-KO小鼠形成炎症性肠病和结肠癌，发现SMS2-KO小鼠能明显减少DSS带来的体重减轻，同时体内的炎症基因和因子均减少如促炎因子和趋化因子，白介素IL1-β等均降低；业内分析认为，SMS2-KO很可能是通过影响结肠上皮细胞膜介导的炎症信号减缓了DSS诱导的炎症，因此SMS2不仅作为鞘脂代谢酶，而且作为蛋白质结合调节剂能调节与炎症有关的跨膜信号，如SMS2能和CD4和CCR5相互结合(Hayashi et al.,J.Biol.Chem.,2014,289(44),30842-30856)，有些磷脂代谢酶GPI锚定鞘磷脂磷酸二酯酸样-3(GPI-anchored sphingomyelin phosphodiesteraseacid-like 3)能与TLRs结合(Heinz et al.,Cell Reports,2015,11(12),1211-1247)。

此外，研究人员发现鞘磷脂合酶(sphingomyelin synthase,SMS)可调节神经酰胺(ceramide)与卵磷脂(PC)合成鞘磷脂(sphingomyelin,SM)，是鞘磷脂从头合成途径最后一步的关键酶。鞘磷脂合酶主要有三个亚型，鞘磷脂合酶1(SMS1)、鞘磷脂合酶1(SMS2)和鞘磷脂合酶相关蛋白(SMSr)，目前对SMSr的研究尚不是很深入，在体内主要是SMS1和SMS2对相关功能进行调节，其中SMS1主要分布在高尔基体内并负责了60％-80％的SM合成，而SMS1主要分布在细胞膜上同时负责 20％-40％的体内SM合成(Tafesse FG,et al.JBiol Chem.2007；282(24):1753-1747)。 Yano等研究人员发现，对小鼠进行SMS1敲除会是线粒体的功能出现失调，从而提高活性氧化物，导致胰岛素分泌功能的受损(M.Yano,K.,et al.J.Biol.Chem., 2011；286(5):3992-4002)，同时氧化应激也会严重损害白色脂肪组织(WAT) (M.Yano,et al.PLoS One.2013；8(4):e61380)；因此,选择性作用于SMS2是可行的和有效的。

临床实践常用的治疗炎症性肠病药物按照机理可以分为四类：5-ASA，糖皮激素，免疫抑制剂和生物制剂；其中代表性的有，美沙拉嗪(5-ASA)、英夫利西单抗、柳氮磺吡啶、甲胺嘌呤、硫唑嘌呤、TNF-α单克隆抗体等，然而，目前IBD 的药物的疗效和种类远远满足不了临床的需求。研究发现SMS2抑制剂能明显抑制小鼠的慢性炎症因子例如TNF-α,IL-6和IL-1β等的分泌(Mo et al., J.Med.Chem.,2018,61(18),8241-8254)。因此，SMS2抑制剂在慢性炎症相关疾病领域有着非常大的应用前景。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供4-(2,6-二氯苄氧基)-3-(3-氨基吡啶)苯并[d]异噁唑(化合物I)在制药中的新用途，尤其是4-(2,6-二氯苄氧基)-3-(3-氨基吡啶)苯并[d]异噁唑在制备预防和治疗炎症性肠病药物中的应用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷和不足，提供4-(2,6-二氯苄氧基)-3-(3-氨基吡啶)苯并[d]异噁唑(化合物I)在制药中新用途。具体涉及4-(2,6-二氯苄氧基)-3-(3-氨基吡啶)苯并[d]异噁唑(化合物I)或其药学上可接受的盐在制备预防和治疗炎症性肠病药物中的应用，本发明经实验证实所述的化合物I制备的预防和治疗炎症性肠病的药物，具有非常好的疗效。

