CN111440803A - 百合bbti5基因在调节植物光周期和开花时间中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供百合BBTI5在调节植物光周期和开花时间中的应用，将BBTI5不同基因型中的一种在水稻中RNAi干扰表达，转化植株在长日照、短日照条件下均表现出早花，尤其在短日照条件下表现出水稻高产，结果表明BBTI5基因对开花的时间起着非常重要的调节作用。本发明首次利用RNAi干扰技术在水稻中表达百合开花调节基因来调节植物光周期和开花时间。RNAi干扰表达基因BBTI5不仅可明显抑制水稻开花，使开花时间提早，生育期缩短，且能在20℃低温条件下同样表现早花现象。这种手段不仅解决调整百合花期对接鲜切花生产季节的问题，且解决各种作物的生育期调控问题，及光周期敏感性问题，最重要的是能解决引种和适应性问题。

Description

百合BBTI5基因在调节植物光周期和开花时间中的应用

技术领域

本发明涉及植物基因工程领域，具体地说，涉及百合开花调节基因BBTI5在调节植物光周期和开花时间中的应用。

背景技术

光周期是环境信号之一，控制着动物、植物，包括真菌的许多发育反应。在大多数植物中，通常从营养生长到开花的转变是由环境因素控制的，光周期在成花过程中起着至关重要的作用，它使许多物种的活力与季节的变化同步。关于植物对光周期反应的分子机制方面主要包括叶片的光信号，昼夜节律的夹带，以及产生一个在植物中传播的移动信号等。在受光周期控制的植物中，开花、块茎形成和芽形成只是许多不同反应中的一小部分。对于控制这些反应的已知分子机制的比较表明，虽然相互之间存在共同点，但这些反应之间在调节机制上差异表现显著。百合作为长日照植物，之前关于百合开花诱导的分子机制的研究大多集中在春化上，但是光周期对百合的开花转变也是非常重要的。开花是影响植物适应性和生产力的一个最为重要过程之一，对于它的作用机理的揭示，不仅对百合的开花和成熟，而且对百合的形态、最终产量和耐逆性可能都将产生重大的影响。

水稻是一种短日（SD）植物，即在SD条件下加速开花，介导日照反应。与拟南芥类拟，水稻光周期途径的遗传途径是保守的。水稻品种开花时间的多样性主要是由于开花基因等位基因的差异及其相互作用。光周期调控途径是控制水稻开花的关键，其中成花基因Hd3a和RTF1为核心，受上游Hd1依赖、Ehd1依赖以及Hd1和Ehd1独立途径的调控。水稻中Hd1在SD条件下促进开花，而在LD条件下抑制开花。OsGI转录受昼夜节律时钟控制，显示出一种节律性表达模式，在光周期结束时达到高峰，类似于拟南芥。osgi的突变除了影响Hd1外，还影响一大组水稻基因，约75%的水稻转录本在一个白天的过程中显示出突变水平的改变。Ghd7编码CCT（CO，CO-LIKE，和CAB1）结构域蛋白，通过分析开花时间的自然变化来分离，同时Ghd7影响Ehd1和Hd3a转录物的水平，但不影响Hd1 mRNA的水平。在LD条件下，Ghd7抑制Ehd1、Hd3a和RFT1，从而延迟开花。总之，水稻中存在两条独立的开花途径：保守的Hd1-Hd3a途径和独特的Ghd7-Ehd1-Hd3a/RFT1途径，这两条途径可以整合环境光周期信号来控制开花。百合作为长日照植物，其相关的调控其开花网络途径及基因很少见。目前研究表明植物中有91 个 Bowman-Birk 基因，多数分布于水稻、大麦、玉米、大豆、花生、刺桐等开花植物，主要功能研究集中在对昆虫的抗性、植物生长发育和植物逆境胁迫响应方面。本研究通过前期的基因信息挖掘，首次克隆获得了一个百合Bowman-Birk家族基因新基因BBTI5，已在单子叶模式植物水稻中完成了光周期调控的功能验证，结果表明RNAi-BBTI5干扰载体转化的水稻与野生型相比表现提早开花。这将为百合品种花期分子改良奠定重要的理论指导意义。

发明内容

本发明的目的是提供百合开花调节基因BBTI5在调节植物光周期和开花时间中的应用。

为了实现本发明目的，采用以下技术方案：

百合开花调节基因BBTI5在调节植物光周期和开花时间中的应用，其基因BBTI5编码蛋白的氨基酸序列如：SEQ ID No.1所示；或为该氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的具有同等功能的氨基酸序列。

所述基因BBTI5的CDS序列如SEQ ID No.2所示。

前述的应用，所述调节植物开花时间具体表现为提早植物开花时间。在长日照或短日照条件下，调节植物开花时间表现为提早植物开花时间；在短日照条件下，提高产量；在20℃低温条件下正常完成抽穗、结实。

所述植物为水稻。

前述的应用，是通过在水稻RNAi干扰表达基因BBTI5的CDS序列，从而提早转基因水稻的开花时间及生育期。具体方法如下：

提取百合（如观赏百合）总RNA，反转录成cDNA，以cDNA为模板进行PCR扩增获得如SEQID No.2所示的基因BBTI5的CDS序列，并将所述的CDS序列正反向分两步先后构建到植物干扰表达载体pTCK303的Ubiquitin启动子的下游和Rice intron的下游，转化水稻，筛选转基因水稻阳性植株。

所述植物干扰表达载体的起始载体骨架为pTCK303。

PCR扩增所用引物设计为：

正向引物Bi5F: 5'-ATGAGCAACACTACCATGGCTACTT-3'（SEQ ID No.4）

反向引物Bi5R:5'-CTAGTTCTCCGCTCGGGGTTTGCAC-3'（SEQ ID No.5）

正向引物Bi5F1: 5'-GGTACCATGAGCAACACTACCATGGCTACTT-3' （SEQ ID No.6）

反向引物Bi5R1:5'-GGATCCCTAGTTCTCCGCTCGGGGTTTGCAC-3' （SEQ ID No.7）

正向引物Bi5F2: 5'-ACTAGTATGAGCAACACTACCATGGCTACTT-3'（SEQ ID No.8）

反向引物Bi5R2: 5'-GAGCTCCTAGTTCTCCGCTCGGGGTTTGCAC-3'（SEQ ID No.9）

正向引物hygF: 5'-TACACAGCCATCGGTCCAGA-3'（SEQ ID No.10）

反向引物hygR: 5'-TAGGAGGGCGTGGATATGTC-3'(SEQ ID No.11)

