CN111419752B - 一种四物发酵水及其制备方法、应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种四物发酵水及其制备方法和应用，其中，所述制备方法为：将熟地黄、当归、川芎、白芍的混合粉末、水与发酵菌液混合得到初始体系，再经发酵得到发酵液，所得发酵液经灭菌、离心得到上清液，即为四物发酵水。本发明采用两种乳酸菌对熟地黄、当归、川芎、白芍进行发酵，保留了熟地黄、当归、川芎、白芍的全部功效成分及其活性，避免了提取方法造成的活性成分流失。

Description

一种四物发酵水及其制备方法、应用
技术领域
本发明涉及一种发酵产品，具体涉及一种具有护肤功能的发酵产品。
背景技术
熟地黄、当归、川芎和白芍是中医中四物汤的主要原料，熟地黄性凉，味甘苦，具有滋阴补肾、养血的功效。凡阴虚血虚肾虚者食之，颇有益处。此外，熟地黄有解热消炎、抗氧化和降低血糖的作用。当归是最常用的中药之一，具有补气和血、调经止痛、抗衰老的功效。通过直接消除自由基，抑制氧化反应和自由基反应等拮抗自由基对组织的损害。据现代医学研究表明，川芎含有洋川芎内酯、香草酸、棕榈酸等成分，有明显的镇静、抗维生素E缺乏作用；能抑制多种杆菌，对皮肤真菌起到抑制的作用。白芍含棕榈酸叫酯，香草酸，青羊参苷元和β-谷甾醇等成分。药理研究显示有抗氧化和美白的作用。
迄今为止，行业中绝大多数的护肤品不是发酵护肤品，主要为传统工艺制备，而传统工艺则受限于古人思维，难有突破，甚至当前发现许多护肤品中的植物提取物运用传统的工艺提取，即采用水煮药材提取方法，不仅严重耗费药材，非可持续发展，甚至获取物只有很有限的种类与数量，还往往会有一些未知的刺激性，所以应当考虑用新技术。当前许多的发酵宣称护肤品，实际商品往往是仅往护肤品配方中加入一点点的发酵来源成分，导致在配方中，该发酵产物的含量往往只有1-2％，其他都是传统的化工物质，而许多的植物提取物，当中所含的物质本来就已经少量，在配方中继续以这种低比例添加，实际所起作用甚微，得到很差的功效，虽然外观状态透明清澈，但对消费者来说，根本毫无意义。且这往往也令好的技术无法在市场上得到真正有意义的推广，埋没优秀的科技。且，现有技术中，熟地黄、当归、川芎和白芍只用于制作中药制剂，而无人制作成护肤品。
背景技术部分的内容仅仅是发明人所知晓的技术，并不当然代表本领域的现有技术。
发明内容
本发明目的是针对现有技术存在问题中的一个或多个，提供一种用地黄、当归、川芎和白芍制得的发酵水；
本发明的另一目的是提供上述方法制得的发酵水的制备方法；
本发明的又一目的是提供上述发酵水的应用。
本发明的目的通过以下技术方案来具体实现：
一种四物发酵水，由包括熟地黄、当归、川芎和白芍的物质发酵而成。
根据本发明的一个方面，所述四物发酵水中含有蛋白质0.5-1.5mg/ml、粗多糖4-7mg/ml、总黄酮1-4mg/ml、总酚0.1-1.0mg/ml。
根据本发明的一个方面，所述四物发酵水中含有蛋白质3.95g/kg、粗多糖62.95g/kg、以芦丁计总黄酮7.89g/kg、总酚2.44g/kg。
根据本发明的一个方面，其特征在于，所述熟地黄、当归、川芎和白芍的质量比为1-3：2-4：0.5-2：1-2；优选地，所述熟地黄、当归、川芎和白芍的质量比为2：2：1：1。
根据本发明的一个方面，所述发酵采用乳酸菌进行。优选地，所述发酵采用植物乳杆菌和嗜热链球菌的混合菌；进一步优选的，所述植物乳杆菌和嗜热链球菌的质量比为2：3。
一种护肤用产品，包括上述的四物发酵水。
上述四物发酵水作为护肤化妆水的应用。
一种四物发酵水的制备方法，将熟地黄、当归、川芎、白芍的混合粉末、水与发酵菌液混合得到初始体系，再经发酵得到发酵液，所得发酵液经灭菌、离心得到上清液，即为四物发酵水。
根据本发明的一个方面，其特征在于，所述熟地黄、当归、川芎和白芍的质量比为1-3：2-4：0.5-2：1-2；优选地，所述熟地黄、当归、川芎和白芍的质量比为2：2：1：1。
根据本发明的一个方面，所述熟地黄、当归、川芎、白芍的混合粉末的目数为20-50目，优选为50目。
