CN111474344A - 新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂的制备方法，具体研制流程包括：抗原制备—免疫产蛋鸡养殖—筛选高免鸡—卵黄抗体制备—卵黄抗体检测—新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂制备。本发明提供的新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂具有特异性强、灵敏度高、制备成本低、操作简易等特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种病毒检测方法，尤其涉及一种新型冠状病毒IgY 抗体免疫检测试剂的制备方法。
背景技术
目前疫情仍在发展过程中并叠加复工复产的需求，全国急需大量 检测试剂以确定具体病毒感染人数，为后续防疫、治疗工作以及经济 发展提供基础数据和情况分析。
新型冠状病毒(2019-nCoV)感染的肺炎疫情暴发以来，普通实 时定量荧光PCR核酸检测试剂的迅速上市和临床应用在患者临床诊 断和疑似患者排查中发挥了重要作用，但是，受操作繁琐、耗时长、 需要集中送检等限制，还不能满足当前快速增长的大量疑似患者、无 症状感染者等排查诊断的检测需求。对于新型冠状病毒(2019-nCoV) 的现场快速检测产品，急需能突破现有检测技术对人员/场所的限制， 缩短检测用时，提升便捷程度，推动诊断前移下移，实现疑似患者的 快速诊断和密切接触人群的现场筛查的检测技术和产品。
免疫检测技术路线分析
传统上，使用哺乳动物来源的IgG抗体作为检测抗体，应用免疫 扩散、ELISE、免疫印迹法等技术手段，可以定性或定量检测相应的 抗原或抗体。血清中发现的免疫球蛋白一共有五种，按照重链的不同， 分为IgG，IgM，IgA，IgE，IgD。
其中IgG是最丰富的免疫球蛋白，大约占总免疫球蛋白的75％， 是体液中最重要的抗病原微生物的抗体。
IgM是一个五聚体蛋白，是人体发生感染后第一个产生的抗体， 约占免疫球蛋白总量的1/10。感染后首先产生，体内浓度随后随着 IgG的浓度上升而下降。
IgA主要存在于粘膜表面，唾液，初乳，泪液，汗液等体液当中， 参与局部粘膜感染的免疫反应。IgA无法通过胎盘屏障，因此初生6-8 个月的婴儿需要从母乳中获得IgA。
IgE存在于血液中，是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，可 以引起I型超敏反应。
IgD体内含量也很低，可作为膜受体存在于B细胞表面，其作用 可能是参与启动B细胞产生抗体。
检测的抗体主要分为IgM和IgG两类。目前对新型冠状病毒的这 两类抗体的产生和持续时间还没有系统性研究，不过通常情况下，IgM 抗体产生早，一经感染，快速产生，维持时间短，消失快，血液中检 测阳性可作为早期感染的指标。IgG抗体产生晚，维持时间长，消失 慢，血液中检测阳性可作为感染和既往感染的指标。
该方法检测只需十几分钟，无需特殊仪器，但目前灵敏度和特异 性有限，同时几乎无法检测潜伏期和感染初期的病人，因此不能作为 新冠肺炎确诊和排除的唯一依据。抗体检测容易受到血液标本中的一 些干扰物质(如类风湿因子、非特异IgM、溶血所致的高浓度血红蛋 白等)的存在而出现“假阳性”结果。
因此，有必要提供一种新新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂的 制备方法解决上述问题。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是提供一种特异性强、灵敏度高、性 质稳定的新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种新型冠状病毒IgY抗体 免疫检测试剂的制备方法，包括如下步骤：
S1,抗原制备；
S11,通过广东实验动物检测所，获取新型冠状病毒蛋白表达的菌 株，将其灭活后和不完全弗氏佐剂免疫产蛋鸡；
S12,从已知的新型冠状病毒的基因序列中，找出其特异性基因， 根据特异性基因序列，人工合成该病毒特异性多肽，再把特异性多肽 偶联大分子载体蛋白，构成免疫原复合物，用免疫原符合物和弗氏不 完全佐剂免疫产蛋鸡；
S2,免疫产蛋鸡养殖；
S21,选择具有资质的蛋鸡养殖场所，挑选健康且产蛋率80％-90％ 的产蛋鸡作为免疫接种对象；
S22,用鸡肉注射方法免疫产蛋鸡，每次每只注射0.5ml,含抗原 20-40μg，共免疫3次，间隔7-10天；
