JP5490725B2 - H5亜型インフルエンザウイルスの普遍的な検出のための結合タンパク質およびエピトープブロッキングelisa - Google Patents
H5亜型インフルエンザウイルスの普遍的な検出のための結合タンパク質およびエピトープブロッキングelisa Download PDFInfo
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Description
mAbまたは関連する結合タンパク質の免疫学的結合特性(Aimmunological binding characteristics@)という用語は、その文法形式の全てにおいて、mAbまたは結合タンパク質のその抗原に関する特異性、親和性および交叉反応性を指す。
は配列CNTRCQTPを有しており、ガチョウから得られた1株は配列CNTRCQTPを有しており、ニワトリから得られた2株は配列CNTKCQTLまたはCNAKCQTPを有していた。合計で、ニワトリからの427株、サギ類からの5株、カモ類からの189株およびガチョウ類からの62株を検査した。そのエピトープは、シチメンチョウ類、マガモ類、ハト類、オオゴシキドリ類(great barbets)、マクジャク(green pea fowl)、クジャク類(peacocks)、スズメ類(tree sparrows)、ハヤブサ類(peregrine falcons)、ユリカモメ類(black−headed gulls)、キンケイ類(golden pheasants)、ワシミミズク類(eagle owls)、ヤマウズラ類(partridges)、オオハクチョウ類(whooper swans)、ダチョウ類(ostriches)、イエガラス類(house crows)、カササギ類(magpies)、スズメ類(sparrows)およびキュウカンチョウ類(mynas)のような種においても高度に保存されていることが分かった。
I.実験的なこと
ウイルス
この試験において使用し、下記の表1にリストしたインドネシアH5N1インフルエンザ株の24種類の分離株(記載1〜24)は、インドネシア国立保健研究開発研究所(National Institute of Health, Research and Development, Indonesia)から得た。他のH5および非H5亜型は、シンガポールの農産食品&家畜管理局(Agri−Food and Veterinary Authority)(AVA)により提供された(表1の記載25〜31)。
高病原性および低病原性ウイルスを、両方とも11日齢の発育鶏卵の尿膜腔中に接種した。48時間の培養の後、卵から尿膜腔液を集めた。ウイルスの力価を、血球凝集アッセイを用いて測定した。次いでウイルスを精製し、−80ECで保管した。生ウイルスを用いた全ての実験はバイオセーフティーレベル3の封じ込め実験室中で実施され、全ての動物実験はCDC/NIHおよびWHOの推奨(12、13)に従って動物バイオセーフティーレベル3(ABSL3)の封じ込め実験室中で行われ、それらはシンガポールの農産食品&家畜管理局(AVA)および保健省(Ministry of Health)(MOH)によっても承認された。
H5N1(CDC/669/インドネシア/06)をベータ−プロピオラクトンを用いて不活化し(14)、全RNAをTrizol(Invitrogen,米国カリフォルニア州カールスバッド)を用いて抽出した。HA0遺伝子をcDNAから増幅し、細菌における発現のために標準的なクローニングの技法を用いてpQE−30ベクター(Qiagen,ドイツ)の中にクローニングした。タンパク質を発現させるために、クローンを大腸菌M15 pREP4コンピテントセルの中に形質転換した。同じ株からのHA1遺伝子を、H5N1 HA1遺伝子を有する組み換えバキュロウイルスを構築するために用いられるベクターであるpFASTBAC−HT(Invitrogen,カリフォルニア州カールスバッド)の中にクローニングし、次いでそれを用いて、H5 HA1特異的mAb類に関するスクリーニングのための免疫蛍光アッセイの開発のために、Sf−900II培地中で増殖させたSf−9細胞を感染させた。