根据本发明的一个方面，熟地黄、当归、川芎、白芍的混合粉末：水的比例为5-20g:100-300mL。
根据本发明的一个方面，所述熟地黄、当归、川芎、白芍的混合粉末：水的质量比为10g:200mL。
根据本发明的一个方面，所述发酵菌液的浓度为105-108CFU/ml。
根据本发明的一个方面，所述发酵菌液与所述熟地黄、当归、川芎、白芍的混合粉末的比例关系为10-40ml：5-20g。
根据本发明的一个方面，所述发酵菌液与所述熟地黄、当归、川芎、白芍的混合粉末的比例关系为20ml：10g。
本发明还提供了上述的四物发酵水的制备方法，所述发酵的发酵温度为30-45℃，优选为37℃。
根据本发明的一个方面，所述发酵的发酵时间为8-30h，优选为24h。
根据本发明的一个方面，所述离心在4000-12000r/min下离心15-30min；
根据本发明的一个方面，所述离心在4500r/min下离心20min。
根据本发明的一个方面，所述离心的离心半径为9-12cm。
根据本发明的一个方面，所述发酵菌为乳酸菌。优选地，所述发酵菌为植物乳杆菌和嗜热链球菌的混合菌；进一步优选的，所述植物乳杆菌和嗜热链球菌的质量比为2：3。
根据本发明的一个方面，所述发酵菌事先进行预处理，所述预处理工艺包括：
菌种活化：将发酵菌菌落放入液体培养基中，再将培养基放入培养箱中将菌种活化；
菌种纯化：将活化的菌种梯度稀释铺板，以便获取单菌落；和
菌种扩培：将待用菌种接种到相应液体培养基中，在30-45℃的培养箱中培养，至其OD值＝0.5-1.0时，菌种处在对数期，即为合适的接种浓度105-108CFU/ml；优选地，所述培养基为MRS培养基。
本发明中的四物是指熟地黄、当归、川芎和白芍四味中药材。
本发明中菌种活化、纯化为本领域技术人员的常规技术手段。
本发明提供的四物发酵水可作为护肤品中的有效成分，也可单独作为护肤品应用，具有抗氧化功能和美白的功能。
本发明提供的利用熟地黄、当归、川芎、白芍发酵水的制备方法，具有以下优点：
(1)本发明采用两种乳酸菌对熟地黄、当归、川芎、白芍进行发酵，保留了熟地黄、当归、川芎、白芍的全部功效成分及其活性，避免了提取方法造成的活性成分流失。
(2)本发明所采用的发酵法，在对熟地黄、当归、川芎、白芍有效成分提取过程中，不添加任何有机试剂，发酵温度和发酵pH温和，植物活性成分结构不被破坏，保持植物的天然活性。
(3)本发明方法中发酵完成后，发酵水中不添加香精等对化学成分，确保产品对人体的安全性。
(4)本发明提供的四物发酵水中富含具有抑制酪氨酸酶活性和抑制黑色素合成的活性物质，从而对皮肤具有较强的美白功能，同时与发酵滤液中的成分具有协同作用。
附图说明
图1为本发明具体实施例中四物发酵水对超氧阴离子自由基清除作用曲线；
图2为本发明具体实施例中四物发酵水对酪氨酸酶活性和熊果苷对酪氨酸酶活性的抑制率柱型图；
图3是使用本发明四物发酵水的肌肤含水量空白对比测试柱型图，其中，每组左边为空白对照数据柱，右边为使用四物发酵水的数据柱。
具体实施方式
在下文中，仅简单地描述了某些示例性实施例。正如本领域技术人员可认识到的那样，在不脱离本发明的精神或范围的情况下，可通过各种不同方式修改所描述的实施例。因此，附图和描述被认为本质上是示例性的而非限制性的。
下文的公开提供了许多不同的实施方式或例子用来实现本发明的不同结构。为了简化本发明的公开，下文中对特定例子的部件和设置进行描述。当然，它们仅仅为示例，并且目的不在于限制本发明。此外，本发明可以在不同例子中重复参考数字和/或参考字母，这种重复是为了简化和清楚的目的，其本身不指示所讨论各种实施方式和/或设置之间的关系。此外，本发明提供了的各种特定的工艺和材料的例子，但是本领域普通技术人员可以意识到其他工艺的应用和/或其他材料的使用。
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
以下实施例中所用发酵菌为植物乳杆菌和嗜热链球菌按质量比为2：3的混合菌。
发酵菌事先进行预处理，所述预处理工艺包括：
菌种活化：将发酵菌菌落放入液体培养基中，再将培养基放入培养箱中将菌种活化；