本发明构建的RNAi干扰表达载体的全序列如SEQ ID No.3所示。

本发明中转化水稻的具体方法如下：所构建的干扰表达载体采用农杆菌介导的方法转入日本晴水稻愈伤组织中，用乙酰丁香酮（AS）和农杆菌AAM培养液进行转化，转化后材料经过共培养-洗菌-筛选-分化-生根，移栽种植温室大棚后检测筛选转基因水稻阳性植株。

本发明农杆菌转化中利用潮霉素作为抗性筛选转基因水稻阳性植株。

将BBTI5基因在单子叶植物日本晴野生型水稻中RNAi干扰表达，转化植株在长日照、短日照条件下均表现早花，表明BBTI5对开花的时间起着非常重要的调节作用。

本发明首次利用RNAi干扰表达百合开花调节基因BBTI调节植物光周期和开花时间。 RNAi干扰表达基因BBTI5不仅可以明显抑制水稻开花，使开花时间提早，生育期缩短，而且能够在20℃低温条件下表现同样早花现象。这种手段不仅解决调整百合花期对接鲜切花生产季节的问题，而且可以在各种作物的生育期调控问题，各种园艺植物、药用植物和经济作物，比如：食用百合、药用百合、观赏百合、水稻、玉米、大豆和洋葱等，最重要的是能解决引种和适应性问题。

附图说明

图1为实施例1中RNAi干扰表达载体pTCK303-BBTI5的结构示意图。

图2为实施例3中RNAi干扰表达BBTI5基因相对水稻日本晴野生型表现早花的表型（A)及PCR检测转基因阳性水稻株系结果（B)。WT为野生型水稻，RNAi-BBTI5-1和RNAi-BBTI5-2为转基因株系。

图3为实施例4中RNAi干扰表达基因BBTI5水稻材料的开花时间比较。WT为野生型水稻，RNAi-BBTI5-1和RNAi-BBTI5-2为转基因株系。

具体实施方式

以下实施例如未特别指明，均按照常规实验条件操作。

实施例1为百合开花调节基因BBTI5的克隆及植物表达载体的构建。

基于水稻基因组数数库（http://rice.plantbiology.msu.edu/）中同源BBTI5基因（LOC_Os01g03360.1），根据其序列设计PCR扩增引物（SEQ ID No.4和5），提取观赏百合系列“西伯”总RNA，反转录成cDNA，以cDNA为模板进行PCR扩增、回收、克隆到pGXT中间载体，获得pGXT-BBTI5骨架载体转化子，挑取pGXT-BBTI5阳性单菌落，并送测序分析，获得百合BBTI5基因的CDS序列（SEQ ID No.2)。

以Bi5F1/Bi5R1和Bi5F2/Bi5R2两对引物，以百合pGXT-BBTI5为模板，高保真酶Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase（货号：P505-d1）构建PCR扩增体系和反应程序。将PCR产物纯化、回收后分别克隆到pGXT中间载体上；分别以BamHI/KpnI 双酶切和SpeI/SacI双酶切后，分步构建到带有Ubiquitin启动子的pTCK303骨架栽体后，及RiceIntron元件后。最终获得了RNAi干扰表达载体pTCK303-BBTI5（图1），其全序列如SEQ IDNo.3所示。

实施例2转基因水稻植株的转化方法

本实施例中涉及野生型日本晴种子成熟胚转化的培养基配方如下：

种子消毒：成熟种子做剥壳处理后，转移到50 mL三角瓶中，先用75%酒精漂洗2 min，再后2%次氯酸钠摇床80 rpm处理30 min，无菌水清洗5～8次，移到高压滤纸的培养皿中吹干。

愈伤诱导：转移种子到N6-C（含N6基础培养基+2,4-D 2mg/L)(N6基础培养基购自PhytoTechnology Laboratories™公司，货号：C167)愈伤诱导培养基上，每个培养皿放置20～30粒种子，28℃暗条件下放置1个月生长胚性愈伤组织。N6的配方：加入N6基础培养基4.1g，1 mL Cu/Mo/Co, 维生素和甘氨酸，KI，100 mg 肌醇，250 mg酪氨酸，2.6 g脯氨酸，35g蔗糖，终体积为1 L，调节PH值到5.6。并加入5.0g/L凝胶剂，121℃高压15min。

农杆菌侵染：从甘油保存的pTCK303-BBTI5菌株中挑取农杆菌划板，2天后挑取单菌落在含50 mg/ml利福平和50 mg/ml卡那霉素的液体培养基中，摇床上250 rpm培养1d～3d后，调整OD600读数在0.6～1.0之间；4000×g离心力离心5 min收集菌，并重悬于N6-AS液体培养基中（N6培养基+乙酰丁香酮终浓度为150 uM），获得农杆菌侵染液，调整OD600读数在0.1～0.2之间。转移20 g胚性愈伤组织到50 mL离心管中，加50 mL农杆菌侵染液，28 ℃培养箱中静置30 min充分感染，倒出液体培养物，将胚性愈伤在滤纸上吹干，转至N6-AS固体培养基上，26 ℃暗条件共培养3 d。

抗性愈伤筛选：将侵染的愈伤组织从共培养转移到250 mL三角瓶中，加入终浓度250 mg/L羧苄青霉素，28℃暗培养静置30 min，用无菌水清洗5～8次，转移到筛选培养基N6-S（N6培养基+50mg/ml 1 mL潮霉素）上，28℃暗培养条件生长抗性愈伤。