形質転換した大腸菌M15細胞を、37ECにおいて、アンピシリン(100μg/ml)を含むルリア−ベルターニ(LB)培地中で、0.5〜0.6のOD600まで増殖させ、タンパク質発現を1mmol/LのIPTGの添加により振盪しながら3時間誘導した。細胞をペレット化し、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)中で再懸濁した。ヒスチジン融合タンパク質を、Ni−NTAカラム(Qiagen,ドイツ)上で精製し、タンパク質をSDS−PAGEおよびウェスタンブロットによる分析のために用いた。
4匹の成体の雌の4〜6週齢のBALB/cマウスを、等体積のアジュバント(SEPPIC,フランス)を用いて乳化させた0.1mlのPBS中の25μgの組み替えH5N1 HA0タンパク質を用いて筋肉内に3回免疫した。マウスの体液性免疫反応をIFAおよび間接酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)で監視した。
96ウェルプレート中のSf−9およびMDCK細胞を、切り詰めたH5N1 HA1遺伝子を有する組み換えバキュロウイルスまたはAIV H5N1インドネシア株、H5N2およびH5N3株でそれぞれ感染させた。感染の36時間(Sf−9細胞に関して)および24〜48時間(MDCK細胞に関して)後に、細胞を4%パラホルムアルデヒドで30分間、室温で固定し、PBS、pH7.4で3回洗浄した。固定した細胞を、ハイブリドーマ培養液と共に37ECで1時間保温した。細胞をPBSで3回すすぎ、フルオレセインイソチオシアネート(FITC)コンジュゲートウサギ抗マウスIg(Dako,デンマーク)の1:40希釈液と共に保温した。細胞をPBS中で再度すすいだ後、最適化されたFITCの可視化のための適切なバリアおよび励起フィルターのある落射蛍光顕微鏡(Olympus,日本)中で結果を記録した。
選択したmAb 5F8を、免疫ブロッティングアッセイにより評価した。組み換えH5N1 HA0タンパク質ならびに完全な精製したH5N1インドネシア株ならびにH5N2およびH5N3株を、非還元条件下で12%SDS−PAGE上で分画した。分かれたタンパク質をニトロセルロース膜上に電気転写し、固定した。膜を、0.1%Tween−20を含むPBS(PBST)中5%脱脂乳で37ECにおいて1時間ブロッキングした。続いて膜をハイブリドーマ上清と共に保温し、PBST中ですすぎ、HRPコンジュゲートウサギ抗マウスIgと共に保温した。膜に結合した抗体を、HRPにコンジュゲートしたウサギ抗マウスで検出した。ECL試薬(Amersham Biosciences)と共に保温することにより膜を現像した(16)。
5F8のエピトープの位置を決定するために、rHA1タンパク質を5種類の重なり合う断片に切り分けた(図2A参照)。対応するDNAの断片を、遺伝子特異的プライマーを用いてPCRで増幅し、pQE−30ベクター(Qiagen,ドイツ)の中にクローニングした。ヒスチジン融合タンパク質を発現させるため、クローンを大腸菌M15pREP4コンピテントセル(Qiagen,ドイツ)の中に形質転換した。形質転換した大腸菌M15細胞を、37ECにおいて、アンピシリン(100μg/ml)を含むルリア−ベルターニ(LB)培地中で、0.5〜0.6のOD600まで増殖させ、タンパク質発現を1mmol/LのIPTGの添加により振盪しながら3時間誘導した。細胞をペレット化し、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)中で再懸濁した。発現した融合ペプチドを、ウェスタンブロットによるエピトープマッピングのために用いた。