菌种纯化：将活化的菌种梯度稀释铺板，以便获取单菌落；和
菌种扩培：将待用菌种接种到相应液体培养基中，在30-45℃的培养箱中培养，至其OD值＝0.5-1.0时，菌种处在对数期，即为合适的接种浓度105-108CFU/ml；优选地，所述培养基为MRS培养基。
本发明中菌种法化、纯化是本领域技术人员常规技术手段。
将扩培培养基里的发酵菌浓度为105-108CFU/ml的发酵菌菌液20mL接种到50目15g的熟地黄、当归、川芎、白芍粉和300g的水中，并且在37℃培养箱中进行培养24小时后，将所得发酵液进行121℃高压灭菌，15min高压灭菌，使菌失活，将灭菌后的发酵液在8000r/min、离心半径为9cm的条件下离心20min，收集上清液，即为本发明提供的四物发酵水化妆品。
该实施例制备所得的四物发酵水化妆品的外观为粘稠液体、颜色为无色透明至棕色。pH值4.5-6.8，粘度100-800cP，可溶性固含物含量1.0-5.0％，菌落总数小于50CFU/ml，无致病菌检出。符合化妆品质量要求。
对该四物发酵水化妆品进行成分分析：本发明制得的四物发酵水化妆品含蛋白质3.95g/kg、粗多糖62.95g/kg、总黄酮7.89g/kg(以芦丁计)、总酚2.44g/kg。
四物发酵水的抗氧化功效分析：
氧分子受单一电子还原的产物称为超氧阴离子Superoxide anion。
由于这个超氧化物多了一个电子，所以其自身会积极找寻另一个电子来配对，最简单的方式就是抢夺人体细胞自带的电子。抢多了，细胞膜会损坏，细胞就会破损死亡。这是为何要抗氧化的原因。
一般来说，人体内的SOD超氧化物歧化酶会解决这个问题。但随著环境的恶化与更多的紫外线照射，导致清除效率远远不足。
因此，如果能够增强抗氧化能力，那么对肌肤的健康能够产生正面的作用，如果这个产品更兼具有复合功效，如舒缓与提供更多天然小分子营养元素帮助细胞新生，那么对于肌肤恢复光泽，减少黯沉，能够起到事半功倍的效果。
超氧阴离子清除实验步骤为：
(1)取4.5mL 0.05mol/L pH8.2的Tris-HCl缓冲液于试管中，1mL样品，混匀，置于25℃水浴中预热10min；
(2)取出后迅速加入0.4mL 25℃保温10min的邻苯三酚溶液(2.5mmol/L，10mmol/LHCl配制)。
(3)加入8mol/L盐酸1mL终止反应，空白组以蒸馏水做对照。
(4)于325nm处测定吸光度，计算清除率。A1为样品，A2对照。
(5)超氧阴离子清除率(％)＝(A1-A2)/A1
做出四物发酵水对超氧阴离子自由基清除作用曲线，见附图1。
由图可知，四物发酵水对超氧阴离子的清除作用明显。随四物发酵水浓度升高，其对超氧阴离子的清除能力不断增强。30％浓度的四物发酵水可清除26.7％左右的超氧阴离子，IC50为46.502％。
四物发酵水的美白功效分析：
酪氨酸酶是黑素生成的关键酶,它控制着黑素的形成过程,其活性程度对色素的沉积起主要作用。目前市场上销售的许多美白、祛斑产品都是以抑制酪氨酸酶达到美白作用,故对酪氨酸酶抑制作用的强弱是评价增白化妆品的主要指标。
通过测定样品对酪氨酸酶的影响来评价样品的美白功能，具体方法如下：
按表1配置溶液：
表1、溶液配制列表
Figure GDA0003736024400000061
Figure GDA0003736024400000071
注：C1和T1加入1mL酪氨酸酶，酶活为100U/mL。
(1)C2管配好摇匀后，在37℃水浴锅中水浴加热10min，波长475nm下调零。
(2)C1管溶液配好摇匀，37℃水浴10min后，加酪氨酸酶1ml，继续水浴10分钟，测定C1吸光度值。
(3)按(1)(2)同样方法，以T2调零测定T1吸光度值。
(4)计算样品对酪氨酸酶的活性抑制率T(％)。T(％)＝(C1-T1)/C1×100％
实验证明30％四物发酵水对酪氨酸酶活性的抑制率为17.50％，1％的熊果苷对酪氨酸酶活性的抑制率75％，见附图2。即30％四物发酵水的美白效果相当于23.33％的熊果苷的效果，具有一定的美白功效。
四物发酵水的保湿功效分析：
