CN104398416A

CN104398416A - 一种藏药组合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN104398416A
Application number: CN201410607045.5A
Authority: CN
Inventors: 杨广群
Original assignee: Guangzhou Danqi Daily Chemical Co Ltd
Current assignee: Guangzhou Danqi Daily Chemical Co Ltd
Priority date: 2014-10-31
Filing date: 2014-10-31
Publication date: 2015-03-11

Abstract

本发明公开了一种藏药组合物，其原料组成及重量份配比为：手掌参10～20份，水母雪莲花5～15份，桃儿七5～15份，紫草5～15份。本发明还公开了该藏药组合物的制备方法和应用。本发明的藏药组合物作为功效成分添加入化妆品体系中不仅能够代替基质中防腐剂的抑菌防腐的作用，且针对敏感性肌肤安全无刺激，具有显著的美白祛斑、防晒功效。

Description

一种藏药组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及化妆品领域，具体涉及一种藏药组合物及其制备方法和应用。

背景技术

“肤如凝脂，面若桃花”是所有女性对肌肤的渴望与追求，由于生活环境的污染和压力、睡眠不足等不良生活习惯等的影响，众多女性肤色逐渐暗淡无光、各种色斑相伴而至，离她们所追求的健康肌肤越来越远。正所谓“一白遮百丑”，出于对美的追求，众多女性消费者不惜尝试各种诸如激光美白祛斑、涂用防晒美白化妆品等方式，因此，有关防晒、祛斑美白化妆品越来越受消费者的青睐。目前市售的美白、祛斑、防晒化妆品良莠不齐，其中大部分产品尤其是防晒产品是依靠化学合成物来起到宣称的作用，这样不仅对消费者的健康带来极大的隐患，还容易引起发炎、过敏等不良反应。

近几年，随着人们物质生活水平的提高和对绿色与健康问题的关注，消费者对个人护理化妆品的安全性要求也随之提高，希望其对皮肤“零负担”，追求“天然”，在这种形势下，市场上添加天然成分的化妆品层出不穷。市售的一些宣称添加了温和无刺激的植物提取物的美白、祛斑、防晒类化妆品由于其在配方中不可避免的添加了防腐剂，使一些消费者用后仍出现皮肤过敏、干燥脱皮、效果不明显或色斑反复发作等问题，其中包括大部分的敏感肌肤的消费者，因此使许多女性尤其是敏感肌肤女性望尘莫及。

发明内容

为了克服以上现有技术的不足，本发明针对敏感性肌肤提供一种天然安全、功效显著的藏药组合物及其制备方法和应用，该藏药组合物作为功效成分添加于化妆品中，可以很好的满足人们对化妆品中化学防腐剂“零添加”的需求，解决了目前市售防晒、美白、祛斑化妆品针对敏感肌肤效果不明显或容易引起过敏的问题。

本发明所要解决上述问题采用的技术方案是提供一种藏药组合物，所述的藏药组合物，包括下列重量份数的原料药：

手掌参10～20份，水母雪莲花5～15份，桃儿七5～15份，紫草5～15份。

上述藏药组合物中：

手掌参，记载于《藏药部颁》(标准号：WS3-BC-0015-95，藏语名称：旺拉)，又名手参，是兰科植物手掌参的干燥块茎，味甘性平，入肺、脾、胃经，具有补益气血、生津止渴的功效，为方中之君药。《藏药志》云:“甘、微苦，温。增力生精，大补元气，安神增智，治阳癌不举。”《中国藏药》载:“甘、涩、温、重。补肾益气，生精，润肺。”