選択したmAb 5F8を用いるエピトープブロッキングELISAの特異性を決定するため、ヒトおよびニワトリの血清試料を検査し、その結果をHIアッセイの結果と比較した。本試験のために用いられる試料を、ヒトおよびニワトリのグループに分けた。ヒトのグループは、3個のグループに分けられた25種類のヒト血清試料からなっていた。グループ1は、H5N1インフルエンザに感染して回復した患者に由来する10種類の血清試料を含んでおり、インドネシアの保健省(MOH)から得た。感染はPCRにより確認され、インドネシアのMOHにより保証されていた。グループ2は、前の6ヶ月以内に市販のインフルエンザウイルスワクチン(FLUARIX7)をワクチン接種した5人の健康なボランティアからなっていた。FLUARIX7は次の3種類のウイルス株のそれぞれのヘマグルチニン(HA)を含む:A/ソロモン諸島/3/2006(H1N1)、A/ウィスコンシン/67/2005(H3N2)およびB/マレーシア/2506/2004。グループ3は、インフルエンザ感染の履歴およびインフルエンザワクチンの使用が無いことが分かっている10人の健康なボランティアからなっていた。全ての試料は、それらの状態に関してインドネシアのMOHにより保証されていた。
5F8 mAbの最大に近い結合を与えるために、H5N1ウイルス抗原/組み換えHA1および5F8 mAbの最適濃度を交差力価測定により決定した。U底96ウェルELISAプレートを、高度に精製された最適濃度の組み換えHA1またはCDC/523 H5N1不活化ウイルス株で、100μL/ウェルで、適切な生物学的封じ込めの下でコートし、コーティング緩衝液(0.1mol/L カーボネート/ビカーボネート、pH9.6)中で4ECにおいて一夜保温した。抗原でコートしたプレートをPBS−T(0.05%Tween20を含むリン酸緩衝生理食塩水(ph7.5))で3回洗浄し、非特異的部位を100μLのブロッキング緩衝液(5%スキムミルクを含むPBS)で37ECにおいて1時間ブロッキングした。検査血清試料をPBS−T中で2倍で系列希釈し、100μLをそれぞれのウェルに添加し、37ECで45分間保温した。プレートをPBS−Tで4回洗浄し、100μLのMAb上清と共に37ECで1時間保温した。プレートを再度4回洗浄し、結合したMAbを、100μLの1:1000希釈したペルオキシダーゼ標識ウサギ抗マウスIgの添加により、37ECで1時間保温して検出した。PBS−Tで洗浄した後、プレートを100μLの3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジン(Sigma,米国)と共に保温した。0.1N硫酸の添加により反応を止め、450nmにおいて発色を読んだ。MAbの抗原への結合を阻害する、試料の抗体により引き起こされる比色反応のパーセント阻害を、異なる希釈率のそれぞれの血清に関して、次のパーセント阻害に関する式を用いることにより算出した:
パーセント阻害=100−[OD(検査血清)/OD(陰性対照)×100]。検査血清による50%阻害の閾値を、H5HA抗体に関して>陽性=であると考えた。検査試料により引き起こされる阻害に関して、結果をMAb結合のパーセント阻害として表した。
モノクローナル抗体の特性づけ
H5NA1抗原に対するmAb類を分泌する一群のハイブリドーマクローンを、全24種類のインドネシアH5N1インフルエンザ株および他のH5および非H5亜型に対する免疫蛍光(IFA)によりスクリーニングした。結果は、5F8 MAbが全てのH5亜型を用いて感染させた全てのMDCK細胞および組み換えHA1を発現するバキュロウイルスを用いて感染させたSf−9細胞と強く反応し、陽性の細胞質の免疫蛍光パターンを生じたことを示し(図1A−1〜1A−3)、それはウサギ抗H5N1血清を用いて得られたパターンと同じであった。全ての他の亜型、例えばH7N1、H3N2、H4N2およびH9N2を感染させたMDCK細胞は、蛍光シグナルを与えなかった(図1A−2および1A−4)。