再生植株生长：将抗性愈伤转移到N6-R（MS基础培养基+0.5mg/L 6-BAP+0.2mg/LNAA）植物再生培养基中，28℃光培养15～25d，后转移到生根培养基MS-RG（MS培养基）中，28℃光培养生长植株，最终获得两种突变体植株，命名为RNAi-BBTI5-1、RNAi-BBTI5-2。

实施例3转基因阳性株系的PCR检测鉴定

1）液氮研磨水稻叶片，CTAB法提取水稻叶片基因组DNA。

2）PCR扩增体系和PCR反应程序：

反应体系：利用北京天根的Golden Easy PCR System Golden Easy PCR 系统，PCR扩增混合体系如下：

PCR 反应循环：

3) PCR产物，220V电泳1.5%琼脂糖跑胶检测。

4) PCR检测结果（见图2.B）上看，筛选获得两个转基因水稻阳性株系RNAi-BBTI5-1和RNAi-BBTI5-2中扩增到潮霉素基因845bp目的片段；野生型WT为阴性对照，无扩增条带。

实施例4百合BBTI5在转基因水稻表型分析

水稻从种子萌发开始一直生长在人工气候箱中，长日照条件为16h光照/8h黑暗条件，生长温度为28℃，短日照条件为8h光照/16h光照条件，生长温度为28℃；水培营养液配方参照国际水稻研究所（IRRI）推荐的标准（1000倍）。与野生型日本晴水稻相比，在长日照和短日照条件下，转基因株系RNAi-BBTI5-1和RNA-BBTI5-2的开花时间明显提高（图2.A为长日照条件种植生长42d）。

显然，上文中已经用一般性的说明和具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，还可以对它进行进一步的修改或改进，比如应用CRISP/Cas9基因编辑的方法对BBTI5基因进行敲除验证，但这对本领域技术人员来说是显而易见的。因此，在不偏离本发明思路和设计的基础上所做的这些修改和技术改进，均属于本发明要求保护的范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 福建省农业科学院生物技术研究所

<120> 百合BBTI5基因在调节植物光周期和开花时间中的应用

<130> 12

<160> 11

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 254

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Met Ser Asn Thr Thr Met Ala Thr Ser Thr Ile Leu Leu Phe Leu Leu