水母雪莲花(藏药名称：恰果苏巴)，是菊科凤毛菊属植物水母雪莲花的全草。其味甘苦，性温，入肝、脾、肾三经，具有强筋活络、补肾壮阳，调经，活血的功效，为方中臣药。

桃儿七又称鬼臼。藏族习用药材，藏药名奥毛赛，为小檗科植物西藏鬼臼和鬼臼的果实和根，其苦、微辛，温；归肺经，具有祛风除湿，止咳止痛，活血解毒的功效，为方中佐药。

紫草为紫草科植物紫草、新藏假紫草的根，其性寒，味甘咸，归心、肝经，具有凉血，活血化瘀的功效，能促进方中的有效成分快速渗入皮肤，为方中使药。《本草经疏》：“紫草为凉血之要药，故主心腹邪热之气。五疸者，湿热在脾胃所成，去湿除热利窍，其疸自愈。邪热在内，能损中气，邪热散即能补中益气矣。苦寒性滑，故利九窍而通利水道也。”《医林纂要》：“补心，缓肝，散瘀，活血。”

上述藏药组合物以传统医学对色斑的病理研究为基础，针对色斑成因：气虚、血瘀、肾虚，气血不能润泽颜面，湿热上升至颜面形成斑点，以手掌参补益气血，以水母雪莲花活血化瘀生肌、补肾壮阳，以桃儿七活血、祛风除湿，治疗兼症，以紫草凉血、活血化瘀，促进有效成分吸收，使气血荣养于面部，从而达到祛斑美白的目的。

现代药理研究证明，手掌参提取物中含有多种微量元素，能够为皮肤提供所需的营养物质，且其能在细胞表层形成一层保护膜，防止外界紫外线或自由基对皮肤造成伤害，此外还有抑菌的作用。水母雪莲花和桃儿七提取物能够消炎抑菌，改善血管通透性，加速毛细血管的微循环作用，减少黑色素的沉积。紫草提取物中含有的紫草素等成分具有抑菌、消炎、促进皮肤再生和细胞新陈代谢的功效，其能够迅速渗入皮肤，快速分解细胞内沉积的黑色素，从而达到除斑的效果。

以上四种藏药为本发明的基础配方，优选的，本藏药组合物配方还可以进行扩展优化，以增强药效，具体还包括如下重量份数的原料药：

蒲公英5～15份，骨碎补5～15份，扭盔马先蒿5～15份，多刺绿绒蒿5～15份。

更优选的扩展优化为所述的藏药组合物还包括如下重量份数的原料药：

蓝玉簪龙胆5～15份，无茎龙胆5～15份，短柄龙胆5～15份，大花龙胆5～15份，水柏枝5～15份，岩白菜5～15份，舟瓣芹5～15份。

以上蒲公英、骨碎补、多刺绿绒蒿、岩白菜、舟瓣芹具有活血消肿、补肾解毒功效；扭盔马先蒿、水柏枝、蓝玉簪龙胆、无茎龙胆、短柄龙胆、大花龙胆祛风利湿，杀虫、疏风、清热解毒功效。现代药理研究显示以上诸药均有不同程度的抑菌、抗炎、抗氧化、清除氧自由基和羟自由基的作用，其能有效地防止紫外线照射对皮肤造成的伤害或新陈代谢产生的有害物质沉着导致的色素沉积。此外，骨碎补能够抑制酪氨酸酶的活性，很大程度上减少色斑的生成；扭盔马先蒿、蓝玉簪龙胆、无茎龙胆、短柄龙胆、大花龙胆能够促进胶原蛋白合成，修复受损的细胞；水柏枝、扭盔马先蒿具有增强皮肤免疫力的功效。藏药产于我国西南边疆地区，特有的高原、高寒气候，富饶的土地资源，赋予了藏药神奇的医药疗效和美容保健护肤功效。藏药不仅具有很好的抗氧化、抗自由基的作用，同时还是很好的抑菌杀菌剂，可以很好的满足人们对化妆品中化学防腐剂“零添加”的需求。藏药植物光合作用有效积累高，高原的水气量低，绝少尘埃，有利于光的通过，因而，蓝紫光和紫外线非常丰富，辐射特别强烈，这种特殊的环境使得藏药植物不仅具有极好的吸收紫外线的功效，而且在不同酶的作用下，藏药植物光合作用的有效物质积累高，经试验证明，本发明的藏药组合物具有显著地防晒、祛斑功效，将本发明的藏药组合提取物作为功效成分添加于化妆品体系中不仅能够代替基质中防腐剂的抑菌防腐的作用还能起到相互辅助、协同增效、除根固本、标本兼治的功效。