mAb 5F8を、H5N1株またはH5亜型の未変性のHA1およびrHA1を検出する能力に関してウェスタンブロッティングによりスクリーニングした(図1B)。ウェスタンブロッティングにより、mAb 5F8は全てのインドネシアH5N1株およびH5亜型と強く反応し、H7N1、H3N2、H4N2およびH9N2のような他のいずれの亜型とも交叉反応は観察されなかった。IFAおよびウェスタンブロットによるモノクローナル抗体の感度および特異性に基づき、5F8 mAbをエピトープマッピングのために、次いでEB−ELISAにおける使用のために選択した。5F8 mAbのアイソタイプはIgMのクラスであると決定された。
エピトープマッピングの第1段階において、ウェスタンブロットの結果は、mAb 5F8が断片5(アミノ酸256〜337)と反応したことを示した(図2Aおよび2B;図2Bにおいて、最初の”C”は対照を表し、”A B C D E”は図2Aにおいて言及されている断片の名前を表す)。
エピトープブロッキングELISAアッセイの診断上の有効性を、ヒトおよびニワトリの血清試料中でH5HA抗体を検出するその能力により特性付けした。全てのH5N1インフルエンザ感染から回復したヒトの血清試料は、mAb 5F8を用いて実施したエピトープブロッキングELISAにおいて、感染から回復した時間に依存して96を超える希釈率において50%を超える平均ブロッキング値(mean blocking values)で検査の結果が陽性であった(表3B)。HI検査も24(log24〜25)のHI力価を示した。非H5ワクチン接種したヒトの血清を用いた試料は、1:5希釈で10〜15%の阻害を示した。しかし、ヘマグルチニン阻害アッセイは14.4(log23〜28)のHI力価を示し、これは交叉反応性を示している。普通のヒトの血清は、MAbのその抗原部位に対する結合の7%未満のブロッキングを示した。
表3b
EB−ELISAおよびインフルエンザ感染に対する抗体に関する血清学的検査に一般的に用いられるHI検査の結果は、既存の血清学的検査と比較したEB−ELISAの能力を説明している。10種類の十分に定義された陽性のヒトH5N1血清試料および非H5ワクチン接種した提供者からの5種類の血清を含む15種類の十分に定義された陰性の血清試料を用いた検査の結果は、全ての抗H5N1陽性の血清を同定することができ非H5ワクチン接種した血清とは交叉反応しないEB−ELISAの信頼性を実証している。系列希釈した血清試料をEB ELISAおよびHI検査の両方で検査した際に、ELISAはHIよりも低い抗体レベルを検出することができ、非H5ワクチン接種した血清試料と交叉反応しなかった。それに対し、HI検査は非H5ワクチン接種した血清試料の異種の抗HA抗体と反応した。
I.実験的なこと
1G5と名付けられた第2のモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ上清を得るための、実施例1の一般的な手順に従って生成した。そのmAbは、H5N1インフルエンザウイルス株A/ガチョウ/広東省/97からクローニングされた組み替えHA0タンパク質に対して産生された。
Sf−9およびMDCK細胞を960ウェルプレート中にまき、それぞれ切り詰めたH5N1 HA1遺伝子を有する組み換えバキュロウイルスおよびH5N1ウイルスと共に保温し、感染の36時間後において、細胞を4%パラホルムアルデヒドで30分間、室温で固定した。全ての洗浄はPBS、pH7.4で実施した。固定した細胞を、ハイブリドーマ培養液と共に37℃で1時間保温し、洗浄し、フルオレセインイソチオシアネート(FITC)コンジュゲートウサギ抗マウスIgの1:50希釈液と共に保温した。細胞を洗浄し、蛍光を適切なバリアおよび励起フィルターのあるOlympus 1X71を用いて可視化した。
免疫ブロッティングは、実施例1の一般的な手順に従って行った。
1G5のエピトープマッピング