1 5 10 15

Ala Gly Leu Ala Ala Ala His Gly Asp Gly Asp Thr Thr Ile Arg Leu

20 25 30

Pro Ser Asp Gly Ala Lys Ala Ser Arg Pro Arg Ala Ala Lys Pro Trp

35 40 45

Asp Cys Cys Asp Asn Ile Glu Ile Ser Arg Leu Met Ile Tyr Pro Pro

50 55 60

Leu Tyr Arg Cys Asn Asp Glu Val Lys Gln Cys Ala Ala Ala Cys Lys

65 70 75 80

Glu Cys Val Glu Ala Pro Gly Gly Asp Phe Asn Gly Gly Ala Phe Val

85 90 95

Cys Ser Asp Trp Phe Ser Thr Val Asp Pro Gly Pro Lys Cys Thr Ala

100 105 110

Ala Leu Asp Gly Leu Ser Met Glu Arg Pro Trp Lys Cys Cys Asp Asn

115 120 125

Ile Lys Arg Leu Pro Thr Lys Pro Asp Pro Pro Gln Trp Arg Cys Asn

130 135 140

Asp Glu Leu Glu Pro Ser Gln Cys Thr Ala Ala Cys Lys Ser Cys Arg

145 150 155 160

Glu Ala Pro Gly Pro Phe Pro Gly Lys Leu Ile Cys Glu Asp Ile Tyr

165 170 175

Trp Gly Ala Asp Pro Gly Pro Phe Cys Thr Pro Arg Pro Trp Gly Asp

180 185 190

Cys Cys Asp Lys Ala Phe Cys Asn Lys Met Asn Pro Pro Thr Cys Arg

195 200 205

Cys Met Asp Glu Val Lys Glu Cys Ala Asp Ala Cys Lys Asp Cys Gln

210 215 220

Arg Val Glu Ser Ser Glu Pro Pro Arg Tyr Val Cys Lys Asp Arg Phe

225 230 235 240

Thr Gly His Pro Gly Pro Val Cys Lys Pro Arg Ala Glu Asn

245 250

<210> 2

<211> 765

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

atgagcaaca ctaccatggc tacttccacc atcctgctct tcctcctcgc cggcctcgcc 60

gccgcccacg gcgacggcga caccaccatc cgtctcccca gcgacggcgc caaagcatca 120

cgaccacgcg ccgccaaacc atgggactgc tgcgacaaca tcgagatctc ccggctaatg 180

atctacccgc cactgtaccg ctgcaacgac gaggtgaagc agtgcgccgc cgcctgcaag 240

gagtgcgtgg aggcgcccgg cggcgacttc aacggcggcg ccttcgtctg cagtgactgg 300

ttctcgacgg tggaccccgg ccccaagtgc acggcggcgc tggatgggct gtcgatggag 360

aggccgtgga agtgctgcga caacatcaag cggctgccga cgaagcccga cccgccgcag 420

tggcgctgca acgacgagct ggagcccagc cagtgcaccg ccgcgtgcaa gtcgtgccgg 480

gaggcgccgg ggccattccc ggggaagctc atctgcgagg acatctactg gggcgccgac 540

ccgggcccct tctgcacgcc gcggccatgg ggagattgct gcgacaaggc cttctgcaac 600

aagatgaacc cgccgacctg ccgctgcatg gacgaggtga aggagtgcgc cgacgcgtgc 660

aaggattgcc agcgcgtgga gtcgtcggag ccgcctcgct acgtctgcaa ggaccgcttc 720

accggccatc ccggccccgt gtgcaaaccc cgagcggaga actag 765

<210> 3

<211> 16141

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

gatctgaggg taaatttcta gtttttctcc ttcattttct tggttaggac ccttttctct 60

ttttattttt ttgagctttg atctttcttt aaactgatct attttttaat tgattggtta 120

tggtgtaaat attacatagc tttaactgat aatctgatta ctttatttcg tgtgtctatg 180

atgatgatga tagttacaga accgacgact cgtccgtcct gtagaaaccc caacccgtga 240

aatcaaaaaa ctcgacggcc tgtgggcatt cagtctggat cgcgaaaact gtggaattga 300

tcagcgttgg tgggaaagcg cgttacaaga aagccgggca attgctgtgc caggcagttt 360

taacgatcag ttcgccgatg cagatattcg taattatgcg ggcaacgtct ggtatcagcg 420

cgaagtcttt ataccgaaag gttgggcagg ccagcgtatc gtgctgcgtt tcgatgcggt 480

cactcattac ggcaaagtgt gggtcaataa tcaggaagtg atggagcatc agggcggcta 540

tacgccattt gaagccgatg tcacgccgta tgttattgcc gggaaaagtg tacgtatcac 600

cgtttgtgtg aacaacgaac tgaactggca gactatcccg ccgggaatgg tgattaccga 660

cgaaaacggc aagaaaaagc agtcttactt ccatgatttc tttaactatg ccggaatcca 720

tcgcagcgta atgctctaca ccacgccgaa cacctgggtg gacgatatca ccgtggtgac 780

gcatgtcgcg caagactgta accacgcgtc tgttgactgg caggtggtgg ccaatggtga 840

tgtcagcgtt gaactgcgtg atgcggatca acaggtggtt gcaactggac aaggcactag 900

cgggactttg caagtggtga atccgcacct ctggcaaccg ggtgaaggtt atctctatga 960

actcgaagtc acagccaaaa gccagacaga gtctgatatc tacccgcttc gcgtcggcat 1020

ccggtcagtg gcagtgaagg gccaacagtt cctgattaac cacaaaccgt tctactttac 1080

tggctttggt cgtcatgaag atgcggactt acgtggcaaa ggattcgata acgtgctgat 1140

ggtgcacgac cacgcattaa tggactggat tggggccaac tcctaccgta cctcgcatta 1200

cccttacgct gaagagatgc tcgactgggc agatgaacat ggcatcgtgg tgattgatga 1260

aactgctgct gtcggctttc agctgtcttt aggcattggt ttcgaagcgg gcaacaagcc 1320

gaaagaactg tacagcgaag aggcagtcaa cggggaaact cagcaagcgc acttacaggc 1380

gattaaagag ctgatagcgc gtgacaaaaa ccacccaagc gtggtgatgt ggagtattgc 1440

caacgaaccg gatacccgtc cgcaaggtgc acgggaatat ttcgcgccac tggcggaagc 1500

aacgcgtaaa ctcgacccga cgcgtccgat cacctgcgtc aatgtaatgt tctgcgacgc 1560

tcacaccgat accatcagcg atctctttga tgtgctgtgc ctgaaccgtt attacggatg 1620

gtatgtccaa agcggcgatt tggaaacggc agagaaggta ctggaaaaag aacttctggc 1680

ctggcaggag aaactgcatc agccgattat catcaccgaa tacggcgtgg atacgttagc 1740

cgggctgcac tcaatgtaca ccgacatgtg gagtgaagag tatcagtgtg catggctgga 1800

tatgtatcac cgcgtctttg atcgcgtcag cgccgtcgtc ggtgaacagg tatggaattt 1860

cgccgatttt gcgacctcgc aaggcatatt gcgcgttggc ggtaacaaga aagggatctt 1920

cactcgcgac cgcaaaccga agtcggcggc ttttctgctg caaaaacgct ggactggcat 1980

gaacttcggt gaaaaaccgc agcagggagg caaacaagct agccaccacc accaccacca 2040

cgtgtgaatt acaggtgacc agctcgaatt tccccgatcg ttcaaacatt tggcaataaa 2100

gtttcttaag attgaatcct gttgccggtc ttgcgatgat tatcatataa tttctgttga 2160

attacgttaa gcatgtaata attaacatgt aatgcatgac gttatttatg agatgggttt 2220

ttatgattag agtcccgcaa ttatacattt aatacgcgat agaaaacaaa atatagcgcg 2280