本发明还提供该藏药组合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)按照权利要求1～3任一项所述的重量份配比称取各原料药，将原料除杂、粉碎、混合后过20～50目筛；

(2)将处理后的原料药用75％的乙醇完全浸湿后装入萃取器中，以CO₂为萃取剂，乙醇为夹带剂，在温度为30℃～50℃、压力为20Mpa～40Mpa下萃取2～4个小时；

(3)解压，出料，将所得的藏药萃取液用旋蒸法去除残留的夹带剂，并在35～55℃减压浓缩即得。

作为本发明的一个优选方案，上述藏药组合物在制备过程中CO₂的流量可控制为0.2m³/h～0.5m³/h。

采用上述方法提取该藏药组合物不必经过反复萃取操作，萃取流程简单，操作条件易控制，不易破坏热敏性物质，对有效成分的破坏少，且安全、无毒、不污染坏境，可避免有效成分被氧化，最大限度的减少溶剂残留。

本发明还提供该藏药组合物在制备化妆品中的应用。

在一些实施例中以上所述的化妆品为防晒美白祛斑霜。

本发明提供一种防晒美白祛斑霜，所述的防晒美白祛斑霜，包含以下重量百分比的各组分：

藏药组合提取物：4-9wt％，

鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯/山梨坦橄榄油酸酯：2-4wt％，

鲸蜡醇棕榈酸酯/山梨坦棕榈酸酯/山梨坦橄榄油酸酯：1-3wt％，

环五聚二甲基硅氧烷/环己硅氧烷：1-3.2wt％，

聚二甲基硅氧烷：1-3.5wt％，

辛酸/癸酸甘油三酯：1.5-4wt％，

生育酚(维生素E)：0.3-0.8wt％，

月桂氮卓酮：0.7-1.5wt％，

甲氧基肉桂酸乙基己酯：0.6-1.4wt％，

丁羟甲苯：0.02-0.09wt％，

丁二醇：3-8wt％，

甘油：3-8wt％，

黄原胶：0.06-0.14wt％，

透明质酸钠：0.01-0.05wt％，

二氧化钛：0.5-1.6wt％，

聚丙烯酰胺/C13-14异链烷烃/月桂醇聚醚-7：0.2-1.5wt％，

光果甘草根提取物：0.1-0.4wt％，

1,3-丙二醇：3-9wt％，

去离子水：余量；

所述的藏药组合提取物为手掌参、水母雪莲花、桃儿七、紫草、蒲公英、骨碎补、扭盔马先蒿、多刺绿绒蒿、蓝玉簪龙胆、无茎龙胆、短柄龙胆、大花龙胆、水柏枝、岩白菜、舟瓣芹中的至少4种组合物的混合提取物。

优选的，该防晒美白祛斑霜还含有重量百分比为1-4wt％的3-O-乙基抗坏血酸、重量百分比为2-8wt％酵母提取物、重量百分比为1.5-3.6wt％的牡丹根提取物中的一种或多种。