mAb 1G5に関するエピトープを、断片化したタンパク質の過剰発現のプロトコルを用いてマッピングした。1G5のエピトープの位置を決定するために、rHA1タンパク質を図5Aに示した5種類の重なり合う断片に、実施例1で述べたプロトコルを用いて切り分けた。
mAb 1G5を用いるエピトープブロッキングELISAの特異性を、実施例1で述べた手順に従って決定した。
実施例1の教えに従って、エピトープブロッキングELISAにおいてmAb 1G5を用いた。
モノクローナル抗体の特性付け
H5A1抗原に対するmAb類を分泌する一群のハイブリドーマクローンを、全24種類の既知のインドネシアH5N1インフルエンザ株および他のH5および非H5亜型に対する免疫蛍光(IFA)によりスクリーニングした。結果は、mAb 1G5が全てのH5亜型を用いて感染させた全てのMDCK細胞および組み換えHA1を発現するバキュロウイルスを用いて感染させたSf−9細胞と強く反応し、陽性の細胞質の免疫蛍光パターンを生じたことを示し(図4A−1および4A−3)、それはウサギ抗H5N1血清を用いて得られたパターンと同じであった。全ての他の亜型、例えばH7N1(図4A−2および図4A−4)、H3N2、H4N1、H9N2およびH10N5は蛍光シグナルを与えなかった。mAb 1G5を、H5N1株またはH5亜型の未変性のHA1およびrHA1を検出する能力に関してウェスタンブロッティングによりスクリーニングした(図4B)。mAb 1G5は全ての既知のインドネシアH5N1株およびH5亜型と強く反応した;ウェスタンブロッティングにより、他の亜型との交叉反応は観察されなかった。IFAおよびウェスタンブロットによるモノクローナル抗体の感度および特異性に基づき、1G5 mAbをエピトープマッピングのために、次いでEB−ELISAにおける使用のために選択した。mAb 1G5のアイソタイプはクラスIgMであると決定された。
エピトープマッピングの第1段階において、断片のウェスタンブロット分析は、mAb 1G5がアミノ酸256〜337である第5断片と反応したことを示した(図5B)。
ウェスタンブロッティングの結果
ウェスタンブロッティングの結果
第3段階において、クローンSF6の中に、308から320までの全てのアミノ酸がアラニンに変異するように、一度に1つのアミノ酸に点変異を導入し、タンパク質断片を再度His融合タンパク質として発現させた。ウェスタンブロットにおいて、そのmAbはアミノ酸310〜317に変異のあるタンパク質断片とは反応しないが、それ以外とは陽性の反応を示すことが観察された(図5C)。これらの結果から、mAb 1G5により認識されるエピトープはIHPLTIGEであると結論づけた。
点変異した断片のウェスタンブロット分析
エピトープブロッキングELISAアッセイの診断上の有効性を、ヒトおよびニワトリの血清試料中でH5HA抗体を検出するその能力により特性付けした。全てのH5N1で免疫したヒトおよびニワトリの血清試料は、mAb 1G5を用いて実施したEB−ELISAにおいて、ニワトリにおいて1:30の平均血清希釈率で(図8ならびに図9Aおよび9B参照)、および回復したヒトの血清試料において1:10希釈で(図8)、50%の平均ブロッキング値で検査の結果が陽性であった。さらに、非H5ワクチン接種したヒトの血清は、1:5希釈で7〜13%の阻害を示した。それに対し、HIアッセイはHI力価log22を示した。
抗原捕捉ELISA(AC−ELISA)の開発
96ウェルプレート(Nunc,デンマーク)を、50μlの炭酸緩衝液(73mM重炭酸ナトリウムおよび30mM炭酸ナトリウム)中の精製したmAb類5F8および/または1G5でコートし、37℃で1時間または4℃で一夜保温した。それぞれの保温工程の後、プレートを0.05%Tween20を含むPBS(PBST)で3回洗浄し、全ての希釈液は1%脱脂乳を含むPBST中で作った。プレートを100μlのブロッキング溶液(PBS−T中5%脱脂乳と共に37℃で1時間保温することによりブロッキングし、すすぎ、50μlの精製した高病原性H5N1インドネシア株/低病原性AIV H5亜型(H5N1/PR8、H5N2およびH5N3)/他の非H5亜型と共に37℃で1時間保温した。