保湿能力是评判产品性能的一个重要指标。皮肤含水量能够在使用产品后提升，并且能够长时间保持比未涂抹的还要高时，可认定该产品具备良好的保湿能力。能够使皮肤滋润、柔软。本发进一步说明本发明产品的保湿功效，本申请进行了具体的保湿测试分析，具体如下。
实验方法：首先在受试者(3人)的左右臂做好测量区域，区域面积3cmx3cm，测定样品按(2.0±1.0)mg/cm2的用量进行单次涂抹。先测定各测试区的初始值(样品使用前，然后在设定的时间后测定受试区域和对照区域的水分含量和水分流失。自愿者选择与测试方法按照QL-SOP-YF-3-01和QL-SOP-YF-3-02方法操作。
实验结果与分析：如图3所示，使用四物发酵水跟未涂抹的空白对照区域相比，四物发酵水长久的保湿性有很明显的优势；受试者使用四物发酵水8h后，皮肤水分含量始终高于未涂抹的空白对照区域。
四物发酵水的安全性分析：
斑贴试验主要是用于检测化妆品终产品或原料的刺激性。本发明对四物发酵水化妆品进行人体封闭式斑贴试验，对其潜在皮肤刺激性进行评估。
选择合适的志愿者30人，年龄范围在18-60岁随机选择。称取0.020g-0.025g将固体样品或半固体的样品放入斑试器中备用。将液体样品0.2mL到0.025mL滴加在滤纸片上，再将滤纸片置于斑试器内。每个样品均设置空白对照，在对照斑试器孔内加入与样品等量的样品溶剂，如蒸馏水或橄榄油。
试验部位选为人体背部，利用无刺激性的胶带将斑试器固定贴敷于受试者背部。测试周期持续24h。为了试验结果的准确、可信和科学，在测试期间志愿者按照要求，不能摘掉斑试器，亦不可使受试部位接触水。
24h后去除斑试器，静置30min后，等待压痕消失，观察皮肤的反应。如果试验结果为阴性，则需要在斑贴试验后24h和48h分别再观察一次。
斑贴试验结果如表2：
表2、斑贴试验结果
Figure GDA0003736024400000081
Figure GDA0003736024400000091
"-"＝阴性反应；
"±"＝可疑反应：仅有微弱红斑；
"+"＝弱阳性反应(红斑反应)：红斑、浸润、水肿、可有丘疹；
"++"＝强阳性反应(疱疹反应)；红斑、浸润、水肿、丘疹、疱疹；反应可超出受试区；
"+++"＝极强阳性反应(融合性疱疹反应)；明显红斑、严重浸润、水肿、融合性疱疹；反应超出受试区。
由表2可知，实施例提供的四物发酵水在试验中均产生2级反应的不超过1例。经判定，四物发酵水具有安全性，不会给人体带来不良反应。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (26)

1.一种四物发酵水，其特征在于，由熟地黄、当归、川芎和白芍的物质发酵而成；所述发酵采用植物乳杆菌和嗜热链球菌的混合菌，所述植物乳杆菌和嗜热链球菌的质量比为2：3。
2.根据权利要求1所述的四物发酵水，其特征在于，所述四物发酵水中含有蛋白质3.95g/kg、粗多糖62.95g/kg、以芦丁计总黄酮7.89g/kg、总酚2.44g/kg。
3.根据权利要求2所述的四物发酵水，其特征在于，四物发酵水的pH值为4.5-6.8。
4.根据权利要求1所述的四物发酵水，其特征在于，所述熟地黄、当归、川芎和白芍的质量比为1-3：2-4：0.5-2：1-2。
5.根据权利要求4所述的四物发酵水，其特征在于，所述熟地黄、当归、川芎和白芍的质量比为2：2：1：1。
6.一种护肤用产品，其特征在于，包括权利要求1-5任一项所述的四物发酵水。
7.根据权利要求1-5任一项所述的四物发酵水在制备护肤化妆水中的应用。
8.一种四物发酵水的制备方法，其特征在于：将熟地黄、当归、川芎、白芍的混合粉末、水与发酵菌液混合得到初始体系，再经发酵得到发酵液，所得发酵液经灭菌、离心得到上清液，即为四物发酵水；所述发酵采用植物乳杆菌和嗜热链球菌的混合菌，所述植物乳杆菌和嗜热链球菌的质量比为2：3。
9.根据权利要求8所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于，所述熟地黄、当归、川芎和白芍的质量比为1-3：2-4：0.5-2：1-2。