caaactagga taaattatcg cgcgcggtgt catctatgtt actagatcgg gaattaaact 2340

atcagtgttt gacaggatat attggcgggt aaacctaaga gaaaagagcg tttattagaa 2400

taacggatat ttaaaagggc gtgaaaaggt ttatccgttc gtccatttgt atgtgcatgc 2460

caaccacagg gttcccctcg ggatcaaagt actttgatcc aacccctccg ctgctatagt 2520

gcagtcggct tctgacgttc agtgcagccg tcttctgaaa acgacatgtc gcacaagtcc 2580

taagttacgc gacaggctgc cgccctgccc ttttcctggc gttttcttgt cgcgtgtttt 2640

agtcgcataa agtagaatac ttgcgactag aaccggagac attacgccat gaacaagagc 2700

gccgccgctg gcctgctggg ctatgcccgc gtcagcaccg acgaccagga cttgaccaac 2760

caacgggccg aactgcacgc ggccggctgc accaagctgt tttccgagaa gatcaccggc 2820

accaggcgcg accgcccgga gctggccagg atgcttgacc acctacgccc tggcgacgtt 2880

gtgacagtga ccaggctaga ccgcctggcc cgcagcaccc gcgacctact ggacattgcc 2940

gagcgcatcc aggaggccgg cgcgggcctg cgtagcctgg cagagccgtg ggccgacacc 3000

accacgccgg ccggccgcat ggtgttgacc gtgttcgccg gcattgccga gttcgagcgt 3060

tccctaatca tcgaccgcac ccggagcggg cgcgaggccg ccaaggcccg aggcgtgaag 3120

tttggccccc gccctaccct caccccggca cagatcgcgc acgcccgcga gctgatcgac 3180

caggaaggcc gcaccgtgaa agaggcggct gcactgcttg gcgtgcatcg ctcgaccctg 3240

taccgcgcac ttgagcgcag cgaggaagtg acgcccaccg aggccaggcg gcgcggtgcc 3300

ttccgtgagg acgcattgac cgaggccgac gccctggcgg ccgccgagaa tgaacgccaa 3360

gaggaacaag catgaaaccg caccaggacg gccaggacga accgtttttc attaccgaag 3420

agatcgaggc ggagatgatc gcggccgggt acgtgttcga gccgcccgcg cacgtctcaa 3480

ccgtgcggct gcatgaaatc ctggccggtt tgtctgatgc caagctggcg gcctggccgg 3540

ccagcttggc cgctgaagaa accgagcgcc gccgtctaaa aaggtgatgt gtatttgagt 3600

aaaacagctt gcgtcatgcg gtcgctgcgt atatgatgcg atgagtaaat aaacaaatac 3660

gcaaggggaa cgcatgaagg ttatcgctgt acttaaccag aaaggcgggt caggcaagac 3720

gaccatcgca acccatctag cccgcgccct gcaactcgcc ggggccgatg ttctgttagt 3780

cgattccgat ccccagggca gtgcccgcga ttgggcggcc gtgcgggaag atcaaccgct 3840

aaccgttgtc ggcatcgacc gcccgacgat tgaccgcgac gtgaaggcca tcggccggcg 3900

cgacttcgta gtgatcgacg gagcgcccca ggcggcggac ttggctgtgt ccgcgatcaa 3960

ggcagccgac ttcgtgctga ttccggtgca gccaagccct tacgacatat gggccaccgc 4020

cgacctggtg gagctggtta agcagcgcat tgaggtcacg gatggaaggc tacaagcggc 4080

ctttgtcgtg tcgcgggcga tcaaaggcac gcgcatcggc ggtgaggttg ccgaggcgct 4140

ggccgggtac gagctgccca ttcttgagtc ccgtatcacg cagcgcgtga gctacccagg 4200

cactgccgcc gccggcacaa ccgttcttga atcagaaccc gagggcgacg ctgcccgcga 4260

ggtccaggcg ctggccgctg aaattaaatc aaaactcatt tgagttaatg aggtaaagag 4320

aaaatgagca aaagcacaaa cacgctaagt gccggccgtc cgagcgcacg cagcagcaag 4380

gctgcaacgt tggccagcct ggcagacacg ccagccatga agcgggtcaa ctttcagttg 4440

ccggcggagg atcacaccaa gctgaagatg tacgcggtac gccaaggcaa gaccattacc 4500

gagctgctat ctgaatacat cgcgcagcta ccagagtaaa tgagcaaatg aataaatgag 4560

tagatgaatt ttagcggcta aaggaggcgg catggaaaat caagaacaac caggcaccga 4620

cgccgtggaa tgccccatgt gtggaggaac gggcggttgg ccaggcgtaa gcggctgggt 4680

tgtctgccgg ccctgcaatg gcactggaac ccccaagccc gaggaatcgg cgtgacggtc 4740

gcaaaccatc cggcccggta caaatcggcg cggcgctggg tgatgacctg gtggagaagt 4800

tgaaggccgc gcaggccgcc cagcggcaac gcatcgaggc agaagcacgc cccggtgaat 4860

cgtggcaagc ggccgctgat cgaatccgca aagaatcccg gcaaccgccg gcagccggtg 4920

cgccgtcgat taggaagccg cccaagggcg acgagcaacc agattttttc gttccgatgc 4980

tctatgacgt gggcacccgc gatagtcgca gcatcatgga cgtggccagt tttaaagagt 5040

tttaggcgga aaaatcgcct tttttctctt ttatatcagt cacttacatg tgtgaccggt 5100

tcccaatgta cggctttggg ttcccaatgt acgggttccg gttcccaatg tacggctttg 5160

ggttcccaat gtacgtgcta tccacaggaa agagaccttt tcgacctttt tcccctgcta 5220

gggcaatttg ccctagcatc tgctccgtac attaggaacc ggcggatgct tcgccctcga 5280

tcaggttgcg gtagcgcatg actaggatcg ggccagcctg ccccgcctcc tccttcaaat 5340

cgtactccgg caggtcattt gacccgatca gcttgcgcac ggtgaaacag aacttcttga 5400

actctccggc gctgccactg cgttcgtaga tcgtcttgaa caaccatctg gcttctgcct 5460

tgcctgcggc gcggcgtgcc aggcggtaga gaaaacggcc gatgccggga tcgatcaaaa 5520

agtaatcggg gtgaaccgtc agcacgtccg ggttcttgcc ttctgtgatc tcgcggtaca 5580

tccaatcagc tagctcgatc tcgatgtact ccggccgccc ggtttcgctc tttacgatct 5640

tgtagcggct aatcaaggct tcaccctcgg ataccgtcac caggcggccg ttcttggcct 5700

tcttcgtacg ctgcatggca acgtgcgtgg tgtttaaccg aatgcaggtt tctaccaggt 5760

cgtctttctg ctttccgcca tcggctcgcc ggcagaactt gagtacgtcc gcaacgtgtg 5820

gacggaacac gcggccgggc ttgtctccct tcccttcccg gtatcggttc atggattcgg 5880

ttagatggga aaccgccatc agtaccaggt cgtaatccca cacactggcc atgccggccg 5940

gccctgcgga aacctctacg tgcccgtctg gaagctcgta gcggatcacc tcgccagctc 6000

gtcggtcacg cttcgacaga cggaaaacta ttaaaactct taaaacccgc ctggcctgtg 6060

cataactgtc tggccagcgc acagccgaag agctgcaaaa agcgcctacc cttcggtcgc 6120

tgcgctccct acgccccgcc gcttcgcgtc ggcctatcgc ggccgctggc cgctcaaaaa 6180

tggctggcct acggccaggc aatctaccag ggcgcggaca agccgcgccg tcgccactcg 6240

accgccggcg cccacatcaa ggcaccctgc ctcgcgcgtt tcggtgatga cggtgaaaac 6300

ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc acagcttgtc tgtaagcgga tgccgggagc 6360

agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt gttggcgggt gtcggggcgc agccatgacc 6420