すすいだ後、100μlのモルモット単一特異性抗体IgG(1:500希釈)を添加し、37℃で1時間保温し、洗浄し、さらに100μlのHRPコンジュゲートウサギ抗モルモット免疫グロブリン(1:1000で希釈した)と共に保温した。発色は100μlのTMB基質溶液の添加により行った;反応を4M H2SO4の添加により止め、sunrise Tecan Remote ELISAプレートリーダーを用いてA450の値を測定した。mAb類および単一特異性抗体の使用濃度(working concentration)を、交差力価測定により決定した。
Claims (28)
- 以下:
(a)トリインフルエンザウイルスのH5亜型のヘマグルチニンのエピトープに特異的に結合する抗体であって、アメリカ培養細胞系統保存機関に受け入れ番号PTA−8757で寄託されたハイブリドーマ5F8により産生されるモノクローナル抗体5F8の免疫学的結合特性を有し、ここで前記免疫学的結合特性はモノクローナル抗体5F8が結合するエピトープCNTKCQTPに結合することを含む、抗体;および
(b)H5ヘマグルチニンのエピトープCNTKCQTPに結合する抗体
から選択される抗体。 - モノクローナル抗体、単鎖抗体、抗体断片、キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項1に記載の抗体。
- アメリカ培養細胞系統保存機関に受け入れ番号PTA−8757で寄託されたハイブリドーマ5F8により産生されるモノクローナル抗体5F8。
- 生物学的標本においてH5亜型トリインフルエンザウイルスのHAに対する抗体を検出する方法であって、
(i)標本を
(a)トリインフルエンザウイルスのH5亜型のエンベロープ糖タンパク質のエピトープCNTKCQTPを含む抗原、および
(b)前記エピトープに特異的に結合する抗体であって、アメリカ培養細胞系統保存機関に受け入れ番号PTA−8757で寄託されたハイブリドーマ5F8により産生されるモノクローナル抗体5F8の免疫学的結合特性を有し、ここで前記免疫学的結合特性はモノクローナル抗体5F8が結合する前記エピトープに結合することを含む、抗体
と接触させること;および
(ii)標本中の抗体が前記のエピトープに結合するかどうかを、どれだけ多くの前記モノクローナル抗体5F8の特性を有する抗体が前記抗原に結合するかを決定することにより決定すること
を含む方法。 - 前記の標本を請求項3に記載のモノクローナル抗体と接触させる、請求項4に記載の方法。
- 生物学的標本においてH5亜型トリインフルエンザウイルスを検出するためのキットであって、請求項1、2に、または3に記載の抗体、糖タンパク質またはその一部であってエピトープCNTKCQTPを含むもの、および前記の抗体の前記のエピトープへの結合を検出するための試薬を含むキット。
- 請求項3に記載のモノクローナル抗体を含む、請求項6に記載のキット。
- 請求項6に記載のキットであって、前記の試薬が、前記の抗体が前記の生物学的標本中の前記の糖タンパク質またはその一部の前記のエピトープを認識する抗体の存在により前記の糖タンパク質またはその一部に結合するのを妨げられたかどうかを検出することができるキット。
- 生物学的標本においてH5亜型トリインフルエンザウイルスを検出する方法であって、
前記標本を請求項1、2、または3に記載の抗体と接触させること;および
前記抗体と前記H5亜型トリインフルエンザウイルスのH5ヘマグルチニンとの結合を決定すること
を含む、方法。 - 前記標本を請求項3に記載のモノクローナル抗体と接触させる、請求項9に記載の方法。
- 生物学的標本においてH5亜型トリインフルエンザウイルスを検出するためのキットであって、請求項1、2、または3に記載の抗体、および前記抗体とエピトープCNTKCQTPとの結合を検出するための試薬を含む、キット。
- 請求項3に記載のモノクローナル抗体を含む、請求項11に記載のキット。