S3,筛选高免鸡
第二次免疫以后第五天，采集当天产的鸡蛋，标记好对应鸡，并 取其卵黄，检测新型冠状病毒的抗体及效价，如果效价达到1:10000, 即稀释10000倍，仍呈阳性反应，该产蛋鸡定位高免疫鸡，为以后采 蛋对象；
S4,卵黄抗体制备
鸡蛋消毒-分离卵黄-蛋黄粉碎-卵黄抗体提取-卵黄抗体纯化；
S5,卵黄抗体检测
S51,效价检测：稀释1:10000以上仍呈阳性反应；
S52,特异性检测：应和新型冠状病毒产生免疫反应；
S6,应用免疫细胞化学法，将特异性抗体与荧光素偶联，制备新 型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂的制备方法盒。
优选的，新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂制成的试剂盒30 分钟检测出新型冠状病毒。
优选的，要和其新型冠状病毒基因对比后，确定新型冠状病毒特 有基因，按其基因序列合成新的肽分子，免疫制备抗体后，再检测抗 体特异性.
优选的，小分子肽类物质，免疫原性很弱，一定偶联大分子蛋白 制成免疫原复合物；偶联不成功，复合物难以获得很好免疫效果。
相较于现有技术，本发明的新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂 的制备方法基于抗原与抗体特异性结合的原理，通过研发 2019-nCoVIgY抗体(包括2019-nCoV-S蛋白抗体、N蛋白抗体)，采 用荧光素标记方法来检测2019-nCoV的存在，从而直接证明样本中含 有新型冠状病毒。
核心技术2019-nCoVIgY抗体制备技术主要通过高免疫产蛋鸡的 卵黄中提取。
与实时定量荧光PCR核酸检测试剂相比具有检测时间快(IgY抗 体检测30分钟内出结果)、操作简便的优势。
与IgM和IgG抗体胶体金检测相比，具有假阳性或假阴性率低， 特异性强；灵敏度高、性质稳定等特点，同时具备成本优势。
新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂具有特异性强、灵敏度高、 制备成本低、操作简易等特点。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清 楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例， 而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员 在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发 明保护的范围。
本发明提供了一种新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂的制备 方法，包括如下步骤：
S1,抗原制备；
S11,通过广东实验动物检测所，获取新型冠状病毒蛋白表达的菌 株，将其灭活后和不完全弗氏佐剂免疫产蛋鸡；
S12,从已知的新型冠状病毒的基因序列中，找出其特异性基因， 根据特异性基因序列，人工合成该病毒特异性多肽，再把特异性多肽 偶联大分子载体蛋白，构成免疫原复合物，用免疫原符合物和弗氏不 完全佐剂免疫产蛋鸡；
S2,免疫产蛋鸡养殖；
S21,选择具有资质的蛋鸡养殖场所，挑选健康且产蛋率80％-90％ 的产蛋鸡作为免疫接种对象；
S22,用鸡肉注射方法免疫产蛋鸡，每次每只注射0.5ml,含抗原 20-40μg，共免疫3次，间隔7-10天；
S3,筛选高免鸡
第二次免疫以后第五天，采集当天产的鸡蛋，标记好对应鸡，并 取其卵黄，检测新型冠状病毒的抗体及效价，如果效价达到1:10000, 即稀释10000倍，仍呈阳性反应，该产蛋鸡定位高免疫鸡，为以后采 蛋对象；
S4,卵黄抗体制备
鸡蛋消毒-分离卵黄-蛋黄粉碎-卵黄抗体提取-卵黄抗体纯化；
S5,卵黄抗体检测
S51,效价检测：稀释1:10000以上仍呈阳性反应；
S52,特异性检测：应和新型冠状病毒产生免疫反应；
S6,应用免疫细胞化学法，将特异性抗体与荧光素偶联，制备新 型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂的制备方法盒。
新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂制成的试剂盒30分钟检测 出新型冠状病毒。
要和其新型冠状病毒基因对比后，确定新型冠状病毒特有基因， 按其基因序列合成新的肽分子，免疫制备抗体后，再检测抗体特异性.