综上，本发明的藏药组合物的有益之处为：

(1)本发明的藏药组合提取物作为功效成分添加于化妆品体系中不仅能够代替基质中防腐剂的抑菌防腐的作用还能起到相互辅助、协同增效、除根固本、标本兼治的功效；

(2)本发明的藏药组合提取物作为功效成分添加于化妆品体系中，针对敏感性肌肤安全无刺激，具有显著的美白祛斑、防晒功效；

(3)本发明的藏药组合物采用合并提取的方法，萃取流程简单，操作条件易控制，对有效成分的破坏少。

具体实施方式

以下将结合具体实施例对本发明做进一步说明。

一、本发明中草药组合物的制备，具体如实施例1-9所示：

实施例1

按照下述重量份配比称取各原料药：

手掌参10kg，水母雪莲花5kg，桃儿七5kg份，紫草5kg份。

(1)将上述配比的原料药除杂、粉碎、混合后过20目筛；

(2)将处理后的原料药用75％的乙醇完全浸湿后装入萃取器中，以0.2m³/h的流量通入CO₂，在温度为30℃、压力为20Mpa下萃取2小时；

(3)萃取完成后解压，出料，将所得的藏药萃取液用旋蒸法去除残留的乙醇，并在35℃减压浓缩即得。

实施例2

按照下述重量份配比称取各原料药：

手掌参15kg，水母雪莲花10kg，桃儿七10kg份，紫草10kg份。

(1)将上述配比的原料药除杂、粉碎、混合后过30目筛；

(2)将处理后的原料药用75％的乙醇完全浸湿后装入萃取器中，以0.3m³/h的流量通入CO₂，在温度为40℃、压力为30Mpa下萃取3小时；

(3)萃取完成后解压，出料，将所得的藏药萃取液用旋蒸法去除残留的乙醇，并在45℃减压浓缩即得。

实施例3

按照下述重量份配比称取各原料药：

手掌参20kg，水母雪莲花15kg，桃儿七15kg份，紫草15kg份。

(1)将上述配比的原料药除杂、粉碎、混合后过40目筛；

(2)将处理后的原料药用75％的乙醇完全浸湿后装入萃取器中，以0.4m³/h的流量通入CO₂，在温度为50℃、压力为40Mpa下萃取4小时；

(3)萃取完成后解压，出料，将所得的藏药萃取液用旋蒸法去除残留的乙醇，并在55℃减压浓缩即得。

实施例4

按照下述重量份配比称取各原料药：

手掌参10kg，水母雪莲花5kg，桃儿七5kg份，紫草5kg份，蒲公英5kg，骨碎补5kg，扭盔马先蒿5kg，多刺绿绒蒿5kg。

(1)将上述配比的原料药除杂、粉碎、混合后过20目筛；

(2)将处理后的原料药用75％的乙醇完全浸湿后装入萃取器中，以0.2m³/h的流量通入CO₂，在温度为35℃、压力为20Mpa下萃取2小时；

实施例5

按照下述重量份配比称取各原料药：

手掌参15kg，水母雪莲花10kg，桃儿七10kg份，紫草10kg份，蒲公英10kg，骨碎补10kg，扭盔马先蒿10kg，多刺绿绒蒿10kg。

(1)将上述配比的原料药除杂、粉碎、混合后过30目筛；

实施例6

按照下述重量份配比称取各原料药：

手掌参20kg，水母雪莲花15kg，桃儿七15kg份，紫草15kg份，蒲公英15kg，骨碎补15kg，扭盔马先蒿15kg，多刺绿绒蒿15kg。

(1)将上述配比的原料药除杂、粉碎、混合后过40目筛；

实施例7

按照下述重量份配比称取各原料药：

手掌参10kg，水母雪莲花5kg，桃儿七5kg份，紫草5kg份，蒲公英5kg，骨碎补5kg，扭盔马先蒿5kg，多刺绿绒蒿5kg，蓝玉簪龙胆5kg，无茎龙胆5kg，短柄龙胆5kg，大花龙胆5kg，水柏枝5kg，岩白菜5kg，舟瓣芹5kg。

(1)将上述配比的原料药除杂、粉碎、混合后过20目筛；

实施例8

按照下述重量份配比称取各原料药：

手掌参15kg，水母雪莲花10kg，桃儿七10kg份，紫草10kg份，

蒲公英10kg，骨碎补10kg，扭盔马先蒿10kg，多刺绿绒蒿10kg，蓝玉簪龙胆10kg，无茎龙胆10kg，短柄龙胆10kg，大花龙胆10kg，水柏枝10kg，岩白菜10kg，舟瓣芹10kg。

(1)将上述配比的原料药除杂、粉碎、混合后过30目筛；

实施例9

按照下述重量份配比称取各原料药：

手掌参20kg，水母雪莲花15kg，桃儿七15kg份，紫草15kg份，蒲公英15kg，骨碎补15kg，扭盔马先蒿15kg，多刺绿绒蒿15kg，蓝玉簪龙胆15kg，无茎龙胆15kg，短柄龙胆15kg，大花龙胆15kg，水柏枝15kg，岩白菜15kg，舟瓣芹15kg。