- 標識され、または固体支持体に付着させた結合タンパク質をさらに含む、請求項11に記載のキット。
- 前記結合タンパク質が、トリインフルエンザウイルスに結合する抗体またはモノクローナル抗体である、請求項13に記載のキット。
- 以下:
(a)H5亜型トリインフルエンザウイルスのヘマグルチニンのエピトープに特異的に結合する抗体であって、アメリカ培養細胞系統保存機関に受け入れ番号PTA−8756で寄託されたハイブリドーマ1G5により産生されるモノクローナル抗体1G5の免疫学的結合特性を有し、ここで前記免疫学的結合特性はモノクローナル抗体1G5が結合するエピトープIHPLTIGEに結合することを含む、抗体;および
(b)H5ヘマグルチニンのエピトープIHPLTIGEに結合する抗体
から選択される、抗体。 - モノクローナル抗体、単鎖抗体、抗体断片、キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項15に記載の抗体。
- アメリカ培養細胞系統保存機関に受け入れ番号PTA−8756で寄託されたハイブリドーマ1G5により産生されるモノクローナル抗体1G5。
- 生物学的標本においてH5亜型トリインフルエンザウイルスのHAに対する抗体を検出する方法であって、
(i)標本を
(a)トリインフルエンザウイルスのH5亜型のエンベロープ糖タンパク質のエピトープIHPLTIGEを含む抗原、および
(b)前記エピトープに特異的に結合する抗体であって、アメリカ培養細胞系統保存機関に受け入れ番号PTA−8756で寄託されたハイブリドーマ1G5により産生されるモノクローナル抗体1G5の免疫学的結合特性を有し、ここで前記免疫学的結合特性はモノクローナル抗体1G5が結合する前記エピトープに結合することを含む、抗体
と接触させること;および
(ii)標本中の抗体が前記のエピトープに結合するかどうかを、どれだけ多くの前記モノクローナル抗体1G5の特性を有する抗体が前記抗原に結合するかを決定することにより決定すること
を含む方法。 - 前記の標本を請求項17に記載のモノクローナル抗体と接触させる、請求項18に記載の方法。
- 生物学的標本においてH5亜型トリインフルエンザウイルスを検出するためのキットであって、請求項15、16、または17に記載の抗体、糖タンパク質またはその一部であってエピトープIHPLTIGEを含むもの、および前記の抗体の前記のエピトープへの結合を検出するための試薬を含むキット。
- 請求項17に記載のモノクローナル抗体を含む、請求項20に記載のキット。
- 請求項20に記載のキットであって、前記の試薬が、前記の抗体が前記の生物学的標本中の前記の糖タンパク質またはその一部の前記のエピトープを認識する抗体の存在により前記の糖タンパク質またはその一部に結合するのを妨げられたかどうかを検出することができるキット。
- 生物学的標本においてH5亜型トリインフルエンザウイルスを検出する方法であって、
前記標本を請求項15、16、または請求項17に記載の抗体と接触させること;および
前記抗体とH5亜型トリインフルエンザウイルスのH5ヘマグルチニンとの結合を決定すること
を含む、方法。 - 前記標本を請求項17に記載のモノクローナル抗体と接触させる、請求項23に記載の方法。
- 生物学的標本においてH5亜型トリインフルエンザウイルスを検出するためのキットであって、請求項15、16、または17に記載の抗体、および前記抗体とエピトープIHPLTIGEとの結合を検出するための試薬を含む、キット。
- 請求項17に記載のモノクローナル抗体を含む、請求項25に記載のキット。
- 標識され、または固体支持体に付着させた結合タンパク質をさらに含む、請求項25に記載のキット。
- 前記結合タンパク質が、トリインフルエンザウイルスに結合する抗体またはモノクローナル抗体である、請求項27に記載のキット。
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