cagtcacgta gcgatagcgg agtgtatact ggcttaacta tgcggcatca gagcagattg 6480

tactgagagt gcaccatatg cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc 6540

gcatcaggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc 6600

ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata 6660

acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg 6720

cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct 6780

caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa 6840

gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc 6900

tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt 6960

aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg 7020

ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg 7080

cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct 7140

tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc 7200

tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg 7260

ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc 7320

aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt 7380

aagggatttt ggtcatgcat tctaggtact aaaacaattc atccagtaaa atataatatt 7440

ttattttctc ccaatcaggc ttgatcccca gtaagtcaaa aaatagctcg acatactgtt 7500

cttccccgat atcctccctg atcgaccgga cgcagaaggc aatgtcatac cacttgtccg 7560

ccctgccgct tctcccaaga tcaataaagc cacttacttt gccatctttc acaaagatgt 7620

tgctgtctcc caggtcgccg tgggaaaaga caagttcctc ttcgggcttt tccgtcttta 7680

aaaaatcata cagctcgcgc ggatctttaa atggagtgtc ttcttcccag ttttcgcaat 7740

ccacatcggc cagatcgtta ttcagtaagt aatccaattc ggctaagcgg ctgtctaagc 7800

tattcgtata gggacaatcc gatatgtcga tggagtgaaa gagcctgatg cactccgcat 7860

acagctcgat aatcttttca gggctttgtt catcttcata ctcttccgag caaaggacgc 7920

catcggcctc actcatgagc agattgctcc agccatcatg ccgttcaaag tgcaggacct 7980

ttggaacagg cagctttcct tccagccata gcatcatgtc cttttcccgt tccacatcat 8040

aggtggtccc tttataccgg ctgtccgtca tttttaaata taggttttca ttttctccca 8100

ccagcttata taccttagca ggagacattc cttccgtatc ttttacgcag cggtattttt 8160

cgatcagttt tttcaattcc ggtgatattc tcattttagc catttattat ttccttcctc 8220

ttttctacag tatttaaaga taccccaaga agctaattat aacaagacga actccaattc 8280

actgttcctt gcattctaaa accttaaata ccagaaaaca gctttttcaa agttgttttc 8340

aaagttggcg tataacatag tatcgacgga gccgattttg aaaccgcggt gatcacaggc 8400

agcaacgctc tgtcatcgtt acaatcaaca tgctaccctc cgcgagatca tccgtgtttc 8460

aaacccggca gcttagttgc cgttcttccg aatagcatcg gtaacatgag caaagtctgc 8520

cgccttacaa cggctctccc gctgacgccg tcccggactg atgggctgcc tgtatcgagt 8580

ggtgattttg tgccgagctg ccggtcgggg agctgttggc tggctggtgg caggatatat 8640

tgtggtgtaa acaaattgac gcttagacaa cttaataaca cattgcggac gtttttaatg 8700

tactgaatta acgccgaatt aattcggggg atctggattt tagtactgga ttttggtttt 8760

aggaattaga aattttattg atagaagtat tttacaaata caaatacata ctaagggttt 8820

cttatatgct caacacatga gcgaaaccct ataggaaccc taattccctt atctgggaac 8880

tactcacaca ttattatgga gaaactcgag cttgtcgatc gacagatccg gtcggcatct 8940

actctatttc tttgccctcg gacgagtgct ggggcgtcgg tttccactat cggcgagtac 9000

ttctacacag ccatcggtcc agacggccgc gcttctgcgg gcgatttgtg tacgcccgac 9060

agtcccggct ccggatcgga cgattgcgtc gcatcgaccc tgcgcccaag ctgcatcatc 9120

gaaattgccg tcaaccaagc tctgatagag ttggtcaaga ccaatgcgga gcatatacgc 9180

ccggagtcgt ggcgatcctg caagctccgg atgcctccgc tcgaagtagc gcgtctgctg 9240

ctccatacaa gccaaccacg gcctccagaa gaagatgttg gcgacctcgt attgggaatc 9300

cccgaacatc gcctcgctcc agtcaatgac cgctgttatg cggccattgt ccgtcaggac 9360

attgttggag ccgaaatccg cgtgcacgag gtgccggact tcggggcagt cctcggccca 9420

aagcatcagc tcatcgagag cctgcgcgac ggacgcactg acggtgtcgt ccatcacagt 9480

ttgccagtga tacacatggg gatcagcaat cgcgcatatg aaatcacgcc atgtagtgta 9540

ttgaccgatt ccttgcggtc cgaatgggcc gaacccgctc gtctggctaa gatcggccgc 9600

agcgatcgca tccatagcct ccgcgaccgg ttgtagaaca gcgggcagtt cggtttcagg 9660

caggtcttgc aacgtgacac cctgtgcacg gcgggagatg caataggtca ggctctcgct 9720

aaactcccca atgtcaagca cttccggaat cgggagcgcg gccgatgcaa agtgccgata 9780

aacataacga tctttgtaga aaccatcggc gcagctattt acccgcagga catatccacg 9840

ccctcctaca tcgaagctga aagcacgaga ttcttcgccc tccgagagct gcatcaggtc 9900

ggagacgctg tcgaactttt cgatcagaaa cttctcgaca gacgtcgcgg tgagttcagg 9960

ctttttcata tctcattgcc ccccgggatc tgcgaaagct cgaggagata gatttgtaga 10020

gagagactgg tgatttcagc gtgtcctctc caaatgaaat gaacttcctt atatagagga 10080

aggtcttgcg aaggatagtg ggattgtgcg tcatccctta cgtcagtgga gatatcacat 10140

caatccactt gctttgaaga cgtggttgga acgtcttctt tttccacgat gctcctcgtg 10200

ggtgggggtc catctttggg accactgtcg gcagaggcat cttgaacgat agcctttcct 10260

ttatcgcaat gatggcattt gtaggtgcca ccttcctttt ctactgtcct tttgatgaag 10320

tgacagatag ctgggcaatg gaatccgagg aggtttcccg atattaccct ttgttgaaaa 10380

gtctcaatag ccctttggtc ttctgagact gtatctttga tattcttgga gtagacgaga 10440

gtgtcgtgct ccaccatgtt atcacatcaa tccacttgct ttgaagacgt ggttggaacg 10500

tcttcttttt ccacgatgct cctcgtgggt gggggtccat ctttgggacc actgtcggca 10560

gaggcatctt gaacgatagc ctttccttta tcgcaatgat ggcatttgta ggtgccacct 10620

tccttttcta ctgtcctttt gatgaagtga cagatagctg ggcaatggaa tccgaggagg 10680

tttcccgata ttaccctttg ttgaaaagtc tcaatagccc tttggtcttc tgagactgta 10740

tctttgatat tcttggagta gacgagagtg tcgtgctcca ccatgtttgg caagctgctc 10800

tagccaatac gcaaaccgcc tctccccgcg cgttggccga ttcattaatg cagctggcac 10860

gacaggtttc ccgactggaa agcgggcagt gagcgcaacg caattaatgt gagttagctc 10920

actcattagg caccccaggc tttacacttt atgcttccgg ctcgtatgtt gtgtggaatt 10980

gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac agctatgaca tgattacgaa ttcccgatct 11040