(1)将上述配比的原料药除杂、粉碎、混合后过40目筛；

(2)将处理后的原料药用75％的乙醇完全浸湿后装入萃取器中，以0.5m³/h的流量通入CO₂，在温度为50℃、压力为40Mpa下萃取4小时；

二、本发明防晒美白祛斑霜的制备，具体配方组成及制备工艺如下：

实施例10中所述的藏药组合提取物为按照实施例1～3任一方法制得的藏药组合物，实施例11中所述的藏药组合提取物为按照实施例4～6中任一方法制得的藏药组合物，实施例10中所述的藏药组合提取物为按照实施例7～9中任一方法制得的藏药组合物，其他各组分名称均为国际化妆品原料命名(International NomenclatureCosmetic Ingredient，INCI)所规定的名称，例如鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯/山梨坦橄榄油酸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯/山梨坦棕榈酸酯/山梨坦橄榄油酸酯、环五聚二甲基硅氧烷/环己硅氧烷、辛酸/癸酸甘油三酯、聚丙烯酰胺/C13-14异链烷烃/月桂醇聚醚-7。

表1本发明防晒美白祛斑霜的配方组成及含量

本发明的防晒美白祛斑霜可按膏霜的现有技术方法制得，优选如下制备工艺：

(1)将表1中A相原料投入到油相锅中，B相原料也投入到水相锅中，A、B两相分别加热至85度，保温15分钟。

(2)先将溶解好的B相抽入乳化锅，再将溶解好的A相抽入乳化锅中，以45转/分钟的速度搅拌均匀，再均质3分钟后加入C相，均质4分钟(均质是搅拌速度控制在30转/分钟，均质完后搅拌速度控制在45转/分种)，保温30分钟。

(3)抽真空，乳化锅冷却至40℃后依次加入D、E、F相，以35转/分钟的速度搅拌15分钟，抽真空即得本发明的防晒美白祛斑霜。

三、安全性评价

1、多次皮肤刺激性试验

(1)试验样品：按照实施例10～12配方所制得的防晒美白祛斑霜，分别为受试物a、受试物b、受试物c；

(2)试验动物：健康、皮肤无损伤的成年白色新西兰家兔，普通级，共12只，体重为2.3-2.5kg，由广东省医学实验动物中心提供(动物生产许可证号：SCXK(粤)2003-0002)，试验动物合格证编号：0003286，实验动物使用许可证号：SYXK(粤)2003-0011，动物房的温度为23℃，湿度为52％RH，饮用水为自来水，实验前进行随机分组，每组4只；

(3)试验步骤：

①试验前将实验动物背部脊柱两侧被毛剪掉，去毛范围各为3cmX3cm，涂抹面积2.5cmX2.5cm；

②取受试物O.5g涂抹在一侧皮肤上，另一侧作为空白对照，每天涂抹1次，连续涂抹14天。从第二天开始，每次涂抹前剪毛，用水或无刺激性溶剂清除残留受试物，一小时后观察结果，按表2评分；

(4)结果评价:每天每只动物平均积分＝Σ红斑和水肿积分/受试动物数/14，以表3判定皮肤刺激强度；

表2皮肤刺激反应评分

皮肤反应	积分
		无红斑	0
轻微红斑(勉强可见)	1
		明显红斑	2
中度～重度红斑	3
		严重红斑(紫红色)至轻微焦痂形成	4
无水肿	0
		轻微水肿(勉强可见)	1
轻度水肿(皮肤隆起轮廓清楚)	2
		中度水肿(皮肤隆起约1mm)	3
重度水肿(皮肤隆起超过1mm，范围扩大)	4
		最高积分	8

表3皮肤刺激强度分级

积分均值

强度

0～<0.5	无刺激性
		0.5～<2.0	轻刺激性
2.0～<6.0	中刺激性
		6.0～8.0	强刺激性

表4本发明防晒美白祛斑霜对家兔多次皮肤刺激性试验结果

结合以上表3和表4的实验数据可知本发明的防晒美白祛斑霜相对安全，无刺激性。

2、人体皮肤斑贴试验

材料和方法:

(1)受试物：按照实施例10～12配方所制得的防晒美白祛斑霜；阴性对照:空白对照(不置任何物质)；

(2)受试者:共30人，女，年龄19一51岁，符合受试者志愿入选标准；

(3)斑试方法:选用合格的斑试器，以封闭式斑贴试验方法，将受试物约0.02～0.025g涂于斑试器内，外用专用胶带贴敷于受试者背部，24小时后去除受试物，分别于去除后0.5、24、48小时观察皮肤反应，按《化妆品卫生规范》(2007年版)中皮肤反应分级标准记录其结果；

实验结果如下表5：

表5受试物对人体皮肤斑贴试验结果

以上结果显示30例中0例出现皮肤不良反应，由此证明本发明防晒美白祛斑霜对人体相对安全无刺激。

四、功效性评价

1、本发明的防晒美白祛斑霜SPF值的测定

根据QB/T2410-1998规定的防晒化妆品UVB区(290nm～320nm)、UVA区(320nm～400nm)防晒效果的评价方法和《化妆品卫生规范》规定的防晒化妆品防晒指数测定方法进行操作。使用普通紫外分光光度计作为紫外光源，测定本发明按照实施例10～12配方所制得的防晒美白祛斑霜在UVA，UVB区的紫外吸光值，通过吸光度的大小，判断本发明防晒美白祛斑霜对UVA，UVB的防护效果防晒效果评价标准见表6，防晒结果见表7。

表6防晒效果评价标准

吸光度	防晒效果	使用条件
			<0.5	无防晒效果	/
0.5～1.0	最9小防护紫外线射	冬日阳光、阴天
			1.0～1.5	中等防护紫外线照射	中等强度阳光照射
1.5～2.0	高效防护紫外线照射	夏日强烈日光照射

>2.0

完全防护紫外线照射

户外工作

表7防晒结果

从以上表6和表7数据可知，本发明的防晒美白祛斑霜和对照品均有防晒作用，但本发明的防晒美白祛斑霜的防晒作用明显优于对照品，且添加了多种藏药提取物作为功效成分的防晒美白祛斑霜比添加部分藏药提取物作为功效成分的防晒美白祛斑霜效果更好，由此证明本发明的藏药组合物作为功效成分添加到化妆品中对皮肤具有显著地防晒作用，且本发明中优选的多种藏药混合提取物具有相互辅助、协同增效的作用。

2、祛斑效果临床观察

(1)实验对象：年龄为18～40岁的女性敏感性肌肤的志愿者40名，每个人都长有不同程度的黄褐斑、雀斑、太阳斑、黑斑等；试用者身体状况良好，不吸烟，无长期服药病史；

(2)试验方法：本试验分为实验组和对照组，实验组为按照实施例10、实施例11、实施例12的配方所制得的祛斑霜，对照组为按照对比例1的配方所制得的祛斑霜及某市售祛斑霜。受试者使用相同的温和清洁剂清洗脸部后，在试用者脸部左右选定相同部位作为试验区，左侧涂抹实验组产品，右侧涂抹等量的对比例产品，每天早、中、晚三次，连续使用6个月，观察结果。

(3)实验结果：疗效标准分为痊愈(斑色全部消退，面部颜色与正常肤色一致)、显效(斑色明显消退)、有效(面部斑色变浅，部分皮肤恢复正常，但仍有部分色素斑未消退)和无效(色斑没有任何改变)，具体如下表8。

表8

受试者在使用实验组的防晒美白祛斑霜过程中未见明显过敏反应，总有效率达到100％，痊愈患者中有一例出现复发症状，重复使用本祛斑霜后痊愈，而使用某市售祛斑霜后的患者29％出现反复发作的现象。