10.根据权利要求9所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于，所述熟地黄、当归、川芎和白芍的质量比为2：2：1：1。
11.根据权利要求8所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于，所述熟地黄、当归、川芎、白芍的混合粉末的目数为20-50目。
12.根据权利要求11所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于，所述熟地黄、当归、川芎、白芍的混合粉末的目数为50目。
13.根据权利要求8所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于，熟地黄、当归、川芎、白芍的混合粉末：水的比例为5-20g:100-300mL。
14.根据权利要求13所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于，所述熟地黄、当归、川芎、白芍的混合粉末：水的质量比为10g:200mL。
15.根据权利要求8所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于，所述发酵菌液的浓度为105-108CFU/ml。
16.根据权利要求8所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于，所述发酵菌液与所述熟地黄、当归、川芎、白芍的混合粉末的比例关系为10-40ml：5-20g。
17.根据权利要求16所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于，所述发酵菌液与所述熟地黄、当归、川芎、白芍的混合粉末的比例关系为20ml：10g。
18.根据权利要求8所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于：所述发酵的发酵温度为30-45℃。
19.根据权利要求18所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于：所述发酵的发酵温度为37℃。
20.根据权利要求8所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于：所述发酵的发酵时间为8-30h。
21.根据权利要求20所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于：所述发酵的发酵时间为24h。
22.根据权利要求8所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于：所述离心在4000-12000r/min下离心15-30min。
23.根据权利要求22所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于：所述离心在4500r/min下离心20min。
24.根据权利要求8所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于：所述离心的离心半径为9-12cm。
25.根据权利要求8所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于：所述发酵菌事先进行预处理，所述预处理工艺包括：
菌种活化：将发酵菌菌落放入液体培养基中，再将培养基放入培养箱中将菌种活化；
菌种纯化：将活化的菌种梯度稀释铺板，以便获取单菌落；和
菌种扩培：将待用菌种接种到相应液体培养基中，在30-45℃的培养箱中培养，至其OD值＝0.5-1.0时，菌种处在对数期，即为合适的接种浓度105-108CFU/ml。
26.根据权利要求25所述的四物发酵水的制备方法，其特征在于：所述培养基为MRS培养基。
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