agtaacatag atgacaccgc gcgcgataat ttatcctagt ttgcgcgcta tattttgttt 11100

tctatcgcgt attaaatgta taattgcggg actctaatca taaaaaccca tctcataaat 11160

aacgtcatgc attacatgtt aattattaca tgcttaacgt aattcaacag aaattatatg 11220

ataatcatcg caagaccggc aacaggattc aatcttaaga aactttattg ccaaatgttt 11280

gaacgatcgg ggaaattcga gctcctagtt ctccgctcgg ggtttgcaca cggggccggg 11340

atggccggtg aagcggtcct tgcagacgta gcgaggcggc tccgacgact ccacgcgctg 11400

gcaatccttg cacgcgtcgg cgcactcctt cacctcgtcc atgcagcggc aggtcggcgg 11460

gttcatcttg ttgcagaagg ccttgtcgca gcaatctccc catggccgcg gcgtgcagaa 11520

ggggcccggg tcggcgcccc agtagatgtc ctcgcagatg agcttccccg ggaatggccc 11580

cggcgcctcc cggcacgact tgcacgcggc ggtgcactgg ctgggctcca gctcgtcgtt 11640

gcagcgccac tgcggcgggt cgggcttcgt cggcagccgc ttgatgttgt cgcagcactt 11700

ccacggcctc tccatcgaca gcccatccag cgccgccgtg cacttggggc cggggtccac 11760

cgtcgagaac cagtcactgc agacgaaggc gccgccgttg aagtcgccgc cgggcgcctc 11820

cacgcactcc ttgcaggcgg cggcgcactg cttcacctcg tcgttgcagc ggtacagtgg 11880

cgggtagatc attagccggg agatctcgat gttgtcgcag cagtcccatg gtttggcggc 11940

gcgtggtcgt gatgctttgg cgccgtcgct ggggagacgg atggtggtgt cgccgtcgcc 12000

gtgggcggcg gcgaggccgg cgaggaggaa gagcaggatg gtggaagtag ccatggtagt 12060

gttgctcata ctagtatcga ttgaaaatct cgaaacagcc gtgtcatagt caatcattag 12120

gtgttatagg aacaatcaaa ggttttttca agtgttaatc ttcatactaa tatatacagt 12180

gggtactctt tatctactgc cgtggaactg tcatatttga ttatgaaatt ttagctctag 12240

aaaatatttg atcatcaatg tcaagacttt atgaccttgc aaaatacatt tcctaattga 12300

gaacagggta aaattatgaa ctatgcctct gaaccttcat acacaggcag cacatttttt 12360

gttgtaaaat tcatcttaat atcagcggaa agactggacc agagaaagaa aaagttaaga 12420

caggcatata ctcttgatcc tctaaaagag atgaggcggt acaatgatca accatgaaca 12480

ttaaagtgat acgtggaaca tgagaacaca aataattgtc actggaacat aagtacaaaa 12540

aggtttgtag taacttaccg ctagcagatc tgtcgacctc gagggtacca tgagcaacac 12600

taccatggct acttccacca tcctgctctt cctcctcgcc ggcctcgccg ccgcccacgg 12660

cgacggcgac accaccatcc gtctccccag cgacggcgcc aaagcatcac gaccacgcgc 12720

cgccaaacca tgggactgct gcgacaacat cgagatctcc cggctaatga tctacccgcc 12780

actgtaccgc tgcaacgacg aggtgaagca gtgcgccgcc gcctgcaagg agtgcgtgga 12840

ggcgcccggc ggcgacttca acggcggcgc cttcgtctgc agtgactggt tctcgacggt 12900

ggaccccggc cccaagtgca cggcggcgct ggatgggctg tcgatggaga ggccgtggaa 12960

gtgctgcgac aacatcaagc ggctgccgac gaagcccgac ccgccgcagt ggcgctgcaa 13020

cgacgagctg gagcccagcc agtgcaccgc cgcgtgcaag tcgtgccggg aggcgccggg 13080

gccattcccg gggaagctca tctgcgagga catctactgg ggcgccgacc cgggcccctt 13140

ctgcacgccg cggccatggg gagattgctg cgacaaggcc ttctgcaaca agatgaaccc 13200

gccgacctgc cgctgcatgg acgaggtgaa ggagtgcgcc gacgcgtgca aggattgcca 13260

gcgcgtggag tcgtcggagc cgcctcgcta cgtctgcaag gaccgcttca ccggccatcc 13320

cggccccgtg tgcaaacccc gagcggagaa ctagggatcc tctagagtcg acctgcagaa 13380

gtaacaccaa acaacagggt gagcatcgac aaaagaaaca gtaccaagca aataaatagc 13440

gtatgaaggc agggctaaaa aaatccacat atagctgctg catatgccat catccaagta 13500

tatcaagatc aaaataatta taaaacatac ttgtttatta taatagatag gtactcaagg 13560

ttagagcata tgaatagatg ctgcatatgc catcatgtat atgcatcagt aaaacccaca 13620

tcaacatgta tacctatcct agatcgatat ttccatccat cttaaactcg taactatgaa 13680

gatgtatgac acacacatac agttccaaaa ttaataaata caccaggtag tttgaaacag 13740

tattctactc cgatctagaa cgaatgaacg accgcccaac cacaccacat catcacaacc 13800

aagcgaacaa aaagcatctc tgtatatgca tcagtaaaac ccgcatcaac atgtatacct 13860

atcctagatc gatatttcca tccatcatct tcaattcgta actatgaata tgtatggcac 13920

acacatacag atccaaaatt aataaatcca ccaggtagtt tgaaacagaa ttctactccg 13980

atctagaacg accgcccaac cagaccacat catcacaacc aagacaaaaa aaagcatgaa 14040

aagatgaccc gacaaacaag tgcacggcat atattgaaat aaaggaaaag ggcaaaccaa 14100

accctatgca acgaaacaaa aaaaatcatg aaatcgatcc cgtctgcgga acggctagag 14160