从以上数据可以看出添加了本发明的藏药组合物的防晒美白祛斑霜针对敏感性肌肤实验者的祛斑效果明显优于不添加本发明的藏药组合物的防晒美白祛斑霜和某市售祛斑霜对对敏感性肌肤实验者的祛斑效果，且添加了多种藏药提取物作为功效成分的防晒美白祛斑霜比添加部分藏药提取物作为功效成分的防晒美白祛斑霜效果更好，由此证明本发明的藏药组合物作为功效成分添加到化妆品中对皮肤具有显著地祛斑功效，且本发明中优选的多种藏药混合提取物具有相互辅助、协同增效的作用。

3、防腐挑战实验测试

(1)试验菌株：

细菌试验菌株包括:从微生物研究所购买的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、粪大肠杆菌，以及从生产车间提取的细菌杂菌的混合悬液；

霉菌试验菌株包括:从微生物研究所购买的黑曲霉、白色假丝酵母，以及从生产车间提取的霉菌、酵母菌混合悬液；

细菌混合悬浮液初始加菌浓度为4.5X10⁶cfu/ml，霉菌酵母菌悬浮液初始加菌浓度为2.5X10⁴cfu/ml；

(2)试验方法：国内参照CTFA加菌防腐挑战性试验

在本发明的防晒美白祛斑霜中一次性接入若干种类、一定数量的微生物进行挑战，初始的霉菌和细菌的接种量分别为10⁴cfu/ml和10⁶cfu/ml(CFU为菌落单位)，将样品存放于适当的温度下，定期抽样检测其中残存的微生物，并根据微生物的数量变化情况评价样品的抗菌效果。

(3)评价标准：

①第28天时，样品中含细菌或霉菌在1Ocfu/g(ml)-100cfu/g(ml)，或从第7天起，样品中的细菌或霉菌<1Ocfu/g(ml)，表明该样品的抗菌体系对微生物有较强或特强的抑杀效果，通过挑战试验。产品在生产、贮藏和使用时很不容易受到微生物的污染。

②第28天时，样品中含细菌或霉菌在1O0cfu/g(ml)-1000cfu/g(ml)，该样品有条件地通过挑战试验，即当产品中蛋白质或其他动植物材料成分不是特别高，同时生产的卫生环境符合要求，包装不易发生二次污染时，该防霉体系可以使用，否则不能。

③第28天时，样品中含细菌或霉菌在>1000cfu/g(ml)该样品不能通过微生物攻击的挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时很容易受到微生物的污染。

(4)实验结果见表9：

表9防腐挑战试验结果

从表9可以看出自挑战试验第7天起，样品中的细菌或霉菌<1Ocfu/ml，由此证明添加了本发明的藏药组合物的防晒美白祛斑霜抗菌体系对微生物有较强的抑杀效果，通过防腐挑战试验。

4、本发明的藏药组合物美白功效评价

体外酪氨酸酶抑制率的测定

黑色素的形成过程中，酪氨酸酶起了关键酶的作用，黑色素产生的多少与酪氨酸酶的活性有直接的关系。L-酪氨酸酶与其底物L-酪氨酸可以发生催化反应。当在实验体系中添加了有L-酪氨酸酶活性抑制作用的试剂后，对催化反应可以产生抑制作用，通过测定添加试剂前后于475nm处的吸光光度，来评价试剂对L-酪氨酸酶活性的抑制率。

(1)实验所需溶液配制:

①磷酸缓冲液的配置：

a:准确称取17.91g十二水磷酸氢二钠溶于蒸馏水中，用500mL容量瓶定容；

b:准确称取7.8g二水磷酸二氢钠溶于蒸馏水中，用500mL容量瓶定容；

c:取a中溶液92.6mL，b中溶液107.4mL，配成200mLpH＝6.8PBS缓冲溶液；

②0.05％L-酪氨酸溶液的配置：

准确称取0.05gL-酪氨酸，先用少量0.1mol/L的盐酸溶解，待其溶解后用pH＝6.8的磷酸缓冲溶液(PBS)定容至100mL；

③试验样品：实施例1-8所制得的藏药组合提取物；

④熊果苷对照品溶液：精密称定熊果苷，加PBS(pH＝6.8)配置成15.00mg/ml，备用。

(2)试验方法

按照下表加样，混匀，35℃水浴保温10分钟。在C1和T1管中加入浓度为100U/ml的L-酪氨酸酶液0.5ml混匀。10分钟后用C2作参比测C1在475nm处的吸光值，用T2作参比测T1在475nm处的吸光值。C1为不加样品的对照反应体系，C2为C1的参比液，T1为加待测样品的反应体系，T2为T1的参比液。每组平行试验3次，计算平均值。利用公式：酪氨酸酶的抑制率＝〖(C1-C2)-(T1-T2)〗/(C1-C2)×100％计算样品对酪氨酸酶的抑制率。反应液组成如下表10：

表10

	C1	C2	T1	T2
					L-酪氨酸	1	1	1	1
样品	0	0	1	1
					磷酸缓冲液	2	2.5	1	1.5

酪氨酸酶	0.5	0	0.5	0
					合计	3.5	3.5	3.5	3.5

(3)实验结果

表11为实施例1-8所制得的藏药组合提取物对络氨酸酶的抑制率(X±S，n＝3)，具体如下：

表11

组别	络氨酸酶的抑制率(％)
		熊果苷对照组	46.11±3.00
实施例1-藏药组合提取物	64.23±2.25
		实施例2-藏药组合提取物	66.06±2.04
实施例3-藏药组合提取物	67.51±1.66
		实施例4-藏药组合提取物	71.30±2.12
实施例5-藏药组合提取物	72.86±2.16
		实施例6-藏药组合提取物	73.14±1.87
实施例7-藏药组合提取物	73.56±1.89
		实施例8-藏药组合提取物	73.81±1.75
实施例9-藏药组合提取物	74.16±2.01

从以上结果显示本发明的藏药组合物对络氨酸酶的抑制率均比熊果苷要强，具有显著性差异((P<0.05)，由此说明本发明的藏药组合物具有显著地美白功效，且各藏药原料药之间存在明显的协同增效的作用。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.一种藏药组合物，其特征在于，包括下列重量份数的原料药：

2.根据权利要求1所述的藏药组合物，其特征在于，还包括如下重量份数的原料药：

3.根据权利要求1或2所述的藏药组合物，其特征在于，还包括如下重量份数的原料药：

4.根据权利要求1～3任一项所述的藏药组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的藏药组合物的制备方法，其特征在于，CO₂的流量为0.2m³/h～0.5m³/h。

6.根据权利要求1～3任一项所述的藏药组合物在制备化妆品中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的化妆品为防晒美白祛斑霜。

8.一种防晒美白祛斑霜，其特征在于，包含以下重量百分比的各组分：

藏药组合提取物：4-9wt％，

鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯/山梨坦橄榄油酸酯：2-4wt％，

环五聚二甲基硅氧烷/环己硅氧烷：1-3.2wt％，

聚二甲基硅氧烷：1-3.5wt％，

辛酸/癸酸甘油三酯：1.5-4wt％，

生育酚(维生素E)：0.3-0.8wt％，

月桂氮卓酮：0.7-1.5wt％，

甲氧基肉桂酸乙基己酯：0.6-1.4wt％，

丁羟甲苯：0.02-0.09wt％，

丁二醇：3-8wt％，

甘油：3-8wt％，

黄原胶：0.06-0.14wt％，

透明质酸钠：0.01-0.05wt％，

二氧化钛：0.5-1.6wt％，

聚丙烯酰胺/C13-14异链烷烃/月桂醇聚醚-7：0.2-1.5wt％，

光果甘草根提取物：0.1-0.4wt％，

1,3-丙二醇：3-9wt％，

去离子水：余量；

所述的藏药组合提取物为权利要求4制备的藏药组合物。

9.根据权利要求8所述的防晒美白祛斑霜，其特征在于，该防晒美白祛斑霜还含有重量百分比为1-4wt％的3-O-乙基抗坏血酸、重量百分比为2-8wt％酵母提取物、重量百分比为1.5-3.6wt％的牡丹根提取物中的一种或多种。