本发明所述化合物I结构如式(I)所示，其分子量为386.23：其绝对生物利用度为57％。

本发明进行了DSS诱导IBD小鼠模型实验，结果表明，所述的化合物I可以减缓了症性肠病小鼠的疾病活动指数，减缓小鼠的直肠萎缩和提高了小鼠的生存率。

本发明的实验中，显示了所述4-(2,6-二氯苄氧基)-3-(3-氨基吡啶)苯并[d]异噁唑降低体内鞘磷脂合酶2活性和鞘磷脂水平，抑制剂巨噬细胞分泌炎症因子，减缓炎症性肠病症状。

本发明的实验中，实际监测炎症性肠病造成的体重降低，证明所述的化合物 I能有效改善小鼠的炎症性肠病引起的体重降低。

本发明的实验中，观察小鼠的状态根据疾病活动指数进行评分，证明所述的化合物I能有效改善小鼠的炎症性肠病的症状。

本发明的实验中，对小鼠进行生存期的考察，证实了所述的化合物I能有效提高炎症性肠病小鼠的生存率。

本发明的实验中，对小鼠进行解剖，实际测量小鼠直肠的长度，证实所述的化合物I能有效改善小鼠的炎症性肠病引起的直肠萎缩。

本发明的化合物I可由于制备预防和治疗炎症性肠病的药物，所述药物可用于预防和治疗人或者动物炎症性肠病。

本发明所述药物可以通过口服、腹腔注射或者静脉注射给予。本领域技术人员可以根据实际情况容易确定给药剂量和给药的形式。

附图说明

图1-1显示了化合物I对小鼠单次尾静脉药后的药时曲线，10mg/kg,n＝4；化合物I对ICR小鼠单次口服给药后的药时曲线，20mg/kg,n＝4。

图1-2显示化合物I改善IBD引起的体重下降。

图1-3显示化合物I改善IBD疾病活动指数(DAI)。

图1-4显示了化合物I改善IBD疾病的生存率。

图1-5显示了化合物I改善IBD疾病的直肠萎缩。

图1-6化合物I能明显降低体内SM的水平。

以下结合具体实施例和图表，进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于说明本发明而不是用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明所记载的内容后，本领域技术人员可以对发明做出改动或者修改，这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求书所限定的范围。

具体实施方式

实施例1：化合物I具有适宜的生物利用度，可用于预防和治疗炎症性肠病

以20mg/kg剂量给小鼠灌胃给予化合物I后，其绝对生物利用度为57％， C_max为0.71μg/mL，远大于其体外抑制鞘磷脂合酶2活性的IC₅₀值(0.035μg/mL)，且在小鼠中静脉和灌胃给药基本符合线性动力学特征，化合物I在ICR小鼠中药时曲线如图1-1所示，主要代谢数据如表1-1所示；鉴于其具备良好的生物利用度，可用于制备治疗炎症性肠病的药物。

表1-1化合物I体内药代动力学参数^a

^an＝4animals/group.Dose iv:administered at 10mg/kg,vehicle was 5％DMSO/5％Polyoxyl 35 Castor oil in saline.Dose po:administered at 20mg/kg,vehicle was 0.5％carboxymethylcellulose sodium.Data are the mean±SEM.。

实施例2：化合物I能减缓DSS诱导炎症性肠病所带来的体重减低

将DSS(MW,40,000)溶于小鼠的饮用水中(3％,w/v)，模型组小鼠连续饮用11 天，对照组为正常饮用水，同时分别口服灌胃测试化合物(25或者50mg/kg/day)、阳性化合物5-氨基水杨酸(25mg/kg/day)，每组n＝10；通过记录小鼠体重，按照表1-2疾病活动指数(DAI)进行评分，当模型空白组死亡50％时，常规处理所有小鼠解剖测定结肠长度同时取肠组织保存到-80℃，实验环境温度为24±1℃，环境湿度55±5％，12h明暗交替，动物实验由复旦大学动物保护和使用委员会批准；结果显示(如图1-2所示)，所述的化合物I具有减缓DSS诱导炎症性肠病所带来的体重减低，由图1-2中所示证实了化合物I的治疗效果与临床实践常用药物美沙拉嗪(5-ASA)的效果相当。