ccatcccagg attccccaaa gagaaacact ggcaagttag caatcagaac gtgtctgacg 14220

tacaggtcgc atccgtgtac gaacgctagc agcacggatc taacacaaac acggatctaa 14280

cacaaacatg aacagaagta gaactaccgg gccctaacca tggaccggaa cgccgatcta 14340

gagaaggtag agaggggggg ggggggagga cgagcggcgt accttgaagc ggaggtgccg 14400

acgggtggat ttgggggaga tctggttgtg tgtgtgtgcg ctccgaacaa cacgaggttg 14460

gggaaagagg gtgtggaggg ggtgtctatt tattacggcg ggcgaggaag ggaaagcgaa 14520

ggagcggtgg gaaaggaatc ccccgtagct gccggtgccg tgagaggagg aggaggccgc 14580

ctgccgtgcc ggctcacgtc tgccgctccg ccacgcaatt tctggatgcc gacagcggag 14640

caagtccaac ggtggagcgg aactctcgag aggggtccag aggcagcgac agagatgccg 14700

tgccgtctgc ttcgcttggc ccgacgcgac gctgctggtt cgctggttgg tgtccgttag 14760

actcgtcgac ggcgtttaac aggctggcat tatctactcg aaacaagaaa aatgtttcct 14820

tagttttttt aatttcttaa agggtatttg tttaattttt agtcacttta ttttattcta 14880

ttttatatct aaattattaa ataaaaaaac taaaatagag ttttagtttt cttaatttag 14940

aggctaaaat agaataaaat agatgtacta aaaaaattag tctataaaaa ccattaaccc 15000

taaaccctaa atggatgtac taataaaatg gatgaagtat tatataggtg aagctatttg 15060

caaaaaaaaa ggagaacaca tgcacactaa aaagataaaa ctgtagagtc ctgttgtcaa 15120

aatactcaat tgtcctttag accatgtcta actgttcatt tatatgattc tctaaaacac 15180

tgatattatt gtagtactat agattatatt attcgtagag taaagtttaa atatatgtat 15240

aaagatagat aaactgcact tcaaacaagt gtgacaaaaa aaatatgtgg taatttttta 15300

taacttagac atgcaatgct cattatctct agagaggggc acgaccgggt cacgctgcac 15360

tgcaggcatg caagcttggc actggccgtc gttttacaac gtcgtgactg ggaaaaccct 15420

ggcgttaccc aacttaatcg ccttgcagca catccccctt tcgccagctg gcgtaatagc 15480

gaagaggccc gcaccgatcg cccttcccaa cagttgcgca gcctgaatgg cgaatgctag 15540

agcagcttga gcttggatca gattgtcgtt tcccgccttc agtttagctt catggagtca 15600

aagattcaaa tagaggacct aacagaactc gccgtaaaga ctggcgaaca gttcatacag 15660

agtctcttac gactcaatga caagaagaaa atcttcgtca acatggtgga gcacgacaca 15720

cttgtctact ccaaaaatat caaagataca gtctcagaag accaaagggc aattgagact 15780

tttcaacaaa gggtaatatc cggaaacctc ctcggattcc attgcccagc tatctgtcac 15840

tttattgtga agatagtgga aaaggaaggt ggctcctaca aatgccatca ttgcgataaa 15900

ggaaaggcca tcgttgaaga tgcctctgcc gacagtggtc ccaaagatgg acccccaccc 15960

acgaggagca tcgtggaaaa agaagacgtt ccaaccacgt cttcaaagca agtggattga 16020

tgtgatatct ccactgacgt aagggatgac gcacaatccc actatccttc gcaagaccct 16080

tcctctatat aaggaagttc atttcatttg gagagaacac gggggactct tgaccatggt 16140

a 16141

<210> 4

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

atgagcaaca ctaccatggc tactt 25

<210> 5

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

ctagttctcc gctcggggtt tgcac 25

<210> 6

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

ggtaccatga gcaacactac catggctact t 31

<210> 7

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

ggatccctag ttctccgctc ggggtttgca c 31

<210> 8

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

actagtatga gcaacactac catggctact t 31

<210> 9

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

gagctcctag ttctccgctc ggggtttgca c 31

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

tacacagcca tcggtccaga 20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

taggagggcg tggatatgtc 20

Claims (6)

1.百合开花调节基因BBTI5在调节植物光周期和开花时间中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述基因BBTI5编码蛋白的氨基酸序列如：SEQ ID No.1所示；或为该氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的具有同等功能的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，在长日照或短日照条件下，调节植物开花时间表现为提早植物开花时间；在短日照条件下，提高产量；在20℃低温条件下正常完成抽穗、结实。

4.根据权利要求1和所述的应用，其特征在于，所述植物为水稻。

5.根据权利要求1和所述的应用，其特征在于，所述基因BBTI5的CDS序列如SEQ IDNo.2所示。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，通过在单子叶水稻中RNAi干扰表达基因BBTI5的CDS序列，从而提早转基因水稻的开花时间和生育期。

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