小分子肽类物质，免疫原性很弱，一定偶联大分子蛋白制成免疫 原复合物；偶联不成功，复合物难以获得很好免疫效果。
具体的，主要考核指标如下。
卵黄抗体效价：1:10000以上；
特异性：试剂盒30分钟检测出新型冠状病毒；
产量：制备卵黄抗体80升，可满足上亿人次检测需求。
IgY抗体免疫检测技术分析
卵黄免疫球蛋白，又称IgY或卵黄抗体，是鸟类、爬行动物和两 栖动物体内的主要抗体，一般从被抗原免疫的母鸡卵黄中提取。与 IgG相比，IgY具有抗原用量少、制备周期短、对动物损伤小、产量 大、特意性强、灵敏度高等优点。
IgY的分子结构
与IgG大分子结构类似，IgY大分子也包括2条重链和2条轻链， 链的形态类似于字母“Y”。Fc区存在2个抗原结合位点。然而，IgG 和IgY之间存在明显的差异。IgG分子量为160KD，IgY分子量为 180KD。IgY重链分子量为67-70KD，有一个可变区和4个稳定区，轻 链分子量为25KD，包含1个可变区和1个稳定区。
IgY抗体易获得、产量高
传统方法通过采血和宰杀动物收集抗体，IgY从卵黄中提取，对 实验动物和操作者都无损伤，简单易行，经济温和。同时，与IgG相 比，IgY产量高。按一只母鸡每月产20只鸡蛋计算，每只母鸡1个 月能生产2gIgY，相当于1只大型哺乳动物血清中抗体的含量。
IgY抗体假阳性或假阴性率低，特异性强
IgY不与血清中的类风湿因子(RF)、人抗鼠抗体(HAMA)、抗-IgG 抗体和抗体结合物发生交叉反应，不激活补体系统等，也不与葡萄球 菌蛋白A和链球菌蛋白G发生反应，可以明显减少假阳性或假阴性的 产生，增强检测特异性。
IgY抗体灵敏度高
由于禽类和哺乳动物之间存在明显的种系和基因学背景差异， IgY能识别更多哺乳动物抗原表位，从而增强免疫信号。IgY的抗体 亲和力是鼠抗IgG的3-5倍。
性质稳定
与IgG相比，IgY具有耐热、耐酸和一定的抗酶降解能力。在PH4-9 以及小于65℃的溶液中，IgY能够保持稳定。同时IgY具有耐高渗性 能(60％的高浓度蔗糖溶液中仍有活性)和很好的耐反复冻融的特性。
产品技术分析
抗体检测优势：
1、新型冠状病毒主要存在于下呼吸道，采样的问题可能使核算 检测出现假阴性的情况，抗体检测可避免；
2、抗体检测有效帮助提高疑似病例的确诊。
3、实验室要求低、生物安全风险低，可以下沉医院及现场检测 点，有助于节省时间和人力成本。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范 围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或 直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利 保护范围内。
Claims (4)
1.一种新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1,抗原制备；
S11,通过广东实验动物检测所，获取新型冠状病毒蛋白表达的菌株，将其灭活后和不完全弗氏佐剂免疫产蛋鸡；
S12,从已知的新型冠状病毒的基因序列中，找出其特异性基因，根据特异性基因序列，人工合成该病毒特异性多肽，再把特异性多肽偶联大分子载体蛋白，构成免疫原复合物，用免疫原符合物和弗氏不完全佐剂免疫产蛋鸡；
S2,免疫产蛋鸡养殖；
S21,选择具有资质的蛋鸡养殖场所，挑选健康且产蛋率80％-90％的产蛋鸡作为免疫接种对象；
S22,用鸡肉注射方法免疫产蛋鸡，每次每只注射0.5ml,含抗原20-40μg，共免疫3次，间隔7-10天；
S3,筛选高免鸡
第二次免疫以后第五天，采集当天产的鸡蛋，标记好对应鸡，并取其卵黄，检测新型冠状病毒的抗体及效价，如果效价达到1:10000,即稀释10000倍，仍呈阳性反应，该产蛋鸡定位高免疫鸡，为以后采蛋对象；
S4,卵黄抗体制备
鸡蛋消毒-分离卵黄-蛋黄粉碎-卵黄抗体提取-卵黄抗体纯化；
S5,卵黄抗体检测
S51,效价检测：稀释1:10000以上仍呈阳性反应；
S52,特异性检测：应和新型冠状病毒产生免疫反应；
S6,应用免疫细胞化学法，将特异性抗体与荧光素偶联，制备新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂的制备方法盒。
2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂制成的试剂盒30分钟检测出新型冠状病毒。
3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，要和其新型冠状病毒基因对比后，确定新型冠状病毒特有基因，按其基因序列合成新的肽分子，免疫制备抗体后，再检测抗体特异性.