表1-2 Disease Activity Index(DAI)Score

。

实施例3：化合物I能减缓DSS诱导炎症性肠病的疾病活动指数(DAI)

按照表1-2疾病活动指数(DAI)进行评分，结果如图1-3所示，所述的化合物I 能减缓DSS诱导炎症性肠病的疾病活动指数(disease activity index,DAI)，进一步证实该化合物I对IBD具有非常好的预防和治疗效果。

实施例4：化合物I能延长DSS诱导炎症性肠病的小鼠的生存率

采用化合物I治疗DSS模型IBD小鼠，当实验进行到模型空白组死亡接近 50％时，对所有组进行生存率的统计，结果证实化合物I能延长DSS诱导炎症性肠病的小鼠的生存率；实施例结果显示，未治疗空白组的生存率为40％时，化合物I 20mg/kg剂量组生存率为50％，5-ASA(美沙拉嗪)阳型对照组生存率为70％，而化合物I的50mg/kg高剂量组的生存率为90％，与造模对照的空白组生存率为100％；证实化合物I在生存期方面优于5-ASA(美沙拉嗪)阳型对照(如图1-4 所示)，实验证实化合物I能有效改善IBD小鼠的生存率和改善机体对抗IBD疾病的能力，可用于制备治疗炎症性肠病的药物。

实施例5：化合物I能有效改善小鼠的炎症性肠病引起的直肠萎缩

按常规实验操作进行动物实验，实验结果显示，当模型空白组死亡50％时，处死所有小鼠解剖测定结肠长度，如图1-5所示，化合物I能有效改善小鼠的炎症性肠病引起的直肠萎缩，治疗效果与临床上常用药物美沙拉嗪(5-ASA)的效果相当。

实施例6：化合物I能有效降低体内鞘磷脂(SM)水平

雄性ICR小鼠(4只每组)，腹腔注射试验化合物(40mg/kg/day，溶剂5％ ethanol/5％Cremophor EL/0.9％NaCl aqueous solution)或者空白(5％ethanol/5％ CremophorEL/0.9％NaCl aqueous solution)，连续给药7天后，取血，用酶联法进行测定(Hojjati&Jiang,J.Lipid Res.,2006,47(3),673-676)，其主要原理为：SM可以被 SMase水解为神经酰胺和磷酸胆碱，再利用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase)对磷酸胆碱分解成胆碱，而胆碱和胆碱氧化酶可以生成H₂O₂，这可以用DAOS，4- 氨基安替吡啉以及过氧化物酶进行催化显示蓝紫色化合物，利用酶标仪(Bio-tek ELX800)读取最大吸收595nm即可以间接测定SM的量；

本发明的实验结果证实所述的化合物I能明显降低体内SM的水平，如图1-6 所示。

Claims

1.式(I)结构的4-(2,6-二氯苄氧基)-3-(3-氨基吡啶)苯并[d]异噁唑或其药学上可接受的盐在制备预防和治疗炎症性肠病药物中的用途；

2.按权利要求1所述的用途，其特征是，所述4-(2,6-二氯苄氧基)-3-(3-氨基吡啶)苯并[d]异噁唑，其分子量为386.23：其绝对生物利用度为57％。

3.按权利要求1所述的用途，其特征是，所述4-(2,6-二氯苄氧基)-3-(3-氨基吡啶)苯并[d]异噁唑降低体内鞘磷脂合酶2活性和鞘磷脂水平，抑制剂巨噬细胞分泌炎症因子，减缓炎症性肠病症状。

4.按权利要求1所述的用途，其特征是，所述的药物为预防和治疗人或者动物的炎症性肠病的药物。

5.按权利要求4所述的用途，其特征是，所述的药物减缓炎症性肠病的症状和提高相关患者或者动物的生存率。

6.按权利要求4所述的用途，其特征是，所述的药物其给药途径为口服、腹腔注射或者静脉注射途径。