4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgY抗体免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，小分子肽类物质，免疫原性很弱，一定偶联大分子蛋白制成免疫原复合物；偶联不成功，复合物难以获得很好免疫效果。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112094341A (zh) * | 2020-09-10 | 2020-12-18 | 华瑞同康生物技术（深圳）有限公司 | 抗新型冠状病毒的IgY中和抗体及其制备方法、制剂和应用 |
| CN112175074A (zh) * | 2020-10-09 | 2021-01-05 | 梁永明 | 基于基因重组抗Covid-19和其他冠状病毒IgY抗体及其他小分子抗体产业化应用 |
| WO2021212755A1 (zh) * | 2020-04-24 | 2021-10-28 | 成都钰康生物科技有限公司 | 一种抗新型冠状病毒的抗体及其制备方法与应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1546526A (zh) * | 2003-12-02 | 2004-11-17 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 | 抗非典型肺炎卵黄抗体的制作方法 |
| CN1556113A (zh) * | 2004-01-07 | 2004-12-22 | 珠海百奥生物技术有限公司 | 抗sars冠状病毒的卵黄抗体及其制备方法和液体制剂 |
| CN1796564A (zh) * | 2004-12-30 | 2006-07-05 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 | 表达sars冠状病毒核蛋白重组病毒及其制备方法 |
| US20150072889A1 (en) * | 2013-09-06 | 2015-03-12 | Theranos, Inc. | Systems and methods for detecting infectious diseases |
| CN110724196A (zh) * | 2019-11-19 | 2020-01-24 | 西安咸辅生物科技有限责任公司 | 一种抗独特型卵黄抗体的制备方法 |
-
2020
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Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1546526A (zh) * | 2003-12-02 | 2004-11-17 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 | 抗非典型肺炎卵黄抗体的制作方法 |
| CN1556113A (zh) * | 2004-01-07 | 2004-12-22 | 珠海百奥生物技术有限公司 | 抗sars冠状病毒的卵黄抗体及其制备方法和液体制剂 |
| CN1796564A (zh) * | 2004-12-30 | 2006-07-05 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 | 表达sars冠状病毒核蛋白重组病毒及其制备方法 |
| US20150072889A1 (en) * | 2013-09-06 | 2015-03-12 | Theranos, Inc. | Systems and methods for detecting infectious diseases |
| CN110724196A (zh) * | 2019-11-19 | 2020-01-24 | 西安咸辅生物科技有限责任公司 | 一种抗独特型卵黄抗体的制备方法 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021212755A1 (zh) * | 2020-04-24 | 2021-10-28 | 成都钰康生物科技有限公司 | 一种抗新型冠状病毒的抗体及其制备方法与应用 |
| CN112094341A (zh) * | 2020-09-10 | 2020-12-18 | 华瑞同康生物技术（深圳）有限公司 | 抗新型冠状病毒的IgY中和抗体及其制备方法、制剂和应用 |
| CN112094341B (zh) * | 2020-09-10 | 2021-05-18 | 华瑞同康生物技术（深圳）有限公司 | 抗新型冠状病毒的IgY中和抗体及其制备方法、制剂和应用 |
| CN112175074A (zh) * | 2020-10-09 | 2021-01-05 | 梁永明 | 基于基因重组抗Covid-19和其他冠状病毒IgY抗体及其他小分子抗体产业化应用 |
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